專利名稱：一種治療牛子宮炎的子宮灌注液的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種治療牛子宮炎的藥物，具體地說是以一種植物中草藥為原料制成的治療牛子宮炎的藥物。
背景技術(shù)：
牛及其它家畜的子宮炎主要是子宮內(nèi)膜的炎癥，故亦稱子宮內(nèi)膜炎。子宮肌炎、子宮漿膜炎，只有在產(chǎn)后急性子宮炎時(shí)才可能發(fā)生，但很少。牛常見子宮內(nèi)膜炎，通常是子宮粘膜發(fā)生炎癥或化膿性炎癥，為產(chǎn)后、流產(chǎn)最常見的一種生殖器官疾病。子宮炎在難產(chǎn)、子宮脫出、胎衣不下時(shí)感染病原菌后繼發(fā)或經(jīng)配種感染，為奶牛常發(fā)病，近年來，隨著奶牛產(chǎn)量提高，牛群擴(kuò)大，子宮炎發(fā)病率高達(dá)25％。由于受子宮黏膜的炎癥病程、炎性產(chǎn)物及細(xì)菌毒素的影響，一方面牛出現(xiàn)性周期紊亂，另一方面又直接危害精子的活力及胚胎著床，致使配種不孕，是奶牛不孕的重要原因之一。
病原微生物的感染是引起子宮炎的主要原因。發(fā)病原因多見于產(chǎn)房衛(wèi)生差或在糞、尿污染的廄床上分娩，臨產(chǎn)母牛外陰、尾根部污染糞便而未徹底清洗消毒，助產(chǎn)或剝離胎衣時(shí)術(shù)者的手臂、器械消毒不嚴(yán)，胎衣不下腐敗分解，惡露停滯，產(chǎn)道損傷、以及人工授精或陰道檢查時(shí)消毒不嚴(yán)，致使致病菌侵入子宮而引起。引起子宮炎的致病菌通常易見的主要有鏈球菌、大腸桿菌和葡萄球菌等。通過對患子宮炎的母牛進(jìn)行了細(xì)菌學(xué)檢驗(yàn)，結(jié)果分離到上述三種菌的占75.56％。其中鏈球菌檢出率為48.89％，大腸桿菌檢出率為26.7％，葡萄球菌檢出率為13.3％，其次是變形桿菌、棒狀桿菌和其他菌。
子宮炎是奶牛的常見病之一，重者可與周圍組織發(fā)生粘連，或者因子宮頸口關(guān)閉而繼發(fā)子宮積膿，使發(fā)情周期紊亂，屢配不孕，直接影響到奶牛的受胎率和奶業(yè)生產(chǎn)。長期以來，人們習(xí)慣用高錳酸鉀、雷佛奴爾、碘液、土霉素、青霉素、紅霉素等常見藥物進(jìn)行傳統(tǒng)治療，效果不很理想。子宮炎做為奶牛常見的一種生殖器官疾病，使患病奶牛繁殖能力下降，產(chǎn)奶量降低，產(chǎn)仔間隔延長，有的因?qū)遗洳辉猩踔帘黄忍蕴?，使奶牛養(yǎng)殖業(yè)蒙受巨大經(jīng)濟(jì)損失，嚴(yán)重影響奶牛繁殖和經(jīng)濟(jì)效益。雖然各地均投入大量的人力、物力予以防治，但發(fā)病率仍有增無減，尤其是大量抗生素和消毒藥的長期使用，致使病原菌抗藥性增強(qiáng)，且由于多次過量沖洗影響子宮體積復(fù)原，故臨床上往往得不到滿意的治療效果。本發(fā)明的子宮灌注液系根據(jù)中獸醫(yī)藥學(xué)理論，經(jīng)科學(xué)提取研制而成的無菌溶液，具有活血化淤、祛腐排膿及凈宮功效，不僅對子宮炎常見病原菌具有明顯抑制和殺滅作用，而且能促進(jìn)子宮收縮，排出炎性滲出物，減少分泌，恢復(fù)其生殖能力，同時(shí)克服了使用抗菌藥所產(chǎn)生的細(xì)菌抗藥性和藥物的刺激作用，有效控制感染。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的問題是為了治療牛子宮炎，提供一種安全、快速、高效的以中藥成分組成的子宮灌注液。
本發(fā)明的解決方案是根據(jù)中獸醫(yī)藥學(xué)理論，運(yùn)用現(xiàn)代藥理學(xué)手段對引起牛子宮炎發(fā)病的致病菌檢析，從藥食同源植物山楂中提取有效成分，子宮內(nèi)灌注，發(fā)揮其抑菌消炎作用，達(dá)到治療目的。
本發(fā)明的子宮灌注液是由山楂制成的。制成本發(fā)明的生產(chǎn)方法是(1)干燥山楂置微波協(xié)助萃取設(shè)備內(nèi)加熱至表面溫度60℃。
(2)取出后加蒸餾水∶乙醇(4-3∶1)混合液回流，回流液靜置24小時(shí)以上過濾分離，濾液濃縮至浸膏備用。
(3)將過濾得固相山楂于250℃干餾至無餾出液，干餾液在油浴狀態(tài)下于80℃～180℃重蒸餾，重蒸餾液靜置24小時(shí)以上備用。
(4)取(2)中浸膏和(3)中液體以1∶4混合，回流老化1小時(shí)。
(5)過濾制得液體，氫氧化鈉溶液(0.5mol/l-1mol/l)調(diào)節(jié)pH值4.5～6.0，24小時(shí)后過濾，加2％-3％體積比的吐溫-80，灌封，100℃～110℃下流通蒸汽滅菌10～30分鐘，即可得到治療牛子宮炎的藥物子宮灌注液。
本發(fā)明的一個(gè)重要特點(diǎn)是藥劑中含有綠原酸和黃酮類化合物各成分含量分別是每1ml藥液含黃酮類化合物不低于1mg。
每1ml藥液含綠原酸不低于0.01mg。
本發(fā)明的另一個(gè)重要特點(diǎn)是pH值為4.5～6.0，比重1.0～1.1。
本發(fā)明的子宮灌注液經(jīng)藥理實(shí)驗(yàn)證明有較強(qiáng)抗炎作用，具體如下實(shí)驗(yàn)陽性對照品為氫化可的松注射液，含量1.25mg/ml。陰性對照品為0.9％生理鹽水。實(shí)驗(yàn)動物為ICR小鼠(18～22g)，雌雄各半。
取體重18～22g小鼠18只，隨機(jī)分為3組，每組6只，皮下注射給藥。第一組給予生理鹽水0.5ml/20g，第二組給予本發(fā)明的子宮灌注液0.5ml/20g，第三組給予氫化可的松注射液0.6mg/20g。
各鼠皮下注射給藥后0.5h，于一側(cè)耳殼正、反兩面均勻涂抹二甲苯(0.05～0.1ml)，1h后處死，沿耳廓基線剪下兩耳，于同一部位用打孔器沖下耳片(直徑8mm)，稱重，以兩耳片重量之差為腫脹度，按下式計(jì)算給藥組腫脹抑制率

