專利名稱：用dll4拮抗劑和化療劑治療癌癥的方法
用DLL4拮抗劑和化療劑治療癌癥的方法
背景技術(shù)：
發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明涉及用δ樣配體4(Dll4)拮抗劑(尤其是與人D114特異性結(jié)合的人抗體或其片段)與一種或多種化療劑聯(lián)合治療癌癥或腫瘤的方法，并且涉及包含D114拮抗劑和化療劑的藥物組合物。相關(guān)領(lǐng)域的描述D114是Notch配體的δ家族的成員，其通過血管內(nèi)皮顯示出高選擇性表達 (Shutter 等，2000，Genes Develop. 14 :1313_1318)。D114 是 Notch 受體包括 Notchl 和 Notch4的配體。D114拮抗劑可用于抑制各種癌癥中的腫瘤生長。人D114(hD114)的核酸和氨基酸序列分別如SEQ ID NO :1和2所示。對人D114特異的抗體以及應(yīng)用D114抗體的癌癥/腫瘤治療公開在國際專利申請公開文本W(wǎng)O 2007/143689、WO 2008/042236和WO 2007/070671 中。化療劑單獨地以及與外科手術(shù)和/或放療聯(lián)合地廣泛用于治療癌癥。應(yīng)用 D114拮抗劑和化療劑的聯(lián)合治療公開在美國專利申請公開文本US2008/0014196和US 2008/0107648 中。發(fā)明概述在第一個方面，本發(fā)明涉及在有需要的受試者中治療癌癥的方法，該方法包括給該受試者施用Dl 14拮抗劑以及化療劑，其中該癌癥被治療。通過本發(fā)明治療的受試者可包括罹患癌癥的任何哺乳動物物種，但優(yōu)選人。本發(fā)明的聯(lián)合治療尤其可用于D114相關(guān)的或D114介導的病癥或疾病，所述病癥或疾病直接或間接地受D114活性調(diào)節(jié)的影響。更具體地，由于已顯示D114涉及血管生長和發(fā)育，因此應(yīng)用D114拮抗劑抑制或降低D114介導的血管生長或發(fā)育或成熟是生長和存活需要充足的血液供應(yīng)的癌癥/腫瘤的有效療法。此外，將D114拮抗劑與包括生長抑制劑和其他細胞毒性劑的化療劑聯(lián)用協(xié)同地提高了它們的抗癌/抗腫瘤效果。通過本發(fā)明的方法可治療的癌癥/腫瘤包括但不限于各種實體惡性腫瘤，包括卵巢癌、子宮癌、乳腺癌、 肺癌、肝癌、結(jié)腸直腸癌、膀胱癌、腎癌、前列腺癌、胰腺癌、胃癌、骨癌、皮膚癌包括黑色素瘤、惡性軟組織肉瘤包括但不限于尤因(Ewing)肉瘤、橫紋肌肉瘤、平滑肌肉瘤、脂肪細胞 (adipocytic)肉瘤、滑膜肉瘤、惡性纖維組織細胞瘤、上皮樣血管內(nèi)皮瘤、血管肉瘤、纖維肉瘤以及未分級肉瘤、白血病包括骨髓瘤等等。在一個實施方案中，D114拮抗劑是以高親和性與D114特異性結(jié)合并阻斷D114與 Notch受體結(jié)合和/或中和D114活性的D114抗體或其片段(“D114Ab”)。該抗體可為多克隆、單克隆、嵌合、人源化或完全人抗體。優(yōu)選地，抗體是完全的(fully)人單克隆抗體或單克隆抗體片段。該抗體片段可為單鏈抗體、Fab或F(ab’)2。在另一實施方案中，D114Ab 與 D114(SEQ ID NO 2)的 N-端結(jié)構(gòu)域(S27-R172)、 或DSL結(jié)構(gòu)域(V173-C217)、或N-端-DSL結(jié)構(gòu)域(S27-C217)內(nèi)的表位結(jié)合。在本發(fā)明方法中使用的D114 Ab能夠以高親和性與人D114結(jié)合，并且其解離常數(shù)(Kd)為約500pM或更低，包括約300pM或更低，以及包括約200pM或更低，如通過表面等離子體共振所測得的那樣。例如，所述Dl 14Ab具有包含三個重鏈CDR(H-CDR)的重鏈可變區(qū)(HCVR)和包含三個輕鏈⑶R(L-OTR)的輕鏈可變區(qū)(LCVR)，其中該三個重鏈⑶R包括SEQ ID NO :20的氨基酸序列的⑶R1、⑶R2和⑶R3，且該三個輕鏈⑶R包括SEQ ID NO 28的氨基酸序列的⑶R1、 ⑶R2和⑶R3。在另一實施方案中，D114Ab的重鏈⑶R1、⑶R2和⑶R3分別包含SEQ ID NO 22、24和26的氨基酸序列。在另一實施方案中，D114Ab的輕鏈⑶R1、⑶R2和⑶R3分別包含SEQ ID NO 30、32和34的氨基酸序列。在又一實施方案中，該Dl 14Ab包含重鏈⑶Rl、 CDR2和CDR3序列以及輕鏈CDRU CDR2和CDR3序列，其中所述重鏈CDRU CDR2和CDR3序列分別包含SEQ ID NO :22、24和26，并且所述輕鏈CDRU CDR2和CDR3序列分別包含SEQ ID N0:30、32和34。在又一實施方案中，該D114Ab含有包含SEQ ID NO :20或116的氨基酸序列的HCVR，或包含SEQ ID NO 28或118的氨基酸序列的LCVR。在又一實施方案中，該 D114Ab 包含 SEQ ID NO 20/28 (REGN281)或 116/118 (REGN421)的 HCVR/LCVR 組合。在另一實施方案中，該D114Ab包含選自以下的重鏈⑶Rl/⑶R2/⑶R3組合和輕鏈 CDR1/CDR2/CDR3 組合分別為 SEQ ID NO 6/8/10 和 SEQ ID NO 14/16/18 ；分別為 SEQ ID NO 38/40/42 和 SEQ ID NO :46/48/50 ；分別為 SEQ ID NO 54/56/58 和 SEQ ID NO 62/64/66 ；分別為 SEQ ID NO 70/72/74 和 SEQ ID NO 78/80/82 ；分別為 SEQ IDNO 86/88/90 和 SEQ ID NO :94/96/98 ；以及分別為 SEQ ID NO 102/104/106 和 SEQ ID NO: 110/112/114。在另一實施方案中，D114Ab 含有包含 SEQ IDNO :4、36、52、68、84 或 100 的氨基酸序列的HCVR，或包含SEQ ID NO :12、44、60、76、92或108的氨基酸序列的LCVR。在又一實施方案中，D114Ab 包含選自以下的 HCVR/LCVR 組合SEQ ID NO 4/12 (REGN279)、SEQ ID NO 36/44 (REGN290)、SEQ ID NO 52/60 (REGN306)、SEQ ID NO 68/76 (REGN309)、SEQ ID NO :84/92(REGN310)和 SEQ ID NO 100/108(REGN289)。編碼SEQ ID NO :4、6、8、10、12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38、40、 42、44、46、48、50、52、54、56、58、60、62、64、66、68、70、72、74、76、78、80、82、84、86、88、90、 92、94、96、98、100、102、104、106、108、110、112、114、116和 118 的氨基酸序列的核苷酸序列分別如 SEQ ID NO :3、5、7、9、11、13、15、17、19、21、23、25、27、29、31、33、35、37、39、41、43、 45、47、49、51、53、55、57、59、61、63、65、67、69、71、73、75、77、79、81、83、85、87、89、91、93、 95、97、99、101、103、105、107、109、111、113、115 和 117 所示。