專利名稱：萘脲類作為葡萄糖攝取的增強(qiáng)劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明主要涉及增強(qiáng)胰島素依賴的葡萄糖攝取的方法。確切而言，本發(fā)明涉及激活胰島素受體激酶的化合物，其中胰島素受體激酶能引起葡萄糖攝取量增加。本發(fā)明也涉及治療人高血糖癥的方法，尤其是治療II型糖尿病的方法。
與本發(fā)明相關(guān)的背景技術(shù)參與能量代謝的肽類和蛋白質(zhì)激素的眾多功能之一是具有與高度特異性的受體作用的能力。胰島素受體實(shí)際上存在于所有細(xì)胞，并且在肝細(xì)胞、骨骼肌細(xì)胞、和脂肪細(xì)胞上濃度較高。胰島素對(duì)胰島素受體的刺激作用是碳水化合物代謝和儲(chǔ)存的的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。
糖尿病分兩類，一類缺乏足夠的胰島素內(nèi)源性分泌(I型)，另一類具有內(nèi)源和外源胰島素抵抗的胰島素受體介導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)通路(II型，或非胰島素依賴糖尿病(NIDDM))。II型糖尿病是糖尿病的最常見(jiàn)類型，工業(yè)化國(guó)家約5％個(gè)體受累。在II型糖尿病中，主要的胰島素反應(yīng)組織，如肝臟、骨骼肌和脂肪組織表現(xiàn)出胰島素抵抗特性(Haring和Mehnert，《糖尿病》(Diabetologia)，36176-182(1993)；Haring等，《糖尿病》(Diabetologia)，37Suppl.2S149-54(1994))。II型糖尿病的胰島素抵抗過(guò)程復(fù)雜、涉及多種因素，但看似由胰島素受體到葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)系統(tǒng)以及糖原合成酶的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)受損引起。胰島素受體激酶的損害已經(jīng)包含于此信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)缺陷發(fā)病機(jī)理之中。胰島素抵抗也見(jiàn)于許多非糖尿病個(gè)體，并且可能是疾病發(fā)展過(guò)程中的潛在發(fā)病因子(Reaven，《糖尿病》(Diabetes)，371595-1607(1998))。
人類已獲得有關(guān)胰島素受體自身的大量信息。此受體包含4個(gè)獨(dú)立的亞單位，每個(gè)亞單位由兩條相同的α鏈和兩條相同的β鏈組成。β亞單位有酪氨酸激酶活性和ATP結(jié)合位點(diǎn)。酪氨酸激酶胞漿結(jié)構(gòu)域關(guān)鍵酪氨酸殘基的自身磷酸化可激活胰島素受體。自身磷酸化對(duì)其后的胰島素受體的活性是必需的，它可以穩(wěn)定活化的受體激酶，從而觸發(fā)胞內(nèi)信使蛋白參與的磷酸化級(jí)聯(lián)放大效應(yīng)。
目前，對(duì)于II型糖尿病的藥理學(xué)治療方法尚有限。雖然胰島素現(xiàn)今用于治療II型糖尿病，其弊端在于必須注射使用。數(shù)種胰島素的肽類類似物也有應(yīng)用，但是其中沒(méi)有一種分子量小于5000道爾頓的藥物能夠維持活性。一些與胰島素受體β亞單位結(jié)合位點(diǎn)相作用的肽類物質(zhì)可以增強(qiáng)胰島素與其受體的作用活性(Kole等，《生物化學(xué)雜志》(J.Biol.Chem.)，27131619-31626(1996))；Kasuya等，《生化生理研究通訊》(Biochem.Biophys.Res.Commun.)，200777-83(1994)。Kohanski以及其他研究者曾經(jīng)報(bào)導(dǎo)了各種各樣能夠產(chǎn)生基礎(chǔ)效應(yīng)的多聚陽(yáng)離子藥物，但是對(duì)胰島素作用的增強(qiáng)效應(yīng)甚微(Kohanski，《生物化學(xué)雜志》(J.Biol.Chem.)，26420984-91(1989)；Xu等，《生物化學(xué)》(Biochemistry)，3011811-19(1991))。這些肽類物質(zhì)明顯作用于胰島素受體的胞漿激酶結(jié)構(gòu)域。
此外，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)特定的非肽類成分能夠增強(qiáng)肽類激素的激動(dòng)特性，但是其中沒(méi)有一種物質(zhì)可以直接作用于胰島素受體激酶。例如，噻唑烷二酮(Thiazolidinediones)(如匹格列酮)增強(qiáng)脂肪細(xì)胞分化的活性已有報(bào)導(dǎo)(Kletzien等，《分子藥理學(xué)》(Mol.Pharmacol.)，41393(1992))。噻唑烷二酮代表了一類增強(qiáng)靶組織對(duì)胰島素反應(yīng)的潛在的抗糖尿病化合物(Kobayashi，《糖尿病》(Diabetes)，41476(1992))。噻唑烷二酮是過(guò)氧化物酶增值因子激活的受體γ(PPARγ)的開(kāi)關(guān)，即參與脂肪細(xì)胞分化的核轉(zhuǎn)錄因子(Kliewer等，《生物化學(xué)雜志》(J.Biol.Chem.)，27012953(1995))，并且對(duì)胰島素受體激酶無(wú)直接效應(yīng)。目前使用的其它抗糖尿病藥物包括胰島素促分泌劑(如磺酰脲類)和抑制肝臟葡萄糖釋放的雙胍類(如二甲雙胍)。迄今為止，還未發(fā)現(xiàn)能夠模擬胰島素對(duì)其受體的激活作用的非肽類物質(zhì)。
文獻(xiàn)中可查到雙萘脲，大多被描述成蘇拉明的多聚磺酸衍生物以及偶氮染料。各種此類多聚陽(yáng)離子磺酸衍生物已被確證為大量疾病指征的強(qiáng)有力的治療藥物。于1917年報(bào)導(dǎo)的蘇拉明是廣泛研究的多聚磺酸(Dressel，《化學(xué)雜志》(J.Chem.Ed.)，38585(1961)；Dressel，《化學(xué)雜志》(J.Chem.Ed.)，39320(1962))，作為驅(qū)蟲藥和抗原蟲藥具有治療作用。較近時(shí)期的研究發(fā)現(xiàn)蘇拉明能夠作為抑制劑，抑制特定鳥(niǎo)類和鼠科動(dòng)物體內(nèi)的逆轉(zhuǎn)錄酶(De Clercq，《癌癥通訊》(Cancer Letter)，89(1979)；Mitsuya等，《科學(xué)》(Science)，226172(1984)；Gagliardi等，《癌癥化療藥理學(xué)》(Cancer Chemother.Pharmacol.)，41117(1988)；Doukas等，《癌癥研究》(Cancer Res.)，555161(1995)；Mohan等，《抗病毒化學(xué)》(Antiviral Chem.)，2215(1991))。除蘇拉明外，還存在許多與蘇拉明有關(guān)的化合物。已報(bào)導(dǎo)的大多數(shù)蘇拉明類似物在每一個(gè)芳基上具有多個(gè)磺酸功能特性。最近研究提示多聚陽(yáng)離子蘇拉明類似物具有抗血管生成、抗增值活性以及抗病毒活性(Gagliardi等，《癌癥化療藥理學(xué)》(Cancer Chemother Pharmacol.)，412117(1988)；Doukas等，《癌癥研究》(Cancer Res.)，555161(1995)；Mohan等，《抗病毒化學(xué)》(Antiviral Chem.)，2215(1991))。在專利文獻(xiàn)中大量雙萘磺酸被描述為輔助抑制劑(US 4132730，US 4129591，US 4120891，US4102917，US 4051176)。此外，許多偶氮染料專利文獻(xiàn)述及(DE19521598，US 3716368，DE 2216592，F(xiàn)R 1578556)多聚磺酰萘偶氮化合物。曾有一篇文獻(xiàn)報(bào)導(dǎo)雙萘脲2-磺胺3-偶氮化合物為液體標(biāo)記(recording liguid)(JP 58191772)。但是，沒(méi)有一種蘇拉明類似物或偶氮染料在高血糖癥或糖尿病的治療方面有效。
發(fā)明簡(jiǎn)述本發(fā)明旨在能夠增強(qiáng)哺乳動(dòng)物葡萄糖攝取的雙萘脲，其藥用組合物以及采用此化合物增強(qiáng)葡萄糖攝取的方法。
在第一方面，本發(fā)明提供了分子式I的化合物 分子式I其中R1和R2是A環(huán)上的取代基團(tuán)，獨(dú)立地為-SO2NR72、-C(O)NR72、-NR7SO2R7、-NR7C(O)R7、-SO2OR7、-C(O)OR7、-OSO2R7、或-OC(O)R7；R3和R4獨(dú)立地為氫或低級(jí)烷基，或者R3和R4共同組成-(CH2)2-、-(CH2)3-、或-(CH2)4-、或R3和R4可能是一個(gè)電子對(duì)；R5和R6可獨(dú)立地為氫原子、烷基、烷基取代物、氰基、鹵素、硝基、-SR8、-C(O)R8、-SO2OR8、-OSO2R8、-SO2NR82、-NR8SO2R8、-OC(O)R8、-C(O)OR8、-C(O)NR82、-NR8C(O)R8、-OR8、或-NR82；每一個(gè)R7和R8分別是氫原子、烷基、取代烷基、芳基、取代芳基、芳香(低級(jí))烷基、取代芳香(低級(jí))烷基、芳香雜環(huán)(低級(jí))烷基、取代芳香雜環(huán)(低級(jí))烷基、雜環(huán)基、取代雜環(huán)基、芳香雜環(huán)基、取代芳香雜環(huán)基；每一個(gè)Y獨(dú)立地為不通過(guò)偶氮或酰胺連接到萘環(huán)上的非干擾取代物；每一個(gè)x獨(dú)立地為0、1或2，以及連接子連接c表示的碳原子和d表示的碳原子；并且為如下結(jié)構(gòu) 其中K可以為O、S或者NR*，以及R*可以是H、氰基、或低級(jí)烷基；或者 其中R*為氫、或者低級(jí)烷基；或者 其中R*可以是氫、氰基、或低級(jí)烷基； 其中R*可以是氰基或低級(jí)烷基；并且，如果其中R1和R2均是-SO2OH，則(i)Y不能為-SO2OH；(ii)R5和R6均不能為-SO2OR8、或者-OSO2R8；并且(iii)R5和R6不能同時(shí)選自含有羥基和氫的基團(tuán)組，除非至少一個(gè)(Y)x是(Y′)x，其中x′是1或2，Y′為鹵素，并且此藥用鹽物質(zhì)自身為單一異構(gòu)體或多個(gè)異構(gòu)體的混合。這些混合物可能作為葡萄糖攝取促效劑，并在高血糖癥及糖尿病的治療中具有一定作用。
在第二方面，本發(fā)明提供了包含(a)藥用載體和(b)活性成分，即第一方面中的化合物。
上述組合物有助于刺激哺乳動(dòng)物細(xì)胞攝取葡萄糖或者治療哺乳動(dòng)物高血糖癥、I型糖尿病、II型糖尿病一類的疾病。
在第三方面，本發(fā)明提供了一種刺激胰島素受體激酶活性的方法，包括第一方面所述化合物與胰島素受體或其激酶接觸，其中化合物的劑量足以刺激胰島素受體激酶的活性。
在第四方面，本發(fā)明提供了一種激活胰島素受體的方法，包括用第一方面中的化合物與胰島素受體或激酶部分的接觸，其中化合物的劑量足以獲得胰島素受體激活效應(yīng)。
在第五方面，本發(fā)明提供了一種刺激具有胰島素受體的細(xì)胞對(duì)葡萄糖的攝取，涉及在胰島素存在或不存在情況下，用第一方面的化合物與細(xì)胞接觸，其中化合物的劑量足以刺激細(xì)胞對(duì)葡萄糖的攝取?？赏ㄟ^(guò)給予哺乳動(dòng)物本發(fā)明化合物得以實(shí)現(xiàn)葡萄糖攝取進(jìn)入細(xì)胞。
在其它方面，本發(fā)明提供了多種治療哺乳動(dòng)物高血糖癥、I型糖尿病、II型糖尿病的方法，例如，在人體使用具有療效劑量的第方面的化合物、或包含該化合物的混合物。
附圖簡(jiǎn)要描述

圖1顯示了在胰島素存在或缺失情況下，化合物15對(duì)IRS-1和胰島素受體磷酸化的作用。
圖2顯示了用各種濃度的化合物13和15作用于胰島素受體時(shí)，其磷酸化水平的增加。
圖3顯示了在胰島素缺失情況下，化合物13和15作用于細(xì)胞，其葡萄糖攝取量的增加。
圖4顯示了在渥曼青霉素存在或缺失情況下，化合物13和15的葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)效應(yīng)。
圖5顯示了在渥曼青霉素和細(xì)胞松弛素B存在和缺失情況下，化合物13和15的葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)效應(yīng)。
圖6顯示了在化合物15作用下細(xì)胞的GLUT4免疫熒光反應(yīng)。
圖7顯示了化合物15對(duì)胰島素受體和表皮生長(zhǎng)因子(EGF)受體的效應(yīng)。
圖8顯示了在db/db小鼠體內(nèi)，化合物15與胰島素作用降低血漿葡萄糖的效應(yīng)。
圖9顯示了在db/db小鼠體內(nèi)，化合物15單獨(dú)作用降低血漿葡萄糖的效應(yīng)。
圖10顯示了化合物15對(duì)ob/ob小鼠特定血液成分的作用效應(yīng)。
圖11顯示了化合物15對(duì)STZ/HFD大鼠血漿葡萄糖水平的作用效應(yīng)。
圖12顯示了口服化合物15后，肌肉組織中胰島素受體磷酸化的量。
圖13顯示了給予db/db小鼠3天單一劑量后，化合物15的效應(yīng)。
圖14顯示了給予STZ/HFD大鼠3天單一劑量后，化合物15的效應(yīng)。
發(fā)明詳述(a)通用參量的定義“烷基”，如在“烷基”、或“烷氧基”中的結(jié)構(gòu)，意指一至二十個(gè)碳的單價(jià)碳?xì)浠衔锊糠郑蔀橹辨?、支鏈、或環(huán)狀的?！暗图?jí)烷基”，如在“低級(jí)烷基”、“鹵化低級(jí)烷基”、“芳香(低級(jí))烷基”，或“芳香雜環(huán)(低級(jí))烷基”出現(xiàn)的部分，意指一至六個(gè)碳的烷基。名詞“低級(jí)烷基”包括以下部分甲基、乙基、異丙基、丙基、丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、己基、環(huán)戊基、環(huán)丙甲基、或環(huán)己基。優(yōu)選一至四個(gè)碳的烷基。用于此處的“低級(jí)烷基”還包括帶有一個(gè)烯鍵的部分，如烯丙基。
“取代烷基”或“取代低級(jí)烷基”各自對(duì)應(yīng)一種典型的單取代、雙取代、或三取代的烷基和低級(jí)烷基，它們的取代物部分包括芳香基、R′取代芳香基、雜環(huán)芳香基、硝基、氰基、鹵素、-OR、-SR、-COR、-OC(O)R、-C(O)OR、-NR2、-SO2OR、-OSO2R、-SO2NR2、-NRSO2R、-CONR、或-NRCOR；其中每個(gè)R可以獨(dú)立地為氫、低級(jí)烷基、R′取代低級(jí)烷基、芳香基、R′取代芳香基、雜環(huán)芳香基、芳香雜環(huán)(低級(jí))烷基、R′取代芳香(低級(jí))烷基、或芳香(低級(jí))烷基；而每個(gè)R′獨(dú)立地為羥基、鹵素、低級(jí)烷氧基、氰基、硫代物、硝基、低級(jí)烷基、鹵化低級(jí)烷基、或氨基。由一到三個(gè)下述基團(tuán)所取代的取代烷基或取代低級(jí)烷基為特別優(yōu)選形式，該取代基選自氰基、鹵素、低級(jí)烷氧基、硫代物、硝基、氨基、或羥基。
術(shù)語(yǔ)“鹵化低級(jí)烷基”意指被一到三個(gè)鹵素基團(tuán)取代的低級(jí)烷基，進(jìn)一步舉例如-CF3、-CH2CF3、和CH2CCl3等基團(tuán)。
“芳香基”，如在“氧化芳香基”和“芳香(低級(jí))烷基”出現(xiàn)的部分，意指一種由芳香碳?xì)浠衔镅苌鴣?lái)的基團(tuán)，含有6-20個(gè)成環(huán)碳原子，并含有一個(gè)單環(huán)(如苯基)；或兩個(gè)或兩個(gè)以上的稠環(huán)，優(yōu)選2-3個(gè)稠環(huán)(如萘基)；或兩個(gè)和兩個(gè)以上的芳香環(huán)，優(yōu)選2到3個(gè)芳香環(huán)；這些環(huán)之間以單鍵相連(如聯(lián)苯基)。芳香基的碳數(shù)較好在6到16之間，優(yōu)選6到14個(gè)碳。
“取代芳基”代表一種單取代、雙取代、或三取代的芳香基團(tuán)，其取代基可為羥基、三唑基、四唑基、羥基異惡唑基、膦酸或膦酸酯基、烷基、R′取代烷基、鹵素、三氟甲基、氰基、硝基、-SR、-OR、-COR、-OCOR、-SO2OR、-OSO2R、-SO2NR2、-NRSO2R、-COOR、-NR2、-CONR2、或-NRCOR；其中每個(gè)R可獨(dú)立地為氫、低級(jí)烷基、R′取代低級(jí)烷基、芳香基、R′取代芳香基、雜環(huán)芳香基、芳香雜環(huán)(低級(jí))烷基、芳香(低級(jí))烷基、或R′取代芳香(低級(jí))烷基；而每個(gè)R′可獨(dú)立獨(dú)立地為羥基、鹵素、低級(jí)烷氧基、氰基、硫代物、硝基、低級(jí)烷基、鹵化低級(jí)烷基、氨基、或-COOR(其中R定義如前述)。取代芳香基上的取代基團(tuán)特別優(yōu)選為以下幾種低級(jí)烷基、鹵素低級(jí)烷基、鹵素、氰基、硫代物、硝基、氨基、低級(jí)烷氧基、或羥基。SO2OR、-SO2NR2、-COOR以及-CONR2等基團(tuán)，(其中的R為氫或低級(jí)烷基)也是本發(fā)明中化合物中取代芳香基的特別優(yōu)選的取代基團(tuán)。
“雜環(huán)芳香基”，如在“雜環(huán)芳香基”和“芳香雜環(huán)(低級(jí))烷基”中出現(xiàn)的部分，意指一種由芳香性碳?xì)浠衔镅苌鴣?lái)的基團(tuán)，基團(tuán)含有5到14個(gè)成環(huán)碳原子，其中1到5個(gè)原子為雜環(huán)原子，獨(dú)立地選自N、O或S，并包含單環(huán)、稠雜環(huán)、稠碳環(huán)、和雜環(huán)芳香環(huán)結(jié)構(gòu)(如噻吩基、呋喃基、吡咯基、嘧啶基、異噁唑基、噁唑基、三唑基、四唑基、吲哚基、異苯呋喃基、嘌呤基、異喹啉基、蝶啶基、咪唑基、吡啶基、吡唑基、吡嗪、喹啉基等)。
“取代雜環(huán)芳香基”可以有一到三個(gè)下述的取代基，例如烷基、R′取代烷基、鹵素、氰基、硝基、-SR、-OR、-COR、-OOCR、-SO2OR、-OSO2R、-SO2NR2、-NRSO2R、-COOR、-NR2、-CONR2、或-NRCOR；其中每個(gè)R可獨(dú)立地為氫、低級(jí)烷基、R′取代低級(jí)烷基、芳香基、R′取代芳香基、雜環(huán)芳香基、芳香雜環(huán)(低級(jí))烷基、芳香(低級(jí))烷基、或R′取代芳香(低級(jí))烷基；而每個(gè)R′可單獨(dú)地為羥基、鹵素、低級(jí)烷氧基、氰基、硫代物、硝基、低級(jí)烷基、鹵化低級(jí)烷基、或氨基。另外，雜環(huán)芳香基上的兩個(gè)靠近的取代基團(tuán)有可能任意地形成一種低級(jí)烯基二氧化物(alkylenedioxy)。取代雜環(huán)芳香基上優(yōu)選的取代基團(tuán)有羥基、鹵素、低級(jí)烷氧基、氰基、硫代物、硝基、低級(jí)烷基、鹵化低級(jí)烷基、或氨基。
“雜環(huán)基”意指一種由脂環(huán)烴衍生而來(lái)的基團(tuán)，含有5到14個(gè)成環(huán)碳原子，其中1到5個(gè)原子為雜環(huán)原子，獨(dú)立地為N、O或S。優(yōu)選為單環(huán)結(jié)構(gòu)(如四氫呋喃基、四氫吡喃基、哌啶基等)。
