專利名稱：粒狀淡紫擬青霉生物殺線蟲劑的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種生物殺線蟲劑的制備方法，特別是淡紫擬青霉生物殺線蟲劑的制備方法，屬于淡紫擬青霉生物殺線蟲劑制備領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
在引起植物侵染性病害的四大病原中，植物寄生線蟲的危害超過細(xì)菌和病毒，僅次于真菌病害。植物寄生線蟲每年造成世界農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的損失約1000億美元，其中根結(jié)線蟲(Meloidogyne spp.)是危害最大的一類植物寄生線蟲，每年僅對世界上重要的經(jīng)濟(jì)作 物造成的經(jīng)濟(jì)損失就高達(dá)數(shù)百億美元。在根結(jié)線蟲屬(Meloidogyne)內(nèi)，以南方根結(jié)線蟲(M. incognita)、花生根結(jié)線蟲(M. arenaria)、爪睡根結(jié)線蟲(M. javanica)和北方根結(jié)線蟲(M. hapla)四個(gè)種的根結(jié)線蟲病害發(fā)生最為普遍，對大多數(shù)的糧食作物、油料作物、纖維作物、煙草、茶葉、果樹、蔬菜、藥材和花卉等均可造成嚴(yán)重?fù)p失。在控制該類病害的方法中，由于根結(jié)線蟲通常存活于土壤中和植物根內(nèi)，所以一般化學(xué)農(nóng)藥難以控制其危害，劇毒農(nóng)藥又對農(nóng)產(chǎn)品生產(chǎn)的安全性構(gòu)成嚴(yán)重威脅，而化學(xué)殺線蟲劑只能在短期內(nèi)控制線蟲數(shù)量，同時(shí)還存在成本高、持效短和抗藥性等問題。此外，一些傳統(tǒng)的防治方法，如輪作、種植抗病品種等雖可起到一定的防治作用，但在實(shí)際生產(chǎn)中能夠輪作的作物并不多，對根結(jié)線蟲具有抗性的作物品種十分有限。因此，傳統(tǒng)控制方法并不能解決該類病害。殺線蟲生物農(nóng)藥由于其安全和高效而逐漸引起關(guān)注，具有非常廣闊的應(yīng)用價(jià)值和市場前景。其中，淡紫擬青霉(P. Iilacinus)是目前防治植物寄生線蟲的最有前途的天敵真菌之一，具有廣泛的研究和開發(fā)價(jià)值。淡紫擬青霉屬真菌門半知菌綱叢梗孢目，可寄生許多植物病原線蟲的卵及雌蟲，包括危害最為嚴(yán)重的根結(jié)線蟲(Meloidogyne spp.)和胞囊線蟲(Heterodera spp.),國際馬鈴薯中心昆蟲系Jatala博士 1979年首次報(bào)道,淡紫擬青霉對南方根結(jié)線蟲的卵寄生率高達(dá)60%-70%。淡紫擬青霉菌株可在作物根際定殖，抵抗根際有害線蟲侵染，對作物根際土壤微生物菌群產(chǎn)生一定影響，利于植物生長發(fā)育。雖然淡紫擬青霉的培養(yǎng)方法已經(jīng)有較多研究，如中國專利CN101845398A中公開了一種淡紫擬青霉的培養(yǎng)方法，中國專利CN102286421A中公開了一種淡紫擬青霉的液體發(fā)酵培養(yǎng)方法，中國專利CN101671210A中公開了一種淡紫擬青霉生物肥藥的制備方法，CN101165016A中公開了一種防治線蟲危害的生物有機(jī)肥制備方法，CN1756482A中公開了一種粒狀殺線蟲劑的制造方法。但這些方法限于少量生產(chǎn)制備，規(guī)?；a(chǎn)則受到限制。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明為克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，通過對淡紫擬青霉生物殺線蟲劑制備方法中各種工藝條件的選擇，提供一種可大規(guī)模生產(chǎn)淡紫擬青霉生物殺線蟲劑的方法，獲得的淡紫擬青霉生物殺線蟲劑的袍子產(chǎn)量高、生產(chǎn)成本低。本發(fā)明通過如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)
