專利名稱：一種從血清中提取微核糖核酸的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于一種從血清中提取微核糖核酸的方法。
背景技術(shù)：
miRNA (microRNA微核糖核酸)是一類內(nèi)源性的單鏈非編碼RNA (核糖核酸)，一般由21個(gè)核苷酸組成。2010年9月10日發(fā)布的Sanger miRNA數(shù)據(jù)庫16. 0版中收錄了來自142個(gè)物種的17341條成熟miRNA序列信息，其中包括人類細(xì)胞已克隆到的1048種 miRNA (http://www. mirbase. org)。作為微型調(diào)節(jié)分子，miRNA通過與mRNA (信使核糖核酸) 的3’-UTR特異性結(jié)合，抑制蛋白質(zhì)翻譯或直接導(dǎo)致mRNA降解，在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控蛋白質(zhì)的表達(dá)。生物信息學(xué)預(yù)測結(jié)果顯示，在哺乳動(dòng)物中50%左右的蛋白編碼基因的翻譯活性都會(huì)受到miRNA的調(diào)控。功能學(xué)研究顯示，miRNA參與調(diào)控幾乎所有細(xì)胞生命活動(dòng)過程，并在人類多種病理?xiàng)l件下都會(huì)發(fā)生表達(dá)量的變化。2008年，在循環(huán)核酸的基礎(chǔ)上，Chim在孕婦血漿中檢測到了循環(huán)胎盤miRNA (微核糖核酸)，很快便提出了循環(huán)miRNA這一概念，旨在探索存在于體液(特別足血清/血漿) 中的miRNA作為生物標(biāo)志物，以便為疾病分型和預(yù)后提供新的途徑。近兩年已經(jīng)在心血管疾病、腫瘤、組織損傷等領(lǐng)域開展了一系列循環(huán)miRNA標(biāo)志物的研究與開發(fā)。在進(jìn)行該方面工作中面臨的問題之一就是如何最大限度地從血清或血漿中提取獲得miRNA用于檢測。當(dāng)前從體液中分離純化微核糖核酸的技術(shù)主要有2種，即常規(guī)TRIzoI法和柱分離技術(shù)。常規(guī)TRIzoI法沿用到血清miRNA的提取，基本上是沿用mRNA的分離技術(shù)，未考慮 miRNA與mRNA在物理性質(zhì)和存在方式上的差別。如miRNA在長度上遠(yuǎn)小于mRNA，此外miRNA 在細(xì)胞中主要以蛋白復(fù)合體的方式存在；常規(guī)TRIzol提取方法會(huì)造成血清miRNA的大量丟失。針對(duì)miRNA的分離柱提取方法可在一定程度上解決問題，但柱材料的吸附同樣會(huì)造成 miRNA的損失，且分離柱法成本高，提取一個(gè)樣本的價(jià)格一般為TRIzol法的10倍左右。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種從血清中提取微核糖核酸的方法，具有方法簡單實(shí)用， 能有效避免血清微核糖核酸在提取過程中的損失，提取成本低、速度快和提取率高的優(yōu)點(diǎn)。為此，本發(fā)明的方法的步驟如下(1) 500 μ 1血漿或血清中加入500 μ 1 TRIzol，渦旋震蕩器劇烈震蕩30s，室溫靜置 5min ；(2)加100 μ 1異丙醇，顛倒混勻，渦旋震蕩器劇烈震蕩30s，至液體透明，室溫靜置 5min ；(3) 3000rpm 4°C離心lOmin，將上清液移至新的離心管中；(4)在該離心管的上清液中加500 μ 1氯仿，顛倒混勻，13000rpm 4°C離心IOmin,
再將上清液移至新的離心管中；(5)在該離心管中加入占其內(nèi)上清液體積2. 5倍量的乙醇，顛倒混勻，室溫靜置
權(quán)利要求
1. 一種從血清中提取微核糖核酸的方法，其特征在于該方法的步驟如下(1)500μ 1血漿或血清中加入500 μ 1 TRIzol，渦旋震蕩器劇烈震蕩30s，室溫靜置 5min ；(2)加100μ 1異丙醇，顛倒混勻，渦旋震蕩器劇烈震蕩30s，至液體透明，室溫靜置 5min ；(3)3000rpm 4°C離心lOmin，將上清液移至新的離心管中；(4)在該離心管的上清液中加500μ 1氯仿，顛倒混勻，13000rpm 4°C離心lOmin，再將上清液移至新的離心管中；(5)在該離心管中加入占其內(nèi)上清液體積2.5倍量的乙醇，顛倒混勻，室溫靜置 IOmin ；(6)13000rpm 4°C離心 lOmin，沉淀 RNA ；(7)吸凈乙醇，干燥RNA;(8)30 μ 1 DEPC水溶解RNA，58°C水浴lOmin，得本發(fā)明提取物。
全文摘要
本發(fā)明提供一種從血清中提取微核糖核酸的方法，它的的方法是取500μl血漿或血清中加入500μl TRIzol，渦旋震蕩器劇烈震蕩30s，室溫靜置5min；加100μl異丙醇，顛倒混勻，渦旋震蕩器劇烈震蕩30s，至液體透明，室溫靜置5min；3000rpm 4℃離心10min，將上清液移至新的離心管中；在該離心管的上清液中加500μl氯仿，顛倒混勻，13000rpm 4℃離心10min，再將上清液移至新的離心管中；在該離心管中加入占其內(nèi)上清液體積2.5倍量的乙醇，顛倒混勻，室溫靜置10min；13000rpm 4℃離心10min，沉淀RNA；吸凈乙醇，干燥RNA；30μl DEPC水溶解RNA，58℃水浴10min，得本發(fā)明提取物。本發(fā)明方法簡單實(shí)用，能有效避免血清微核糖核酸在提取過程中的損失，提取成本低、速度快和提取率高的優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號(hào)C12N15/10GK102226175SQ201110109080
公開日2011年10月26日 申請(qǐng)日期2011年4月29日 優(yōu)先權(quán)日2011年4月29日
發(fā)明者叢祥鳳, 侯劍峰, 張洋, 聶宇, 陳曦, 顧海勇 申請(qǐng)人:中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院阜外心血管病醫(yī)院