專利名稱：一種藥物組合物、其制備方法及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種藥物組合物、其制備方法及其用途，具體地說，涉及一種由除人以外的哺乳動物腦組織中提取的腦提取液、維腦路通及含有從除人以外的哺乳動物腦組織中提取的神經(jīng)節(jié)苷脂組配而成的藥物組合物、其制備方法及其在制備治療急慢性腦血管疾病、老年性癡呆、顱腦外傷、腦血管意外創(chuàng)傷及創(chuàng)傷后的神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥及腦血管疾病所引起腦功能障礙等后遺癥藥物的用途。
背景技術(shù)：
維腦路通(又名曲克蘆丁)是蘆丁經(jīng)羥乙基化半合成而得到的水溶性黃酮類化合物，為以曲克蘆丁(7，3’，4’-三羥乙基蘆丁)為主的羥乙基蘆丁的混合物，一般藥用按無水物計算，含曲克蘆丁(C33H42O19)不得少于80.0％(供注射用)和60.0％(供口服用)。維腦路通能抑制血小板的聚集，有防止血栓形成的作用。同時能對抗5-羥色胺、緩激肽引起的血管損傷，增加毛細(xì)血管的抵抗力，降低毛細(xì)血管的通透性，可防止血管通透性升高引起的水腫。
維腦路通的臨床藥用價值有適用于閉塞性腦血管病引起的偏癱、失語、冠心病梗死前綜合征、中心視網(wǎng)膜炎、血栓性靜脈炎、血管通透性升高引起的水腫、淋巴水腫、燒傷及創(chuàng)傷水腫、動脈硬化等。
以維腦路通作為組分之一，構(gòu)成復(fù)方，相關(guān)專利也有公開。比如，申請?zhí)?3107252.2公開了一種復(fù)方天仙子動靜脈注射液及其制備方法，每10ml這種注射液含有鹽酸山茛菪鹼30-80mg，氫溴酸東茛菪鹼0.3-1.5mg，維腦路通0.1-0.4g，葡萄糖200-400mg。其制備方法是按維腦路通-鹽酸山茛菪鹼-氫溴酸東茛菪鹼-葡萄糖的順序依次混合、裝瓶、封口、消毒、抽驗(yàn)合格后備用。
申請?zhí)?5109431.9公開了一種復(fù)方混配腦脈通注射液水制劑，其特點(diǎn)是丹參100-300份、維腦路通5-15份、胞二磷膽堿5-10份、輔酶A1-2份、三磷酸腺甘0.4份、水240-770份，該藥有抑制紅細(xì)胞和血小板凝集的作用，能防治血栓形成，能防治腦水腫，促進(jìn)新血管生成，能防治老年癡呆，可治療腦脈血管疾病。
腦組織蛋白酶解可制成含特異性多肽、氨基酸的腦提取物，但神經(jīng)節(jié)苷脂檢測不出，上述腦組織特異性多肽、氨基酸廣泛參與腦代謝各種生化過程，包括各種物質(zhì)的合成、物質(zhì)的轉(zhuǎn)運(yùn)、信息物質(zhì)生成與傳遞，同時為腦代謝活動提供能量、營養(yǎng)，對腦組織非常重要。
神經(jīng)節(jié)苷脂是一種含唾液酸的鞘糖脂類，其一個或多個末端糖基是N-乙?；窠?jīng)酸即唾液酸。腦灰質(zhì)的膜脂中含神經(jīng)節(jié)苷脂高達(dá)6％以上，在神經(jīng)的傳導(dǎo)中起著重要作用。
神經(jīng)節(jié)苷脂的臨床藥用價值有用于各種原因引起的中樞神經(jīng)系統(tǒng)結(jié)構(gòu)損害的功能恢復(fù)；用于腦血管意外創(chuàng)傷及創(chuàng)傷后的中樞神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥的治療；用于缺血性和出血性腦病變的治療。
目前上市的神經(jīng)節(jié)苷脂類藥物有阿根廷生產(chǎn)的施捷因，為單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂鈉鹽注射液，其由基因工程方法生產(chǎn)，為單一組分，不含活性多肽，不太利于吸收和利用。
意大利Fidia公司從牛腦組織中提取的單唾液酸四己糖基神經(jīng)節(jié)苷脂(GM1)注射液(商品名Sygen)已于20世紀(jì)90年代正式在我國銷售。
中國專利申請93112578公開了一種腦保健營養(yǎng)品、其制造方法和用途，該保健品為含有神經(jīng)節(jié)苷脂的營養(yǎng)液，神經(jīng)節(jié)苷脂含量至少每毫升含有0.5mg，其制造方法主要使用水、氯仿、酒精提取，其用途在于增強(qiáng)人腦的學(xué)習(xí)、記憶功能，促進(jìn)人腦的正常發(fā)育和腦損傷后的恢復(fù)。
中國專利申請95111569公開了一種含神經(jīng)節(jié)苷脂為主的糖脂類物質(zhì)的生產(chǎn)方法，包括粉碎、溶劑提取、過濾和濃縮，其特征是將干凈的動物腦經(jīng)粉碎，加入40-100％含量的酒精和石油醚提取，或者在干凈的動物腦中加入40～100％含量的酒精后粉碎，加入石油醚提取，上述提取物過濾，清液濃縮，所述的動物腦、酒精和石油醚的重量比是1∶1～20∶0.5～8。
中國專利申請00133077公開了一種單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂的高純度制備工藝。
從國內(nèi)外文獻(xiàn)報道的提取神經(jīng)節(jié)苷脂的方法看，多采用不同比例有機(jī)溶劑抽提總脂，然后用分配萃取方法提取神經(jīng)節(jié)苷脂混合物，再用離子交換層析、分子排阻及硅膠層析法分離神經(jīng)節(jié)苷脂。
有報道，將組織勻漿用氯仿-甲醇溶液抽提、離心，上清液加水萃取、蒸干得粗脂。將粗脂溶于甲醇，過陰離子交換柱，收集神經(jīng)節(jié)苷脂。
另有報道，將組織加入氯仿-甲醇溶液抽提，抽提液濃縮、旋轉(zhuǎn)蒸干得總脂。將總脂加入異丙醚-正丁醇溶劑溶解后用氯化納溶液萃取、離心，水相為酸性鞘糖脂提取物。凍干粗脂過Sepbadex G-50柱層析，收集混合神經(jīng)節(jié)苷脂組分凍干。
專利申請01126465公開了一種治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病的藥物和保健品，含有神經(jīng)節(jié)苷脂和銀杏葉提取物，提供了神經(jīng)節(jié)苷脂作為組合物組分，與其它組分協(xié)同發(fā)揮作用的藥物組合物。
目前已公開的腦提取液中的神經(jīng)節(jié)苷脂的含量均較低，而且雖然也有神經(jīng)節(jié)苷脂作為組合物組分，與其它組分協(xié)同發(fā)揮作用的藥物組合物的公開報道，但仍未涉及維腦路通與動物腦提取物(含有活性多肽、多種氨基酸)及神經(jīng)節(jié)苷脂組配，制備新的藥品。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種藥物組合物，該藥物組合物由除人以外的哺乳動物腦組織中提取的腦提取液、維腦路通及含有從除人以外的哺乳動物腦組織中提取的神經(jīng)節(jié)苷脂組配而成。
本發(fā)明的另一目的在于提供該藥物組合物的制備方法。
本發(fā)明的再一目的是提供上述組合物在制備治療急慢性腦血管疾病、老年性癡呆、顱腦外傷、腦血管意外創(chuàng)傷及創(chuàng)傷后的神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥及腦血管疾病所引起腦功能障礙等后遺癥藥物的用途。
本發(fā)明還涉及藥物組合物在制備治療閉塞綜合癥、動脈硬化、血栓性靜脈炎、毛細(xì)血管出血以及血管通透性升高引起的水腫等藥物中的用途。
本發(fā)明所述的一種藥物組合物，其中含有動物腦組織提取液，腦組織提取液中活性多肽、氨基酸由截留分子量5000-10000的超濾膜在超濾時控制。
本發(fā)明所述的藥物組合物，含有蘆丁經(jīng)羥乙基化得到的維腦路通(7，3’，4’-三羥乙基蘆丁)和由除人以外的哺乳動物腦組織中提取的腦提取液及含有從除人以外的哺乳動物腦組織中提取的神經(jīng)節(jié)苷脂，藥物組合物中含有維腦路通為1-1000重量份，所述的重量份可以是μg、mg、g等醫(yī)藥領(lǐng)域公知的含量，其中維腦路通與腦提取液中總氮含量的重量比為0.1～200，維腦路通與神經(jīng)節(jié)苷脂中唾液酸的重量比為10～1600倍。
所述的藥物組合物中維腦路通與腦提取液中總氮含量的重量比為10-100，該重量比更優(yōu)選為70-90，最優(yōu)選為80；藥物組合物中維腦路通與與神經(jīng)節(jié)苷脂中唾液酸的重量比40～1000倍，該重量比更優(yōu)選為100-500，最優(yōu)選為400。
本發(fā)明所述的除人以外的哺乳動物腦組織優(yōu)選為豬、狗、牛、羊、鹿、馬或兔的腦組織。
哺乳動物中樞神經(jīng)系統(tǒng)中的神經(jīng)節(jié)苷脂含量豐富，例如可從豬、狗、牛、羊、鹿、馬、兔等新鮮腦組織中提取含有神經(jīng)節(jié)苷脂的物質(zhì)，從生產(chǎn)成本、生產(chǎn)工藝、產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定性、臨床療效等因素考慮，上述哺乳動物腦組織提取的神經(jīng)節(jié)苷脂優(yōu)選牛腦組織。牛腦主要是用來提取神經(jīng)節(jié)苷脂，國外已經(jīng)用牛腦外的其它動物組織提取制成了同類產(chǎn)品，但主要基于神經(jīng)節(jié)苷脂的提取量考慮。
