本發(fā)明屬于藥物化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種核苷類似物，具體涉及一種含1,2,3-三氮唑的甾體嘌呤核苷類似物及其制備方法和應(yīng)用。

背景技術(shù)：

近幾十年，癌癥發(fā)病率呈直線上升趨勢，癌癥目前已經(jīng)成為嚴(yán)重危害人類生命健康、制約社會經(jīng)濟(jì)發(fā)展的一大類疾病，因此，各國科研機(jī)構(gòu)和制藥公司一直致力于研制治療效果好、副作用小的抗癌藥物。核苷是一類十分重要的生物大分子，由核糖與堿基兩部分組成，在細(xì)胞生命活動中起著不可忽視的作用，對細(xì)胞的結(jié)構(gòu)、代謝、能量和功能的調(diào)節(jié)等尤其重要。核苷類似物是一類經(jīng)過修飾與改造的核苷類化合物，如碘苷(idu)、齊多夫定、阿昔洛韋等，結(jié)構(gòu)雖然與天然核苷類似，參與病毒的代謝，但是這些核苷類似物卻不能被病毒識別，從而干擾病毒的dna、抑制蛋白質(zhì)的合成，或者影響核酸的轉(zhuǎn)錄過程，因此達(dá)到治療腫瘤和抗病毒的效果。現(xiàn)在，人們已經(jīng)研發(fā)出大量的核苷類藥物，但由于對人體的副作用和病毒的多樣性，耐藥性等原因，合成新的核苷類似物和對現(xiàn)有的核苷類藥物進(jìn)行化學(xué)修飾仍受到廣泛關(guān)注。

由于1,2,3-三氮唑在生理?xiàng)l件下具有非常穩(wěn)定的特性，因此，在藥物化學(xué)領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用，表現(xiàn)出多種生物活性，如抗癌、抗真菌、抗病毒等。利用1,2,3-三氮唑?qū)⒉煌乃幮Х肿舆B接在一起，形成新的藥物分子，極大地豐富了化合物的種類，是近幾年的熱點(diǎn)。甾體類衍生物是一類重要的化合物，其具有抗炎、抗過敏、調(diào)節(jié)代謝、抗腫瘤等功能，近年來，在醫(yī)藥領(lǐng)域中的應(yīng)用不斷擴(kuò)大。將1,2,3-三氮唑?qū)㈢摅w骨架與堿基相連，形成一類新穎、具有抗癌活性的化合物，目前未見文獻(xiàn)報道。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是提供一種含1,2,3-三氮唑的甾體嘌呤核苷類似物及其制備方法和應(yīng)用。

本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：

所述含1,2,3-三氮唑的甾體嘌呤核苷類似物，其特征在于，具有以下通式：

其中，所述r是氯原子、氫原子或氟原子；所述r2是

制備含1,2,3-三氮唑的甾體嘌呤核苷類似物的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)化合物2a、2b的合成：取1a(3β-羥基-5α-雄甾-17-酮)或1b(4-氮雜-5α-雄甾-3,17-二酮)溶解于甲醇，再加入溴化試劑，回流、攪拌反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束，后處理得化合物2a或2b；

(2)化合物4a的合成：將化合物2a溶于丙酮中，隨后冰水浴條件攪拌滴加瓊斯試劑，滴加完畢后繼續(xù)攪拌停止反應(yīng)，后處理得化合物4a；

(3)化合物3a、3b、5a的合成：將化合物2a或2b或4a溶于n,n-二甲基甲酰胺，再加入疊氮化鈉，隨后室溫攪拌反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束，后處理得化合物3a或3b或5a；

(4)化合物7a、7b、7c的合成：將堿基溶于n,n-二甲基甲酰胺，加入3-溴丙炔、碳酸鉀，室溫攪拌反應(yīng)，經(jīng)后處理得化合物7a或7b或7c；

(5)化合物含1,2,3-三氮唑的甾體嘌呤核苷類似物的合成：將化合物7a或7b或7c與3a或3b或5a溶于四氫呋喃與水的混合溶液中，再加入催化劑，室溫攪拌反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束，后處理得含1,2,3-三氮唑的甾體嘌呤核苷類似物。

步驟(1)中1a(3β-羥基-5α-雄甾-17-酮)或1b(4-氮雜-5α-雄甾-3,17-二酮)與溴化試劑摩爾比為1:2.0-4.0，每克3β-羥基-5α-雄甾-17-酮或4-氮雜-5α-雄甾-3,17-二酮使用甲醇20-30ml；

