專利名稱：協(xié)同治療癌癥的方法和組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及癌癥治療方法，具體地說，本發(fā)明涉及兩種或多種具有抗增殖細(xì)胞毒性活性和抗增殖細(xì)胞抑制活性的抗癌劑的協(xié)同應(yīng)用。
背景技術(shù)：
多年以來，系統(tǒng)給予后經(jīng)血液循環(huán)系統(tǒng)傳遞至全身的抗腫瘤劑的化療連同并且常常協(xié)同外科手術(shù)和/或放療治療一起，已經(jīng)廣泛用于治療各種各樣的癌癥。遺憾的是，可應(yīng)用的化療藥物經(jīng)常對患者無效，因?yàn)樗鼈儦⑺篮芏嘟】导?xì)胞并因此帶來嚴(yán)重的副作用，這些副作用限制了醫(yī)師可以給予的劑量。
癌性腫瘤特別難以治療，因?yàn)樗鼈兗劝性鲋承园┘?xì)胞，又包含有非增殖性癌細(xì)胞。隨著癌性腫瘤的生長，血管生成經(jīng)常不能與惡性細(xì)胞群的快速增殖同步。因此，實(shí)體癌性腫瘤塊通常呈現(xiàn)出異常的血管網(wǎng)絡(luò)，這些血管網(wǎng)絡(luò)與正常組織中的血管不同，它們不能為癌性腫瘤細(xì)胞最優(yōu)生長提供足夠的營養(yǎng)。就大多數(shù)癌性實(shí)體瘤而言，非增殖性腫瘤細(xì)胞占總腫瘤細(xì)胞群的大部分。而且，隨著腫瘤尺寸的增大，非增殖性腫瘤細(xì)胞的比例也按比例增加。因?yàn)楝F(xiàn)有的大多數(shù)抗癌劑針對增殖細(xì)胞，所以對于單獨(dú)或一起應(yīng)用的放療或化療不能治愈腫瘤性疾病，非增殖性腫瘤細(xì)胞群已經(jīng)被視為主要影響因素。
如上所述，隨著腫瘤尺寸的增大，對大多數(shù)化療來說，腫瘤通常變得更難以治愈。因此，許多腫瘤根除方法包括在給予抗腫瘤劑之前縮小腫瘤塊的減少腫瘤步驟。然而，減少腫瘤步驟不是總能根除腫瘤，甚至在與有效化療藥物聯(lián)合應(yīng)用時也是如此。因此，本領(lǐng)域需要既針對增殖性癌細(xì)胞又針對非增殖性癌細(xì)胞的新型治療來治療惡性腫瘤。
WO 98/54966公開了使用抗腫瘤劑或放療連同可用于治療癌癥的異戊烯蛋白轉(zhuǎn)移酶抑制劑的組合療法。但是，WO 98/54966沒有公開本發(fā)明式I化合物的應(yīng)用。
美國專利第6,011,029號公開了本發(fā)明式I化合物，并提供其用作抗癌劑的方法。另外，該專利從一般意義上公開了所述式I化合物可與其它癌癥療法組合使用。然而，美國專利第6,011,029號沒有公開任何具體的組合治療，也沒有公開或提示起協(xié)同抗癌治療作用的組合治療。
因此，本發(fā)明的一個目的是提供一種治療癌癥的協(xié)同方法。
本發(fā)明的另一個目的是提供一種用于協(xié)同治療癌癥的藥用組合物。
下文提供的本發(fā)明描述將使本發(fā)明的這些目的和其它目的變得更加清晰。
