專利名稱：用于脊柱外科手術(shù)中定向細胞向內(nèi)生長和控制組織再生的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種用于防止外科手術(shù)后或創(chuàng)傷后的細胞粘連在組織表面上的方法，所
述組織選自脊柱組織、硬膜和脊柱神經(jīng)，該方法包括用多層生理活性和生物功能膠原生物基 質(zhì)薄片覆蓋并隔離組織的步驟。本發(fā)明還涉及一種使細胞生長和組織修復(fù)定向的方法，用于 治療哺乳動物生理失調(diào)，該方法包括用多層膠原薄片生物基質(zhì)覆蓋和隔離所述組織的步驟。 本發(fā)明的方法通過提供用于定向細胞向內(nèi)生長和控制組織再生的生物功能基質(zhì)，防止硬膜外 的粘連和神經(jīng)周的粘連，并且防止疤痕組織形成。
冃豕忟不眾所周知，在脊柱外科手術(shù)之后會有內(nèi)部傷痕、硬膜外和神經(jīng)周的纖維化和粘連， 并且產(chǎn)生不希望有的所述外科手術(shù)的副作用。這些情況導(dǎo)致高百分率的疼痛、移動困難，并 且往往需要附加的外科手術(shù)。使用包含羧甲基纖維素和聚環(huán)氧乙烷的凝膠用于減少脊柱外科 手術(shù)后的硬膜外粘連，這已在下述文獻中被公開Kim等"在椎板切除術(shù)、椎板切開術(shù)和 椎間盤切除術(shù)后使用Oxiplex/SP Gel膠1年以減小腿痛和下肢虛弱。Neurosurg Focus" 17(1): Clinical Pearl， 1: 1-6， 2004) : Porchet等"用ADCON-L抑制硬膜外纖維化對臨床結(jié)束 一年接著進行周期性腰椎神經(jīng)根病再手術(shù)的影響。"N函l Res 21 (增補版l) : 51-S60,
(1999);以及，ROSS等"在硬膜外傷痕和腰椎椎間盤切除術(shù)后周期性根痛之間的關(guān)系
磁共振評估"。ADCON-L歐洲研究組。Neurosurgery 38: 855-863' (1996)。在這些例子中， 凝膠以不受控制的方式被分配在施用的區(qū)域并且一次施加，凝膠分配不能被容易地操縱或者 校正。另外，這些抗粘連性凝膠劑具有有限的作為屏障的效果，并且層厚不能限定。這些抗 粘連性凝膠具有較低的止血性能，即便有的話。并且不能提供傷口愈合支撐作用，而且不能 定向細胞生長和組織再生。甚至有文獻報道了在使用ADCON-L的同時出現(xiàn)的CSF (腦脊髓 液)泄漏的增長率(Hieb， L.D.， & Stevens, D. L. (2001)。自發(fā)的手術(shù)后腦脊髓液泄漏接 著施用抗粘連屏障凝膠病案報告和文獻綜述。Spine, 26 (7) ， 748-751; Kuhn， J.， Hofinann， B.， Knitelius， H. O.， Coenen， H. H., & Bewermeyer， H. (2005)。在腰椎椎間盤切除術(shù)后 施用ADCON-L凝膠由于腦脊髓液的慢性滲漏導(dǎo)致的雙側(cè)硬膜下血腫和腰椎假性腦脊膜突 出，J Neurol Neuros咖Psychiatry, 76 (7)， 1031 -1033; Le， A. X.， Rogers，D. E., Dawson， E. G.，Kropf,M. A.,DeGrange,D. A.,&Delamarter，R.B. (2001)。腰椎椎間盤切除術(shù)后未被認識的 硬脊膜切開與使用ADCON-L有關(guān)的四例病案的報告，S由e， 26 (1) ， 115 - 7;討論118 )。
—種商品化抗粘連產(chǎn)品是DURAGENPLUS。該DURAGENPLUS屏障來源于牛，形 狀不很穩(wěn)定，該意思是指在施用以后其形狀和位置難以校正。另外，DURAGEN PLUS屏障 不具有高的抗拉強度和彈性。而且，由于DURAGENPLUS屏障是多孔的，因此并非不漏液 體(不滲透液體)，因而具有有限的作為屏障作用的效果。而且，DURAGEN PLUS吸收血 液，這可能會產(chǎn)生在粘連形成的發(fā)病機理中扮演關(guān)鍵角色的纖維蛋白帶，并且其多孔結(jié)構(gòu)促 進了非定向的細胞向內(nèi)生長，因此也可以對不受控制的纖維化組織形成和粘連有貢獻。
因此，強烈需要有一種用于被定向并受控的組織再生的新系統(tǒng)，以防止外科手術(shù)后 或外傷后進行外科手術(shù)時在組織愈合和再生過程中的硬膜外的和神經(jīng)周的粘連形成，并且防 止外傷性的傷害。該新系統(tǒng)不會吸收血液，支撐著重新塑造、再生和傷口愈合過程，其可以 使細胞的生長和細胞的向內(nèi)生長定向，并且其可以有效地用作有生物功能的隔離層。
因此，本發(fā)明的一個目的在于提供一種新方法，用于防止外科手術(shù)后或者外傷后硬 膜外的或祌經(jīng)周的粘連和纖維化，并且通過使用生物功能膠原薄片基質(zhì)來覆蓋和隔離脊柱組 織，來定向細胞向內(nèi)生長并且控制組織再生。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供組合物和方法，用于通過使用多層膠原薄片生物基質(zhì)來覆蓋 和隔離組織例如脊柱組織，防止外科手術(shù)后或者外傷后硬膜外的或神經(jīng)周的粘連和纖維化形 成、在外科手術(shù)后或外傷后定向細胞生長和細胞向內(nèi)生長并且控制組織再生。脊柱組織包括， 比如，脊椎管組織、硬膜和脊柱神經(jīng)。例如，在脊柱外科手術(shù)期間，在哺乳動物例如人身上 可以使用本發(fā)明的方法，包括用顯微多層的膠原薄片生物基質(zhì)覆蓋和隔離組織的步驟。在上 述方法的一個實施例中，多層膠原薄片生物基質(zhì)吸引細胞，所述細胞選自由修復(fù)細胞和再生 細胞所構(gòu)成的組。在上述方法的另一個實施例中，多層結(jié)構(gòu)的生物功能膠原薄片生物基質(zhì)將 細胞生長定向到表面上，并且定向向內(nèi)生長的細胞(比如修復(fù)細胞和再生細胞)，并且該多 層結(jié)構(gòu)的生物功能膠原薄片生物基質(zhì)在所述的向內(nèi)生長后被重新塑造成天然的組織，并且被 再吸收。進一步地，本發(fā)明涉及一種用于治療以脊柱組織缺損為特征的哺乳動物生理失調(diào)的 方法，包括用多層膠原薄片生物基質(zhì)覆蓋和隔離所述組織和/或周圍組織的步驟，以便抑制不 受控制的組織形成。在治療性地使用膠原基組合物時，膠原基組合物通常被宿主作為外來物察覺并且和往往被封閉起來。因此，不會發(fā)生或者不可能發(fā)生再內(nèi)皮細胞化并重構(gòu)建成各個解剖學(xué)組織， 沒有定向的細胞向內(nèi)生長并且沒有再生過程的控制，僅僅容許作為"生物相容的"移植物。 相反，本發(fā)明的多層膠原薄片生物基質(zhì)起到細胞膜(例如，脊骨細胞膜)的作用，其具有生 理活性臨時隔離層的功能，用于定向在多層膠原薄片生物基質(zhì)內(nèi)的細胞生長并且定向在膠原 薄片生物基質(zhì)的表面上。并非單獨作為抗細胞生長的屏障、而是作為大多數(shù)抗粘連組合物起 作用，本發(fā)明的多層膠原薄片生物基質(zhì)是極有生理活性并且支撐著組織的重塑。例如，植入 兩周后，本發(fā)明的多層膠原薄片生物基質(zhì)已經(jīng)較好地整合入硬膜外組織的修復(fù)的解剖結(jié)構(gòu)中。
另外，在外科手術(shù)以后和期間，本發(fā)明的無孔隙的、不漏液體(例如，血液)的多層結(jié)構(gòu)膠 原膜能夠防止不受控制的血液(例如，纖維蛋白原/纖維蛋白)分布和硬膜外傷口區(qū)域出現(xiàn)壞 死物質(zhì)，其決定著在外科手術(shù)后起始時間周期內(nèi)粘連形成的支撐條件(與多孔組合物相比)。 本發(fā)明的膠原生物基質(zhì)還防止在硬膜和硬膜外傷口區(qū)域、疤痕形成和纖維化的主要區(qū)域之間 的直接接觸。通過防止并使之最小化不受控制的粘連和疤痕形成以及防止硬膜外的纖維化， 這還有助于受控的解剖結(jié)構(gòu)的重塑。
本發(fā)明的部分目的如下
1. 一種方法，用于在哺乳動物細胞內(nèi)生長定向和組織再生控制、并且防止外科手術(shù)后或 者外傷后的粘連和在組織表面上的纖維化形成，其包括下述步驟用無孔的顯微多層的膠原 薄片生物基質(zhì)提供、覆蓋和隔離組織。
