一種用于IgA腎病檢測的系統(tǒng)、方法及方法的建立的制作方法
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及醫(yī)療診斷技術領域，尤其是涉及一種用于IgA腎病檢測的系統(tǒng)、方法 及方法的建立。
【背景技術】
[0002] 目前，IgA腎病診斷的主要的檢測方法是腎活檢，特征是腎小球系膜區(qū)IgA團塊樣 或顆粒樣沉積，腎活檢時患者呈俯臥位，穿刺針在超聲的引導下于患者背部進針，快速取出 腎組織，在一系列固定和染色后在光學顯微鏡或電子顯微鏡下觀察腎臟變化情況，以診斷 腎病類型和判斷預后，但腎活檢存在著至少下列所述的技術缺點：
[0003] 1、腎活檢為創(chuàng)傷性檢查，在早期患者尿常規(guī)正常的情況下，不推薦進行腎活檢。在 患者病情加重需要重新評估腎臟病理時，多次穿刺不僅加重腎損傷，還有合并出血、感染等 并發(fā)癥的風險，難以反復進行。
[0004] 2、腎活檢有許多禁忌癥。如絕對禁忌癥、出血傾向明顯、重度1?血壓、精神病或不 配合者、孤立腎、小腎等；相對禁忌癥，腎臟感染呈活動期(如活動性腎盂腎炎、腎結核、腎膿 腫)、腎腫瘤或腎動脈瘤、多囊腎、過度肥胖、慢性腎功能衰竭、重度腹水、心功能衰竭、妊娠 等。因此，不是每個腎臟病患者都適合做腎活檢檢查。
[0005] 3、腎活檢還有許多的并發(fā)癥。最常見的如血尿，腎周圍膿腫，腰痛及腰部不適，發(fā) 熱，動靜脈瘺等。
[0006] 4、腎活檢從準備穿刺到得到病理結果耗時較長，準備步驟較多，反應較慢。由于 是有創(chuàng)檢查，患者需要術前停用抗凝藥，對于有心血管疾病必須長期使用抗凝藥的患者不 利，且患者術后必須躺在床上24小時絕對臥床，不得下床走動。而從穿刺出腎組織到固定、 石蠟包埋、免疫組化染色，直到最后顯微鏡下觀察得出病理結果，一般需要5-7天時間，對 于進展較快的急進性腎小球腎炎等腎病往往會造成診斷不及時，錯診或漏診的情況時有發(fā) 生。
[0007] 因此，目前IgA腎病的診斷技術有待進一步改進。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 本發(fā)明的一個目的是建立一種用于IgA腎病檢測方法，旨在解決現(xiàn)有技術中的檢 測時對機體創(chuàng)傷大、檢測時間長、適用范圍小、檢測步驟復雜的技術問題。
[0009] 本發(fā)明的另外一個目的是提供一種用于IgA腎病檢測方法，旨在提供一種無機體 創(chuàng)傷、檢測時間短、適用范圍大、檢測步驟簡單的IgA腎病檢測方法。
[0010] 本發(fā)明的又一個目的是提供一種用于IgA腎病檢測的系統(tǒng)，旨在提供一種適用于 無機體創(chuàng)傷、檢測時間短、適用范圍大、檢測步驟簡單的IgA腎病檢測方法的系統(tǒng)。
[0011] 本發(fā)明提出了一種用于IgA腎病檢測方法的建立，包括：
[0012] S10、采集IgA型腎病患者、非IgA型腎病的腎病患者以及健康者的尿液；
[0013] S20、檢測尿液中miRNA的表達量；
[0014] S30、利用相對定量法比較所述miRNA的表達量；
[0015] S40、對所述miRNA的表達量進行ROC曲線分析。
[0016] 可選的，所述 miRNA 為 miRNA-25、miRNA-144 以及 miRNA-486 中的至少一種。
[0017] 可選的，檢測miRNA-25、miRNA-144以及miRNA-486的表達量是通過選自熒光定量 PCR、Taqman探針以及LightCycle探針中的至少一種方法進行的。
[0018] 可選的，所述熒光定量PCR為SYBR Green熒光定量PCR。