在一個實施方案中，化療劑是抗有絲分裂劑，諸如多西紫杉醇、紫杉醇等；基于鉬的化療化合物，諸如順鉬、卡鉬、異丙鉬、奧沙利鉬等；或其他常用的細胞毒性劑，諸如5-氟尿嘧啶(5-FU)、卡培他濱、伊立替康、甲酰四氫葉酸、吉西他濱；受體酪氨酸激酶和/或血管發(fā)生抑制劑，諸如ErbB抑制劑、III類RTK抑制劑、VEGFR抑制劑等；并且D114拮抗劑是如上所述的D114抗體或其片段。在第二方面，本發(fā)明涉及在有需要的受試者中降低、減少或停止腫瘤生長的方法， 該方法包括給所述受試者施用D114拮抗劑和化療劑，其中腫瘤生長被降低、減少或停止。在第三方面，本發(fā)明涉及與單獨施用各治療劑相比，降低達到期望的治療效果所需的化療劑或D114拮抗劑的量的方法，其包括與D114拮抗劑一起施用化療劑。在一個實施方案中，在存在共同施用的D114拮抗劑的情況下，達到期望治療效果例如停止或減少腫瘤生長的化療劑的量減少至少10%、減少至少20%、減少至少30%、減少至少40%、或減少至少50%，或者反之亦然。一般地，期望化療劑或D114拮抗劑的量可減少約30%至約50%。 因此，由于能夠降低有效劑量，本發(fā)明的方法對于這樣的癌癥患者是尤其有利的，所述患者對任一種治療劑單獨治療所需的高劑量引起的副作用具有低耐受性。在第四方面，本發(fā)明涉及包含D114拮抗劑、化療劑和可藥用載體的藥物組合物。 在一個實施方案中，所述D114拮抗劑是以高親和性與D114特異性結(jié)合并中和D114活性的 D114Ab或其片段，并且所述化療劑是本文所述那些中的任一種。在第五方面，本發(fā)明涉及藥盒(kit)，其含有包含本發(fā)明的藥物組合物的容器和具有使用說明的包裝說明書。在一個實施方案中，藥盒可包含其中包含特異性結(jié)合hD114的抗體或其抗原結(jié)合片段的容器、其中包含至少一種選自本文所述的那些的化療劑的一個或多個其他容器、以及具有使用說明的包裝說明書。其它目的和優(yōu)點將在閱讀后面的發(fā)明詳述之后變得明了。附圖簡述

圖1顯示了 D114Ab與順鉬聯(lián)合對移植在表達人源化Dl 14蛋白的重度聯(lián)合免疫缺陷(SCID)小鼠(人源化D114SCID小鼠)中的人VMCubl腫瘤(膀胱癌)生長的影響(實施例1)。人Fc對照(帶有實線的 ) ；REGN421 (D114Ab) 2mg/kg/注射(帶有虛線的 )；順鉬 0. 5mg/kg/ 注射(□)；順鉬 2mg/kg/ 注射(■ ) ；REGN421 2mg/kg/ 注射 + 順鉬 0. 5mg/ kg/注射(〇)；以及REGN4212mg/kg/注射+順鉬2mg/kg/注射(·)。圖2顯示了 D114Ab與順鉬聯(lián)合對移植在人源化D114SCID小鼠中的人A549腫瘤 (非小細胞性肺癌)生長的影響(實施例2)。AFc對照(· ) ；REGN421 6mg/kg總劑量 (〇)；順鉬 5mg/kg 總劑量(Δ )；順鉬 9mg/kg 總劑量(▲ ) ；REGN421 6mg/kg+ 順鉬 5mg/ kg總劑量( )；以及REGN4216mg/kg+順鉬9mg/kg總劑量( )。圖3顯示了 D114Ab與5-FU聯(lián)合對移植在人源化D114SCID小鼠中的人HCTl 16 (結(jié)腸直腸癌)生長的影響(實施例5)。人Fc對照(眷)；REGN4216mg/kg總劑量(O ) ；5-FU 45mg/kg 總劑量(Δ ) ； 5-FU 75mg/kg 總劑量(▲) ； REGN421 6mg/kg+5_FU 45mg/kg 總劑量( )；以及 REGN421 6mg/kg+5-FU 75mg/kg 總劑量( )。圖4顯示了 D114Ab與伊立替康聯(lián)合對移植在人源化D114SCID小鼠中的人HCTl 16 腫瘤生長的影響(實施例6)。人Fc對照(·)；REGN4216mg/kg總劑量(〇)；伊立替康22. 5mg/kg總劑量(Δ )；伊立替康75mg/kg總劑量(▲ ) ；REGN421 6mg/kg+伊立替康 22. 5mg/kg 總劑量( )；以及 REGN421 6mg/kg+ 伊立替康 75mg/kg 總劑量( )。圖5顯示了與15mg/kg的hFc相比，使用0. 5、5或15mg/kg的單劑量REGN421，移植在人源化D114SCID小鼠中的Colo205人結(jié)腸直腸腫瘤細胞中Heyl基因表達的平均(4 只小鼠/組)倍數(shù)變化，在給藥后5、10、24和72小時以及7天時測量。發(fā)明詳述在描述本發(fā)明的方法之前，應(yīng)當理解本發(fā)明并不局限于所描述的特定方法和實驗條件，因為此類方法和條件可以改變。也應(yīng)當理解，本文所用的術(shù)語僅旨在描述特定的實施方案，并不意在構(gòu)成限制，因為本發(fā)明的范圍將僅受所附權(quán)利要求的限定。如本說明書和所附權(quán)利要求書所使用，單數(shù)形式“一種(a，an)”和“該/所述 (the)”包括所復數(shù)的指代物，除非上下文中另有明確規(guī)定。因而，例如提及“一種方法”包括本文中所述類型的一種或多種方法、和/或步驟，和/或在閱讀本發(fā)明內(nèi)容之后它們對于本領(lǐng)域技術(shù)人員將是顯而易見的。除非另外定義，否則本文中所用的所有技術(shù)和科學術(shù)語均具有如本發(fā)明所屬領(lǐng)域普通技術(shù)人員通常理解的相同含義。盡管與本文所述的方法和材料相似或等價的任何方法和材料均可用于實施或檢驗本發(fā)明，但優(yōu)選的方法和材料是現(xiàn)在所描述的。定義“ δ樣配體4”、“D114”、“hD114”可互換使用，用于指由SEQ ID NO 1的核酸序列
編碼的蛋白質(zhì)和具有SEQ ID NO 2的氨基酸序列的蛋白質(zhì)。D114拮抗劑包括能夠阻斷D114與下述結(jié)合的D114抗體及其片段=Notch受體(諸如Notchl和Notch4)、包含融合至多聚化成分上的D114胞外域的融合蛋白質(zhì)或其片段(例如參見美國專利申請公開號2006/0134121和2008/0107648)；以及肽和肽體 (P印tibodies)(例如參見，美國專利申請公開號2003/0229023)。除非另外明確指出，否則本文使用的術(shù)語“抗體”應(yīng)當理解為包括包含兩個免疫球蛋白重鏈和兩個免疫球蛋白輕鏈的抗體分子(即，“完全的抗體分子”)及其抗原結(jié)合片段。本文使用的術(shù)語抗體的“抗原結(jié)合部分”、抗體的“抗原結(jié)合片段”等包括與抗原特異性結(jié)合形成復合物的任何天然存在的、可通過酶獲得的、合成的、或遺傳工程的多肽或糖蛋白。抗體的抗原結(jié)合片段可應(yīng)用任何合適的標準技術(shù)例如從完全的抗體分子衍生得到，所述技術(shù)諸如是蛋白水解消化或包括編碼抗體可變結(jié)構(gòu)域及任選的恒定結(jié)構(gòu)域的DNA的操作和表達的重組基因工程技術(shù)。此類DNA是公知的和/或可容易地從例如商業(yè)來源、DNA文庫(例如包括噬菌體-抗體文庫)獲得，或可合成得到?？蓪NA進行測序以及進行化學操作或通過應(yīng)用分子生物學技術(shù)操作，例如將一個或多個可變和/或恒定結(jié)構(gòu)域排列至合適的構(gòu)型，或引入密碼子，產(chǎn)生半胱氨酸殘基，修飾、添加或缺失氨基酸等等?？乖Y(jié)合片段的非限制性實例包括⑴Fab片段；(ii) F (ab ‘ ) 2片段；(iii) Fd片段；(iv)Fv片段；(ν)單鏈Fv(ScFv)分子；(vi) dAb片段；以及(vii)由模擬抗體高變區(qū)的氨基酸殘基組成的最小識別單位(例如，分離的互補決定區(qū)(CDR))。其他工程分子，諸如雙體(diabodies)、三體、四體和微型體(minibodies)也包括在本文使用的表述“抗原結(jié)合片段”之內(nèi)?？