2. 如段落l所述的方法，其中，該組織選自由脊柱組織、硬膜和脊柱神經(jīng)所構(gòu)成的組。
3. 如段落1或2所述的方法，其中，細胞生長在多層膠原薄片生物基質(zhì)的層間的空隙內(nèi) 被定向。
4. 如段落l、 2或3所述的方法，其中，哺乳動物是人類。
5. 根據(jù)段落2的方法，其中，用無孔的多層膠原薄片生物基質(zhì)覆蓋和隔離組織的步驟在 脊柱外科手術(shù)期間進行。
6. 根據(jù)段落1、 2、 3、 4或5的方法，其中，多層膠原薄片生物基質(zhì)吸引細胞，所述細 胞選自由修復(fù)細胞和再生細胞所構(gòu)成的組。
7. 根據(jù)段落1、 2、 3、 4或5的方法，其中，多層膠原薄片生物基質(zhì)的多層結(jié)構(gòu)使修復(fù) 細胞和再生細胞的內(nèi)生長在表面內(nèi)及表面上、以及在多層膠原薄片生物基質(zhì)內(nèi)部被定向。
S.根據(jù)段落5、 6或7的方法，其中，在外科手術(shù)后兩周至約十二周的周期內(nèi)，在細胞 的內(nèi)生長期間，多層膠原薄片生物基質(zhì)被再吸收和重構(gòu)建成天然組織。9. 根據(jù)段落卜8的方法，其中，膠原薄片源自于下述選自由牛的、豬的、馬的、或人類 的膠原及其混合物所構(gòu)成的來源組之一，并且通過使用纖維蛋白封閉劑被附接于哺乳動物組 織。
10. —種防止在哺乳動物體內(nèi)粘連的方法，包括下述步驟用有生物功能的、無孔的多 層膠原薄片生物基質(zhì)提供、覆蓋和隔離組織，其中，多層膠原薄片在層間具有空隙，用于使 細胞生長在多層膠原薄片生物基質(zhì)內(nèi)部和其上被定向。
11. 如段落0所述的方法，其中，該方法防止外科手術(shù)后粘連和外傷引起的粘連。
12. 如段落10或11所述的方法，其中，該方法防止組織表面上的纖維化形成。
13. 如段落10、 11或12所述的方法，其中，組織選自由脊柱組織、硬膜和脊柱神經(jīng)所 構(gòu)成的組。
14. 如段落10所述的方法，其中，各層膠原薄片平滑并且基本上無孔。
15. 如段落14所述的方法，其中，各層膠原薄片完全無孔。
16. 如段落10、 11或12所述的方法，其中，多層膠原薄片生物基質(zhì)使在多層膠原薄片 的層間空隙中的細胞生長定向，并且膠原薄片的層被宿主再吸收并重構(gòu)建進入天然組織。
17. 如段落IO、 11或12所述的方法，其中，多層膠原薄片起到臨時脊骨膜的作用，用 于使新細胞的細胞生長定向，同時防止外科手術(shù)后或外傷后的粘連和纖維化。
18. 如段落10-17所述的方法，其中，膠原薄片源自于下述選自由牛的、豬的、馬的、或 人類的膠原及其混合物所構(gòu)成的來源組之一。
19. 如段落18所述的方法，其中，通過重組方式制造出膠原薄片。
20. 如段落l、 10、 11、 12、 17或18所述的方法，其中，該組織選自由腹部、卵巢、月巿、 肌肉和腱組織所構(gòu)成的組。
21. 如段落1、 9、 10或18所述的方法，還包括添加生理活性試劑(例如纖溶酶原激活 物)、生長閑子、抗生素、細胞抑制藥物、及其組合物的步驟。
22. 如段落l、 9、 10或18所述的方法，其中，該方法防止在骨或腱表面間的粘連增長。
23. —種用于防止粘連并防止纖維化形成的組合物，其包括顯微多層的膠原薄片生物基 質(zhì)，其中，多層膠原薄片可以使在膠原層間的空隙內(nèi)的細胞生長定向，并且使在多層膠原薄 片生物基質(zhì)的外表面上的細胞生長定向。
24. 如段落23所述的組合物，其中，多層膠原薄片生物基質(zhì)源自于選自由牛的、豬的、 馬的、或人類的膠原所構(gòu)成的組的材料。
25. 如段落23所述的組合物，其中，多層膠原薄片生物基質(zhì)源自于馬的膠原。26. 如段落23或25所述的組合物，其中，多層膠原薄片生物基質(zhì)的各層是平滑的并且 無孔。
27. 如段落23或25所述的組合物，其中，多層膠原薄片生物基質(zhì)的各層是平滑的并且 基本上無孔。
28. 如段落23或25所述的組合物，其中，多層膠原薄片生物基質(zhì)的層是多孔的，并且 任選地氣孔是互連的。
29. 組合物在藥物制造屮的應(yīng)用，用于防止在哺乳動物體內(nèi)的粘連和纖維化形成，其中， 組合物由顯微多層的膠原薄片生物基質(zhì)組成，其中，多層膠原薄片可以使修復(fù)細胞和/或再生 細胞在膠原層間的空隙中的生長被定向，其屮，膠原選自于由牛的、豬的、馬的、或人類的 膠原及其混合物所構(gòu)成的組中之一。
30. 如段落29所述的應(yīng)用，其中，粘連是手術(shù)后的粘連、或者通過外傷引起的粘連比如 硬膜外的或神經(jīng)周的粘連。
31. 如段落29所述的應(yīng)用，其中，組合物定向?qū)娱g空隙中的細胞生長。
32. 如段落29所述的應(yīng)用，其中，膠原薄片產(chǎn)生基本不透液的和不滲漏細胞的密封或屏障。
33. 如段落29、 30、 31或32所述的應(yīng)用，其中，通過利用外科手術(shù)封閉劑或者通過縫 合，將膠原薄片附接于組織。
34. 如段落29-33所述的應(yīng)用，其中，以試劑盒形式提供組合物。


圖1是SEM (掃描電子顯微鏡)照片，顯示了生物功能膠原薄片生物基質(zhì)的表面。 膠原原纖維被清楚地顯示出來。由圖片證明表面基本無孔；圖2A和2B是在ESEM (環(huán)境掃描電子顯微術(shù))條件下拍攝的照片，該條件是指在 稍潮濕的大氣中接近真實條件，照片顯示了從生物功能膠原薄片生物基質(zhì)側(cè)面觀察的上表面。 由照片證明基本上無孔；圖3A和3B是在ESEM條件下拍攝的照片，顯示了生物功能膠原薄片生物基質(zhì)的下 表面。膠原原纖維被圖3A顯示出來。由圖片證明該表面基本上無孔；圖4是SEM照片，顯示了水合生物功能膠原薄片生物基質(zhì)的表面。膠原原纖維清楚 顯示于圖4中。由圖片證明表面基本上無孔；圖5A、 5B和5C是在ESEM條件(潮濕的環(huán)境)下拍攝的照片，顯示了生物功能膠原薄片生物基質(zhì)的橫截面。該材料顯示了該結(jié)構(gòu)類似一堆非常緊地堆在一起的層疊薄片。膠 原層間的空隙顯示于圖片中；圖6A和6B是SEM照片，顯示了干燥的生物功能膠原薄片生物基質(zhì)的橫截面。圖片 中顯示了多層膠原和膠原層間的空隙；圖7是本發(fā)明的一種具體實施方式
的示意圖，其中生物功能膠原薄片生物基質(zhì)被設(shè) 置于通過手術(shù)而在脊椎骨上產(chǎn)生的缺損的整個邊緣，并且設(shè)置在硬膜(duramater)頂部上， 以便定向細胞向內(nèi)生長并控制組織再生，因此防止再生創(chuàng)傷組織的粘連至脊骨硬膜(spinal dura mater)和脊柱神經(jīng)(spinal nerve)。本實施方式中，將生物功能膠原薄片生物基質(zhì)的邊 緣緊固至脊椎骨側(cè)面的外部傷口表面；圖S是本發(fā)明的另一種具體實施方式
的示意圖，其中生物功能膠原薄片生物基質(zhì)被 設(shè)置于通過手術(shù)而在脊椎骨上產(chǎn)生的缺損的下面，并且設(shè)置在硬膜頂部上，以便防止再生創(chuàng) 傷組織粘連至脊骨硬膜和脊柱神經(jīng)。本實施方式中，將生物功能膠原薄片生物基質(zhì)的邊緣緊 固至脊椎骨的內(nèi)表面，位于脊椎管內(nèi)；圖9是手術(shù)一周后膠原薄片生物基質(zhì)的剖視圖。表面結(jié)構(gòu)是無孔的，并且形成臨時 的屏障。血液(紅血球)被隔離并且不會滲入多層膠原薄片生物基質(zhì)；圖IO顯示了植入一周后的膠原薄片生物基質(zhì)。按常規(guī)外科療法(癲癇癥)方案間隔 7天給病人(年齡18歲，性別女性)動手術(shù)。第一次外科手術(shù)期間，將膠原薄片生物基 質(zhì)植入硬膜外〔防止CSF泄漏)。在第二次外科手術(shù)期間，在硬膜重新打開之前按慣例除去 膠原薄片生物基質(zhì)植入物。在硬膜外(epidural)植入一周后，膠原薄片生物基質(zhì)在機械性方 面仍然穩(wěn)定，并且可移動；圖11是植入一周后膠原薄片生物基質(zhì)邊緣的剖視圖。成纖維細胞已經(jīng)從下部側(cè)侵入 生物基質(zhì)約25 ym，并且正在沿著平行多層結(jié)構(gòu)、以定向的縱向向內(nèi)生長方向擴散，并且正 在成長為被多層結(jié)構(gòu)定向的膠原薄片生物基質(zhì)?？v向滲透約220至320 nm。修復(fù)細胞沿著 多層結(jié)構(gòu)的定向向內(nèi)生長速度在縱向比橫向高約10至15倍("圖10")。最小限度的炎性 浸潤表示了正在進行的再生過程；圖12顯示了新西蘭白兔("NZW")手術(shù)后的玻片，放大倍數(shù)x20，用HE染色，