實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下

實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)本發(fā)明的子宮灌注液有明顯抗炎作用。
本發(fā)明的子宮灌注液經(jīng)過藥理實(shí)驗(yàn)證明對引起牛子宮炎的致病菌鏈球菌、大腸桿菌和葡萄球菌均有抑制作用，具體分述如下1.體外抑菌試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)菌種為無乳鏈球菌c55901、大腸桿菌(44103)、金黃色葡萄球菌(26003)將其制備為菌懸液。對照藥品為注射用青霉素鉀與注射用硫酸鏈霉素。采用鋼管法進(jìn)行抑菌試驗(yàn)，平皿內(nèi)底層均勻鋪平瓊脂，菌液加入瓊脂后均勻攤布于底層瓊脂上，上放置鋼管，將本發(fā)明的子宮灌注液(批號分別為SG040901，SG040902，SG040903)，試驗(yàn)濃度為原濃度和對照藥品青霉素鉀注射液，試驗(yàn)濃度為2u/ml，對照藥品硫酸鏈霉素注射液，試驗(yàn)濃度為1.6u/ml分別注入鋼管中，37℃溫箱，培養(yǎng)24小時(shí)。用游標(biāo)卡尺測量每個(gè)樣品的抑菌直徑。結(jié)果如下。
表1對無乳鏈球菌c55901的抑菌圈直徑結(jié)果

表2對大腸桿菌(44103)的抑菌圈直徑結(jié)果

表3對金黃色葡萄球菌(26003)的抑菌圈直徑結(jié)果

試驗(yàn)結(jié)果表明，本發(fā)明的子宮灌注液對鏈球菌、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌均有抑制作用，它的抑菌作用是肯定的。
2.最低抑菌濃度試驗(yàn)實(shí)驗(yàn)菌株為實(shí)驗(yàn)菌種為無乳鏈球菌c55901、大腸桿菌(44103)、金黃色葡萄球菌(26003)，并制備為菌懸液。對照藥品為注射用青霉素鉀與注射用硫酸鏈霉素。采用液體試管法進(jìn)行試驗(yàn)。將本發(fā)明的子宮灌注液(批號分別為SG040901，SG040902，SG040903)分別用營養(yǎng)肉湯稀釋為每1ml營養(yǎng)肉湯含0.5ml、0.25ml、0.125ml、0.0625ml、0.03125ml、0.015625ml、0.0078125ml供試藥品，分別置于無菌試管中，每管1ml，備用。取對照藥品，用營養(yǎng)肉湯稀釋為100u/ml濃度，置于無菌試管中，每管1ml，備用。分別取無乳鏈球菌c55901菌液、大腸桿菌(44103)、金黃色葡萄球菌(26003)0.1ml分別加入制備備用的供試藥品中，無乳鏈球菌c55901菌液0.1ml、金黃色葡萄球菌(26003)0.1ml加入注射用青霉素鉀對照藥品溶液中，大腸桿菌(44103)菌液0.1ml加入注射液硫酸鏈霉素對照藥品溶液中，37℃培養(yǎng)18小時(shí)。
觀察試管中有無細(xì)菌生長，確定細(xì)菌不生長的為最低抑菌濃度。結(jié)果如下
表4子宮灌注液(批號SG040901)抑菌試驗(yàn)結(jié)果(液體試管法)