贵w的抗原結(jié)合片段一般將包含至少一個可變結(jié)構(gòu)域。該可變結(jié)構(gòu)域可以是任意大小的或具有任意的氨基酸組成，并且通常將包含與一個或多個框架序列相鄰或在一個或多個框架區(qū)構(gòu)架內(nèi)的至少一個CDR。在具有與\結(jié)構(gòu)域相關(guān)聯(lián)的Vh結(jié)構(gòu)域的抗原結(jié)合片段中，該Vh和\結(jié)構(gòu)域可以以任何合適的排列相對于彼此定位。例如，可變區(qū)可以是二聚的， 并含有VH-VH、VH-\或Vft 二聚體。備選地，抗體的抗原結(jié)合片段可含有單體Vh或\結(jié)構(gòu)域。在某些實施方案中，抗體的抗原結(jié)合片段可含有與至少一個恒定結(jié)構(gòu)域共價連接的至少一個可變結(jié)構(gòu)域?？稍诒景l(fā)明的抗體的抗原結(jié)合片段中發(fā)現(xiàn)的可變和恒定結(jié)構(gòu)域的非限制性、示例性構(gòu)型包括⑴ VChI ； (ii)VH-CH2 ； (iii)VH-CH3 ； (iv)VH-CH1-CH2 ； (ν) Vh-Ch 1-Ch2-Ch3 ； (vi)VH-CH2-CH3 ； (vii) Vh-Cl ； (viii) Vl-ChI ； (ix)VL-CH2 ； (χ) VL-CH3 ； (xi) Vl-Ch 1-Ch2 ； (xii)VL-CHl-CH2-CH3 ； (xiii) VL-CH2-CH3 ^P (xiv)VfQ。在可變和恒定結(jié)構(gòu)域的任何構(gòu)型(包括上述任何示例性構(gòu)型)中，可變和恒定結(jié)構(gòu)域可彼此直接連接或通過完全或部分鉸鏈區(qū)或連接區(qū)連接。鉸鏈區(qū)可由至少2(例如，5、10、15、20、40、60或更多)個氨基酸組成，其在單個多肽分子中的相鄰可變和/或恒定結(jié)構(gòu)域之間產(chǎn)生柔性的或半柔性連接。此外，本發(fā)明抗體的抗原結(jié)合片段可包含上述的任何可變和恒定結(jié)構(gòu)域構(gòu)型非共價地彼此關(guān)聯(lián)和/或與一個或多個單體Vh或\結(jié)構(gòu)域關(guān)聯(lián)(例如，通過二硫鍵)的同型二聚體或異源二聚體(或其他多聚體)。如完全的抗體分子那樣，抗原結(jié)合片段可以是單特異性的或多特異性的(例如， 雙特異性)?？贵w的多特異性抗原結(jié)合片段一般地將包含至少兩個不同的可變結(jié)構(gòu)域，其中每一個可變結(jié)構(gòu)域能夠特異性地與單獨的抗原結(jié)合、或與相同抗原上的不同表位結(jié)合。包括本文公開的示例性雙特異性抗體類型(format)在內(nèi)的任何多特異性抗體類型可以采用本領(lǐng)域可獲得的常規(guī)技術(shù)而適用于本發(fā)明抗體的抗原結(jié)合片段的情況中。本文使用的術(shù)語“人抗體”意圖包括具有得自人種系免疫球蛋白序列的可變區(qū)和恒定區(qū)的抗體。本發(fā)明的人mAb可包含不由人種系免疫球蛋白序列編碼的氨基酸殘基(例如，通過體外隨機或位點特異性誘變、或通過體內(nèi)體細胞突變而引入的突變)，例如在CDR 中，并且尤其是在CDR3中。然而，本文使用的術(shù)語“人抗體”不意圖包括其中衍生自另一哺乳動物物種種系(例如小鼠)的CDR序列嫁接到人FR序列中的mAb。與相應(yīng)種系序列相比較，本文公開的完全的人抗-Dl 14抗體可在重鏈和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域的框架區(qū)和/或CDR區(qū)中包含一個或多個氨基酸置換、插入和/或缺失。此類突變可通過將本文公開的氨基酸序列與例如可從公開的抗體序列數(shù)據(jù)庫中獲得的種系序列相比較而很容易地確定。本發(fā)明包括衍生自本文公開的任何氨基酸序列的抗體及其抗原結(jié)合片段，其中一個或多個框架區(qū)和/或CDR區(qū)中的一個或多個氨基酸回復突變?yōu)橄鄳?yīng)的種系殘基或相應(yīng)種系殘基的保守氨基酸置換(天然或非天然)(此類序列改變可稱為“種系回復突變”)。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員從本文公開的重鏈和輕鏈可變區(qū)序列開始，可容易地產(chǎn)生許多包含一個或多個單獨的種系回復突變或其組合的抗體和抗原結(jié)合片段。在某些實施方案中，Vh和/或\結(jié)構(gòu)域中的所有框架和/或CDR殘基均回復突變?yōu)榉N系序列。在其他實施方案中，僅有某些殘基回復突變?yōu)榉N系序列，例如僅為在FRl的前8個氨基酸或FR4的后 8個氨基酸中發(fā)現(xiàn)的突變殘基，或僅為CDR1、CDR2或CDR3中發(fā)現(xiàn)的突變殘基。此外，本發(fā)明的抗體可含有框架區(qū)和/或CDR區(qū)中的兩個或更多個種系回復突變的任何組合，即其中某些個體殘基突變回種系序列，而某些與種系序列不同的其他殘基得以保留。一旦獲得，則可容易地測試含有一個或多個種系回復突變的抗體和抗原結(jié)合片段的一種或多種期望的性質(zhì)，諸如改進的結(jié)合特異性、升高的結(jié)合親和性、改進的或增強的拮抗或激動生物學性質(zhì) (按它們可能的情況)、降低的免疫原性等。以這種一般方法得到的抗體和抗原結(jié)合片段包括在本發(fā)明之內(nèi)。本發(fā)明還包括包含本文公開的任意HCVR、LCVR和/或⑶R氨基酸序列的變體的抗 D114抗體，其中所述變體具有一個或多個保守置換。例如，本發(fā)明包括這樣的抗D114抗體， 其包含相對于本文公開的任何HCVR、LCVR和/或CDR氨基酸序列具有例如10個或更少、8 個或更少、6個或更少、4個或更少、2個或1個保守氨基酸置換的HCVR、LCVR和/或CDR氨基酸序列。在一個實施方案中，HCVR包含其中具有10個或更少保守氨基酸置換的SEQ ID N0:116的氨基酸序列。在另一個實施方案中，HCVR包含其中具有8個或更少保守氨基酸置換的SEQ ID N0:116的氨基酸序列。在另一個實施方案中，HCVR包含其中具有6個或更少保守氨基酸置換的SEQ ID N0:116的氨基酸序列。在另一個實施方案中，HCVR包含其中具有4個或更少保守氨基酸置換的SEQ ID N0:116的氨基酸序列。在又一個實施方案中， HCVR包含其中具有2或1個保守氨基酸置換的SEQ ID NO 116的氨基酸序列。在一個實施方案中，LCVR包含其中具有10個或更少保守氨基酸置換的SEQ ID NO :118的氨基酸序列。 在另一個實施方案中，LCVR包含其中具有8個或更少保守氨基酸置換的SEQ ID NO: 118的氨基酸序列。在另一個實施方案中，LCVR包含其中具有6個或更少保守氨基酸置換的SEQ ID N0:118的氨基酸序列。在另一個實施方案中，LCVR包含其中具有4個或更少保守氨基酸置換的SEQ ID N0:118的氨基酸序列。在又一個實施方案中，LCVR包含其中具有2個或 1個保守氨基酸置換的SEQ ID NO 118的氨基酸序列?！爸泻汀被颉白钄唷毙钥贵w用來指結(jié)合D114導致D114生物活性抑制的抗體。這種 D114生物活性的抑制可通過測量D114生物活性的一種或多種指示物來評價。這些D114生物活性的指示物可通過本領(lǐng)域已知的若干標準的體外或體內(nèi)檢測中的一種或多種檢測來評價。例如，通過D114與Notch受體的結(jié)合所受到的抑制，評價抗體的中和D114活性的能力。術(shù)語“特異性結(jié)合”等的意思是抗體或其抗原結(jié)合片段與抗原形成在生理條件下相對穩(wěn)定的復合物。