“取代雜環(huán)基”可以有一到三個(gè)取代基，優(yōu)選的取代基如烷基、R′取代烷基、鹵素、氰基、硝基、-SR、-OR、-COR、-OOCR、-SO2OR、-OSO2R、-SO2NR2、-NRSO2R、-COOR、-NR2、-CONR2、或-NRCOR，其中每個(gè)R可獨(dú)立地為氫、低級(jí)烷基、R′取代烷基、芳香基、R′取代芳香基、雜環(huán)芳香基、芳香雜環(huán)(低級(jí))烷基、芳香(低級(jí))烷基、或R′取代芳香(低級(jí))烷基，并且每個(gè)R′可獨(dú)立地為羥基、鹵素、低級(jí)烷氧基、氰基、硫代物、硝基、低級(jí)烷基、鹵化低級(jí)烷基、或氨基。取代雜環(huán)基上優(yōu)選的取代基團(tuán)有低級(jí)烷基、鹵化低級(jí)烷基、鹵素、氰基、硫代物、氨基、低級(jí)烷氧基、或羥基。
“芳香(低級(jí))烷基”指一種被芳香基(定義如前述)取代的低級(jí)烷基基團(tuán)?！叭〈枷?低級(jí))烷基”指一種在其芳香基部分或烷基部分，或兩者同時(shí)，有1到3個(gè)取代基的芳香(低級(jí))烷基基團(tuán)。
“芳香雜環(huán)(低級(jí))烷基”意指一種被雜環(huán)芳香基(定義如前述)取代的低級(jí)烷基基團(tuán)。“取代芳香雜環(huán)(低級(jí))烷基”意指一種在其雜環(huán)芳香基部分或烷基部分，或兩者同時(shí)，有1到3個(gè)取代基的芳香雜環(huán)(低級(jí))烷基基團(tuán)。
“低級(jí)烷氧基”意指一種-OR型基團(tuán)，其中R為一種低級(jí)烷基。
“鹵素”意指溴、氟、或氯。
“非干擾性取代基”意指某種特定的取代基，當(dāng)它與一化合物結(jié)合時(shí)并不明顯地降低、或者說(shuō)抑制此物質(zhì)特有的、有價(jià)值的生物活性，比如化合物刺激胰島素受體激酶活性并激活此受體的作用，或促進(jìn)胰島素受體的表達(dá)而提高細(xì)胞對(duì)葡萄糖攝取的作用。非干擾性取代基對(duì)母體化合物的生物活性的妨害作用不能超過(guò)30％?？赡艿脑挘浞梁ψ饔脩?yīng)在10％以內(nèi)。最好的情況是，非干擾性取代基在可檢測(cè)范圍內(nèi)對(duì)母體活性不起任何妨害作用。不過(guò)，并不要求非干擾性取代基對(duì)母體的作用一定為中性。例如它可有選擇性的提高母體某種特定的生物學(xué)活性。合適的非干擾性取代基包括(但并不限于)取代烷基、腈基、鹵素、硝基、-SR、-OR、和-NR2，其中每個(gè)R獨(dú)立地為氫、低級(jí)烷基、或取代低級(jí)烷基。
“重氮鍵”為-N＝N-基團(tuán)。一個(gè)典型的“酰胺鍵”為基團(tuán) 其中R可為烷基、芳香基、或氫。
“藥用鹽”可為任意一種由無(wú)機(jī)酸或有機(jī)酸、或堿衍生而來(lái)的鹽。術(shù)語(yǔ)“藥用陰離子”指此類酸中的陰離子。述語(yǔ)“藥用陽(yáng)離子”指加入一種堿后形成的陽(yáng)離子。這些鹽和/或陰離子或陽(yáng)離子經(jīng)挑選而避免帶有不良的生物學(xué)或其他方面的活性。
“立體異構(gòu)體”是具有相同的共價(jià)鍵順序但在原子空間相對(duì)位置上有差異的化合物。
“內(nèi)鹽”或“兩性鹽”可以在氨基酸基團(tuán)里從羧基轉(zhuǎn)移一個(gè)質(zhì)子到氮原子的孤對(duì)電子上而制得。
“治療有效劑量”指為治療某種疾病，對(duì)一種哺乳動(dòng)物進(jìn)行給藥后能足夠有效治療該疾病的劑量。
對(duì)某種哺乳動(dòng)物疾病的“治療”或“治療方案”包括(1)對(duì)還未出現(xiàn)疾病癥狀的，但可能對(duì)疾病易感的動(dòng)物體預(yù)防疾病的發(fā)生，(2)抑制疾病，即控制病情發(fā)展，或(3)緩解病情，即使病癥減輕。
關(guān)于胰島素受體的描述中的“其激酶部分”，指胰島素受體的細(xì)胞質(zhì)酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域。(b)命名法分子式I類化合物的編號(hào)和命名，參考如下分子式Ia。 分子式Ia
在化合物分子式Ia中，取代基R1是在萘環(huán)上的7位，而R2位于萘環(huán)上的2位。舉例說(shuō)明，如果R1為SO2OH，R2為SO2OH，R3為H，R4為H，R5為H，R6為H，而K為O，氨基-羰胺基)的一端與取代基為R5的萘環(huán)上的C2位連接，一端與取代基為R6的萘環(huán)上的C7位連接，那么此化合物的名稱為7-{[(7-磺基-2-萘基)氨基]羰胺基}萘-2-磺酸(c)有關(guān)的組成和藥用組合物一方面，本發(fā)明的組分包括分子式I的化合物及其藥用鹽，為單獨(dú)的立體異構(gòu)體或立體異構(gòu)體的混合物 分子式I其中，R1和R2是A環(huán)的取代基團(tuán)，可獨(dú)立地為-SO2NR72、C(O)NR72、-NR7SO2R7、-NR7C(O)R7、-SO2OR7、-C(O)OR7、-OSO2R7、或-OC(O)R7，R3和R4可獨(dú)立地為氫、或低級(jí)烷基、或者R3和R4都是-(CH2)2-，-(CH2)3-、或-(CH2)4-，或者R3或R4可以是電子對(duì)，R5和R6可獨(dú)立地為氫、烷基、取代烷基、氰基、鹵素、硝基、-SR8、-C(O)R8、-SO2OR8、-OSO2R8、-SO2NR82、-NR8SO2R8、-OC(O)R8、-C(O)OR8、-C(O)NR82、-NR8C(O)R8、-OR8、或-NR82，
每個(gè)R7和R8可獨(dú)立地為氫、烷基、取代烷基、芳基、取代芳基、芳基(低級(jí))烷基、取代芳基(低級(jí))烷基、雜環(huán)芳香(低級(jí))烷基、取代雜環(huán)芳香(低級(jí))烷基、芳香雜環(huán)、或取代芳香雜環(huán)，每個(gè)Y可以獨(dú)立地為非干擾性的取代基團(tuán)，它不通過(guò)偶氮或酰胺鍵與萘環(huán)連接，每個(gè)x可以分別是0、1、2，并且連接子連接一個(gè)c碳和一個(gè)d碳，其結(jié)構(gòu)式為 其中K可以分別是O、S、或NR*，以及R*是氫、氰基、或低級(jí)烷基；或 其中R*是氫、或低級(jí)烷基；或
其中的R*是氫、氰基、或低級(jí)烷基； 其中R*是氰基、或低級(jí)烷基；而且，如果R1和R2都是-SO2OH，那么(i)Y不能是-SO2OH；(ii)R5和R6均不是-SO2OR8或-OSO2R8；并且(iii)R5和R6不能同時(shí)選自含有氫、和羥基的基團(tuán)，除非至少一個(gè)(Y)x為(Y′)x′，其中x′是1或2，Y′是鹵素；分子式I的化合物優(yōu)選包括分子式II的化合物 分子式II其中連接子連接一個(gè)c碳和一個(gè)d碳，以及其藥用鹽，可以是單獨(dú)的立體異構(gòu)體或是立體異構(gòu)體的混合物。
分子式II的化合物優(yōu)選包括分子式IIa的化合物 分子式IIa或其藥用鹽，它們是單獨(dú)的立體異構(gòu)體或是立體異構(gòu)體的混合物，分子式IIa中R1到R6，Y和x與前面分子式II定義一樣。
較好地每個(gè)非干擾性的取代基Y是烷基、取代烷基、氰基、鹵素、硝基、-SR9、-OR9、或-NR92，其中的每個(gè)R9可以獨(dú)立地為氫、低級(jí)烷基、或取代低級(jí)烷基。優(yōu)選的是每個(gè)Y是低級(jí)烷基、鹵素低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基、氰基、鹵素、硫基、硝基、氨基、或羥基。
在分子式I、分子式Ia、分子式II、分子式IIa的化合物中，每個(gè)x優(yōu)選為0或1，特別優(yōu)選實(shí)施例中x為0。
本發(fā)明一個(gè)比較好的實(shí)施例中，R1和R2是-SO2OR10，-C(O)OR10、-SO2NR11R10、-C(O)NR11R10、-OSO2R10、-OC(O)R10、-NR11SO2R10、或-NR11C(O)R10；每個(gè)R11可以獨(dú)立地為氫、或低級(jí)烷基；而每個(gè)R10則可以獨(dú)立地為烷基、取代烷基、芳基、取代芳基、芳基低級(jí)烷基、取代芳基低級(jí)烷基、雜環(huán)芳香基低級(jí)烷基、取代雜環(huán)芳香基低級(jí)烷基、雜環(huán)、取代雜環(huán)、雜環(huán)芳香基、或取代雜環(huán)芳香基。R1和R2優(yōu)選可獨(dú)立地為-SO2NR11R10、-C(O)NR11R10、-NR11SO2R10、或-NR11C(O)R10。一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施例中R11為氫。例如，一個(gè)優(yōu)選的化合物中，R1和R2獨(dú)立地為-SO2NHR10或-NHSO2R10。
在另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施例中，R1是-SO2OR10、-C(O)OR10、-SO2NR11R10、-C(O)NR11R10、-OSO2R10、-OC(O)R10、-NR11SO2R10、或-NR11C(O)R10，并且R2是-SO2OR11、或-C(O)OR11，其中R10和R11與前一段中定義的一樣。R1優(yōu)選為-SO2NR11R10、-C(O)NR11R10、-NR11SO2R10、或-NR11C(O)R10。在一個(gè)更合適的實(shí)施例中，R11是氫。例如，一個(gè)特別優(yōu)選的化合物中，R1是-SO2NHR10、或-NHSO2R10。一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施例中，R2是-C(O)NR112、或-C(O)OR11。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施例中，R2是-SO2NR112、或-SO2OR11，比如-SO2OH。
本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施例中，每個(gè)R10可以獨(dú)立地是取代烷基、取代芳基、取代芳基低級(jí)烷基、取代雜環(huán)芳香基低級(jí)烷基、取代雜環(huán)、或取代雜環(huán)芳香基；至少R10上的一個(gè)取代基團(tuán)是R12；每個(gè)R12可以獨(dú)立地是-SO2OR13、-C(O)OR13、-SO2NR132、-C(O)NR132、羥基、三唑基、四唑基、羥基異噁唑基、膦酸殘基、或膦酸酯殘基；并且R13可以獨(dú)立地是氫、或低級(jí)烷基。此實(shí)施例中R10優(yōu)選是取代芳基、或取代雜環(huán)芳香基。R10優(yōu)選是取代苯基。本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選的化合物中，每個(gè)R12可獨(dú)立地為-C(O)OR13、-C(O)NR132、-SO2OR13、羥基、三唑基、四唑基、羥基異惡唑基、磷酸殘、或磷酸酯殘基。尤其，當(dāng)R12分別是-C(O)OR13，-SO2OR13，羥基，三唑基，四唑基，羥基異唑基，磷酸或磷酸酯基是更可取。例如，每個(gè)R12可以是-C(O)OH、-SO2OR13、或-C(O)OCH3。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施例中，R12可獨(dú)立地為-SO2OR13或-SO2NR132。R12是優(yōu)選是SO2OR13。尤其R12是-SO2OH更好。優(yōu)選的是，當(dāng)R12是-C(O)OR13或-SO2OR13、R12將位于芳基，芳香雜環(huán)基，或雜環(huán)上的取代基(氯或羥基)的鄰位。
本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施例中，每個(gè)R10可獨(dú)立地為芳基、雜環(huán)芳香基、芳基低級(jí)烷基、或雜環(huán)芳香基低級(jí)烷基。在此實(shí)施例中，最優(yōu)選的R10是苯基、吡啶基、吡嗪基、或嘧啶基。
本發(fā)明的另一個(gè)優(yōu)選實(shí)施例中，每個(gè)R1和R2獨(dú)立地是-SO2NR72、-C(O)NR72、-SO2OR7、或-C(O)OR7；并且每個(gè)R7可以獨(dú)立地是氫、或低級(jí)烷基。最優(yōu)選的R1和R2獨(dú)立地是-C(O)OR7或-C(O)NR72。另一個(gè)優(yōu)選的分子式I組成中，R1和R2獨(dú)立地是-SO2OR7或-SO2NR72。例如，R1和R2可以都是-SO2OH。優(yōu)選地，如果R1和R2都是-SO2OH，R5和R6不都是羥基或氫。
本發(fā)明的化合物中R3和R4優(yōu)選是氫。
優(yōu)選地，R5和R6獨(dú)立地是氫、烷基、取代烷基、氰基、鹵素、硝基、-OR8、-NR82、-SR8，其中每個(gè)R8可以獨(dú)立地是氫、低級(jí)烷基、取代低級(jí)烷基、芳基、取代芳基、芳基低級(jí)烷基、取代芳基低級(jí)烷基、雜環(huán)芳香基、或雜環(huán)芳香基低級(jí)烷基。最適宜的R5和R6是氫、羥基、鹵素、氰基、低級(jí)烷基、鹵素低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基、硝基、氨基、硫基。本發(fā)明許多優(yōu)選化合物中，R5和R6是氫或羥基。
分子式I和分子式II的組成優(yōu)選是對(duì)稱的。
本發(fā)明化合物包括由不止一個(gè)適宜的取代基。如果一化合物含有比第二種組份更多的取代基團(tuán)，那么第一種更可取。比如，分子式I中含有R1到R4和R10到R12多種基本的取代基，它比只有R1到R3取代基的化合物更合適。
例如，本發(fā)明優(yōu)選的化合物包括分子式III的化合物 分子式III
其中，R5和R6選自氫和羥基；并且每個(gè)R10可以獨(dú)立地是取代芳基、或取代雜環(huán)芳香基；至少一個(gè)R10上的取代基是R12；每個(gè)R12獨(dú)立地-SO2OR13、-C(O)OR13、-SO2NR132、-C(O)NR132、三唑基、四唑基、異噁唑基、膦酸殘基、或磷酸酯殘基；并且每個(gè)R13獨(dú)立地為氫或低級(jí)烷基，和藥用鹽，以及其單獨(dú)立體異構(gòu)體或立體異構(gòu)體的混合物。優(yōu)選地，當(dāng)R12是-CO(O)R13、或-SO2OR13，R12將位于芳基、芳香雜環(huán)基、或雜環(huán)上的取代基(如氯或羥基)的鄰位。
本發(fā)明的化合物中的其他實(shí)施例包括一些分子式IV的化合物， 分子式IV其中的R5和R6是選自氫和羥基；R10是取代芳基或取代異芳香基；R10取代基中至少有一個(gè)是R12；每一個(gè)R12獨(dú)立地是-SO2OR13、-CO(O)R13、-SO2NR132、-C(O)NR132、三唑基、四唑基、異噁唑基、膦酸殘基、或膦酸酯殘基；每一個(gè)R13獨(dú)立地為羥基、或低級(jí)烷基，及其藥用鹽，如其單獨(dú)立體異構(gòu)體、或立體異構(gòu)體的混合物。優(yōu)選的是，當(dāng)R12是-CO(O)R13、或-SO2OR13，R12將位于芳基、芳香雜環(huán)基、或雜環(huán)上的取代基(氯或羥基)的鄰位。
本發(fā)明的優(yōu)選的化合物非限定地包括如下的化合物4-羥基-7{[(5-羥基-7-磺基(2-萘基))氨基]-羰胺基}萘基-2-磺酸二鈉鹽；
3-{[(4-羥基-7-{[(5-羥基-7-{[(3-磺基苯基)氨基]磺?；鶀(2-萘基))氨基]羰胺基}-2-萘基)磺?；鵠氨基}苯磺酸；2-[6-({[5-(羧甲氧基)-7-磺基(2-萘基)]氨基}羰胺基)-3-磺基萘氧基]乙酸；3-溴-7-{[(6-溴-5-羥基-7-磺基(2-萘基))氨基]羰胺基}-4-羥基萘-2-磺酸；4-[(2-磺基苯基)甲氧基]-7-[({7-磺基-5-[(2-磺基苯基)甲氧基](2-萘基)}氨基)羰胺基]萘-2-磺酸；4-羥基-7-{[(5-甲氧基-7-磺基(2-萘基))氨基]羰胺基}萘-2磺酸；4-甲氧基-7-{[(5-甲氧基-7-磺基(2-萘基))氨基]羰胺基}萘-2-磺酸；7-[({5-[(乙氧基羰基)甲氧基]-7-磺基(2-萘基)}氨基)羰胺基]-4-羥基萘-2-磺酸；4-[(乙氧羧基)甲氧基]-7-[({5-[(乙氧羧基)甲氧基]-7-磺基(2-萘基)}氨基)羰胺基]萘-2-磺酸；4-(3-磺酰丙氧基)-7-磺基-5-(3-磺酰丙氧基)(2-萘基)]氨基}羰胺基)萘-2-磺酸；4-羥基-7-({[7-磺基-5-(3-磺酰丙氧基)(2-萘)]氨基}羰胺基)萘-2-磺酸；N-(5-羥基-7-氨磺?；?2-萘基))[(5-羥基-7-氨磺?；?2-萘基))氨基]羧酰胺；
4-羥基-7-{[(5-羥基-7-{[(3-磺基苯基)氨基]磺基}(2-萘基))氨基]羰胺基}萘-2-磺基；甲基3-({[4-羥基-7-({[5-羥基-7-({[3-(甲氧羰基)苯]氨基}磺?；?(2-萘基)]氨基}羰胺基)-2-萘基]磺?；鶀氨基)苯甲酸鹽(酯)；3-{[(7-{[(7-{[(3-c羧苯基)氨基]磺基}-5-羥基(2-萘基))氨基]羰胺基}-4-羥基-2-萘基)磺酰基]氨基}苯甲酸；4-{[(7-{[(7-{[(3-羧苯基)氨基]磺基}-5-羥基(2-萘基))氨基]羰胺基}-4-羥基-2-萘基)磺?；鵠氨基}苯甲酸；4-{[(4-羥基-7-{[N-(5-羥基-7-磺基(2-萘基))氨基甲酰]氨基}-2-萘基)磺酰基]氨基}苯甲酸；甲基4-({[4-羥基-7-({N-[5-羥基-7-({[4-(甲氧羰基)苯基]氨基}磺?；?(2-萘基)]氨基甲酰}氨基)-2-萘基]磺?；鶀氨基)苯甲酸鹽(酯)；4-羥基-7-({[5-羥基-7-({[4-(甲氧羰基)苯基]氨基}磺?；?(2-萘基)]氨基}羰胺基)萘-2-磺酸；7-{[(7-磺基-2-萘基)氨基]羰胺基}萘-2-磺酸；7-{[(7-{[(3-磺基苯基)氨基]磺?；鶀-2-萘基)氨基]羰胺基}萘-2-磺酸；3-{[(7-{[N-(7-{[(3-磺基苯基)氨基]磺?；鶀-2-萘基)氨基甲酰]氨基}-2萘基)磺酰基]氨基}苯磺酸；
甲基3-({[7-({[7-({[3-(甲氧羰基)苯基]氨基}磺酰基)-2-萘基]氨基}羰胺基)-2-萘基]磺?；鶀氨基)苯甲酸酯(鹽)；3-{[(7-{[N-(7-{[(3-羧基苯)氨基]磺?；鶀-2-萘基)氨基甲酰]氨基}-2-萘基)磺?；鵠氨基}苯甲酸；N-{7-[(氨基苯)磺?；鵠(2-萘基)}({7-[(氨基苯)磺酰基](2-萘基)}氨基)酰胺；N-(7-{[(3-磺胺基苯)氨基]磺?；鶀(2-萘基))[(7-{[(3-磺氨基苯)氨基]磺?；鶀(2-萘基))氨基]酰胺；N-{7-[(3-氨基吡啶)磺酰基](2-萘基)}({7-[(3-氨基吡啶)磺?；鵠(2-萘基)}氨基)酰胺；N-{7-[(吡嗪-2-氨基)磺?；鵠(2-萘基)}({7-[(吡嗪-2-氨基)磺?；鵠(2-萘基)}氨基)酰胺；N-{7-[(嘧啶-2-氨基)磺酰基](2-萘基)}({7-[(嘧啶-2-氨基)磺?；鵠(2-萘基)}氨基)酰胺；4-甲苯基3-[({7-[(N-{7-[({3-[(4-甲苯基)羥基磺?；鵠苯基}氨基)磺?；鵠-2-萘基}氨基甲酰)氨基]-2-萘基}磺酰基)氨基]苯磺酸酯(或鹽)；4-甲苯基4-[({7-[({7-[({4-[(4-甲苯基)羥基磺?；鵠苯基}氨基)磺?；鵠-2-萘基}氨基)羰胺基]-2-萘基}磺?；?氨基]苯磺酸酯(或鹽)；7-[({7-[(嘧啶-2-氨基)磺?；鵠-2-萘基}氨基)羰胺基]萘-2-磺酸；