如同實施例1的教導(dǎo)。多層膠原薄片生物基質(zhì)是在硬膜和背側(cè)傷口區(qū)域之間的隔離層，并且
提供了生理活性多層結(jié)構(gòu)，該多層結(jié)構(gòu)是無孔的并且對血液而言不漏液體；圖13A顯示了NZW兔手術(shù)1周后的情況；放大倍數(shù)x2.5; HE染色。多層膠原薄
片生物基質(zhì)正在封閉椎板切除術(shù)的缺損并且正在將硬膜外腔與初期細胞富集的背側(cè)疤痕形成區(qū)隔離；圖13B顯示了NZW兔手術(shù)1周后的情況；放大倍數(shù)x 20; HE染色。該圖顯示了 在缺損(a)的邊緣處在多層膠原薄片生物基質(zhì)和骨質(zhì)之間的接觸區(qū)域；圖13C顯示了NZW兔手術(shù)1周后的情況；放大倍數(shù)x 20; HE染色。多層膠原薄 片生物基質(zhì)位于椎板切除術(shù)缺損的中心。多層膠原薄片生物基質(zhì)被一體化并且正在將前側(cè)？ 腹側(cè)(ventra)的硬膜外腔與背側(cè)(dorsal)疤痕形成區(qū)隔離；圖13D顯示了NZW兔手術(shù)1周后的情況；放大倍數(shù)x2.5; HE染色。多層膠原薄 片生物基質(zhì)正在封閉椎板切除術(shù)的缺損并且正在將硬膜與初期細胞富集的背側(cè)疤痕形成區(qū)隔 離；細胞還沒有滲透膠原生物基質(zhì)的表面。在膠原生物基質(zhì)邊緣處，正開始將修復(fù)細胞定向 滲入多層結(jié)構(gòu)(a):圖13E顯示了 NZW兔手術(shù)1周后的情況；放大倍數(shù)x 2.5; HE染色。膠原海綿 (DURAGEN)被用于覆蓋椎板切除術(shù)缺損。在硬膜外腔和背側(cè)傷口區(qū)域之間沒有清晰的無 孔隔離層。該海綿被血液浸透；圖14A顯示了兔子手術(shù)兩周后的情況；放大倍數(shù)x2.5; HE染色。多層膠原薄片生 物基質(zhì)完全地被一體化。組織修復(fù)細胞已經(jīng)滲透膠原生物基質(zhì)，并且由帶有脂肪細胞的疏松 組織使硬膜與疤痕形成區(qū)以及重構(gòu)建的膠原生物基質(zhì)隔離；圖14B顯/孓了兔子手術(shù)兩周后的情況；放大倍數(shù)x 4; HE染色；多層膠原薄片生 物基質(zhì)完全被一體化。組織修復(fù)細胞己經(jīng)滲透膠原生物基質(zhì)的多層結(jié)構(gòu)。由帶有脂肪細胞的 疏松組織使硬膜與疤痕形成區(qū)和重構(gòu)建的膠原生物基質(zhì)隔離；以及圖14C顯示了兔子手術(shù)兩周后的情況放大倍數(shù)x 10; HE染色；多層膠原薄片生 物基質(zhì)完全被一體化。組織修復(fù)細胞已經(jīng)滲透膠原生物基質(zhì)的多層結(jié)構(gòu)(a)。由帶有脂肪細 胞的疏松組織使硬膜與疤痕形成區(qū)和重構(gòu)建的膠原生物基質(zhì)隔離。
具體實施例方式本發(fā)明的一個方面涉及一種方法，用于防止手術(shù)后或者外傷后硬膜外的或神經(jīng)周的 粘連、并且防止在脊柱組織表面上的纖維化形成，該組織包括選自由哺乳動物體內(nèi)脊椎管組 織、硬膜和脊柱神經(jīng)所構(gòu)成的組，該方法包括下述步驟用顯微多層的膠原薄片生物基質(zhì)覆 蓋該組織，并且將該組織與其他周圍組織隔離。根據(jù)本發(fā)明的多層膠原薄片生物基質(zhì)是膠原自然交聯(lián)的、顯微多層的生物基質(zhì)，其 由多層基本上無孔的薄片組成，所述薄片由非天然產(chǎn)生的生物基質(zhì)中的膠原原纖維組成，例
10如，如國際專利申請WO 04/108179所述，在此將其公開的全部內(nèi)容并入本文以供參考。根 據(jù)本發(fā)明使用的膠原薄片是有生物功能的、生理活性的、在機械性方面穩(wěn)定的、有彈性的、 無孔的并且不漏液體尤其血液的、并且不漏細胞的臨時屏障，阻止不受控制的血液、纖維蛋 白原、壞死材料和損傷組織的分布。被限定在脊柱組織之間的生理活性隔離層因此在最初屏 蔽了脊柱組織和周圍組織，脊柱組織和周圍組織之一或兩者可以是磨損的或損傷的組織。該 多層膠原薄片生物基質(zhì)起到止血劑作用；并且抑制不受控制的纖維蛋白帶子形成和分配以及 血腫，它們引起在解剖學(xué)區(qū)域纖維化和粘連形成的主要原因之一，該區(qū)域位于硬膜或脊柱神 經(jīng)旁邊或者附近。在本發(fā)明的一個實施例中，通過根據(jù)本發(fā)明的方法防止細胞粘連至脊柱神經(jīng)和/或硬 膜，該細胞選自于結(jié)締組織細胞。哺乳動物可以是任何哺乳動物，比如人、小鼠、大鼠、貓、狗等。用多層生物功能膠原薄片生物基質(zhì)覆蓋和隔離組織的步驟可以在治療脊椎硬膜或脊 柱的任何傷害或缺損期間進行。本發(fā)明的一個實施例中，用多層膠原薄片生物基質(zhì)覆蓋和隔 離組織的步驟可以在脊柱外科手術(shù)期間進行。在另一個實施例中，多層膠原薄片生物基質(zhì)吸 引細胞比如修復(fù)細胞和再生細胞，并且定向它們的向內(nèi)生長穿過并且在薄片生物基質(zhì)上。通 過細胞的向內(nèi)生長，該多層膠原薄片生物基質(zhì)被再吸收并重構(gòu)建成天然組織。該膠原薄片生 物基質(zhì)起到有生理活性和有生物功能的支架作用，用于細胞的體內(nèi)向內(nèi)生長，并且在再生和 恢復(fù)期間被哺乳動物組織替代。該膠原薄片生物基質(zhì)可被在其體內(nèi)植入的哺乳動物再吸收。 這一性能可以通過自然交聯(lián)的膠原纖維和多層結(jié)構(gòu)的膠原薄片生物基質(zhì)的生物功能性而得到 增強，如圖5-6所示。用以產(chǎn)生本發(fā)明中使用的膠原薄片生物基質(zhì)的工藝可以形成膠原原纖維的堆積層。 在各層之間是空隙，供病人的細胞和脈管系統(tǒng)可以進入其內(nèi)遷移并且形成新的膠原結(jié)構(gòu)和天 然構(gòu)造的組織。根據(jù)本發(fā)明的方法的有益性能是，有生物功能的天然的膠原纖維和無孔的、 層狀結(jié)構(gòu)的膠原薄片生物基質(zhì)能夠促進細胞、脈管系統(tǒng)的向內(nèi)生長，并且促進形成新的穿過 膠原薄片生物基質(zhì)和在存在于多個層之間的空隙內(nèi)的膠原結(jié)構(gòu)。與在傷口或者缺損處隨機的、 不能控制的、未受控制的細胞向內(nèi)生長相比，在本發(fā)明的方法中的定向向內(nèi)生長和再生可以 防止粘連和纖維化的形成，維持在脊柱解剖結(jié)構(gòu)中組織的隔離。因此，避免了與硬膜外的或 神經(jīng)周的粘連和纖維化有關(guān)的疼痛和并發(fā)癥。 —般說來，措詞"用多層膠原薄片生物基質(zhì)覆蓋組織"是指使組織與多層膠原薄片 生物基質(zhì)直接接觸。在本發(fā)明的一個實施例中，組織與多層膠原薄片生物基質(zhì)的接觸導(dǎo)致所