一種粒狀淡紫擬青霉生物殺線蟲劑的制備方法，其包括如下步驟準(zhǔn)備菌株、制備菌種、第一次發(fā)酵、第二次發(fā)酵和造粒，其特征在于，所述制備菌種中采用的培養(yǎng)基的組成為蔗糖、酵母、MgSO4, KC1、ZnSO4 · 7H20和蒸餾水；所述第一次發(fā)酵中的培養(yǎng)基的組成為蔗糖、酵母、MgS04、KCl、ZnS04 · 7H20和蒸餾水；所述第二次發(fā)酵中的培養(yǎng)基的組成為蔗糖、酵母、MgSO4、KCl、ZnS04 · 7H20 和蒸餾水。如上所述制備方法，所述制備菌種中采用搖瓶培養(yǎng)，其搖瓶裝量< 150ml/500ml瓶、搖床轉(zhuǎn)速為150rpm、培養(yǎng)溫度為29 30° C、時(shí)間為72h。如上所述制備方法，所述第一次發(fā)酵中的發(fā)酵罐的接種量為4%體積比，發(fā)酵罐的裝罐系數(shù)為O. 6-0. 7、溫度為27-29° C、攪拌速度為200-300rpm，發(fā)酵周期為45-54小時(shí)。如上所述制備方法，所述第二次發(fā)酵中的發(fā)酵罐的接種量為4%體積比，發(fā)酵罐的裝罐系數(shù)為O. 6-0. 7、溫度為27-29° C、攪拌速度為200-300rpm，發(fā)酵周期為42-50小時(shí)。
如上所述制備方法，所述制備菌種中的培養(yǎng)基的組成為蔗糖15g，酵母6. 12g，MgSO4 O. 5g，KCl O. 5g，ZnSO4 · 7H20 IOmg 和蒸餾水 1000ml。所述培養(yǎng)基的 pH 優(yōu)選為 6. 5。如上所述制備方法，所述第一次發(fā)酵中的培養(yǎng)基的組成為蔗糖15g，酵母6. 12g，MgSO4 O. 5g，KCl O. 5g，ZnSO4 · 7H20 IOmg 和蒸餾水 1000ml。所述培養(yǎng)基的 pH 優(yōu)選為 6. 5。如上所述制備方法，所述第二次發(fā)酵中的培養(yǎng)基就的組成為蔗糖15g，酵母
6.12g，MgSO4O. 5g，KCl O. 5g，ZnSO4 ·7Η20 IOmg 和蒸餾水 1000ml。所述培養(yǎng)基的 pH 優(yōu)選為6. 5o本發(fā)明的有益效果本發(fā)明的方法每批次可獲得殺線蟲劑(微球制劑)250kg以上，每克微球制劑中有效成分含量> 107CFU/g制劑菌落數(shù)，微球制劑顆粒大小范圍為4±lmm，千粒微球重量范圍為10-15克，且生產(chǎn)成本低，可以大規(guī)模的生產(chǎn)粒狀淡紫擬青霉生物殺線蟲劑。
具體實(shí)施例方式根據(jù)本發(fā)明的制備方法，其中菌株為淡紫擬青霉菌株，是可以購買得到的，也可以通過以下方法培養(yǎng)得到采用馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基(PDA)，通過本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的方法獲得，所述培養(yǎng)中具體的參數(shù)選擇如下菌株生長的溫度范圍為8-38° C，最佳為25-30° C ;菌株生長的pH為2-11，優(yōu)選pH值為5-9。所述培養(yǎng)基的制備方法為馬鈴薯去皮后切成塊，200g煮沸20min，紗布過濾后，向?yàn)V液中加葡萄糖20g，瓊脂粉15g，用蒸餾水定容至1000ml，分裝，高壓蒸汽滅菌20分鐘后備用。所述菌株可通過以下方法保存將上述獲得的菌株采用普通試管PDA培養(yǎng)基塊法，即切取生長在PDA培養(yǎng)基上生長良好的菌塊放置在I毫升無菌離心管中，低溫下(4° C)至少保存I年。根據(jù)本發(fā)明的制備方法，所述菌種的制備方法包括(I)菌種活化將低溫保存的菌種轉(zhuǎn)接至PDA培養(yǎng)基斜面上，28 30° C條件下培養(yǎng)3 4天，實(shí)現(xiàn)菌種的充分活化?；罨囵B(yǎng)后的菌種可接種搖瓶進(jìn)行種子培養(yǎng)。(2)制備搖瓶菌種