4-{[(7-{[N-(7-{[(4-磺基苯基)氨基]磺?；鶀-2-萘基)氨基甲酰]氨基}-2-萘基)磺?；鵠氨基}苯磺酸；甲基4-({[7-({N-[7-({[4-(甲氧羰基)苯基]氨基}磺酰基)-2-萘基]氨基甲酰}氨基)-2-萘基]磺?；鶀氨基)苯磺酸酯(或鹽)；4-{[(7-{[N-(7-{[(4-羧基苯)氨基]磺?；鶀-2-萘基)氨基甲酰]氨基}-2-萘基)磺?；鵠氨基}苯甲酸；甲基(2S)-2-({[7-({N-[7-({[(1 S)-2-(4-羥基苯)-1-(甲氧羧基)乙基]氨基}磺?；?(2-萘基)]氨基甲酰}氨基)-3-(4-羥基苯)丙酸酯；和(2S)-2-({[7-({N-[7-({[(1 S)-1-羧基-2-(4-羥基苯)-1-(甲氧羧基)乙基]氨基}磺?；?(2-萘基)]氨基甲酰}氨基)-3-(4-羥基苯)丙酸；和它們的藥用鹽，可以是單獨(dú)立體異構(gòu)體或立體異構(gòu)體的混合物；這些化合物的合成和說(shuō)明在下述實(shí)施例1到10中闡述。
本發(fā)明的某些化合物可能包含一個(gè)或多個(gè)手性中心。在此情況下，所有的立體異構(gòu)體也屬于本發(fā)明范疇。本發(fā)明所述及的化合物包括單獨(dú)的立體異構(gòu)體，也包括這些立體異構(gòu)體的混合物。
本發(fā)明所述及的化合物進(jìn)一步包括上述化合物的藥用鹽形式。這些藥用鹽適用于本發(fā)明的所有方法以及藥用組合物。
藥用鹽包括酸性質(zhì)子與有機(jī)或無(wú)機(jī)堿反應(yīng)所形成的鹽。典型的例子是，母體化合物經(jīng)含有適當(dāng)陽(yáng)離子的過(guò)量的堿性試劑處理，如氫氧化物、碳酸鹽(酯)、或醇鹽、酚鹽，其中陽(yáng)離子如Na+、K+、Ca2+、和NH4+，為藥用鹽中陽(yáng)離子的代表，Na+尤為有用。因此，藥用無(wú)機(jī)堿包括氫氧化鈣、氫氧化鉀、碳酸鈉和氫氧化鈉。采用有機(jī)堿諸如乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、N-甲基谷氨酸鹽、和氨丁三醇，也能制備此種鹽類。
如果本發(fā)明所述及的化合物包含一個(gè)堿性基團(tuán)，則加入酸有可能得到鹽?；衔锏乃嵝愿郊欲}在適宜溶劑中，以標(biāo)準(zhǔn)方法從母體化合物和過(guò)量酸制備得到，其中所用的酸如鹽酸、氫溴酸、硫酸(提供硫酸鹽和雙硫酸鹽)、硝酸、磷酸等，以及有機(jī)酸如乙酸、丙酸、乙二酸、丙酮酸、草酸、蘋果酸、丙二酸、琥珀酸、馬來(lái)酸、反丁烯二酸、酒石酸、檸檬酸、苯甲酸、苯乙烯酸、杏仁酸、甲磺酸、乙磺酸、水楊酸、對(duì)位-甲苯磺酸、己酸、庚酸、環(huán)戊丙酸、乳酸、o-(4-羥-苯唑)苯甲酸、1，2-乙二磺、2-羥乙磺酸、苯磺酸、對(duì)位-氯苯磺酸、2-萘磺酸、樟腦磺酸、4-甲基-雙環(huán)[2.2.2.]oct-2-ene-1-羧酸、葡萄庚酸、葡萄糖酸、4，4’-二亞甲基(3-羥基-2-萘基)酸、3-苯丙酸、三甲基乙酸、特丁基乙酸、十二烷基磺酸、葡萄糖醛酸、谷氨酸、3-羥-2-萘酸，硬脂酸、己二烯二酸等。
本發(fā)明的某些化合物形成內(nèi)鹽或兩性離子。
本發(fā)明包括所述及的所有化合物的藥用組合物。這些藥用組合物包括(i)本發(fā)明中的一種化合物作為活性成分和(ii)藥用載體。
本發(fā)明化合物的藥用組合物、或者其衍生物，可以制成胃腸外給藥的溶劑或凍干的粉劑。在使用之前加入適當(dāng)稀釋液或其它藥用載體可水化粉劑。液體配方通常是緩沖液、等滲水溶液。適當(dāng)稀釋液的實(shí)施例一般為等滲鹽溶液，溶于水或者緩沖鈉鹽或醋酸銨的5％右旋糖苷。此配方尤其適合于胃腸外給藥，但也可用于口服?？梢约尤胍欢ㄙx形劑，如多聚吡咯烷酮、凝膠、水解纖維素、阿拉伯樹(shù)膠、聚乙烯乙二醇、甘露醇、氯化鈉或檸檬酸鈉?；蛘甙b成膠囊、片劑，制備成乳劑或糖漿，以便于口服?？梢约尤胨幱霉腆w或液體載體，以加強(qiáng)或穩(wěn)定其藥用組合物，或者用于組合物的制備。液體載體包括糖漿、花生油、橄欖油、甘油、鹽、酒精、以及水。固體載體包括淀粉、乳糖、硫酸鈣、二水合物、石膏粉、硬脂酸鎂或硬脂酸、云母、果質(zhì)、阿拉伯樹(shù)膠、瓊脂或凝膠。載體可能還包括一持續(xù)釋放的物質(zhì)，如單獨(dú)甘油單硬脂或甘油雙硬脂，或其與石蠟的混合物。固體載體的量變化不一，但是多為約20mg-1g每劑量單位。制藥過(guò)程依據(jù)制藥的傳統(tǒng)技術(shù)，對(duì)于片劑其過(guò)程包括研磨、混合、顆?；枰獣r(shí)也可進(jìn)行壓縮處理，對(duì)于硬凝膠膠囊則包括研磨、混合、填充等過(guò)程。當(dāng)使用液體載體時(shí)，制備可能采用糖漿、西也劑、乳劑或者水性、或非水性懸浮液形式。這樣的液體配方可直接口服，或包裝成軟凝膠膠囊。就重量百分比而言，典型的藥學(xué)組成可包含0.1-95％的活性成分，優(yōu)選為1-80％。
一些適宜的藥用組合物的實(shí)施例見(jiàn)下述實(shí)施例25。
通常，本發(fā)明的藥用組合物將會(huì)包裝于貼有標(biāo)簽的容器中，其上標(biāo)有所述藥用組合物治療高血糖癥、I型糖尿病和II型糖尿病或其中任何疾病的聯(lián)合疾患的用法。所述化合物可作為預(yù)防性用藥在飯前服用，以控制II型糖尿病飯后一段時(shí)間過(guò)量升高的葡萄糖水平。此外，糖尿病病人服用所述化合物后，采用血糖監(jiān)測(cè)儀測(cè)定葡萄糖水平，發(fā)現(xiàn)可以將過(guò)量升高的血糖水平正?；?。最后要指出的是，已知對(duì)于I型糖尿病病人，機(jī)體只能利用及少量剩余循環(huán)胰島素來(lái)防止嚴(yán)重的脂解作用以及產(chǎn)生的酮癥。這些化合物可以作為預(yù)防用藥以拮抗I型糖尿病病人的酮癥，通過(guò)活化胰島素受體能夠緩解酮癥，并不是為了控制血糖，而是抑制有困難獲得胰島素的I型糖尿病病人體內(nèi)的嚴(yán)重脂解作用。(c)本發(fā)明所述化合物的服用方法本發(fā)明所述化合物能夠刺激胰島素受體的自身磷酸化(實(shí)施例11和12，見(jiàn)下文)。此外，有證據(jù)表明這些化合物可以增加胰島素導(dǎo)致葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)入培養(yǎng)纖維母細(xì)胞的能力(實(shí)施例13，見(jiàn)下文)。該化合物也被證實(shí)可以不依賴胰島素的方式降低db/db小鼠血漿葡萄糖水平(圖8和9，實(shí)施例17；圖11，實(shí)施例19)。
本發(fā)明所述化合物刺激胰島素受體自身磷酸化的能力，以及刺激細(xì)胞攝取葡萄糖的能力，在下述實(shí)施例11-12進(jìn)行闡述，提示其對(duì)于糖尿病病人治療及控制的有效性。盡管不希望受任何理論束縛，但普遍的理論認(rèn)為本發(fā)明化合物直接作用于胰島素受體的激酶功能，而且在胰島素結(jié)合位點(diǎn)并不需要與胰島素競(jìng)爭(zhēng)，也不通過(guò)與胰島素類似的方式激活受體。這樣，它們能夠激活激酶產(chǎn)生自身磷酸化，增強(qiáng)胰島素的效應(yīng)，在磷酸化外源性底物時(shí)激活受體的激酶功能，使得脂肪細(xì)胞和表達(dá)胰島素受體的細(xì)胞對(duì)葡萄糖的攝取普遍增加，以及降低糖尿病病人的血糖水平。從而，利用本發(fā)明化合物的活性，可以刺激胰島素受體激酶活性，增強(qiáng)胰島素對(duì)胰島素受體的激活作用，增強(qiáng)胰島素對(duì)細(xì)胞葡萄糖攝取的刺激，以及刺激糖尿病病人對(duì)葡萄糖的攝取。由此，本發(fā)明化合物對(duì)于哺乳動(dòng)物高血糖癥和糖尿病的治療有效。
本發(fā)明的另一個(gè)方面涉及刺激胰島素受體激酶活性的方法。此方法包括采用本發(fā)明的一種化合物與胰島素受體或激酶部分結(jié)合，化合物的劑量足以刺激胰島素受體的激酶活性。通過(guò)刺激此激酶活性，自身磷酸化和外源性底物的磷酸化都有所增強(qiáng)。對(duì)胰島素受體激酶活性的刺激可發(fā)生在在體及離體情況下。刺激胰島素受體激酶活性的可選方法進(jìn)一步也包括用胰島素作用于胰島素受體。
本發(fā)明化合物已被證明在胰島素受體水平具有刺激活性，降低血循環(huán)中葡萄糖水平，從而表現(xiàn)出潛在的糖尿病治療效應(yīng)。與之類似，其它對(duì)胰島素受體及血糖水平表現(xiàn)出相同效應(yīng)的化合物具有在糖尿病治療方面的應(yīng)用潛能。此專利所申請(qǐng)的化合物可以作為模型，用于研制開(kāi)發(fā)其它作用于糖尿病病人的胰島素受體并因物來(lái)發(fā)現(xiàn)新的胰島素受體由此降低血糖的新藥物。通過(guò)下述方法，可以利用這些化合拮抗劑/激活劑和降血糖治療的新藥物。該化合物可用于驗(yàn)證、優(yōu)化和標(biāo)準(zhǔn)化發(fā)現(xiàn)其它化合物所需的檢驗(yàn)。
1.激活/刺激胰島素受體激酶的胞漿激酶結(jié)構(gòu)域或者胰島素受體激酶；2.激活/刺激胰島素受體；3.刺激細(xì)胞和組織攝取葡萄糖；4.降低哺乳動(dòng)物血糖水平；5.降低人體血糖水平；6.抑制細(xì)胞和組織內(nèi)的脂解作用；7.抑制哺乳動(dòng)物體內(nèi)的脂解作用。
這些化合物可作為水準(zhǔn)基點(diǎn)，用于研制開(kāi)發(fā)在如下檢驗(yàn)中活性增加的化合物1.激活/刺激胰島素受體激酶的胞漿激酶結(jié)構(gòu)域或者胰島素受體激酶；2.激活/刺激胰島素受體；3.刺激細(xì)胞和組織攝取葡萄糖；4.降低哺乳動(dòng)物血糖水平；5.降低人體血糖水平；6.抑制細(xì)胞和組織內(nèi)的脂解作用；
7.抑制哺乳動(dòng)物體內(nèi)的脂解作用。
在待測(cè)化合物中，可以結(jié)合使用統(tǒng)計(jì)方法比較和/或匹配它們的結(jié)構(gòu)或化學(xué)特性，這些化合物可以用來(lái)研制開(kāi)發(fā)在如下生物鑒定中具有活性的化合物1.激活/刺激胰島素受體激酶的胞漿激酶結(jié)構(gòu)域或者胰島素受體激酶；2.激活/刺激胰島素受體；3.刺激細(xì)胞和組織攝取葡萄糖；4.降低哺乳動(dòng)物血糖水平；5.降低人體血糖水平；6.抑制細(xì)胞和組織內(nèi)的脂解作用；7.抑制哺乳動(dòng)物體內(nèi)的脂解作用。
可以結(jié)合使用比較和/或匹配結(jié)構(gòu)的統(tǒng)計(jì)方法模擬分子的相互作用，這些化合物可以用來(lái)研制開(kāi)發(fā)在如下生物化驗(yàn)中具有活性的化合物1.激活/刺激胰島素受體激酶的胞漿激酶結(jié)構(gòu)域或者胰島素受體激酶；2.激活/刺激胰島素受體；3.刺激細(xì)胞和組織攝取葡萄糖；4.降低哺乳動(dòng)物血糖水平；
5.降低人體血糖水平；6.抑制細(xì)胞和組織內(nèi)的脂解作用；7.抑制哺乳動(dòng)物體內(nèi)的脂解作用。
本專利的具有放射活性的化合物可用于診斷糖尿病，因?yàn)镮I型糖尿病病人體內(nèi)胰島素受體數(shù)目下降，甚至具有糖尿病發(fā)病前危險(xiǎn)因素(如X綜合癥)的病人也如此。將組織樣本暴露于這些放射活性的化合物后，進(jìn)行初步的組織活體檢查，可作為活組織檢查受體記數(shù)的一種量度指標(biāo)。因而低受體密度記數(shù)可用于診斷糖尿病或糖尿病發(fā)病前病變。
放射活性的化合物在新藥的研制開(kāi)發(fā)方面的應(yīng)用具有相當(dāng)長(zhǎng)的歷史。所有本專利所申請(qǐng)的化合物都具有易于進(jìn)行放射性標(biāo)記的潛能，并且可用于研制其它作用于胰島素受體、進(jìn)而降低糖尿病病人血糖水平的新藥。利用這些藥物研制開(kāi)發(fā)新的胰島素受體拮抗劑/激活劑以及降血糖治療新藥物的方法如下本專利所申請(qǐng)的放射活性化合物可用于其它化合物研發(fā)中的驗(yàn)證，優(yōu)化和標(biāo)準(zhǔn)化生物鑒定1.激活/刺激胰島素受體激酶的胞漿激酶結(jié)構(gòu)域或者胰島素受體激酶；2.激活/刺激胰島素受體；3.刺激細(xì)胞和組織攝取葡萄糖；4.降低哺乳動(dòng)物血糖水平；5.降低人體血糖水平；
6.抑制細(xì)胞和組織內(nèi)的脂解作用；7.抑制哺乳動(dòng)物體內(nèi)的脂解作用。
本發(fā)明所申請(qǐng)的放射活性化合物可作為水準(zhǔn)基點(diǎn)，用于研制開(kāi)發(fā)在如下化驗(yàn)中活性增加的化合物1.激活/刺激胰島素受體激酶的胞漿激酶結(jié)構(gòu)域或者胰島素受體激酶；2.激活/刺激胰島素受體；3.刺激細(xì)胞和組織攝取葡萄糖；4.降低哺乳動(dòng)物血糖水平；5.降低人體血糖水平；6.抑制細(xì)胞和組織內(nèi)的脂解作用；7.抑制哺乳動(dòng)物體內(nèi)的脂解作用。
在本發(fā)明的另一個(gè)方面，胰島素受體的激活由足量的本發(fā)明化合物與胰島素受體或其激酶部分結(jié)合而實(shí)現(xiàn)，其中化合物的劑量足以激活胰島素受體。靶向胰島素受體可能廣泛分布于哺乳動(dòng)物細(xì)胞表面。在這種情況下，給哺乳動(dòng)物施用此化合物或其藥用組合物可以實(shí)現(xiàn)與胰島素受體的結(jié)合。非必選地，此方法可進(jìn)一步包括用胰島素結(jié)合胰島素受體。
在另一個(gè)方面，本發(fā)明的化合物用于刺激表達(dá)胰島素受體的細(xì)胞攝取葡萄糖。此方法包括在胰島素存在或不存在情況下用本發(fā)明化合物與細(xì)胞結(jié)合，其中化合物的劑量足以刺激細(xì)胞攝取葡萄糖。靶向細(xì)胞可能廣泛分布于哺乳動(dòng)物體內(nèi)，那么給哺乳動(dòng)物施用此化合物或其藥用組合物可以實(shí)現(xiàn)與胰島素受體的結(jié)合。在刺激表達(dá)胰島素受體細(xì)胞攝取葡萄糖的方法的一個(gè)實(shí)施例中，細(xì)胞也可以與外源性胰島素結(jié)合。
本發(fā)明也嘗試了治療哺乳動(dòng)物高血糖癥的一種方法，其中人是更優(yōu)選的治療對(duì)象。此方法包括給哺乳動(dòng)物施用具療效劑量的本發(fā)明化合物或其藥用組合物?？晒┻x擇的是此方法進(jìn)一步包括給予哺乳動(dòng)物一種或多種治療高血糖癥的附加治療藥物。例如，其中一種方法可能包括給予哺乳動(dòng)物除本發(fā)明所述化合物外的外源性胰島素。此外，本發(fā)明化合物可能與非胰島素藥物或其它可供選擇的高血糖癥治療藥物聯(lián)合用藥，施用于哺乳動(dòng)物。哺乳動(dòng)物藥物聯(lián)合應(yīng)用的總劑量必須具有治療效應(yīng)，雖然單一藥物劑量單獨(dú)使用可能達(dá)不到最優(yōu)的治療目的。
使用胰島素的非常危險(xiǎn)的副作用是胰島素誘導(dǎo)的低血糖癥，能夠引起昏迷，可能致死。對(duì)于對(duì)胰島素表現(xiàn)出意外反應(yīng)或血糖水平高度易變的糖尿病病人此問(wèn)題則非常嚴(yán)重。對(duì)這些病人而言，該化合物以低于胰島素治療劑量的劑量聯(lián)合使用可將糖尿病病人過(guò)量使用胰島素并導(dǎo)致諸如昏迷和死亡的嚴(yán)重后果的可能性降至最小。這些化合物看來(lái)不能在胰島素存在或缺乏情況下誘發(fā)低血糖癥。它們可能增加胰島素的效力，但并不表現(xiàn)出真正的胰島素模仿效應(yīng)，如低血糖癥。因此，這些化合物是有效的胰島素安全劑。
在本發(fā)明的一個(gè)方面，該化合物用于哺乳動(dòng)物I型糖尿病的治療。此方法包括給予哺乳動(dòng)物療效劑量的本發(fā)明所述化合物或其藥用組合物。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施例中，選擇的哺乳動(dòng)物是人。此外，治療I型糖尿病的方法可進(jìn)一步包括采用一種或多種I型糖尿病的附加治療方法。例如，在治療I型糖尿病方法的一個(gè)實(shí)施例中，本發(fā)明一種化合物和胰島素可以共同施用于哺乳動(dòng)物。此外，與本發(fā)明化合物聯(lián)合應(yīng)用的I型糖尿病的附加治療藥物可能是一抗糖尿病制劑，不同于治療I型糖尿病的胰島素或其它可選藥物。同樣，哺乳動(dòng)物抗糖尿病藥物聯(lián)合應(yīng)用的總劑量必須具有治療效應(yīng)，雖然當(dāng)單獨(dú)給予患有I型糖尿病的哺乳動(dòng)物這些藥物時(shí)單一藥物劑量可能達(dá)不到最優(yōu)的治療目的。
在本發(fā)明的另一個(gè)方面，用本發(fā)明化合物治療哺乳動(dòng)物II型糖尿病。此方法包括給予哺乳動(dòng)物療效劑量的本發(fā)明化合物或其藥用組合物。首選對(duì)象仍然是人。
同樣，與本發(fā)明的其它治療方法類似，此方法可進(jìn)一步包括采用一種或多種治療II型糖尿病的附加治療方法，如給予哺乳動(dòng)物胰島素治療。胰島素的劑量采用與本發(fā)明所述化合物聯(lián)合應(yīng)用時(shí)的療效劑量。與本發(fā)明所述化合物聯(lián)合應(yīng)用時(shí)的胰島素療效劑量可能低于單獨(dú)應(yīng)用胰島素時(shí)的療效劑量。本發(fā)明所述的任何一種治療所用的胰島素可能分離自天然來(lái)源或?yàn)橹亟M產(chǎn)物。此外，在本發(fā)明所涉及的治療中，胰島素類似物可用來(lái)替代胰島素。
采用本發(fā)明化合物以聯(lián)合用藥方式治療II型糖尿病還可以包括聯(lián)合給予哺乳動(dòng)物本發(fā)明化合物和非胰島素、抗糖尿病藥物或其它治療II型糖尿病的藥物。例如，與本發(fā)明化合物聯(lián)合給予哺乳動(dòng)物的抗糖尿病藥物可以是噻唑烷二酮(thiazolidinedione)，如曲格列酮、磺脲。治療哺乳動(dòng)物II型糖尿病聯(lián)合用藥(本發(fā)明化合物外加胰島素和/或其它抗糖尿病藥物)的總劑量必須是療效劑量，雖然當(dāng)單獨(dú)給予患有II型糖尿病的哺乳動(dòng)物這些藥物時(shí)單一藥物劑量可能達(dá)不到最優(yōu)的治療目的。
因此，本發(fā)明化合物可增加需要此種治療病人體內(nèi)葡萄糖的攝取。治療方法包括胃腸外和口服給予有效劑量的所選本發(fā)明化合物，此化合物以分散于藥用載體中為最佳。活性成分的劑量單位通常選自0.01-1000mg/kg這一范圍，較好是0.01-100mg/kg，優(yōu)選的范圍是0.1-50mg/kg，但是本人員根據(jù)給藥途徑、年齡和病人情況很容易確定劑量單位。本發(fā)明化合物的最佳給藥劑量單位是1-10mg/kg。對(duì)于急性或慢性疾病上述劑量單位可以每日給藥1到10次。根據(jù)本發(fā)明的給藥方法，其化合物無(wú)嚴(yán)重毒副作用。
本發(fā)明化合物可以經(jīng)任何途徑給藥，只要適合于接受治療的病人及其疾病的性質(zhì)。其中給藥途徑包括注射給藥，如靜脈、腹膜、肌肉和皮下注射，經(jīng)黏膜或經(jīng)皮給藥，通過(guò)局部敷藥器、鼻腔噴霧、栓劑等方式給藥，或者口服給藥。藥物的劑型可為脂質(zhì)體形式、乳劑、通過(guò)黏膜或皮膚給藥的劑型。與上述每一種方法相適宜的藥物劑型可參閱制藥學(xué)書籍，如Remington’s Pharmaceutical Sciences最新版本，Mack Publishing Company，Easton，PA.