本發(fā)明同時優(yōu)選牛腦，通過酶解，制成含有特異性多肽、氨基酸的腦提取物，其用量以總氮含量計。
本發(fā)明所述藥物組合物的制備方法包括包括腦提取液的制備及神經(jīng)節(jié)苷脂提取液的制備和腦提取液、維腦路通及神經(jīng)節(jié)苷脂提取液按比例混配，其中維腦路通與腦提取液中總氮含量的重量比為0.1～200，維腦路通與神經(jīng)節(jié)苷脂中唾液酸的重量比為10～1600倍，然后經(jīng)后處理制得成品制劑。
其中腦提取液的制備過程為取新鮮健康的動物腦組織，加0.5-2.5倍重量注射用水勻漿，加熱至80-95℃，保持15-30分鐘，冷卻至酶解溫度，調(diào)節(jié)至酶解pH值，加入腦重量0.1-1.5％的蛋白水解酶，進(jìn)行一次酶解或二次酶解，一次酶解液或二次酶解液在4-8℃放置8-24小時后，經(jīng)離心過濾處理，濾液用截留分子量為5000-10000的超濾膜超濾，超濾液為腦提取液，其總氮含量為0.1～10mg/ml。
所述的一次酶解為在加入腦重量0.1-1.5％的蛋白水解酶后，在該蛋白水解酶酶解溫度保持2-20小時，保持酶解pH值，然后加熱至80-95℃并保持15-30分鐘，得一次酶解液。
所述蛋白水解酶優(yōu)選使用胰蛋白酶，酶解適合溫度為35-50℃，酶解適合pH值為7.5-8.5，酶解pH值優(yōu)選為7.8～8.2，酶解溫度優(yōu)選為37～42℃；為保持溫度穩(wěn)定，可采取夾層水浴保溫的方法。
所述的所述的二次酶解過程為將一次酶解液降溫至酶解溫度，調(diào)節(jié)至酶解pH值，加入腦重量0.1-1.5％的蛋白水解酶，酶解2-20小時，保持酶解pH值，然后加熱至80-95℃保持15-30分鐘，得二次酶解液。
所述蛋白水解酶優(yōu)選使用胃蛋白酶，酶解溫度為35-50℃，酶解溫度優(yōu)選為37～42℃，酶解pH值為2.5-3.5，酶解pH值優(yōu)選為2.5-3.2。
所述的酶解溫度是上述使用的蛋白酶對應(yīng)的具有生物活性的工作溫度，在該溫度下，使用的蛋白酶具有正常的生物活性。
所述的酶解pH值是適合所使用的蛋白酶的環(huán)境pH值，在該pH值下，使用的蛋白酶具有正常的生物活性。
所述的一次酶解后的離心過濾處理為離心后分離上清液，將上清液過濾，濾液調(diào)pH值為3.5-4.5，加熱至80-95℃，保持15-30分鐘，在4-8℃放置8-24小時，離心后分離上清液，將上清液過濾，濾液調(diào)pH值為6.5-7.5，加熱至80-95℃，保持15-30分鐘，在4-8℃放置8-24小時，然后離心，上清液經(jīng)過濾得濾液。
所述的二次酶解后的離心過濾處理為離心后分離上清液，將上清液過濾，濾液調(diào)pH值為8.0-10.0，加熱至80-95℃，保持15-30分鐘，在4-8℃放置8-24小時，離心后分離上清液，將上清液過濾，濾液調(diào)pH值為6.5-7.5，加熱至80-95℃，保持15-30分鐘，在4-8℃放置8-24小時，然后離心，上清液經(jīng)過濾得濾液。
所述的離心條件為4000轉(zhuǎn)/分，離心時間為15-30分鐘。
所述的過濾為現(xiàn)有技術(shù)中通用的紙漿過濾或澄清板過濾。
上述過程調(diào)pH值使用鹽酸和/或氫氧化鈉。
所述的蛋白水解酶為胰蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、菠蘿蛋白酶、中性蛋白酶等現(xiàn)有技術(shù)中使用的蛋白水解酶，使用方式可以是單一使用，也可以是先后使用不同的酶；優(yōu)選使用胰蛋白酶或胃蛋白酶。胃蛋白酶常用規(guī)格為1∶3000-10000，胰蛋白酶常用規(guī)格為1∶250，為使本發(fā)明生產(chǎn)工藝、產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定，使用的酶應(yīng)盡可能由固定生產(chǎn)商提供。
上述超濾膜優(yōu)選為截留分子量為6000-10000的超濾膜，更優(yōu)選截留分子量為8000的超濾膜。使用的超濾膜為市售產(chǎn)品，其生產(chǎn)商應(yīng)為行業(yè)認(rèn)可的生產(chǎn)單位，使用的濾膜型號與尺寸可根據(jù)具體的生產(chǎn)量、選用的超濾器尺寸來確定。
其中神經(jīng)節(jié)苷脂提取液的制備過程為A)將動物腦組織加溶劑勻漿后過濾，濾渣用溶劑抽提提取，提取液與濾液合并后蒸干，得干燥物；B)將干燥物溶于溶劑中，向其中加入鹽的水溶液提取分液；C)分液的上、下層液相分別用至少兩種溶劑的混合水溶液洗滌，合并洗滌后的上層液相部分，減壓濃縮，然后用預(yù)冷丙酮沉淀，干燥后得干燥物；D)將干燥物溶于至少兩種溶劑的混合水溶液，層析柱分離，洗脫液濃縮后用預(yù)冷丙酮沉淀、分離，得到的沉淀經(jīng)后處理，得到神經(jīng)節(jié)苷脂提取液；在神經(jīng)節(jié)苷脂提取液的制備過程中，勻漿所用溶劑為丙酮，濾渣用氯仿-甲醇(1～20∶1～20，V/V)的混合液充分抽提，合并的濾液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器蒸干，得干燥物。
溶解干燥物的溶劑為體積比為2～30∶1～20的鹵代烴和醇的混合溶劑，鹽的水溶液優(yōu)選KCl水溶液。
分液的上、下層液相分別用鹵代烴和醇的混合水溶液洗滌，減壓濃縮至初始體積的1/8～1/2，然后用低于0℃預(yù)冷丙酮沉淀。
將干燥物溶于鹵代烴和醇的混合水溶液，用鹵代烴和醇的混合水溶液梯度洗脫柱層析分離。
更具體地說，神經(jīng)節(jié)苷脂提取液的制備過程為A)將動物腦組織加3～4倍重量的丙酮勻漿后過濾，保留濾渣和濾液；濾渣用3～5倍重量的氯仿-甲醇(1～20∶1～20，V/V)混合液抽提三次，分別過濾；將上述濾液合并后在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中37℃減壓蒸干，得干燥物；B)干燥物溶于氯仿-甲醇(2～30∶1～20，V/V)混合液，然后向混合液中加入1/20～1/80體積的0.1mol/L的KCl溶液，室溫下攪拌1小時，靜置8～16小時后分液；C)分液后，上層液相用等體積的氯仿-甲醇-水(50～150∶5～40∶0.5～5，V/V/V)混合液洗滌，下層液相用等體積的氯仿-甲醇-水(1～10∶30～80∶35～85，V/V/V)混合液洗滌，合并兩次洗滌后的上層液相部分，在37℃減壓濃縮至初始體積的1/8～1/2，然后用-20℃預(yù)冷丙酮沉淀，真空干燥，得干燥物；D)將干燥物溶于的氯仿-甲醇-水(30～80∶10～50∶1～90，V/V/V)混合液，制成1～5％濃度的溶液，加入層析柱，調(diào)整流速5ml/分鐘，用氯仿-甲醇-水(60～90∶15～40∶1～10，V/V/V)混合液10～30L洗脫，然后改用氯仿-甲醇-水(40～80∶20～50∶5～15，V/V/V)混合液8～15L洗脫，收集后洗脫液6～12L，減壓濃縮后用3～5倍體積的-20℃預(yù)冷丙酮沉淀，-20℃靜止2小時后傾去上層清液，余下部分在1000轉(zhuǎn)/分下離心10分鐘，得到的沉淀用適量丙酮洗2次，真空干燥，將干燥物溶于水得神經(jīng)節(jié)苷脂提取液，該神經(jīng)節(jié)苷脂提取液濃度為每1ml含唾液酸0.1～20mg；更為優(yōu)選的，神經(jīng)節(jié)苷脂提取液的制備過程為A)將動物腦組織加3～4倍重量的丙酮勻漿后過濾，保留濾渣和濾液；濾渣用3～5倍重量的氯仿-甲醇(1∶1，V/V)混合液抽提三次，分別過濾；將上述濾液合并后在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中37℃減壓蒸干，得干燥物；B)干燥物溶于氯仿-甲醇(2∶1，V/V)混合液，然后向混合液中加入1/80體積的0.1mol/L的KCl溶液，室溫下攪拌1小時，靜置8～16小時后分液；C)分液后，上層液相用等體積的氯仿-甲醇-水(86∶14∶1，V/V/V)混合液洗滌，下層液相用等體積的氯仿-甲醇-水(3∶48∶47，V/V/V)混合液洗滌，合并兩次洗滌后的上層液相部分，在37℃減壓濃縮至初始體積的1/4，然后用-20℃預(yù)冷丙酮沉淀，真空干燥，得干燥物；
