本發(fā)明屬于醫(yī)藥中間體的合成技術(shù)領域，具體涉及一種具有苯并吡喃結(jié)構(gòu)的fsh拮抗劑的制備方法。

背景技術(shù)：

促性腺激素在人體中表現(xiàn)出重要的生理機能，比如新陳代謝、體溫調(diào)節(jié)和生殖過程。它是由下丘腦合成和分泌的，通過誘導垂體中促卵泡激素(fsh)/黃體生成激素(lh)的分泌，并進一步誘導卵巢中各級卵泡的生長發(fā)育及排卵。fsh為糖蛋白激素，有α和β亞單位合成后各自釋放入血、相結(jié)合后方可發(fā)揮其生物作用。最早發(fā)現(xiàn)fshr轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物是在胚胎期14.5天的男性和20.5天的女性的胚胎性腺中。這些轉(zhuǎn)錄初期產(chǎn)物并不完整，只表達在受體的細胞外部分，完整全長得mrna在數(shù)天后出現(xiàn)。孕10-13周胎兒垂體開始分泌fsh和黃體生成激素，兒童4歲后及青春期血液中fsh水平緩慢上升，至性成熟期fsh出現(xiàn)月經(jīng)周期內(nèi)規(guī)律性波動，到圍絕經(jīng)期雌二醇水平降低、伴隨fsh水平升高。fsh是哺乳動物生殖過程中的核心激素，在胎兒性分化、胎兒期卵子峰發(fā)生和卵泡閉鎖、性成熟期卵泡的發(fā)生發(fā)育和成熟、顆粒細胞芳香化酶活化和雄激素向雌激素的轉(zhuǎn)化、生殖周期的調(diào)節(jié)中起到不可替代的關(guān)鍵作用。fsh對靶器官的作用主要由fsh受體(fshr)所介導。研究表明，fshr不僅只表達于性腺，也在骨骼、前列腺、卵巢表面上皮等其它組織的表達。fsh在體內(nèi)水平過高，會導致骨質(zhì)流失，一些激素依賴性疾病，如卵巢癌、前列腺癌、子宮內(nèi)膜異位、卵巢過度刺激綜合征等，都受fsh影響很大；通過抑制fsh的分泌，可以進而抑制性腺分泌性激素，導致血中疾病依賴性激素水平降低，抑制癌細胞的生長或預防、緩解、治療其他病癥；例如，西曲瑞克就是按照該機理對卵巢癌發(fā)揮抗增殖效應。我們根據(jù)目前已有的fsh受體抑制劑藥物分子，對其結(jié)構(gòu)進行優(yōu)化得到了一系列新型的fsh受體抑制劑藥物分子，并對其進行了相關(guān)活性測試。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明解決的技術(shù)問題是提供了一種合成方法簡單、分子結(jié)構(gòu)新穎且對fsh受體作用效果較好的具有苯并吡喃結(jié)構(gòu)的fsh拮抗劑的制備方法。

本發(fā)明為解決上述技術(shù)問題采用如下技術(shù)方案，一種具有苯并吡喃結(jié)構(gòu)的fsh拮抗劑的制備方法，其特征在于該化合物的結(jié)構(gòu)式為：

一種具有苯并吡喃結(jié)構(gòu)的fsh拮抗劑的制備方法，其特征在于具體步驟為：

a、2-溴-4-硝基苯甲醚與2-甲基苯硼酸在催化劑鈀碳的作用下經(jīng)過取代反應得到2’-甲基-5-硝基聯(lián)苯-2-甲醚；

b、2’-甲基-5-硝基聯(lián)苯-2-甲醚在催化劑還原鐵粉的作用下經(jīng)過硝基還原反應得到2’-甲基-5-氨基聯(lián)苯-2-甲醚；

c、2’-甲基-5-氨基聯(lián)苯-2-甲醚在催化劑亞硝酸鈉的作用下經(jīng)過氨基還原氧化反應得到2’-甲基-5-羥基聯(lián)苯-2-甲醚；

d、甲苯在定位催化劑鐵粉的作用下與溴素發(fā)生取代反應得到鄰溴芐溴；

e、2’-甲基-5-羥基聯(lián)苯-2-甲醚與鄰溴芐溴在羥基氫活化催化劑鈀/羥基磷灰石的作用下發(fā)生取代反應得到5-(2-溴苯甲醇)-2’-甲基聯(lián)苯-2-甲醚；