11述薄片的植入。多層膠原薄片生物基質(zhì)位置的例子如圖7-8所示。在此使用的措詞"多層膠原薄片生物基質(zhì)"或"膠原生物基質(zhì)"或"膠原薄片"， 是指天然膠原原纖維的生物基質(zhì)(即生物相容的和有生物功能的材料基質(zhì))，其被處理以除 去非膠原的組分，并且形成具有在顯微鏡水平上多層薄片結(jié)構(gòu)的膠原原纖維片。該多層膠原 薄片可以是任何來源，比如來源于牛、羊、豬、馬或者人，其被處理以除去非膠原的組分， 并且形成具有相同物理性質(zhì)的膠原原纖維片。本發(fā)明的膠原薄片生物基質(zhì)當通過掃描電子顯 微鏡測定時基本上是無孔的。在上下文中，針對有生物功能的多層薄片的生物基質(zhì)所使用的術(shù)語"生物功能"， 是指該生物基質(zhì)由天然的膠原原纖維組成，可以被動物的細胞以類似于動物體內(nèi)天然膠原原 纖維的方式識別和利用。例如，但不限于，這樣的功能可以包括修復(fù)細胞和再生細胞沿著生 物功能膠原原纖維和多層結(jié)構(gòu)的移動，并且可以包括新細胞外基質(zhì)被細胞的沉積(包含、或 代替生物功能膠原原纖維的沉積)。在此使用的措詞"非天然產(chǎn)生的生物基質(zhì)"是指被制造的基質(zhì)或骨架，其包括由下 述材料形成的天然膠原原纖維(i)存在于自然界的材料(即天然材料)，其己經(jīng)以一種方 式被處理或加工，其中在天然材料膠原結(jié)構(gòu)內(nèi)部，天然材料所含膠原原纖維已從它們自然發(fā) 生的排列位置被移動或復(fù)位；或者(ii)自然界不存在的材料(即非天然的、人造材料，比如 重組體材料)，其被處理或加工用于操縱膠原原纖維的排列。例如，非天然產(chǎn)生的生物基質(zhì) 可以由包含膠原的起始原材料形成，該膠原己經(jīng)經(jīng)過機械或化學(xué)加工(例如研磨、切碎等)。 通過以保留大然產(chǎn)生的膠原骨架結(jié)構(gòu)的方式來處理或加工起始原材料而形成的膠原生物基質(zhì) 不是非天然產(chǎn)生的生物基質(zhì)(例如被處理以除去細胞組分同時保留大然產(chǎn)生的膠原結(jié)構(gòu)的表 皮組織)。在本發(fā)明的一種實施方式中，膠原薄片生物基質(zhì)由包含膠原原纖維的結(jié)締組織蛋白 質(zhì)組成。例如，膠原薄片生物基質(zhì)可以由包含I型膠原原纖維的結(jié)締組織蛋白質(zhì)組成。除了 由膠原原纖維組成之外，膠原薄片生物基質(zhì)可以進一步包括賦形劑、防腐劑、生長因子或者 有助于最終產(chǎn)品的柔韌性和彈性的添加劑。各層膠原原纖維是基本上無孔的。在此使用的措詞"基本上無孔的"是指，任何存 在于膠原薄片生物基質(zhì)中的氣孔基本上互相隔離，這些氣孔是沉積膠原原纖維以形成膠原薄 片的結(jié)果。這些氣孔不以橫過膠原薄片厚度的方式互相連接。在膠原薄片生物基質(zhì)中開孔的 機械穿孔不是氣孔。在本發(fā)明的一個實施例中，通過使用掃描電子顯微鏡放大1500倍材料呈 現(xiàn)為基本上沒有能看得見的孔。掃描電子顯微鏡圖片顯示了膠原薄片生物基質(zhì)無孔的性質(zhì)，
在本發(fā)明的一種實施方式中，在本發(fā)明中使用的膠原薄片生物基質(zhì)是非天然產(chǎn)生的 多層膠原膜，其包含許多層多方向纏結(jié)的膠原原纖維。因此，膠原原纖維以多向的方式設(shè)置 在平面內(nèi)，并且這些平面形成薄片，產(chǎn)生多層結(jié)構(gòu)。在顯微照相(SEM)中，可以看見干燥 的膠原薄片生物基質(zhì)的示意圖，其顯示了膠原薄片生物基質(zhì)的表面，其中膠原原纖維被包埋 (圖1)。在ESEM (環(huán)境掃描電子顯微術(shù)，其中提供稍潮濕的大氣以接近真實條件)條件 下的膠原薄片生物基質(zhì)的上表面照片上，可以看見膠原原纖維是在表面上。該表面顯得平滑 并且基本上無孔(圖2)。在圖3中，膠原薄片生物基質(zhì)的下表面照片(ESEM)顯示了膠原 薄片生物基質(zhì)的基本無孔性。]在多個層中膠原纖維沿二維方向的單一朝向基本上保障了甚至在高靜水壓下的不透 液，并&提供了較大的強度和高彈性。由于許多平行排列的膠原薄片生物基質(zhì)的較薄膠原原 纖維層，這種材料適合于覆蓋后在封閉和隔離缺損方面臨時代替身體本身的組織，并且提供 有生物功能的生物基質(zhì)支架，用于細胞向內(nèi)生長以形成新的組織。本發(fā)明的多層結(jié)構(gòu)增強了 膠原薄片生物基質(zhì)的不透液特性。因為膠原薄片生物基質(zhì)是基本上無孔，空隙存在于膠原原纖維層之間。該膠原薄片 生物基質(zhì)類似于一疊書頁，其中，各頁基本平滑并且基本上無孔，各頁之間具有間隙。當處 于干燥形式時，空隙更明顯。當在稍潮濕的大氣中接近真實條件下觀察膠原薄片生物基質(zhì)時， 空隙變小。膠原薄片生物基質(zhì)的空隙的減小被顯示在圖5中于潮濕環(huán)境下的膠原薄片生物基 質(zhì)的截面圖中。除促進不透液性能之外，許多平行排列的膠原薄片生物基質(zhì)的較薄膠原原纖 維層同時還用作生物等效的生物功能支架，用于細胞向內(nèi)生長以便身體自身組織的從頭構(gòu)造。
當水合時，根據(jù)本發(fā)明使用的膠原薄片生物基質(zhì)的體積變化較小或者可以忽略。與 多孔置換的產(chǎn)物相反，當發(fā)生水合時，膠原薄片生物基質(zhì)基本上保持其大小和形狀，甚至在 水合以后也具有出色的形狀穩(wěn)定性，并且不會引起與組織相接觸后溶脹或者收縮的問題。一 旦被水合和植入，膠原薄片生物基質(zhì)不會顯著地在面積或厚度方面膨脹或者收縮到這樣的程 度其將撕裂外科縫線，或者分裂纖維蛋白或其他生物相容的使膠原薄片生物基質(zhì)緊貼病人 的組織的膠密封。在本發(fā)明的一個實施例中，當完全水合時，干燥的膠原薄片生物基質(zhì)面積的收縮或 溶脹可以改變約-5%至約20%。在另一個實施例中，當完全水合時，干燥的膠原薄片生物基 質(zhì)的面積的收縮或溶脹可以在約-5%至約10%之間變化。在另一個例子中，當完全水合時， 干燥的膠原薄片生物基質(zhì)的面積的收縮或溶脹可以在約-5 %至約5 %之間變化。例如，當完
13全水合時，干燥的膠原薄片生物基質(zhì)的面積增加至多約為4%。在本發(fā)明的一個實施例中，當完全水合時，膠原薄片生物基質(zhì)增加至約6倍于其干 燥時的厚度。在另一個實施例中，當完全水合時，膠原薄片生物基質(zhì)增加至約3倍于其干燥 時的厚度。在另一個實施例中，當完全水合時，膠原薄片生物基質(zhì)增加至約2倍于其干燥時 的厚度。用于本發(fā)明的膠原薄片生物基質(zhì)的厚度可以根據(jù)其具體應(yīng)用的需要而變化。改變用 以產(chǎn)生具體尺寸的膠原薄片生物基質(zhì)的起始原材料的含量可以控制膠原薄片生物基質(zhì)的厚 度。在本發(fā)明的一個實施例中，根據(jù)本發(fā)明使用的膠原薄片生物基質(zhì)，當呈其干燥形式時， 具有約0.01 mm至約3.0 mm的厚度。在另一個實施例中，膠原薄片生物基質(zhì)的厚度為約0.02 mm至約2.0mm。在另一個實施例中，膠原薄片生物基質(zhì)的厚度為約0.03 mm至約1.5 mm。 在另一個實施例中，膠原薄片生物基質(zhì)的厚度為約0.05mm至約lmm。在再一個實施例中， 膠原薄片生物基質(zhì)的厚度為約l.Omm以下。膠原薄片生物基質(zhì)的干重取決于其所需要的厚度。在一個實施例中，膠原薄片生物 基質(zhì)的干重為約1 mg/cr^至約50mg/cm2。在另一個實施例，膠原薄片生物基質(zhì)的千重為約 1.5 mg/cn^至約30 mg/cm2。在再一個實施例中，膠原薄片生物基質(zhì)的干重為約2 mg/cn^至 約20 mg/cm2。在再一個實施例中，膠原薄片生物基質(zhì)的干重為約2.5 mg/cm2至約15 mg/cm2。 例如，膠原薄片牛物基質(zhì)的干重為約3 mg/cm2至約10 mg/cm2。在本發(fā)明的一個實施例中，當剛水合時，膠原薄片生物基質(zhì)的重量增加至約15倍于 其干重。在另一個實施例中，當剛水合時，膠原薄片生物基質(zhì)的重量增加至約IO倍于其千重。 在另一個實施例中，當剛水合時，膠原薄片生物基質(zhì)的重量增加至約7倍于其干重。在又一 個實施例中，當剛水合時，膠原薄片生物基質(zhì)的重量增加至約5倍于其干重。
優(yōu)選根據(jù)本發(fā)明使用的膠原薄片生物基質(zhì)具有高抗拉強度，其可以改善并支持例如 在其外科手術(shù)施用期間對膠原薄片生物基質(zhì)的處理，并且提供例如在其植入后增加了的機械 穩(wěn)定性。另外，增加膠原薄片生物基質(zhì)的厚度可以顯著地提高抗拉強度。
在加壓下膠原薄片生物基質(zhì)材料發(fā)生撕裂的傾向可以被測量為其"最終拉伸載荷" 或"最終張力"，以下簡稱"最終張力"。通過對具有特定寬度的膠原薄片生物基質(zhì)條帶施 壓，并且確定導(dǎo)致破壞(例如，撕裂或破裂)膠原薄片生物基質(zhì)的加壓量，可以確定膠原薄 片生物基質(zhì)膠原薄片生物基質(zhì)的最終張力。使用下列方程式可使最終張力定量化"最終張 力"=施加的壓力/膠原薄片生物基質(zhì)條帶的寬度=牛頓/厘米條帶。
