聚胸腺嘧啶模板、基于聚胸腺嘧啶模板的熒光銅納米簇及其制備方法、atp的檢測方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及納米材料以及分子檢測領(lǐng)域，具體涉及一種聚胸腺嘧啶模板、一種基 于聚胸腺嘧啶模板的熒光銅納米簇及其制備方法、和一種ATP的檢測方法。
【背景技術(shù)】
[0002] ATP對許多酶的活性有著重要影響，其增加或減少都會引起各種疾病，如低氧、低 血糖、帕金森癥以及惡性腫瘤等。因此，ATP的簡單快速檢測對相關(guān)疾病的治療是至關(guān)重要 的。目前檢測ATP的方法主要是采用熒光素和熒光素酶檢測。雖然其檢測精度高，但成本 高昂，而且步驟相對復(fù)雜，不適合快速檢測。
[0003] 因此，有必要提供一種成本低，而且簡單易行，能快速、高靈敏檢測ATP的方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 為解決上述問題，本發(fā)明提供了一種聚胸腺嘧啶模板及其應(yīng)用。本發(fā)明還提供了 一種基于聚胸腺嘧啶模板的熒光銅納米簇及其制備方法和應(yīng)用。本發(fā)明還提供了一種ATP 的檢測方法。
[0005] 本發(fā)明提供的聚胸腺嘧啶模板能用于制備熒光銅納米簇；且制備成本低、操作簡 便。本發(fā)明提供的ATP的檢測方法在生物醫(yī)學(xué)研究和疾病早期診斷方面具有廣闊的應(yīng)用價 值，不僅成本低，而且檢測步驟簡單易行，現(xiàn)象明顯，易于觀察，能快速、高靈敏檢測樣品中 ATP的濃度。
[0006] 本發(fā)明所述"ATP"是指三磷酸腺苷。
[0007] 本發(fā)明所述"DNA"是指脫氧核糖核苷酸。
[0008] 本發(fā)明所述的"A"、"T"、"C"、"G"、"U"分別為腺嘌呤、胸腺嘧啶、胞嘧啶、鳥嘌呤、 胞嘧啶。
[0009] 本發(fā)明所述的" (Y)n"表示n個Y序列，Y為腺嘌呤（A)、胸腺嘧啶（T)、胞嘧啶（C) 或鳥嘌呤（G)。
[0010] 第一方面，本發(fā)明提供了一種聚胸腺嘧啶模板，所述聚胸腺嘧啶模板為單鏈DNA 序列，所述聚胸腺嘧啶模板包括至少一個聚胸腺嘧啶序列，所述聚胸腺嘧啶序列為（T)n，其 中，所述n的取值范圍為15~40之間的自然數(shù)。
[0011] 具體地，本發(fā)明所述的"⑴n"表示n個T序列。
[0012] 具體地，當(dāng)n為25時，所述聚胸腺嘧啶序列為⑴25,所述⑴25的序列如SEQID NO: 1所示。
[0013] 優(yōu)選地，所述聚胸腺啼陡模板還包括至少一個聚胞啼陡序列。
[0014] 進(jìn)一步優(yōu)選地，所述聚胞嘧啶序列為"（C)m"，所述m的取值范圍為5~20之間的 自然數(shù)。
[0015] 具體地，當(dāng)n為10時，所述聚胞嘧啶序列為（C)n為（C) 10,所述（C) 10的序列如 SEQIDNO: 2 所示。
[0016] 進(jìn)一步優(yōu)選地，所述聚胸腺啼陡模板中，所述聚胞啼陡序列和所述聚胸腺啼陡序 列依次間隔排列，且所述聚胞嘧啶序列的兩側(cè)為所述聚胸腺嘧啶序列。
[0017] 更進(jìn)一步優(yōu)選地，所述聚胞嘧啶序列的重復(fù)次數(shù)為1~3次。