[0019] 可選的，MiRNA-25 的引物為：CAUUGCACUU⑶CUCGGUCUGA ;
[0020] 和 / 或，MiRNA-144 的引物為：UACAGUAUAGAUGAUGUACU ;
[0021] 和 / 或，MiRNA-486 的引物為：UCCUGUACUGAGCUGCCCCGAG。
[0022] 可選的，還包括管家基因的引物為：AAAGCAGGCUUUAAAGGAACCU。
[0023] 可選的，miRNA-25的臨界值為0. 058 ;
[0024] 和 / 或，miRNA-144 的臨界值為 0· 007 ;
[0025] 和 / 或，miRNA-486 的臨界值為 0· 025。
[0026] 本發(fā)明的另外一個目的是提出一種用于IgA腎病檢測方法，所述方法是根據(jù)以上 所述的方法建立的方法，包括以下步驟：
[0027] 采集尿液；
[0028] 檢測尿液中miRNA-25、miRNA-144以及miRNA-486中至少一個的表達量；
[0029] 判斷miRNA-25、miRNA-144或miRNA-486的表達量是否高于其各自的所述臨界值。
[0030] 可選的，所述熒光定量PCR為SYBR Green熒光定量PCR。
[0031] 本發(fā)明的又一個目的是提出一種用于IgA腎病檢測的系統(tǒng)，所述用于IgA腎病檢 測的系統(tǒng)利用以上所述的用于IgA腎病檢測的方法進行檢測，所述系統(tǒng)包括：
[0032] 尿液米集裝置，以米集尿液；
[0033] miRNA檢測裝置，以檢測尿液中miRNA的表達量。
[0034] 根據(jù)本發(fā)明的用于IgA腎病檢測方法的建立，可以取得以下所述的至少一種積極 技術效果：
[0035] 1、可以有效地建立一種用于IgA腎病檢測方法。
[0036] 2、由于檢測的樣本是尿液，而不是腎組織，所以本發(fā)明的最明顯的優(yōu)勢就是具有 無創(chuàng)傷的特點，可以根據(jù)疾病的病情變化需要反復或連續(xù)留取和測試。另外，所需留取尿液 不會給患者帶來任何損傷和風險，非常安全可靠。
[0037] 3、由于檢測時無明顯禁忌癥，可以適用于所有患者的檢測。
[0038] 4、由于所用的光定量PCR、Taqman探針以及LightCycle探針的方法已經(jīng)是常見的 技術手段，并且具有檢測準確、安全可靠、簡單易行等的優(yōu)點，一般的醫(yī)護人員，例如鄉(xiāng)鎮(zhèn)和 社區(qū)的基層醫(yī)護人員，經(jīng)1周左右的培訓就可完全掌握該方法，大大縮短了培訓周期，有效 解決了現(xiàn)有腎組織活檢對于醫(yī)院和醫(yī)護人員要求嚴格限制的問題，從而使本發(fā)明具有更廣 闊的應用空間和巨大的推廣價值。
[0039] 5、與現(xiàn)有腎組織活檢的3000元的費用相比，本發(fā)明所用試劑盒一套僅需5700元 左右，可反復使用50次，從而大大降低了患者的診斷費用。
[0040] 6、現(xiàn)有腎組織活檢從患者入院準備到最后給出診斷報告周期大約為1周，而本發(fā) 明能在24小時內(nèi)給出結果，且不影響患者的工作、學習和生活，不僅大大縮短了患者等待 時間，也為患者爭取到了及時對癥治療的寶貴時間，可以有效防止錯診或漏診情況的發(fā)生。
[0041] 7、由于患者的尿液簡單易得，且容易保存，還適合偏遠地區(qū)大量篩查患者時的使 用。
【附圖說明】
[0042] 本發(fā)明的上述和/或附加的方面和優(yōu)點從結合下面附圖對實施例的描述中將變 得明顯和容易理解，其中：
[0043] 圖1是根據(jù)本發(fā)明實施例中的用于IgA腎病檢測方法的建立的方法流程示意圖；