在本發(fā)明的一個實施例中，膠原薄片生物基質(zhì)的最終張力為約1至約30牛頓/厘米條 帶，例如為約1.5至約15牛頓/厘米條帶，例如為約2至約10牛頓/厘米條帶，例如為約3至 約6牛頓/厘米條帶。同時，根據(jù)本發(fā)明使用的膠原薄片生物基質(zhì)具有高抗拉強度，當水合時，其保持彈 性和柔韌性。該特征允許膠原薄片生物基質(zhì)能夠最佳地適應(yīng)在接觸部位存在的解剖條件(例 如彎曲)。當在其水合狀態(tài)時，膠原薄片生物基質(zhì)可以容易地圍繞例如外科手術(shù)位點移動，并 且最佳地被塑模和修改成例如在其被植入處的缺損的形狀和位置。 一旦被植入，膠原薄片生 物基質(zhì)移植物可以保持平滑，并且可以在必要時被復(fù)位。隨時間的過去，細胞和脈管系統(tǒng)定 向遷移，遍及多層膠原薄片生物基質(zhì)的多個層，最終用新的組織代替多層膠原薄片生物基質(zhì)。 當細胞遷移和脈管系統(tǒng)形成在膠原薄片生物基質(zhì)的層內(nèi)部時，組織以定向的方式采取膠原薄 片生物基質(zhì)的形狀。在膠原薄片生物基質(zhì)的細胞組織具有重新形成的結(jié)締組織后，使得脊骨 硬膜或者脊柱神經(jīng)組織的粘連形成最小化。用于制造膠原薄片生物基質(zhì)的膠原可以從任何合適的來源得到。例如，但不限于， 膠原可以來源于牛、羊、豬、馬或人?？梢杂商烊唤M織比如肌腱、真皮、或其他富含膠原的 組織收集膠原，或者可以通過重組體遺傳手段生產(chǎn)。如下所述，本發(fā)明的一個示例性實施方 式利用馬來源于跟腱的膠原。在例如WO 04/108179所述的生產(chǎn)工藝期間，膠原原纖維成為自然交聯(lián)，如同溶液中 析出的原纖維沉淀物那樣，從而形成膠原薄片。不同于使用化合物或輻射(例如電離或紫外 線輻射)交聯(lián)的膠原原纖維，允許膠原原纖維自然交聯(lián)，從而確保了它們的生物功能性，促 進了再生加快，并且一旦膠原薄片生物基質(zhì)接觸到組織時促進了再吸收次數(shù)的減少。用化合 物或者輻射進行交聯(lián)的膠原原纖維可能導(dǎo)致再吸收量次數(shù)的增加、或者甚至無再吸收、封閉、 以及疤痕形成。在本發(fā)明使用的膠原薄片生物基質(zhì)中的原纖維的自然交聯(lián)通過自然的、生理 學(xué)類的方法發(fā)生?；旧线@些自然交聯(lián)是通過非共價相互作用(例如范德華力或者偶極-偶極 相互作用)進行的，或者通過在膠原分子的氨基酸側(cè)鏈間形成可輕易隔離的席夫堿鍵而進行 的。膠原分子內(nèi)的交聯(lián)決定著物理穩(wěn)定性和化學(xué)穩(wěn)定性。在膠原交聯(lián)鍵的形成中的關(guān)鍵步驟 取決于賴氨酸或羥基賴氨酸殘基的酶轉(zhuǎn)化，并且導(dǎo)致產(chǎn)生醛類、s-醛賴氨酸和6-醛基羥賴氨 酸。這些醛基會自然地與反應(yīng)性的氨基反應(yīng)，導(dǎo)致含有具有不穩(wěn)定醛亞胺鍵(類似例如-CH^ N-)的不穩(wěn)定羥醛縮合物產(chǎn)物的席夫堿組分的形成。因此，本發(fā)明產(chǎn)物的原纖維可以通過用 例如弱酸處理進行隔離。由使用化學(xué)交聯(lián)劑引起的交聯(lián)可以通過存在穩(wěn)定的共價交聯(lián)鍵的交聯(lián)部分而檢測到。通常，這可以通過使用席夫堿(Schiff-base)試劑(例如戊二醛)以形成 席夫堿反應(yīng)產(chǎn)物、然后通過阿馬多爾重排(Amadori-rearrangement)或還原條件來固定化連 接鍵而完成。另外，膠原可以通過多種雙功能的碳二亞胺試劑進行交聯(lián)。由使用輻射引起的 交聯(lián)可以通過在膠原原纖維間存在穩(wěn)定的共價鍵進行檢測，該共價鍵是通過在照射期間產(chǎn)生 的自由基部分的反應(yīng)所引起的。另一方面，本發(fā)明的產(chǎn)物中，原纖維基本上不與任何穩(wěn)定的 共價鍵交聯(lián)，并且未經(jīng)過化合物或者放射手段處理。因此，在本發(fā)明的產(chǎn)物中原纖維之間的 任何聯(lián)系基本上是非共價的或者易可逆的，并且不是穩(wěn)定地交聯(lián)的。過去人們巳經(jīng)使用化合 物比如氰胺、戊二醛、甲醛、丙烯酰胺、碳二酰亞胺二酮(carbodiimidedione) 、 二酰亞胺化 物(diimidate) 、 二丙烯酰胺及其類似物來以化學(xué)方法交聯(lián)膠原原纖維。然而，使用這些化 合物可以導(dǎo)致與無意中使神經(jīng)系統(tǒng)組織接觸膠原薄片生物基質(zhì)中的殘留化合物有關(guān)的毒性風 險。沉積工藝因此避免了交聯(lián)性化合物的毒性風險和較長的與用化合物或輻射交聯(lián)膠原原纖 維有關(guān)的再吸收次數(shù)。得到的干燥的、沉積的膠原組合物可以形成由高分子量的多層膠原膜組成的膠原薄 片生物基質(zhì)，該多層膠原膜包含許多層二維多向的自然纏結(jié)的膠原原纖維。該膠原薄片生物 基質(zhì)主要含有有間隙的I型膠原。該膠原薄片生物基質(zhì)基本上無孔并且基本不透液?？梢栽?產(chǎn)物上進行免疫擴散測試，以確保沒有異種蛋白。該膠原薄片生物基質(zhì)可以通過使用環(huán)氧乙 烷(ETO)或者類似的滅菌氣體進行氣體滅菌，或者通過照射滅菌。根據(jù)本發(fā)明，使用馬的膠原薄片生物基質(zhì)的顯著益處在于將疾病傳輸給接觸所述薄 片的病人的風險基本上較低。其中膠原原纖維用酸(例如鹽酸、乙酸等)和堿(比如氫氧化 鈉)處理從而產(chǎn)生馬膠原薄片的生產(chǎn)工藝有益地起到下述作用使細菌、病毒和可能存在的 感染性蛋白質(zhì)失活或者降低其傳染水平。用鹽酸、氫氧化鈉、環(huán)氧乙垸(ETO)等處理生物 材料已經(jīng)是本技術(shù)領(lǐng)域公知的使感染性蛋白質(zhì)和病毒失活的在藥物和生物材料規(guī)則內(nèi)準許的 方法。在一些規(guī)則下，這樣的處理可以對于在分批次基礎(chǔ)上測試馬膠原薄片降低受規(guī)則要求 的限制。因此，在生產(chǎn)工藝期間膠原原纖維的處理增強了產(chǎn)物安全性，并且降低了將疾病傳 染給病人的風險。已經(jīng)經(jīng)過如上所述生產(chǎn)加工的馬的材料已知尚未將任何病原體傳染給病人。因此， 除生產(chǎn)工藝之外，基于馬的膠原的利用進一步避免了傳染以前與人類尸體材料有關(guān)的海綿狀 腦炎的風險。來源于馬的膠原(比如來源于馬跟腱的膠原)的使用，避免了傳染可傳染的海 綿狀腦病(TSE)的風險，該TSE亦稱為牛海綿狀腦病(BSE)或癢病。這些疾病的傳染已 經(jīng)發(fā)現(xiàn)與使用由反芻動物來源(例如源于牛、山羊、縮羊等)得到的生物材料有關(guān)。
根據(jù)本發(fā)明使用的膠原薄片生物基質(zhì)，其中源自于馬并且經(jīng)額外處理(例如用酶) 的膠原降低了免疫反應(yīng)引出的風險。來源于馬的膠原薄片生物基質(zhì)還會導(dǎo)致炎癥應(yīng)答的降低。當與含有來源于比如人類 闊筋膜的膠原的薄片相比時，由接觸馬膠原薄片生物基質(zhì)引起的炎性細胞的數(shù)量顯著較低。
在使用之前，可以將干燥的膠原薄片生物基質(zhì)例如在生理鹽水中進行水合。在一個 實施例中，生理鹽水包括0.9%氯化鈉溶液。在另一個實施例中，膠原薄片生物基質(zhì)在含有賦 形劑或藥物的溶液中水合。水合膠原薄片生物基質(zhì)所需的持續(xù)時間與薄片的厚度有關(guān)。膠原 薄片生物基質(zhì)水合直到其全部區(qū)域厚度一致。在一個實施例中，膠原薄片生物基質(zhì)在生理鹽 水中水合約0.5秒至約1小時。在另一個實施例中，膠原薄片生物基質(zhì)在生理鹽水中水合約 0.5秒至約30分鐘。在另一個實施例中，膠原薄片生物基質(zhì)在生理鹽水中水合約0.5秒至約 20分鐘。在另一個實施例中，膠原薄片生物基質(zhì)在生理鹽水中水合約0.5秒至約IO分鐘。在 又一個實施例中，膠原薄片生物基質(zhì)在生理鹽水中水合約0.5秒至約2分鐘。在另一個實施 例中，例如，通過把膠原薄片生物基質(zhì)浸入生理鹽水，使膠原薄片生物基質(zhì)在生理鹽水中水 合約0.5秒至10秒。在另一個實施例屮，在接觸組織之前，膠原薄片生物基質(zhì)不水合。
