專利名稱：依帕司他在制備防治高血壓腎病藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及依帕司他的新用途，具體提供了其在制備治療高血壓腎病的藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
腎臟是血壓調(diào)節(jié)的重要器官，也是高血壓最常累及的靶器官。血壓上升是高血壓腎損害最重要的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。高血壓腎損傷最終可發(fā)展為終末期腎病(End stage renaldiease, ESRD )。據(jù)報(bào)道，2009年在美國(guó)ESRD患者中約有28%為高血壓腎損害所致，因此而支出的醫(yī)療費(fèi)用高達(dá)56億美元。在我國(guó)13%的ESRD患者由高血壓發(fā)展而來(lái)。高血壓腎病已嚴(yán)重威脅人類的健康。因此，深入研究高血壓引起腎損害的機(jī)制及探討有效防治措施具有重要意義。腎小球硬化是高血壓腎功能衰竭的主要病理基礎(chǔ)，其中心環(huán)節(jié)為腎小球系膜細(xì)胞異常增殖和細(xì)胞外基質(zhì)(Extracellular matrix, ECM )沉積。腎小球系膜細(xì)胞在腎小球固有細(xì)胞中功能最為活躍，是腎小球ECM產(chǎn)生與降解的主要場(chǎng)所。正常腎小球內(nèi)，系膜細(xì)胞增殖緩慢，ECM產(chǎn)生與降解處于動(dòng)態(tài)平衡狀態(tài)。但在高血壓等病理因素刺激下，系膜細(xì)胞異常增殖，分泌大量細(xì)胞因子和生長(zhǎng)因子，ECM成分合成增加、降解減少，發(fā)生ECM沉積，最終導(dǎo)致腎小球硬化。在高血壓腎小球硬化中，血管緊張素II ( Angiotensin II，Ang II )發(fā)揮著重要作用。高血壓病理?xiàng)l件下，Ang II通過(guò)多種途徑參與高血壓腎損害過(guò)程:
① Ang II 誘導(dǎo)表皮生長(zhǎng)因子受體(Epidermal growth factor receptor, EGFR )表達(dá)，通過(guò) PI3K/Akt、MAPK 通路使激活蛋白 I ( Activator protein I, AP-1 )活化，促進(jìn)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子 β1( ·Transforming growth factor - β I, TGF - β I)轉(zhuǎn)錄及表達(dá)[14-22]。TGF - β I通過(guò)下游Smads通路和結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(Connective tissuegrowth factor, CTGF )刺激系膜細(xì)胞增殖及細(xì)胞外基質(zhì)成分表達(dá)。②Ang II活化NAD ( P ) H氧化酶、抑制誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(Inducible nitricoxide synthase, iNOS)和氧化物歧化酶(Superoxide dismutase, SOD),生成過(guò)量活性氧族(Reactive oxygen species, ROS ),形成氧化應(yīng)激,改變酪氨酸激酶活性及磷酸化,激活細(xì)胞內(nèi)信號(hào)通路，活化核轉(zhuǎn)錄因子κΒ ( Nuclear factor κ B, NF - κΒ )和AP - 1，促進(jìn)相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄，致使系膜細(xì)胞增殖及細(xì)胞外基質(zhì)成分合成過(guò)量。③Ang II 促使血小板源性生長(zhǎng)因子(Plateletderived growth factor, F1DGF)、單核細(xì)胞趨化蛋白_1 (Monocyte chemotactic protein I, MCP -1 )和腫瘤壞死因子_a (Tumor necrosis factor - α , TNF - α )等炎性因子產(chǎn)生，激活NF - κ B,引起炎癥促進(jìn)膠原產(chǎn)生形成纖維化。依帕司他為醛糖還原酶抑制劑，主要用于預(yù)防、改善和治療糖尿病并發(fā)的末梢神經(jīng)障礙(麻木感、疼痛)等，也有研究報(bào)道其可用于糖尿病腎病的治療。但目前國(guó)內(nèi)外均未發(fā)現(xiàn)有在高血壓腎病方面的研究報(bào)道。糖尿病腎病(DN)是糖尿病(DM)主要微血管病變之一，常見于病史超過(guò)10年的患者，是糖尿病致死的主要原因之一。糖尿病腎病與自由基介導(dǎo)的氧化損傷有關(guān)。