f、5-(2-溴苯甲醇)-2’-甲基聯(lián)苯-2-甲醚在苯環(huán)氫活化催化劑鈀/羥基磷灰石的作用下進行分子內(nèi)成環(huán)反應得到3-(2-甲基苯)-6h-二苯并吡喃-2-甲醚；

g、3-(2-甲基苯)-6h-二苯并吡喃-2-甲醚在溴化鋰的作用下脫去甲基得到3-(2-甲基苯)-6h-二苯并吡喃-2-羥基；

h、3-(2-甲基苯)-6h-二苯并吡喃-2-羥基在甲基氫活化催化劑碘化亞銅和羥基氫活化催化劑叔丁醇鉀的共同作用下發(fā)生分子內(nèi)成環(huán)反應得到6h-苯并吡喃并苯基并吡喃并苯。

進一步優(yōu)選，步驟a的具體過程為：在反應容器中將2-溴-4-硝基苯甲醚、2-甲基苯硼酸和碳酸鉀加入到體積比為10:1的dme與水的混合溶液中，氮氣保護下室溫攪拌30min，再加入催化劑鈀碳，在氮氣保護下攪拌均勻，升溫至100℃反應直至tlc監(jiān)控原料反應完全，在真空條件下蒸除溶劑，剩余物加入二氯甲烷中，再用純凈水洗滌兩次，有機相經(jīng)無水硫酸鈉干燥后蒸除溶劑，再經(jīng)硅膠柱層析分離提純得到2’-甲基-5-硝基聯(lián)苯-2-甲醚。

進一步優(yōu)選，步驟b的具體過程為：在反應容器中將還原鐵粉加入到冰乙酸中，升溫至70℃后攪拌反應1h，在氮氣保護下加入溶有2’-甲基-5-硝基聯(lián)苯-2-甲醚的冰乙酸溶液，加完后于85℃反應直至tlc監(jiān)控原料反應完全，然后通過硅藻土過濾反應液，硅藻土用熱的冰乙酸進行洗滌，濾液在真空條件下蒸除反應溶劑，加入飽和碳酸氫鈉，再用乙酸乙酯萃取反應液三次，合并有機相，有機相經(jīng)無水硫酸鈉干燥后蒸除溶劑，濃縮得到2’-甲基-5-氨基聯(lián)苯-2-甲醚。

進一步優(yōu)選，步驟c的具體過程為：在反應容器中于0℃將2’-甲基-5-氨基聯(lián)苯-2-甲醚加入到質(zhì)量濃度為5％的稀硫酸中，攪拌10min后滴加溶有催化劑亞硝酸鈉的水溶液，滴加完后保持溫度繼續(xù)反應2h，再升溫至60℃反應直至tlc監(jiān)控原料反應完全，然后冷卻至室溫，用乙酸乙酯萃取反應液三次，合并有機相，有機相經(jīng)無水硫酸鈉干燥后蒸除溶劑，經(jīng)硅膠柱層析分離提純得到2’-甲基-5-羥基聯(lián)苯-2-甲醚。

進一步優(yōu)選，步驟d的具體過程為：在反應容器中將甲苯加入到冰乙酸中，再加入定位催化劑鐵粉，在室溫條件下滴加溴素，30min滴加完，升溫至40℃反應5h，再放入300w的鎢燈下進行光照反應5h，tlc監(jiān)控原料反應完全，真空下蒸除溶劑冰乙酸，濃縮物中加入質(zhì)量濃度為20％的氫氧化鈉溶液，過濾反應液，濾液用二氯甲烷萃取三次，合并有機相，有機相再經(jīng)過無水硫酸鈉干燥后濃縮得到鄰溴芐溴。

