者對(duì)照組（組l)miR-486的表達(dá)量為0. 012846±0. 011028, IgA腎病 組(組2)為0. 272673±0. 527395, IgA腎病組miR-486的表達(dá)量顯著高于健康者對(duì)照組，p < 0· 001。
[0156] 圖5, IgA腎病組（組l)miR-25的表達(dá)量為0. 239375±0. 3035597,而非IgA型腎 病的腎病患者對(duì)照組(組2)為0. 064979±0. 051222, IgA腎病組miR-25的表達(dá)量顯著高于 非IgA型腎病的腎病患者對(duì)照組，p < 0. 001。
[0157] 圖6, IgA腎病組(組l)miR-144的表達(dá)量為0. 124129±0. 246618,而非IgA型腎 病的腎病患者對(duì)照組(組2)為0. 029361 ±0. 062052, IgA腎病組miR-144的表達(dá)量顯著高 于非IgA型腎病的腎病患者對(duì)照組，p=0. 003。
[0158] 圖7, IgA腎病組(組l)miR-486的表達(dá)量為0. 272673±0. 527395,而非IgA型腎 病的腎病患者對(duì)照組(組2)為0. 050362±0. 058641，IgA腎病組miR-486的表達(dá)量顯著高 于非IgA型腎病的腎病患者對(duì)照組，p < 0. 001。
[0159] 如圖2-7可知，IgA腎病組miR-25、miR-144以及miR-486三個(gè)指標(biāo)的表達(dá)量均顯 著高于健康者對(duì)照組和非IgA型腎病的腎病患者對(duì)照組，其升高與IgA腎病預(yù)警有很強(qiáng)關(guān) 聯(lián)，可以作為IgA腎病特異性預(yù)警指標(biāo)。
[0160] 7) miRNA表達(dá)量的ROC曲線分析：
[0161] 利用SPSS軟件，將miRNA-25、miRNA-144以及miRNA-486三個(gè)指標(biāo)聯(lián)合做IgA腎 病預(yù)警價(jià)值的ROC曲線分析，結(jié)果如圖8和下面表1所示。
[0162] 表1miRNA表達(dá)量的ROC曲線分析統(tǒng)計(jì)表
[0163]
[0164]
[0165] 從圖8和表1可知：
[0166] 當(dāng)miRNA-25的表達(dá)量高于0.058 (臨界值）時(shí)，此時(shí)預(yù)警IgA腎病的敏感性為 81. 3%，特異性為100% ;
[0167] 和/或，miRNA-144的表達(dá)量高于0. 007 (臨界值)時(shí)，此時(shí)預(yù)警IgA腎病的敏感性 為80%，特異性為100%;
[0168] 和/或，miRNA-486的表達(dá)量高于0. 025 (臨界值)時(shí)，此時(shí)預(yù)警IgA腎病的敏感性 為93. 8%，特異性為90. 9%。
[0169] AUC (曲線下面積）可以評(píng)價(jià)預(yù)警的準(zhǔn)確性，即AUC越大，預(yù)警正確的準(zhǔn)確性越高。 ROC曲線下面積值在I. 0和0. 5之間，當(dāng)面積值在0. 9以上時(shí)有很好的準(zhǔn)確性。本發(fā)明的 ROC曲線下面積值皆在0. 9以上，表明本發(fā)明具有很好的準(zhǔn)確性，可信度非常高。
[0170] 95%CI指AUC的95%置信區(qū)間，即AUC落在這一范圍內(nèi)的可能性為95%，可知本發(fā) 明的準(zhǔn)確性非?？煽?。
[0171] P值就是用于判斷錯(cuò)誤的概率，一般認(rèn)為P值小于0. 05,即為小概率事件，它在 一次試驗(yàn)中幾乎不可能發(fā)生，就可以認(rèn)為判斷是正確的。本發(fā)明的P值均小于0. 0001，即 為本發(fā)明預(yù)警該患者為IgA型腎病，而該患者實(shí)際上不是(犯錯(cuò)誤）IgA型腎病的機(jī)率小于 0.01%，幾乎不可能發(fā)生，說(shuō)明本發(fā)明判斷的準(zhǔn)確性非常高。
[0172] 本發(fā)明還將上述三個(gè)miRNA :miRNA-25、miRNA-144以及miRNA-486表達(dá)量的聯(lián)合 指標(biāo)進(jìn)行ROC曲線分析，結(jié)果如圖9和下面表2所示。
[0173] 表2miRNA表達(dá)量的聯(lián)合指標(biāo)的ROC曲線分析統(tǒng)計(jì)表
[0174]
[0175] 從圖9和表2可知：
