一種高效液相色譜法測(cè)定山核桃油中齊墩果酸、熊果酸含量的方法
【專利說明】 一種高效液相色譜法測(cè)定山核桃油中齊墩果酸、熊果酸含
量白勺方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001 ] 本發(fā)明涉及一種高效液相色譜法測(cè)定山核桃油中齊墩果酸、熊果酸含量的方法，所屬技術(shù)領(lǐng)域:二、生物與新醫(yī)藥技術(shù)(七)現(xiàn)代農(nóng)業(yè)技術(shù)4、農(nóng)產(chǎn)品精深加工與現(xiàn)代儲(chǔ)運(yùn):農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全評(píng)價(jià)、快速檢測(cè)、全程質(zhì)量控制等技術(shù)。
【背景技術(shù)】
[0002]HPLC是一項(xiàng)高壓、高效、高靈敏度的分離技術(shù)，可用于分離分析高沸點(diǎn)、相對(duì)分子量大、熱穩(wěn)定性差的有機(jī)化合物，廣泛應(yīng)用于化學(xué)、化工、高分子、生物、食品、醫(yī)藥等領(lǐng)域。
[0003]齊墩果酸、熊果酸主要存在于山核桃油及其油腳中，為五環(huán)三萜類化合物；性質(zhì)相近，難以分離；是一種活性成分；有保肝、消炎、抗腫瘤、降血脂、增強(qiáng)免疫和抑制免疫(免疫雙向調(diào)解作用)等作用。
[0004]目前這2種物質(zhì)還只能從植物中提取，無(wú)法化學(xué)合成；檢測(cè)方法有分光光度法、薄層掃描法和高效液相色譜法，前者通常采用顯色劑顯色后測(cè)定，由于他們性質(zhì)相近，分光光度法通常測(cè)得其三萜類總量，方法缺乏專屬性；而普通的薄層色譜很難使OA和UA分離；相比較而言，HPLC較容易實(shí)施兩者的分離，且紫外檢測(cè)相對(duì)于蒸發(fā)光散射檢測(cè)有較好的重現(xiàn)性。在現(xiàn)有可查范圍內(nèi)，利用HPLC同時(shí)測(cè)定山核桃油中齊墩果酸、熊果酸未見報(bào)道，采用反相高效液相色譜法二極管陣列檢測(cè)器測(cè)定了山核桃油中的齊墩果酸和熊果酸含量，旨在為評(píng)價(jià)山核桃油的質(zhì)量提供科學(xué)依據(jù)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于提供一種高效液相色譜法測(cè)定山核桃油中齊墩果酸、熊果酸含量的方法，從而準(zhǔn)確測(cè)定其含量，方法操作簡(jiǎn)單、靈敏度高、重現(xiàn)性好。
[0006]為了實(shí)現(xiàn)上述目的本發(fā)明采用如下技術(shù)方案:
[0007]一種高效液相色譜法測(cè)定山核桃油中齊墩果酸、熊果酸含量的方法，其特征在于包括以下步驟:
[0008](I)對(duì)照品溶液的制備精密稱取齊墩果酸對(duì)照品10.20mg、熊果酸對(duì)照品8.54mg，分別置1ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得齊墩果酸、熊果酸對(duì)照品貯備液。
[0009](2)樣品溶液的處理:取山核桃油樣品約1.0-2.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加甲醇25ml，密塞，稱定重量，超聲10-30min，浸漬0.5_lh，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；
[0010](3)將濾液過0.40-0.50 μ m微孔濾膜后，在實(shí)驗(yàn)色譜條件下進(jìn)行高效液相色譜法測(cè)定，得測(cè)定數(shù)值；所述的實(shí)驗(yàn)色譜條件為:色譜柱:C18柱，250X4.6mm，5ym;流動(dòng)相:265 %甲醇-35 %水-0.1 %冰乙酸-0.05 %三乙胺，其中，流動(dòng)相由甲醇265mL、水35mL、冰乙酸0.05mL和三乙胺0.05mL配置；紫外檢測(cè)器的檢測(cè)波長(zhǎng):210nm ;流動(dòng)相流速為0.6mL/min,柱溫20°C，進(jìn)樣體積為20 μ L ;
[0011](4)按照外標(biāo)法計(jì)算山核桃油中齊墩果酸、熊果酸的含量。