通過建立的外科手術(shù)技術(shù)，例如通過纖維蛋白封閉劑、組織膠、外科縫線、或者通 過加壓固定外科手術(shù)技術(shù)，可以將膠原薄片生物基質(zhì)附著于病人的組織。作為另一種選擇， 在膠原薄片生物基質(zhì)和組織之間的自然吸引性、或者組織表面上的血液可以被用于將膠原薄 片生物基質(zhì)附接在組織上，無需使用任何封閉劑、膠、縫線、或者加壓固定技術(shù)。 一旦水合， 可以將膠原薄片生物基質(zhì)切割成稍大于病人組織上的例如外科手術(shù)開口 。因此該膠原薄片生 物基質(zhì)稍稍重疊在其附接的病人組織上。在一個實施例中，水合膠原薄片生物基質(zhì)大小為與 組織重疊大約0.5厘米至約1厘米。根據(jù)外科醫(yī)生的選擇和技術(shù)，重疊量可以改變。
在一個實施例中，根據(jù)眾所周知的膠原與纖維蛋白原和粘連蛋白的交互作用，膠原 薄片生物基質(zhì)可以用纖維蛋白封閉劑固定就位。經(jīng)批準用于外科手術(shù)用途的纖維蛋白封閉劑 的例子包括TISSUCOL和TISSEEL纖維蛋白封閉劑(Baxter AG公司，維也納，奧地利)。 作為另一種選擇，也可以使用不會誘導(dǎo)廣泛炎癥反應(yīng)并且經(jīng)批準用于脊柱外科手術(shù)的組織膠。 在圍繞重疊組織的膠原薄片生物基質(zhì)部分的連續(xù)線上可以涂敷纖維蛋白封閉劑或組織膠，以 便形成不透液的密封。用不透液的密封固定是優(yōu)選的，因為其避免了與接觸鄰接的出血組織 有關(guān)的并發(fā)癥，例如，被纖維蛋白誘發(fā)的粘連形成。在另一個實施例中，當用纖維蛋白封閉 劑或組織膠的連續(xù)線附著于組織時，膠原薄片生物基質(zhì)產(chǎn)生不透液的密封。在另一個實施例 中，重疊組織的膠原薄片生物基質(zhì)可以用纖維蛋白封閉劑或組織膠打點，以便將其附接至組織。在又一個實施例中， 一旦已經(jīng)被放置于欲期接觸部位，可以通過手術(shù)縫合將膠原薄片生 物基質(zhì)附接至組織。如果膠原薄片生物基質(zhì)被縫合，必須采用無張力的縫合技術(shù)，以防止撕 裂薄片。例如，建議使用具有纖維蛋白封閉劑的密封縫合線。在另一個實施例中，根據(jù)本技 術(shù)領(lǐng)域已知的加壓固定技術(shù)，設(shè)置并植入膠原薄片生物基質(zhì)。在該技術(shù)中，膠原薄片生物基 質(zhì)被設(shè)置在欲期植入位置，并且被周圍組織固定就位。因此，保持就地移植，無需使用外科 縫線、纖維蛋白封閉劑、或組織膠。在另一個實施例中，膠原薄片生物基質(zhì)被設(shè)置并植入， 無需使用任何封閉劑、膠、縫合、或加壓固定技術(shù)。在該技術(shù)中，膠原薄片生物基質(zhì)被設(shè)置 在欲期植入位置，并且通過在膠原薄片生物基質(zhì)和哺乳動物組織之間發(fā)生的自然吸引或粘連 固定就位。在另一個實施例中，通過上述任何方法可以將膠原薄片生物基質(zhì)施加于組織并附 著，然后通過上述任何方法將另一個膠原薄片生物基質(zhì)施加于鄰接的組織并涂敷，因此產(chǎn)生 膠原薄片生物基質(zhì)的相鄰薄片。任選地，本發(fā)明的膠原薄片生物基質(zhì)可以與其他產(chǎn)品一起使用。例如，在通過如上 所述任何方法將膠原薄片生物基質(zhì)施加至組織并緊固后，可以將抗粘連產(chǎn)品施加于膠原薄片 生物基質(zhì)的上表面或下表面、或者施加于鄰接的組織。在一種實施方式中，可以將PEG基產(chǎn) 物比如CoSeal (購自巴克斯特保健公司)施加于膠原薄片生物基質(zhì)的上表面或下表面、或 者施加于相鄰的組織。因為本發(fā)明的膠原薄片生物基質(zhì)通過隔離組織并且通過定向的組織再 生、而不是通過產(chǎn)生"光滑的"表面來防止粘連，可以通過利用臨時產(chǎn)生"光滑的"不會粘 附細胞的表面的產(chǎn)物補充其作用。在另一個實施方式中，可以使用在其一個或者兩個表面上 已經(jīng)涂有PEG基產(chǎn)品的備用的膠原薄片生物基質(zhì)。另外，本發(fā)明涉及多層膠原薄片生物基質(zhì)在藥物、即醫(yī)學(xué)上可應(yīng)用材料的制造中的 應(yīng)用，用于處理在哺乳動物體內(nèi)的生理失調(diào)比如，例如，損傷、外科手術(shù)、或者病原體基疾 病，其特征在于，分開選自由脊柱和硬膜以及周圍組織所構(gòu)成的組的組織。實施例粘連和纖維化形成、基礎(chǔ)和研究目標
在脊柱外科手術(shù)中，過度的疤痕組織形成和粘連是嚴重的問題，經(jīng)常引起神經(jīng)根的疼痛 和物理損傷，例如，損壞的腰椎圓盤外科手術(shù)或者椎間盤切除術(shù)后綜合癥。據(jù)文獻報道，在 校正外科手術(shù)病例中，硬膜病變的發(fā)生率為5~10%。
手術(shù)后發(fā)展和粘連形成程度的最重要的臨界參數(shù)是
-外科手術(shù)區(qū)域的手術(shù)前位置(存在粘連/纖維化，包括病人的基因誘因)；
18-外科手術(shù)的手術(shù)中表現(xiàn)(傷口區(qū)域的程度、組織和某些解剖結(jié)構(gòu)(例如細胞膜)損傷 的避免、小心止血、避免組織變干燥等等)；以及，
-手術(shù)中用于防止并最小化的手術(shù)后的粘連的措施，例如類似海綿、薄片或凝膠的抗粘 連植入物的植入。
由于引起粘連的多個原因，外科手術(shù)措施在每病人體內(nèi)可以從不達到100%的粘連防范， 但是上述參數(shù)的前提條件可以受影響。外科手術(shù)目標是優(yōu)化在手術(shù)后期間和在手術(shù)后初期外 科手術(shù)傷口的位置。已知在該期間的傷口狀況主要決定著任何手術(shù)后粘連的形成和纖維化形成。
考慮到粘連/硬膜外纖維化的發(fā)病機理，研究潛在的硬膜保護和防止粘連行為、以及在硬 膜外背側(cè)傷口區(qū)域形成生理學(xué)疤痕期間的最小化方法和產(chǎn)品，該研究集中在第一次手術(shù)后期 間(大約外科手術(shù)后一至兩周)。這是最重要的時期，其決定著特殊的組合物是否滿足在背 部外科手術(shù)缺損區(qū)域保護作用和將硬膜與疤痕形成區(qū)隔離的作用、以及避免不受控制的手術(shù) 后血液、纖維蛋白原、纖維蛋白和壞死材料分布的作用，這種不受控制的分布是引起任何不 受控制的疤痕/粘連/纖維化形成的主要因素和根本原因。
手術(shù)后兩周的位置允許評估植入物的一體化，并總結(jié)植入物的生物活性、生物功能性和 組織相容性的種類和潛力。例如，在兩周以后，植入物是否較好地被接受、分裂為很多細胞、 并且整合入背部的解剖結(jié)構(gòu)？或者相反，其是否當作長期異物并引起封閉和疤痕形成？下述 實施例的目標是，評價生物學(xué)膠原薄片生物基質(zhì)在手術(shù)后期間作為臨時隔離層、并且作為細 胞生長和組織再生的生物基質(zhì)的生物功能性，并且評價其用于防止和最小化與臨床有關(guān)的/粘 附和不受控制的疤痕組織形成的價值。實施例I:材料和方法動物試驗顯示，通過使用生物功能膠原薄片生物基質(zhì)，在脊 柱外科手術(shù)中的粘連減小
A)材料和方法如圖7-9所示
動物新西蘭白兔，兩種性別，重4kg。產(chǎn)地Charles River， Sulzfeld，德國；或者Harlan Winkelmann ， D - 3 3178 Borchen 。
模型和分組
使用生物功能膠原薄片生物基質(zhì)椎板切除術(shù)，暴露脊柱祌經(jīng)根部并且施用膠原薄片生 物基質(zhì)。每組包括20只動物。
第l組椎板切除術(shù)，皮膚閉合(對照組)。 第2組椎板切除術(shù)，覆蓋膠原薄片生物基質(zhì)。外科手術(shù)