[0176] 當(dāng)三個(gè)miRNA :miRNA-25、miRNA-144以及miRNA-486表達(dá)量的三個(gè)聯(lián)合指標(biāo)一起 檢測(cè)時(shí)，當(dāng)上述三個(gè)聯(lián)合指標(biāo)中有一個(gè)高于它們各自的臨界值，即可預(yù)警IgA腎病，而且通 過(guò)聯(lián)合可進(jìn)一步提高預(yù)警的敏感性至89. 9%，而預(yù)警的特異性為100%。因此，本發(fā)明可以提 供一種非常準(zhǔn)確的預(yù)警IgA腎病的檢測(cè)方法。
[0177] 從圖2-4中可知，用熒光定量PCR檢測(cè)尿沉渣miRNA時(shí)，IgA腎病患者miRNA-25、 miRNA-144和miRNA-486的表達(dá)量顯著高于健康者對(duì)照組，p < 0. 001，差異具有顯著的統(tǒng) 計(jì)學(xué)意義。
[0178] 從圖5-7中可知，用熒光定量PCR檢測(cè)尿沉渣miRNA時(shí)，IgA腎病患者miRNA-25、 miRNA-144和miRNA-486的表達(dá)量顯著高于非IgA型腎病的腎病患者對(duì)照組(膜性腎病，系 膜增殖性腎炎，微小病變腎病，局灶節(jié)段性腎小球硬化，膜增生性腎小球腎炎)，P < 〇. 001， 差異具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
[0179] 圖2-7表明，尿沉渣中IgA腎病組miRNA-25、miRNA-144和miRNA-486的表達(dá)量不 僅顯著高于健康者對(duì)照組，而且顯著高于非IgA型腎病的腎病患者對(duì)照組，是IgA腎病特異 性的 miRNAs。
[0180] 為了分別找到三個(gè)指標(biāo)預(yù)警IgA腎病的臨界值(或閾值)，及其對(duì)應(yīng)的敏感性和特 異性，將三個(gè)miRNAs的表達(dá)量帶入ROC曲線分析，可得圖8和表1。從圖8和表1中可知， 上述三個(gè)指標(biāo)分別單獨(dú)預(yù)警IgA腎病時(shí)，均有較好的敏感性和特異性，其中miRNA-25的敏 感性為81. 3%，特異性為100% ;miRNA-144的敏感性為80%，特異性為100% ;miRNA-486的敏 感性為93. 8%，特異性為90. 9%。且預(yù)警的準(zhǔn)確性較高（AUC > 0. 9)。
[0181] 由于發(fā)現(xiàn)miRNA-25和miRNA-144預(yù)警IgA腎病的特異性非常好（為100%)，而敏 感性相對(duì)較差，為了提高本發(fā)明預(yù)警IgA腎病的敏感性，提高預(yù)警效率，本發(fā)明的遂進(jìn)行了 并聯(lián)實(shí)驗(yàn)(聯(lián)合檢測(cè))，即當(dāng)上述三個(gè)指標(biāo)中有一個(gè)高于它們各自的臨界值，即可預(yù)警IgA腎 病。從圖9和表2可知，通過(guò)聯(lián)合檢測(cè)三個(gè)指標(biāo)，可將預(yù)警的敏感性進(jìn)一步提高至89. 9%， 而預(yù)警的特異性仍為1〇〇%。因此，本發(fā)明可以提供一種非常準(zhǔn)確的預(yù)警IgA腎病的檢測(cè)方 法。
[0182] 實(shí)施例2
[0183] 為進(jìn)一步檢驗(yàn)本發(fā)明的實(shí)用性和準(zhǔn)確性，發(fā)明人隨機(jī)抽取新入院未行腎組織活檢 (即將要做)的腎病患者10人，及性別、年齡匹配的健康者10人，隨機(jī)編號(hào)，參照實(shí)施例1的 技術(shù)方案進(jìn)行檢測(cè)，預(yù)警出IgA型腎病患者6人。待起一周后腎組織活檢結(jié)果出來(lái)，IgA型腎 病患者也為6人，與本發(fā)明預(yù)警的結(jié)果完全一致，而其它4名非IgA型腎病的腎病患者(膜 性腎病2人，微小病變腎病1人，局灶節(jié)段性腎小球硬化1人)與10名健康者的上述miRNAs 表達(dá)量差異無(wú)顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。由此，進(jìn)一步表明本發(fā)明的實(shí)用性強(qiáng)，準(zhǔn)確性高。
