一種硫酸魚精蛋白效價測定方法
【專利摘要】《中國藥典》2010年版規(guī)定硫酸魚精蛋白效價采用生物測定法，比較肝素標(biāo)準(zhǔn)品(S)與供試品(T)延長新鮮兔血或豬、兔血漿凝結(jié)時間的程度，以測定供試品的效價。兔血漿的市場價格昂貴，10元/支，每支0.5ml，測定一個硫酸魚精蛋白樣品，至少需要60支。本發(fā)明專利采用紫外分光光度計，550nm波長下測定溶液透光率，測定硫酸魚精蛋白的效價，操作不需要兔血漿，成本降低，而且操作更加方便快捷。
【專利說明】一種硫酸魚精蛋白效價測定方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體地說涉及硫酸魚精蛋白效價的測定。
【背景技術(shù)】
[0002]《中國藥典》2010年版附錄VIIJ硫酸魚精蛋白生物測定法，詳述了硫酸魚精蛋白效價的測定方法，通過兔血漿凝結(jié)狀況來判定其效價。具體操作方法如下:
[0003](I)肝素標(biāo)準(zhǔn)品溶液的配制稱取肝素標(biāo)準(zhǔn)品適量，按效價加0.9%氯化鈉溶液溶解使成幾種不同濃度的溶液。
[0004](2)硫酸魚精蛋白溶液的配制稱取硫酸魚精蛋白，加0.9%氣化納溶液,制成Img/ml的溶液。
[0005](3)檢定法取小試管8支，第I管和第8管為空白對照管，加入0.9%氯化鈉溶液0.2ml,第2?7管為供試品管,每管加入硫酸魚精蛋白溶液0.1ml,再每管分別加入上述一種濃度的肝素標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液0.1ml，立即混勻。然后分別于上述各管中加入0.7ml的血漿，置37±0.5°C恒溫水浴中預(yù)熱5?10分鐘，每管分別加入1%氯化鈣溶液0.1ml，立即混勻，避免產(chǎn)生氣泡，并開始計算時間。觀察并記錄各管凝結(jié)時間。
[0006]結(jié)果判斷兩支對照管的凝結(jié)時間相差不得超過1.35倍。在供試品管的凝結(jié)時間不超過兩支對照管平均凝結(jié)時間150%的各管中，以肝素濃度最高的一管作為終點管。同樣重復(fù)5次，5次試驗測得終點管的肝素濃度，相差不得大于10個單位。5次結(jié)果的平均值，即為硫酸魚精蛋白Img中和肝素的單位數(shù)。
[0007]檢驗中使用的兔血漿或是親自制備，或是花昂貴的價格購買，市場上血漿的價格約為10元/支，每支0.5ml,測定一個硫酸魚精蛋白樣品，重復(fù)5次,至少60支兔血衆(zhòng),600多元錢，檢驗成本很高。另外，操作復(fù)雜，耗時間長。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008]本發(fā)明的目是提供了一種硫酸魚精蛋白效價測定方法。
[0009]具體地，本發(fā)明的目的是提供的硫酸魚精蛋白效價測定方法，不適用兔血漿，檢驗實惠、操作方便、快捷。
[0010]本發(fā)明采用以下測定方法方案予以實現(xiàn)上述目的:
[0011](I)肝素標(biāo)準(zhǔn)品溶液的配制稱取肝素標(biāo)準(zhǔn)品，加0.9%氯化鈉溶液溶解使成不同效價濃度的肝素標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液。
[0012](2)硫酸魚精蛋白溶液的配制稱取硫酸魚精蛋白，加0.9 %氣化納溶液,稀釋成lmg/ml的溶液。
[0013](3)檢定法取試管，每管加入硫酸魚精蛋白溶液，再每管加入等體積的一種濃度的肝素標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液，靜置，取上清液，550nm波長下，測定每管混合液的透光率。
[0014]透光率最高管的肝素標(biāo)準(zhǔn)品的效價濃度數(shù)，即為硫酸魚精蛋白的效價。
[0015]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點和積極效果:[0016]經(jīng)過多次實驗，本發(fā)明測定的硫酸魚精蛋白的效價，與《中國藥典》2010年版規(guī)定的硫酸魚精蛋白生物測定法所測得的效價完全一致。但進行對比發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明的優(yōu)勢在于①使用的實驗試劑少，不需要兔血漿、氯化鈣，實驗成本低，；②操作快捷、時間短實驗所需的儀器少，不需要水浴鍋、秒表等。