進一步優(yōu)選，步驟e的具體過程為：在反應容器中將2’-甲基-5-羥基聯(lián)苯-2-甲醚和鄰溴芐溴加入到干燥的丙酮中，再加入羥基氫活化催化劑鈀/羥基磷灰石，加熱至回流反應直至tlc監(jiān)控原料反應完全，在真空條件下蒸除反應溶劑，濃縮物加入到二氯甲烷中，再用純凈水洗滌有機相三次，分出有機相，在真空條件下蒸除溶劑后得到粗品，再經(jīng)硅膠柱層析分離提純得到5-(2-溴苯甲醇)-2’-甲基聯(lián)苯-2-甲醚。

進一步優(yōu)選，步驟f的具體過程為：在反應容器中將5-(2-溴苯甲醇)-2’-甲基聯(lián)苯-2-甲醚和碳酸鉀加入到二甲基乙酰胺中，在n2保護下加入苯環(huán)氫活化催化劑鈀/羥基磷灰石，向反應體系中持續(xù)通入n2，同時排出n2，使其保持一個穩(wěn)定流通環(huán)境，室溫攪拌30min后密閉反應容器，再將反應容器放置于微波反應器中，升溫至100℃反應直至tlc監(jiān)控原料反應完全，從微波反應器中取出反應容器后加入純凈水淬滅反應，再用乙酸乙酯萃取反應液三次，合并有機相，再用無水硫酸鈉干燥后蒸除溶劑，最后經(jīng)硅膠柱層析分離提純得到3-(2-甲基苯)-6h-二苯并吡喃-2-甲醚。

進一步優(yōu)選，步驟g的具體過程為：在反應容器中將3-(2-甲基苯)-6h-二苯并吡喃-2-甲醚加入到二氯甲烷中，再加入溴化鋰，于0℃攪拌反應直至tlc監(jiān)控原料反應完全，蒸除反應溶劑得到3-(2-甲基苯)-6h-二苯并吡喃-2-羥基。

進一步優(yōu)選，步驟h的具體過程為：在反應容器中將3-(2-甲基苯)-6h-二苯并吡喃-2-羥基加入到乙腈中，再加入甲基氫活化催化劑碘化亞銅和羥基氫活化催化劑叔丁醇鉀，氮氣保護反應體系，攪拌升溫至70℃反應直至tlc監(jiān)控原料反應完全，減壓蒸出溶劑乙腈，再加入甲基叔丁基醚，冷卻至-5℃，攪拌過程中有大量固體析出，過濾反應液得到固體，并用冷甲苯洗滌，濾餅烘干后得到6h-苯并吡喃并苯基并吡喃并苯。

本發(fā)明所述的具有苯并吡喃結(jié)構(gòu)的fsh拮抗劑的合成路線為：

本發(fā)明合成工藝簡單且成本低廉，經(jīng)過活性測試可知制得的fsh拮抗劑藥物分子對fsh受體的作用效果較好，有望進一步推廣應用。

具體實施方式

以下通過實施例對本發(fā)明的上述內(nèi)容做進一步詳細說明，但不應該將此理解為本發(fā)明上述主題的范圍僅限于以下的實施例，凡基于本發(fā)明上述內(nèi)容實現(xiàn)的技術(shù)均屬于本發(fā)明的范圍。

實施例1

在反應瓶中，把2-溴-4-硝基苯甲醚10.0g、2-甲基苯硼酸8.0g和碳酸鉀10g加入甲基叔丁基醚和水的混合溶液250ml中，氮氣保護下室溫攪拌30min，再加入催化劑鈀碳(鈀重量含量為10％)1g，在氮氣保護下攪拌均勻，緩慢升溫至100℃，反應14h后tlc監(jiān)控原料反應完全，抽濾反應液，濾液在真空條件下蒸除溶劑，剩余物加入二氯甲烷中，再用純凈水100ml洗滌兩次，有機相經(jīng)無水硫酸鈉干燥后蒸除溶劑，再經(jīng)硅膠柱層析分離提純得到純凈的2’-甲基-5-硝基聯(lián)苯-2-甲醚9.7g；¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ:8.54(s,1h),8.11-8.10(m,1h),7.59-7.45(m,5h),3.81(s,3h),2.29(s,3h)。