注＝無菌生長；-無菌生長；+++有菌生長表5子宮灌注液(批號SG040902)抑菌試驗(yàn)結(jié)果(液體試管法)

注＝無菌生長；-無菌生長；+++有菌生長表6子宮灌注液(批號SG040903)抑菌試驗(yàn)結(jié)果(液體試管法)

注＝無菌生長；-無菌生長；+++有菌生長試驗(yàn)結(jié)果證實(shí)，本發(fā)明的子宮灌注液對無乳鏈球菌c55901、大腸桿菌(44103)、對金黃色葡萄球菌(26003)的最低抑菌濃度均可達(dá)0.03125ml/1ml營養(yǎng)肉湯，有較強(qiáng)抑制作用。
本發(fā)明經(jīng)對46例牛子宮炎病例治療臨床觀察，以土霉素治療9例牛子宮炎做為對照，本發(fā)明的子宮灌注液具有良好療效，與土霉素治療效果比較，見效快，不產(chǎn)生耐受，治愈率高，用藥后臨床癥狀很快消失，子宮基本恢復(fù)，治愈后跟蹤觀察15天，未見復(fù)發(fā)。
具體如下黑白花品種奶牛，臨床診斷病情分級為隱性子宮炎、卡他性子宮炎、卡他性膿性子宮炎、膿性子宮炎。設(shè)本發(fā)明的子宮灌注液治療組和土霉素對照組。本發(fā)明的使用方法為取本發(fā)明的子宮灌注液子宮內(nèi)灌注，一次100～250ml，一日一次，隔日使用。土霉素的使用方法為土霉素2g溶于100～200ml生理鹽水，子宮內(nèi)灌注，一日一次，隔日使用。
療效判定標(biāo)準(zhǔn)為治愈臨床癥狀完全消失。
顯效臨床癥狀基本消失。
有效臨床癥狀減輕，繼續(xù)治療無明顯變化。
無效臨床癥狀未減輕或加重。
結(jié)果如下子宮灌注液使用治療情況，共治療牛子宮炎病例46例。其中治療隱性子宮炎病例9例，卡他性子宮炎11例，治療卡他性膿性子宮炎病例21例，膿性子宮炎病例5例。治愈率84.8％，治愈平均給藥次數(shù)4.1次。
治療組子宮灌注液使用治療情況

根據(jù)使用方法，取本發(fā)明的子宮灌注液100～250ml每日1次，隔日灌注給藥。統(tǒng)計(jì)治療數(shù)據(jù)，共治療病例46例，平均用藥4.1次，治愈率84.8％。
土霉素組使用治療情況，共治療牛子宮炎病例9例。其中治療陰性子宮炎2例，卡他性子宮炎2例，卡他性膿性子宮炎4例，膿性子宮炎1例。治愈率55.6％，治愈平均給藥次數(shù)5次。
對照組土霉素使用治療情況

根據(jù)土霉素使用方法，取土霉素2g，溶于100～200ml生理鹽水，隔日一次灌注給藥。統(tǒng)計(jì)治療數(shù)據(jù)，共治療病例9例，平均用藥5次，治愈率55.6％。
本發(fā)明的子宮灌注液與土霉素治療比較情況見下表

本發(fā)明的子宮灌注液與土霉素治療情況比較，本發(fā)明治療效果好，使用方便，治愈率高，子宮很快恢復(fù)，刺激性小，無毒副作用，安全可靠，對治療病例跟蹤觀察15天無不良反應(yīng)。
本發(fā)明的子宮灌注液為中藥制劑，使用安全，治愈率高，治療后細(xì)菌很快下降至正常范圍，子宮復(fù)原快，減少損失，增加經(jīng)濟(jì)效益。具體安全性試驗(yàn)如下隨機(jī)選出不同牛齡健康奶牛5例，子宮炎病例5例，500ml本發(fā)明的子宮灌注液注入子宮給藥(注藥液注入后有自然流出)。具體使用情況見下表