步驟(2)中每克2a化合物使用瓊斯試劑1.5-2.0ml，每克2a化合物使用丙酮20-30ml；

步驟(3)中化合物2a或2b或4a與疊氮化鈉的摩爾比為1:2.0-3.0，每克化合物2a或2b或4a使用n,n-二甲基甲酰胺15-25ml；

步驟(4)中6a或6b或6c與3-溴丙炔、碳酸鉀的摩爾比為1：1.0-1.5:1.5-2.0，每克化合物6a或6b或6c使用n,n-二甲基甲酰胺20-35ml；

步驟(5)中7a或7b或7c與3a或3b或5a摩爾比為1：1.0-1.5，7a或7b或7c與催化劑的摩爾比為1：0.2-0.4，四氫呋喃/水體積比為1/0.8-1.0，每克化合物7a或7b或7c使用四氫呋喃與水40-60ml。

所述步驟(1)中的溴化試劑為溴化銅或液溴；步驟(4)中堿基為2，6-二氯嘌呤、6-氯嘌呤、2-氟-6-氯嘌；步驟(5)中催化劑為cui、cu2o、cuso4/naasc(1/3-6)。

所述步驟(1)的后處理過程為減壓蒸餾、萃取、有機(jī)相干燥，所述步驟(2)的后處理過程為減壓蒸餾、萃取、有機(jī)相干燥，所述步驟(3)的后處理過程為加水析出、抽濾、干燥，所述步驟(4)的后處理過程為減壓蒸餾、萃取、有機(jī)相干燥、柱層析，所述步驟(5)的后處理過程為減壓蒸餾、萃取、有機(jī)相干燥、柱層析。

含1,2,3-三氮唑的甾體嘌呤核苷類似物的合成路線如下：

本發(fā)明所述含1,2,3-三氮唑的甾體嘌呤核苷類似物對多種腫瘤細(xì)胞株如前列腺癌、胃癌等細(xì)胞株具有顯著的抑制作用，能夠用于制備抗腫瘤藥物，具有潛在的藥物應(yīng)用價值，為開發(fā)自主知識產(chǎn)權(quán)的一類新藥奠定了良好的基礎(chǔ)。

本發(fā)明優(yōu)點(diǎn)：以3β-羥基-5α-雄甾-17-酮或4-氮雜-5α-雄甾-3,17-二酮為原料，經(jīng)溴化、氧化、疊氮化、環(huán)加成反應(yīng)制得，制備方法簡單，條件溫和，目標(biāo)物總收率達(dá)75％以上。所得化合物由1,2,3-三氮唑?qū)㈢摅w骨架與堿基相連，形成一類新穎、具有抗癌活性的化合物，對前列腺癌細(xì)胞株(pc-3)、人胃癌細(xì)胞(mgc-803)、人食管癌細(xì)胞(ec-109)具有較好的活性，豐富了甾體核苷類似物的種類，為進(jìn)一步研究抗癌藥物提供先導(dǎo)化合物。

具體實(shí)施方式

為對本發(fā)明進(jìn)行更好地說明，舉實(shí)施例如下：

實(shí)施例1

制備通式所示r是氯原子，r2是即化合物8a(16β-(4-((2,6-二氯嘌呤-9-基)甲基)-1,2,3-三氮唑-1-基)-5α-雄甾-3,17-二酮)的制備。

步驟一：化合物2a(16α-溴-3β-羥基-5α-雄甾-17-酮)的合成

取化合物1a(5g，17.2mmol)于250ml燒瓶中，加入甲醇(100ml)攪拌溶解，然后加入溴化銅(11.5g，51.6mmol)，攪拌下回流反應(yīng)12h反應(yīng)；反應(yīng)完畢后，首先減壓蒸除大部分醇類有機(jī)溶劑，然后加入水(150ml)，用二氯甲烷(100ml×3)萃取，合并有機(jī)相并用飽和碳酸氫鈉溶液洗滌(20ml×3)，然后用飽和食鹽水洗滌(20ml×3)，無水na2so4干燥，最后減壓濃縮得白色固體，干燥后得白色固體(6.2g，16.8mmol)，產(chǎn)率97％。

產(chǎn)物的分析數(shù)據(jù)如下：¹hnmr(600mhz,chloroform-d)δ4.53(d,1h-16),3.61(m,1h-3),0.90(s,3h),0.83(s,3h).¹³cnmr(151mhz,chloroform-d)δ213.48,71.07,54.27,47.96,47.82,46.40,44.78,38.02,36.87,35.66,34.33,34.10,32.37,31.41,30.75,28.26,20.41,14.22,12.28.。

