本發(fā)明涉及一種利用大豆糖蜜提取大豆異黃酮的方法，屬于大豆制品生產(chǎn)技術領域。

背景技術：

大豆糖蜜是以脫脂豆粕為原料，醇法制備大豆?jié)饪s蛋白生產(chǎn)過程中產(chǎn)生的一種副產(chǎn)物，富含有生物活性物質，大豆異黃酮就是其中一種，應用價值極高。大豆異黃酮具有降低血液膽固醇、防止骨質疏松及抑制癌細胞生長的作用，它還可以作為雌性激素治療藥物的替代品，改善婦女更年期綜合癥。目前，大豆糖蜜大多用于制備飼料，而提取大豆異黃酮的主要原料又是大豆豆粕或者直接是大豆，這樣就形成了雙重浪費，既浪費了大豆糖蜜中生物活性物質，又對大豆或豆粕中的其他物質造成的浪費。因此，以大豆糖蜜為原料提取大豆異黃酮可以節(jié)省大豆資源，提高大豆糖蜜的附加值。

申請?zhí)枮?01210517707.0的中國專利，其生產(chǎn)方法以大豆為原料，經(jīng)過干燥、去皮、磨粉、打漿、加熱、乙醇萃取得到大豆異黃酮產(chǎn)品，其工藝繁瑣復雜；公開號為cn1349987的中國專利以胚芽或豆粕為原料，經(jīng)甲醇萃取、絮凝，最后通過柱層析法純化得到純度高于50％的大豆異黃酮產(chǎn)品；其制備工藝中也存在一些比如粉碎和萃取最后再用樹脂純化的前期處理；同時上述方法制備的大豆異黃酮產(chǎn)品純度及產(chǎn)率都較低。

技術實現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種利用大豆糖蜜提取大豆異黃酮的方法，綠色環(huán)保能耗低，且工藝方法簡單易操作。

所述的利用大豆糖蜜提取大豆異黃酮的方法，包括以下步驟：

1)預處理：用蒸餾水將大豆糖蜜的糖度調節(jié)至15-25％，滅菌后接入2-8g/l的酵母菌在25-35℃條件下發(fā)酵48小時后收集乙醇，得大豆糖蜜發(fā)酵液；

2)去蛋白及還原糖處理：將大豆糖蜜發(fā)酵液煮沸10-15min后加入caco3攪拌，繼續(xù)加入cao攪拌均勻后靜置，每靜置5-10分鐘攪拌一次，直至液面分層后往溶液中通入co2，調節(jié)溶液ph至中性，并在離心機轉速為3000-8000r/min條件下離心10-20min，取上清液；

3)柱層析：將上清液加熱至20-25℃，并在此溫度下進行柱層析；

4)梯度洗脫：柱層析完成后，首先用質量分數(shù)為0-20％的乙醇溶液將樹脂中的糖類和酚酸洗脫出來，然后用質量分數(shù)為30-40％的乙醇溶液將樹脂中大豆異黃酮洗脫出來，得到大豆異黃酮乙醇溶液；

5)乙醇回收：在溫度為55-65℃，真空度為0.07～-0.01mpa條件下蒸餾，回收大豆異黃酮乙醇溶液中的乙醇，得大豆異黃酮濃縮液；

6)純化：將乙酸乙酯加入到大豆異黃酮濃縮液中攪拌均勻后靜置沉降，取上清液在溫度為55-65℃，真空度為0.07～-0.01mpa條件下濃縮得到大豆異黃酮膏狀物，同時回收乙酸乙酯；