采用液體培養(yǎng)基，其組成為蔗糖、酵母、MgS04、KCl、ZnS04 · 7H20和蒸餾水。所述培養(yǎng)基可以使用如下的配方蔗糖15g，酵母6. 12g，MgS04 O. 5g,KCl O. 5g，ZnSO4 ·7Η20 IOmg,蒸懼水 1000ml, pH=6. 5。搖瓶培養(yǎng)的參數(shù)如下?lián)u瓶裝量< 150ml/500ml瓶，搖床轉(zhuǎn)速為150rpm，培養(yǎng)溫度為29 30° C，時(shí)間為約72h。接種時(shí)采用培養(yǎng)基塊直接接種搖瓶即可，具體而言，接入直徑O. 5mm培養(yǎng)基塊4塊到一個(gè)搖瓶即可。所得的菌種在PDA培養(yǎng)基上顏色正常，鏡檢無其他雜菌孢子存在，無細(xì)菌菌膿等雜質(zhì)，無酸性氣味存在。
根據(jù)本發(fā)明的制備方法，所述第一次發(fā)酵(也稱為種子罐發(fā)酵)具體為采用液體培養(yǎng)基，其組成為蔗糖、酵母、MgSO4, KC1、ZnSO4 · 7H20和蒸餾水。所述培養(yǎng)基具體可以采用以下配方蔗糖15g，酵母6. 12g，MgSO4 O. 5g，KCl O. 5g，ZnSO4 · 7H20IOmg,蒸懼水 1000ml, pH=6. 5。第一次發(fā)酵即種子罐發(fā)酵，其種子罐滅菌、接種量和接種溫度具體為121° C滅菌30min，此時(shí)pH范圍在6. O 6. 5 ;發(fā)酵液按一級種子罐裝量的4%體積比接種，接種溫度為30。C以下。發(fā)酵控制及發(fā)酵時(shí)間具體為裝罐系數(shù)0.6-0.7，28±1° C，攪拌速度為200-300rpm，取樣間隔時(shí)間為4小時(shí)；發(fā)酵時(shí)間為18-24小時(shí)。發(fā)酵周期45 54小時(shí)。所得種子液(即菌液)呈土黃色至深褐色，較為粘稠，孢子含量達(dá)到SXlOVml以上。根據(jù)本發(fā)明的制備方法，所述第二次發(fā)酵(也稱為生產(chǎn)罐發(fā)酵)具體為采用液體培養(yǎng)基，其組成為蔗糖、酵母、MgSO4, KC1、ZnSO4 · 7H20和蒸餾水。所述培養(yǎng)基具體可以采用以下配方蔗糖15g，酵母6. 12g，MgSO4 O. 5g，KCl O. 5g，ZnSO4 · 7H20IOmg,蒸懼水 1000ml, pH=6. 5。第二次發(fā)酵即生產(chǎn)罐發(fā)酵，其生產(chǎn)罐滅菌、接種量和接種溫度具體為培養(yǎng)液經(jīng)121° C滅菌30min，接種量4%體積比，接種溫度為30° C以下。發(fā)酵控制及發(fā)酵時(shí)間具體為裝罐系數(shù)0.6-0.7，發(fā)酵溫度28±1° C，攪拌速度為200-300rpm，不需調(diào)節(jié)pH值；取樣間隔時(shí)間為3小時(shí)；發(fā)酵周期為42 50小時(shí)。所得菌液呈土黃色至深褐色，較為粘稠，發(fā)酵液中液生孢子含量在4X 108/ml以上，菌體干重在1.5%以上。根據(jù)本發(fā)明的制備方法，所述造粒具體為淡紫擬青霉菌在上述生產(chǎn)罐發(fā)酵完成后，在發(fā)酵罐中經(jīng)過充分?jǐn)嚢?，分散菌絲以及孢子，制備成菌懸液備用。將已經(jīng)充分溶解好的海藻酸鈉溶液與罐內(nèi)菌懸液按照1:1比例在攪拌罐中徹底攪拌混勻，隨即加入無菌娃藻土，混合均勻成為礦土溶液。將該礦土溶液加入準(zhǔn)備好的微球發(fā)生器內(nèi)，液滴自小孔滴出，形成海藻酸鈉微球。微球用無菌水沖洗，室溫條件下陰干，干燥至微球制劑含水量降至2 %以下后包裝使用。每克微球制劑中有效成分含量> 107CFU/g制劑菌落數(shù)，微球制劑顆粒大小范圍為4± 1mm，千粒微球重量范圍為10-15克。根據(jù)本發(fā)明的制備方法，所述制劑通過以下步驟包裝、儲(chǔ)存