上述本發(fā)明化合物方法、如何使用、活性、給藥途徑以及藥用組合物方面，以K＝O的化合物為首選。(d)實(shí)施例所述實(shí)施例旨在闡明本發(fā)明。所有實(shí)施例的目的不在于限制本發(fā)明的應(yīng)用范圍，而是示例如何配制和使用本發(fā)明化合物。
分子式I所代表化合物可經(jīng)如下過(guò)程制備(i)下式所代表的化合物A 與分子式B 所代表的化合物分子間或分子內(nèi)縮合，或者將分子式A所代表的化合物加入到分子式B所代表的化合物中，其中一活化的雙功能試劑提供K＝C基團(tuán)，使得分子式A和B中的氨基處于保護(hù)狀態(tài)，這里K具有上述意義；其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、x和Y根據(jù)本發(fā)明簡(jiǎn)述部分的第一方面定義，X可以為R3或R4，WZ可以為S＝C＝或O＝C＝，或者W和Z可以為R3或R4；可在分子式A和分子式B之間形成一連接子；(ii)一個(gè)或多個(gè)取代基團(tuán)R1、R2、R5、和R6或Y的化學(xué)加工，其中所述取代基團(tuán)被轉(zhuǎn)化為另一取代基團(tuán)；(iii)將R1、R2、R5和R6或Y引入萘的一個(gè)或兩個(gè)環(huán)；(iv)去保護(hù)作用；(v)確立一連接子以將所述連接子轉(zhuǎn)化為另一個(gè)連接子(vi)鹽的形成或內(nèi)轉(zhuǎn)化；(vii)酯的水解；(viii)釋放權(quán)利要求1中化合物的一個(gè)自由酸或堿；或者(ix)立體異構(gòu)體的分離或合成。
細(xì)節(jié)詳見(jiàn)下表，其列出了從步驟(i)到(viii)的主要反應(yīng)。反應(yīng)方案 反應(yīng)類型I A環(huán)引入取代基團(tuán)A環(huán)上取代基團(tuán)的確立(溴化、氨基化合物形成、水解)縮合以形成連接子II縮合以形成連接子III A環(huán)上取代基團(tuán)的確立(烷化、水解)鹽的內(nèi)轉(zhuǎn)化(NH4+→Na+)IVA環(huán)上取代基團(tuán)的確立(烷化)V 縮合以形成連接子A環(huán)上取代基團(tuán)的確立(水解、酸化)VI分子內(nèi)縮合以形成連接子氨基的去保護(hù)A環(huán)上取代基團(tuán)的確立(水解、酸化)VII 縮合以形成連接子A環(huán)上取代基團(tuán)的確立(水解、酸化)VIII 加成以形成連接子(-NH2+SCN-)連接子的確立A環(huán)上取代基團(tuán)的確立(水解、酸化) IX加成以形成連接子(-NH2+SCN-)連接子的確立(烷化、氨解作用)A環(huán)上取代基團(tuán)的確立(水解、酸化)X 縮合以形成連接子在縮合反應(yīng)中，兩個(gè)或更多分子結(jié)合后可釋放諸如水之類的簡(jiǎn)單物質(zhì)。在溫度為50-125℃時(shí)加入任何劑量的用于有機(jī)合成的開(kāi)始反應(yīng)物，如二溴乙烷、二碘丙烷，縮合反應(yīng)即可發(fā)生。如果分子式A和B中R3和R4均為-(CH2)2-、-(CH2)3-、或-(CH2)4-，則縮合為分子內(nèi)縮合(見(jiàn)反應(yīng)步驟VI)。
一個(gè)或多個(gè)取代基團(tuán)R1、R2、R5和R6或Y可通過(guò)一種取代基團(tuán)轉(zhuǎn)化為另一種取代基團(tuán)的方式進(jìn)行化學(xué)加工，此過(guò)程可經(jīng)水解、鹽形成、酸化、烷化、酯化、氧化或還原實(shí)現(xiàn)。在水解作用中，酯或氨基化合物通過(guò)與水的作用而分離。水解過(guò)程可被酸或堿催化，并且氨基的水解較酯的水解通常需要更嚴(yán)格的條件(例如，更高濃度的硫酸，在1-100℃反應(yīng)1-5小時(shí))。水解反應(yīng)也可以在鹽酸水溶液中進(jìn)行，溫度為100-150℃，可能耗時(shí)達(dá)18小時(shí)。
在鹽形成的反應(yīng)中，加入堿性試劑后自由酸被轉(zhuǎn)化為鹽，其中堿性試劑如氫氧化鈉水溶液或三乙醇胺，它們能用堿所含的一個(gè)或多個(gè)陽(yáng)離子置換出酸所含的所有或部分氫離子?；衔镛D(zhuǎn)化為其相應(yīng)的鹽，可用一適當(dāng)酸處理而得到，如鹽酸，其中酸的劑量由化學(xué)計(jì)量學(xué)得到。具代表性的是，自由堿溶于極性有機(jī)溶劑中，如甲醇或乙醇，并將酸加入甲醇或乙醇中，溫度維持在0-50℃。相應(yīng)的鹽在形成的同時(shí)沉淀或可用極性更弱的溶劑萃取出來(lái)。酸化反應(yīng)中，化合物轉(zhuǎn)化為酸。
烷化反應(yīng)中，化合物中引入烷基或其烷基被取代。此反應(yīng)在一適宜溶劑中進(jìn)行，如乙腈、DMF、THF，溫度為1-160℃，25℃是典型的回流溫度，并再需1-18小時(shí)。最后，酯化反應(yīng)生成至少一種酯類產(chǎn)物。簡(jiǎn)而言之，該化合物與鏈烷醇、硫醇、或氨、單烷基或二烷基胺、或者雜環(huán)氨基鏈烷醇反應(yīng)，其中這些物質(zhì)從1.0-5.0摩爾當(dāng)量，優(yōu)選2.0摩爾當(dāng)量。此反應(yīng)可在溶于有機(jī)溶劑的1.0-1.5摩爾當(dāng)量的三元有機(jī)堿存在下進(jìn)行，優(yōu)選1.25摩爾當(dāng)量，其中有機(jī)溶劑如二氧雜環(huán)己烷、四氫呋喃、或優(yōu)選二氯甲烷，有機(jī)堿如4-二甲氨基吡啶或更合適的三乙胺。此反應(yīng)在-10-50℃下進(jìn)行1-24小時(shí)，最好是室溫下進(jìn)行，時(shí)間為4小時(shí)。
分子式I所代表的某些化合物可通過(guò)加入酸制備得到。而且，分子式I所代表的化合物可由修飾K而得到(其中K具有上文中的意義)，如對(duì)K進(jìn)行烷化作用，隨后進(jìn)行氨基取代，例如氨基取代離散基團(tuán)，如S-甲基基團(tuán)。
在上述情況中，可以引入保護(hù)基團(tuán)并最后去除。適于氨基、羥基、羧基的保護(hù)基團(tuán)可參閱Greene等所著之書《有機(jī)合成中的保護(hù)基團(tuán)》(Protective Groups in Organic Synthesis)，第二版，紐約JohnWiley &Sons 1991出版。正如Larock在《綜合有機(jī)轉(zhuǎn)化》(Comprehensive Organic Transformations)(紐約VCH Publishers1989)中所述，采用大量不同的試劑可以活化羧酸。實(shí)施例1根據(jù)反應(yīng)方案I和反應(yīng)方案II可制備化合物3、4、8-16和19-93。 反應(yīng)方案I7-{[(7-磺基-2-萘)氨基]羰胺基}萘-2-磺酸二鈉鹽(化合物3)。向5.25g(0.021mol)懸浮于80mL水中的7-氨基-萘-2-磺酸加入6.5mL、濃度為10N的NaOH(0.065mol)水溶液，加入前用水稀釋至30mL，同時(shí)分次加入溶于30mL THF的三光氣(triphosgene)溶液，其中含三光氣3.20g(0.011mol)，并調(diào)節(jié)pH值在8以上。TLC(乙酸乙酯∶異丙烷∶水比例為6∶2∶1)指示反應(yīng)完全后，用HCl水溶液調(diào)節(jié)pH值降至1，并用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)方式去除揮發(fā)性物質(zhì)。用真空過(guò)濾器收集固體產(chǎn)物，并經(jīng)水沖洗。最終產(chǎn)出3.14g化合物3。
4-羥-7-{[(5-羥-7-磺基(2-萘)氨基)羰胺基]萘-2-磺酸二鈉鹽(化合物4)。向溶于45mL、濃度為1N的NaOH水溶液的10.77g(0.045mol)7-氨基-4-羥基萘-2-磺酸和50mL水中加入3.70g(0.045mol)的醋酸鈉。此溶液的pH值高于9。在盛有冰水的桶中冷卻反應(yīng)溫度至低于5℃。然后分三部分向反應(yīng)物中加入溶于15mLTHF中的2.23g(0.045mol)三光氣。此時(shí)反應(yīng)物的pH值降至4-5，滴入1N的NaOH水溶液重新調(diào)節(jié)pH值至7-8。TCL(乙酸乙酯∶異丙烷∶水為6∶2∶1)指示反應(yīng)進(jìn)行不完全。另分次加入溶于10mLTHF中的2.20g(0.045mol)三光氣，并用1N的NaOH水溶液調(diào)節(jié)pH值高于7。當(dāng)TLC指示反應(yīng)完全后，用HCl水溶液調(diào)節(jié)pH值降至1，并用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)方式去除揮發(fā)性物質(zhì)。用真空過(guò)濾器收集固體產(chǎn)物，最終產(chǎn)出10.85g化合物4。
4-甲苯基3-氨苯磺酸酯(化合物5)。向50g(0.463mol)4-甲基酚(pcresol)和溶于250mL氯仿中的37mL(0.458mol)吡啶中加入50g(0.226mol)3-硝基苯磺酰氯。此反應(yīng)在室溫下即可進(jìn)行。2小時(shí)后，TLC測(cè)定反應(yīng)是否完全，若完全則用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)方式去除揮發(fā)性物質(zhì)，所得剩余物質(zhì)用400mL 0.5M的碳酸氫鈉處理。收集不溶產(chǎn)物并用碳酸氫鈉(2次，每次200mL)和水沖洗(2次，每次300mL)。再依次用甲醇(200mL)和水(200mL)處理所得固體。用真空過(guò)濾器收集此固體產(chǎn)物，并用水沖洗。然后用溶于250mL濃HCl中的170g(0.897mol)氯化亞錫(II)處理所得固體。此反應(yīng)可以在室溫下進(jìn)行，需40小時(shí)。TLC指示反應(yīng)未完全，因此加熱反應(yīng)至50℃，進(jìn)行27小時(shí)。用真空過(guò)濾器收集此固體沉淀，并用6N的HCl沖洗。用乙酸乙酯和水萃取此固體。然后用鹽水沖洗乙酸乙酯層、硫酸鎂干燥、過(guò)濾，并用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)方式去除揮發(fā)性物質(zhì)，最終產(chǎn)出42.5g化合物5，為固態(tài)油。
N-[7-(磺酰氯)(2-萘)]{[7-(磺酰氯)(2-萘)]氨基}酰胺(化合物6)。向2.35g(4.86mol)化合物3中加入116mL環(huán)丁砜(sulfolane)、25mL乙腈、31mL氯氧化磷和1mL二甲基乙酰胺。此反應(yīng)在室溫下進(jìn)行72小時(shí)，產(chǎn)生接近澄清的溶液。將反應(yīng)物傾倒于1.5L的冰上，隨后將燒瓶置于冰浴中。待所有冰塊融化后，用真空過(guò)濾器收集固體產(chǎn)物，并經(jīng)水沖洗。在高度真空中干燥所得固體24小時(shí)。最終產(chǎn)出2.56g化合物6。
7-{[(7-(磺酰氯)-5-羥(2-萘))氨基]羰胺基}-4-羥萘-2-磺酰氯(化合物7)。向懸浮于8mL氯氧化磷的500mg(0.912mmol)化合物4中加入25mL 1∶1(v∶v)的環(huán)丁砜∶乙腈，和0.5mL二甲基乙酰胺。反應(yīng)混合物可以在室溫下進(jìn)行反應(yīng)，需16小時(shí)。此反應(yīng)物變?yōu)槌吻宓娜芤?，并將其傾倒于500mL冰上，將冰-溶液混合物置于冰浴中。待溫度升至室溫后，用真空過(guò)濾器收集所得固體，并經(jīng)水沖洗。在高度真空中干燥固體產(chǎn)物24小時(shí)，最終產(chǎn)出412g化合物7。
7-[({7-[({3-[(4-甲苯基)羥基磺?；?oxysulfnyl)]苯基}氨基)磺酰基]-2-萘基}氨基)-羰胺基]萘基-2-磺酸(化合物8)和4-甲苯基3-[({7-[(N-{7-[({3-[(4-甲苯基)羥基磺?；鵠苯基}氨基)磺?；鵠-2-萘基}氨基甲酰)氨基]-2-萘基}磺?；?氨基]苯磺酸酯(化合物9)。向溶于40mL吡啶的250mg(0.95mmol)4-甲苯3-氨苯磺酸酯(化合物5)溶液中加入溶于5mL THF中的化合物6溶液，其中含250mg(0.49mmol)化合物6。此反應(yīng)在室溫下進(jìn)行3小時(shí)，然后用乙酸乙酯和1N HCl進(jìn)行萃取。萃取結(jié)束后，依次經(jīng)硫酸鎂干燥乙酸乙酯層、過(guò)濾、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)方式去除揮發(fā)性物質(zhì)。所得產(chǎn)物經(jīng)反相(RP)HPLC(C18，30×250mm柱)純化，其中所用緩沖液為三氟乙酸(TFA)緩沖體系(緩沖液A5％乙腈，95％水，0.05％TFA；緩沖液B95％乙腈，5％水，0.05％TFA；35mL/min，0-100％緩沖液B，進(jìn)行45鐘)。收集先洗脫出來(lái)的液體部分并凍干，得到9mg化合物8。洗脫出來(lái)的液體收集并凍干，得到51mg化合物9。
4-羥基-7-{[(5-羥基-7-{[(3-[4-甲苯基]羥基磺?；?苯基]氨基}磺酰基)(2-萘基)氨基]羰胺基}萘基-2-磺酸(化合物10)和4-甲苯基3-[({4-羥基-7-{[(N-{5-羥基-7-{[(3-[4-甲苯基]羥基磺?；?苯基]氨基}磺?；鶀(2-萘基)氨基甲酰)氨基]-2-萘基}磺酰基}氨基)苯磺酸酯(化合物11)。向溶于40mL吡啶的250mg(0.95mmol)4-甲苯3-氨苯磺酸酯(化合物5)溶液中加入溶于5mL THF中的化合物7溶液，其中含265mg(0.49mmol)化合物7。此反應(yīng)在室溫下進(jìn)行3小時(shí)，然后用乙酸乙酯和1N HCl進(jìn)行萃取。萃取結(jié)束后，依次經(jīng)硫酸鎂干燥乙酸乙酯層、過(guò)濾、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)方式去除揮發(fā)性物質(zhì)。所得產(chǎn)物經(jīng)反相HPLC(C18，30×250mm柱)純化，其中所用緩沖液為三氟乙酸(TFA)緩沖體系(緩沖液A5％乙腈，95％水，0.05％TFA；緩沖液B95％乙腈，5％水，0.05％TFA；35mL/min，0-100％緩沖液B，進(jìn)行60分鐘)。收集先洗脫出來(lái)的液體部分并凍干，得到15mg化合物10。收集后洗脫出來(lái)的液體部分并凍干，得到65mg化合物11。
7-{[(7-{[(3-磺基苯基)氨基]磺酰基}-2-萘基)氨基]羰胺基}萘基-2-磺酸二鈉鹽(化合物12)向8mg(0.011mmol)化合物8中加入5N NaOH 2mL。此反應(yīng)在室溫下進(jìn)行6小時(shí)。然后用6N HCl進(jìn)行酸化，所得溶液加入到一小型反相(C18)固相萃取柱中。依次用H2O、50∶50(v∶v)的CH3CN∶H2O流洗此柱，洗脫得到5mg化合物12。
3-{[(7-{[N-(7-{[(3-磺基苯基)氨基]磺?；鶀-2-萘基)氨基甲酰]-氨基}-2-萘基)]磺?；鶀氨基}苯磺酸二鈉鹽(化合物13)向35mg(0.036mmol)化合物9中加入5N NaOH 2mL。此反應(yīng)在室溫下進(jìn)行6小時(shí)。然后用6N HCl進(jìn)行酸化，所得溶液加入到一小型反相(C18)固相萃取柱中。依次用H2O、50∶50(v∶v)的CH3CN∶H2O流洗此柱，洗脫得到26mg化合物13。
4-羥基-7-{[(5-羥基-7-{[(3-磺基苯基)氨基]磺基}(2-萘基))氨基]羰胺基}萘-2-磺酸(化合物14)此化合物可由化合物10、根據(jù)化合物12的制備過(guò)程而得到。
3-{[(4-羥基-7-{[N-(5-羥基-7-{[(3-磺基苯基)氨基]磺?；鶀(2-萘基))-氨基甲酰]氨基}-2-萘)磺?；鵠氨基}苯磺酸(化合物15)此化合物可由化合物11、根據(jù)化合物12的制備過(guò)程而得到。
3-溴-7-{[(6-溴-5-羥基-7-磺基(2-萘基))氨基]羰胺基}-4-羥基萘-2-磺酸二鈉鹽(化合物16)將123mg(0.22mmol)化合物4加入到1mL水和2mL二氧雜環(huán)己烷(dioxane)中配成溶液，再向此溶液中加入300μL、濃度為1M的溴的四氯化碳溶液。1小時(shí)后，另加入200μL上述溴的四氯化碳溶液。再經(jīng)1小時(shí)后，再次加入150μL上述溴的四氯化碳溶液。反應(yīng)30分鐘后，將反應(yīng)物倒入100mL THF中，產(chǎn)生棕色沉淀，用真空過(guò)濾器收集沉淀。最后經(jīng)硅膠柱色譜法(乙酸乙酯∶異丙醇∶水為5∶2∶1)提純，得到17mg化合物16。實(shí)施例2在反應(yīng)方案II中描述了可供選擇的另一種合成本發(fā)明化合物的方法。此方法適用于目的產(chǎn)物的大量合成，下面以化合物15的合成為例加以闡明。 反應(yīng)方案II6-(乙酰氨基)-3-(磺酰氯)萘乙酸(化合物17)。向50g(0.209mmol)化合物2中加入100mL醋酸酐和100mL吡啶，在室溫下反應(yīng)16小時(shí)。用真空過(guò)濾器收集固體沉淀，在高度真空干燥作用下可得到83g產(chǎn)物。將此固體投入260ml氯氧化磷中形成懸浮液，反應(yīng)在室溫進(jìn)行16小時(shí)。然后將所得的深色溶液傾倒于3L冰塊上。待所有的冰塊融化后(大約3小時(shí)后)，用真空過(guò)濾器收集固體物質(zhì)，并用水沖洗。真空干燥后得到50g化合物17。
3-{[(7-氨基-4-羥基-2-萘)磺?；鵠氨基}苯磺酸鈉鹽(化合物18)。向溶于200mL THF的25g(0.095mol)化合物5中加入8.1mL吡啶，然后依次加入36.3g(0.106mol)化合物17、200mLTHF。室溫下反應(yīng)16小時(shí)后，除去揮發(fā)性物質(zhì)，剩余物質(zhì)用乙酸乙酯和1NHCl進(jìn)行分離。乙酸乙酯層經(jīng)鹽水沖洗、硫酸鎂干燥、過(guò)濾、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)方式去除揮發(fā)性物質(zhì)后，將所得固體溶于220mL、濃度為5N的NaOH溶液和30mL二氧雜環(huán)己烷中。80℃加熱此溶液5小時(shí)，隨后用HCl調(diào)節(jié)溶液pH值降至1。用真空過(guò)濾器收集固體物質(zhì)并將其溶于200mL水中，再加入濃度為5N的NaOH 20mL。再加熱此溶液至渾濁，并在此溫度過(guò)濾得到澄清的溶液。稀釋所得溶液至1.5升，用6N的HCl調(diào)節(jié)pH值至1。此時(shí)出現(xiàn)固體沉淀。將懸浮液置于冰箱中過(guò)夜，以達(dá)冷卻目的。最后，用真空過(guò)濾器收集固體物質(zhì)并干燥，得到21g化合物18。
3-{[(4-羥基-7-{[N-(5-羥基-7-{[(3-磺基苯基)氨基]磺?；鶀(2-萘基))-氨基甲酰]氨基}-2-萘)磺酰基]氨基}苯磺酸(化合物15)向17.7g(0.045mol)化合物18中加入250mL醋酸緩沖液(1MNaOAC/HOAc，pH4.6)和50mL THF，從而形成暗褐色的溶液。在3小時(shí)10分鐘內(nèi)向此溶液中滴入含4.4g(15mmol)三光氣的THF溶液40mL。HPLC指示反應(yīng)完全。用濃HCl(15mL)酸化此反應(yīng)物，然后用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)方式去除所有揮發(fā)性物質(zhì)，所得粘性物質(zhì)依次從乙腈、乙腈/庚烷以及庚烷分離。將所得固體溶于140mL水中，加熱后加入250mL鹽溶液，此時(shí)形成固體沉淀。玻璃瓶置于4℃，15小時(shí)后用真空過(guò)濾器收集固體物質(zhì)。用少量水∶鹽冰溶液沖洗固體物質(zhì)，其中水∶鹽為3∶1。高度真空干燥后得到19.2g化合物15。