步驟二：化合物4a(16α-溴-5α-雄甾-3,17-二酮)的合成

稱取化合物2a(6.2g，16.8mmol)于250ml燒瓶中，加入丙酮(120ml)攪拌溶解，冰水浴下滴加瓊斯試劑(9.4ml，18.5mmol)，滴加完畢后，冰浴下攪拌1h，反應(yīng)完后，滴加1ml乙醇中和過量的瓊斯試劑，停止反應(yīng)，首先減壓蒸除大部分有機(jī)溶劑，然后加入水(150ml)，用二氯甲烷(100ml×3)萃取，合并有機(jī)相并用飽和碳酸氫鈉溶液洗滌(20ml×3)，然后用飽和食鹽水洗滌(20ml×3)，無水na2so4干燥，最后減壓濃縮得白色固體，干燥后得白色固體(6.1g，16.6mmol)，產(chǎn)率98％。

產(chǎn)物的分析數(shù)據(jù)如下：¹hnmr(600mhz,chloroform-d)δ4.54(d,1h-16),1.04(s,3h),0.93(s,3h).¹³cnmr(151mhz,chloroform-d)δ213.12,211.27,53.69,47.79,47.75,46.47,46.22,44.51,38.31,38.01,35.81,34.22,34.09,32.29,30.39,28.47,20.60,14.21,11.44.。

步驟三：化合物5a(16β-疊氮-5α-雄甾-3,17-二酮)的合成

稱取化合物4a(6.1g，16.6mmol)溶解在n,n-二甲基甲酰胺(100ml)中，加入疊氮化鈉(3.25g，50mmol)，室溫攪拌20min，倒入大量冰水中，過濾，白色濾餅用水洗滌(20ml×3)，干燥，得化合物5a白色固體(5.2g，15.8mmol)，產(chǎn)率95％。

產(chǎn)物的分析數(shù)據(jù)如下：¹hnmr(600mhz,chloroform-d)δ3.74(t,1h-16),1.04(s,3h),0.95(s,3h).¹³cnmr(151mhz,chloroform-d)δ214.98,211.24,63.10,53.95,47.12,46.70,46.52,44.50,38.35,38.00,35.87,34.26,31.61,30.62,28.89,28.47,20.46,14.19,11.45.。

步驟四：化合物7a(2,6-二氯-9-炔丙基-9-氫嘌呤)的合成

在圓底燒瓶中，加入6a(2,6-二氯-9-氫嘌呤)(5g，26.4mmol)，及n,n-二甲基甲酰胺(100ml)，再加入3-溴丙炔(3.77g，31.7mmol)、碳酸鉀(5.52g，40mmol)室溫攪拌過夜。反應(yīng)結(jié)束后加入水(200ml)，用乙酸乙酯(100ml×4)萃取，飽和碳酸氫鈉溶液洗滌(20ml×3)，然后用飽和食鹽水洗滌(20ml×3)，無水na2so4干燥，最后減壓濃縮，柱層析得產(chǎn)品7a(4.25g，18.75mmol)，產(chǎn)率71％。

產(chǎn)物的分析數(shù)據(jù)如下：¹hnmr(600mhz,chloroform-d)δ8.35(s,1h),5.06(d,2h),2.63(t,1h).¹³cnmr(151mhz,chloroform-d)δ153.28,152.55,152.04,144.88,130.77,76.39,74.57,33.91.。

步驟五：化合物8a(16β-(4-((2,6-二氯嘌呤-9-基)甲基)-1,2,3-三氮唑-1-基)-5α-雄甾-3,17-二酮)的制備

稱取化合物5a(1g，3mmol)和7a(0.68g，3mmol)，溶解于四氫呋喃(25ml)和水(25ml)的混合溶液中，然后再加入五水硫酸銅(37.5mg，0.15mmol),抗壞血酸鈉(120mg，0.6mmol)室溫攪拌5h。反應(yīng)完畢后，首先減壓蒸除大部分有機(jī)溶劑，然后加入水(50ml)，用二氯甲烷(50ml×3)萃取，合并有機(jī)相用飽和食鹽水洗滌(10ml×3)，無水na2so4干燥，柱層析得白色固體，乙醇重結(jié)晶，得到化合物8a(16β-(4-((2,6-二氯嘌呤-9-基)甲基)-1,2,3-三氮唑-1-基)-5α-雄甾-3,17-二酮)(1.38g，2.5mmol)，產(chǎn)率83％。

產(chǎn)物的分析數(shù)據(jù)如下：¹hnmr(600mhz,chloroform-d)δ8.37(s,1h),7.86(s,1h),5.61–5.49(m,2h),4.69(dd,1h-16),1.09(d,7h).¹³cnmr(151mhz,chloroform-d)δ211.19,210.73,153.04,152.83,151.92,145.87,140.64,130.72,124.09,64.94,53.94,47.78,47.05,46.52,44.47,39.03,38.35,38.00,35.90,34.16,31.78,30.69,29.29,28.40,20.49,14.65,11.50.。