[0012]所述的高效液相色譜法測(cè)定山核桃油中齊墩果酸、熊果酸含量的方法，其特征在于:所述的實(shí)驗(yàn)色譜條件為:色譜柱:Cj±，250X4.6mm，5ym;流動(dòng)相:265%甲醇-35%水-0.1%冰乙酸-0.05%三乙胺，其中，流動(dòng)相由甲醇265mL、水35mL、冰乙酸0.05mL和三乙胺0.05mL配置；紫外檢測(cè)器的檢測(cè)波長(zhǎng):210nm ;流動(dòng)相流速為0.6mL/min，柱溫20°C，進(jìn)樣體積為20 μ L。
[0013]本發(fā)明的有益效果:本發(fā)明可準(zhǔn)確測(cè)定山核桃油中齊墩果酸、熊果酸的含量，方法操作簡(jiǎn)單、靈敏度高、重現(xiàn)性好:1、利用超聲波輔助提取技術(shù)，大大節(jié)約了提取時(shí)間；
2、流動(dòng)相中使用三乙胺，改善了目標(biāo)峰峰型，使峰拖尾情況大大改善；3、三萜分離檢測(cè)靈敏度高，穩(wěn)定性和重現(xiàn)性好，在一定范圍內(nèi)，2種三萜類物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)曲線線性關(guān)系良好(r2彡0.999)，三種物質(zhì)保留時(shí)間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)均小于0.06%，2種三萜含量測(cè)定相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)均小于0.4%，因此本發(fā)明的檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確。。
【附圖說明】
[0014]圖1本發(fā)明實(shí)施例2對(duì)照品中齊墩果酸、熊果酸的色譜圖，a齊墩果酸、b熊果酸。
[0015]圖2本發(fā)明實(shí)施例2山核桃油中齊墩果酸、熊果酸的色譜圖，a齊墩果酸、b熊果酸。
【具體實(shí)施方式】
[0016]實(shí)施例1:高效液相色譜法測(cè)定山核桃油中齊墩果酸、熊果酸含量的方法，包括以下步驟:
[0017](I)對(duì)照品溶液的制備精密稱取齊墩果酸對(duì)照品10.20mg、熊果酸對(duì)照品8.54mg，分別置1ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得齊墩果酸、熊果酸對(duì)照品貯備液。
[0018](2)樣品溶液的處理:取山核桃油樣品約0.5-1.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加甲醇25ml，密塞，稱定重量，超聲10-30min，浸漬0.5_lh，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得；
[0019](3)將濾液過0.40-0.50 μ m微孔濾膜后，在實(shí)驗(yàn)色譜條件下進(jìn)行高效液相色譜法測(cè)定，得測(cè)定數(shù)值；所述的實(shí)驗(yàn)色譜條件為:色譜柱:C18柱，250X4.6mm，5ym;流動(dòng)相:265 %甲醇-35 %水-0.1 %冰乙酸-0.05 %三乙胺，其中，流動(dòng)相由甲醇265mL、水35mL、冰乙酸0.05mL和三乙胺0.05mL配置；紫外檢測(cè)器的檢測(cè)波長(zhǎng):210nm ;流動(dòng)相流速為0.6mL/min,柱溫20°C，進(jìn)樣體積為20 μ L ;
[0020](4)按照外標(biāo)法計(jì)算山核桃油中齊墩果酸、熊果酸的含量。
[0021]所述的實(shí)驗(yàn)色譜條件為:色譜柱:C18柱，250X4.6mm，5ym;流動(dòng)相:265 %甲醇-35 %水-0.1 %冰乙酸-0.05 %三乙胺，其中，流動(dòng)相由甲醇265mL、水35mL、冰乙酸
0.05mL和三乙胺0.05mL配置；紫外檢測(cè)器的檢測(cè)波長(zhǎng):210nm ;流動(dòng)相流速為0.6mL/min，柱溫20°C，進(jìn)樣體積為20 μ L。
[0022]實(shí)施例2:本發(fā)明的具體實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù):
[0023]I儀器與試劑
[0024]儀器:1100高效液相色譜儀(包括G1311A泵、G1322脫氣機(jī)、G1313AZ自動(dòng)進(jìn)樣器、G1313A 柱溫箱、G1315 DAD ;Agilent 1100 ChemStat1n) ;BP221D 電子