D)將干燥物溶于的氯仿-甲醇-水(65∶25∶4，V/V/V)混合液，制成2.5％濃度的溶液，加入層析柱，調(diào)整流速5mL/分鐘，用氯仿-甲醇-水(65∶25∶4，V/V/V)混合液20L洗脫，然后改用氯仿-甲醇-水(60∶35∶8，V/V/V)混合液12L洗脫，收集后洗脫液10L，減壓濃縮后用4倍體積的-20℃預(yù)冷丙酮沉淀，-20℃靜止2小時后傾去上層清液，余下部分在1000轉(zhuǎn)/分下離心10分鐘，得到的沉淀用適量丙酮洗2次，真空干燥，將干燥物溶于水得神經(jīng)節(jié)苷脂提取液，該神經(jīng)節(jié)苷脂提取液濃度為每1ml含唾液酸0.1～20mg；上述步驟B)中，氯仿-甲醇混合液加入量以完全溶解干燥物為準(zhǔn)。
上述步驟中丙酮的加入量以不再有沉淀析出為準(zhǔn)。
上述步驟D)中，所用的層析柱通過如下過程制備將硅膠顆粒過篩選60～80目的均勻顆粒，在110℃下干燥1小時，使其活化，然后用5倍柱體積的氯仿-甲醇(5～20∶0.5～3，V/V)混合液作為載體，將硅膠調(diào)成糊狀，使其均勻分散后裝入80×10cm的層析柱，即得。其中優(yōu)選的氯仿-甲醇混合比為9∶1(V/V)。
本發(fā)明的減壓蒸發(fā)的壓力控制在0.04～0.08MPa左右。
上述制備方法制備的腦提取液、神經(jīng)節(jié)苷脂提取液與維腦路通按比例混配，其中維腦路通與腦提取液中總氮含量的重量比為0.1～200，維腦路通與神經(jīng)節(jié)苷脂中唾液酸的重量比為10～1600倍，然后經(jīng)后處理制得成品制劑，成品制劑的劑型為藥劑學(xué)上可接受的劑型，比如片劑、膠囊劑、顆粒劑、口服液、小容量注射劑、大容量注射劑或凍干粉針劑等，優(yōu)選為小容量注射劑、大容量注射劑或凍干粉針劑，最優(yōu)選為小容量注射劑。因此，所述的后處理可以是按照制備藥劑學(xué)上可接受的劑型的常規(guī)方法進(jìn)行。
本發(fā)明二次酶解后的腦提取液含有多肽和游離氨基酸，符合國家藥品標(biāo)準(zhǔn)腦蛋白水解物質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。本發(fā)明二次酶解后的腦提取液濃縮干燥后腦蛋白水解物(口服用)每克含總氮應(yīng)為80-100mg，符合腦蛋白水解物(口服用)國家藥品標(biāo)準(zhǔn)；本發(fā)明二次酶解后的腦提取液(注射用，水溶液)稀釋或濃縮后可用于制備腦蛋白水解物注射液，并符合國家藥品標(biāo)準(zhǔn)。腦蛋白水解物為一種大腦所特有的肽能神經(jīng)營養(yǎng)物，能以多種方式作用于中樞神經(jīng)，調(diào)節(jié)和改善神經(jīng)元的代謝，促進(jìn)突觸的形成，誘導(dǎo)神經(jīng)元的分化，并進(jìn)一步保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞免受各種缺血和神經(jīng)毒素的損害?？赏ㄟ^血腦屏障，促進(jìn)腦內(nèi)蛋白質(zhì)的合成，影響呼吸鏈，具有抗缺氧的保護(hù)能力，改善腦內(nèi)能量代謝，可激活腺苷酸環(huán)化酶和催化其他激素系統(tǒng)，提供神經(jīng)遞質(zhì)，肽類激素及輔酶前體?？捎糜陲B腦外傷，腦血管病后遺癥伴有記憶減退及注意力集中障礙的癥狀改善。對腦功能不全有輔助改善作用，也用于蛋白質(zhì)缺乏、神經(jīng)衰弱病人以及對一般蛋白質(zhì)消化吸收障礙的病例。
本發(fā)明的制備方法采用硅膠柱一步純化得混合神經(jīng)節(jié)苷脂，含有單唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂(如GM1)、雙唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂(如GD1a、GD1b、GD3)及三唾液酸四己糖神經(jīng)節(jié)苷脂(如GT1)等多種神經(jīng)節(jié)苷脂，先減壓濃縮后用預(yù)冷丙酮沉淀，真空干燥后溶于蒸餾水，作為神經(jīng)節(jié)苷脂提取液備用，使制得的提取物有效成分收率較高，組分更合理，同時也節(jié)省了操作時間，降低了原輔料消耗。該復(fù)合神經(jīng)節(jié)苷脂對神經(jīng)組織具有高度特異親和性，能夠在神經(jīng)細(xì)胞膜上高度濃集而發(fā)揮神經(jīng)病變、神經(jīng)損傷修復(fù)、再生作用。神經(jīng)節(jié)苷脂具有感知、傳遞細(xì)胞內(nèi)外信息的功能，參與細(xì)胞的識別、粘著、生長、分化以及細(xì)胞信息傳遞等過程。作為某些神經(jīng)遞質(zhì)、激素、病毒和干擾素的受體，具有參與神經(jīng)組織的分化、再生、修復(fù)，與神經(jīng)沖動的傳導(dǎo)、細(xì)胞間的識別作用，能加速病變、損傷的神經(jīng)組織的再生修復(fù)，促進(jìn)神經(jīng)功能恢復(fù)和清除神經(jīng)病變癥狀，減低興奮性氨基酸的釋放，從而減輕細(xì)胞毒性和血管水腫，是腦血管意外治療的良藥，用于治療老年性癡呆及其它神經(jīng)性疾病取得良好療效。
本發(fā)明所述藥物組合物可應(yīng)用于制備治療腦血栓、腦栓塞、腦痙攣等急慢性腦血管疾病，以及老年性癡呆、顱腦外傷、腦血管意外創(chuàng)傷及創(chuàng)傷后的神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥及腦血管疾病(腦供血不全、腦梗塞)所引起腦功能障礙等后遺癥；用于治療閉塞綜合癥、動脈硬化、血栓性靜脈炎、毛細(xì)血管出血以及血管通透性升高引起的水腫等藥物中的應(yīng)用。
本發(fā)明研究人員進(jìn)行大量實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，當(dāng)該藥物組合物中維腦路通重量為腦提取液中總氮含量的80倍時及維腦路通重量為神經(jīng)節(jié)苷脂中唾液酸含量的400倍時的三者協(xié)同作用最好，更利于人體的吸收和利用。
本發(fā)明最優(yōu)選藥物組合物注射液的規(guī)格為2ml∶80mg維腦路通∶1mg總氮∶200μg唾液液；5ml∶200mg維腦路通∶2.5mg總氮∶500μg唾液酸；10ml∶400mg維腦路通∶5mg總氮∶1000μg唾液酸；肌內(nèi)注射一次2～4ml，一日2次靜脈滴注一次10ml，一日一次，用250～500ml生理鹽水或5％葡萄糖注射液稀釋后使用。20日為一療程，可用1～3個療程，每療程間隔3～7天。
本發(fā)明所述的藥物組合物含有治療腦血管疾病及其引起的腦功能障礙后遺癥的腦提取液、多種神經(jīng)節(jié)苷脂等活性物質(zhì)，能調(diào)節(jié)和改善腦代謝，能加速病變、損傷的神經(jīng)組織的再生修復(fù)，促進(jìn)神經(jīng)功能恢復(fù)和清除神經(jīng)病變癥狀，采用維腦路通與腦提取液、多種神經(jīng)節(jié)苷脂活性物質(zhì)的協(xié)同作用，達(dá)到了最佳的臨床效果。
本發(fā)明人在長期研究基礎(chǔ)上，結(jié)合目前臨床積累的經(jīng)驗(yàn)，出人意料的發(fā)現(xiàn)，將神經(jīng)節(jié)苷脂提取物與曲克蘆丁、腦蛋白提取物組合，在治療心腦血管疾病上有著更好的協(xié)調(diào)增效作用。
本藥物組合物通過腦提取液、神經(jīng)節(jié)苷脂與維腦路通的有機(jī)組合，發(fā)揮了三者的協(xié)同作用，更利于腦血管疾病的有效治療及其由腦血管疾病引起的后遺癥的改善。
本發(fā)明所述的藥物組合物含有治療腦血管疾病及其引起的腦功能障礙后遺癥的活性物質(zhì)，包括維腦路通、腦提取液中含有的大量活性多肽和多種氨基酸及多種神經(jīng)節(jié)苷脂。維腦路通能抑制血小板的聚集，有防止血栓形成的作用。同時能對抗5-羥色胺、緩激肽引起的血管損傷，增加毛細(xì)血管的抵抗力，降低毛細(xì)血管的通透性，可防止血管通透性升高引起的水腫，可增加血中氧含量和氧飽和度，保護(hù)缺氧狀態(tài)下酶的活性、改善微循環(huán)，促進(jìn)新血管生成以增進(jìn)側(cè)枝循環(huán)，從而增加腦血流量，改善半暗帶區(qū)域的供血，減輕周邊區(qū)域的水腫，減小腦梗死面積。腦提取液所含的大量活性多肽、多種氨基酸等能透過血腦屏障，以多種形式作用于中樞神經(jīng)，調(diào)整和改善神經(jīng)元代謝，并影響其呼吸鏈，具有激活、改善腦內(nèi)神經(jīng)遞質(zhì)和酶的活性，保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞免受各種缺血和神經(jīng)毒素的損害。能增加腦組織對葡萄糖的利用，改善腦細(xì)胞缺氧狀態(tài)，對缺氧的腦組織具保護(hù)作用。