糖尿病患者機(jī)體中氧化自由基產(chǎn)生增加或抗氧化劑和抗氧化酶活力下降，可導(dǎo)致自由基的生成與機(jī)體抗氧化能力間失衡，腎組織發(fā)生氧化應(yīng)激引起腎損傷，導(dǎo)致DN。高血壓腎病是一種完全不同于糖尿病腎病，機(jī)理上完全不同，高血壓腎病是原發(fā)性高血壓引起的良性小動(dòng)脈腎硬化(又稱高血壓腎小動(dòng)脈硬化)和惡性小動(dòng)脈腎硬化，并伴有相應(yīng)臨床表現(xiàn)的疾病。目前臨床治療上需要采取綜合治療措施，給患者健康帶來(lái)了較大的影響，同時(shí)給患者也帶來(lái)了較大的心里負(fù)擔(dān)和經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。因此，開發(fā)有效的防治高血壓腎病的藥物具有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的旨在提供一種依帕司他的新用途。為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供了依帕司他在制備防治高血壓腎病藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明還提供了依帕司他的組合物在制備防治高血壓腎病藥物中的應(yīng)用。所述依帕司他的組合物是以依帕司他為原料，與其它任何能增強(qiáng)依帕司他療效或利于依帕司他發(fā)揮作用的物質(zhì)制備而成的物質(zhì)。本發(fā)明還提供了依帕司他經(jīng)過(guò)加工制備的適合服用的任何單位劑量形式的藥物制劑，這些藥物制劑選自以下劑型:片劑、糖衣片劑、薄膜衣片劑、腸溶衣片劑、膠囊劑、硬膠囊劑、軟膠囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、栓劑、軟膏劑、硬膏劑、霜?jiǎng)婌F劑、滴劑、貼劑，需要時(shí)可以制成緩釋制劑、腸溶制劑。下面對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步解釋和說(shuō)明:
依帕司他在制備成藥物制劑時(shí)可加入藥物可接受的載體，所述藥物可接受的載體選自:抗氧劑、鰲合劑、表面活性劑、填充劑、崩解劑、潤(rùn)濕劑、分散劑、潤(rùn)滑劑溶劑、緩釋材料、腸溶材料、PH調(diào)節(jié)劑、矯味劑、色素等，常用的載體如:甘露糖醇、右旋糖苷、乳糖、葡萄糖、山梨醇、甘露醇、木糖醇、氯化鈉、硅衍生物、纖維素及纖維素衍生物、亞硫酸鈉、焦亞硫酸鈉、藻酸鹽、明膠、聚乙烯吡咯烷酮、甘油、吐溫80、瓊脂、碳酸鈣、碳酸氫鈣、聚乙二醇、環(huán)糊精、β -環(huán)糊精、磷脂類材料、高嶺土、滑石粉、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂等。醒糖還原酶(Aldose reductase, AR )屬于醒酮還原酶超家族中重要的一員，是糖代謝途徑中多元醇通路的限速酶。我們研究發(fā)現(xiàn)，在自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)腎臟組織中醛糖還原酶(AR)表達(dá)升高，而AR抑制劑依帕司他能夠降低SHR的N-乙酰-β -D-氨基葡萄糖苷酶(N N-acetyl-β -D-glucosaminidase, NAG)活性，白蛋白與肌酐比值(Albumin/Urine creatinine, ALB/UCR)，改善高血壓所致的基底膜損傷及抑制腎皮質(zhì)微血管外ColIII的表達(dá)。這為將依帕司他開發(fā)成為一種具有防治高血壓腎病的新型降壓藥物提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1
1.1目的:研究依帕司他對(duì)血管緊張素II ( Ang II )誘導(dǎo)大鼠腎小球系膜細(xì)胞增殖和細(xì)胞外基質(zhì)合成的 影響，闡明依帕司他保護(hù)高血壓腎損害的具體機(jī)制。1.2方法:采用大鼠腎小球系膜(HBZY-1 )細(xì)胞，實(shí)驗(yàn)分為3組:對(duì)照組、Ang II誘導(dǎo)組(10-8 mol/L Ang II)、依帕司他組(10-8 mol/L Ang II + 20 ymol/L依帕司他)。各組細(xì)胞在含1%新生牛血清培養(yǎng)基中孵育48 h，采用MTT —步法檢測(cè)A490值來(lái)評(píng)估細(xì)胞數(shù)；采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT - qPCR )法和蛋白質(zhì)印跡(Western blot )法檢測(cè)細(xì)胞外基質(zhì)I型膠原蛋白(Col I )、III型膠原蛋白(Col III )、IV膠原蛋白(Col IV )、纖連蛋白(FN )以及醛糖還原酶(AR )的mRNA和蛋白表達(dá)水平。1.3 結(jié)果:
①與對(duì)照組相比，10-8 mol/L Ang II組細(xì)胞數(shù)增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(1.76 土
0.06 vs 1.67 土 0.05，P〈 0.05 )。與 Ang II 組比較，依帕司他組(1.65 土 0.04 vs
1.76 土 0.06，P < 0.01 )細(xì)胞數(shù)減少，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。②與對(duì)照組相比，10-8 mol/L Ang II能夠顯著增加Col IV ( 2.33 土 0.13vs 1.00 土 0.31，P < 0.01)、FN ( 1.17 土 0.04 vs 1.00 土 0.08，P < 0.01 ), ColI (1.36 土 0.05 vs 1.00 土 0.05，P < 0.01 )、Col III ( 1.31 土 0.03 vs 1.00 土
0.04, P〈 0.01 )和 AR ( 1.35 土 0.04 vs 1.00 土 0.11，P < 0.01 ) mRNA 水平。與Ang II 組相比，依帕司他組 FN ( 0.76 土 0.03 vs 1.17 土 0.04，P〈 0.01),Col I ( 1.25 土 0.05 vs 1.36 土 0.05，P < 0.05 )和Col III ( 0.68 土 0.02 vs
1.31 土 0.03，P < 0.01 ) mRNA水平明顯下降，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；AR ( 3.78 土 0.13vs 1.35 土 0.04，P < 0.01 )，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；Col IV ( 2.54 土 0.14 vs 2.33土 0.13，P = 0.275 ) mRNA水平上升，但差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

③與對(duì)照組相比，10-8 mol/L Ang II能夠顯著增加Col IV ( 2.18 ± 0.26 vs1.00 土 0.02，P〈 0.01 )、FN ( 2.43 土 0.03 vs 1.00 土 0.07，P〈 0.01 )、Col I(1.29 土 0.05 vs 1.00 土 0.04，P < 0.01 )、Col III ( 5.08 土 0.21 vs 1.00 土0.43, P〈 0.01 )和 AR ( 2.02 土 0.08 vs 1.00 土 0.08，P < 0.01 )蛋白水平。與Ang II 組相比，依帕司他組 FN ( 2.07 土 0.06 vs 2.43 土 0.03，P〈 0.01),Col I ( 1.07 土 0.02 vs 1.29 土 0.05，P < 0.01 )和Col III ( 1.12 土 0.46 vs5.08 土 0.21，P < 0.01 )蛋白水平下降，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；Col IV ( 2.71 土 0.42vs 2.18 土 0.26，P〈 0.01 )和 AR ( 3.13 土 0.24 vs 2.02 土 0.08，P〈 0.01 )蛋白水平上升，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。1.4結(jié)論:Ang II促進(jìn)HBZY-1中Col III和AR表達(dá)，依帕司他能夠抑制Ang II誘導(dǎo)的HBZY-1增殖和細(xì)胞外基質(zhì)成分(FN、Col I和Col III )表達(dá)。實(shí)施例2
2.1目的:研究依帕司他對(duì)血管緊張素II誘導(dǎo)的大鼠腎小球系膜細(xì)胞增殖的影響及其機(jī)制。2.2方法:采用大鼠腎小球系膜細(xì)胞(HBZY-1)作為實(shí)驗(yàn)材料，實(shí)驗(yàn)共分為3組，每組重復(fù)5次(η = 5):空白對(duì)照組、Ang II誘導(dǎo)模型組(10_8 mol/L Ang II)、醒糖還原酶抑制劑依帕司他組(10-8 mol/L Ang II + 20 μ mol/L依帕司他)。各組細(xì)胞在含10 %胎牛血清培養(yǎng)基中孵育24、36、48 h，采用MTT—步法檢測(cè)0D490值來(lái)評(píng)估細(xì)胞數(shù)目；采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組細(xì)胞周期和細(xì)胞凋亡情況；采用用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-qPCR)法和蛋白質(zhì)印跡(Western blot)法檢測(cè)細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶抑制劑_P21、P27、細(xì)胞凋亡相關(guān)基因-Bax、Bcl-2和醛糖還原酶(Aldose Reductase, AR)的mRNA和蛋白表達(dá)水平；采用紫外測(cè)定法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)AR的活性。2.3 結(jié)果:
(I)與對(duì)照組相比，10-8 mol/L Ang II模型組在含10 %胎牛血清培養(yǎng)基中孵育48 h后，細(xì)胞數(shù)目顯著增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(1.91 土 0.06 vs 1.49 土 0.08，P < 0.01，48 h);與 Ang II 模型組比較，依帕司他組(1.60 土 0.04 vs 1.91 土 0.06 ;P < 0.01,48h)細(xì)胞數(shù)目減少，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(2)與對(duì)照組相比，10-8 mol/L Ang II模型組Gl期細(xì)胞比例明顯減少(69.17土 0.25 vs 73.90 土 0.58，P < 0.05)，S 期細(xì)胞明顯增多(22.41 土 1.06 vs 12.64 土0.23，P < 0.05)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與Ang II模型組相比，依帕司他組可抑制細(xì)胞進(jìn)入 S 期，S 期細(xì)胞比例明顯下降(11.09 土 0.38,13.95 土 0.57，10.08 土 0.20，7.05 土0.69 vs 22.41 土 1.06 ;P < 0.05，P < 0.05，P < 0.05，P < 0.01)。(3)與對(duì)照組相比，10-8 mol/L Ang II模型組P21、P27 mRNA水平顯著降低(P21:0.0020 土 0.000098 vs 0.0063 土 0.00017，P < 0.01 ；P27:0.0013 土 0.00011 vs0.0041 土 0.00007，P < 0.01 )，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與Ang II模型組相比，依帕司他組P21、P27 mRNA 水平均顯著高于 Ang II 模型組(P21:0.0087 土 0.00047 vs 0.0020 土
0.000098,P < 0.01 ；P27:0.0060 土 0.00020 vs 0.0013 土 0.00011，Ρ < 0.01)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(4)與對(duì)照組相比，10-8 mol/L Ang II模型組P21、P27蛋白水平顯著降低(P21:0.51 土 0.03 vs 1.00 土 0.00，P < 0.05 ；P27:0.72 土 0.02 vs 1.00 土 0.00，P <
0.05)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與Ang II模型組相比，依帕司他組和不同濃度杜仲木脂素組Ρ21、Ρ27 蛋白水平均顯著高于 Ang II 模型組(Ρ21:3.21 土 0.12 vs 0.51 土 0.03，P <0.01 ；P27:2.36 土 0.04 vs 0.`72 土 0.02，P < 0.01 )，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(5)與對(duì)照組相比，10-8 mol/L Ang II模型組細(xì)胞的凋亡率顯著高于對(duì)照組(10.47 土 0.27 vs 8.68 土 0.31，P < 0.05)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與Ang II模型組相t匕，依帕司他組凋亡率顯著增強(qiáng)(17.89 土 0.62 vs 10.47 土(λ 27 ;P < (λ 01)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(6)與對(duì)照組相比，10-8 mol/L Ang II模型組Bax、Bcl_2 mRNA水平顯著增高(Bax:0.0054 土 0.00006 vs 0.0032 土 0.00026，P〈 0.01 ;Bcl_2:0.0055 土 0.00025vs 0.0041 土 0.00014，P < 0.01 )，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與Ang II組相比，依帕司他組Bax mRNA 水平均顯著高于 Ang II 模型組(0.0071 土 0.00005 vs 0.0054 土 0.00006 ;P< 0.01)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；而依帕司他組的Bcl-2 mRNA水平與Ang II模型組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(0.0059 土 0.00010 vs 0.0055 土 0.00025 ;P > 0.05)。