特異性結(jié)合可通過至少約IxlO-6M或更低(例如，更小的Kd表示更緊密的結(jié)合)的平衡解離常數(shù)來表征。確定兩個分子是否特異性結(jié)合的方法是本領(lǐng)域公知的， 并且例如包括平衡透析法、表面等離子體共振等。然而，與hD114特異性結(jié)合的分離的抗體可展示出與其他抗原(諸如來自其他物種的D114分子)的交叉反應(yīng)性。此外，與hD114以及一種或多種其他抗原結(jié)合的多特異性抗體(例如，雙特異性)仍然被認為是本文所使用的與hD114 “特異性結(jié)合”的抗體。 本文使用的術(shù)語“KD”意指特定抗體_抗原相互作用的解離常數(shù)。術(shù)語“高親和性”抗體是指以少于約500pM、少于約400pM、少于約300pM、或少于約 200pM的Kd與D114結(jié)合的那些抗體，如通過表面等離子體共振(例如BIAC0RE )或溶液親和性ELISA，應(yīng)用例如單體D114所測得；或以少于約ΙΟΟρΜ、少于約50pM、或少于約20pM的 Kd與D114結(jié)合的那些抗體，如通過表面等離子體共振應(yīng)用二聚體D114所測得。本文所使用的術(shù)語“表面等離子體共振”是指允許通過檢測生物傳感器矩陣中的蛋白質(zhì)濃度的改變分析實時生物特異性相互作用的光學現(xiàn)象，例如應(yīng)用BIAC0RE 系統(tǒng) (Pharmacia Biosensor AB, Uppsala，Sweden 禾口 Piscataway，N. J.)0術(shù)語“表位”是抗原的被抗體結(jié)合的區(qū)域。表位可作為結(jié)構(gòu)或功能來定義。功能表位通常是結(jié)構(gòu)表位的子集，并且具有直接對相互作用的親和性作出貢獻的那些殘基。表位也可以是構(gòu)象的，即由非線性的氨基酸組成。在某些實施方案中，表位可包括決定簇，其為分子諸如氨基酸、糖側(cè)鏈、磷?；鶊F或磺酰基團的化學活性表面的集合，以及在某些實施方案中，可具有特定的三維結(jié)構(gòu)特征和/或特定的電荷特征?；焺┦强捎糜谥委煱┌Y的化合物，并且包括生長抑制劑或其他細胞毒性劑?？捎糜诒景l(fā)明方法的化療劑的實例包括烷化劑諸如塞替派和環(huán)磷酰胺 (CYTOXAN );烷基磺酸酯類諸如白消安、英丙舒凡和哌泊舒凡；氮丙啶類諸如 benzodopa、卡波酉昆、meturedopa 禾口 uredopa ；亞乙基亞胺類(ethylenimines)禾口甲基蜜胺類(methylamelamines)，包括六甲蜜胺、三乙撐蜜胺、三亞乙基磷酰胺(trietylenephosphoramide)、三亞乙基硫代磷酉先胺禾口 trimethylolomelamine ；氮芥類諸如苯丁酸氮芥、萘氮芥、cholophosphamide、雌莫司汀、異環(huán)磷酰胺、氮芥、氧化氮芥鹽酸鹽、美法侖、新氮芥、苯芥膽留醇、潑尼莫司汀、曲磷胺、烏拉莫司?。幌趸孱愔T如卡莫司汀、氯脲菌素、福莫司汀、洛莫司汀、尼莫司汀、雷莫司?。豢股?，諸如阿克拉霉素 (aclacinomysins)、放線菌素、authramycin、偶氮絲氨酸、博來霉素、放線菌素C、卡奇霉素(calicheamicin)、carabicin、洋紅霉素、嗜癌素、色霉素、放線菌素D、柔紅霉素、地托比星、6-重氮基-5-氧代-L-正亮氨酸、多柔比星、表柔比星、依索比星、伊達比星、麻西羅霉素、絲裂霉素、麥考酚酸、諾拉霉素、橄欖霉素、培洛霉素、potfiromycin、嘌羅霉素、三鐵阿霉素、羅多比星、鏈黑霉素、鏈佐星、殺結(jié)核菌素、烏苯美司、凈司他丁、佐柔比星；抗代謝物，諸如甲氨蝶呤和5-FU;葉酸類似物，諸如二甲葉酸、甲氨蝶呤、蝶羅呤、三甲曲沙；曙呤類似物，諸如氟達拉濱、6-巰嘌呤、硫咪嘌呤、硫鳥嘌呤；嘧啶類似物，諸如安西他濱、阿扎胞苷、6-阿扎尿苷、卡莫氟、阿糖胞苷、雙脫氧脲苷(dideoxyuridine)、去氧氟尿苷、依諾他濱、氟尿苷；雄激素，諸如卡普睪酮、丙酸屈他雄酮、環(huán)硫雄醇、美雄烷、睪內(nèi)酯；抗腎上腺素類，諸如氨魯米特、米托坦、曲洛司坦；葉酸補充劑，諸如亞葉酸(frolinic acid)；醋葡醛內(nèi)酯；醛磷酰胺；氨基酮戊酸；安吖啶；bestrabucil ；比生群；依達曲沙；defofamine ；秋水仙胺；地吖醌；elfornithine ；依利醋銨；依托格魯；硝酸鎵；羥基脲；香菇多糖；氯尼達明；米托胍腙；米托蒽醌；莫哌達醇；硝氨丙吖啶；噴司他丁 ；蛋氨氮芥；卩比柔比星；鬼臼酸； 2-乙基酰胼；丙卡巴胼；PSK ;雷佐生；西佐喃；鍺螺胺；替奴佐酸；三亞胺醌；2，2'， 2〃 -三氯三乙胺；烏拉坦；長春地辛；達卡巴嗪；甘露莫司汀；二溴甘露醇；二溴衛(wèi)矛醇；哌泊溴烷；gacytosine ；阿糖胞苷(“Ara_C”)；環(huán)磷酰胺；塞替派；紫杉烷類家族成員，諸如紫杉醇(TAXOL ,Bristol-Myers Squibb Oncology,Princeton,N. J.)和多西紫杉醇 (TAXOTERE ; Aventis Antony, France)及其類似物；苯丁酸氮芥；吉西他濱；6-硫鳥嘌呤；巰嘌呤；甲氨蝶呤；鉬類似物諸如順鉬和卡鉬；長春堿；鉬；依托泊苷(VP-16)；異環(huán)磷酰胺；絲裂霉素C ；米托蒽醌；長春新堿；長春瑞濱；諾維本；諾消靈；替尼泊苷；柔紅霉素；氨基蝶呤；希羅達；伊班膦酸鹽；CPT-Il ；拓撲異構(gòu)酶抑制劑RFS 2000 ；二氟甲基鳥氨酸(DMFO)；視黃酸；埃斯波霉素(esperamicins)；卡培他濱；受體酪氨酸激酶和/或血管發(fā)生抑制劑，包括索拉非尼(Nexavar , Bayer Pharmaceuticals Corp.)、舒尼替尼(SUTENT , Pfizer)、帕唑帕尼(pazopanib) (V0TRIENT , GlaxoSmithKline)、 toceranib (PALLADIA , Pfizer)、凡德他尼(vandetanib) (ZACTIMA , AstraZeneca)、西地尼布(cediranib) ( RECENTIN ，AstraZeneca)、regorafenib (BAY 73-4506， Bayer)、阿西替尼(axitinib) (AGO 13736, Pfizer)、來他替尼(Iestaurtinib) (CEP-701， C印halon)、厄洛替尼(erlotinib) ( TARCEVA ，Genentech)、吉非替尼(Iressa ， AstraZeneca)> BIBff 2992 (T0V0K , Boehringer Ingelheim)、拉帕替尼(Iapatinib) (TYKERB ，GlaxoSmithKline) ,neratinib (HKI-272, ffyeth/Pf izer)；等等，以及上述任何化合物的可藥用鹽、酸或衍生物。在該定義中還包括起調(diào)節(jié)或抑制激素對腫瘤的作用的抗激素劑諸如抗雌激素類，例如包括他莫昔芬、雷洛昔芬、抑制芳香酶的4(5)-咪唑類、 4-羥泰米芬、曲沃昔芬、keOXifene、LYii70i8、奧那司酮和托瑞米芬(FARESTON )； 以及抗雄激素類，諸如氟他胺、尼魯米特、比卡魯胺、亮丙瑞林和戈舍瑞林；以及上述任何物質(zhì)的可藥用鹽、酸或衍生物。其他常用的細胞毒化合物，如在Wiemarm等，1985，MedicalOncology (Calabresi等編輯)，第10章，McMillan Publishing中公開的那些，可用于本發(fā)明的方法中。術(shù)語“生長抑制劑”是指在體外或在體內(nèi)抑制細胞、尤其是癌細胞生長的化合物或組合物。