神經(jīng)節(jié)苷脂對神經(jīng)組織具有高度特異親和性，能夠在神經(jīng)細(xì)胞膜上高度濃集而發(fā)揮神經(jīng)病變、神經(jīng)損傷修復(fù)、再生作用，能加速病變、損傷的神經(jīng)組織的再生修復(fù)，促進(jìn)神經(jīng)功能恢復(fù)和清除神經(jīng)病變癥狀。腦提取液所含的活性多肽、特定比例組成的氨基酸能夠透過血腦屏障，能夠激活和促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞蛋白質(zhì)合成，提供和補(bǔ)充神經(jīng)代謝所需的特異性營養(yǎng)物質(zhì)，能夠補(bǔ)充腦營養(yǎng)，促進(jìn)腦神經(jīng)新陳代謝，能夠?yàn)樯顒蛹皺C(jī)體病變修復(fù)提供高效能量補(bǔ)充和營養(yǎng)支持。神經(jīng)節(jié)苷脂和腦提取液所含多種活性營養(yǎng)因子及維腦路通之間的高效組合，相互能夠起到促進(jìn)、協(xié)同、增強(qiáng)作用?？蓱?yīng)用于制備治療腦血栓、腦栓塞、腦痙攣等急慢性腦血管疾病，以及老年性癡呆、顱腦外傷、腦血管意外創(chuàng)傷及創(chuàng)傷后的神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥及腦血管疾病(腦供血不全、腦梗塞)所引起腦功能障礙等后遺癥；用于治療閉塞綜合癥、動脈硬化、血栓性靜脈炎、毛細(xì)血管出血以及血管通透性升高引起的水腫等藥物中的應(yīng)用。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1取新鮮健康牛腦10kg，除去筋膜等雜質(zhì)，用注射用水洗滌，加10L注射用水，勻漿，加熱80℃，保持15分鐘，冷卻至42℃，調(diào)節(jié)pH值7.5，加入45g胰蛋白酶(美國DIFCO公司，規(guī)格500g)在42℃酶解3小時，酶解過程中控制pH值8.5，取出，加熱至80℃，保持20分鐘，得一次酶解液；4℃放置24小時后離心，離心條件為4000轉(zhuǎn)/分，離心時間為15分鐘，紙漿過濾，上清液調(diào)pH值3.5，加熱95℃，保持20分鐘，4℃放置12小時后離心，離心條件為4000轉(zhuǎn)/分，離心時間為20分鐘，紙漿過濾，濾液調(diào)pH值6.5，加熱至90℃，保持15分鐘，8℃放置8小時后離心，離心條件為4000轉(zhuǎn)/分，離心時間為20分鐘，得濾液；濾液用截留分子量為6000的超濾膜(美國millipore公司，標(biāo)準(zhǔn)超濾系統(tǒng))超濾，超濾液即為腦提取液，其中總氮含量為4mg/ml。
取10kg新鮮牛腦用40L丙酮勻漿，勻漿液用濾紙過濾，得濾渣2500g，濾渣用10L氯仿-甲醇(1∶1)混合液抽提三次，分別過濾后合并濾液，使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，在37℃減壓蒸干，得干燥物1.25g。干燥物用20L氯仿-甲醇混合液(2∶1，V/V)溶解，加入250ml的0.1mol/LKCl溶液。室溫攪拌1小時，轉(zhuǎn)移到分液漏斗中靜置8小時。分液后，上相用等體積的氯仿-甲醇-水(86∶14∶1，V/V/V)洗1次；下相用等體積的氯仿-甲醇-水(3∶48∶47，V/V/V)洗1次；合并2次上相于37℃減壓濃縮至約5L，-20℃預(yù)冷丙酮沉淀，真空干燥。
層析柱通過如下過程制備將硅膠顆粒過篩選80目的均勻顆粒，在110℃下干燥1小時，使其活化，然后用5倍柱體積的氯仿-甲醇(9∶1，V/V)混合液作為載體，將硅膠調(diào)成糊狀，使其均勻分散后裝入80×10cm的層析柱，即可。
將前述真空干燥物1.2g溶于氯仿-甲醇-水(65∶25∶4，V/V/V)50ml加入層析柱，調(diào)整流速5ml/分鐘，用氯仿-甲醇-水(65∶25∶4，V/V/V)20L溶液洗脫，然后改用氯仿-甲醇-水(60∶35∶8)12L洗脫，收集后洗脫液10L，減壓濃縮后用40L的-20℃預(yù)冷丙酮沉淀，-20℃靜止2小時，傾去上層清液，離心10分鐘(1000rpm)，沉淀用適量丙酮洗2次，沉淀真空干燥過夜。
將1.2g干燥物溶于1200ml注射用水，作為神經(jīng)節(jié)苷脂提取液備用，濃度為每1ml含神經(jīng)節(jié)苷脂以唾液酸計1mg/ml。
稱取注射用維腦路通純品80g，與250ml腦提取液及200ml神經(jīng)節(jié)苷脂提取液可配成2000ml藥液，最終制成小溶量注射劑1000支(規(guī)格為2ml∶80mg維腦路通、1mg總氮與200μg唾液酸)。取配液量約40％的注射用水于濃配罐中，加入維腦路通充分?jǐn)嚢柚镣耆芙?，加入總配制體積0.05％的活性攪拌煮沸15分鐘，將藥液溫度降至40～50℃，將藥液脫炭過濾至稀配罐中，在稀配罐中投入腦提取液及神經(jīng)節(jié)苷脂提取液，加水至配液量，調(diào)節(jié)PH值6.8～7.0，藥液經(jīng)過濾系統(tǒng)過濾后灌封于2ml安瓿中，滅菌，即得小容量注射劑。
實(shí)施例2取新鮮健康豬腦10kg，除去筋膜等雜質(zhì)，用注射用水洗滌，加10L注射用水，勻漿，調(diào)節(jié)pH值8.2，加熱80℃，保持15分鐘，冷卻至42℃，加入80g胰蛋白酶(美國DIFCO公司，規(guī)格500g)在42℃酶解10小時，酶解過程中控制pH值8.2，取出，加熱至80℃，保持20分鐘，得一次酶解液；將一次酶解液降溫至44℃，調(diào)節(jié)pH值為2.5，加入50g胃蛋白酶(廈門星隆達(dá)化學(xué)試劑有限公司；1∶10000；規(guī)格100g)，酶解10小時，過程pH值控制為2.5，然后加熱至90℃保持20分鐘，得到二次酶解液；以4000轉(zhuǎn)/分的速度離心30分鐘，將上清液澄清板過濾，濾液調(diào)pH值為8.0，加熱至95℃，保持15分鐘，在6℃放置20小時，相同離心方式分離上清，過濾，濾液調(diào)pH值為7.3，加熱至85℃，保持25分鐘，然后在6℃放置15小時，相同方式離心、過濾得濾液；濾液用截留分子量為10000的超濾膜(美國millipore公司，標(biāo)準(zhǔn)超濾系統(tǒng))超濾，超濾液即為腦提取液，其中總氮含量為6mg/ml。
取10kg新鮮牛腦用35L丙酮勻漿，勻漿液用濾紙過濾，得濾渣2500g，濾渣用7.5L氯仿-甲醇(5∶1)混合液抽提三次，分別過濾后合并濾液，使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，在37℃減壓蒸干，得干燥物1.25g。干燥物用20L氯仿-甲醇混合液(10∶1，V/V)溶解，加入1000ml的0.1mol/LKCl溶液。室溫攪拌1小時，轉(zhuǎn)移到分液漏斗中靜置10小時。分液后，上相用等體積的氯仿-甲醇-水(50∶10∶0.5，V/V/V)洗1次；下相用等體積的氯仿-甲醇-水(1∶30∶35，V/V/V)洗1次；合并2次上相于37℃減壓濃縮至約2.5L，-20℃預(yù)冷丙酮沉淀，真空干燥。
層析柱通過如下過程制備將硅膠顆粒過篩選70目的均勻顆粒，在110℃下干燥1小時，使其活化，然后用5倍柱體積的氯仿-甲醇(20∶3，V/V)混合液作為載體，將硅膠調(diào)成糊狀，使其均勻分散后裝入80×10cm的層析柱，即可。
將前述真空干燥物1.2g溶于氯仿-甲醇-水(30∶50∶40，V/V/V)120ml加入層析柱，調(diào)整流速5ml/分鐘，用氯仿-甲醇-水(90∶15∶6，V/V/V)30L溶液洗脫，然后改用氯仿-甲醇-水(80∶20∶5)8L洗脫，收集后洗脫液12L，減壓濃縮后用35L的-20℃預(yù)冷丙酮沉淀，-20℃靜止2小時，傾去上層清液，離心10分鐘(1000rpm)，沉淀用適量丙酮洗2次，沉淀真空干燥過夜。
將1.16g干燥物溶于800ml注射用水，作為神經(jīng)節(jié)苷脂提取液備用，濃度為每1ml含神經(jīng)節(jié)苷脂以唾液酸計1.45mg/ml。
稱取注射用維腦路通純品60g，與250ml腦提取液及200ml神經(jīng)節(jié)苷脂提取液可配成2000ml藥液，最終制成小溶量注射劑1000支(規(guī)格為2ml∶60g維腦路通、1.5mg總氮與290μg唾液酸)。。取配液量約40％的注射用水于濃配罐中，加入維腦路通充分?jǐn)嚢柚镣耆芙?，加入總配制體積0.05％的活性攪拌煮沸15分鐘，將藥液溫度降至40～50℃，將藥液脫炭過濾至稀配罐中，在稀配罐中投入腦提取液及神經(jīng)節(jié)苷脂提取液，加水至配液量，調(diào)節(jié)PH值7.1～7.3，藥液經(jīng)過濾系統(tǒng)過濾后灌封于2ml安瓿中，滅菌，即得小容量注射劑。
實(shí)施例3取新鮮健康牛腦10kg，除去筋膜等雜質(zhì)，用注射用水洗滌，加25L注射用水，勻漿，調(diào)節(jié)pH值9.0，加熱95℃，保持30分鐘，冷卻至38℃，加入150g胰蛋白酶，保溫4小時，酶解過程中控制pH值8.0，然后加熱至85℃，保持30分鐘，得一次酶解液；8℃放置8小時，離心，離心條件為4000轉(zhuǎn)/分，離心時間為20分鐘，上清液紙漿過濾，濾液調(diào)pH值4.0，加熱80℃，保持30分鐘，5℃放置12小時，離心，離心條件為4000轉(zhuǎn)/分，離心時間為30分鐘，上清液過濾，濾液調(diào)pH值7.0，加熱至95℃，保持30分鐘，7℃放置18小時后離心，離心條件為4000轉(zhuǎn)/分，離心時間為30分鐘，上清液過濾，得濾液；濾液用截留分子量為8000的超濾膜超濾，超濾液即為腦提取液，其總氮含量為1.4mg/mL。