以下所列(表1)的化合物可根據(jù)與反應(yīng)方案I和II相同的通用步驟制備得到，其詳細(xì)過(guò)程見(jiàn)化合物3-18的合成過(guò)程。代替化合物5用于化合物19-91合成過(guò)程的各種不同物質(zhì)分子的來(lái)源有二購(gòu)買自商品提供商，或根據(jù)技術(shù)人員均熟悉的標(biāo)準(zhǔn)方法制備得到。表1中含有酸基的化合物以自由酸形式列出。
表1
接續(xù)上頁(yè)
接續(xù)上頁(yè)
接續(xù)上頁(yè)
接續(xù)上頁(yè)
接續(xù)上頁(yè)
接續(xù)上頁(yè) 實(shí)施例3化合物94-102根據(jù)反應(yīng)方案III所述的步驟合成。 反應(yīng)方案III7-[({5-[(乙氧羰基)甲氧基]-7-磺基(2-萘基)}氨基)羰胺基]-4-羥基萘-2-磺酸二銨鹽(化合物94)和4-[(乙氧羧基)甲氧基]-7-[({5-[(乙氧羧基)甲氧基]-7-磺基(2-萘基)}氨基)羰胺基]萘-2-磺酸二銨鹽(化合物95)。向懸浮于50mL乙醇中的275mg(0.5mmol)化合物4中加入0.2M的乙醇鈉的乙醇溶液2.5mL，然后在加入56μL(0.5mmol)溴乙酸乙酯。此混合物在室溫下反應(yīng)2小時(shí)后，過(guò)濾除去固體物質(zhì)，并從濾液中除去揮發(fā)性物質(zhì)，從而得到粗制品。所得粗制品經(jīng)反相HPLC(C18，20×250mm柱)純化，其中所用緩沖液為乙酸銨(NH4OAc)緩沖體系(緩沖液A5％乙腈，95％水，50mM NH4OAc；緩沖液B70％乙腈，30％水，15mMNH4OAc；15mL/分鐘，0-100％緩沖液B，進(jìn)行30分鐘)。收集先洗脫出的液體部分并凍干，得到60mg化合物94。收集后洗脫出的液體部分并凍干，得到32mg化合物95。
2-(6{[N-(5-羥基-7-磺基(2-萘基))氨基甲酰]氨基}-3-磺基萘氧基)乙酸二鈉鹽(化合物96)。向25mg(0.04mmol)化合物94加入5N NaOH 1mL，室溫下攪拌18小時(shí)。用HCl水溶液調(diào)節(jié)pH值至1，用真空過(guò)濾器收集所得固體物質(zhì)，得到16mg化合物96。
2-(6{[N-[5-(羧基甲氧基)-7-磺基(2-萘基)]氨基甲酰]氨基}-3-磺基萘氧基}乙酸二鈉鹽(化合物97)。采用與化合物94相同的過(guò)程處理化合物95，得到11mg化合物97。
以下所列(表2)的化合物可根據(jù)與反應(yīng)方案III相同的通用步驟制備得到，其詳細(xì)過(guò)程見(jiàn)化合物94-97的合成過(guò)程。代替溴乙酸乙酯用于化合物98-102合成過(guò)程的各種不同物質(zhì)分子的來(lái)源有二購(gòu)買自商品提供商，或根據(jù)技術(shù)人員均熟悉的標(biāo)準(zhǔn)方法制備得到。表2中所有化合物均以自由酸形式列出。
表2 實(shí)施例4化合物103-105根據(jù)反應(yīng)方案IV所述的步驟合成。 反應(yīng)方案IV3-{甲基[(7-{[(7-{[甲基-(3-磺基苯基)氨基]磺酰基}-(2-萘基)氨基)羰胺基]-(2-萘基)磺?；鶀氨基}苯磺酸二鉀鹽(化合物103)。向59mg(0.071mmol)化合物13加入2mL DMF。再加入38mg碳酸鉀。經(jīng)攪拌的懸浮液在油浴中加熱，溫度為70℃。然后，加入36μL碘化甲烷。加熱此反應(yīng)方案3小時(shí)并用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)方式除去易揮發(fā)物質(zhì)。將所得固體物質(zhì)溶于水中配成溶液，加入到C18固相萃取柱中。用9倍柱體積的水流洗此柱。用80％乙腈洗脫，除去揮發(fā)性物質(zhì)后得到55mg化合物103。
化合物104和105(表3)可根據(jù)與上述合成化合物103相同的通用步驟制備得到，不同之處在于在化合物104和105合成過(guò)程中溴化烯丙烷代替碘化甲烷，化合物48代替化合物13參加反應(yīng)。表3中含有酸基團(tuán)的化合物以自由酸形式列出。
表3 實(shí)施例5化合物112-114和116根據(jù)反應(yīng)方案V的步驟合成。 反應(yīng)方案V
7-(芴基-9-羰胺氧基)萘-2-羧酸(化合物107)(7-(fluoren-9-yloxycarbonylamino)naphthalene-2-carboxylic acid)。向0.504g(2.70mmol)7-氨基萘-2-羧酸(化合物106，根據(jù)Harrison，H.A.和Royle，F(xiàn).A.所著《化學(xué)協(xié)會(huì)雜志》(J.Chem.Soc.)中所描述的步驟制備)加入二氧雜環(huán)己烷10mL、10％碳酸鈉5mL和35mL水，得到澄清溶液。15分鐘內(nèi)再向此澄清溶液分批加入0.786g(2.97mmol)9-芴基甲基氯甲酸酯(9-fluorenylmethyl chloroformate)。3小時(shí)后，用1N HCl酸化此反應(yīng)物，并用真空過(guò)濾器收集白色沉淀物。將所得固體物質(zhì)懸浮于乙醚中，經(jīng)攪拌形成細(xì)顆粒沉淀，并用真空過(guò)濾器收集，得到化0.948g合物107。
4-甲苯基3-{[7-(芴基-9-羰胺氧基)-2-萘]羰胺基}苯磺酸酯(化合物108)(4-methylphenyl 3{[7-(fluoren-9-yloxycarbonylamino)-2-naphthyl]carbonylamino}benzenesulfonate)。向104mg(0.026mmol)化合物107加入6.5mL氯仿、1.3mL氯化亞硫酰和100μL吡啶。室溫下進(jìn)行3小時(shí)，然后在真空中除去揮發(fā)性物質(zhì)。剩余物在真空中與氯仿進(jìn)行兩次分離。將所得固體物質(zhì)懸浮于15mL氯仿中，并向其加入74mg(0.028mmol)4-甲基苯基3-氨基苯磺酸鹽(化合物5)和溶于1.5mL氯仿中的27μL(0.033mmol)吡啶。此反應(yīng)室溫下攪拌進(jìn)行16小時(shí)后，采用乙酸乙酯和1N HCl水溶液進(jìn)行萃取。有機(jī)層經(jīng)硫酸鎂干燥、過(guò)濾、和真空去除揮發(fā)性物質(zhì)后，用乙醚處理所得剩余物質(zhì)，并用真空過(guò)濾器收集固體沉淀，得到110mg化合物108。
4-甲基苯基3-{[(7-氨基-2-萘基)磺?；鵠氨基}苯磺酸酯(化合物110)。向104mg(0.16mmol)化合物108中加入9mL THF和360μL哌啶。所得澄清溶液在室溫下反應(yīng)6小時(shí)后，采用乙酸乙酯和1N HCl水溶液進(jìn)行萃取。有機(jī)層經(jīng)硫酸鎂干燥、過(guò)濾、和真空去除揮發(fā)性物質(zhì)后，將剩余物質(zhì)溶于二氯甲烷和含有3mL、1N HCl的乙醚溶液，并向其中加入50mL乙醚形成沉淀。離心收集此沉淀。干燥后得到75mg化合物110的鹽酸鹽。
4-甲基苯基3-[({7-[(N-{7-[({3-[(4-甲苯基)羥基磺?；鵠苯基}氨基)磺酰基]-2-萘基}氨基甲酰)氨基]-2-萘基}磺?；?氨基]苯磺酸酯(化合物112)。向含有75mg(0.17mmol)化合物110的3mL THF和1mL水的溶液中中分次、交替加入兩種溶液280μL、濃度為5N的NaOH水溶液溶于1mL水中所得溶液，54mg(0.18mmol)三光氣溶于1mL THF中所得溶液。去除揮發(fā)性物質(zhì)，直至固體沉淀物形成和溶液呈現(xiàn)澄清。棄去溶液，將固體物質(zhì)溶于二氯甲烷中，并蒸發(fā)3次，由此產(chǎn)生一種不溶于二氯甲烷的產(chǎn)物。用真空過(guò)濾器收集此產(chǎn)物，得到24mg化合物112。
3-{[(7-{[N-(7-{[(3-磺基苯基)氨基]磺?；鶀-2-萘基)氨基甲酰]氨基}-2萘基)磺?；鵠氨基}苯磺酸二鈉鹽(化合物114)。向20mg(0.02mol)化合物112中加入濃度為1.37M的甲醇鈉的甲醇溶液1.5mL、水1mL和THF 0.5mL。所得溶液室溫下攪拌反應(yīng)2天后，用1N HCl水溶液酸化反應(yīng)方案，并在真空中除去有機(jī)揮發(fā)性物質(zhì)。用真空過(guò)濾器收集固體沉淀物，得到15mg化合物114。
甲基3-({7-[(芴基-9-甲氧基(fluoren-9-ylmethoxy))羰胺基]-2-萘基}羰胺基)苯甲酸酯(化合物109)。向305mg(0.75mmol)化合物107中加入10mL氯仿、3.5mL氯化亞硫酰和180μL吡啶。此反應(yīng)在室溫下進(jìn)行3小時(shí)后，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)方式除去揮發(fā)性物質(zhì)。兩次分離剩余物質(zhì)與氯仿，然后向其加入50mL氯仿、124mg(0.82mmol)甲基-3-氨基苯甲酸酯和100μL吡啶。此反應(yīng)室溫下攪拌進(jìn)行16小時(shí)后，反應(yīng)物用1N HCl水溶液萃取兩次，用水萃取一次。有機(jī)層經(jīng)硫酸鎂干燥、過(guò)濾、和旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)方式去除揮發(fā)性物質(zhì)后，用甲醇處理所得剩余物質(zhì)，并用真空過(guò)濾器收集固體沉淀，得到380mg化合物109。
甲基3-[(7-氨基2-萘基)羰胺基]苯甲酸酯(化合物111)。向380mg(0.70mmol)化合物109中加入30mL二氯甲烷、3mL THF和1mL哌啶。所得澄清溶液在室溫下攪拌反應(yīng)3小時(shí)后，反應(yīng)物用乙酸乙酯和1N HCl水溶液進(jìn)行萃取。有機(jī)層經(jīng)硫酸鎂干燥、過(guò)濾、和真空去除揮發(fā)性物質(zhì)后，將剩余物質(zhì)溶于二氯甲烷和含3mL、1NHCl的乙醚溶液組成的混合溶液，并向其中加入50mL乙醚形成沉淀。用真空過(guò)濾器收集此沉淀，干燥后得到212mg化合物111的鹽酸鹽。
甲基3-[(7-{[N-(7-{N-[3-(甲氧羰基)苯基]氨基甲酰}-2-萘基)氨基甲酰]氨基}-2-萘基)羰胺基]苯甲酸酯(化合物113)。向溶于2mL THF和1mL水的21mg(0.07mmol)化合物111中分次、交替加入兩種溶液112μL、濃度為5N的NaOH水溶液溶于1mL水中所得溶液，28mg(0.10mmol)三光氣溶于1mL THF中所得溶液。用1N HCl酸化此反應(yīng)物，并除去揮發(fā)性物質(zhì)直至形成一固體沉淀物，溶液呈現(xiàn)澄清。用真空過(guò)濾器收集此固體沉淀物，得到21mg化合物113。
3-[(7-氨基-2-萘基)羰胺基]苯甲酸(化合物115)。向51mg(0.16mmol)化合物111中加入1mL甲醇、1mL水和800μL含1N氫氧化鋰(水溶液)。反應(yīng)在室溫下攪拌進(jìn)行16小時(shí)后，用1NHCl將pH值調(diào)至3，真空除去揮發(fā)性物質(zhì)。將所得固體物質(zhì)懸浮于水中并用真空過(guò)濾器收集，得到16mg化合物115。
3-({7-[(N-{7-[N-(3-羧基苯)氨基甲酰]-2-萘基}氨基甲酰)氨基]-2-萘基}羰胺基)苯甲酸(化合物116)。向溶于2mL THF和1mL水的10mg(0.03mmol)化合物115中分次、交替加入兩種溶液40μL、濃度為5N的NaOH水溶液溶于0.2mL水中所得溶液，4mg(0.02mmol)三光氣溶于0.2mL THF中所得溶液。用1N HCl酸化此反應(yīng)物，真空除去揮發(fā)性物質(zhì)。用真空過(guò)濾器收集固體沉淀物，得到9mg化合物116。
經(jīng)上述過(guò)程制備得到的化合物112-114和116列于表4中，含有酸基團(tuán)的化合物以自由酸形式列出。
表4
實(shí)施例6化合物122和123根據(jù)反應(yīng)方案VI的步驟合成。 反應(yīng)方案VI7-({2-[(7-磺基-2-萘基)氨基]乙基}氨基)萘-2-磺酸二鉀鹽(化合物117)。向2.04g(9.15mmol)7-氨基-2-萘磺酸(化合物1)中加入50mL無(wú)水DMF。攪拌此懸浮液并110℃加熱，然后依次加入1.4g碳酸氫鉀和400μL(4.6mmol)1，2-二溴乙烷。此反應(yīng)依次于110℃和80℃各維持18小時(shí)后，冷卻至室溫。用真空過(guò)濾器收集所得不溶沉淀物并用甲醇沖洗。原產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱色譜法(乙酸乙酯∶異丙醇∶水為6∶2∶1)純化后，得到596mg化合物117。
7-(芴基-9-甲氧基(fluroen-9-ylmethoxy))-N-{2-[(芴基-9-甲氧基)-N-(7-磺基(2-萘))羰胺基]乙基}羰胺基)萘-2-磺酸二鈉鹽(化合物118)。向259mg(0.47mmol)化合物117中加入25mL水和207mg碳酸鈉，再加入二氧雜環(huán)己烷20mL。向此攪拌的渾濁溶液中分次加入290mg(1.1mmol)9-芴基甲基氯甲酸酯(FMOC-Cl)。兩小時(shí)后，另加入260mg(1.0mmol)FMOC-Cl，反應(yīng)在室溫下進(jìn)行12小時(shí)。用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)方式除去揮發(fā)性物質(zhì)，所得固體物質(zhì)溶于水中并凍干。此原產(chǎn)物不需純化即可使用。
甲基5-[({7-[(芴基-9-甲氧基)-N-(2-{(芴基-9-甲氧基)-N-[7-({[4-羥基-3-(甲氧羰基)苯基]氨基}磺?；?(2-萘)]羰胺基}乙基)-羰胺基](2-萘)}磺?；?氨基]-2-羥苯甲酸酯(化合物119)。向所有所得化合物118中加入15mL磷酰氯。此懸浮液在室溫下攪拌24小時(shí)后，將黃色懸浮物傾倒于700mL冰塊上。待冰塊融化后，用真空過(guò)濾器收集黃色固體物質(zhì)，并用水沖洗。此固體經(jīng)真空干燥，過(guò)夜，得到194mg中間產(chǎn)物二磺酰氯(disulfonylchloride)。向此固體物質(zhì)依次加入THF 3mL，含有72mg(0.43mmol)甲基5-氨基-2-羥苯甲酸酯和41μL吡啶的THF 1.5mL。此反應(yīng)在室溫下進(jìn)行12小時(shí)后，反應(yīng)物用乙酸乙酯和1N HCl進(jìn)行萃取。有機(jī)層經(jīng)硫酸鎂干燥、過(guò)濾、和旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)方式去除揮發(fā)性物質(zhì)后，所得固體物質(zhì)經(jīng)硅膠柱色譜法純化，其中采用0.5％的甲醇二氯甲烷溶液洗脫。由此得到116mg化合物119。
甲基2-羥基-5-[({7-[(2-{[7-({[4-羥基-3-(甲氧羰基)苯基]氨基}-磺?；?-(2-萘)]氨基}乙基)-氨基](2-萘)}磺酰基)氨基]苯甲酸酯(化合物120)。向99mg(0.08mmol)化合物119中加入9mL 5％(v/v)的哌啶THF溶液。所得懸浮液在室溫下攪拌24小時(shí)后，反應(yīng)物用乙酸乙酯和1N HCl進(jìn)行萃取。有機(jī)層經(jīng)硫酸鎂干燥、過(guò)濾、和旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)方式去除揮發(fā)性物質(zhì)后，所得固體物質(zhì)經(jīng)硅膠柱色譜法純化，其中依次采用1％的甲醇二氯甲烷溶液和2％的甲醇二氯甲烷溶液洗脫。由此得到64mg化合物120。
5-({[7-({2-[(7-{[(3-羧基-4-羥苯基)氨基]磺?；鶀(2-萘基))氨基]-乙基}-氨基)(2-萘基)]-磺酰基}氨基)-2-羥苯甲酸(化合物121)。64mg(0.08mmol)化合物120加入20mL飽和碳酸鈉、76mg硫代硫酸鈉(Na2S2O4)和2mL DMF。反應(yīng)在室溫下攪拌22小時(shí)后，用乙酸乙酯和1N HCl進(jìn)行萃取。有機(jī)層經(jīng)硫酸鎂干燥、過(guò)濾、和旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)方式去除揮發(fā)性物質(zhì)后，所得產(chǎn)物經(jīng)反相HPLC(C18，250×20mm柱)純化，其中所用緩沖液為三氟乙酸(TFA)緩沖體系(緩沖液A5％乙腈，95％水，0.05％TFA；緩沖液B95％乙腈，5％水，0.05％TFA；17mL/min，0-50％緩沖液B，進(jìn)行10分鐘，50％緩沖液B，進(jìn)行17分鐘，50-100％緩沖液B，進(jìn)行20分鐘)。收集先洗脫出來(lái)的液體部分并凍干，得到24mg化合物121。
5-[({7-[3-(7-{[(3-羧基-4-羥苯基)氨基]磺?；鶀(2-萘基))-2-氧咪唑烷基]-(2-萘基)}-磺?；?氨基]-2-羥苯甲酸(化合物122)向溶于2mL飽和碳酸鈉和2mL水的8mg(0.011mmol)化合物121中滴入含3mg(0.010mmol)三光氣的THF溶液0.5mL，滴入持續(xù)15分鐘。此反應(yīng)根據(jù)HPLC判斷未完全，因此又于15分鐘內(nèi)滴入含有4.5mg(0.015mmol)三光氣的THF溶液0.5mL。2小時(shí)后，用6N HCl酸化反應(yīng)體系，此時(shí)有沉淀形成。冷凍此懸浮液并凍干，所得固體溶于二甲亞砜/水/乙腈中，經(jīng)反相HPLC(C18，250×20mm柱)純化，其中所用緩沖液為三氟乙酸(TFA)緩沖體系(緩沖液A5％乙腈，95％水，0.05％TFA；緩沖液B95％乙腈，5％水，0.05％TFA；19mL/分鐘，0-100％緩沖液B，進(jìn)行20分鐘。由此得到1mg化合物122。
化合物123可由與反應(yīng)方案VI所列步驟相似的過(guò)程合成。
表6
實(shí)施例7化合物129根據(jù)反應(yīng)方案VII的步驟合成。化合物126可用市售3-磺基苯甲酸，根據(jù)本技術(shù)領(lǐng)域?qū)I(yè)人員熟悉的標(biāo)準(zhǔn)程序制備得到。
反應(yīng)方案VII萘-2，7-二胺(化合物125)向1.39g(6.37mmol)2，7-二硝基萘(124)中加入25mL濃鹽酸和15mL乙醇，再加入9.6g(50.9mmol)氯化錫(II)，反應(yīng)于78℃加熱24小時(shí)。用NaOH進(jìn)行堿化，并用乙酸乙酯萃取。乙酸乙酯層經(jīng)硫酸鎂干燥、過(guò)濾、和旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)方式去除揮發(fā)性物質(zhì)后，所得產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱色譜法純化，其中采用1％的甲醇二氯甲烷溶液洗脫。由此得到0.965g化合物125。
