專利名稱：核糖核酸(rna)的提取方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種RNA(核糖核酸)樣品的制備方法，適用于生物樣品，特別是從海產(chǎn)品中提取RNA的方法。
現(xiàn)有的從海產(chǎn)品中提取RNA(核糖核酸)樣品的方法有美國德州baylormedicalcallge的分子病毒學(xué)研究中心的Robertl，Atmar等人在“Appliedenvironmentalmicrobilogy”vol59，NO.21993。發(fā)表的用PCR檢測貝類病毒方法，這種方法采用有機絮凝作用和聚乙二醇沉淀法提取RNA樣品，其方法較復(fù)雜且耗資大。
本發(fā)明旨在提出一種快速、簡便的提取海產(chǎn)品，特別是貝類產(chǎn)品中的RNA的方法。
本發(fā)明提出的提取RNA的方法包括1、從新鮮海產(chǎn)品、如貝類、蝦類中摘取內(nèi)臟，低溫保存，(可選擇4℃至-70℃)。
2、取上述低溫保存的樣品若干，置入堿性緩沖液中勻漿、搖勻、離心使顆粒物沉淀，3、往上清中加入6-12%聚乙二醇，混勻，在0℃-6℃中放置2小時以上，4、分離去上清，將沉淀物溶于堿性緩沖液中，混勻，去不溶物。
5、往上清中加入有機酸(可選用5-10%的三氯乙酸或三氟乙酸或0.5-1%磺基水楊酸)，使蛋白質(zhì)變性，然后析出變性蛋白，高速離心，使不溶物沉于管底。
6、按常規(guī)方法沉淀、洗滌、干燥溶液中的RNA樣品。
上述堿性緩沖液可優(yōu)先選用Tris或甘氨酸或磷酸鹽等，PH值7.5-11，濃度0.05M-0.5M。
本發(fā)明公開的提取RNA的方法快速、簡便、僅需8-10小時即可完成。特別是能從大樣中提取微量的RNA。用本法提取海產(chǎn)品中的RNA不含有破壞RNA和抑制逆轉(zhuǎn)錄及PCR反應(yīng)的因子，為使用RT-PCR檢測法提供理想、合格的RNA樣品。
以下結(jié)合實施例對本發(fā)明作進一步描述。
本實施例是從新鮮貝類或蝦中提取甲肝病毒的RNA或腸道病毒的RNA。具體步驟如下1、從新鮮貝類或蝦樣品中摘取內(nèi)臟，置-20℃保存。
2、稱取樣品10克，置入100ml0.05M甘氨酸，0.15MNaClpH9.5中勻漿，振搖10分鐘，12000rpm離心20分鐘。
3、往上清中加入8克聚乙二醇，混勻。4℃放置2小時以上。
4、12000rpm離心10分鐘。去上清，沉淀溶于10ml0.1MNaCl·0.05MTris-HClpH9.5中，混勻。20000rpm離心20分鐘。
5、向上清中加入1ml50%三氯乙酸，煮沸10分鐘，冰浴10分鐘。20000rpm離心10分鐘。上清移入另管中。
6、加1ml3M乙酸鈉pH5.0，再加入2.5倍的乙醇。離心后，沉淀用70%乙醇洗滌，干燥，即得RNA樣品。
7、將RNA樣品溶于10-20微升水中，-70℃保存即可。
權(quán)利要求
1.一種RNA的提取方法，適用于生物樣品，特別是從海產(chǎn)品中提取RNA的方法，包括以下步驟1)取新鮮海產(chǎn)品的內(nèi)臟，低溫保存，然后，2)置入堿性緩沖液勻漿，搖勻，離心使顆料物沉淀，然后，3)往上清中加入聚乙二醇，混勻，在0℃-6℃中放置2小時以上，然后，4)分離去上清，將沉淀物溶于堿性緩沖液中，去不溶物，然后，5)往上清中加入有機酸，去不溶物，然后，6)上清中的RNA按常規(guī)方法沉淀，洗滌、干燥。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征是采用的有機酸可以是5-10%的三氯乙酸或5-10%的三氟乙酸或0.5-1%磺基水楊酸。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種提取RNA的方法，它是從新鮮海產(chǎn)品中摘取內(nèi)臟，低溫保存后置入堿性緩沖液中，再向上清中加入聚乙二醇沉淀、溶解后加入有機酸，析出變性蛋白，上清再沉淀、洗滌、干燥，即可得到RNA。本發(fā)明公開的提取RNA的方法具有快速、簡易。RNA樣品中不含有破壞RNA和抑制逆轉(zhuǎn)錄和PCR反應(yīng)的因子。
文檔編號C07H21/02GK1113916SQ9410609
公開日1995年12月27日 申請日期1994年5月26日 優(yōu)先權(quán)日1994年5月26日
發(fā)明者楊豐, 徐洵 申請人:國家海洋局第三海洋研究所