(7)與對(duì)照組相比，10-8 mol/L Ang II模型組Bax、Bcl_2蛋白水平顯著增高(Bax:1.81 土 0.04 vs 1.00 土 0.00，P < 0.01 ;Bcl_2:2.24 土 0.10 vs 1.00 土 0.00，P < 0.05)差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與Ang II組相比，依帕司他組的Bax蛋白水平均顯著高于Ang II模型組(2.29 土 0.05 vs 1.81 土(λ 04 ;P < (λ 01 )，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；而依帕司他組和不同濃度杜仲木脂素組的Bcl-2蛋白水平與Ang II模型組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(2.21土 0.09 vs 2.24 土 0.10 ;P > 0.05)。(8)與對(duì)照組相比，10-8 mol/L Ang II模型組細(xì)胞內(nèi)AR活性相對(duì)于對(duì)照組明顯增強(qiáng)(0.19 土 0.03 vs 0.14 土 0.01，P < 0.05)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與Ang II模型組相比，依帕司他組細(xì)胞內(nèi)AR活性顯著下降(0.11 土 0.01 vs 0.19 土(λ 03 ;P < 0.01)。(9)與對(duì)照組相比，10-8 mol/L Ang II模型組能夠顯著增加AR (1.35 ±0.04 vs1.00 土 0.00，P < 0.01) mRNA水平，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與Ang II模型組相比，依帕司他組的AR mRNA水平較Ang II模型組增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(3.78 土 0.13 vs 1.35± 0.04，P < 0.01)o(10)與對(duì)照組相比，10-8 mol/L Ang II模型組AR蛋白水平顯著升高(2.02 土
0.08 vs 1.00 土 0.00，P < 0.01)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；與Ang II模型組相比，依帕司他組的AR蛋白水平較Ang II模型組顯著增加(3.13 土 0.24 vs 2.02 土 0.08，P < 0.01)。2.4結(jié)論:依帕司他能明顯抑制Ang II誘導(dǎo)的系膜細(xì)胞增殖；其機(jī)制可能與其影響細(xì)胞周期調(diào)節(jié)基因P21和P27及細(xì)胞凋亡調(diào)節(jié)基因Bax和Bcl_2的表達(dá)有關(guān)；AR可能在此過(guò)程中發(fā)揮了 重要作用。
權(quán)利要求
1.依帕司他在制備防治高血壓腎病藥物中的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述應(yīng)用，其特征是，所述防治高血壓腎病藥物的劑型包括片劑、糖衣片劑、薄膜衣片劑、腸溶衣片劑、膠囊劑、硬膠囊劑、軟膠囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、栓劑、軟膏劑、硬膏劑、霜?jiǎng)婌F劑、滴劑、貼劑，緩釋制劑和腸溶制 劑。
全文摘要
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及依帕司他的新用途，具體提供了其在制備治療高血壓腎病的藥物中的應(yīng)用。經(jīng)實(shí)驗(yàn)研究，依帕司他能夠抑制AngII誘導(dǎo)的HBZY-1增殖和細(xì)胞外基質(zhì)成分(FN、ColI和ColIII)表達(dá)，且能明顯抑制AngII誘導(dǎo)的系膜細(xì)胞增殖，可以用于制備治療高血壓腎病的藥物。
文檔編號(hào)A61P9/12GK103239443SQ201310183759
公開日2013年8月14日 申請(qǐng)日期2013年5月17日 優(yōu)先權(quán)日2013年5月17日
發(fā)明者鄧曉蘭, 景賢, 嚴(yán)謹(jǐn), 郭成賢, 李振宇, 歐陽(yáng)冬生 申請(qǐng)人:歐陽(yáng)冬生