采用塑料袋抽真空保存，本制劑在室溫條件下存放6個(gè)月后，制劑有效成分仍然保持活力。本發(fā)明的有益效果本發(fā)明的方法每批次可獲得殺線蟲劑(微球制劑)250kg以上，優(yōu)選在280-360kg，每克微球制劑中有效成分含量>107CFU/g制劑菌落數(shù)，微球制劑顆粒大小范圍為4± Imm,千粒微球重量范圍為10-15克,且生產(chǎn)成本低,可以大規(guī)模的生產(chǎn)粒狀淡紫擬青霉生物殺線蟲劑。下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步說明，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不限于實(shí)施例。一、培養(yǎng)基及其配方I、馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基(PDA)馬鈴薯去皮后切成塊，200g煮沸20min，紗布過濾后，向?yàn)V液中加葡萄糖20g，瓊脂 粉15g，用蒸餾水定容至1000ml，分裝，高壓蒸汽滅菌20分鐘后備用。2、液體培養(yǎng)基鹿糖15g,酵母 6. 12g, MgSO4 O. 5g, KCl O. 5g, ZnSO4 · 7H20 IOmg,蒸懼水 1000ml,pH=6. 5。二、菌株的培養(yǎng)和保存I、馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基(PDA)馬鈴薯去皮后切成塊，200g煮沸20min，紗布過濾后，向?yàn)V液中加葡萄糖20g，瓊脂粉15g，用蒸餾水定容至1000ml，分裝，高壓蒸汽滅菌20分鐘后備用。2、菌株培養(yǎng)該菌株生長的溫度范圍為8-38° C，最佳為25-30° C。該菌株在pH 2_11之間均可以生長，適宜pH值為5-9。(I)在上述馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基中，菌株的具體培養(yǎng)條件為溫度25° C，pH=6. 5，所得菌株編號(hào)為Al。(2)在上述馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基中，菌株的具體培養(yǎng)條件為溫度30° C，pH=7，所得菌株編號(hào)為A2。(3)在上述馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基中，菌株的具體培養(yǎng)條件為溫度28° C，pH=9，所得菌株編號(hào)為A3。3、菌種保存將上述獲得的菌株采用普通試管PDA培養(yǎng)基塊法(切取生長在PDA培養(yǎng)基上生長良好的菌塊放置在I毫升無菌離心管中)，低溫下(4° C)保存。三、制備菌種I、活化菌種(I)將上述低溫保存的菌株Al轉(zhuǎn)接至PDA培養(yǎng)基斜面上，28°C條件下培養(yǎng)3天，可用于接種搖瓶進(jìn)行種子培養(yǎng)(記為All)。(2)將上述低溫保存的菌株Al轉(zhuǎn)接至PDA培養(yǎng)基斜面上，28°C條件下培養(yǎng)4天，可用于接種搖瓶進(jìn)行種子培養(yǎng)(記為A12)。(3)將上述低溫保存的菌株Al轉(zhuǎn)接至PDA培養(yǎng)基斜面上，30°C條件下培養(yǎng)3天，可用于接種搖瓶進(jìn)行種子培養(yǎng)(記為A13)。(4)將上述低溫保存的菌株A2轉(zhuǎn)接至PDA培養(yǎng)基斜面上，28 °C條件下培養(yǎng)3天，可用于接種搖瓶進(jìn)行種子培養(yǎng)(記為A21)。(5)將上述低溫保存的菌株A2轉(zhuǎn)接至PDA培養(yǎng)基斜面上，28 °C條件下培養(yǎng)4天，可用于接種搖瓶進(jìn)行種子培養(yǎng)(記為A22)。