7)干燥：將大豆異黃酮膏狀物在溫度為60-75℃，真空度為0.07～-0.01mpa條件下真空干燥后粉粹即得所述的大豆異黃酮。

步驟2)所述的caco3的加入量是大豆糖蜜發(fā)酵液總質量的1-2‰。

步驟2)所述的cao的加入量是大豆糖蜜發(fā)酵液總質量的1-4％。

步驟2)所述的往溶液中通入co2，調節(jié)溶液ph至7-7.5。

步驟2)所述的去蛋白及還原糖處理過程中，蛋白質去除率在99％以上，還原糖去除率在95％以上。

步驟2)所述的去蛋白及還原糖處理過程中，大豆異黃酮的損失率小于3％。

步驟4)所述的30-40％的乙醇溶液洗脫樹脂中大豆異黃酮，其洗脫率大于95％。

步驟5)所述的大豆異黃酮濃縮液固形物含量為20-25％。

步驟7)所述的大豆異黃酮的純度大于50％。

利用本發(fā)明大豆糖蜜提取大豆異黃酮的方法，大豆糖蜜中大豆異黃酮的提取率大于95％。

與現(xiàn)有技術相比本發(fā)明的有益效果是：

本發(fā)明將大豆糖蜜進行發(fā)酵，進一步提高了大豆糖蜜的附加值，產(chǎn)生乙醇的過程中也會使大豆糖蜜中的蛋白質沉淀，簡化了后續(xù)去蛋白的工作量。

本發(fā)明生產(chǎn)投入成本低，只需要具備主要的柱層析、蒸餾、干燥等設備就可以實現(xiàn)大豆異黃酮的提取，全程不添加對人或環(huán)境造成不良影響的試劑如乙醚、丙酮、甲醛、三氯乙烷，與現(xiàn)有技術相比是一種綠色環(huán)保且能耗低的方法。本發(fā)明有效提高了大豆?jié)饪s蛋白副產(chǎn)物的利用率，增加了大豆糖蜜的附加值，適合工廠規(guī)模生產(chǎn)。

本發(fā)明方法得到的大豆異黃酮純度較高，蛋白質去除率在99％以上，還原糖去除率在95％以上，大豆異黃酮損失率小于3％，大豆糖蜜中大豆異黃酮的提取率大于95％(現(xiàn)有技術提取率在80％左右)。

具體實施方式

下面結合具體實施例對本發(fā)明做進一步說明。

實施例1

所述的利用大豆糖蜜提取大豆異黃酮的方法，包括以下步驟：

1)預處理：用蒸餾水將大豆糖蜜的糖度調節(jié)至15％，滅菌后接入2g/l的酵母菌在25℃條件下發(fā)酵48小時后收集乙醇，得大豆糖蜜發(fā)酵液；

2)去蛋白及還原糖處理：將大豆糖蜜發(fā)酵液煮沸10min后加入大豆糖蜜發(fā)酵液總質量的1‰的caco3攪拌，繼續(xù)加入大豆糖蜜發(fā)酵液總質量的1％的cao攪拌均勻后靜置，每靜置5分鐘攪拌一次，直至液面分層后往溶液中通入co2，調節(jié)溶液ph至7，并在離心機轉速為3000r/min條件下離心10min，取上清液，其中蛋白質去除率為99.3％，還原糖去除率為95.2％，大豆異黃酮的損失率為2.2％；

3)柱層析：將上清液加熱至20℃，并在此溫度下進行柱層析；

4)梯度洗脫：柱層析完成后，首先用蒸餾水將樹脂中的糖類和酚酸洗脫出來，然后用質量分數(shù)為30％的乙醇溶液將樹脂中大豆異黃酮洗脫出來，其洗脫率為95.1％，得到固形物含量為20％的大豆異黃酮乙醇溶液；