取10kg新鮮馬腦用30L丙酮勻漿，勻漿液用濾紙過濾，得濾渣2500g，濾渣用12.5L氯仿-甲醇(20∶1)混合液抽提三次，分別過濾后合并濾液，使用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器，在37℃減壓蒸干，得干燥物1.25g。干燥物用20L氯仿-甲醇混合液(30∶1，V/V)溶解，加入500ml的0.1mol/LKCl溶液。室溫攪拌1小時，轉(zhuǎn)移到分液漏斗中靜置16小時。分液后，上相用等體積的氯仿-甲醇-水(120∶35∶5，V/V/V)洗1次；下相用等體積的氯仿-甲醇-水(10∶68∶77，V/V/V)洗1次；合并2次上相于37℃減壓濃縮至約10L，-20℃預(yù)冷丙酮沉淀，真空干燥。
層析柱通過如下過程制備將硅膠顆粒過篩選80目的均勻顆粒，在110℃下干燥1小時，使其活化，然后用5倍柱體積的氯仿-甲醇(15∶2，V/V)混合液作為載體，將硅膠調(diào)成糊狀，使其均勻分散后裝入80×10cm的層析柱，即可。
將前述真空干燥物1.2g溶于氯仿-甲醇-水(80∶10∶20，V/V/V)24ml加入層析柱，調(diào)整流速5ml/分鐘，用氯仿-甲醇-水(75∶15∶10，V/V/V)20L溶液洗脫，然后改用氯仿-甲醇-水(40∶50∶15)15L洗脫，收集后洗脫液8L，減壓濃縮后用40L的-20℃預(yù)冷丙酮沉淀，-20℃靜止2小時，傾去上層清液，離心10分鐘(1000rpm)，沉淀用適量丙酮洗2次，沉淀真空干燥過夜。
將1.25g干燥物溶于500ml注射用水，作為神經(jīng)節(jié)苷脂提取液備用，濃度為每1ml含神經(jīng)節(jié)苷脂以唾液酸計2.5mg/ml。
稱取注射用維腦路通純品100g，與500ml腦提取液及200ml神經(jīng)節(jié)苷脂提取液可配成2000ml藥液，最終制成小溶量注射劑1000支(規(guī)格為2ml∶100mg維腦路通、0.7mg總氮與500μg唾液酸)。取配液量約40％的注射用水于濃配罐中，加入維腦路通充分?jǐn)嚢柚镣耆芙?，加入總配制體積0.05％的活性攪拌煮沸15分鐘，將藥液溫度降至40～50℃，將藥液脫炭過濾至稀配罐中，在稀配罐中投入腦提取液及神經(jīng)節(jié)苷脂提取液，加水至配液量，調(diào)節(jié)PH值7.0～7.2，藥液經(jīng)過濾系統(tǒng)過濾后灌封于2ml安瓿中，滅菌，即得小容量注射劑。
實(shí)施例4按照實(shí)施例3的操作，得到一次酶解液。
將一次酶解液降溫至45℃，調(diào)節(jié)pH值為3.5，加入100g胃蛋白酶(廈門星隆達(dá)化學(xué)試劑有限公司；1∶10000；規(guī)格100g)，酶解2小時，過程pH值控制為3.2，然后加熱至95℃保持15分鐘，得到二次酶解液；以4000轉(zhuǎn)/分的速度離心30分鐘，將上清液澄清板過濾，濾液調(diào)pH值為10.0，加熱至g0℃，保持30分鐘，在4℃放置8小時，相同離心方式分離上清，過濾，濾液調(diào)pH值為7.0，加熱至90℃，保持30分鐘，然后在6℃放置15小時，相同方式離心、過濾得濾液；濾液用截留分子量為8000的超濾膜(美國millipore公司，標(biāo)準(zhǔn)超濾系統(tǒng))超濾，超濾液即為腦提取液，其中總氮含量為2.5mg/ml。
取10kg新鮮馬腦用45L丙酮勻漿，參照實(shí)施例1步驟，制備神經(jīng)節(jié)苷脂提取液備用，濃度為每1ml含1含神經(jīng)節(jié)苷脂以唾液酸計10mg/ml。
按照實(shí)施例3的操作，制得注射液。
實(shí)施例5取新鮮健康鹿腦10kg，除去筋膜等雜質(zhì)，用注射用水洗滌，加5L注射用水，勻漿，調(diào)節(jié)pH值至8.5，加熱85℃，保持20分鐘，冷卻至45℃，加入40g胃蛋白酶(廈門星隆達(dá)化學(xué)試劑有限公司；1∶10000；規(guī)格100g)，在45℃酶解20小時，酶解過程中控制pH值2.5，然后加熱至95℃，保持15分鐘，得到一次酶解液；7℃放置10小時后離心，離心條件為4000轉(zhuǎn)/分，離心時間為30分鐘，上清液澄清板過濾，濾液調(diào)pH值3.5，加熱至80℃，保持30分鐘，8℃放置8小時后離心，相同方式離心、過濾，濾液調(diào)pH值7.3，加熱至85℃，保持15分鐘，4℃放置24小時后，相同方式離心、過濾，得濾液，濾液用截留分子量為8000的超濾膜(美國millipore公司，標(biāo)準(zhǔn)超濾系統(tǒng))超濾，超濾液即為腦提取液，其中總氮含量為7mg/ml。
取10kg新鮮狗腦用40L丙酮勻漿，參照實(shí)施例1步驟，制備神經(jīng)節(jié)苷脂提取液備用，濃度為每1ml含1含神經(jīng)節(jié)苷脂以唾液酸計100μg/ml。
稱取注射用維腦路通純品100g，與500ml腦提取液及1000ml神經(jīng)節(jié)苷脂提取液可配成2000ml藥液，最終制成小溶量注射劑1000支(規(guī)格為2ml∶100mg維腦路通、3.5mg總氮與100μg唾液酸)。取配液量約20％的注射用水于濃配罐中，加入維腦路通充分?jǐn)嚢柚镣耆芙?，加入總配制體積0.05％的活性攪拌煮沸15分鐘，將藥液溫度降至40～50℃，將藥液脫炭過濾至稀配罐中，在稀配罐中投入腦提取液及神經(jīng)節(jié)苷脂提取液，加水至配液量，調(diào)節(jié)PH值7.0～7.2，藥液經(jīng)過濾系統(tǒng)過濾后灌封于2ml安瓿中，滅菌，即得小容量注射劑。
實(shí)施例6按照實(shí)施例5的操作，得到一次酶解液。
將一次酶解液降溫至50℃，調(diào)節(jié)pH值為7.8，加入80g胰蛋白酶(美國DIFCO公司，規(guī)格500g)，酶解10小時，過程pH值控制為7.8，然后加熱至90℃保持20分鐘，得到二次酶解液；以4000轉(zhuǎn)/分的速度離心30分鐘，將上清液澄清板過濾，濾液調(diào)pH值為9.0，加熱至85℃，保持25分鐘，在8℃放置10小時，相同離心方式分離上清，過濾，濾液調(diào)pH值為7.2，加熱至80℃，保持20分鐘，然后在6℃放置25小時，相同方式離心、過濾得濾液；濾液用截留分子量為6000的超濾膜(美國millipore公司，標(biāo)準(zhǔn)超濾系統(tǒng))超濾，超濾液即為腦提取液，其中總氮含量為8.0mg/ml。
取10kg新鮮豬腦用35L丙酮勻漿，參照實(shí)施例1步驟，制備豬腦神經(jīng)節(jié)苷脂提取液備用，濃度為每1ml含唾液酸400μg唾液酸。
按照實(shí)施例5的操作，制得注射液。
實(shí)施例7取新鮮健康豬腦10kg，加入15L注射用水勻漿，參照實(shí)施例1制備腦提取液備用，其中總氮含量為2.4mg/ml。
取10kg新鮮羊腦用35L丙酮勻漿，參照實(shí)施例1步驟，制備羊腦神經(jīng)節(jié)苷脂提取液備用，濃度為每1ml含唾液酸400μg唾液酸。
稱取注射用維腦路通純品80g，與250ml腦提取液及500ml神經(jīng)節(jié)苷脂提取液可配成2000ml藥液，最終制成小容量注射劑400支(規(guī)格為5ml∶200mg維腦路通、1.5mg總氮與5mg唾液酸)。取配液量約40％的注射用水于濃配罐中，加入維腦路通充分?jǐn)嚢柚镣耆芙?，加入總配制體積0.05％的活性攪拌煮沸15分鐘，將藥液溫度降至40～50℃，將藥液脫炭過濾至稀配罐中，在稀配罐中投入腦提取液及神經(jīng)節(jié)苷脂提取液，加水至配液量，調(diào)節(jié)PH值6.8～7.0，藥液經(jīng)過濾系統(tǒng)過濾后灌封于5ml安瓿中，滅菌，即得小容量注射劑。
實(shí)施例8按照實(shí)施例1中的操作，制備腦提取液及神經(jīng)節(jié)苷脂提取液。
稱取注射用維腦路通純品80g，與1000ml腦提取液及神經(jīng)節(jié)苷脂提取液200ml可配成2000ml藥液，最終制成小溶量注射劑200支(規(guī)格為10ml∶400mg維腦路通、20mg總氮與10mg唾液酸)。取配液量約30％的注射用水于濃配罐中，加入維腦路通充分?jǐn)嚢柚镣耆芙?，加入總配制體積0.05％的活性攪拌煮沸15分鐘，將藥液溫度降至40～50℃，將藥液脫炭過濾至稀配罐中，在稀配罐中投入腦提取液及神經(jīng)節(jié)苷脂提取液，加水至配液量，調(diào)節(jié)PH值6.8～7.0，藥液經(jīng)過濾系統(tǒng)過濾后灌封于5ml安瓿中，滅菌，即得小容量注射劑。