甲基3-{[(7-氨基-2-萘基)氨基]磺?；鶀苯甲酸酯(化合物127)。向227mg(1.19mmol)化合物125中加入30mL THF形成懸浮液后，再加入900μL吡啶和10mL環(huán)丁砜，并滴入含有307mg(1.31mmol)化合物126的THF 10mL。此反應(yīng)在室溫下進(jìn)行14小時(shí)。用乙酸乙酯(2x)和1N HCl對(duì)反應(yīng)物進(jìn)行萃取。棄去乙酸乙酯層，用NaOH堿化水相層并用乙酸乙酯萃取。隨后，乙酸乙酯層用水進(jìn)行萃取，pH值為2.6，直至有機(jī)層中檢測(cè)不到更多的開(kāi)始反應(yīng)物(化合物125)。乙酸乙酯層經(jīng)硫酸鎂干燥、過(guò)濾、和旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)方式去除揮發(fā)性物質(zhì)后，將剩余物質(zhì)溶于乙酸乙酯并用含1N HCl的乙醚處理。收集所得固體，得到48mg鹽酸鹽形式的化合物127。
甲基3-({[7-({[7-({[3-(甲氧羰基)苯基]磺酰基}氨基)-2-萘基]氨基}羰胺基)-2-萘基]氨基}磺?；?苯甲酸酯(化合物128)和3-{[(7-{[(7-{[(3-羧基苯)磺酰基]氨基}-2-萘基)氨基]羰胺基}-2-萘基)氨基]磺?；鶀苯甲酸(化合物129)。向43mg(0.11mmol)化合物127中加入1M碳酸鈉8mL、THF 0.5mL，得到澄清溶液。然后滴入含有33mg(0.11mmol)三光氣的THF溶液0.5mL。HPLC提示反應(yīng)進(jìn)行不完全，因此又滴入33mg(0.11mmol)三光氣。經(jīng)HPLC分析反應(yīng)仍未完全，第三次又加入三光氣。此后，反應(yīng)進(jìn)行完全，因此用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)方式除去揮發(fā)性物質(zhì)，并用2NNaOH處理剩余物質(zhì)(化合物128)。此反應(yīng)室溫下攪拌進(jìn)行14小時(shí)后，用6N HCl調(diào)節(jié)pH值至1，此時(shí)有沉淀物形成。用真空過(guò)濾器收集固體物質(zhì)并經(jīng)硅膠柱色譜法純化，得到16mg化合物129。實(shí)施例8非對(duì)稱化合物136-145根據(jù)反應(yīng)方案VIII中所述用于化合物136和137合成的基本步驟制備得到?；衔?8的多種取代胺類化合物由反應(yīng)方案II中所述的用于化合物18的基本合成步驟制備得到。 反應(yīng)方案VIII7-(乙酰氨基)萘-2-磺酸鈉鹽(化合物130)。向3.75g(16.8mmol)7-氨基-萘-2-磺酸中加入20mL吡啶和20mL醋酸酐，室溫下攪拌反應(yīng)24小時(shí)。之后，將黑色的反應(yīng)物置于冰浴中冷卻，然后向其中緩緩加入45mL甲醇。1小時(shí)后，再加入甲醇鈉溶液(425mg鈉溶于10mL甲醇中)。此時(shí)形成沉淀。此懸浮液在室溫下攪拌小時(shí)，之后用真空過(guò)濾器收集所得固體物質(zhì)并用乙酸乙酯沖洗，得到4.4g化合物130。
N-[7-(氯磺?；?-2-萘]乙酰胺(化合物131)。向3.6g(12.5mmol)化合物130中加入100mL磷酰氯(phosphorous oxycholride)后，再滴入4mL二甲乙酰胺，室溫下反應(yīng)5小時(shí)。之后將其置于2L的冰塊上，待冰塊融化后用真空過(guò)濾器收集固體沉淀物，并用水沖洗此物質(zhì)。經(jīng)真空干燥得到3.4g化合物131。
5-({[7-(乙酰氨基)(2-萘)]磺酰基}氨基)-2-氯苯甲酸(化合物132)。將15g(0.087mol)5-氨基-2-氯苯甲酸溶于450mL THF和15mL吡啶中，并將此溶液置于冰水浴中冷卻至5℃。然后10分鐘之內(nèi)加入含有20.8g(0.074mol)化合物131的THF溶液200mL，反應(yīng)在5℃下持續(xù)30分鐘后，轉(zhuǎn)為室溫再進(jìn)行4小時(shí)。之后過(guò)濾反應(yīng)物以除去不溶物質(zhì)，所得澄清溶液經(jīng)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)方式除去揮發(fā)性物質(zhì)，得到一固體物質(zhì)。此固體物質(zhì)用乙酸乙酯和1N HCl進(jìn)行萃取。乙酸乙酯層進(jìn)一步用0.5M NaOH(1次)和0.33M NaOH(3次)萃取。收集水相并用HCl酸化，再經(jīng)乙酸乙酯萃取。經(jīng)硫酸鎂干燥、過(guò)濾、和旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)方式去除乙酸乙酯后，將剩余固體物質(zhì)溶于加熱的2.8L、50/50的甲醇/水中。冷卻所得溶液至室溫，用真空過(guò)濾器棄去少量固體物質(zhì)。澄清濾液室溫放置48小時(shí)后，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)方式將體積降為500mL。用真空過(guò)濾器收集所得固體物質(zhì)。真空干燥后得到17.6g化合物132。
5-{[(7-氨基(2-萘基))磺?；鵠氨基}-2-氯苯甲酸(化合物133)。向13.5g(0.032mol)化合物132中加入100mL、濃度為5N的NaOH溶液，并50℃加熱8小時(shí)。然后用86mL、6N HCl酸化反應(yīng)方案，并用乙酸乙酯進(jìn)行萃取。乙酸乙酯經(jīng)1N HCl、水和鹽水沖洗后，有機(jī)層經(jīng)硫酸鎂干燥、過(guò)濾、和旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)方式去除揮發(fā)性物質(zhì)，得到11.3g化合物133。
甲基5-{[(7-氨基(2-萘基))磺?；鵠氨基}-2-氯苯甲酸酯(化合物134)。向溶于250mL甲醇的10.1g(0.027mol)化合物133中加入溶于二氧雜環(huán)己烷的50mL、濃度為4N的HCl溶液。室溫下進(jìn)行18小時(shí)后，反應(yīng)未達(dá)完全，因此回流時(shí)又加熱5小時(shí)。然后用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)方式除去揮發(fā)性物質(zhì)，并用乙酸乙酯和0.4N碳酸鈉、水以及鹽水對(duì)所得固體物質(zhì)進(jìn)行萃取。有機(jī)層經(jīng)硫酸鎂干燥、過(guò)濾、和旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)方式去除揮發(fā)性物質(zhì)，得到8.71g化合物134。
甲基2-氯-5-{[(7-異硫氰基(2-萘基))磺酰基]氨基}苯甲酸酯(化合物135)。向4.5g(11.5mmol)化合物134和9.01g(50.6mmol)1，1′-硫代羰基二咪唑中加入50mL THF。所得溶液室溫下反應(yīng)1.5小時(shí)后，將反應(yīng)物倒于300mL乙酸乙酯中，并用1N HCl、水和鹽水萃取。有機(jī)層經(jīng)硫酸鎂干燥、過(guò)濾、和旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)方式去除揮發(fā)性物質(zhì)，得到4.77g化合物135。
3-[({7-[({[7-({[4-氯-3-(甲氧羰基)苯基]氨基}磺酰基)-(2-萘基)]氨基}-硫代甲基)氨基]-4-羥基-2-萘基}磺?；?氨基]苯磺酸(化合物136)。向溶于5ml DMF的170mg(0.39mmol)化合物135中加入含有100mg(0.25mmol)化合物18的DMF 5mL。反應(yīng)在室溫下進(jìn)行。4天后，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)方式除去DMF，痕量DMF采用高度真空除去。剩余物質(zhì)用50mL二氯甲烷處理并用震蕩以形成懸浮液。真空過(guò)濾器收集固體不溶產(chǎn)物后，將其溶于甲醇中。隨后，用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)方式除去甲醇。所得固體物質(zhì)再次經(jīng)二氯甲烷處理、震蕩以及真空過(guò)濾器收集。由此得到172mg橙色固體物質(zhì)。
2-氯-5-{[(7-{[(5-羥基-7-{[(3磺基苯基)氨基]磺?；鶀(2-萘基))氨基]羰胺基}(2-萘基))磺酰基]氨基}苯甲酸(化合物137)。向100mg(0.12mmol)化合物136中依次加入15mL乙腈、10mL THF和1mL碘甲烷。反應(yīng)在室溫下攪拌4天。HPLC分析提示反應(yīng)進(jìn)行完全。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)方式除去揮發(fā)性物質(zhì)后，將剩余物在0-5℃下溶于1N NaOH水溶液。此反應(yīng)物置于冰浴中，持續(xù)30分鐘，此后取出2小時(shí)之內(nèi)恢復(fù)至室溫。采用0.2μm尼龍過(guò)濾器除去反應(yīng)方案中的絮狀物，然后用6N HCl調(diào)節(jié)pH值至1。真空過(guò)濾收集所得固體沉淀物，得到60mg化合物137。
化合物138-145(表7)根據(jù)化合物136和137合成的相同基本步驟制備得到，所不同的是在化合物138-145的合成過(guò)程中多種胺類物質(zhì)取代化合物18。這些胺類物質(zhì)由反應(yīng)方案II中所述的用于化合物18的基本合成步驟制備得到。表7中含酸基團(tuán)的化合物以自由酸形式列出。
表7
接續(xù)上頁(yè) 實(shí)施例9化合物157-168根據(jù)反應(yīng)方案IX的步驟制備得到。 反應(yīng)方案IX甲基2-氯-5-[({7-[({[7-({[4-氯-3-(甲氧羰基)苯基]氨基}磺?；?(2-萘基)]氨基}硫代甲基)氨基](2-萘基)}磺?；?氨基]苯甲酸酯(化合物157)向3.0g(7.68mmol)化合物134中加入含4.0g(9.24mmol)化合物135的二氯甲烷200mL，反應(yīng)在室溫下進(jìn)行48小時(shí)。之后，收集細(xì)小、白色固體物質(zhì)，得到5.2g化合物157。
甲基5-({[7-(1-氮雜-2-{[7-({[4-氯-3-(甲氧羰基)苯基]氨基}磺酰基)(2-萘基)]氨基}-2-甲基硫代乙烯基)(2-萘基)]磺?；鶀氨基)-2-氯苯甲酸酯(化合物158)向溶于50mL乙腈的1.0g(1.21mmol)化合物157中加入1.1mL碘甲烷(17.7mmol)。反應(yīng)在氬氣中進(jìn)行72小時(shí)后，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)方式除去揮發(fā)性物質(zhì)，剩余黃色固體物質(zhì)用乙酸乙酯和1M碳酸鈉進(jìn)行萃取。有機(jī)層依次用50/50的鹽水/水和鹽水沖洗后，將其分離并以旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)方式除去揮發(fā)性物質(zhì)，得到0.95g化合物158。
甲基5-({[7-(2氨基-1-氮雜-2-{[7-({[4-氯-3-(甲氧羰基)-苯基]-氨基}磺?；?(2-萘基)]氨基}乙烯基)(2-萘基)]磺酰基}氨基)-2-氯苯甲酸酯(化合物159)。向220mg(0.24mmol)化合物158中加入溶于二氧雜環(huán)己烷的10mL、濃度為0.5M的NH3溶液。將所得溶液置于密封試管內(nèi)并依次于70℃加熱18小時(shí)，80℃加熱24小時(shí)。然后，再向反應(yīng)體系充氨氣4分鐘。此時(shí)反應(yīng)體系處于密封狀態(tài)，于80℃繼續(xù)加熱51小時(shí)。之后將反應(yīng)方案溫度降至65℃并維持此溫度11天。此時(shí)，根據(jù)HPLC分析的結(jié)果表明反應(yīng)以完成70％。通過(guò)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)方式除去揮發(fā)性物質(zhì)，可以停止反應(yīng)。所得產(chǎn)物經(jīng)硅膠色譜法純化，其中依次用3％甲烷二氯甲烷溶液和5％甲烷二氯甲烷溶液洗脫。最后，用乙酸乙酯∶異丙醇∶水比例為90∶2∶1的混合溶液洗脫產(chǎn)物。由此得到117mg化合物159。
5-{[(7-{2-氨基-1-氮雜-2-[(7-{[(3-羧基-4-氯苯基)氨基]磺?；鶀(2-萘基))-氨基]-乙烯基}(2-萘基))磺?；鵠氨基}-2-氯苯甲酸(化合物160)。向50mg(0.062mmol)化合物159中加入10mL、濃度為1N的NaOH溶液。所得溶液室溫下反應(yīng)1小時(shí)。之后用11mL、濃度為1N的HCl酸化反應(yīng)方案，至pH值為1。此時(shí)形成白色沉淀物。真空過(guò)濾收集此沉淀并進(jìn)行水洗，經(jīng)真空干燥后得到45mg化合物160。
化合物161-168(表8)根據(jù)化合物157-160合成的相同基本步驟制備得到，所不同的是在化合物161-168的合成過(guò)程中另一些胺類物質(zhì)取代氨。表8中含酸性基團(tuán)的化合物以自由酸形式列出。
表8
實(shí)施例10化合物169-181(表9)根據(jù)反應(yīng)方案I和II所述以及表1中化合物所用的相同基本步驟制備得到?；衔?-氨基-萘-2-磺酸代替化合物1和2用于合成過(guò)程。
表9 實(shí)施例11[14C]標(biāo)記的化合物15根據(jù)反應(yīng)方案X所述步驟制備得到。 反應(yīng)方案X[14C]3-{[(4-羥基-7-{[(5-羥基-7-{[(3-磺基苯基)氨基]磺酰基}(2-萘基))-氨基]氨基甲酰}氨基)-2-萘]磺?；鶀氨基}苯磺酸(化合物[14C]-15)。向溶于1.7mL DMF的51mg(0.013mmol)化合物18中加入58μL(0.026mmol)2，6-二叔丁基吡啶。向另一個(gè)盛有含13.6mg(0.020mmol)咪唑(imidizole)的1.7mL THF的試管中加入36μL(0.007mmol)[14C]-碳酰氯(phosgene)(20％，溶劑為甲苯)，從而形成白色固體物質(zhì)。2分鐘后，向此THF懸浮液中加入1.7mL DMF，使其呈澄清溶液。將此澄清溶液加入到化合物18的DMF溶液中。4小時(shí)后，所得產(chǎn)物經(jīng)反相HPLC(C18，250×20mm柱)純化，其中所用緩沖液為三氟乙酸(TFA)緩沖體系(緩沖液A5％乙腈，95％水，0.1％TFA；緩沖液B95％乙腈，5％水，0.1％TFA)，得到16mg化合物[14C]-15，其活性為55mCi/mmol。
根據(jù)常規(guī)方法制備的化合物的名稱和它們的結(jié)構(gòu)分子式列于表1-9，這些化合物均囊括在表10中。具有酸的官能團(tuán)的化合物依其母體自由酸命名。下述IUPAC命名源自ChemInnovation軟件公司開(kāi)發(fā)的軟件程序--化學(xué)4D畫圖(Chemistry 4D DrawTM)。
表10
接續(xù)上頁(yè)
接續(xù)上頁(yè)
接續(xù)上頁(yè)
接續(xù)上頁(yè)
接續(xù)上頁(yè)
接續(xù)上頁(yè)
接續(xù)上頁(yè)
接續(xù)上頁(yè)
實(shí)施例1132P-胞漿激酶結(jié)構(gòu)域(cvtoplasmic kinase domain，CKD)自身磷酸化的測(cè)定刺激胰島素受體可以激活胰島素信號(hào)傳導(dǎo)通路。此活化的主要因素是被稱為β-激酶結(jié)構(gòu)域的受體特定部分的磷酸化。人胰島素受體完整的β-激酶結(jié)構(gòu)域表達(dá)并純化自桿狀病毒群。CKD(4.0μg/ml)在29mM HEPES(羥乙基哌嗪乙磺酸)(pH7.6)、0.05％ TritonX-100，10mM MgCl2和2mM MnCl2所配溶液(終體積50μL)中，與50μM ATP和5μCi32P-ATP(3000Ci/mmol)混合。加入一測(cè)試化合物或媒介物(二甲亞砜，DMSO)并使DMSO達(dá)到終濃度1％。此混合物在室溫下反應(yīng)10分鐘后，加入10μL、200mM的EDTA結(jié)束反應(yīng)。取出30μL溶液，與5μL、6X Laemmeli十二烷基硫酸鈉(SDS)緩沖液混合，并加熱至94℃5分鐘。另20μL在SDS-PAGE凝膠上進(jìn)行電泳。摻入CKD帶的放射活性由凝膠的磷成像定量，或由切除條帶的閃光記數(shù)定量。化合物促進(jìn)磷酸化的能力以載體藥物水平的百分比來(lái)表示。測(cè)定結(jié)果顯示于以下表11中。
表11
實(shí)施例12整體細(xì)胞磷酸化測(cè)定胰島素信號(hào)傳遞的開(kāi)始步驟是胰島素受體對(duì)胰島素結(jié)合所作出的磷酸化反應(yīng)。過(guò)度表達(dá)人胰島素受體的NIH 3T3細(xì)胞(3T3HIR)以2×105個(gè)細(xì)胞/毫升的密度在6孔培養(yǎng)皿中培養(yǎng)2天，培養(yǎng)基為DMEM，其中含10％FBS和L-谷酰胺。實(shí)驗(yàn)前，細(xì)胞在含0.1％BSA(牛血清白蛋白)但無(wú)血清存在的DMEM培養(yǎng)基中過(guò)夜。次日凌晨，用PBS洗細(xì)胞，用150mM NaCl、1.7mM KCl、0.9mM CaCl2和K2HPO4(pH7.4)替代原培養(yǎng)基，其中加入實(shí)驗(yàn)化合物或其媒介物(DMSO)。在測(cè)定緩沖液(分別含有測(cè)試化合物或其媒介物)中稀釋胰島素或其媒介物(0.01％BSA)，至終濃度2.5nM。反應(yīng)15分鐘后，用冷PBS沖洗細(xì)胞兩次，并將細(xì)胞溶解于含有50mMTris.HCl，pH7.4、150mM NaCl、0.25％去氧膽酸鈉、1％NP-40、1mMEGTA、1mM PMSF、1mM Na3VO4、1mM NaF、濃度均為1μg/ml的抑肽酶、白胃素和胃酶抑素的溶液中。12000rpm離心以澄清細(xì)胞溶解產(chǎn)物，所得上清液用來(lái)測(cè)定蛋白濃度?？偧?xì)胞溶解產(chǎn)物(～20Xg)與2X SDS-PAGE樣本緩沖液煮沸3分鐘，并與作為標(biāo)準(zhǔn)分子量的Amersham虹標(biāo)記蛋白一起加樣于7.5％SDS-PAGE上。
SDS-PAGE結(jié)束后，蛋白被轉(zhuǎn)移至止動(dòng)劑-P膜上，將斑點(diǎn)與抗磷酸酪氨酸抗體溫育反應(yīng)以進(jìn)行Western分析，并經(jīng)強(qiáng)化化學(xué)熒光(ECL)顯像，如圖1所示。圖2表示的是不同濃度的化合物13和15對(duì)自身磷酸化的增強(qiáng)作用。實(shí)施例13葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)活性測(cè)定刺激胰島素受體引起葡萄糖從血液向細(xì)胞的轉(zhuǎn)運(yùn)，由此調(diào)節(jié)血糖水平。在含10％牛胎盤血清(FBS)的Dulbecco氏修飾Eagle培養(yǎng)基(DMEM)中培養(yǎng)3T3 L1纖維母細(xì)胞(ATCC)，然后細(xì)胞以3×104個(gè)細(xì)胞/孔的密度在24孔板上鋪板。各孔細(xì)胞匯合2天后，用0.5mM異丁基甲基黃嘌呤(IBMX)，1μM地塞米松和1.7μM胰島素處理3天。然后將細(xì)胞轉(zhuǎn)移至含10％FBS的DMEM中，并加入1.7μM胰島素再處理2天后，細(xì)胞在此含有10％FBS的DMEM中維持4天。最后，將細(xì)胞置于含0.1％牛血清白蛋白(BSA)的DMEM中，在無(wú)血清條件下過(guò)夜。
