專利名稱：一種硫酸魚精蛋白的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體地說涉及以適宜的魚類新鮮成熟精子為原料，提取硫酸魚精蛋白的工藝方法。
背景技術(shù)：
I.硫酸魚精蛋白的作用I)硫酸魚精蛋白體外循環(huán)心臟手術(shù)中不可或缺的、無法替代的對抗肝素的藥物，在心臟手術(shù)結(jié)束時(shí)，患者需要使用硫酸魚精蛋白，以解除抗凝，防止大出血，是必備的“救命藥”、“救心藥”。2)硫酸魚精蛋白與胰島素結(jié)合，延遲胰島素釋放，從而延長胰島素的降血糖作用，用來制造長效胰島素。 3)強(qiáng)壯和輔助治療男性不育。國內(nèi)外研究結(jié)果表明，硫酸魚精蛋白中的DNA能促進(jìn)細(xì)胞活化、強(qiáng)化生殖能力；精氨酸刺激垂體釋放性腺激素的作用。此外，硫酸魚精蛋白中含有較高的鋅，鋅鹽可使血漿睪酮水平與精子數(shù)目成倍增加。因此硫酸魚精蛋白DNA、精氨酸、鋅協(xié)同作用，治療因精子分泌不足和精子缺乏引起的男性不育癥。4)此外，硫酸魚精蛋白是一種廣譜、高效、安全的新型天然食品防腐劑。2、硫酸魚精蛋白傳統(tǒng)生產(chǎn)工藝硫Ife魚精蛋白的傳統(tǒng)生廣工藝，在魚的精子中，魚精蛋白通常以核Ife _蛋白質(zhì)的形態(tài)存在。即核蛋白結(jié)合鍵寬松不固，甚至易分開，所以可用硫酸使其分離，制成魚精蛋白硫酸鹽，反應(yīng)式如下核酸-蛋白質(zhì)+H2SO4 —魚精蛋白SO3+核酸+H2O利用硫酸魚精蛋白溶于水、不溶于乙醇，以及耐高溫的特性，而核酸微溶于水，不耐高溫的特性，聯(lián)合采用3體積％的硫酸提取、80-85°C溫水提取、(TC低溫處理以及有機(jī)溶劑乙醇沉淀生化技術(shù)，從而實(shí)現(xiàn)從魚精子中將魚精蛋白與核酸分離，純化得到硫酸魚精蛋白，硫酸魚精蛋白成品效價(jià)能夠達(dá)到135 iu/mg?！吨袊幍洹?010年版提高硫酸魚精蛋白的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，增加了比旋度(-65°至-85° )指標(biāo)要求。采用傳統(tǒng)的生產(chǎn)工藝，其比旋度僅能達(dá)到-30°，已不能滿足新藥典對硫酸魚精蛋白的質(zhì)量要求。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目是提供了一種硫酸魚精蛋白的制備方法。具體地，本發(fā)明的目的是提供了一種能夠提高硫酸魚精蛋白比旋度的方法。本發(fā)明采用以下工藝方案予以實(shí)現(xiàn)上述目的鮭魚的魚精，粉碎，加水提取，過濾，濾液加乙醇沉淀，得到硫酸魚精蛋白粗品，粗品再經(jīng)下述操作(I)硫酸提取工序
硫酸魚精蛋白粗品中，按I :2-1 7的比例加入3%硫酸溶液，攪拌2-3小時(shí)，過濾，取濾液；濾液按體積I :3-1 6的比例加乙醇，沉淀12小時(shí)后，過濾，固體稱重；(2)升溫提取工序按重量的I :2-1 8的比例加入水?dāng)嚢枞芙?，溶液加熱?0 79°C，保溫20 30分鐘，過濾取濾清液，量取濾液體積。按I :3-1 6的比例加乙醇沉淀，下層沉淀物稱重；按重量I :2-1 8的比例加水溶解，用氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH :7. 