【具體實施方式】
[0017]實施例1:
[0018](I)肝素標(biāo)準(zhǔn)品溶液的配制
[0019]稱取肝素標(biāo)準(zhǔn)品150.05mg,單位效價180iu/mg，加0.9 %氯化鈉溶液溶解使之成為不同效價濃度的肝素標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液各25ml，效價濃度分別為145iu/ml，150iu/ml，155iu/ml,160iu/ml,165iu/ml,170iu/mlo
[0020](2)硫酸魚精蛋白溶液的配制
[0021]稱取硫酸魚精蛋白122.52mg，批號110901，加0.9%氯化鈉溶液，稀釋成lmg/ml的溶液。
[0022](3)檢定法
[0023]取試管6支，每個試管中加入硫酸魚精蛋白溶液5ml，再在各個試管中分別加入5ml 的對應(yīng)濃度為 145iu/ml, 150iu/ml, 155iu/ml, 160iu/ml, 165iu/ml, 170iu/ml 肝素標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液，靜置，取上清液，500nm波長下，測定每管混合液的透光率，重復(fù)3次。
[0024]結(jié)果見下表:
[0025]
【權(quán)利要求】
1.一種硫酸魚精蛋白效價的測定方法，其特征在于包括使用肝素的氯化鈉溶液。
2.權(quán)利要求1所述的測定方法，其特征在于包括以下步驟: (1)肝素標(biāo)準(zhǔn)品溶液的配制 稱取肝素標(biāo)準(zhǔn)品，加氯化鈉溶液溶解使之成為不同效價濃度(iu/ml)的肝素標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液。 (2)硫酸魚精蛋白溶液的配制 稱取硫酸魚精蛋白待測樣品，加氣化納溶液，稀釋成硫Ife魚精蛋白溶液。 (3)檢定法取試管，每試管中分別加入步驟(2)中所得到的硫酸魚精蛋白溶液，再在每試管中分別加入上述步驟(I)中配制的不同效價濃度的肝素標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液，靜置，取上清液，測定每個試管中混合液的透光率，其中每個試管中的硫酸魚精蛋白溶液與肝素標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液的體積相等。 根據(jù)透光率最高的試管中的肝素標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液的效價濃度數(shù)所對應(yīng)的效價值，計算得出硫酸魚精蛋白樣品的單位效價(iu/mg)。
3.權(quán)利要求2所述的測定方法，其特征在于:所述步驟⑴和(2)中所用氯化鈉溶液的濃度為0.8質(zhì)量％ -1.2質(zhì)量％。
4.權(quán)利要求2所述的測定方法，其特征在于:所述步驟(2)中的硫酸魚精蛋白溶液的濃度為 0.6-1.2mg/ml。
5.權(quán)利要求4所述的測定方法，其特征在于:所述步驟(2)中的硫酸魚精蛋白溶液的濃度為lmg/ml。
6.權(quán)利要求2所述的測定方法，其特征在于:所述步驟(I)中的不同效價濃度的肝素標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液之間的效價濃度差可以相同或不同。
7.權(quán)利要求2所述的測定方法，其特征在于:所述步驟(I)中的不同效價濃度的肝素標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液之間的效價濃度差為3-8iu/ml。
8.權(quán)利要求2所述的測定方法，其特征在于:所述步驟(3)中測定透光率的光的波長為 400nm-600nm。
9.權(quán)利要求2所述的測定方法，其特征在于:所述步驟(I)中不同效價濃度的肝素標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液的效價濃度范圍為100iu/ml-200iu/ml。
【文檔編號】G01N21/59GK103604779SQ201310338351
【公開日】2014年2月26日 申請日期:2013年7月30日 優(yōu)先權(quán)日:2013年7月30日
【發(fā)明者】劉乃山, 葛翠鳳, 劉翠珍, 孫延年, 劉振海 申請人:青島九龍生物醫(yī)藥有限公司