次日，用150mM NaCl、1.7mM KCl、0.9mM CaCl2以及K2HPO4(pH7.4)取代培養(yǎng)介質(zhì)，并向上述物質(zhì)中加入測(cè)試化合物或其媒介物(DMSO)。在測(cè)試緩沖液(分別含有測(cè)試化合物或其媒介物)中稀釋胰島素或其媒介物(0.01％BSA)，至最終濃度為5.6nM。37℃溫育30分鐘后，加入5μCi/ml14C-2-脫氧-右旋葡萄糖，并于37℃繼續(xù)溫育30分鐘。然后用冰PBS/20mM葡萄糖將細(xì)胞洗3次，并于室溫下在250μL溶解緩沖液(50mM Hepes，pH值為7.6，1％ TritonX-100)中溶解細(xì)胞30分鐘。溶解產(chǎn)物的放射活性由閃光記數(shù)定量。
一旦14C-2-脫氧-右旋葡萄糖被轉(zhuǎn)運(yùn)入細(xì)胞，就不會(huì)被釋放。因此，葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)與溶解產(chǎn)物中的放射活性成比例。將葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)提高到大于媒介物對(duì)照組的150％(通常表示媒介物對(duì)照組標(biāo)準(zhǔn)差和檢測(cè)樣本組最大標(biāo)準(zhǔn)差之和)所需的化合物濃度以有效濃度(effective concentration，EC)表示。結(jié)果顯示于表2中。圖3所示是用化合物13和15處理，不同濃度下細(xì)胞對(duì)葡萄糖的攝取情況。
表12
接續(xù)上頁(yè)
接續(xù)上頁(yè)
實(shí)施例14渥曼青霉素和松胞菌素對(duì)葡萄糖攝取的效應(yīng)由胰島素刺激的葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)途徑涉及PI3激酶的活化。渥曼青霉素是PI3激酶的選擇性抑制劑，抑制胰島素刺激的葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)。預(yù)先用100nM渥曼青霉素處理3T3 L1脂肪細(xì)胞，并在胰島素存在或缺乏情況下用所述化合物刺激細(xì)胞。采用實(shí)施例11中所述方法測(cè)知，渥曼青霉素抑制單獨(dú)化合物15或化合物15加5.6nM胰島素共同對(duì)葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)途徑的激活。胰島素刺激葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)的作用由葡萄糖轉(zhuǎn)體蛋白介導(dǎo)。松胞菌素B是葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)體的抑制劑，抑制胰島素刺激的葡萄糖攝取。與渥曼青霉素類似，采用實(shí)施例13中所述方法測(cè)知，松胞菌素B(10μM)抑制單獨(dú)化合物15或化合物15加5.6nM胰島素共同對(duì)葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)途徑的激活。這些結(jié)果提示由所述化合物介導(dǎo)的葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)的激活利用了細(xì)胞胰島素信號(hào)傳導(dǎo)機(jī)制。本實(shí)施例結(jié)果表示于圖4和5中。實(shí)施例153T3 L1脂肪細(xì)胞中GLUT4動(dòng)員的免疫熒光分析細(xì)胞內(nèi)胰島素依賴的葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)利用葡萄糖轉(zhuǎn)體蛋白，如GLUT4。胰島素刺激使此轉(zhuǎn)運(yùn)體從細(xì)胞內(nèi)的儲(chǔ)存位置轉(zhuǎn)移至細(xì)胞膜上，從而幫助葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)入胞內(nèi)。
3T3 L1脂肪細(xì)胞的培養(yǎng)和分化同實(shí)施例11，所不同的是本例中細(xì)胞生長(zhǎng)在顯微小室玻片上。將細(xì)胞置于含0.1％牛血清白蛋白(BSA)的DMEM中，禁血清16小時(shí)，并單獨(dú)用56μM化合物15或100nM胰島素于37℃刺激1小時(shí)。經(jīng)3.5％多聚甲醛固定5分鐘、在1％BSA、TBS中以0.2％皂甙滲透5分鐘后，室溫下與抗GLTU4抗體反應(yīng)分鐘30分鐘。然后，充分沖洗細(xì)胞，并在室溫下將其與FITC偶聯(lián)的二級(jí)抗體反應(yīng)30分鐘。反應(yīng)結(jié)束后，再次洗細(xì)胞，風(fēng)干，并用裝片介質(zhì)制作成樣本置于共聚焦顯微鏡下研究(Stuart A.Ross等1996，《生物化學(xué)雜志》(J.Biol.Chem.)，271(1996)3328-3332)。
正如圖6所示，在未刺激的細(xì)胞中，GLUT4免疫熒光分布于整個(gè)細(xì)胞內(nèi)(圖6A)。胰島素刺激后，GLUT4主要見(jiàn)于細(xì)胞表面(圖6B)，與胰島素誘導(dǎo)的位置轉(zhuǎn)移相一致。用化合物15處理細(xì)胞GLUT4也明顯向細(xì)胞表面轉(zhuǎn)移(圖6C)，與化合物15刺激葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)入細(xì)胞的能力相一致，其作用方式與胰島素相似。實(shí)施例16選擇性與EGFR、PDGFR和IGFR為了確定所述化合物對(duì)胰島素受體的選擇性，測(cè)定了它們對(duì)其它與胰島素受體有類似活化機(jī)制受體的作用效應(yīng)。人表皮樣癌(A431)細(xì)胞以2×105個(gè)細(xì)胞/孔的密度鋪于6孔平皿上，培養(yǎng)基為含10％FBS和L-谷酰胺的DMEM，生長(zhǎng)至75％發(fā)生匯合。實(shí)驗(yàn)前，將細(xì)胞置于含0.1％牛血清白蛋白的DMEM中，禁血清過(guò)夜。次日上午，用PBS洗細(xì)胞，并以150mMNaCl、1.7mM KCl、0.9mMCaCl2以及K2HPO4(pH7.4)取代培養(yǎng)介質(zhì)，并向上述物質(zhì)中加入測(cè)試化合物或其媒介物(DMSO)。在測(cè)試緩沖液(分別含有測(cè)試化合物及其媒介物)中稀釋表皮生長(zhǎng)因子(EGF)或其媒介物(0.01％BSA)，至終濃度為2.5ng/ml。反應(yīng)15分鐘后，以冷PBS洗細(xì)胞兩次，并將細(xì)胞置于50mM Tris.HCl pH7.4、150mM NaCl、0.25％去氧膽酸鈉、1％NP40、1mM EGTA、1mM PMSF、1mMNa3VO4、1mM NaF、濃度均為1μg/ml的抑肽酶、白胃素、和胃酶抑素中進(jìn)行溶解。12000rpm離心以澄清細(xì)胞溶解產(chǎn)物，所得清液用于測(cè)定蛋白濃度?？偧?xì)胞溶解產(chǎn)物(～20μg)與2X SDS-PAGE樣本緩沖液共同煮沸3分鐘，并上樣于7.5％SDS-PAGE上，其中以Amersham虹標(biāo)記蛋白作為分子量標(biāo)準(zhǔn)物。
SDS-PAGE結(jié)束后，將蛋白轉(zhuǎn)移至止動(dòng)劑-P膜上，使斑點(diǎn)和抗磷酸酪氨酸抗體反應(yīng)并用強(qiáng)化化學(xué)熒光(ECL)顯影從而進(jìn)行Western分析。所得結(jié)果見(jiàn)圖7。
化合物15在EGR存在或缺失情況下并不增加EGFR的磷酸化。采用改進(jìn)后的為本領(lǐng)域內(nèi)技術(shù)人員所熟悉的方法和適宜的細(xì)胞類型，化合物15似乎并不增加胰島素樣生長(zhǎng)因子1(IGF-1)或血小板衍生生長(zhǎng)因子(PDGF)受體的磷酸化，不論其內(nèi)源性配體(分別為IGF-1和PDGF)存在與否。實(shí)施例17db/db小鼠血糖水平的測(cè)定公認(rèn)的用來(lái)測(cè)定具有潛在抗糖尿病活性的化合物的II型糖尿病模型是db/db小鼠。選用7-9周的雄性db/db小鼠(Jackson實(shí)驗(yàn)室，Bar Harbor Maine)研究化合物對(duì)血糖水平的作用效應(yīng)。將小鼠控制于己于人工周期為12h/12h的白天/黑夜的循環(huán)中，黑夜時(shí)段結(jié)束后(早700)立即開(kāi)始實(shí)驗(yàn)，此時(shí)小鼠開(kāi)始禁食，待最后一次血糖測(cè)定結(jié)束后恢復(fù)飲食。
將濃度為100U/ml的濃縮胰島素在PBS(磷酸緩沖鹽，Gibco，BRL)中以1∶200的比例稀釋得到胰島素(0.5U/ml，人胰島素(Humulin R)，目錄號(hào)HI-201，Lilly，Indianapolis，Indiana)?；衔镆訮BS或含20％ DMSO的PBS為媒介物制備。
每一種實(shí)驗(yàn)條件需要5-10只小鼠(平均體重40-50g)。依次給小鼠皮下注射0.01U胰島素(包括PBS媒介物)或單獨(dú)PBS、腹腔注射0.1mL化合物或其媒介物。在以化合物或媒介物進(jìn)行給藥后以0分、15分、30分、1小時(shí)、2小時(shí)、和4小時(shí)為間隔分別取血，方式為尾取血。用血糖測(cè)定儀和血糖試紙條(Bayer)進(jìn)行葡萄糖測(cè)定。
所得數(shù)據(jù)示于圖8和9中。圖8表明了單獨(dú)注射磷酸緩沖鹽(PBS)、含胰島素的PBS或同時(shí)含有化合物15和胰島素的PBS之后，不同時(shí)間點(diǎn)血糖水平。各時(shí)間點(diǎn)的血糖水平以0時(shí)數(shù)值的百分比表示。圖9表明單獨(dú)化合物15(不加胰島素)對(duì)db/db小鼠血糖水平的作用效應(yīng)。db/db小鼠注射化合物15及其媒介物(DMSO)和以PBS為媒介物的胰島素后，不同時(shí)間點(diǎn)血糖水平顯示于圖9中。單獨(dú)注射PBS后不同時(shí)間點(diǎn)的血糖水平也被列出以便于比較。從這些數(shù)據(jù)中可以看出化合物15以非胰島素依賴的方式降低血糖水平。實(shí)施例18II型糖尿病ob/ob小鼠模型體內(nèi)血糖、胰島素、和甘油三脂的降低II型糖尿病的另一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)模型是ob/ob小鼠模型。雄性ob/ob小鼠(C57 BL/6J-ob)每籠3-5只喂養(yǎng)，可自由接觸到嚙齒類動(dòng)物的標(biāo)準(zhǔn)食物粒。一周后，給予單一劑量的化合物15(30mg/kg，口腔給藥)?；衔?5引起血糖水平下降13％，血漿胰島素水平下降42％，血漿甘油三脂水平下降15％。同時(shí)出現(xiàn)血糖和胰島素水平下降與胰島素抵抗程度的降減弱一致。結(jié)果見(jiàn)圖10。實(shí)施例19II型糖尿病STZ/HFD大鼠模型血糖測(cè)定代表性化合物也可用正常遺傳背景大鼠予以闡明，這些大鼠先給予高脂飲食再用低劑量鏈脲霉素進(jìn)行給藥(STZ/HFD)。此處理方法重造了可在II型糖尿病患者體內(nèi)見(jiàn)到的胰島素抵抗和高血糖癥狀。雄性CD大鼠(Jackson實(shí)驗(yàn)室，Bar Harbor Me)根據(jù)NIH指導(dǎo)方針喂養(yǎng)，每籠兩只，標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)室飲食(Tekland實(shí)驗(yàn)室飲食，James Grain，San Jose，CA)或加以巧克力、餅干和土豆餅的相同食物，使最終飲食中脂肪占的比重為30％(高脂飲食，HFD)。如此喂養(yǎng)兩周后，給予大鼠新配制的鏈脲霉素(35mg/kg，腹腔注射)，并繼續(xù)高脂飲食。血糖水平達(dá)到190-380mg/dl的大鼠方可用于本實(shí)驗(yàn)。在周期為12小時(shí)的白天/黑夜循環(huán)將近結(jié)束且本實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，將大鼠轉(zhuǎn)移至新籠中，禁食直至治療結(jié)束4小時(shí)后。化合物或其媒介物(PBS)經(jīng)胃管口腔給藥，血樣采集采取經(jīng)IACUC認(rèn)可的采用<p>表11
SDS-PAGE結(jié)束后，蛋白被轉(zhuǎn)移至止動(dòng)劑-P膜上，將斑點(diǎn)與抗磷酸酪氨酸抗體反應(yīng)以進(jìn)行Western分析，并經(jīng)強(qiáng)化化學(xué)熒光(ECL)顯像。圖12表明，化合物15引起胰島素受體的磷酸化增強(qiáng)，其時(shí)間特征與血糖降低相一致(圖11)。實(shí)施例21db/db小鼠的多劑量給藥如同實(shí)施例17，給予7-8周雄性db/db小鼠(Jackson實(shí)驗(yàn)室，Bar Harbor，Maine)化合物15(56mg/kg，口腔給藥)或其等量的媒介物(PBS)，每天給藥，持續(xù)3天。采用經(jīng)IACUC認(rèn)可的方法(tail cap斷尾取血)取血，在每一劑量給藥之前或之后3小時(shí)立即采集血樣。血糖水平用Elite血糖測(cè)定儀(Bayer，Elkhart，IN)測(cè)定。血糖水平在給予PBS兩小時(shí)后變化很小(圖13)，相比之下，化合物15給藥后2小時(shí)使葡萄糖水平降低14-29％，3天均是如此。實(shí)施例22STZ/HFD大鼠的多劑量給藥STZ/HFD大鼠的準(zhǔn)備同實(shí)施例19?；衔?5或其等量的媒介物(PBS)以30mg/kg的劑量每日口腔給藥。采用經(jīng)IACUC認(rèn)可的方法(tail cap斷尾取血)取血，在每一劑量給藥之前或之后4和6小時(shí)(只第一天)立即采集血樣。血糖水平用Elite血糖測(cè)定儀(Bayer，Elkhart，IN)測(cè)定。當(dāng)動(dòng)物從低劑量STZ恢復(fù)時(shí)媒介物組大鼠的血糖水平隨實(shí)驗(yàn)的進(jìn)展而下降(圖14)。給藥6小時(shí)后化合物15可以將用藥大鼠的血糖水平降至低于媒介物組大鼠的水平，并且此降低效應(yīng)持續(xù)至其后的3天。實(shí)施例23急性毒性化合物15以PBS為媒介物給藥于雄性db/db小鼠(腹腔內(nèi)注射)和雄性CD大鼠(口腔給藥)，劑量為300mg/kg，是其有效劑量的10倍。未見(jiàn)急性毒性。實(shí)施例24Ames檢測(cè)(化合物4)在鼠傷寒沙門氏菌菌株(Salmonella typhimurium strains)TA89、TA100、TA1537和TA1537的組胺操縱子以及大腸桿菌株WP2uvra的色氨酸操縱子中檢測(cè)化合物4致突變作用。此方法代表了化合物致突變潛能的標(biāo)準(zhǔn)檢測(cè)，總稱為Ames檢測(cè)。在外源性激活物質(zhì)缺乏和誘導(dǎo)的大鼠肝S-9及輔因子存在情況下，測(cè)定所述化合物非毒性劑量(50-5000μg/板)的致突變作用。在本實(shí)驗(yàn)條件下，所述化合物并沒(méi)有在任何菌株中明顯增加誘導(dǎo)的回復(fù)突變菌落數(shù)，因此可以認(rèn)為鼠傷寒沙門氏菌/大腸桿菌平皿結(jié)合突變實(shí)驗(yàn)為陰性。實(shí)施例25P450的交互作用清除體內(nèi)藥物的主要途徑是細(xì)胞色素P450系統(tǒng)，此系統(tǒng)可能限制藥物效率?；衔?5并不抑制人細(xì)胞色素P450、CYP1A2、CYP2C19、CYP2D6或CYP3A4的催化活性。此外，化合物15、53和48經(jīng)1小時(shí)反應(yīng)后也不被肝微粒體代謝。實(shí)施例26口服藥物組成的制備—固體劑型配方用于口服的藥物組成可由下述配方制備％w/w本發(fā)明化合物 10％硬脂酸鎂 0.5％淀粉 2.0％HPM纖維素 1.0％微晶纖維素 86.5％此混合物可壓縮成片劑或包裝為硬凝膠膠囊。
片劑包衣可采用制膜劑(如HPM纖維素)、色素(如二氧化鈦)和增塑劑(如鄰苯二甲酸乙酯)的混懸液包被制得，并蒸發(fā)溶劑以干燥薄膜。薄膜包衣可占藥片重量的2.0-6.0％，優(yōu)選為約3.0％。實(shí)施例27口服藥物組成的制備—膠囊適于口服的本發(fā)明所述化合物的藥學(xué)組成可由下述配方制備％w/w本發(fā)明化合物20％聚乙烯乙二醇400 80％將藥物分散或溶于液體載體中，如果需要可加入增稠劑。然后選用相應(yīng)技術(shù)將此配方物質(zhì)包于軟凝膠膠囊中。實(shí)施例28胃腸外用藥的藥物組成制備用于胃腸外用藥的藥物組成可由下述配方制備首選劑量本發(fā)明所述化合物 1.0％鹽 99.0％將溶液進(jìn)行滅菌處理后密封于無(wú)菌容器內(nèi)。實(shí)施例29口服后化合物-[14C]-15的體內(nèi)分布STZ/HFD大鼠的準(zhǔn)備工作同實(shí)施例19。給大鼠口服單一劑量以50μCi的14C標(biāo)記的化合物-[14C]-15(制備同實(shí)施例11A)，劑量為30mg/kg。2小時(shí)后，將大鼠無(wú)痛處死，采用IACUC認(rèn)可的方法從不同組織取樣本共200mg。將組織樣本混勻，用閃光記述方法測(cè)定其放射活性。最高放射活性出現(xiàn)在胰腺、肝臟和大腿肌肉。分別對(duì)應(yīng)濃度為780nM、200nM和175nM的化合物15。上述濃度在體外實(shí)驗(yàn)中足以引起胰島素受體磷酸化。低水平的放射活性對(duì)應(yīng)于濃度為50nM-100nM的化合物，可見(jiàn)于腹部肌肉、脂肪組織、腎臟和脾臟。血中放射活性水平并不高于背景水平。
以上描述中所引用的所有文獻(xiàn)在這里作為參考文獻(xiàn)。不偏離本發(fā)明的范圍和精神所作的各種修改和變更，對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員是顯而易見(jiàn)的。雖然本發(fā)明結(jié)合特定實(shí)施例加以描述，但的本發(fā)明并不局限于上述特定實(shí)施例。事實(shí)上，對(duì)本領(lǐng)域內(nèi)的技術(shù)人士而言，對(duì)實(shí)施本發(fā)明的各種模式的顯而易見(jiàn)的修改也應(yīng)包含于下述權(quán)利要求的范圍內(nèi)。
權(quán)利要求