[0184] 以上所述僅為本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例而已，并不用于限制本發(fā)明，對(duì)于本領(lǐng)域的技 術(shù)人員來(lái)說(shuō)，本發(fā)明可以有各種更改和變化。凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修 改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種用于IgA腎病檢測(cè)方法的建立，其特征在于，包括： S10、采集IgA型腎病患者、非IgA型腎病的腎病患者以及健康者的尿液； S20、檢測(cè)尿液中miRNA的表達(dá)量； S30、利用2_A 相對(duì)定量法比較所述miRNA的表達(dá)量； S40、對(duì)所述miRNA的表達(dá)量進(jìn)行ROC曲線分析。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于IgA腎病檢測(cè)方法的建立，其特征在于，所述miRNA為 miRNA-25、miRNA-144 以及 miRNA-486 中的至少一種。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的用于IgA腎病檢測(cè)方法的建立，其特征在于，檢測(cè)所述 miRNA-25、miRNA-144以及miRNA-486的表達(dá)量是通過(guò)選自熒光定量PCR、Taqman探針以及 LightCycle探針中的至少一種方法進(jìn)行的。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的用于IgA腎病檢測(cè)方法的建立，其特征在于，所述熒光定量 PCR 為 SYBR Green 熒光定量 PCR。5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的用于IgA腎病檢測(cè)方法的建立，其特征在于， MiRNA-25 的引物為：CAUUGCACUU⑶CUCGGUCUGA ; 和 / 或，MiRNA-144 的引物為：UACAGUAUAGAUGAUGUACU ; 和 / 或，MiRNA-486 的引物為：UCCUGUACUGAGCUGCCCCGAG。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的用于IgA腎病檢測(cè)方法的建立，其特征在于，還包括管家基因 的引物為：AAAGCAGGCUUUAAAGGAACCU。7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的用于IgA腎病檢測(cè)方法的建立，其特征在于，所述miRNA-25 的臨界值為〇. 058 ; 和/或，所述miRNA-144的臨界值為0. 007 ; 和/或，所述miRNA-486的臨界值為0. 025。8. -種用于IgA腎病檢測(cè)的方法，其特征在于，所述方法是根據(jù)權(quán)利要求1~7中任一 項(xiàng)所述的方法建立的方法，包括以下步驟： 米集尿液； 檢測(cè)尿液中miRNA-25、miRNA-144以及miRNA-486中至少一個(gè)的表達(dá)量； 判斷miRNA-25、miRNA-144或miRNA-486的表達(dá)量是否高于其各自的所述臨界值。9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的用于IgA腎病檢測(cè)的方法，其特征在于，所述熒光定量PCR為 SYBR Green 熒光定量 PCR。10. -種用于IgA腎病檢測(cè)的系統(tǒng)，其特征在于，所述用于IgA腎病檢測(cè)的系統(tǒng)利用權(quán) 利要求8或9所述的用于IgA腎病檢測(cè)的方法進(jìn)行檢測(cè)，所述系統(tǒng)包括： 尿液采集裝置，以采集尿液； miRNA檢測(cè)裝置，以檢測(cè)尿液中miRNA的表達(dá)量。
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種用于IgA腎病檢測(cè)的系統(tǒng)、方法及方法的建立，其中，所述建立方法包括：S10、采集IgA型腎病患者、非IgA型腎病的腎病患者以及健康者的尿液；S20、檢測(cè)尿液中miRNA的表達(dá)量；S30、利用2-ΔΔct相對(duì)定量法比較所述miRNA的表達(dá)量；S40、對(duì)所述miRNA的表達(dá)量進(jìn)行ROC曲線分析。本發(fā)明的檢測(cè)樣本是尿液，而不是腎組織，最明顯的優(yōu)勢(shì)就是具有無(wú)創(chuàng)傷檢測(cè)的特點(diǎn)，由于檢測(cè)時(shí)無(wú)明顯禁忌癥，可以適用于所有患者的檢測(cè)。
【IPC分類】C12M1/34, C12Q1/68
【公開(kāi)號(hào)】CN104975075
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201410143612
【發(fā)明人】蔡廣研, 陳香美, 段智余
【申請(qǐng)人】中國(guó)人民解放軍總醫(yī)院
【公開(kāi)日】2015年10月14日
【申請(qǐng)日】2014年4月10日