實(shí)施例9～14參照實(shí)施例1～6，腦提取液和維腦路通及神經(jīng)節(jié)苷脂提取液進(jìn)行配比，按公知的方法，制成顆粒，干燥后壓片，得片劑。
實(shí)施例15～20參照實(shí)施例1～5，腦提取液和維腦路通及神經(jīng)節(jié)苷脂提取液進(jìn)行配比，加入適宜的賦型劑(如右旋糖酐40、甘露醇等)，進(jìn)行除菌灌裝，按公知的方法，冷凍干燥制成凍干粉針產(chǎn)品。
實(shí)施例21～26參照實(shí)施例1～5，將腦提取液及神經(jīng)節(jié)苷脂提取液投入到稀配罐中；在濃配罐中投入維腦路通和0.85％最終配制總體積的氯化鈉，加入0.4‰活性炭煮沸脫炭過濾，冷卻后，將藥液過濾至稀配罐中，在稀配罐中補(bǔ)加注射用水至配液量，調(diào)PH為6.8～7.0，過濾。灌封于輸液瓶中，100℃流通蒸汽滅菌45分鐘，即得輸液產(chǎn)品。
實(shí)驗(yàn)例1本實(shí)驗(yàn)例為實(shí)施例1注射劑外觀性狀、pH值、蛋白質(zhì)、熱原、異常毒性及其它規(guī)定的注射劑檢查項(xiàng)目的檢測。
√本品為黃色或淺棕黃色澄明液體。
√按照中國藥典2000年版二部附錄VI H測定，本品pH值應(yīng)為5.5-7.5。
√取本品2ml，加20％磺基水楊酸溶液2ml，溶液應(yīng)澄清。
√熱原檢查取本品，用氯化鈉注射液稀釋成每ml中含維腦路通20mg的溶液，依法檢查(中國藥典2000年版二部附錄XID)。劑量按家兔體重每kg注射本品2ml，應(yīng)符合規(guī)定。
√異常毒性測定取本品，用氯化鈉注射液稀釋成每ml中含維腦路通20mg的溶液，依法檢查(中國藥典2000年版二部附錄XIC)。按靜脈注射給藥，應(yīng)符合規(guī)定。
√其他應(yīng)符合注射劑項(xiàng)下有關(guān)各項(xiàng)規(guī)定(中國藥典2000版二部附錄IB)。
實(shí)驗(yàn)例2本實(shí)驗(yàn)例為實(shí)施例1注射劑中主要組分的定性測定。
√取本品0.5ml，加水稀釋至20ml，加鹽酸1ml和鋅粉少量，置水浴上加熱，顯持續(xù)的紅色。
√取本品0.5ml，加水稀釋至20ml，加三氯化鋁少量，溶液顯亮黃色。
√取本品2ml，加茚三酮試液數(shù)滴，加熱，應(yīng)顯藍(lán)色。
√在維腦路通含量測定項(xiàng)下記錄的色譜圖中，供試品溶液的主峰保留時間應(yīng)與維腦路通對照品峰的保留時間一致。
以上三種實(shí)驗(yàn)為本發(fā)明藥物組合物所含組份的定性反應(yīng)，說明本發(fā)明藥物組合中含有確定的組份。
實(shí)驗(yàn)例3本實(shí)驗(yàn)例為實(shí)施例1注射劑中的維腦路通定量測定。
本實(shí)驗(yàn)例按高效液相色譜法(中國藥典2000年版二部附錄VD)測定。
√色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以0.1％枸櫞酸溶液-乙睛-四氫呋喃(85∶9∶6)為流動相；檢測波長為254nm。理論板數(shù)按維腦路通峰計算應(yīng)不低于2000。維腦路通峰與其他物質(zhì)峰之間的分離度應(yīng)符合要求。
√測定法取本品適量，用流動相定量稀釋成每1ml中含維腦路通0.20mg的溶液，作為供試品溶液，取10μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖；另精密稱取維腦路通對照品適量，用流動相溶解并稀釋制成每1ml中含維腦路通0.20mg的溶液，作為對照品溶液，同法測定，按外標(biāo)法以峰面積計算。
√維腦路通含量應(yīng)為標(biāo)示量的90～110％。
√分為三組測定，結(jié)果見下表
實(shí)驗(yàn)例4本實(shí)驗(yàn)例為實(shí)施例1注射劑中總氮的定量測定。
取本品依法測定(中國藥典2000年版二部附錄VIID)。
分為三組測定，本品中總氮含量應(yīng)為標(biāo)示量的85～115％，結(jié)果見下表
實(shí)驗(yàn)例5本實(shí)驗(yàn)例為本發(fā)明最優(yōu)選藥物組合物小容量注射劑(每ml含40mg維腦路通、0.5mg總氮、200μg唾液液)中所含神經(jīng)節(jié)苷脂(以唾液酸計)的定量測定。
參比溶液的制備 取唾液酸參比試劑適量，加0.9％氯化鈉溶液制成每1ml中含50μg的溶液。
標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密量取參比溶液0.0ml、0.5ml、1.0ml、1.5ml、2.0ml，分別置具塞試管中，各加水至2.0ml，再分別精密加入間苯二酚溶液(取2％間苯二酚溶液10ml、2.5％硫酸銅溶液0.25ml，鹽酸80ml，加水至100ml)2ml，搖勻，置水浴中反應(yīng)15分鐘，取出置冷水中10分鐘。分別精密加醋酸正丁酯-正丁醇(85∶15)5ml，劇烈振搖后放置15分鐘。取上層液于585nm的波長處測定吸收度；以0管作為空白。以測得的吸收度與對應(yīng)的濃度計算回歸方程。
測定法 精密量取供試品溶液1ml，照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項(xiàng)下的方法，自“精密加入間苯二酚溶液”起，依法測定，從回歸方程求得供試品溶液的濃度，并乘以稀釋倍數(shù)，即為唾液酸含量。
√含神經(jīng)節(jié)苷脂(以唾液酸計)應(yīng)為標(biāo)示量的80.0％～120.0％。
√分為三組測定，結(jié)果見下表
實(shí)驗(yàn)例6本例為對實(shí)施例2所制備的腦提取液按腦蛋白水解物注射液標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行的主要項(xiàng)目檢測。
√氨基酸含量測定取本品，用適宜的氨基酸分析儀或高效液相色譜儀進(jìn)行分離測定；另取相應(yīng)的氨基酸對照品制成的相應(yīng)濃度的對照品溶液，同法測定。按外標(biāo)法以峰面積計算各氨基酸的含量。測定結(jié)果如下每1ml含游離氨基酸為34.70mg/ml，其中門冬氨酸 3.05mg/ml谷氨酸3.89mg/ml絲氨酸0.25mg/ml組氨酸1.22mg/ml甘氨酸1.49mg/ml蘇氨酸0.24mg/ml丙氨酸2.99mg/ml精氨酸0.55mg/ml纈氨酸1.94mg/ml蛋氨酸0.43mg/ml異亮氨酸 1.90mg/ml苯丙氨酸 1.80mg/ml亮氨酸6.18mg/ml賴氨酸6.55mg/ml脯氨酸2.22mg/ml√總氮含量測定取本品，依法測定(中國藥典2000年版二部附錄VII D)，總氮為6.10mg/ml。
√鑒別(1)取本品2ml，加雙縮腺試劑(取硫酸銅0.75g和酒石酸鉀鈉0.3g，加水250ml使溶解，在攪拌下加入10％氫氧化鈉溶液150ml，加水至500ml)4ml，顯紫紅色，符合規(guī)定。
√鑒別(2)取本品，照高效液相色譜法(中國藥典2000年版二部附錄V D)試驗(yàn)。
色譜條件用凝膠色譜柱以磷酸鹽緩沖液(取磷酸氫二鉀10.63g與磷酸二氫鉀5.31g，加異丙醇50ml，加水至1000ml，用磷酸調(diào)節(jié)PH值至7.0)為流動相；流速為每分鐘1ml。
測定法取對照溶液及供試品溶液各10υl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，供試品溶液的色譜圖應(yīng)與對照溶液的色譜圖基本一致，符合規(guī)定。
√折光率本品的折光率(中國藥典2000年版二部附錄VIH)為1.342，符合規(guī)定。
√PH值PH值為7.2(中國藥典2000年版二部附錄VIH)，符合規(guī)定。
√蛋白質(zhì)取本品5ml，加20％磺基水楊酸2ml，溶液應(yīng)澄清，符合規(guī)定。
實(shí)驗(yàn)例7本實(shí)驗(yàn)例為本發(fā)明藥物組合物對大鼠局灶腦缺血后的神經(jīng)修復(fù)功能的藥理藥效試驗(yàn)，說明了各組分之間的協(xié)同增效作用。
方法采用Longa氏法制備SD大鼠大腦中動脈腦缺血模型，分組如下A、假手術(shù)組(8只)；B、持續(xù)缺血組(無藥物干預(yù))根據(jù)取樣時間點(diǎn)的不同分為1、3、7及14d共4組(每組8只)；C、藥物干預(yù)組實(shí)施例1注射劑、施普善(Cerebrolysin，原名腦活素)和維腦路通注射液干預(yù)組。
各時相點(diǎn)取材，免疫組化觀察巢蛋白(Nestin)和神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)的表達(dá)變化，并使用多媒體彩色病理圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行定量分析；利用草酸-焦銻酸鉀電鏡細(xì)胞化學(xué)技術(shù)觀察缺血腦組織的超微結(jié)構(gòu)改變。