實(shí)施例2

制備通式所示r是氫原子，r2是即化合物8b(16β-(4-((6-氯嘌呤-9-基)甲基)-1,2,3-三氮唑-1-基)-5α-雄甾-3,17-二酮)的制備。

步驟一：化合物7b(6-氯-9-炔丙基-9-氫嘌呤)的合成

在圓底燒瓶中，加入6b(6-氯-9-氫嘌呤)(5g，32.5mmol)，及n,n-二甲基甲酰胺(100ml)，再加入3-溴丙炔(4.64g，39mmol)、碳酸鉀(6.8g，49.3mmol)室溫攪拌過夜。反應(yīng)結(jié)束后加入水(200ml)，用乙酸乙酯(100ml×4)萃取，飽和碳酸氫鈉溶液洗滌(20ml×3)，然后用飽和食鹽水洗滌(20ml×3)，無水na2so4干燥，最后減壓濃縮，柱層析得產(chǎn)品7b(3.9g，20.3mmol)，產(chǎn)率62.5％。

產(chǎn)物的分析數(shù)據(jù)如下：¹hnmr(400mhz,chloroform-d)δ8.79(s,1h),8.36(s,1h),5.09(d,2h),2.61(t,1h).¹³cnmr(100.6mhz,chloroform-d)δ152.24,151.29,144.29,131.62,75.96,75.00,33.70.。

步驟二：化合物8b(16β-(4-((6-氯嘌呤-9-基)甲基)-1,2,3-三氮唑-1-基)-5α-雄甾-3,17-二酮)的制備

稱取化合物5a(1g，3mmol)和7b(0.58g，3mmol)，溶解于四氫呋喃(25ml)和水(25ml)的混合溶液中，然后再加入五水硫酸銅(50mg，0.20mmol),抗壞血酸鈉(160mg，0.8mmol)室溫攪拌4h。反應(yīng)完畢后，首先減壓蒸除大部分有機(jī)溶劑，然后加入水(50ml)，用二氯甲烷(50ml×3)萃取，合并有機(jī)相用飽和食鹽水洗滌(10ml×3)，無水na2so4干燥，柱層析得白色固體，乙醇重結(jié)晶，得到化合物8b(16β-(4-((6-氯嘌呤-9-基)甲基)-1,2,3-三氮唑-1-基)-5α-雄甾-3,17-二酮)(1.28g，2.45mmol)，產(chǎn)率81.7％。

產(chǎn)物的分析數(shù)據(jù)如下：¹hnmr(400mhz,chloroform-d)δ8.77(s,1h),8.36(s,1h),7.83(s,1h),5.68–5.49(m,2h),4.66(dd,1h-16),1.08(d,7h).¹³cnmr(100.6mhz,chloroform-d)δ211.22,210.79,152.05,151.52,151.18,145.17,140.12,131.54,123.98,64.87,53.92,47.77,47.03,46.52,44.46,38.97,38.35,38.00,35.89,34.14,31.76,30.68,29.20,28.39,20.48,14.63,11.49.。

實(shí)施例3

制備通式所示r是氟原子，r2是即化合物8c(16β-(4-((2-氟-6-氯嘌呤-9-基)甲基)-1,2,3-三氮唑-1-基)-5α-雄甾-3,17-二酮)的制備。

步驟一：化合物7c(2-氟-6-氯-9-炔丙基-9-氫嘌呤)的合成

在圓底燒瓶中，加入6c(2-氟-6-氯-9-氫嘌呤)(5g，29mmol)，及n,n-二甲基甲酰胺(100ml)，再加入3-溴丙炔(4.2g，35.3mmol)、碳酸鉀(6.0g，43.5mmol)室溫攪拌過夜。反應(yīng)結(jié)束后加入水(250ml)，用乙酸乙酯(100ml×4)萃取，飽和碳酸氫鈉溶液洗滌(15ml×3)，然后用飽和食鹽水洗滌(15ml×3)，無水na2so4干燥，最后減壓濃縮，柱層析得產(chǎn)品7c(3.75g，17.9mmol)，產(chǎn)率62％。

產(chǎn)物的分析數(shù)據(jù)如下：¹hnmr(600mhz,chloroform-d)δ8.33(s,1h),5.02(d,2h),2.62(t,1h).¹³cnmr(100.6mhz,chloroform-d)δ158.50,156.30,153.1,144.89,130.30,76.30,74.54,33.86.。