將動物放置成臥姿并緊固，并且剃光外科手術(shù)區(qū)域(脊柱腰段)。在無菌的條件下，在 皮膚的正中開刀后，將Para椎骨的肌肉系統(tǒng)與棘突分離，并且暴露腰椎脊柱的神經(jīng)板。進行 第3rd和4th節(jié)腰椎的偏側(cè)椎板切除術(shù)。暴露兩個相應(yīng)的脊柱神經(jīng)根部和根部通道。還描述根 據(jù)不同組的外科手術(shù)的延續(xù)。
全身麻醉科塔菲特(Ketavet) 60mg/kg
若朋(Rompun) 16mg/kg 皮下注射
戊硫代巴比妥(Thiopental) 基于效果，通過耳朵靜脈進行靜脈注射 納克西斯(Narkosis),插管法，機械通風
疼痛藥療法2x天。泰米杰斯克(Temgesic) 0.05 mg/kg手術(shù)后皮下注射3-4天。 安樂死通常為過量巴比妥酸鹽靜脈注射麻醉
評估和病理檢查
對各組動物按如下方案實施安樂死10天后10只動物；4周后10只動物；3個月后10 只動物。評價參數(shù)粘連和纖維化程度。接著，整理廣泛的組織結(jié)構(gòu)。實驗顯示，在使用生 物功能膠原薄片生物基質(zhì)的組中粘連形成減少。
實施例II:在病人體內(nèi)植入膠原薄片生物基質(zhì)一周后
按常規(guī)外科療法(癲癇癥)方案，間隔7天給病人(年齡18歲，性別女性)動手術(shù)。 第一次外科手術(shù)期間，將膠原薄片生物基質(zhì)植入硬膜外(防止CSF泄漏)。在第二次外科手
術(shù)期間，在重新打開硬膜之前，按慣例除去膠原薄片牛物基質(zhì)植入物。在硬膜外植入一周后，
膠原薄片生物基質(zhì)在機械性方面仍然穩(wěn)定，并且可移動，如圖10所示。
0019]圖11是植入一周后圖10中膠原薄片生物基質(zhì)的剖視圖。可以看見，成纖維細胞
正生長成膠原薄片生物基質(zhì)，被多層結(jié)構(gòu)定向?？v向滲透性是約220至320 um。
修復(fù)細胞沿著多層結(jié)構(gòu)的定向向內(nèi)生長速度在縱向比橫向高約10至15倍("圖10")。
顯示出最小限度的炎性浸潤，表示正在進行的再生過程。實施例III:在脊柱外科手術(shù)中植入膠原薄片生物基質(zhì)后的細胞生長、組織再生和防 止硬膜外粘連和纖維化
材料
天然的馬膠原原纖維(主要為I型膠原)，由精制切碎的馬跟腱并沉積到原纖維而產(chǎn)生。 柔韌的形狀穩(wěn)定的并且有彈性的生物基質(zhì)被特別加工，并且具有無孔的不透液體的多層結(jié)構(gòu)。 干燥的馬多層膠原薄膜的厚度是約0.1 mm。在潮濕狀態(tài)下，膜厚度長至0.3mm。
20全身麻醉科塔菲特60mg/kg 若朋16mg/kg皮下注射
戊硫代巴比妥，基于效果，通過耳朵靜脈進行靜脈注射 納克西斯，插管法，機械通風
疼痛藥療法2x天。泰米杰斯克0.05mg/kg手術(shù)后皮下注射3-4天。
安樂死通常為過量巴比妥酸鹽靜脈注射麻醉
動物模型
本研究在新西蘭白兔("NZW")身上進行，在外科手術(shù)時，兔重平均3kg，并且它們 的平均年齡是4個月。所有兔子都是雌性，并且在經(jīng)過奧地利維也納市當局的正式批準后， 被批準用于進行動物研究。在實驗動物模型兔身上設(shè)計的外科手術(shù)方案類似于最普通的人體 介入手術(shù)。椎板切除術(shù)和切除術(shù)在腰脊椎第4至5 (L4/5)節(jié)的小關(guān)節(jié)面連接處進行。為實施 實際外科手術(shù)比如后軀腰椎介體融合(Posterior Lumbar Interbody Fusion, PLIF)外科手術(shù)的 完全延伸，切除黃韌帶。脊髓(spinal cord)上方的硬膜保持完整無損。椎板切除術(shù)區(qū)域被本 發(fā)明的生物學(xué)膠原薄片生物基質(zhì)覆蓋。脊柱旁的肌肉就地往后移，并且筋膜被吸收性縫線封 閉。使用Syntofif縫線封閉皮膚。
兔子在第一個3天期間接受手術(shù)后疼痛藥療法和輸液，并且接受配餐。通過過量戊硫代 巴比妥，將兔子實施安樂死，除去并分離脊柱的手術(shù)區(qū)域，用于組織評估。
組織學(xué)方法
切除脊柱全體，并且浸于10%甲醛溶液，用于固定。在各個腰椎脫鈣后切成片，脫水并 包埋在石蠟中。從各個樣品取七個3 ym厚的部分。
這些部分用蘇木精-曙紅染色，用于普通組織學(xué)染色所有的細胞和骨質(zhì)組分。通過評價解 剖結(jié)構(gòu)(比如是硬膜和硬膜外背部外科手術(shù)傷口區(qū)域之間的關(guān)系)、細胞向內(nèi)生長入膠原薄 片生物基質(zhì)的情況、沒有/存在、以及粘連形成的程度和硬膜外纖維疤痕形成來檢査玻片。
結(jié)果/組織學(xué)發(fā)現(xiàn)
這些部分用蘇木精-曙紅染色，用于普通組織學(xué)染色所有的細胞和骨質(zhì)組分。通過評價解 剖結(jié)構(gòu)諸如硬膜和硬膜外背部外科手術(shù)傷口區(qū)域之間的關(guān)系，來檢查玻片。分析了進入、以 及在膠原薄片生物基質(zhì)上的細胞生長、在生物基質(zhì)和周圍組織中炎癥反應(yīng)的數(shù)量和質(zhì)量。還 分析了一體化/并入過程和沒有/存在、以及粘連形成的程度和硬膜外結(jié)締組織結(jié)構(gòu)。
研究顯示了下述組織學(xué)發(fā)現(xiàn)手術(shù)后當時將膠原薄片生物基質(zhì)設(shè)置在硬膜和背部缺損區(qū)域之間，并且形成在硬膜和 背部傷口區(qū)域之間的生物學(xué)隔離層。未將其固定到背部缺損的組織上。血液(紅血球)呈薄 層粘附于膠原薄片生物基質(zhì)的表面，并且證明了其作為止血劑的作用?？梢郧宄乜匆娔z原 薄片生物基質(zhì)的平行的顯微多層結(jié)構(gòu)，其是無孔的并且對血液而言不漏液體。膠原薄片生物 基質(zhì)的厚度是約0.3 mm。(圖12)
手術(shù)后1周膜片大部分整合到周圍組織中。有血細胞、尤其是淋巴細胞滲透(圖13 A)。 硬膜下腔沒有細胞滲透或粘連組織。在背側(cè)表面，細胞沿著表面定向，并且?guī)缀跷礉B透膠原 薄片生物基質(zhì)的表面。在缺損的邊緣，將膠原生物基質(zhì)施加在骨頭上。
接觸區(qū)域(a)是牛物活性(生物基質(zhì)/細胞相互作用)、以及在沿著多層結(jié)構(gòu)定向的細 胞滲透開始時優(yōu)選的區(qū)域。在多層膠原薄片生物基質(zhì)和硬膜之間的區(qū)域(b)由含有脂肪細胞 的疏松組織組成，所謂"疏松組織"是與在解剖學(xué)不受外科于-術(shù)影響的區(qū)域(c)中的硬膜外 腔組織相比較而言，如圖13A所示。
圖13A顯示了在缺損的邊緣處在多層膠原薄片生物基質(zhì)和骨質(zhì)之間的接觸區(qū)域(a)。 細胞與多層膠原薄片生物基質(zhì)之間有強烈的交互作用。多層膠原薄片生物基質(zhì)的重構(gòu)建開始 于細胞(成纖維細胞、粒性白細胞)的定向滲透進入多層膠原薄片生物基質(zhì)的平行多層結(jié)構(gòu)。
圖13B顯示了在缺損的邊緣處在多層膠原薄片生物基質(zhì)和骨質(zhì)之間的接觸區(qū)域(a )。
圖13C顯示了在椎板切除術(shù)缺損中心的多層膠原薄片生物基質(zhì)。膠原生物基質(zhì)被一體化， 并且正在將前側(cè)的硬膜外腔與背側(cè)疤痕形成區(qū)隔離。細胞沿著背側(cè)表面定向，并且未滲透膠 原生物基質(zhì)的表面。在膠原生物基質(zhì)和硬膜之間的區(qū)域(a) (b) 由含有脂肪細胞的疏 松組織組成。
圖13D顯示了 NZW兔手術(shù)后1周的情況。多層膠原薄片生物基質(zhì)正在封閉椎板切除術(shù) 的缺損，并且正在將硬膜與初期細胞富集的背側(cè)疤痕形成區(qū)隔離。細胞沒有滲透膠原生物基 質(zhì)的表面?？梢钥匆?，在膠原生物基質(zhì)邊緣處，修復(fù)細胞的定向滲透正開始進入多層結(jié)構(gòu)(a)。
圖13E顯示了 NZW兔手術(shù)后1周的情況。膠原海綿(DURAGEN)被用于覆蓋椎板切 除術(shù)缺損。與本發(fā)明相反，在硬膜外腔和背部傷口區(qū)域之間沒有清晰的無孔隔離層。該膠原 海綿被血液浸透。