5)乙醇回收：在溫度為55℃，真空度為0.07mpa條件下蒸餾，回收大豆異黃酮乙醇溶液中的乙醇，得大豆異黃酮濃縮液；

6)純化：將乙酸乙酯加入到大豆異黃酮濃縮液中攪拌均勻后靜置沉降，取上清液在溫度為55℃，真空度為0.07mpa條件下濃縮得到大豆異黃酮膏狀物，同時回收乙酸乙酯；

7)干燥：將大豆異黃酮膏狀物在溫度為60℃，真空度為0.07mpa條件下干燥后粉粹即得純度為54％的大豆異黃酮。大豆糖蜜中大豆異黃酮的提取率為97％。

實施例2

所述的利用大豆糖蜜提取大豆異黃酮的方法，包括以下步驟：

1)預處理：用蒸餾水將大豆糖蜜的糖度調節(jié)至25％，滅菌后接入8g/l的酵母菌在35℃條件下發(fā)酵48小時后收集乙醇，得大豆糖蜜發(fā)酵液；

2)去蛋白及還原糖處理：將大豆糖蜜發(fā)酵液煮沸15min后加入大豆糖蜜發(fā)酵液總質量的2‰的caco3攪拌，繼續(xù)加入大豆糖蜜發(fā)酵液總質量的4％的cao攪拌均勻后靜置，每靜置10分鐘攪拌一次，直至液面分層后往溶液中通入co2，調節(jié)溶液ph至7.5，并在離心機轉速為8000r/min條件下離心20min，取上清液，其中蛋白質去除率為99.5％，還原糖去除率為95.5％，大豆異黃酮的損失率為2.9％；

3)柱層析：將上清液加熱至25℃，并在此溫度下進行柱層析；

4)梯度洗脫：柱層析完成后，首先用質量分數(shù)為20％的乙醇溶液將樹脂中的糖類和酚酸洗脫出來，然后用質量分數(shù)為40％的乙醇溶液將樹脂中大豆異黃酮洗脫出來，其洗脫率為95.4％，得到固形物含量為25％的大豆異黃酮乙醇溶液；

5)乙醇回收：在溫度為65℃，真空度為-0.01mpa條件下蒸餾，回收大豆異黃酮乙醇溶液中的乙醇，得大豆異黃酮濃縮液；

6)純化：將乙酸乙酯加入到大豆異黃酮濃縮液中攪拌均勻后靜置沉降，取上清液在溫度為65℃，真空度為-0.01mpa條件下濃縮得到大豆異黃酮膏狀物，同時回收乙酸乙酯；

7)干燥：將大豆異黃酮膏狀物在溫度為75℃，真空度為-0.01mpa條件下干燥后粉粹即得純度為51％的大豆異黃酮。大豆糖蜜中大豆異黃酮的提取率為96％。

實施例3

所述的利用大豆糖蜜提取大豆異黃酮的方法，包括以下步驟：

1)預處理：用蒸餾水將大豆糖蜜的糖度調節(jié)至20％，滅菌后接入6g/l的酵母菌在30℃條件下發(fā)酵48小時后收集乙醇，得大豆糖蜜發(fā)酵液；

2)去蛋白及還原糖處理：將大豆糖蜜發(fā)酵液煮沸12min后加入大豆糖蜜發(fā)酵液總質量的1.5‰的caco3攪拌，繼續(xù)加入大豆糖蜜發(fā)酵液總質量的2％的cao攪拌均勻后靜置，每靜置8分鐘攪拌一次，直至液面分層后往溶液中通入co2，調節(jié)溶液ph至7.2，并在離心機轉速為5000r/min條件下離心15min，取上清液，其中蛋白質去除率為99.6％，還原糖去除率為95.3％，大豆異黃酮的損失率為2.4％；

3)柱層析：將上清液加熱至22℃，并在此溫度下進行柱層析；

4)梯度洗脫：柱層析完成后，首先用質量分數(shù)為10％的乙醇溶液將樹脂中的糖類和酚酸洗脫出來，然后用質量分數(shù)為35％的乙醇溶液將樹脂中大豆異黃酮洗脫出來，其洗脫率為95.4％，得到固形物含量為22％的大豆異黃酮乙醇溶液；

5)乙醇回收：在溫度為60℃，真空度為0.09mpa條件下蒸餾，回收大豆異黃酮乙醇溶液中的乙醇，得大豆異黃酮濃縮液；

6)純化：將乙酸乙酯加入到大豆異黃酮濃縮液中攪拌均勻后靜置沉降，取上清液在溫度為60℃，真空度為0.09mpa條件下濃縮得到大豆異黃酮膏狀物，同時回收乙酸乙酯；

7)干燥：將大豆異黃酮膏狀物在溫度為65℃，真空度為0.08mpa條件下干燥后粉粹即得純度為56％的大豆異黃酮。大豆糖蜜中大豆異黃酮的提取率為98％。