步驟二：化合物8c(16β-(4-((2-氟-6-氯嘌呤-9-基)甲基)-1,2,3-三氮唑-1-基)-5α-雄甾-3,17-二酮)的制備

稱取化合物5a(1g，3mmol)和7c(0.63g，3mmol)，溶解于四氫呋喃(25ml)和水(25ml)的混合溶液中，然后再加入五水硫酸銅(37.5mg，0.15mmol)，抗壞血酸鈉(160mg，0.8mmol)室溫攪拌4h。反應(yīng)完畢后，首先減壓蒸除大部分有機(jī)溶劑，然后加入水(50ml)，用二氯甲烷(50ml×3)萃取，合并有機(jī)相用飽和食鹽水洗滌(10ml×3)，無水na2so4干燥，柱層析得白色固體，乙醇重結(jié)晶，得到化合物8c(16β-(4-((2-氟-6-氯嘌呤-9-基)甲基)-1,2,3-三氮唑-1-基)-5α-雄甾-3,17-二酮)(1.23g，2.28mmol)，產(chǎn)率76％。

產(chǎn)物的分析數(shù)據(jù)如下：¹hnmr(400mhz,chloroform-d)δ8.35(s,1h),7.86(s,1h),5.51(m,2h),4.68(dd,1h-16),1.10(s,3h),1.07(s,3h).¹³cnmr(100.6mhz,chloroform-d)δ211.23,210.76,158.40,156.22,153.08,145.88,140.60,130.23,124.09,64.92,53.92,47.77,47.03,46.51,44.47,39.03,38.34,38.00,35.90,34.14,31.76,30.68,29.27,28.39,20.48,14.63,11.49.。

實(shí)施例4

制備通式所示r是氯原子，r2是即化合物8d(16β-(4-((2,6-二氯嘌呤-9-基)甲基)-1,2,3-三氮唑-1-基)-3β-羥基-5α-雄甾-17-酮)的制備。

步驟一：化合物3a(16β-疊氮-5α-雄甾-3,17-二酮)的合成

稱取化合物2a(5g，13.5mmol)溶解在n,n-二甲基甲酰胺(80ml)中，加入疊氮化鈉(2.6g，40mmol)，室溫攪拌20min，倒入大量冰水中，過濾，白色濾餅，用水洗滌(15ml×3)，干燥，得化合物5a白色固體(4.2g，12.7mmol)，產(chǎn)率94％。

產(chǎn)物的分析數(shù)據(jù)如下：¹hnmr(600mhz,chloroform-d)δ3.72(t,1h-16),3.60(m,1h-3),0.92(s,3h),0.83(s,3h).¹³cnmr(151mhz,chloroform-d)δ215.32,71.07,63.18,54.52,47.19,46.87,44.80,38.01,36.88,35.71,34.35,31.70,31.39,30.99,28.89,28.26,20.27,14.19,12.29.。

步驟二：化合物8d(16β-(4-((2,6-二氯嘌呤-9-基)甲基)-1,2,3-三氮唑-1-基)-3β-羥基-5α-雄甾-17-酮)的制備

稱取化合物3a(500mg，1.51mmol)和7a(0.34g，1.51mmol)，溶解于四氫呋喃(15ml)和水(15ml)的混合溶液中，然后再加入五水硫酸銅(25mg，0.10mmol),抗壞血酸鈉(80mg，0.4mmol)室溫攪拌5h。反應(yīng)完畢后，首先減壓蒸除大部分有機(jī)溶劑，然后加入水(30ml)，用二氯甲烷(30ml×3)萃取，合并有機(jī)相用飽和食鹽水洗滌(6ml×3)，無水na2so4干燥，柱層析得白色固體，乙醇重結(jié)晶，得到化合物8d(16β-(4-((2,6-二氯嘌呤-9-基)甲基)-1,2,3-三氮唑-1-基)-3β-羥基-5α-雄甾-17-酮)(0.66g，1.18mmol)，產(chǎn)率78％。

產(chǎn)物的分析數(shù)據(jù)如下：¹hnmr(600mhz,chloroform-d)δ8.35(s,1h),7.83(s,1h),5.62–5.45(m,2h),4.67(t,1h-16),3.61(m,1h),2.66(m,1h),2.39(m,1h),1.07(s,3h),0.86(s,3h).¹³cnmr(151mhz,chloroform-d)δ210.99,153.06,152.80,151.96,145.82,140.59,130.73,123.92,71.06,65.02,54.54,47.87,47.26,44.82,39.04,38.00,36.90,35.76,34.28,31.89,31.40,31.07,29.34,28.21,20.31,14.66,12.33.。