(6)將上述低溫保存的菌株A2轉(zhuǎn)接至PDA培養(yǎng)基斜面上，30°C條件下培養(yǎng)3天，可用于接種搖瓶進(jìn)行 種子培養(yǎng)(記為A23)。(7)將上述低溫保存的菌株A3轉(zhuǎn)接至PDA培養(yǎng)基斜面上，28 °C條件下培養(yǎng)3天，可用于接種搖瓶進(jìn)行種子培養(yǎng)(記為A31)。(8)將上述低溫保存的菌株A3轉(zhuǎn)接至PDA培養(yǎng)基斜面上，28 °C條件下培養(yǎng)4天，可用于接種搖瓶進(jìn)行種子培養(yǎng)(記為A32)。(9)將上述低溫保存的菌株A3轉(zhuǎn)接至PDA培養(yǎng)基斜面上，30°C條件下培養(yǎng)3天，可用于接種搖瓶進(jìn)行種子培養(yǎng)(記為A33)。2、制備搖瓶菌種(I)搖瓶培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基鹿糖15g,酵母 6. 12g, MgSO4 O. 5g, KCl O. 5g, ZnSO4 · 7H2010mg,蒸懼水 1000ml, pH=6. 5。(2)搖瓶培養(yǎng)控制搖瓶裝量彡150ml/500ml瓶，搖床轉(zhuǎn)速為150rpm，培養(yǎng)溫度29 30° C，時(shí)間為約72h。(3)接種采用培養(yǎng)基塊直接接種搖瓶即可，由于該菌可以產(chǎn)生大量分生孢子，因此接入直徑O. 5mm培養(yǎng)基塊4塊到一個(gè)搖瓶即可。(4)獲得菌種以上獲得的菌種在PDA培養(yǎng)基上顏色正常，鏡檢無其他雜菌孢子存在，無細(xì)菌菌膿等雜質(zhì)，無酸性氣味存在。四、第一次發(fā)酵(種子罐發(fā)酵)I、種子罐培養(yǎng)基液體培養(yǎng)基鹿糖15g,酵母 6. 12g, MgSO4 O. 5g, KCl O. 5g, ZnSO4 · 7H2010mg,蒸懼水 1000ml, pH=6. 5。2、種子罐滅菌、接種量和接種溫度121° C滅菌30min，此時(shí)pH范圍在6. O 6. 5。發(fā)酵液按一級種子罐裝量的4%體積比接種，接種溫度為30° C以下。3、發(fā)酵控制及發(fā)酵時(shí)間裝罐系數(shù)0.6-0.7，28±1° C，攪拌速度為200_300rpm，取樣間隔時(shí)間為4小時(shí)。發(fā)酵時(shí)間為18-24小時(shí)。發(fā)酵周期45 54小時(shí)。4、獲得種子液獲得的種子液(即菌液)呈土黃色至深褐色，較為粘稠，孢子含量達(dá)到8XlOVml以上。五、第二次發(fā)酵(生產(chǎn)罐發(fā)酵)I、生產(chǎn)罐培養(yǎng)基
液體培養(yǎng)基鹿糖15g,酵母 6. 12g, MgSO4 O. 5g, KCl O. 5g, ZnSO4 · 7H2010mg,蒸懼水 1000ml, pH=6. 5。2、生產(chǎn)罐滅菌、接種量和接種溫度培養(yǎng)液經(jīng)121° C滅菌30min，接種量4%體積比，接種溫度為30° C以下。3、發(fā)酵控制及發(fā)酵時(shí)間裝罐系數(shù)O. 6-0. 7，溫度28 ±1° C，攪拌速度為200 300rpm，不需調(diào)節(jié)pH值。取樣間隔時(shí)間為3小時(shí)，發(fā)酵周期為42 50小時(shí)。