結(jié)果藥物干預(yù)組其病理改變輕于持續(xù)缺血組；實(shí)施例1注射劑組病理改變輕于施普善、維腦路通注射液組。藥物干預(yù)組其Nestin、NSE表達(dá)明顯高于持續(xù)缺血組。
結(jié)論本發(fā)明藥物組合物注射劑可通過使缺血后Nestin、NSE的表達(dá)上調(diào)，而起到減輕缺血性腦損傷的作用，同時因兼有神經(jīng)節(jié)苷脂，其效果上有協(xié)同增效作用。
比較例1本例為實(shí)施例1注射劑與對照組在治療腦血栓的臨床對比，說明本發(fā)明組合物的良好療效，即腦提取液、神經(jīng)節(jié)苷脂與維腦路通的協(xié)同療效優(yōu)于腦提取液與維腦路通的組合。
目標(biāo)病例數(shù)受試對象及基本情況，各項(xiàng)指標(biāo)經(jīng)過統(tǒng)計學(xué)檢驗(yàn)后，無差異。根據(jù)總體試驗(yàn)設(shè)計，共有115例(既治療組55例及對照組60例)兩組分布一致。
試驗(yàn)對象1、入選標(biāo)準(zhǔn)急性中度(NIH 7-22分)頸內(nèi)動脈首發(fā)的腦梗死，發(fā)病在72小時內(nèi)；發(fā)病年齡35-70歲；無意識障礙、查體合作；經(jīng)頭顱CT證實(shí)為腦梗死，排出腦出血。
2、排除標(biāo)準(zhǔn)既往有致殘性中風(fēng)者；心、肺、肝、腎等臟器功能衰竭者；懷孕或哺乳期的婦女；試驗(yàn)開始前一個月及試驗(yàn)期間參加其他任何藥物的試驗(yàn)者；有精神病史或嚴(yán)重精神癥狀者；有活動性出血或出血傾向者。
試驗(yàn)方法1、本試驗(yàn)為隨機(jī)對照試驗(yàn)。
2、實(shí)施例1產(chǎn)品作為治療組應(yīng)用，對照組按照實(shí)施例1的制備方法制備，不同在于，其中沒有神經(jīng)節(jié)苷脂組分。
3、觀察指標(biāo)1)NIH2)病殘程度評分3)實(shí)驗(yàn)室檢查a.分別與給藥前、給藥后7天、21天化驗(yàn)血、尿常規(guī)、肝、腎功能b.于給藥前及試驗(yàn)結(jié)束后檢查心電圖、血壓。
4、不良反應(yīng)詳細(xì)記錄治療中出現(xiàn)的不良反應(yīng)，包括頭痛、頭暈、皮膚過敏反應(yīng)等。記錄不良反應(yīng)出現(xiàn)的時間、程度、和持續(xù)時間。并按與本藥治療肯定有關(guān)、很可能有關(guān)、可能有關(guān)、不能判定及無關(guān)五級標(biāo)準(zhǔn)判定。
5、療效判定基本痊愈NIH減少91-100％，病殘程度為0級；顯著進(jìn)步NIH減少46-90％，病殘程度在1-3級；進(jìn)步NIH減少18-45％；無變化NIH減少或增加在17％；惡化NIH增加18％以上。
總有效率＝基本痊愈+顯著進(jìn)步+進(jìn)步統(tǒng)計分析所有數(shù)據(jù)均用SPSS統(tǒng)計軟件進(jìn)行分析；其中兩組間各指標(biāo)均數(shù)間比較采用t檢驗(yàn)；計數(shù)資料采用x2檢驗(yàn)。
結(jié)果1、入選病例及治療前病人的基本特征兩組分別為55例和60例，病例均包括在意向處理分析中；兩組病人治療前在性別、年齡、病程、NIH等無明顯差異。
2、臨床療效分級療效評定如下表
3、終止治療及不良反應(yīng)事件治療前、治療后，實(shí)驗(yàn)室檢查肝腎功能、血尿常規(guī)及心電圖均無異常變化，未見明顯不良反應(yīng)。
結(jié)論本發(fā)明治療組有效率83.6％，對照組有效率65％，尤其在顯著進(jìn)步和基本痊愈上有了顯著的提高。因此，本發(fā)明藥物組合物具有多途徑、多機(jī)制的協(xié)同藥理作用，無明顯的不良反應(yīng)，是治療急性腦血管病的有效藥物。
比較例2本例為實(shí)施例1注射劑與施捷因[神經(jīng)節(jié)苷脂(GM1)注射液]，在治療血管性癡呆(VaD)的臨床對比，說明本發(fā)明注射液的良好療效，即腦提取液、神經(jīng)節(jié)苷脂與維腦路通的協(xié)同療效優(yōu)于神經(jīng)節(jié)苷脂注射液。
研究對象VaD患者共52例，年齡55～75歲，所有入選病例均符合DSM-IV及NINCDS-ADRDA標(biāo)準(zhǔn)(1)滿足DSM-IV可能性VaD標(biāo)準(zhǔn)；(2)HIS評分超過7分；(3)CT或MRI有額葉和頂葉腦室旁融合性白質(zhì)病變及基底節(jié)和額葉腔隙性梗死灶(≥2)。
腔隙灶定義為低密度，與腦脊液等密度，2mm＜直徑＜15mm。
52例患者隨機(jī)分為本發(fā)明藥物組和普洛迪組對照組，失訪2例，實(shí)際入選50例。
本發(fā)明組(實(shí)施例1注射劑組)27例，男20例，女7例，平均年齡65±3.5歲，病程3～3.5年，合并高血壓15例，糖尿病12例，血脂異常14例；對照組23例，男18例，女6例，平均年齡66±7.0歲，病程3～3.5年，合并高血壓11例，糖尿病9例，血脂異常10例；兩組的性別、年齡、文化程度、婚姻、基本病情無顯著差異(p＞0.05)。
治療方法均采用藥品說明書方法給藥，每天1次，28d為1個療程。
療效評定所有患者治療前及治療后28d、3個月接受簡易智力狀態(tài)檢查表(MMSE)、日常生活能力表(ADL)、腦卒中患者臨床神經(jīng)功能缺損表(DND)評估。
統(tǒng)計學(xué)方法數(shù)據(jù)采用SPSS10.0軟件包處理。計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(x±s)表示，行方差分析和t檢驗(yàn)。
結(jié)果治療前兩組各量表評分無顯著性差異(p＞0.05)。治療28d后本發(fā)明組的MMSE總分比治療前提高3.12分，對照組提高1.30分，本發(fā)明組優(yōu)于施捷因組，兩組比較有顯著性差異(p＜0.05)。3個月后本發(fā)明組MMSE總分比治療前提高了0.91分，施捷因組下降1.78分，兩組比較差異有顯著性(p＜0.05)。本發(fā)明組ADL和DND在治療后28d和3個月后均下降，與施捷因組比較差異有顯著性意義(p＜0.01或p＜0.05)。
權(quán)利要求
1.一種藥物組合物，其特征在于，所述的藥物組合物由除人以外的哺乳動物腦組織中提取的腦提取液、維腦路通及神經(jīng)節(jié)苷脂組配而成，所述的神經(jīng)節(jié)苷脂由除人以外的哺乳動物腦組織中提取得到，其中維腦路通與腦提取液中總氮含量的重量比為0.1～200，維腦路通與神經(jīng)節(jié)苷脂中唾液酸的重量比為10～1600倍。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的組合物，其特征在于，所述的藥物組合物中維腦路通與腦提取液中總氮含量的重量比為10-100，該重量比更優(yōu)選為70-90，最優(yōu)選為80；藥物組合物中維腦路通與與神經(jīng)節(jié)苷脂中唾液酸的重量比40～1000倍，該重量比更優(yōu)選為100-500，最優(yōu)選為400。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的組合物，其特征在于，所述的除人以外的哺乳動物腦組織為豬、狗、牛、羊、鹿、馬或兔的腦組織，優(yōu)選牛腦組織。
4.權(quán)利要求1-3所述的藥物組合物的制備方法，其特征在于，該制備方法包括腦提取液的制備，神經(jīng)節(jié)苷脂提取液的制備，腦提取液、維腦路通和神經(jīng)節(jié)苷脂混配，以及經(jīng)后處理制得成品制劑的步驟。