實(shí)施例5

制備通式所示r是氫原子，r2是即化合物8e(16β-(4-((6-氯嘌呤-9-基)甲基)-1,2,3-三氮唑-1-基)-3β-羥基-5α-雄甾-17-酮)的制備。

化合物8e(16β-(4-((6-氯嘌呤-9-基)甲基)-1,2,3-三氮唑-1-基)-3β-羥基-5α-雄甾-17-酮)的制備

稱取化合物3a(500mg，1.51mmol)和7b(0.29g，1.51mmol)，溶解于四氫呋喃(15ml)和水(15ml)的混合溶液中，然后再加入碘化亞銅(57mg，0.3mmol)室溫攪拌5h。反應(yīng)完畢后，首先減壓蒸除大部分有機(jī)溶劑，然后加入水(30ml)，用二氯甲烷(30ml×3)萃取，合并有機(jī)相用飽和食鹽水洗滌(6ml×3)，無水na2so4干燥，柱層析得白色固體，乙醇重結(jié)晶，得到化合物8e(16β-(4-((6-氯嘌呤-9-基)甲基)-1,2,3-三氮唑-1-基)-3β-羥基-5α-雄甾-17-酮)(0.59g，1.12mmol)，產(chǎn)率74.5％。

產(chǎn)物的分析數(shù)據(jù)如下：¹hnmr(600mhz,chloroform-d)δ8.77(s,1h),8.36(s,1h),7.82(s,1h),5.58(t,2h),4.69–4.61(m,1h-16),3.60(m,1h),2.65(m,1h),2.39(m,1h),1.06(s,3h),0.86(s,3h).¹³cnmr(151mhz,chloroform-d)δ211.07,152.03,151.52,151.19,145.19,141.09,131.55,123.86,71.02,64.97,54.52,47.85,47.23,44.81,38.97,37.99,36.89,35.75,34.26,31.87,31.39,31.05,29.27,28.20,20.30,14.64,12.32.。

實(shí)施例6

制備通式所示r是氟原子，r2是即化合物8f(16β-(4-((2-氟-6-氯嘌呤-9-基)甲基)-1,2,3-三氮唑-1-基)-3β-羥基-5α-雄甾-17-酮)的制備。

化合物8f(16β-(4-((2-氟-6-氯嘌呤-9-基)甲基)-1,2,3-三氮唑-1-基)-3β-羥基-5α-雄甾-17-酮)的制備

稱取化合物3a(500mg，1.51mmol)和7c(0.32g，1.51mmol)，溶解于四氫呋喃(15ml)和水(15ml)的混合溶液中，然后再加入氧化亞銅(43mg,0.3mmol)室溫攪拌5h。反應(yīng)完畢后，首先減壓蒸除大部分有機(jī)溶劑，然后加入水(30ml)，用二氯甲烷(30ml×3)萃取，合并有機(jī)相用飽和食鹽水洗滌(8ml×3)，無水na2so4干燥，柱層析得白色固體，乙醇重結(jié)晶，得到化合物8f(16β-(4-((2-氟-6-氯嘌呤-9-基)甲基)-1,2,3-三氮唑-1-基)-3β-羥基-5α-雄甾-17-酮)(0.65g，1.2mmol)，產(chǎn)率79.5％。

產(chǎn)物的分析數(shù)據(jù)如下：¹hnmr(600mhz,dmso-d6)δ8.80(s,1h),8.22(s,1h),5.57(s,2h),5.23(t,1h-16),4.43(s,1h),3.34(m,1h),3.32(s,2h),2.06(m,1h),0.99(s,3h),0.79(s,3h).¹³cnmr(151mhz,dmso-d6)δ212.53,157.46,156.04,152.55,148.81,141.62,130.36,125.23,69.70,64.81,54.38,47.46,46.26,44.83,39.43,38.56,36.99,35.82,34.09,31.84,31.79,31.12,30.14,28.54,20.42,14.76,12.52.。

實(shí)施例7

制備通式所示r是氯原子，r2是即化合物8g(4-氮雜-16β-(4-((2,6-二氯嘌呤-9-基)甲基)-1,2,3-三氮唑-1-基)-5α-雄甾-3,17-二酮)的制備。

步驟一：化合物2b(4-氮雜-16α-溴-5α-雄甾-3,17-二酮)的合成

取化合物1b(5g，17.3mmol)于250ml燒瓶中，加入甲醇(120ml)攪拌溶解，然后加入溴化銅(11.6g，52mmol)，攪拌下回流反應(yīng)12h反應(yīng)；反應(yīng)完畢后，首先減壓蒸除大部分醇類有機(jī)溶劑，然后加入水(200ml)，用二氯甲烷(150ml×3)萃取，合并有機(jī)相并用飽和碳酸氫鈉溶液洗滌(20ml×3)，然后用飽和食鹽水洗滌(20ml×3)，無水na2so4干燥，最后減壓濃縮得白色固體，干燥后得白色固體(5.7g，15.5mmol)，產(chǎn)率90％。