生長抑制劑的實例包括阻斷細胞周期進展(在非S期的位置)的抑制劑，諸如誘導Gl停止和M-期停止的物質(zhì)。典型的M-期阻斷劑包括長春胺(長春新堿和長春堿)；紫杉烷家族成員，包括但不限于紫杉醇(TAXOL )、多西紫杉醇(TAXOTERE )、及其類似物(例如，XRP9881 和 XRP6258 ；參見 Ojima 等，Curr Opin Investig Drugs 4:737， 2003)；以及拓撲異構(gòu)酶抑制劑，諸如伊立替康、托泊替康、喜樹堿、片螺素(lamellarirOD、 多柔比星、表柔比星、柔紅霉素、依托泊苷和博來霉素。那些停止Gl的治療劑還溢出進入S 期停止，例如DNA烷化劑諸如他莫昔芬、潑尼松、達卡巴嗪、氮芥、順鉬、甲氨蝶呤、5-FU和阿糖胞苷。一般說明本發(fā)明是基于這樣的發(fā)現(xiàn)，即共同施用D114拮抗劑(例如，與D114特異性結(jié)合并阻斷D114活性的D114抗體或其片段)和化療劑(例如，順鉬或多西紫杉醇)導致比任一單獨治療劑更高的腫瘤生長抑制。對于完全的人D114Ab，包括重組人D114Ab的描述，參見國際專利申請公開號W02008/076379。D114Ab的制備方法制備抗體的方法是本領(lǐng)域公知的。參見，例如，Kohler & Milstein(1975)Nature 256 495~497 ；Harlow & Lane(1988)Antibodies :a Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Lab.，Cold Spring Harbor，NY)。從非人的生物體如小鼠、大鼠、兔、牛分離出的抗體，可通過嵌合或人源化使其更類似于人的。非人(例如，鼠)抗體的“人源化”或嵌合形式為含有衍生自非人免疫球蛋白的結(jié)合抗原所需最小序列的免疫球蛋白、免疫球蛋白鏈或其片段(如FV、Fab、Fab’、F(ab’)2或抗體的其它結(jié)合抗原的亞序列)。它們與提供構(gòu)建嵌合或人源化抗體的起始原料的小鼠或其它非人抗體具有相同或相似的結(jié)合特異性和親和性。嵌合抗體是其輕鏈和重鏈基因已經(jīng)由屬于不同物種的免疫球蛋白基因片段構(gòu)建(通常通過遺傳工程)的抗體。例如，來自小鼠單克隆抗體的基因的可變(V)片段可與人恒定(C)片段如IgGl和IgG4連接。因此典型的嵌合抗體為由來自小鼠抗體的V或抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域和來自人抗體的C或效應(yīng)器結(jié)構(gòu)域組成的雜交蛋白。人源化的抗體具有基本上來自人抗體(稱為受體抗體)的可變區(qū)框架殘基和基本上來自小鼠抗體(稱為供體免疫球蛋白)的互補決定區(qū)(CDR區(qū))。參見，Queen等， Proc. Natl. Acad Sci. USA 86 10029-10033 (1989)和國際專利申請公開號 WO 90/07861 和 U. S.專利 5，693，762,5, 693，761,5, 585，089,5, 530，101 和 5，225，539。若存在的話，則恒定區(qū)也基本上或完全來自人免疫球蛋白。人可變結(jié)構(gòu)域通常選自這樣的人抗體，即其框架序列顯示出與從其獲得CDR的鼠可變區(qū)結(jié)構(gòu)域的高度序列同一性。重鏈和輕鏈可變區(qū)框架殘基可源自相同或不同的人抗體序列。人抗體序列可以是天然存在的人抗體序列或可以是數(shù)種人抗體的共有序列。參見國際專利申請公開1092/^22653?；谄鋵DR構(gòu)象和/或?qū)乖Y(jié)合的可能影響，選擇來自人可變區(qū)框架殘基的某些氨基酸用于置換。這種可能影響的研究可通過特定位點的氨基酸特性的模擬、檢驗或者經(jīng)驗性觀察特定氨基酸的置換或誘變的效應(yīng)來進行。例如，當鼠可變區(qū)框架殘基和所選擇的人可變區(qū)框架殘基之間的氨基
11酸不同時，通常人框架氨基酸將被來自小鼠抗體的等價框架氨基酸置換，條件是當合理預期所述氨基酸⑴非共價直接結(jié)合抗原；⑵與CDR區(qū)鄰接；(3)否則與CDR區(qū)(例如在 ⑶R區(qū)的約之內(nèi))相互作用，或(4)參與Hh界面。其它用于置換的候選者是在該位置上對于人免疫球蛋白不常見的受體人框架氨基酸。這些氨基酸可被來自小鼠供體抗體的等價位置或來自更典型的人免疫球蛋白的等價位置的氨基酸置換。其它用于置換的候選者是在該位置上對于人免疫球蛋白不常見的受體人框架氨基酸。人源化的免疫球蛋白的可變區(qū)框架通常顯示與人可變區(qū)框架序列或此類序列的共有序列至少85%的序列同一性。產(chǎn)生人抗體的方法包括，例如，VELOCIMMUNE (RegeneronPharmaceuticals)、 XEN0M0USE 技術(shù)(Abgenix)，“minilocus”方法和噬菌體展示。VELOCIMMUNE 技術(shù)(US 專利6，596，541)包括產(chǎn)生對選定抗原具有高特異性的完全人抗體的方法。該技術(shù)涉及具有包含可操作性連接至內(nèi)源性小鼠恒定區(qū)位點(loci)的人重鏈和輕鏈可變區(qū)的基因組的轉(zhuǎn)基因小鼠的產(chǎn)生，使得小鼠響應(yīng)抗原刺激產(chǎn)生包含人可變區(qū)和小鼠恒定區(qū)的抗體。編碼該抗體的重鏈和輕鏈的可變區(qū)的DNA經(jīng)分離并可操作性連接至編碼人重鏈和輕鏈恒定區(qū)的 DNA。然后在能表達完全人抗體的細胞中表達所述DNA。在一個實施方案中，細胞為CHO細胞。XEN0M0USE 技術(shù)(Green 等，1994，Nature Genetics 7 13-21)產(chǎn)生同時具有來自重鏈和κ輕鏈位點的人可變區(qū)和恒定區(qū)的小鼠。在另一方法中，其他人已經(jīng)使用了 ‘minilocus”方法，其中通過包含源自Ig位點的個體基因模擬外源性Ig位點(參見，例如， US專利5，545，807)。可分離與編碼人重鏈和輕鏈恒定區(qū)的DNA操作性連接或不連接的編碼可變區(qū)的DNA。備選地，噬菌體展示或相關(guān)展示技術(shù)可用于鑒定特異性結(jié)合D114的抗體、抗體片段，諸如可變結(jié)構(gòu)域和異數(shù)(heteromeric^Fab片段。(例如參見美國專利申請公開 2003/0229023)。優(yōu)選的免疫球蛋白(抗體)的篩選和選擇可通過本領(lǐng)域已知的各種方法進行。 例如，對于特異性針對D114的單克隆抗體的存在的初步篩選可通過使用基于ELISA的方法或噬菌體展示進行。優(yōu)選地進行第二道篩選以鑒定和選擇所需的單克隆抗體。第二道篩選可用本領(lǐng)域已知的任何適宜的方法進行。一種優(yōu)選的方法，稱為“Biosensor Modification-Assisted Profiling" ( “BiaMAP”)描述于美國專利申請公開 2004/101920 中。BiaMAP可以迅速識別產(chǎn)生具有所需特性的單克隆抗體的雜交瘤克隆。更具體而言，基于抗體抗原相互作用的評價將單克隆抗體分類為不同的表位相關(guān)組。備選地，基于ELISA 的、基于珠子的或基于BIACORE 的競爭分析可用于鑒定結(jié)合對，所述結(jié)合對結(jié)合不同的D114表位并因此可能以高親和性協(xié)作結(jié)合配體。施用方法本發(fā)明提供了治療方法，其包括給受試者施用有效量的包含D114拮抗劑(諸如 D114Ab)以及化療劑和/或佐劑的藥物組合物，所述化療劑諸如抗有絲分裂劑，例如多西紫杉醇、紫杉醇等(紫杉烷類)；基于鉬的化療化合物，諸如順鉬、卡鉬、異丙鉬、奧沙利鉬等； 嘧啶類似物，諸如5-Fu、卡培他濱(XELODA , Roche)等；拓撲異構(gòu)酶抑制劑，諸如伊立替康、托泊替康、喜樹堿、片螺素D等；所述佐劑諸如亞葉酸(甲酰四氫葉酸)等(詳見上面的定義部分)。