4、獲得菌液獲得的菌液呈土黃色至深褐色，較為粘稠，發(fā)酵液中液生孢子含量在4X 108/ml以上，菌體干重在1.5%以上。六、制劑及儲(chǔ)存I、發(fā)酵液的后處理經(jīng)生產(chǎn)罐發(fā)酵后的淡紫擬青霉菌在發(fā)酵罐中經(jīng)過充分?jǐn)嚢?，分散菌絲以及孢子，制備成菌懸液備用。2、混合物料將已經(jīng)充分溶解好的海藻酸鈉溶液與罐內(nèi)菌懸液按照I :1比例在攪拌罐中徹底攪拌混勻，隨即加入無菌娃藻土，混合均勻成為礦土溶液。將該礦土溶液加入準(zhǔn)備好的微球發(fā)生器內(nèi)，液滴自小孔滴出，形成海藻酸鈉微球。3、制備成品微球用無菌水沖洗，室溫條件下陰干，干燥至微球制劑含水量降至2%以下后包裝使用。4、成品的質(zhì)量所得微球中，每克微球制劑中有效成分含量> 107CFU/g制劑菌落數(shù)，微球制劑顆粒大小范圍為4± 1mm，千粒微球重量范圍為10-15克。5、產(chǎn)品的儲(chǔ)存采用塑料袋抽真空保存，本制劑在室溫條件下存放6個(gè)月后，制劑有效成分仍然保持活力。具體的操作參數(shù)及產(chǎn)品參數(shù)見表I。表I操作參數(shù)及產(chǎn)品參數(shù)
權(quán)利要求
1.一種粒狀淡紫擬青霉生物殺線蟲劑的制備方法，其包括如下步驟準(zhǔn)備菌株、制備菌種、第一次發(fā)酵、第二次發(fā)酵和造粒，其特征在于，所述制備菌種中采用的培養(yǎng)基的組成為蔗糖、酵母、MgSO4, KC1、ZnSO4 · 7H20和蒸餾水；所述第一次發(fā)酵中的培養(yǎng)基的組成為蔗糖、酵母、MgS04、KCl、ZnS04 · 7H20和蒸餾水；所述第二次發(fā)酵中的培養(yǎng)基的組成為蔗糖、酵母、MgSO4、KCl、ZnS04 · 7H20 和蒸餾水。
2.如權(quán)利要求I所述制備方法，所述制備菌種中采用搖瓶培養(yǎng)，其搖瓶裝量(150ml/500ml瓶、搖床轉(zhuǎn)速為150rpm、培養(yǎng)溫度為29 30°C、時(shí)間為72h。
3.如權(quán)利要求I或2所述制備方法，所述第一次發(fā)酵中的發(fā)酵罐的接種量為4%體積t匕，發(fā)酵罐的裝罐系數(shù)為O. 6-0. 7、溫度為27-29° C、攪拌速度為200_300rpm，發(fā)酵周期為45-54小時(shí)。
4.如權(quán)利要求I至3之一所述制備方法，所述第二次發(fā)酵中的發(fā)酵罐的接種量為4%體積比，發(fā)酵罐的裝罐系數(shù)為O. 6-0. 7、溫度為27-29° C、攪拌速度為200_300rpm，發(fā)酵周期為42-50小時(shí)。
5.如權(quán)利要求I至4之一所述制備方法，所述制備菌種中的培養(yǎng)基的組成為蔗糖15g，酵母 6. 12g, MgSO4 O. 5g, KCl O. 5g, ZnSO4 · 7H20 IOmg 和蒸餾水 1000ml ；pH=6. 5。
6.如權(quán)利要求I至5之一所述制備方法，所述第一次發(fā)酵中的培養(yǎng)基的組成為蔗糖15g，酵母 6. 12g, MgSO4O. 5g, KCl O. 5g, ZnSO4 · 7H20 IOmg 和蒸餾水 1000ml ；pH=6. 5。
7.如權(quán)利要求I至6之一所述制備方法，所述第二次發(fā)酵中的培養(yǎng)基的組成為蔗糖15g，酵母 6. 12g, MgSO4O. 5g, KCl O. 5g, ZnSO4 · 7H20 IOmg 和蒸餾水 1000ml ；pH=6. 5。
全文摘要
本發(fā)明提供一種粒狀淡紫擬青霉生物殺線蟲劑的制備方法，其包括如下步驟準(zhǔn)備菌株、制備菌種、第一次發(fā)酵、第二次發(fā)酵和造粒，所述方法中采用的培養(yǎng)基的組成為蔗糖、酵母、MgSO4、KCl、ZnSO4·7H2O和蒸餾水。通過對淡紫擬青霉生物殺線蟲劑制備方法中各種工藝條件的選擇，提供一種可大規(guī)模生產(chǎn)淡紫擬青霉生物殺線蟲劑的方法，獲得的淡紫擬青霉生物殺線蟲劑的袍子產(chǎn)量高、生產(chǎn)成本低。
文檔編號(hào)A01N63/04GK102960369SQ20121048011
公開日2013年3月13日 申請日期2012年11月22日 優(yōu)先權(quán)日2012年11月22日
發(fā)明者梁洪柱, 田會(huì)鵬, 陳倩, 李學(xué)燕 申請人:北京市西山試驗(yàn)林場