產(chǎn)物的分析數(shù)據(jù)如下：¹hnmr(600mhz,chloroform-d)δ6.08(s,1h-4nh),4.54(d,1h-16),3.15–3.04(m,1h),0.93(t,7h).¹³cnmr(151mhz,chloroform-d)δ212.74,172.01,60.48,51.22,47.84,47.52,46.02,35.86,34.02,33.92,33.37,32.14,28.32,26.94,20.34,14.25,11.34.。

步驟二：化合物3b(4-氮雜-16β-疊氮-5α-雄甾-3,17-二酮)的合成

稱取化合物2b(5.7g，15.5mmol)溶解在n,n-二甲基甲酰胺(80ml)中，加入疊氮化鈉(3.25g，50mmol)，室溫攪拌20min，倒入大量冰水中，過濾，白色濾餅用水洗滌(20ml×3)，干燥，得化合物5a白色固體(4.9g，14.85mmol)，產(chǎn)率96％。

產(chǎn)物的分析數(shù)據(jù)如下：¹hnmr(600mhz,chloroform-d)δ6.24(s,1h-4nh),3.74(t,1h-16),3.08(d,1h),0.94(d,6h),¹³cnmr(151mhz,chloroform-d)δ214.63,172.05,62.98,60.53,51.44,47.23,46.43,35.93,33.97,33.29,31.45,28.83,28.53,28.48,27.01,20.20,14.24,11.36.。

步驟三：化合物8g(4-氮雜-16β-(4-((2,6-二氯嘌呤-9-基)甲基)-1,2,3-三氮唑-1-基)-5α-雄甾-3,17-二酮)的制備

稱取化合物3b(1g，3mmol)和7a(0.68g，3mmol)，溶解于四氫呋喃(30ml)和水(30ml)的混合溶液中，然后再加入五水硫酸銅(37.5mg，0.15mmol),抗壞血酸鈉(120mg，0.6mmol)室溫攪拌5h。反應(yīng)完畢后，首先減壓蒸除大部分有機(jī)溶劑，然后加入水(50ml)，用二氯甲烷(50ml×3)萃取，合并有機(jī)相用飽和食鹽水洗滌(10ml×3)，無水na2so4干燥，柱層析得白色固體，乙醇重結(jié)晶，得到化合物8g(4-氮雜-16β-(4-((2,6-二氯嘌呤-9-基)甲基)-1,2,3-三氮唑-1-基)-5α-雄甾-3,17-二酮)(1.4g，2.52mmol)，產(chǎn)率84％。

產(chǎn)物的分析數(shù)據(jù)如下：¹hnmr(600mhz,dmso-d6)δ8.83(s,1h),8.22(s,1h),7.29(s,1h),5.60(s,2h),5.25(t,1h-16),3.32(s,1h),2.99(d,1h),1.02(s,4h),0.83(s,3h).¹³cnmr(151mhz,dmso-d6)δ212.33,170.59,153.74,151.62,150.22,148.87,141.67,130.88,125.21,64.77,60.13,51.17,47.56,45.81,39.47,35.66,33.62,33.29,31.66,30.10,28.91,28.67,26.54,20.34,14.81,11.54.。

實(shí)施例8

制備通式所示r是氫原子，r2是即化合物8h(4-氮雜-16β-(4-((6-氯嘌呤-9-基)甲基)-1,2,3-三氮唑-1-基)-5α-雄甾-3,17-二酮)的制備。

化合物8h(4-氮雜-16β-(4-((6-氯嘌呤-9-基)甲基)-1,2,3-三氮唑-1-基)-5α-雄甾-3,17-二酮)的制備

稱取化合物3b(1g，3mmol)和7b(0.57g，3mmol)，溶解于四氫呋喃(30ml)和水(30ml)的混合溶液中，然后再加入五水硫酸銅(50mg，0.2mmolmmol),抗壞血酸鈉(120mg，0.6mmol)室溫攪拌5h。反應(yīng)完畢后，首先減壓蒸除大部分有機(jī)溶劑，然后加入水(50ml)，用二氯甲烷(50ml×3)萃取，合并有機(jī)相用飽和食鹽水洗滌(10ml×3)，無水na2so4干燥，柱層析得白色固體，乙醇重結(jié)晶，得到化合物8h(4-氮雜-16β-(4-((6-氯嘌呤-9-基)甲基)-1,2,3-三氮唑-1-基)-5α-雄甾-3,17-二酮)(1.19g，2.27mmol)，產(chǎn)率75.5％。