0-13.0，然后溶液加熱50 79°C，保溫20 30分鐘，過濾，取濾液；(4)低溫析出工序?yàn)V液2_15°C低溫處理，12小時(shí)后，傾去上層清液，析出油狀物，稱其重量； (5)干燥工序按重量I :2-1 8的比例加水溶解，溶解后，用硫酸調(diào)節(jié)pH :1. 0-6. 0，按I :3_1 6的比例加乙醇沉淀。12小時(shí)后，棄去上層乙醇，沉淀物用無水乙醇洗滌，2-3次，用五氧化二磷作吸水劑，真空干燥，干燥后即得精制品；與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和積極效果本發(fā)明在傳統(tǒng)生產(chǎn)工藝的基礎(chǔ)上，采用2體積％ -10體積％硫酸提取、50-79°C溫水提取、乙醇沉淀、以及2-15°C處理四種生化技術(shù)，從鮭魚中提純得到硫酸魚精蛋白。與傳統(tǒng)工藝相比，新生產(chǎn)技術(shù)的創(chuàng)新之處在于，工藝簡單，成本低，過程溫和，制得的硫酸魚精蛋白的比旋度能夠達(dá)到-72. 0°，滿足《中國藥典》2010年版的標(biāo)準(zhǔn)要求，同時(shí)，效價(jià)升高至約155iu/mg。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例I :鮭魚的魚精，粉碎，加水提取，過濾，濾液加乙醇沉淀，得到硫酸魚精蛋白粗品，粗品再經(jīng)下述操作(I)硫酸提取工序硫Ife魚精蛋白粗品300. 5g中，加入3體積硫酸溶液601ml，攬祥2小時(shí)，過濾，取濾液；濾液用95%乙醇1800ml沉淀，12小時(shí)后，棄去上層乙醇，下層沉淀物過濾，棄去濾液，固體稱重60g ；(2)升溫提取工序固體加240ml水?dāng)嚢枞芙猓芤豪^續(xù)加熱至65 °C，保溫30分鐘，過濾取濾清液，棄去濾渣，濾液量取體積240ml ；加入95%乙醇720ml沉淀，在次日棄去上層乙醇，下層沉淀物稱重55g ；沉淀物中加純化水220ml溶解，用5mol/L的氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH 11. 2，然后把溶液加熱65°C，保溫30分鐘，過濾，取濾液棄去濾渣；(4)低溫析出工序低溫10°C，靜置12小時(shí)后，傾去上層清液，析出油狀物，稱其重量50. 55g ；(5)干燥工序
油狀物中加純化水202. 2ml溶解，溶解后，用2. 5mol/L硫酸調(diào)節(jié)pH :3. 0，加95%乙醇610ml沉淀。再次日，棄去上層乙醇，沉淀物用無水乙醇洗滌2次，用五氧化二磷作吸水劑，真空干燥，干燥后即得精制品26. 52g。實(shí)施例2:將實(shí)施例I中的步驟(I)中的3體積％硫酸溶液變?yōu)?體積％硫酸溶液；將步驟(2)的溶液加熱溫度改為加熱至70°C ;將步驟(3)中的低溫處理溫度改為3°C，其他工藝條件與實(shí)施例I相同，最終得到精制品26. 78g。實(shí)施例3 將實(shí)施例I中的步驟(I)中的3體積％硫酸溶液變?yōu)?體積％硫酸溶液；將步驟
(2)的溶液加熱溫度改為加熱至75°C ;將步驟(3)中的低溫處理溫度改為14°C，其他工藝條件與實(shí)施例I相同，最終得到精制品27. 06g。傳統(tǒng)生產(chǎn)工藝青島康原藥業(yè)有限公司硫Ife魚精蛋白成品檢驗(yàn)報(bào)告單
權(quán)利要求