1.具有下式的化合物或其藥用鹽，可為單獨(dú)的立體異構(gòu)體、或立體異構(gòu)體混合物 分子式I其中R1和R2是A環(huán)的取代基團(tuán)，可獨(dú)立地為-SO2NR72、-C(O)NR72、-NR7SO2R7、-NR7C(O)R7、-SO2OR7、-C(O)OR7、-OSO2R7、或-OC(O)R7，R3和R4可獨(dú)立地為氫、或低級(jí)烷基、或者R3和R4都是-(CH2)2-、-(CH2)3-、或-(CH2)4-、或者R3或R4可以是電子對(duì)，R5和R6可獨(dú)立地為氫、烷基、取代烷基、氰基、鹵素、硝基、-SR8、-C(O)R8、-SO2OR8、-OSO2R8、-SO2NR82、-NR8SO2R8、-OC(O)R8、-C(O)OR8、-C(O)NR82、-NR8C(O)R8、-OR、或-NR82，每個(gè)R7和R8可獨(dú)立地為氫、烷基、取代烷基、芳香基，取代芳香基、芳香(低級(jí))烷基、取代芳香(低級(jí))烷基、芳香雜環(huán)(低級(jí))烷基、取代芳香雜環(huán)(低級(jí))烷基、雜環(huán)基，取代雜環(huán)基、雜環(huán)芳香基、或取代雜環(huán)芳香基，每個(gè)Y可以獨(dú)立地是非干擾性的取代基團(tuán)，它不通過(guò)偶氮或酰胺鍵與萘環(huán)連接，每個(gè)x可以獨(dú)立地是0、1、或2，并且連接子連接一個(gè)c碳和一個(gè)d碳，其分子式可為 其中K可以是O、S、或NR*，以及R*是氫、氰基、或低級(jí)烷基；或 其中R*是氫、或低級(jí)烷基；或 其中的R*是氫、氰基、或低級(jí)烷基； 其中R*是氰基、或低級(jí)烷基；而且，如果R1和R2都是-SO2OH，那么(i)Y不能是-SO2OH；(ii)R5和R6均不是-SO2OR8或-OSO2R8；并且(iii)R5和R6不能同時(shí)選自含有氫和羥基的基團(tuán)，除非至少一個(gè)(Y)x為(Y′)x′，其中x′是1或2，Y′是鹵素。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其中每個(gè)x＝O。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的化合物，其中K為N-R*、S、或S-R*。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的化合物，其中K為S、或S-R*。
5.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的化合物，其中R1位于萘環(huán)7位，R2位于萘環(huán)2位。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，其中K＝O。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的化合物，其中每個(gè)x＝O。
8.根據(jù)權(quán)利要求6或7所述任意一種化合物，其中R1位于萘環(huán)7位，R2位于萘環(huán)2位。
9.根據(jù)權(quán)利要求5或8所述任意一種化合物，其中每個(gè)Y可以獨(dú)立地是烷基、取代烷基、氰基、鹵素、硝基、-SR9、-OR9、或-NR92；并且每個(gè)R9可以獨(dú)立地是氫、低級(jí)烷基、或取代低級(jí)烷基。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的化合物，其中每個(gè)Y可以獨(dú)立地是低級(jí)烷基、鹵代低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基、氰基、鹵素、硫代物、硝基、氨基、或羥基。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的化合物，其中R1和R2獨(dú)立地是-SO2OR10、-C(O)OR10、-SO2NR11R10、-C(O)NR11R10、-OSO2R10、-OC(O)R10、-NR11SO2R10、或-NR11C(O)R10；每個(gè)R10可獨(dú)立地為烷基、取代烷基、芳基、取代芳香基、芳香(低級(jí))烷基、取代芳香(低級(jí))烷基、芳香雜環(huán)(低級(jí))烷基、取代芳香雜環(huán)(低級(jí))烷基、雜環(huán)基、取代雜環(huán)基、雜環(huán)芳香基、或取代雜環(huán)芳香基；并且每個(gè)R11獨(dú)立地為氫、或低級(jí)烷基。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的化合物，其中R1和R2獨(dú)立地為-SO2NHR10、或-NHSO2R10。
13.根據(jù)權(quán)利要求11所述的化合物，其中R10獨(dú)立地為芳香基、雜環(huán)芳香基、芳香(低級(jí))烷基、或芳香雜環(huán)(低級(jí))烷基。
14.根據(jù)權(quán)利要求11所述的化合物，其中每個(gè)R10可獨(dú)立地為取代烷基、取代芳香基、取代芳香基(低級(jí))烷基、取代芳香雜環(huán)(低級(jí))烷基、取代雜環(huán)基、或取代雜環(huán)芳香基；R10上至少一個(gè)取代基團(tuán)是R12；每個(gè)R12可獨(dú)立地為-SO2OR13、-C(O)OR13、-SO2NR132、-C(O)NR132、羥基、三唑基、四唑基、羥基異惡唑基、膦酸殘基、或膦酸酯殘基；并且每個(gè)R13獨(dú)立地為氫、或低級(jí)烷基。
15.根據(jù)權(quán)利要求14所述的化合物，其中R10是取代芳基。
16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的化合物，其中R10是取代苯基。
17.根據(jù)權(quán)利要求14所述的化合物，其中每個(gè)R12獨(dú)立地為-C(O)OR13、-C(O)NR132、羥基、三唑基、四唑基、羥基異惡唑基、膦酸殘基、或磷酸酯基殘基。
18.根據(jù)權(quán)利要求17所述的化合物，其中每個(gè)R12是-C(O)OR13、羥基、三唑基、四唑基、羥基異惡唑基、或一種膦酸殘基。
19.根據(jù)權(quán)利要求14所述化合物，其中每個(gè)R12獨(dú)立地是-SO2OR13、或-SO2NR132。
20.根據(jù)權(quán)利要求19所述的化合物，其中R12是-SO2OR13。
21.根據(jù)權(quán)利要求6、或7所述任一化合物，其中R1是-SO2OR10、-C(O)OR10、-SO2NR11R10、-C(O)NR11R10、-OSO2R10、-OC(O)R10、-NR11SO2R10、或-NR11C(O)R10；R2是-SO2NR112、-C(O)NR112、-SO2OR11、或-C(O)OR11；每個(gè)R10可獨(dú)立地為烷基、取代烷基、芳基、取代芳香基、芳香(低級(jí))烷基、取代芳香(低級(jí))烷基、芳香雜環(huán)(低級(jí))烷基、取代芳香雜環(huán)(低級(jí))烷基、雜環(huán)基、取代雜環(huán)基、雜環(huán)芳香基、或取代雜環(huán)芳香基；并且每個(gè)R11可獨(dú)立地為氫、或低級(jí)烷基。
22.根據(jù)權(quán)利要求6、或7所述的任一化合物，其中R1和R2獨(dú)立地是-C(O)OR7、或-C(O)NR72；并且每個(gè)R7獨(dú)立地是氫、或低級(jí)烷基。
23.根據(jù)權(quán)利要求6、或7所述的任一化合物，其中R1和R2獨(dú)立地是-SO2OR7、或-SO2NR72；并且每個(gè)R7獨(dú)立地是氫、或低級(jí)烷基。
24.根據(jù)權(quán)利要求23所述的化合物，其中R1、和R2是-SO2OH。
25.根據(jù)權(quán)利要求6、或7所述的任一化合物，其中R5和R6獨(dú)立地是氫、烷基、取代烷基、氰基、鹵素、硝基、-SR8、-OR8、或-NR82；并且每個(gè)R8獨(dú)立地是氫、低級(jí)烷基、取代低級(jí)烷基、芳香基、取代芳香基、芳香(低級(jí))烷基、取代芳香(低級(jí))烷基、雜環(huán)芳香基、取代雜環(huán)芳香基、芳香雜環(huán)(低級(jí))烷基、取代芳香雜環(huán)(低級(jí))烷基。
26.根據(jù)權(quán)利要求24所述的化合物，其中R5和R6獨(dú)立地是氫、低級(jí)烷基、鹵代低級(jí)烷基、低級(jí)烷氧基、氰基、鹵素、硫代物、氨基、硝基、或羥基。
27.根據(jù)權(quán)利要求14所述的化合物，其中R12是-C(O)OR13。
28.根據(jù)權(quán)利要求14所述的化合物，其中當(dāng)R12為-C(O)OR13、或-SO2OR13時(shí)，R12應(yīng)在芳基、芳香雜環(huán)、或雜環(huán)上與諸如氯或羥基的取代基團(tuán)相鄰。
29.根據(jù)權(quán)利要求19所述的化合物，其中當(dāng)R12為-SO2OR13時(shí)，R12應(yīng)在芳基、芳香雜環(huán)、或雜環(huán)上與諸如氯或羥基的取代基團(tuán)相鄰。
30.根據(jù)權(quán)利要求17和18所述的任一化合物，其中當(dāng)R12為-C(O)OR13時(shí)，R12應(yīng)在芳基、芳香雜環(huán)、或雜環(huán)上與諸如氯或羥基的取代基團(tuán)相鄰。
31.根據(jù)權(quán)利要求20和27所述的任一化合物，其中R12應(yīng)在芳基、芳香雜環(huán)、或雜環(huán)上與諸如氯或羥基的取代基團(tuán)相鄰。
32.根據(jù)權(quán)利要求1或6所述的任一化合物具對(duì)稱性。
33.根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物，為甲基2-氯-5-[({7-[({[7-({[4-氯-3-(甲氧羰基)苯基]氨基}磺?；?(-2-萘基)氨基]硫代甲基}氨基)2-萘基]}磺酰基)氨基]苯甲酸酯，或甲基5-({[7-((1Z)-1-氮雜-2-{[7-({[4-氯-3-(甲氧羰基)苯基]氨基}磺?；?(-2-萘基)氨基]-2-甲硫乙烯基}(2-萘基))]磺酰基}氨基)-2-氯苯甲酸酯。
34.根據(jù)權(quán)利要求1或6所述任一化合物，所述化合物是3-{[(7-{[N-(7-{[(3-苯磺基)氨基]磺?；鶀-2-萘基)氨基甲酰]氨基}-2-萘基)磺?；鵠氨基}苯磺酸，3-{[(4-羥基-7-{[N-(5-羥基-7-{[(3-磺基苯基)-氨基]磺?；鶀(2-萘基))氨甲酰基]氨基)-2-萘基]磺?；鶀-氨基}苯磺酸，4-{[(7-{[(7-{[(4-磺基苯基)氨基]磺?；鶀-2-萘基)氨基]-氨基甲酰}-2-萘基)磺?；鵠氨基}苯磺酸，甲基4-({[7-({N-[7-({[4-(甲氧羰基)苯基]氨基}磺酰基)-2-萘基]-氨基甲酰}氨基)-2-萘基]磺?；鶀氨基)苯磺酸酯，4-{[(7-{[(7-{[(4-羧基苯)氨基]磺?；鶀-2-萘基)氨基]氨基甲酰}-2-萘基)磺?；鵠氨基}苯甲酸，甲基4-({[4-羥基-7-({N-[5-羥基-7-({[4-(甲氧羰基)苯基]氨基}磺酰基)(2-萘基)]氨基甲酰}氨基)-2-萘基]-磺?；鶀氨基)苯甲酸酯，4-{[(7-{[(7-{[(4-羧苯基)氨基]磺?；鶀-5-羥基(2-萘基))氨基]氨基甲酰}-4-羥基-2-萘基)磺?；鵠氨基}苯甲酸，3-{[(7-{[N-(7-{[(3-羧基-2-羥苯基)氨基]磺酰基}(2-萘基))氨基甲酰}-氨基](2-萘基))-磺?；鵠氨基}-2-羥苯甲酸，5-{[(7-{[N-(7-{[(3-羧基-4-羥苯基)-氨基]磺酰基}(2-萘基))氨基甲酰]-氨基}(2-萘基))-磺?；鵠氨基}-2-羥苯甲酸，甲基3-({[7-({[7-({[3-(甲氧羰基)苯基]氨基}磺?；?-2-萘基]氨基}氨甲?；?-2-萘基]磺?；鶀氨基)苯甲酸酯，3-{[(7-{[(7-{[(3-羧基苯)氨基]磺酰基}-2-萘基)氨基]氨基甲酰}-2-萘基)磺?；鵠氨基}苯甲酸，甲基3-({[4-羥基-7-({[5-羥基-7-({[3-(甲氧羰基)苯基]氨基}磺?；?(2-萘基)氨基}-氨甲?；?-2-萘基]磺?；鶀氨基)苯甲酸酯，3-{[(7-{[(7-{[(3-羧苯基)氨基]磺酰基}-5-羥基(2-萘基))氨基]-氨甲?；鶀-4-羥基-2-萘基)磺酰基]氨基}苯甲酸，5-{[(7-{[N-(7-{[(3-羧基-4-羥苯基)氨基]磺?；鶀-5-羥(2-萘基))氨基甲酰]-氨基}-4-羥(2-萘基))-磺?；鵠氨基}-2-羥苯甲酸，5-{[(7-{[N-(7-{[(3-羧基-4-氯苯基)氨基]磺酰基}(2-萘基))氨基甲酰}-氨基](2-萘基))-磺?；鵠氨基}-2-氯苯甲酸，5-{[(7-{[N-(7-{[(3-羧基-4-氯苯基)氨基]磺?；鶀-5-羥(2-萘基))氨基甲酰}-氨基)-4-羥(2-萘基)]-磺酰基}氨基}-2-氯苯甲酸，甲基2-羥-5-({[7-({[7-({[4-羥-3-(甲氧羰基)苯基]氨基}磺酰基)(-2-萘基)]氨基}氨甲?；?(2-萘基)]磺酰基]氨基]苯甲酸酯，甲基2-氯-5-({[7-({N-[7-({[4-氯-3-(甲氧羰基)苯基]氨基}磺?；?(-2-萘基)]氨基甲酰}-氨基)(2-萘基)]磺酰基}氨基)苯甲酸酯，N-(7-{[(3-(1H-1，2，3，4-四氮-5-yl)苯基)氨基]-磺?；鶀(2-萘基)}[(7-{[(3-(1H-1，2，3，4-四氮-5-yl)苯基)氨基]-磺酰基}(2-萘基))氨基]酰胺，N-(5-羥-7-{[(3-(1H-1，2，3，4-四氮-5-yl)苯基)-氨基]-磺酰基}(2-萘基)}[(5-羥-7-{[(3-(1H-1，2，3，4-四氮-5-yl)苯基)-氨基]-磺酰基}(2-萘基))氨基]酰胺，N-[7-({[3-(二乙氧磷?；?-苯基]氨基}磺?；?(2-萘基)]{[7-({[3-(二乙氧磷?；?苯基]氨基}磺?；?(2-萘基)]氨基}酰胺，N-[7-({[3-(二乙氧基(羥膦?；?)-苯基]氨基}磺?；?(2-萘基)]{[7-({[3-(二乙氧基(羥膦酰基))-苯基]氨基]磺?；鵠(2-萘基)]氨基]酰胺，2-氯-5-{[(7-{[(7-{[(4-氯-3-磺苯基)氨基]磺酰基}(-2-萘基))氨基]氨甲?；鶀(2-萘基))磺?；鵠氨基}苯磺酸，2-氯-5-{[(7-{[(7-{[(4-氯-3-磺苯基)氨基]磺?；鶀-5-羥(-2-萘基))氨基]氨甲?；鶀-4-羥(2-萘基))磺?；鵠氨基}苯磺酸，5-[({7-[3-(7-{[(3-羧基-4-羥苯基)氨基]磺?；鶀(-2-萘基))-2-氧代咪唑烷基](-2-萘基)}-磺?；?氨基]-2-羥苯甲酸，5-[({7-[3-(7-{[(3-羧基-4-氯苯基)-氨基]磺?；鶀(-2-萘基))-2-氧代咪唑烷基](2-萘基)}磺酰基)氨基]-2-氯苯甲酸，2-氯-5-{[(7-{[N-(5-羥-7-{[(3-磺苯基)氨基]磺?；鶀(-2-萘基))氨基甲酰]氨基}(2-萘基))磺?；鵠-氨基}苯甲酸，5-{[(7-{[N-(7-{[(4-羧苯基)氨基]磺酰基}(2-萘基))氨基甲酰]-氨基}(2-萘基))-磺?；?氨基)-2-氯苯甲酸；和5-{[(7-{[N-(7-{[(3-羧苯基)氨基]磺?；鶀(2-萘基))氨基甲酰]-氨基}(2-萘基)}-磺?；鶀氨基}-2-氯苯甲酸，或其藥用鹽。
35.用于治療選自高血糖癥、I型糖尿病、和II型糖尿病的哺乳動(dòng)物疾病狀態(tài)的藥用組合物，包括(a)療效劑量的根據(jù)權(quán)利要求1-34所述的任一化合物；并且(b)至少一種藥用賦形劑。
36.刺激胰島素受體激酶活性的方法，包括根據(jù)權(quán)利要求1-34所述任一化合物與胰島素受體、或激酶部分接觸，化合物劑量足以刺激胰島素受體激酶活性。
37.激活胰島素受體方法，包括權(quán)利要求1-34所述任一化合物與胰島素受體或激酶部分結(jié)合，化合物劑量足以激活胰島素受體。
38.刺激表達(dá)有胰島素受體的細(xì)胞攝取葡萄糖的方法，包括用根據(jù)權(quán)利要求1-34所述的任一化合物與細(xì)胞接觸，化合物劑量足以刺激細(xì)胞攝取葡萄糖。
39.治療選自高血糖癥、I型糖尿病、和II型糖尿病的哺乳動(dòng)物疾病狀態(tài)的方法，包括給予哺乳動(dòng)物療效劑量的根據(jù) 1-34所述的任一化合物、或其藥用組合物。
40.根據(jù)權(quán)利要求35所述的方法，進(jìn)一步包括對(duì)于所述疾病狀態(tài)給予所述哺乳動(dòng)物輔助治療。
41.根據(jù)權(quán)利要求1-34所述任一化合物用于治療或預(yù)防選自高血糖癥、I型糖尿病、和II型糖尿病的哺乳動(dòng)物疾病狀態(tài)的藥物制備的應(yīng)用。
42.用于根據(jù)權(quán)利要求1-34所述任一化合物的制備方法，所述方法包括(i)分子式A所代表化合物 與分子式B所代表化合物 的分子間或分子內(nèi)縮合，或者將分子式A所代表化合物加入到分子式B所代表的化合物中，其中分子式A和B中的氨基非必選可處于保護(hù)狀態(tài)，與一種活化的雙功能試劑提供的K＝C-基團(tuán)相連接，這里K的意義如前述；其中R1、R2、R3、R4、R5、R6、x和Y根據(jù)本權(quán)利要求1定義，X可能為R3或R4，WZ可為S＝C＝或O＝C＝，或者W和Z可為R3或R4；從而在分子式A和分子式B之間形成一連接子；或(ii)一個(gè)或多個(gè)取代基團(tuán)的化學(xué)加工，其中所述取代基團(tuán)可被轉(zhuǎn)化為另一取代基團(tuán)R1、R2、R5、和R6或Y；或(iii)將R1、R2、R5和R6或Y引入萘的一個(gè)或兩個(gè)環(huán)；或(iv)保護(hù)基團(tuán)的去保護(hù)；或(v)修改一連接子以將所述連接子轉(zhuǎn)化為另一個(gè)連接子；或(vi)鹽的形成或內(nèi)轉(zhuǎn)化；或(vii)酯的水解；或(viii)釋放根據(jù)權(quán)利要求1所述的化合物的一個(gè)自由酸或堿；或者(ix)立體異構(gòu)體的分離或合成。
43.根據(jù)權(quán)利要求1-34所述任一化合物在制備和/或研制能夠刺激胰島素受體激酶活性、激活胰島素受體、和刺激葡萄糖攝取的化合物模型方面的應(yīng)用。
44.根據(jù)權(quán)利要求1-34所述任一化合物在治療I型糖尿病和晚期II型糖尿病方面的應(yīng)用，包括所述化合物與可能的輔助治療劑量的胰島素聯(lián)合用藥以達(dá)治療目的。
45.用于制備能模擬權(quán)利要求1-34所述任一化合物功能的化合物的方法，所述方法包括(i)以權(quán)利要求1-34所述任一化合物為對(duì)照篩選測(cè)試化合物，以確定相關(guān)的刺激胰島素受體激酶活性的功能；并且(ii)如果具有刺激胰島素受體激酶活性的功能，則制備所述測(cè)試化合物。
46.根據(jù)權(quán)利要求1-34所述任一化合物在驗(yàn)證、優(yōu)化或標(biāo)準(zhǔn)化生物檢測(cè)方面的應(yīng)用。
47.放射標(biāo)記權(quán)利要求1-34所述任一化合物。
48.根據(jù)權(quán)利要求47所述的化合物是14C-4-甲苯基-3-[({4-羥-7-[(N-{5-羥-7-[({3-[(4-甲苯基)羥基磺?；鵠苯基}氨基)磺?；鵠(2-萘基)}氨基甲酰)-氨基]-2-萘基}磺?；?氨基]苯磺酸酯。
49.根據(jù)權(quán)利要求47或48所述的任一化合物，作為鑒定和/或制備能夠刺激胰島素受體激酶活性、激活胰島素受體、和刺激葡萄糖攝取的化合物的鑒別應(yīng)用。
50.根據(jù)權(quán)利要求1-34所述任一化合物或其藥用鹽作為葡萄糖攝取增強(qiáng)劑。
全文摘要
分子式I所示的化合物,其中R
文檔編號(hào)C07F9/40GK1364156SQ00810853
公開(kāi)日2002年8月14日 申請(qǐng)日期2000年5月25日 優(yōu)先權(quán)日1999年5月26日
發(fā)明者韋恩·施佩瓦克, 羅伯特·T·盧穆, 施松遠(yuǎn), 普拉薩德·曼徹姆, 米歇爾·R·柯孜盧斯基, 史蒂文·R·修 申請(qǐng)人:泰立克公司