產(chǎn)物的分析數(shù)據(jù)如下：¹hnmr(600mhz,chloroform-d)δ8.77(s,1h),8.35(s,1h),7.83(s,1h),6.01(s,1h),5.68–5.50(m,2h),4.66(t,1h-16),3.10(d,1h),2.66(m,1h),1.09(s,3h),0.96(s,3h).¹³cnmr(151mhz,chloroform-d)δ210.36,171.95,152.05,151.53,151.22,145.13,141.20,131.58,123.92,64.75,60.51,51.44,47.88,46.78,38.97,35.97,33.87,33.30,31.63,29.12,28.60,28.47,26.97,20.24,14.68,11.39.

實(shí)施例9

制備通式所示r是氟原子，r2是即化合物8i(4-氮雜-16β-(4-((2-氟-6-氯嘌呤-9-基)甲基)-1,2,3-三氮唑-1-基)-5α-雄甾-3,17-二酮)的制備。

化合物8i(4-氮雜-16β-(4-((2-氟-6-氯嘌呤-9-基)甲基)-1,2,3-三氮唑-1-基)-5α-雄甾-3,17-二酮)的制備

稱取化合物3b(1g，3mmol)和7c(0.63g，3mmol)，溶解于四氫呋喃(25ml)和水(25ml)的混合溶液中，然后再加入五水硫酸銅(37.5mg，0.15mmol),抗壞血酸鈉(120mg，0.6mmol)室溫攪拌5h。反應(yīng)完畢后，首先減壓蒸除大部分有機(jī)溶劑，然后加入水(50ml)，用二氯甲烷(50ml×3)萃取，合并有機(jī)相用飽和食鹽水洗滌(15ml×3)，無水na2so4干燥，柱層析得白色固體，乙醇重結(jié)晶，得到化合物8i(4-氮雜-16β-(4-((2-氟-6-氯嘌呤-9-基)甲基)-1,2,3-三氮唑-1-基)-5α-雄甾-3,17-二酮)(1.3g，2.4mmol)，產(chǎn)率80％。

產(chǎn)物的分析數(shù)據(jù)如下：¹hnmr(600mhz,dmso-d6)δ8.81(s,1h),8.23(s,1h),7.28(s,1h),5.58(d,2h),5.25(q,j＝8.8,8.0hz,1h),3.32(s,1h),2.99(d,1h),1.02(m,4h),0.83(s,3h).¹³cnmr(151mhz,dmso-d6)δ212.32,170.59,157.47,156.05,152.4,148.80,141.61,130.36,125.26,64.76,60.13,51.18,47.55,45.82,39.43,35.66,33.62,33.29,31.67,30.09,28.90,28.66,26.54,20.34,14.80,11.53.。

表1本專利中所涉及到的新化合物的編號和化學(xué)結(jié)構(gòu)

目標(biāo)化合物的腫瘤細(xì)胞抑制活性試驗(yàn)：

采用本發(fā)明實(shí)施例制得的含1,2,3-三氮唑的甾體嘌呤核苷類似物(8a-8i)對前列腺癌細(xì)胞株(pc-3)、人胃癌細(xì)胞(mgc-803)、人食管癌細(xì)胞(ec-109)進(jìn)行細(xì)胞毒性試驗(yàn)。采用mtt法，進(jìn)行體外細(xì)胞毒性測定。在96孔板中培養(yǎng)的對數(shù)生長期細(xì)胞中加入不同濃度的含1,2,3-三氮唑的甾體嘌呤核苷類似物，37℃、體積百分含量5％co2下培養(yǎng)細(xì)胞72h，同時進(jìn)行三個平行實(shí)驗(yàn)，與對照組進(jìn)行比較。加入mtt，繼續(xù)培養(yǎng)3-4h，活細(xì)胞內(nèi)將形成藍(lán)紫色不溶物甲躦，移除培養(yǎng)液，加入dmso，室溫下振蕩15分鐘，使甲躦充分溶解，用酶標(biāo)儀測定其吸光度，分別計算抑制腫瘤細(xì)胞生長到50％時化合物的濃度，以ic50值表示，其中部分結(jié)果如表2所示。

表2本發(fā)明含1,2,3-三氮唑的甾體嘌呤核苷類似物抗腫瘤活性測試結(jié)果(ic50，μm)

由表2看出，所測化合物對三種癌細(xì)胞都有一定的抑制活性；化合物8d對pc-3的抑制活性最好。