1.一種硫酸魚精蛋白的制備方法，其特征在于包括以下步驟 (1)硫酸提取工序 硫酸魚精蛋白粗品中加入硫酸溶液提取，過濾，提取液中加乙醇，沉淀，過濾取固體； (2)升溫提取工序 固體加水溶解，溶液加熱至50 79V，保溫，過濾，濾液用乙醇沉淀，過濾取固體,固體再加水溶解，調(diào)節(jié)PH，保溫50 79°C，過濾，取濾液； (3)低溫析出工序 濾液經(jīng)低溫處理，析出油狀物； (4)干燥工序 油狀物再加水溶解，調(diào)節(jié)PH，加乙醇沉淀，過濾，所得固體用無水乙醇洗滌，真空干燥即得硫Ife魚精蛋白。
2.根據(jù)權(quán)利要求書I所述的方法，其特征在于，步驟(I)中，所述硫酸溶液的體積濃度為2%至10% ;粗品與硫酸溶液的重量比為1:2至1:7 ;提取時(shí)間為1-4小時(shí)；提取液與乙醇的體積比為1:2至1:6。
3.根據(jù)權(quán)利要求書2所述的方法，其特征在于，步驟(I)中，所述硫酸溶液的體積濃度為4%至8% ;粗品與硫酸溶液的重量比為1:3至1:6 ;提取時(shí)間為2-3小時(shí)；提取液與乙醇的體積比為1:3至1:5。
4.根據(jù)權(quán)利要求書I所述的方法，其特征在于，步驟(2)中，固體與水的重量比均為1:2至1:8 ;濾液與乙醇的體積比為1:2至1:6 ;pH調(diào)節(jié)為7. 0-13.0。
5.根據(jù)權(quán)利要求書3所述的方法，其特征在于，步驟(2)中，固體與水的重量比均為1:4至1:6 ;濾液與乙醇的體積比為1:3至1:5 ;pH調(diào)節(jié)為8. 0-10. O。
6.根據(jù)權(quán)利要求書I所述的方法，其特征在于，步驟(3)中，所述低溫處理的溫度為2-15。。。
7.根據(jù)權(quán)利要求書I所述的方法，其特征在于，步驟(4)中，油狀物與水的重量比為1:2至1:8 ;pH調(diào)節(jié)至I. 0-6. 0 ;油狀物加水溶解后的體積與乙醇的體積比為1:2至1:6。
8.根據(jù)權(quán)利要求書7所述的方法，其特征在于，步驟(4)中，油狀物與水的重量比為1:4至1:6 ;pH調(diào)節(jié)至2. 0-4. 0 ;油狀物加水溶解后的體積與乙醇的體積比為1:3至1:5。
9.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，所述硫酸魚精蛋白粗品是通過以下步驟制備得到的將鮭魚的魚精粉碎，加水提取，過濾，濾液加乙醇沉淀，得到硫酸魚精蛋白粗品。
10.一種由權(quán)利要求1-9任意之一所述的方法制備得到的硫酸魚精蛋白。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種硫酸魚精蛋白的制備方法?！吨袊幍洹?010年版提高了硫酸魚精蛋白的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，增加了比旋度(-65°至-85°)指標(biāo)的要求。在魚的精子中，魚精蛋白通常以核酸-蛋白質(zhì)的形態(tài)存在。采用傳統(tǒng)的生產(chǎn)工藝，成品硫酸魚精蛋白中因含核酸雜質(zhì)，其比旋度僅能達(dá)到-30°，已不能滿足新藥典對硫酸魚精蛋白的質(zhì)量要求。本發(fā)明采用3%硫酸提取、50-79℃溫水提取、乙醇沉淀、以及低溫處理四種生化技術(shù)，以鮭魚的魚精為原料，制得硫酸魚精蛋白，其比旋度達(dá)到-72.0°。
文檔編號C07K1/30GK102796189SQ201210281599
公開日2012年11月28日 申請日期2012年8月9日 優(yōu)先權(quán)日2012年8月9日
發(fā)明者劉乃山, 葛翠鳳, 劉振海, 劉翠珍 申請人:青島康原藥業(yè)有限公司