D114拮抗劑和化療劑可一起或分開地共同施用。當使用分開劑量制劑時，D114拮抗劑和化療劑可同時施用，或以交錯的時間分開施用，即順次施用。各種遞送系統(tǒng)是已知的且可用于施用本發(fā)明的藥物組合物，例如脂質(zhì)體中的包囊、微粒、微囊、能表達突變病毒的重組細胞、受體介導的胞吞(參見，例如，Wu和Wu，1987， J. Biol. Chem. 262 :44294432)。引入的方法包括但不限于皮內(nèi)、肌內(nèi)、腹膜內(nèi)、靜脈內(nèi)、皮下、 鼻內(nèi)、眼內(nèi)、硬膜外和口服的途徑。組合物可通過任何途徑施用，例如通過輸注或快速推注、 通過上皮或粘膜內(nèi)層吸收(例如，口腔粘膜、直腸和腸粘膜等)施用，且可與其它生物活性劑一起施用。施用可以是全身的或局部的。施用可以是急性的或長期的(例如，每天、每周、每月等)，或與其他物質(zhì)聯(lián)用。也可以采用肺部施用，例如，通過利用吸入器或噴霧器和含霧化劑的制劑施用。就皮下遞送而言，筆式(pen)遞送裝置容易地應(yīng)用于遞送本發(fā)明的藥物組合物。 此筆式遞送裝置可以是可重復使用的或一次性的?？芍貜褪褂玫墓P式遞送裝置通常利用含有藥物組合物的可更換的藥筒。一旦該藥筒中的所有藥物組合物被施用完了，并且該藥筒是空的時，可容易地棄去該空藥筒，并換上含有藥物組合物的新藥筒。于是該筆式遞送裝置可重復使用。在一次性筆式遞送裝置的情況下，沒有可更換的藥筒。而是，該一次性筆式遞送裝置在裝置的儲器中預填裝有藥物組合物。一旦該儲器沒有了藥物組合物，則棄去整個
直ο多種可重復使用的筆式遞送裝置適用于皮下遞送本發(fā)明的藥物組合物。實例包括但顯然不限于 AUT0PEN (0wen Mumford, Inc.，Woodstock, UK)、DISETRONIC 筆 (Disetronic Medical Systems, Burghdorf, Switzerland), HUMALOG MIX 75/25 筆、 HUMALOG 筆、HUMALIN 70/30 筆(Eli Lilly and Co. , Indianapolis, IN)、NOVOPENtmI、 II 禾口 III (Novo Nordisk, Copenhagen，Denmark)、N0V0PEN JUNIOR (Novo Nordisk, Copenhagen, Denmark)、BD 筆(Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ)、0ΡΤΙΡΕΝ 、 0ΡΤΙΡΕΝ PRO 、OPTIPEN STARLET 和 0PTICLIK (sanofi-aventis, Frankfurt, Germany)， 這僅是聊舉數(shù)例。適用于皮下遞送本發(fā)明藥物組合物的一次性筆式遞送裝置的實例包括但顯然不限于 S0L0STAR 筆(sanofi-aventis)、FLEXPEN (Novo Nordisk)和 KWIKPEN (Eli Lilly)ο在另一實施方案中，活性劑可以在囊泡(vesicle)或脂質(zhì)體中遞送(參見 Langer (1990) Science 249 1527-1533)。在另一實施方案中，活性劑可在控釋系統(tǒng)中遞送。 在一實施方案中，可以使用泵(參見Langer (1990)如上)。在另一實施方案中，可以使用聚合材料(參見Howard等(1989) J. Neurosurg. 71 :105)。在另一實施方案中，當本發(fā)明的活性劑為編碼蛋白的核酸時，可通過將其構(gòu)建為適宜的核酸表達載體的一部分并將其施用使其成為細胞內(nèi)的，例如通過利用逆轉(zhuǎn)錄病毒載體(參見，例如美國專利4，980，286)，或通過直接注射，或通過利用微粒轟擊(例如，基因槍；Biolistic，Dupont)，或以脂質(zhì)或細胞表面受體或轉(zhuǎn)染劑包衣，或通過以與已知會進入細胞核的同源異型框樣肽連接的形式將其施用 (參見例如，Joliot 等，1991，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 88 1864-1868)等，來體內(nèi)施用該核酸以促進其編碼的蛋白的表達。備選地，可通過同源重組將核酸引入細胞內(nèi)并摻入宿主細胞DNA中用于表達。在一具體的實施方案中，可能期望局部地將本發(fā)明的藥物組合物施用至需要治療的區(qū)域，這可通過以下的方式實現(xiàn)(例如不限于)在手術(shù)期間局部輸注、例如通過注射局部施用、通過導管的方式、通過植入物的方式，其中所述植入物為多孔的、非多孔的或凝膠狀的材料，包括膜諸如sialastic膜、纖維、或商品化的皮膚替代物。有效治療癌癥/腫瘤的本發(fā)明活性劑的量可基于本說明書通過標準的臨床技術(shù)來確定。此外，可任選地運用體外試驗以幫助確定最佳的劑量范圍。用于制劑中的精確劑量還將取決于施用途徑和病癥的嚴重程度，并根據(jù)醫(yī)師的判斷和每個患者的情況來決定。不過，靜脈施用的適宜劑量范圍通常為每公斤體重約0. 2至30毫克的活性化合物。鼻內(nèi)施用適宜的劑量范圍通常為約0. 01pg/kg體重至lmg/kg體重。有效劑量可由從體外或動物模型試驗系統(tǒng)獲得的劑量_反應(yīng)曲線來推斷對于全身施用，可從體外測試初步評估治療有效劑量。例如，可在動物模型中配制劑量以達到包括在細胞培養(yǎng)中確定的IC5tl的循環(huán)濃度范圍。此類信息可用于更準確地確定人類中的有用劑量。也可從體內(nèi)數(shù)據(jù)(例如，動物模型)應(yīng)用本領(lǐng)域公知的技術(shù)估算起始劑量。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可基于動物數(shù)據(jù)容易地最優(yōu)化人類的施用。劑量可能根據(jù)待施用的受試者的年齡和大小(例如，體重或體表面積)、靶疾病、 狀況、施用途徑等而不同。對于全身施用D114拮抗劑特別是D114抗體，靜脈內(nèi)施用的典型劑量范圍為約0. 01至約100mg/kg體重、約0. 1至約50mg/kg、或約0. 2至約10mg/kg的日劑量。對于皮下施用，該抗體可以以約IOmg至約500mg、約20mg至約400mg、約30mg至約 300mg、或約 50mg 至約 200mg，以至少約 25mg/ml、約 50mg/ml、約 75mg/ml、約 100mg/ml、約 125mg/ml、約 150mg/ml、約 175mg/ml、約 200mg/ml 或約 250mg/ml 的抗體濃度，至少每天 1 至5次、每周1至5次、或每月1至5次地施用。備選地，該抗體可最初通過靜脈內(nèi)注射施用，隨后進行連續(xù)的(sequential)皮下施用。一般地，化療劑以每周50mg/m2至5000mg/m2的劑量范圍靜脈內(nèi)或口服使用，但該劑量范圍根據(jù)多種因素而不同，所述因素包括待治療的受試者、受試者體重和年齡、疾病的嚴重度、施用方式、所使用的化療劑類型、處方醫(yī)生的判斷等。當癥狀可檢測到或甚至當它們不能檢測到時，可間歇地重復治療。治療的持續(xù)時間也會取決于待治療的疾病的嚴重程度以及受試者對可能的副作用(若有的話)的耐受水平而不同，并且可持續(xù)所需要的時間長度，或只要受益超過任何副作用即可持續(xù)。在聯(lián)合治療中每一治療劑的劑量可進一步調(diào)整，其中與單獨施用兩者中任一治療劑相比，達到期望治療效果所需的每一治療劑的量減少了(即，展示出協(xié)同作用)(參見以下實施例1和2)。可在本發(fā)明的聯(lián)合治療中使用的化療劑還包括在公知的化療方案中應(yīng)用的那些。 例如，F(xiàn)0LF0X是用于治療結(jié)腸直腸癌(CRC)的化療方案，并且是5-FU、亞葉酸和奧沙利鉬的組合。F0LFIRI是用于CRC的另一化療方案，并且是5-FU、亞葉酸和伊立替康的組合。XELOX 是用于CRC的二線化療方案，并且是卡培他濱和奧沙利鉬的組合。此外，采用化療劑與D114拮抗劑的組合的治療可單獨提供，或與其它藥物聯(lián)合地提供，所述其它藥物諸如其它抗血管發(fā)生劑，例如VEGF拮抗劑，包括抗VEGF抗體(例如， Genentech 的AVASTIN )、結(jié)合 veGF 的融合蛋白(例如，Regeneron Pharmaceuticals 的afliberc印t)等，以及其它治療劑，諸如鎮(zhèn)痛劑、抗炎劑，包括非甾類抗炎藥(NSAIDS)， 諸如Cox-2抑制劑等，以便于改善和/或減輕伴隨根本的癌癥/腫瘤的癥狀。