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述的腦提取液的制備過程為取新鮮健康的動物腦組織，加0.5-2.5倍重量注射用水勻漿，加熱至80-95℃，保持15-30分鐘，冷卻至酶解溫度，調(diào)節(jié)至酶解pH值，加入腦重量0.1-1.5％的蛋白水解酶，進(jìn)行一次酶解或二次酶解，一次酶解液或二次酶解液在4-8℃放置8-24小時后，經(jīng)離心過濾處理，濾液用截留分子量為5000-10000的超濾膜超濾，超濾液為腦提取液，其總氮含量為0.1～10mg/ml；進(jìn)一步的，上述腦提取液制備所述的一次酶解為在加入腦重量0.1-1.5％的蛋白水解酶后，在該蛋白水解酶酶解溫度保持2-20小時，保持酶解pH值，然后加熱至80-95℃并保持15-30分鐘，得一次酶解液；所述蛋白水解酶優(yōu)選使用胰蛋白酶，酶解溫度為35-50℃，酶解溫度優(yōu)選為37～42℃，酶解pH值為7.5-8.5，酶解pH值優(yōu)選為7.8～8.2；所述的一次酶解后的離心過濾處理為離心后分離上清液，將上清液過濾，濾液調(diào)pH值為3.5-4.5，加熱至80-95℃，保持15-30分鐘，在4-8℃放置8-24小時，離心后分離上清液，將上清液過濾，濾液調(diào)pH值為6.5-7.5，加熱至80-95℃，保持15-30分鐘，在4-8℃放置8-24小時，然后離心，上清液經(jīng)過濾得濾液；所述的二次酶解過程為將一次酶解液降溫至酶解溫度，調(diào)節(jié)至酶解pH值，加入腦重量0.1-1.5％的蛋白水解酶，酶解2-20小時，保持酶解pH值，然后加熱至80-95℃保持15-30分鐘，得二次酶解液；所述蛋白水解酶優(yōu)選使用胃蛋白酶，酶解適合溫度為35-50℃，酶解溫度優(yōu)選為37～42℃，酶解適合pH值為2.5-3.5，酶解pH值優(yōu)選為2.5-3.2；所述的二次酶解后的離心過濾處理為離心后分離上清液，將上清液過濾，濾液調(diào)pH值為8.0-10.0，加熱至80-95℃，保持15-30分鐘，在4-8℃放置8-24小時，離心后分離上清液，將上清液過濾，濾液調(diào)pH值為6.5-7.5，加熱至80-95℃，保持15-30分鐘，在4-8℃放置8-24小時，然后離心，上清液經(jīng)過濾得濾液；所述的離心條件為4000轉(zhuǎn)/分，離心時間為15-30分鐘；所述的過濾為現(xiàn)有技術(shù)中通用的紙漿過濾或澄清板過濾；所述的蛋白水解酶為胰蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、菠蘿蛋白酶、中性蛋白酶等現(xiàn)有技術(shù)中使用的蛋白水解酶；上述超濾膜優(yōu)選為截留分子量為6000-10000的超濾膜，更優(yōu)選截留分子量為8000的超濾膜。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的制備方法，其特征在于，所述的神經(jīng)節(jié)苷脂提取液的制備過程為A)將動物腦組織加溶劑勻漿后過濾，濾渣用溶劑抽提提取，提取液與濾液合并后蒸干，得干燥物；B)將干燥物溶于溶劑中，向其中加入鹽的水溶液提取分液；C)分液的上、下層液相分別用至少兩種溶劑的混合水溶液洗滌，合并洗滌后的上層液相部分，減壓濃縮，然后用預(yù)冷丙酮沉淀，干燥后得干燥物；D)將干燥物溶于至少兩種溶劑的混合水溶液，層析柱分離，洗脫液濃縮后用預(yù)冷丙酮沉淀、分離，得到的沉淀經(jīng)后處理，得到神經(jīng)節(jié)苷脂提取液；所述的神經(jīng)節(jié)苷脂提取液的制備過程進(jìn)一步優(yōu)選為A)將動物腦組織加3～4倍重量的丙酮勻漿后過濾，保留濾渣和濾液；濾渣用3～5倍重量的氯仿-甲醇(1～20∶1～20，V/V)混合液抽提三次，分別過濾；將上述濾液合并后在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中37℃減壓蒸干，得干燥物；B)干燥物溶于氯仿-甲醇(2～30∶1～20，V/V)混合液，然后向混合液中加入1/20～1/80體積的0.1mol/L的KCl溶液，室溫下攪拌1小時，靜置8～16小時后分液；C)分液后，上層液相用等體積的氯仿-甲醇-水(50～150∶5～40∶0.5～5，V/V/V)混合液洗滌，下層液相用等體積的氯仿-甲醇-水(1～10∶30～80∶35～85，V/V/V)混合液洗滌，合并兩次洗滌后的上層液相部分，在37℃減壓濃縮至初始體積的1/8～1/2，然后用-20℃預(yù)冷丙酮沉淀，真空干燥，得干燥物；D)將干燥物溶于的氯仿-甲醇-水(30～80∶10～50∶1～90，V/V/V)混合液，制成1～5％濃度的溶液，加入層析柱，調(diào)整流速5ml/分鐘，用氯仿-甲醇-水(60～90∶15～40∶1～10，V/V/V)混合液10～30L洗脫，然后改用氯仿-甲醇-水(40～80∶20～50∶5～15，V/V/V)混合液8～15L洗脫，收集后洗脫液6～12L，減壓濃縮后用3～5倍體積的-20℃預(yù)冷丙酮沉淀，-20℃靜止2小時后傾去上層清液，余下部分在1000轉(zhuǎn)/分下離心10分鐘，得到的沉淀用適量丙酮洗2次，真空干燥，將干燥物溶于水得神經(jīng)節(jié)苷脂提取液，該神經(jīng)節(jié)苷脂提取液濃度為每1ml含唾液酸0.1～20mg；所述的神經(jīng)節(jié)苷脂提取液的制備過程更進(jìn)一步優(yōu)選為A)將動物腦組織加3～4倍重量的丙酮勻漿后過濾，保留濾渣和濾液；濾渣用3～5倍重量的氯仿-甲醇(1∶1，V/V)混合液抽提三次，分別過濾；將上述濾液合并后在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器中37℃減壓蒸干，得干燥物；B)干燥物溶于氯仿-甲醇(2∶1，V/V)混合液，然后向混合液中加入1/80體積的0.1mol/L的KCl溶液，室溫下攪拌1小時，靜置8～16小時后分液；C)分液后，上層液相用等體積的氯仿-甲醇-水(86∶14∶1，V/V/V)混合液洗滌，下層液相用等體積的氯仿-甲醇-水(3∶48∶47，V/V/V)混合液洗滌，合并兩次洗滌后的上層液相部分，在37℃減壓濃縮至初始體積的1/4，然后用-20℃預(yù)冷丙酮沉淀，真空干燥，得干燥物；D)將干燥物溶于的氯仿-甲醇-水(65∶25∶4，V/V/V)混合液，制成2.5％濃度的溶液，加入層析柱，調(diào)整流速5mL/分鐘，用氯仿-甲醇-水(65∶25∶4，V/V/V)混合液20L洗脫，然后改用氯仿-甲醇-水(60∶35∶8，V/V/V)混合液12L洗脫，收集后洗脫液10L，減壓濃縮后用4倍體積的-20℃預(yù)冷丙酮沉淀，-20℃靜止2小時后傾去上層清液，余下部分在1000轉(zhuǎn)/分下離心10分鐘，得到的沉淀用適量丙酮洗2次，真空干燥，將干燥物溶于水得神經(jīng)節(jié)苷脂提取液，該神經(jīng)節(jié)苷脂提取液濃度為每1ml含唾液酸0.1～20mg。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的制備方法，其特征在于，所述步驟D)中所用的層析柱通過如下過程制備將硅膠顆粒過篩選60～80目的均勻顆粒，在110℃下干燥1小時，使其活化，然后用5倍柱體積的氯仿-甲醇(5～20∶0.5～3，V/V)混合液作為載體，將硅膠調(diào)成糊狀，使其均勻分散后裝入80×10cm的層析柱，即得。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的制備方法，其特征在于，所述氯仿-甲醇混合比為9∶1(V/V)。
9.根據(jù)權(quán)利要求4-8任意一項(xiàng)所述的制備方法，其特征在于，所述的成品制劑的劑型為藥劑學(xué)上可接受的劑型，比如片劑、膠囊劑、顆粒劑、口服液、小容量注射劑、大容量注射劑或凍干粉針劑等，優(yōu)選為小容量注射劑、大容量注射劑或凍干粉針劑，最優(yōu)選為小容量注射劑；所述的后處理是按照制備藥劑學(xué)上可接受的劑型的常規(guī)方法進(jìn)行。
10.權(quán)利要求1-3所述的藥物組合物在制備治療腦血栓、腦栓塞、腦痙攣等急慢性腦血管疾病，以及老年性癡呆、顱腦外傷、腦血管意外創(chuàng)傷及創(chuàng)傷后的神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥及腦血管疾病所引起腦功能障礙等后遺癥，治療閉塞綜合癥、動脈硬化、血栓性靜脈炎、毛細(xì)血管出血以及血管通透性升高引起的水腫等藥物中的應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種藥物組合物，含有蘆丁經(jīng)羥乙基化得到的維腦路通和從除人以外的哺乳動物腦組織中提取的腦提取液及含有從除人以外的哺乳動物腦組織中提取的神經(jīng)節(jié)苷脂，藥物組合物中含有維腦路通1－1000重量份，藥物組合物中維腦路通重量為腦提取液中總氮含量的0.1～200倍，藥物組合物中維腦路通重量為神經(jīng)節(jié)苷脂中唾液酸的10～1600倍，還公開了藥物組合物的制備方法及其用途，本藥物組合物能抑制血小板的聚集，有防止血栓形成的作用，能調(diào)整和改善腦代謝，能促進(jìn)神經(jīng)病變、神經(jīng)損傷修復(fù)、再生，有神經(jīng)功能恢復(fù)和清除神經(jīng)病變癥狀作用，用于治療急慢性腦血管疾病，以及老年性癡呆、顱腦外傷、腦血管意外創(chuàng)傷及創(chuàng)傷后的神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥及腦血管疾病所引起腦功能障礙等后遺癥；用于治療閉塞綜合癥、動脈硬化、血栓性靜脈炎、毛細(xì)血管出血以及血管通透性升高引起的水腫。
文檔編號A61P25/00GK1813797SQ200510130540
公開日2006年8月9日 申請日期2005年12月14日 優(yōu)先權(quán)日2004年12月15日
發(fā)明者彭瑞平 申請人:阿爾貝拉醫(yī)藥控股(通化)有限公司