[0044] 圖2是根據(jù)本發(fā)明實施例中的IgA腎病患者與健康者對照組間MiRNA-25表達 量的比較圖，在圖中，橫坐標為分組，1為健康者對照組，2為IgA腎病患者組,縱坐標為 MiRNA-25的相對表達量；
[0045] 圖3是根據(jù)本發(fā)明實施例中的IgA腎病患者與健康者對照組間MiRNA-144表達 量的比較圖，在圖中，橫坐標為分組，1為健康者對照組，2為IgA腎病患者組,縱坐標為 MiRNA-144的相對表達量；
[0046] 圖4是根據(jù)本發(fā)明實施例中的IgA腎病患者與健康者對照組間MiRNA-486表達 量的比較圖，在圖中，橫坐標為分組，1為健康者對照組，2為IgA腎病患者組,縱坐標為 MiRNA-486的相對表達量；
[0047] 圖5是根據(jù)本發(fā)明實施例中的IgA腎病患者與非IgA型腎病的腎病患者對照組間 MiRNA-25表達量的比較圖，在圖中，橫坐標為分組，1為IgA腎病患者組，2為非IgA型腎病 的腎病患者對照組，縱坐標為MiRNA-25的相對表達量；
[0048] 圖6是根據(jù)本發(fā)明實施例中的IgA腎病患者與非IgA型腎病的腎病患者對照組間 MiRNA-144表達量的比較圖，在圖中，橫坐標為分組，1為IgA腎病患者組，2為非IgA型腎病 的腎病患者對照組，縱坐標為MiRNA-25的相對表達量；
[0049] 圖7是根據(jù)本發(fā)明實施例中的IgA腎病患者與非IgA型腎病的腎病患者對照組間 MiRNA-486表達量的比較圖，在圖中，橫坐標為分組，1為IgA腎病患者組，2為非IgA型腎病 的腎病患者對照組，縱坐標為MiRNA-25的相對表達量；
[0050] 圖8是根據(jù)本發(fā)明實施例中的miRNA表達量的ROC曲線分析圖，在圖中，橫坐標為 特異性，縱坐標為敏感性，1為MiRNA-25, 2為MiRNA-144, 3為MiRNA-486,4為標準參考曲 線.
[0051] 圖9是根據(jù)本發(fā)明實施例中的miRNA表達量的ROC曲線分析圖，在圖中，橫坐標為 特異性，縱坐標為敏感性，1為聯(lián)合上述3個MiRNA指標，2為標準參考曲線。
【具體實施方式】
[0052] 下文中將參考附圖并結合實施例來詳細說明本發(fā)明。需要說明的是，在不沖突的 情況下，本申請中的實施例及實施例中的特征可以相互組合，另外，實施例是示例性的，僅 用于解釋本發(fā)明，而不能理解為對本發(fā)明的限制。
[0053] 在本發(fā)明中，如無特殊說明，所用專業(yè)術語按照以下所述理解：
[0054] (1)腎活檢：通常情況下叫做腎穿刺，是指在超聲的引導下，穿刺針在患者背部穿 入腎臟，取出部分腎組織，在光學顯微鏡或電子顯微鏡下觀察腎臟組織病變情況的手術。由 于腎臟疾病的種類繁多，病因及發(fā)病機制復雜，許多腎臟疾病的臨床表現(xiàn)與腎臟的組織學 改變并不完全一致，為了明確疾病的病因病理，進一步確診患者所患的具體病種，這時就需 要做腎穿刺活檢術。
[0055] (2) MicroRNA (miRNA):是在真核生物中發(fā)現(xiàn)的一類內(nèi)源性的具有調(diào)控功能的非 編碼RNA，其大小長約20~25個核苷酸。成熟的miRNAs是由較長的初級轉錄物經(jīng)過一系 列核酸酶的剪切加工而產(chǎn)生的，隨后組裝進RNA誘導的沉默復合體，通過堿基互補配對的 方式識別靶mRNA，并根據(jù)互補程度的不同指導沉默復合體降解靶mRNA或者阻遏靶mRNA的 翻譯。
[0056] (3) SYBR Green熒光定量PCR :SYBR Green熒光定量PCR是一種結合于所有雙鏈 DNA (人及大多數(shù)生物細胞內(nèi)都是雙鏈DNA)雙螺旋小溝區(qū)域的具有綠色激發(fā)波