一種用于治療乳腺癌的新的檸檬苦素類化合物的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于藥物技術(shù)領(lǐng)域，具體設(shè)及從積殼的干燥未成熟果實(shí)中分離得到的一種 具有治療乳腺癌作用的巧樣苦素類化合物及其制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 積殼為蕓香科植物酸澄（CitrusaurantiumL.)及其栽培變種的干燥未成熟果 實(shí)。7月果皮尚綠時(shí)采收，自中部橫切為兩半，曬干或低溫干燥。味苦、辛、酸。性微寒。歸 脾、胃經(jīng)。具有理氣寬中，行滯消脹之功效。用于胸脅氣滯，脹滿疼痛，食積不化，疲飲內(nèi)停， 臟器下垂。積殼是中藥典型的理氣藥之一，廣泛應(yīng)用于中醫(yī)臨床。
[0003] 積殼所含化學(xué)成分較為復(fù)雜，目前已知的有效成分主要有黃酬類、揮發(fā)油類、生物 堿類、香豆素類和一些微量元素等。積殼中黃酬類成分主要有：澄皮巧、新澄皮巧、抽皮巧、 抽皮蕓香巧、異抽皮巧、陳皮素、抽皮素、川陳皮素、紅橘素、5-0-去甲基川陳皮素、去甲川陳 皮素、澄黃酬、4'，5, 7, 8-四甲氧基黃酬、4-0-甲基黃琴素、3-徑基-3'，4'，5, 6, 7, 8-六甲氧 基黃酬和5, 6-二徑基-7, 4'-二甲氧基黃酬等。揮發(fā)油主要有巧樣締、芳精醇、2-十一燒酬、 丫-松油締。積殼中所含的生物堿類活性成分主要有辛弗林、N-甲基酪胺、酪胺、大麥芽堿 等。積殼中所含的香豆素類成分主要有葡萄內(nèi)醋、傘形花內(nèi)醋、異前胡素、馬明丙酬化合物、 潑朗弗林、異米拉素、花椒毒酪、5-異戊締氧基線巧喃香豆素、5-甲氧基線巧喃香豆素等。
[0004] 積殼中的澄皮巧具有抗炎、抗氧化、抗癌和保肝等作用；抽皮巧具有抗炎鎮(zhèn)痛、降 血糖等作用；川陳皮素具有抗炎，抗病毒，抗氧化等藥理作用；川陳皮素具有很好的抗腫瘤 的作用；抽皮素具有抗抑郁、保肝、抗氧化、改善大鼠學(xué)習(xí)記憶障礙、抗血小板聚集的作用。 積殼揮發(fā)油的主要成分是巧樣締。在臨床上，巧樣締膠囊已上市，主要用于膽囊炎、膽管炎、 膽結(jié)石和膽道術(shù)后綜合征等的治療。在積殼揮發(fā)油中，另一重要成分為芳精醇，具有防腐、 抗菌、抗病毒和鎮(zhèn)靜等作用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供一種從積殼的干燥未成熟果實(shí)中分離得到的一種具有治療 乳腺癌作用的巧樣苦素類化合物及其制備方法。
[0006] 本發(fā)明的上述目的是通過(guò)下面的技術(shù)方案得W實(shí)現(xiàn)的：
[0007] 具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物（I)，
[0008]
[0009] 所述的化合物（I)的制備方法，包含W下操作步驟：(a)將積殼的干燥未成熟果 實(shí)粉碎，用75~85 %乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無(wú)醇味，依次用石油酸、乙酸乙 醋和水飽和的正下醇萃取，分別得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃取物；化） 步驟（a)中乙酸乙醋萃取物用大孔樹脂除雜，先用10%乙醇洗脫8個(gè)柱體積，再用75%乙 醇洗脫10個(gè)柱體積，收集75%乙醇洗脫液，減壓濃縮得75%乙醇洗脫物浸膏；（C)步驟化） 中75 %乙醇洗脫浸膏用正相硅膠分離，依次用體積比為80:1、45:1、25:1、10:1和1:1的二 氯甲燒-甲醇梯度洗脫得到5個(gè)組分；（d)步驟（C)中組分4用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次 用體積比為15:1、10:1和5:1的二氯甲燒-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；（e)步驟（d)中 組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為75%的甲醇水溶液等度洗 脫，收集8~12個(gè)柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到純的化合物（I)。
[0010] 進(jìn)一步地，所述大孔樹脂為Dioi大孔吸附樹脂。
[0011] 進(jìn)一步地，所述用乙醇熱回流提取采用的乙醇濃度為80 %。
[0012] 一種藥物組合物，其中含有治療有效量的所述的化合物（I)和藥學(xué)上可接受的 載體。
[0013] 所述的化合物（I)在制備治療乳腺癌的藥物中的應(yīng)用。
[0014] 所述的藥物組合物在制備治療乳腺癌的藥物中的應(yīng)用。
[0015] 本發(fā)明化合物用作藥物時(shí)，可W直接使用，或者W藥物組合物的形式使用。
[0016] 該藥物組合物含有治療有效量的本發(fā)明化合物（I)，其余為藥物學(xué)上可接受的、 對(duì)人和動(dòng)物無(wú)毒和惰性的可藥用載體和/或賦形劑。