[0018] 具體地，當(dāng)所述聚胞嘧啶序列的重復(fù)次數(shù)為1次時，所述聚胸腺嘧啶模板的序列 如SEQIDNO: 3 所示。
[0019] 具體地，當(dāng)所述聚胞嘧啶序列的重復(fù)次數(shù)為2次時，所述聚胸腺嘧啶模板的序列 如SEQIDNO:4 所示。
[0020] 優(yōu)選地，所述聚胸腺嘧啶模板還包括至少一個聚鳥嘌呤序列。
[0021] 進(jìn)一步優(yōu)選地，所述聚鳥嘌呤序列為"（G)q"，所述q的取值范圍為5~20之間的 自然數(shù)。
[0022] 進(jìn)一步優(yōu)選地，所述聚胸腺嘧啶模板中，所述聚胞嘧啶序列和所述聚鳥嘌呤序列 依次間隔排列，且所述聚鳥嘌呤序列的兩側(cè)為所述聚胸腺嘧啶序列。
[0023] 更進(jìn)一步優(yōu)選地，所述聚鳥嘌呤序列的重復(fù)次數(shù)為1~3次。
[0024] 優(yōu)選地，所述聚胸腺嘧啶模板還包括至少一個10~20個堿基長度的隨機序列。
[0025] 進(jìn)一步優(yōu)選地，所述聚胸腺啼陡模板中，所述聚胞啼陡序列和所述隨機序列依次 間隔排列，且所述隨機序列的兩側(cè)為所述聚胸腺嘧啶序列。
[0026] 更進(jìn)一步優(yōu)選地，所述隨機序列的重復(fù)次數(shù)為1~3次。
[0027] 在此優(yōu)選條件下，所述聚胸腺嘧啶模板的序列優(yōu)選為如SEQIDNO:6、SEQIDNO:7 或SEQIDNO:8 所示。
[0028] 優(yōu)選地，所述聚胸腺嘧啶模板的5'端連接有生物素標(biāo)記或鏈霉親和素標(biāo)記。
[0029] 在此在此優(yōu)選條件下，所述生物素標(biāo)記或鏈霉親和素標(biāo)記通過行業(yè)內(nèi)常規(guī)操作修 飾在聚胸腺嘧啶模板的5'端。
[0030] 在此優(yōu)選條件下，所述聚胸腺嘧啶模板的序列優(yōu)選為T25-biotin，其中，所述T25 的序列如SEQIDNO: 1所示。
[0031] 具體的，所述T25-biotin表示在SEQIDNO: 1所示序列的5'端標(biāo)記生物素標(biāo)簽。
[0032] 本發(fā)明提供的標(biāo)記有生物素或鏈霉親和素的聚胸腺嘧啶模板不僅可以用于制備 熒光銅納米簇，還可以用于純化、富集、觀察所制備的熒光銅納米簇，方便所制備的熒光銅 納米簇的應(yīng)用，在制備ATP檢測試劑盒中具有較大的應(yīng)用價值。
[0033] 本發(fā)明提供的聚胸腺嘧啶模板選用15~40bp的寡聚胸腺嘧啶DNA單鏈序列作為 制備熒光銅納米簇的模板，制得的銅納米顆粒與DNA單鏈結(jié)合緊密，熒光穩(wěn)定性較雙鏈更 高，能在1小時之內(nèi)保持穩(wěn)定的熒光發(fā)光；其次，所制備的熒光銅納米簇即使在無熒光儀精 確定量的情況下也可在紫外燈下看出明顯的現(xiàn)象，使得醫(yī)療、實驗等檢測工作更加簡便、適 用性更高；此外，寡聚胸腺嘧啶DNA單鏈成本相對于雙鏈更加低廉，采用本發(fā)明提供的聚胸 腺嘧啶模板制備ATP檢測試劑盒能降低生產(chǎn)成本。
[0034] 第二方面，本發(fā)明提供了一種如第一方面所述的聚胸腺嘧啶模板在制備熒光銅納 米簇、檢測ATP或制備檢測ATP的試劑盒中的應(yīng)用。
[0035] 第三方面，本發(fā)明提供了一種基于聚胸腺嘧啶模板的熒光銅納米簇的制備方法， 包括如下步驟：