節(jié)律化療(Metronomic Chemotherapies)節(jié)律化療作為施用化療的改進方式出現(xiàn)。傳統(tǒng)化療以不引起威脅生命水平的毒性的最高可能劑量例如以最大耐受劑量(MTD)通過單劑量或短治療期施用。MTD治療在相繼的治療周期之間需要2-3周的延長中斷期。盡管此類化療的數(shù)量和用于測試它們的大量臨床試驗，然而就治愈或顯著延長罹癌患者生命而言進展是不大的(Kerbel等，2004，Nature Reviews Cancer 4 :423-436)。節(jié)律化療是指以顯著低于MTD的劑量頻繁地、甚至每天施用化療，不需要延長的無藥中斷期。除了降低急性毒性外，當與特定抗血管發(fā)生藥物(諸如VEGF抑制劑)聯(lián)合施用時，節(jié)律化療的效力可以增加(Kerbel等，2004，同上)。因此，本發(fā)明涉及在有需要的受試者中治療癌癥的節(jié)律化療方法，其包括給該受試者施用D114拮抗劑以及化療劑，其中所述癌癥被治療。在一具體的實施方案中，可在相對短的時期(例如，1-12周)一起或順序施用D114拮抗劑和化療劑，然后在延長的時期(例如，6-M個月)節(jié)律施用化療劑。藥物組合物本發(fā)明提供了包含D114拮抗劑、化療劑和可藥用載體的藥物組合物。術(shù)語“可藥用的”的意思是經(jīng)聯(lián)邦或州政府管理機構(gòu)批準的或者列在美國藥典或其它公認的藥典中的供動物更尤其是人使用的。術(shù)語“載體”指與治療劑一起施用的稀釋劑、佐劑、賦形劑或溶媒。這類藥用載體可以是無菌液體，諸如水和油，包括石油、動物、植物或合成來源的油，諸如花生油、豆油、礦物油、芝麻油等。適宜的藥用賦形劑包括淀粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明膠、 麥芽、大米、面粉、白堊、硅膠、硬脂酸鈉、甘油單硬脂酸酯、滑石粉、氯化鈉、脫脂奶粉、甘油、 丙烯、乙二醇、水、乙醇等。如果需要，組合物還可以含少量的濕潤劑或乳化劑或pH緩沖劑。 這些組合物可采取溶液、混懸液、乳劑、片劑、丸劑、膠囊、散劑、緩釋制劑等形式。組合物可與常規(guī)的粘合劑和載體諸如甘油三酯一起配制成栓劑?？诜苿┛砂藴实妮d體諸如藥用級的甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸鎂、糖精鈉、纖維素、碳酸鎂等。適宜的藥用載體的實例描述于 E. W. Martin 的 “Remington’ s Pharmaceutical Sciences，，中。在優(yōu)選的實施方案中，組合物按常規(guī)方法配制成適合于靜脈內(nèi)施用給人類的藥物組合物。必要時，組合物還可包含增溶劑和局部麻醉劑諸如利多卡因以在注射部位減輕疼痛。在輸注施用組合物的情況下，可用裝有無菌藥用級水或鹽水的輸液瓶配制組合物。在組合物注射施用的情況下，可提供一安瓿的滅菌注射水或鹽水以便在施用之前可以混合各成分。本發(fā)明的活性劑可以以中性或鹽的形式配制?？伤幱名}包括與游離氨基形成的鹽，諸如由鹽酸、磷酸、乙酸、草酸、酒石酸等獲得的鹽，以及與游離羧基形成的鹽，諸如由氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化銨、氫氧化鈣、氫氧化鐵、異丙胺、三乙胺、2-乙基氨基乙醇、組氨酸、普魯卡因等獲得的鹽?？捎糜趯嵤┍景l(fā)明方法的組合物可以是包含本發(fā)明治療劑的液體，其為溶液、混懸液、或兩者的形式。術(shù)語“溶液/混懸液”是指這樣的液體組合物，其中第一部分的活性劑存在于溶液中，而第二部分活性劑在液體基質(zhì)的混懸液中以微粒的形式存在。液體組合物可以是水性的，并且還包括凝膠和軟膏形式。可用于實施本發(fā)明方法的水性混懸液或溶液/混懸液可含有一種或多種作為助懸劑的聚合物。有用的聚合物包括水溶性聚合物，諸如交聯(lián)的含羧基聚合物。本發(fā)明的水性混懸液或溶液/混懸液優(yōu)選為粘稠的或粘膜粘著的，或甚至更優(yōu)選為粘稠的且粘膜粘著的。藥盒本發(fā)明還提供了生產(chǎn)的物品或藥盒，其包含包裝材料、容器和包含在該容器中的藥物物質(zhì)，其中所述藥物物質(zhì)包括至少一種D114拮抗劑(諸如D114抗體)以及至少一種化療劑，并且其中該包裝材料包括指示該D114拮抗劑和化療劑可用于治療癌癥或減少或終止腫瘤生長的標簽或包裝說明書。在一個實施方案中，D114拮抗劑和化療劑可包含在不同的容器中，因此，本發(fā)明提供了一種藥盒，其包含在其中包含特異性結(jié)合hD114的抗體或其抗原結(jié)合片段的容器，以及一個或多個在其中包含至少一種化療劑的其它容器。
實施例給出以下實施例以向本領(lǐng)域普通技術(shù)人員提供如何制備和使用本發(fā)明的方法和組合物的完全公開和說明，而不意欲限制發(fā)明人所考慮的其發(fā)明的范圍。已經(jīng)努力地確保所用數(shù)字(例如量、溫度等)的準確性，但應(yīng)說明存在一些實驗誤差和偏差。除非另有說明，份數(shù)為重量份數(shù)，溫度為攝氏度，壓力為大氣壓或接近大氣壓，以及圖誤差線=平均值士 SEM。實施例1 抗hD114抗體與順鉬聯(lián)合的效果對移植在表達人源化D114蛋白的重度聯(lián)合免疫缺陷(SCID)小鼠(人源化 D114SCID小鼠)中的腫瘤評估了抗D114抗體(REGN421)與順鉬(順氯氨鉬，順-二氯二氨合鉬)聯(lián)合對腫瘤生長的作用。通過在胚胎干(ES)細胞中用人D114基因(7kb)的相應(yīng)細胞外區(qū)域替換小鼠D114基因的整個細胞外結(jié)構(gòu)域而制得人源化D114SCID小鼠。產(chǎn)生純合 hD114小鼠，并培育成SCID背景。對每一小鼠皮下(sc)植入IX IO6個人VM-Cubl腫瘤細胞(膀胱癌細胞)加 MATRIGEL (BD Biosciences,#354234) 在腫瘤在小鼠中確立之后(腫瘤大小150_200mm3， 植入后約14天)，測量腫瘤，隨機化，并用hFc、REGN421、順鉬、或REGN421與順鉬的組合治療?？偣?5只小鼠分為9組(每組群η = 5)。第一組用ang/kg的hFc皮下(sc)治療；第二和第三組分別用0. 5和ang/kg的REGN421SC治療；第四和第五組分別用0. 5和ang/kg的順鉬腹膜內(nèi)(ip)治療；第六組用0. 5mg/kg的REGN421SC和0. 5mg/kg的順鉬ip治療；第七組用0. 5mg/kg的REGN421sc和ang/kg的順鉬ip治療；第八組用ang/kg的REGN421sc和 0. 5mg/kg的順鉬ip治療；以及第九組用2mg/kg的REGN421sc和2mg/kg的順鉬ip治療。 從第14天開始每3-4天施用REGN421，并且小鼠總共接受3劑量。從第14天開始每M小時施用順鉬，小鼠總共接受4劑量。為評估REGN421和順鉬作為單獨治療劑或聯(lián)合治療的效果，記錄腫瘤大小的變化。在開始REGN421治療前三天、每次REGN421治療當天(第14、17和21天)以及此后每 3-4天測量腫瘤生長，直到腫瘤達到 600mm3大小。應(yīng)用公式(長X寬2)/2計算體內(nèi)腫瘤大小(圖1和表1)。表 權(quán)利要求