試驗(yàn)三批藥品，試驗(yàn)?zāi)膛Ｔ谧⑷胨幬锖笥休p微拱腰、努責(zé)現(xiàn)象，幾分鐘后消失，無其它不良反應(yīng)。五頭健康奶牛無不良反應(yīng)，食欲正常，無影響，五頭子宮病例基本治愈，治愈后子宮恢復(fù)正常。跟蹤觀察15天未見任何不良反應(yīng)。通過試驗(yàn)說明本發(fā)明的子宮灌注液治療子宮炎是安全的。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1(1)干燥山楂1000g，置微波協(xié)助萃取設(shè)備內(nèi)加熱至表面溫度60℃。
(2)取出后加蒸餾水∶乙醇(4∶1)混合液回流，回流液靜置24小時(shí)以上過濾分離，濾液濃縮至浸膏備用。
(3)將過濾得固相山楂于250℃干餾至無餾出液，干餾液在油浴狀態(tài)下于80℃～180℃重蒸餾，重蒸餾液靜置24小時(shí)以上備用。
(4)取(2)中浸膏和(3)中液體以1∶4混合，回流老化1小時(shí)。
(5)過濾制得液體，氫氧化鈉溶液(0.5mol/l-1mol/l)調(diào)節(jié)pH值4.5～6.0，24小時(shí)后過濾，加2％-3％體積比的吐溫-80，灌封，100℃～110℃下流通蒸汽滅菌10～30分鐘，約得500ml本發(fā)明的子宮灌注液。
實(shí)施例2(1)干燥山楂1000g，置微波協(xié)助萃取設(shè)備內(nèi)加熱至表面溫度60℃。
(2)取出后加蒸餾水∶乙醇(3∶1)混合液回流，回流液靜置24小時(shí)以上過濾分離，濾液濃縮至浸膏備用。
(3)將過濾得固相山楂于250℃干餾至無餾出液，干餾液在油浴狀態(tài)下于80℃～180℃重蒸餾，重蒸餾液靜置24小時(shí)以上備用。
(4)取(2)中浸膏和(3)中液體以1∶4混合，回流老化1小時(shí)。
(5)過濾制得液體，氫氧化鈉溶液(0.5mol/l-1mol/l)調(diào)節(jié)pH值4.5～6.0，24小時(shí)后過濾，加2％-3％體積比的吐溫-80，灌封，100℃～110℃下流通蒸汽滅菌10～30分鐘，約得500ml本發(fā)明的子宮灌注液。
權(quán)利要求
1.一種治療牛子宮炎的子宮灌注液，其特征在于其全部或部分組分為黃酮類化合物和綠原酸。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的治療牛子宮炎子宮灌注液，其特征在于其可制成灌注液。
3.一種治療牛子宮炎的子宮灌注液，其特征在于是以山楂為原料按照下述方法制成的子宮灌注液干燥山楂置微波協(xié)助萃取設(shè)備內(nèi)加熱至表面溫度60℃，取出后加蒸餾水∶乙醇(4-3∶1)混合液回流，回流液靜置24小時(shí)以上過濾分離，濾液濃縮至浸膏備用，將過濾得固相山楂于250℃干餾至無餾出液，干餾液在油浴狀態(tài)下于80℃～180℃重蒸餾，重蒸餾液靜置24小時(shí)以上備用，取上述浸膏和干餾液以1∶4混合，回流老化1小時(shí)，過濾制得液體，氫氧化鈉溶液(0.5mol/l-1mol/l)調(diào)節(jié)pH值4.5～6.0，24小時(shí)后過濾，加2％-3％體積比的吐溫-80，灌封，100℃～110℃下流通蒸汽滅菌10～30分鐘，即得。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的治療牛子宮炎子宮灌注液，其特征在于其黃酮類化合物含量每1ml藥液不低于1mg，綠原酸含量每1ml藥液不低于0.01mg。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的治療牛子宮炎子宮灌注液，其特征在于其比重為1.0-1.1。
全文摘要
本發(fā)明是一種治療牛子宮炎的子宮灌注液，它是以山楂為原料經(jīng)提取加工制成的中藥藥物，主要含黃酮類化合物和綠原酸。用于治療牛子宮炎。本發(fā)明的子宮灌注液具較好抗炎作用，同時(shí)抑菌能力強(qiáng)，對引起牛子宮炎的鏈球菌、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌均有抑制作用，對治療牛子宮炎具有良好效果，起效快，治愈率高且刺激小，安全性高。
文檔編號A61K31/21GK1981826SQ20051013056
公開日2007年6月20日 申請日期2005年12月15日 優(yōu)先權(quán)日2005年12月15日
發(fā)明者王錁韞, 治明遠(yuǎn), 張會強(qiáng), 文鵬 申請人:治明遠(yuǎn), 邵嵐