實施例2

在反應瓶中，把還原鐵粉10g加入到冰乙酸150ml中，升溫至70℃后攪拌反應1h，在氮氣保護下緩慢加入溶有2’-甲基-5-硝基聯(lián)苯-2-甲醚12g的冰乙酸溶液150ml，滴加完后在85℃條件下繼續(xù)反應2h，tlc監(jiān)控原料反應完全后通過硅藻土進行過濾反應液，硅藻土再用一定量的熱的冰乙酸進行洗滌；濾液在真空條件下蒸除反應溶劑，加入一定量的飽和碳酸氫鈉，再用乙酸乙酯萃取反應液三次，合并有機相，有機相經(jīng)無水硫酸鈉干燥后蒸除溶劑，濃縮得到純凈的2’-甲基-5-氨基聯(lián)苯-2-甲醚8.9g；¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ:7.71-7.69(m,1h),7.43-7.35(m,3h),7.03-6.99(m,3h),5.98(s,2h),3.79(s,3h),2.33(s,3h)。

實施例3

在反應瓶中，在溫度為0℃條件下，把2’-甲基-5-氨基聯(lián)苯-2-甲醚10g加入到質(zhì)量濃度為5％的稀硫酸200ml中，攪拌10min后，再緩慢滴加溶有亞硝酸鈉5g的水溶液40ml，滴加完后保持溫度繼續(xù)反應2h，再緩慢升溫至60℃反應8h，tlc監(jiān)控原料反應完全后冷卻至室溫，用乙酸乙酯50ml萃取反應液三次，合并有機相，有機相經(jīng)無水硫酸鈉30g干燥后蒸除溶劑，經(jīng)硅膠柱層析分離提純得到純凈的2’-甲基-5-羥基聯(lián)苯-2-甲醚8.2g；¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ:7.76(d,j＝8.6hz,1h),7.45-7.38(m,3h),7.11-7.06(m,3h),5.72(s,1h),3.76(s,3h),2.35(s,3h)。

實施例4

在反應瓶中，把甲苯15g加入到冰乙酸100ml中，再加入定位催化劑鐵粉3g，在室溫條件下緩慢滴加溴素8ml，約30min滴加完，升溫至40℃后反應5h，然后再放入300w的鎢燈下進行光照反應5h，tlc監(jiān)控原料反應完全，真空下蒸除溶劑冰乙酸，濃縮物中加入一定量的質(zhì)量濃度為20％的氫氧化鈉溶液，過濾反應液，濾液用二氯甲烷萃取三次，合并有機相，有機相再經(jīng)過無水硫酸鈉干燥后濃縮得到鄰溴芐溴24g；¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ:7.51(d,j＝12.0hz,1h),7.27-7.23(m,3h),4.37(s,2h)。

實施例6

在反應瓶中加入二氯化鈀5g，再加入質(zhì)量比為1:1的甲醇-水混合溶液250ml，再加入羧甲基纖維素鈉1g，用碳酸鈉調(diào)節(jié)體系的ph為4.5，加入羥基磷灰石50g，在室溫下攪拌2h后放入高壓釜中，在100kpa，100℃條件下攪拌加氫還原反應2h，減壓抽濾，去離子水洗至中性且經(jīng)硝酸銀溶液檢測無氯離子，在常壓60℃條件下干燥3h得到鈀/羥基磷灰石40g。

實施例7

在反應瓶中，把2’-甲基-5-羥基聯(lián)苯-2-甲醚10g和鄰溴芐溴15g加入到干燥的丙酮300ml中，再加入羥基氫活化催化劑鈀/羥基磷灰石1g，加熱至回流反應4h，tlc監(jiān)控原料反應完全，在真空條件下蒸除反應溶劑，濃縮物加入到二氯甲烷250ml中，再用純凈水50ml洗滌有機相三次，分出有機相，在真空條件下蒸除溶劑后得到產(chǎn)品粗品，再經(jīng)硅膠柱層析分離提純得到純凈的5-(2-溴苯甲醇)-2’-甲基聯(lián)苯-2-甲醚15g；¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ:7.78(d,j＝8.0hz,1h),7.53-7.47(m,3h),7.26-7.18(m,5h),7.03-7.01(m,2h),5.21(s,2h),3.69(s,3h),2.31(s,3h)。