1.分離的與人S樣配體4(hD114)特異性結(jié)合的人抗體或其抗原結(jié)合片段，其通過與化療劑聯(lián)合施用用于在受試者中治療癌癥或減少或停止腫瘤生長，其中所述人抗體或其抗原結(jié)合片段包含重鏈可變區(qū)(HCVR)和輕鏈可變區(qū)(LCVR)，所述重鏈可變區(qū)包含分別為SEQ ID NO :22、24和26的重鏈CDR1、⑶R2和⑶R3序列，所述輕鏈可變區(qū)包含分別為SEQ ID NO: 30、32和34的輕鏈CDR1、CDR2和CDR3序列。
2.權(quán)利要求1的人抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述抗體或抗原結(jié)合片段包含SEQID N0:20 或 SEQ ID NO 116 的 HCVR 序列，或者 SEQ ID NO 28 或 SEQ ID N0:118 的 LCVR 序列。
3.權(quán)利要求1的人抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述抗體或抗原結(jié)合片段包含SEQID NO 20/28 或 116/118 的 HCVR/LCVR 組合。
4.前述任一項權(quán)利要求的人抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述化療劑是選自以下的至少一種抗有絲分裂劑、基于鉬的化療劑、受體酪氨酸激酶抑制劑、嘧啶類似物、拓撲異構(gòu)酶抑制劑和佐劑。
5.權(quán)利要求4的人抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述抗有絲分裂劑是多西紫杉醇或紫杉醇、或其可藥用類似物或鹽。
6.權(quán)利要求4的人抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述基于鉬的化療劑是順鉬、卡鉬、異丙鉬或奧沙利鉬，或者其可藥用鹽。
7.權(quán)利要求4的人抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述受體酪氨酸激酶抑制劑是索拉非尼、舒尼替尼或帕唑帕尼，或其可藥用鹽。
8.權(quán)利要求4的人抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述嘧啶類似物是吉西他濱、5-FU或卡培他濱，或其可藥用鹽。
9.權(quán)利要求4的人抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述拓撲異構(gòu)酶抑制劑是伊立替康、托泊替康、喜樹堿或片螺素D，或其可藥用鹽。
10.權(quán)利要求4的人抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述佐劑是亞葉酸，或其可藥用鹽。
11.權(quán)利要求4的人抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述化療劑是5-FU、亞葉酸和奧沙利鉬的組合；5-FU、亞葉酸和伊立替康的組合；卡培他濱和奧沙利鉬的組合；或順鉬和吉西他濱的組合。
12.前述任一項權(quán)利要求的人抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述癌癥選自卵巢癌、子宮癌、乳腺癌、肺癌、肝癌、結(jié)腸直腸癌、膀胱癌、腎癌、前列腺癌、胰腺癌、胃癌、骨癌、皮膚癌、 白血病以及惡性軟組織肉瘤。
13.前述任一項權(quán)利要求的人抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述抗體或抗原結(jié)合片段和所述化療劑用于同時或順次施用。
14.前述任一項權(quán)利要求的人抗體或抗原結(jié)合片段，其用于與權(quán)利要求1或4-11中任一項定義的化療劑聯(lián)合施用至人受試者。
15.藥物組合物，其包含如權(quán)利要求1-3中任一項定義的抗體或其抗原結(jié)合片段、如權(quán)利要求1或4-11中任一項定義的化療劑、以及可藥用載體。
16.藥盒，其包含其中包含如權(quán)利要求1-3中任一項定義的抗體或其抗原結(jié)合片段的容器，以及一個或多個其中包含至少一種如權(quán)利要求1或4-11中任一項定義的化療劑的其它容器。
17.如權(quán)利要求1-3中任一項定義的人抗體或抗原結(jié)合片段通過與如權(quán)利要求1或 4-11中任一項定義的化療劑聯(lián)合施用從而用于在受試者中治療癌癥或減少或停止腫瘤生長的用途。
18.如權(quán)利要求1-3中任一項定義的人抗體或抗原結(jié)合片段在制備通過與如權(quán)利要求 1或4-11中任一項定義的化療劑聯(lián)合施用而用于在受試者中治療癌癥或減少或停止腫瘤生長的藥物中的用途。
19.在受試者中治療癌癥或減少或停止腫瘤生長的方法，其包括給所述受試者施用如權(quán)利要求1-3中任一項定義的人抗體或抗原結(jié)合片段以及如權(quán)利要求1或4-11中任一項定義的化療劑。
20.權(quán)利要求17-19中任一項的用途或方法，其中所述癌癥如權(quán)利要求12所定義。
21.權(quán)利要求17-20中任一項的用途或方法，其中所述抗體或抗原結(jié)合片段和所述化療劑用于同時或順次施用。
22.權(quán)利要求17-21中任一項的用途或方法，其中所述受試者是人受試者。
23.減少在罹患癌癥或腫瘤的受試者中達到期望治療效果所需化療劑的量的方法，該方法包括給所述受試者聯(lián)合施用所述化療劑和與hD114特異性結(jié)合的抗體或其抗原結(jié)合片段，其中所述抗體或抗原結(jié)合片段如權(quán)利要求1-3中任一項所定義，并且所述化療劑如權(quán)利要求1或4-11中任一項所定義；并且其中與不存在所述抗體或抗原結(jié)合片段時達到相同治療效果所需的量相比，所述化療劑的量減少了。
24.權(quán)利要求23的方法，其中達到期望治療效果所需化療劑的量減少了至少20%、或約30%至約50%。
全文摘要
本發(fā)明提供了通過施用Dll4拮抗劑和化療劑的組合從而治療各種類型的癌癥/腫瘤的方法，其中所述Dll4拮抗劑尤其是特異性結(jié)合Dll4的Dll4抗體和其片段。此類聯(lián)合治療與單獨用任一治療劑治療相比表現(xiàn)出協(xié)同作用。因此，本發(fā)明的方法對于對由單獨用任一治療劑治療所需的高劑量引起的副作用具有低耐受性的癌癥患者尤其有益，這是因為能夠降低有效劑量。還提供了含有Dll4拮抗劑和化療劑的藥物組合物及藥盒。
文檔編號C07K16/22GK102481365SQ201080037619
公開日2012年5月30日 申請日期2010年6月25日 優(yōu)先權(quán)日2009年6月25日
發(fā)明者A·蒂博, G·瑟斯頓, I·諾格拉特羅伊賽 申請人:瑞澤恩制藥公司