手術(shù)后2周通過向內(nèi)生長的毛細結(jié)構(gòu)，膜片的一體化進入周圍組織得到提高。淋巴細 胞、分葉核粒細胞的含量增加了?？梢詫⒛z原薄片生物基質(zhì)的結(jié)構(gòu)與周圍組織區(qū)分開來。在 膜片上有炎癥反應(yīng)，淋巴細胞和粒性白細胞滲出。硬膜下腔沒有細胞滲透或粘連組織。圖14A-C顯示了 NZW兔手術(shù)后2周的情況。多層膠原薄片生物基質(zhì)完全地被一體化。 組織修復(fù)細胞已經(jīng)滲透了膠原生物基質(zhì)，并且沿著多層結(jié)構(gòu)定向。硬膜被帶有脂肪細胞的疏 松組織與疤痕形成區(qū)和重構(gòu)建的膠原生物基質(zhì)隔離。
結(jié)論
本發(fā)明的無孔的多層膠原薄片生物基質(zhì)證明，在硬膜和背部外科手術(shù)缺損之間具有直接 的和出色的隔離和保護作用，避免不受控制的血液、纖維蛋白和壞死材料分布進入硬膜外區(qū) 域，以及定向和隔離在背側(cè)表面上方起始疤痕的細胞生長。該生物功能膠原薄片還定向細胞 向內(nèi)生長進入其多層結(jié)構(gòu)。沿著多層結(jié)構(gòu)的向內(nèi)生長速度高于從背側(cè)表面進入生物基質(zhì)的細 胞向內(nèi)生長速度。在第一周沒有細胞的向內(nèi)生長進入膠原薄片生物基質(zhì)的前側(cè)表面。沿著或 者穿過多層結(jié)構(gòu)的細胞向內(nèi)生長的不同速度與手術(shù)一周后在硬膜外植入的多層膠原薄片生物 基質(zhì)的臨床觀察情況成線性關(guān)系(實施例II)。
在兩周以后，多層生物基質(zhì)被修復(fù)細胞滲透。有完全一體化的生物基質(zhì)進入背部外科手 術(shù)傷口區(qū)域的生理學(xué)疤痕形成區(qū)。硬膜被看起來類似于脂肪組織的疏松脂肪組織隔離，艮p， 硬膜與脊椎管生理學(xué)地隔離。被沿著逐漸消失的富含細胞的生物基質(zhì)的多層結(jié)構(gòu)定向的修復(fù)
細胞有較高的生物活性。該生物基質(zhì)被重構(gòu)建，并且被整合入正常的解剖結(jié)構(gòu)中。 本發(fā)明的多層膠原薄片生物基質(zhì)被證明是在硬膜和背部缺損區(qū)域之間有效的、生物相容的、 并且有生物功能的直接的保護和隔離層，其可以定向細胞在多層結(jié)構(gòu)內(nèi)部向內(nèi)生長，并且定 向在其背側(cè)表面上的細胞生長。通過定向細胞生長，膠原薄片生物基質(zhì)有效地控制著重構(gòu)建 和組織再生過程，并且提供防止和最小化與臨床有關(guān)的粘連的最優(yōu)條件。
2權(quán)利要求
1. 一種用于哺乳動物細胞內(nèi)生長定向和組織再生控制的方法，用以防止外科手術(shù)后或者外傷后的粘連和在組織表面上的纖維化形成，所述組織選自由脊柱組織、硬膜和脊柱神經(jīng)所構(gòu)成的組，所述方法包括使用無孔的顯微多層的膠原薄片生物基質(zhì)提供、覆蓋和隔離所述組織的步驟。
2. 如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述哺乳動物是人。
3. 如權(quán)利要求l所述的方法，其特征在于，所述用無孔的多層膠原薄片生物基質(zhì)覆蓋和 隔離所述組織的步驟在脊柱外科手術(shù)期間進行。
4. 如權(quán)利要求l所述的方法，其特征在于，所述多層膠原薄片生物基質(zhì)吸引選自由修復(fù) 細胞和再生細胞所構(gòu)成的組的細胞，由此誘導(dǎo)新組織生長。
5. 如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述多層膠原薄片生物基質(zhì)的多層結(jié)構(gòu)使所 述表面上的細胞生長定向，以及使位于所述多層膠原薄片生物基質(zhì)的空隙中的細胞內(nèi)生長定 向，其中所述細胞選自由修復(fù)細胞和再生細胞所構(gòu)成的組。
6. 如權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，在所述細胞的內(nèi)生長期問，所述多層膠原薄 片生物基質(zhì)被再吸收并且被重構(gòu)建入天然組織，所述細胞選自由修復(fù)細胞和再生細胞所構(gòu)成 的組。
7. —種用于治療具有組織缺損的哺乳動物的生理失調(diào)的方法，所述組織選自由脊髓、硬 膜和周圍組織所構(gòu)成的組，所述方法包括下述步驟用有生物功能的無孔多層膠原薄片生物 基質(zhì)提供、覆蓋和隔離選自由脊髓和硬膜所構(gòu)成的組的所述組織，以使位于所述多層膠原薄 片生物基質(zhì)的空隙內(nèi)的細胞生長定向。
8. 如權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，所述多層膠原薄片生物基質(zhì)源自于下述選自 由牛的、豬的、馬的、人類的膠原及其混合物所構(gòu)成的來源組之一。
9. 如權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，通過使用纖維蛋白封閉劑，將所述多層膠原 薄片生物基質(zhì)附接于所述哺乳動物的所述組織。
10. 如權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，所述細胞內(nèi)生長在所述多層膠原薄片生物 基質(zhì)層間的空隙內(nèi)和在所述多層膠原薄片生物基質(zhì)的外表面上被定向。
11. 一種組合物在藥物制造中的應(yīng)用，用于防止哺乳動物體內(nèi)的粘連和防止纖維化形成， 其特征在于，所述組合物由顯微多層的膠原薄片生物基質(zhì)組成，其中所述多層膠原薄片生物 基質(zhì)可以使位于所述膠原層間的空隙中的細胞生長定向，所述膠原選自于由牛的、豬的、馬 的、或人類的膠原及其混合物所構(gòu)成的組中之一。
12. 如權(quán)利要求ll所述的應(yīng)用，其特征在于，所述粘連是手術(shù)后粘連、或者由外傷引起 的粘連，比如硬膜外的或神經(jīng)周的粘連。
13. 如權(quán)利要求ll所述的應(yīng)用，其特征在于，所述多層膠原薄片生物基質(zhì)使位于所述層 的空隙之間的細胞生長定向，以及使位于所述多層膠原薄片生物基質(zhì)的表面上的細胞生長定 向。
14. 如權(quán)利要求ll所述的應(yīng)用，其特征在于，所述多層膠原薄片生物基質(zhì)產(chǎn)生基本不透 液的密封隔離層。
15. 如權(quán)利要求14所述的應(yīng)用，其特征在于，所述多層膠原薄片生物基質(zhì)是平滑的且基 本上無孔。
16. 如權(quán)利要求14所述的應(yīng)用，其特征在于，所述多層膠原薄片生物基質(zhì)是平滑的且無孔。
17. 如權(quán)利要求ll所述的應(yīng)用，其特征在于，所述多層膠原薄片生物基質(zhì)被再吸收并被 重構(gòu)建入天然組織。
18. 如權(quán)利要求17所述的應(yīng)用，其特征在于，在14天內(nèi)，所述多層膠原薄片生物基質(zhì) 被再吸收并被重構(gòu)建入天然組織。
19. 如權(quán)利要求ll所述的應(yīng)用，其特征在于，所述膠原薄片源自T馬的膠原。
20. 如權(quán)利要求ll所述的應(yīng)用，其特征在于，所述組合物以試劑盒形式提供。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種方法，用于在哺乳動物體內(nèi)定向細胞向內(nèi)生長并且控制組織再生，以防止外科手術(shù)后或者外傷后的粘連和在受傷組織表面上的纖維化形成，所述組織選自由脊柱組織、硬膜和脊柱神經(jīng)所構(gòu)成的組，該方法包括下述步驟用生理活性的、有生物功能的、無孔的、顯微多層的膠原薄片生物基質(zhì)提供、覆蓋和隔離所述組織。本發(fā)明還涉及一種用于在哺乳動物體內(nèi)治療缺損的方法，其包括下述步驟用生理活性的、有生物功能的、無孔的、顯微多層的膠原薄片生物基質(zhì)提供、覆蓋和隔離組織。
文檔編號A61L31/04GK101454030SQ200780019553
公開日2009年6月10日 申請日期2007年5月30日 優(yōu)先權(quán)日2006年5月31日
發(fā)明者約翰·奧達爾, 雷蒙德·尼斯托爾·加洛 申請人:巴克斯特國際公司;巴克斯特保健股份有限公司