[0017] 所述的可藥用載體或賦形劑是一種或多種選自固體、半固體和液體稀釋劑、填料 W及藥物制品輔劑。將本發(fā)明的藥物組合物W單位體重服用量的形式使用。本發(fā)明藥物可 通過(guò)口服或注射的形式施用于需要治療的患者。用于口服時(shí)，可將其制成片劑、緩釋片、控 釋片、膠囊、滴丸、微丸、混懸劑、乳劑、散劑或顆粒劑、口服液等；用于注射時(shí)，可制成滅菌的 水性或油性溶液、無(wú)菌粉針、脂質(zhì)體或乳劑等。
【附圖說(shuō)明】 陽(yáng)〇1引圖1為化合物（I)結(jié)構(gòu)式；
[0019] 圖2為化合物（I)理論ECD值與實(shí)驗(yàn)ECD值比較；
[0020] 圖3為不同劑量化合物（I)對(duì)乳腺癌細(xì)胞增殖活力的影響；
[0021] 圖4為不同劑量化合物（I)對(duì)乳腺癌細(xì)胞調(diào)亡的影響。
【具體實(shí)施方式】
[0022] 下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但并不W此限定本發(fā)明保護(hù)范 圍。盡管參照較佳實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作了詳細(xì)說(shuō)明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可W對(duì) 本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實(shí)質(zhì)和范圍。 陽(yáng)02引實(shí)施例1 :化合物（I)分離制備及結(jié)構(gòu)確證
[0024] 試劑來(lái)源：乙醇、石油酸、乙酸乙醋、正下醇、二氯甲燒為分析純，購(gòu)自上海凌峰化 學(xué)試劑有限公司，甲醇，分析純，購(gòu)自江蘇漢邦化學(xué)試劑有限公司。
[00巧]制備方法：（a)將積殼的干燥未成熟果實(shí)（IOkg)粉碎，用80%乙醇熱回流提取 (2化X3次），合并提取液，濃縮至無(wú)醇味（3L)，依次用石油酸（化X3次）、乙酸乙醋0LX3 次）和水飽和的正下醇（化X3次）萃取，分別得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物（431g) 和正下醇萃取物；(b)步驟（a)中乙酸乙醋萃取物用DlOl大孔樹脂除雜，先用10%乙醇洗 脫8個(gè)柱體積，再用75 %乙醇洗脫10個(gè)柱體積，收集75 %乙醇洗脫液，減壓濃縮得75 %乙 醇洗脫物浸膏（172g) ;(c)步驟化）中75%乙醇洗脫浸膏用正相硅膠分離，依次用體積比 為80:1 (8個(gè)柱體積）、45:1 (8個(gè)柱體積）、25:1 (8個(gè)柱體積）、10:1 (10個(gè)柱體積）和1:1 (5 個(gè)柱體積）的二氯甲燒-甲醇梯度洗脫得到5個(gè)組分；（d)步驟（C)中組分4 (65g)用正相 硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為15:1 (8個(gè)柱體積）、10:1 (10個(gè)柱體積）和5:1 (8個(gè)柱體 積）的二氯甲燒-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；（e)步驟（d)中組分2 (37g)用十八烷基娃 燒鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為75%的甲醇水溶液等度洗脫，收集8-12個(gè)柱體 積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到純的化合物（I)(45mg)。 陽(yáng)0%] 結(jié)構(gòu)確證：白色無(wú)定形粉末。HR-ESIMS顯示[M+Na]+為m/z463. 2110,結(jié)合核磁 特征可得分子式為〔2班32〇6,不飽和度為11。核磁共振氨譜數(shù)據(jù)5H(ppm，DMS0-de，500MHz):H-I(6. 68,d，J= 12. 5)，H-2 (5. 79,d，J= 12. 5)，H-5 (2. 22,dd，J= 13. 2,4. 0)，H-6 (1. 77， dd，J= 16. 0,4. 0)，H-6 (I. 57,ddd，J= 16. 0,13. 2,4. 0)，H-7 (4. 54,s)，H-9 (2. 53,d， J= 4. 0)，71，q，J= 4. 0)，H-12(3. 42,t，J= 6.W，H-15(4. 44,q，J= 3.W， H-16 (I. 55,ddd，J= 12. 0,10. 5, 3.W，H-16 (I. 64,dt，J= 12. 0, 5.W，H-17 (3. 19,dd，J =10. 5, 5. 5)，H-18 (0. 55,s)，H-19 (I. 26,s)，H-21 (7. 25,s)，H-22 化.34,s)，H-23 (7. 37， s)，H-28(l. 18，s)，H-29(1.29，s)，H-30(1.42，s)，15-0H(4. 73，d，J= 3. 5);核磁共振碳譜 數(shù)據(jù) 5C(卵m，DMSO-de，125MHz) : 15