[0036] 1)提供聚胸腺嘧啶模板、還原劑、和含Cu2+的溶液，其中，所述聚胸腺嘧啶模板為 單鏈DNA序列，所述聚胸腺嘧啶模板包括至少一個聚胸腺嘧啶序列，所述聚胸腺嘧啶序列 為（T)n，其中，所述n的取值范圍為15~40之間的自然數(shù)；
[0037] 2)將步驟⑴所述聚胸腺嘧啶模板、還原劑、和含Cu2+的溶液加入到緩沖溶液中， 輕微混勻并反應(yīng)，得到所述基于聚胸腺嘧啶模板的熒光銅納米簇，其中，所述聚胸腺嘧啶模 板和Cu2+的摩爾比為1:100~1 :500。
[0038] 優(yōu)選地，所述步驟（1)中，所述聚胸腺嘧啶模板還包括至少一個聚胞嘧啶序列。
[0039] 進(jìn)一步優(yōu)選地，所述聚胞嘧啶序列為"（C)m"，所述m的取值范圍為5~20之間的 自然數(shù)。
[0040] 具體地，當(dāng)n為10時，所述聚胞嘧啶序列為（C)n為（C) 10,所述（C) 10的序列如 SEQIDNO:2 所示。
[0041] 進(jìn)一步優(yōu)選地，所述聚胸腺啼陡模板中，所述聚胞啼陡序列和所述聚胸腺啼陡序 列依次間隔排列，且所述聚胞嘧啶序列的兩側(cè)為所述聚胸腺嘧啶序列。
[0042] 更進(jìn)一步優(yōu)選地，所述聚胞嘧啶序列的重復(fù)次數(shù)為1~3次。
[0043] 具體地，當(dāng)所述聚胞嘧啶序列的重復(fù)次數(shù)為1次時，所述聚胸腺嘧啶模板的序列 如SEQIDNO: 3 所示。
[0044] 具體地，當(dāng)所述聚胞嘧啶序列的重復(fù)次數(shù)為2次時，所述聚胸腺嘧啶模板的序列 如SEQIDNO:4 所示。
[0045] 優(yōu)選地，所述步驟（1)中，所述聚胸腺啼陡模板還包括至少一個聚鳥嘌呤序列。
[0046] 進(jìn)一步優(yōu)選地，所述聚鳥嘌呤序列為"（G)q"，所述q的取值范圍為5~20之間的 自然數(shù)。
[0047] 進(jìn)一步優(yōu)選地，所述聚胸腺嘧啶模板中，所述聚胞嘧啶序列和所述聚鳥嘌呤序列 依次間隔排列，且所述聚鳥嘌呤序列的兩側(cè)為所述聚胸腺嘧啶序列。
[0048] 更進(jìn)一步優(yōu)選地，所述聚鳥嘌呤序列的重復(fù)次數(shù)為1~3次。
[0049] 優(yōu)選地,所述步驟（1)中，所述聚胸腺啼陡模板還包括至少一個10~20個堿基長 度的隨機序列。
[0050] 進(jìn)一步優(yōu)選地，所述聚胸腺啼陡模板中，所述聚胞啼陡序列和所述隨機序列依次 間隔排列，且所述隨機序列的兩側(cè)為所述聚胸腺嘧啶序列。
[0051] 更進(jìn)一步優(yōu)選地，所述隨機序列的重復(fù)次數(shù)為1~3次。
[0052] 在此優(yōu)選條件下，所述聚胸腺嘧啶模板的序列優(yōu)選為如SEQIDNO:6、SEQIDNO:7 或SEQIDNO:8 所示。
[0053] 優(yōu)選地，所述步驟（1)中，所述聚胸腺嘧啶模板的5'端連接有生物素標(biāo)記或鏈霉 親和素標(biāo)記。
[0054] 在此在此優(yōu)選條件下，所述生物素標(biāo)記或鏈霉親和素標(biāo)記通過行業(yè)內(nèi)常規(guī)操作修 飾在聚胸腺嘧啶模板的5'端。
[0055] 在此優(yōu)選條件下，所述聚胸腺嘧啶模板的序列優(yōu)選為T25-biotin，其中，所述T25 的序列