專利名稱：葡萄糖脫氫酶法檢測葡萄糖的試劑盒及制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于一種含有酶的葡萄糖檢測試劑盒，特別是涉及一種葡萄糖脫氫酶法檢測葡萄糖的試劑盒及制備方法。
背景技術(shù)：
葡萄糖的測定方法已知的就有12種之多，在這些方法中，有的方法易受反應(yīng)液中還原性物質(zhì)、其它糖類干擾而產(chǎn)生或高或低偏差而很少應(yīng)用。目前，國內(nèi)外臨床實(shí)驗(yàn)室檢測葡萄糖最常用的方法是酶法，以酶為試劑可以提高特異性，葡萄糖氧化酶法易受維生素C、尿酸、尿素、膽紅素、肌酐的干擾，而以上各物質(zhì)對葡萄糖脫氫酶法無干擾。目前各實(shí)驗(yàn)室使用的葡萄糖脫氫酶法試劑盒，雖生產(chǎn)廠家不同，但試劑盒的組成基本相似，緩沖液內(nèi)含有葡萄糖脫氫酶、變旋酶、NAD+或NADP+、防腐劑。下面是《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》葡萄糖脫氫酶法試劑盒配方《全國臨床檢驗(yàn)操作規(guī)程》第三版中配方:
磷酸鹽緩沖液(PH 7.6) 120.0 mmol/L GDH4500 U/L 變旋酶90 U/L NAD+2.2 mmol/L
使用方法:樣品:試劑=I: 100，混勻后7分鐘檢測。葡萄糖脫氫酶法(GDH)法檢測葡萄糖的過程為:葡萄糖脫氫酶催化葡萄糖脫氫，與NAD+氧化生成葡萄糖酸(D-葡萄糖糖酸-δ -內(nèi)酯)和NADH。
GDHβ -D-葡萄糖+NAD+ 4 NADH+D-葡萄糖酸內(nèi)酯反應(yīng)液中加入變旋酶可縮短反應(yīng)到達(dá)平衡的時間,在反應(yīng)過程中，NADH的生成量與葡萄糖濃度呈正比關(guān)系。在肝轉(zhuǎn)移癌、惡性貧血、急性心肌梗塞患者中，血液中LDH、a -HBDH活性都升高，同時伴有丙酮酸、α -酮丁酸升高，用葡萄糖脫氫酶法測定其葡萄糖時，一旦有NADH生成，它將會產(chǎn)生如下干擾反應(yīng):在LDH催化下，NADH與丙酮酸反應(yīng)，生成L-乳酸和NAD+，如反應(yīng)方程式(I);在a-HBDH催化下，NADH與α -酮丁酸反應(yīng)生成α -羥丁酸和NAD+，如反應(yīng)方程式(2)。干擾反應(yīng)不同程度地消耗了 NADH，有時甚至?xí)谋M生成的NADH，使反應(yīng)曲線下降或變?yōu)槠教?，使NADH的生成與葡萄糖不成等量關(guān)系，干擾反應(yīng)的結(jié)果使葡萄糖測定結(jié)果偏低，LDH、a-HBDH活性越高，干擾反應(yīng)速度越快，偏差越大。葡萄糖脫氫酶法測定心肌酶升高患者的葡萄糖，內(nèi)源性干擾可通過與葡萄糖氧化酶法比較而被發(fā)現(xiàn)，葡萄糖脫氫酶法測定葡萄糖結(jié)果明顯偏低，也可以通過在自動化分析儀上查看實(shí)時反應(yīng)曲線獲知，心肌酶活性越高，樣品體積分?jǐn)?shù)增加，內(nèi)源性干擾越大，反應(yīng)曲線下降越陡，葡萄糖結(jié)果偏差越大，準(zhǔn)確度越低。
權(quán)利要求
1.種葡萄糖脫氫酶法檢測葡萄糖的試劑盒，包括有:4瓶葡萄糖脫氫酶法試劑及I支葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液，其特征在于90 150.0mmol/L的磷酸鹽緩沖液溶解4.0 12.0mmol/L濃度的草酸鹽，葡萄糖脫氫酶5000 7000U/L，變旋酶140 220U/L，NAD+2.0 6.0mmol/L,0.1 0.3% ProClin300 防腐劑。
2.據(jù)權(quán)利要求1所述的葡萄糖脫氫酶法檢測葡萄糖的試劑盒，其特征在于試劑中草酸鹽為分析純的草酸鈉、草酸鉀，用于抑制葡萄糖脫氫酶法測定中的干擾反應(yīng)。
3.據(jù)權(quán)利要求1所述的葡萄糖脫氫酶法檢測葡萄糖的試劑盒，其特征在于葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液的濃度為5.55mmol/L。
4.據(jù)權(quán)利要求1所述的葡萄糖脫氫酶法檢測葡萄糖的試劑盒，其特征在于防腐劑為ProClin 300。
5.種葡萄糖脫氫酶法試劑盒的制備方法，其特征在于試劑制備方法如下: a.磷酸鹽緩沖液(PH7.5) 120.0mmol/L濃度的磷酸鹽緩沖液的制備方法:稱取96gNaCl,2.4g KCl、17.3g Na2HPCM 和 2.88g KH2PO4,溶于 800ml 蒸餾水中，調(diào)節(jié) pH 值，最后加蒸餾水定容至IL即可。
b.試劑的制備方法:將葡萄糖脫氫酶加入制備好的磷酸鹽緩沖液中，依次溶解草酸鈉、變旋酶、NAD+、ProClin 300充分混勻，使各成分的濃度達(dá)到使用要求。
c.葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液 的制備方法:稱取分析純葡萄糖溶解在蒸餾水中，使其濃度為5.55mmol/L,混勻后靜置30分鐘，分裝備用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種葡萄糖脫氫酶法檢測葡萄糖的試劑盒，屬于一種含酶的葡萄糖檢測試劑盒。本發(fā)明試劑盒包括有4瓶葡萄糖脫氫酶法試劑及1支葡萄糖標(biāo)準(zhǔn)液，在本發(fā)明試劑中包括有120.0mmol/L濃度的磷酸鹽緩沖液中溶解草酸鈉8.0mmol/L、葡萄糖脫氫酶6000U/L、變旋酶180U/L、NAD+4.0mmol/L、0.2％ProClin 300防腐劑。在測定中通過草酸鈉抑制內(nèi)源性乳酸脫氫酶、α-羥丁酸脫氫酶的活性來控制干擾反應(yīng)，增加反應(yīng)的特異性，提高檢測結(jié)果的準(zhǔn)確度。本發(fā)明的試劑盒檢測時受樣品/試劑體積比的設(shè)置影響小，線性范圍可達(dá)35.0mmol/L。其使用方法與原有葡萄糖脫氫酶法相同，不會增加實(shí)驗(yàn)人員的負(fù)擔(dān)，幾乎不增加試劑成本，經(jīng)濟(jì)方便易行，是一種準(zhǔn)確性更高的葡萄糖脫氫酶法測定葡萄糖的試劑盒。
文檔編號C12Q1/32GK103088108SQ201210459910
公開日2013年5月8日 申請日期2012年11月16日 優(yōu)先權(quán)日2012年11月16日
發(fā)明者李立和 申請人:李立和