實施例8

在反應瓶中，把5-(2-溴苯甲醇)-2’-甲基聯(lián)苯-2-甲醚10g和碳酸鉀8g加入二甲基乙酰胺150ml中，在n2保護下加入苯環(huán)氫活化催化劑鈀/羥基磷灰石1g，向反應體系中持續(xù)通入n2，同時排出n2，使其保持一個穩(wěn)定流通環(huán)境，室溫攪拌30min后密閉反應瓶，把其放置在微波反應器中，加熱到100℃反應24h，tlc監(jiān)控原料反應完全；從微波反應器中拿出反應瓶，加入純凈水100ml淬滅反應，再用乙酸乙酯60ml萃取反應液三次，合并有機相，再用無水硫酸鈉30g干燥后蒸除溶劑，最后經(jīng)硅膠柱層析分離提純得到3-(2-甲基苯)-6h-二苯并吡喃-2-甲醚8.2g；¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ:7.81(d,j＝8.0hz,1h),7.46-7.41(m,4h),7.35-7.31(m,4h),7.09(s,1h),5.23(s,2h),3.75(s,3h),2.32(s,3h)。

實施例9

在反應瓶中，把3-(2-甲基苯)-6h-二苯并吡喃-2-甲醚15g加入到二氯甲烷300ml中，再加入溴化鋰10g，在0℃條件下攪拌2h，tlc監(jiān)控原料反應完全后，蒸除反應溶劑得到3-(2-甲基苯)-6h-二苯并吡喃-2-羥基；¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ:¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ:7.82(d,j＝8.0hz,1h),7.46-7.44(m,2h),7.42-7.40(m,2h),7.35-7.31(m,4h),7.07(s,1h),5.46(s,1h),5.23(s,2h),2.32(s,3h)。

實施例10

反應瓶中，把3-(2-甲基苯)-6h-二苯并吡喃-2-羥基10g加入到乙腈150ml中，再加入催化劑碘化亞銅5g和叔丁醇鉀5g，氮氣保護反應體系，機械攪拌加熱至70℃，反應10h后經(jīng)tlc監(jiān)控原料反應完全，減壓蒸出溶劑乙腈，再加入一定量的甲基叔丁基醚700ml，冷卻至-5℃，攪拌過程中逐漸有大量固體析出，過濾反應液得到固體，并用一定量的冷甲苯200ml洗滌，濾餅烘干后得到6h-苯并吡喃并苯基并吡喃并苯9.3g；¹hnmr(400mhz,cdcl3)δ:7.63(d,j＝12.0hz,4h),7.55-7.51(m,4h),7.13-7.11(m,2h),5.15(s,4h)。

實施例11

抗腫瘤活性測試

收集生長期前列腺癌細胞du145，以mts法測定一下化合物的抗癌活性，將細胞以適當濃度(每毫升4×10⁴個細胞)加到96孔細胞培養(yǎng)板中(含10％胎小牛血清得培養(yǎng)液配成單個細胞懸液)，培養(yǎng)24小時后，在37℃、體積濃度為5％的co2條件下與不同濃度的化合物作用72小時，然后將mts(最終質(zhì)量濃度2mg/ml)和dms(最終摩爾濃度30μm)的混合物直接加入含細胞的培養(yǎng)基中，繼續(xù)置培養(yǎng)箱孵育4h。作用4h后，棄去上清液，每孔加入150μldmso，振蕩，細胞存活率通過其對mts作用的代謝物在酶聯(lián)免疫監(jiān)測儀490nm波長下的吸收率測定，fshr拮抗劑藥物分子對該細胞的抑制率ic50為5.1μmol·l^-1。

初步生物活性測試表明，該化合物在前列腺癌細胞du145中對癌細胞有一定抑制作用。

綜上所述，本發(fā)明提供了一種具有苯并吡喃結(jié)構(gòu)的fshr拮抗劑及其制備方法，這是該類化合物該用途的首次發(fā)現(xiàn)，具有一定的研發(fā)潛力。

以上實施例描述了本發(fā)明的基本原理、主要特征及優(yōu)點，本行業(yè)的技術(shù)人員應該了解，本發(fā)明不受上述實施例的限制，上述實施例和說明書中描述的只是說明本發(fā)明的原理，在不脫離本發(fā)明原理的范圍下，本發(fā)明還會有各種變化和改進，這些變化和改進均落入本發(fā)明保護的范圍內(nèi)。