發(fā)明概述本發(fā)明提供一種治療癌癥的協(xié)同方法，包括給予哺乳動物協(xié)同治療有效量的以下物質(zhì)(1)至少一種選自抗增殖細(xì)胞毒性劑和抗增殖細(xì)胞抑制劑的藥物，和(2)式I的化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽 其中R1是Cl、Br、CN、任選取代的苯基或任選取代的2-、3-或4-吡啶基；R2是任選取代的低級烷基或任選取代的芳烷基；R3和R5每個獨(dú)自為任選取代的低級烷基、任選取代的芳基或任選取代的雜環(huán)基；R4為氫或低級烷基；Z1為CO、SO2、CO2或SO2N(R5)-；而n為1或2；前提是所述細(xì)胞毒性劑和/或細(xì)胞抑制劑與式I化合物同時給予或在式I化合物之前給予。
本發(fā)明進(jìn)一步提供一種用于協(xié)同治療癌癥的藥用組合物，其包括至少一種選自抗增殖細(xì)胞毒性劑和抗增殖細(xì)胞抑制劑的藥物和式I化合物以及一種藥學(xué)上可接受的載體。
在本發(fā)明的一個優(yōu)選實(shí)施方案中，所述細(xì)胞毒性劑或細(xì)胞抑制劑在式I化合物給予之前給予。在本發(fā)明的另一個實(shí)施方案中，所述細(xì)胞毒性劑或細(xì)胞抑制劑與式I化合物同時給予。
附圖簡述

圖1圖示說明在裸鼠中生長的HCT116人結(jié)腸直腸實(shí)體癌模型中，絕大部分腫瘤細(xì)胞處于非增殖(G0)生長期。通過持續(xù)輸注延長BrdUrd標(biāo)記(24小時)鑒定皮下生長的HCT-116人結(jié)腸癌實(shí)體瘤中存在的非增殖細(xì)胞。從所述實(shí)體瘤分散獲得的整個腫瘤細(xì)胞中僅有20％為BrdUrd染色陽性，BrdUrd選擇性標(biāo)記增殖細(xì)胞。
圖2圖示說明化合物2體外選擇性針對非增殖HCT-116腫瘤細(xì)胞。指數(shù)生長的腫瘤細(xì)胞(第2天非匯合的高度增殖細(xì)胞)對化合物2的敏感性(IC90＝0.3μM)比穩(wěn)定生長期的腫瘤細(xì)胞(第8天高度匯合的非增殖細(xì)胞)低44倍以上。
圖3圖示說明化合物6體外選擇性針對非增殖HCT-116腫瘤細(xì)胞。指數(shù)生長的腫瘤細(xì)胞(第2天非匯合的高度增殖細(xì)胞)對化合物6的敏感性(IC90＝1.04μM)比穩(wěn)定生長期的腫瘤細(xì)胞(第8天高度匯合的非增殖細(xì)胞)低約67倍。
圖4圖示說明化合物4體外選擇性針對非增殖HCT-116腫瘤細(xì)胞。指數(shù)生長的腫瘤細(xì)胞(第2天非匯合的高度增殖細(xì)胞)對化合物4的敏感性(IC90＝1.05μM)比穩(wěn)定生長期的腫瘤細(xì)胞(第8天高度匯合的非增殖細(xì)胞)低約91.2倍。
圖5圖示說明抗增殖劑如紫杉醇與化合物2及其同類物不同，其體外選擇性針對增殖HCT-116腫瘤細(xì)胞。指數(shù)生長的癌細(xì)胞(第2天非匯合的高度增殖細(xì)胞)對紫杉醇的敏感性(IC90＝17.8nM)比穩(wěn)定生長期的腫瘤細(xì)胞(第8天高度匯合的非增殖細(xì)胞)高出遠(yuǎn)超過10倍。
圖6圖示說明另一種類型的抗腫瘤抗增殖劑epothilone選擇性針對增殖細(xì)胞。在該實(shí)施例中，指數(shù)生長的HCT116癌細(xì)胞(第2天非匯合的高度增殖細(xì)胞)對epothilone B的敏感性(IC90＝1.3nM)比穩(wěn)定生長期的HCT116細(xì)胞(第8天高度匯合的非增殖細(xì)胞)高出遠(yuǎn)超過83倍。
圖7顯示了化合物2和紫杉醇組合化療人結(jié)腸癌細(xì)胞系HCT116的結(jié)果。這些數(shù)據(jù)證實(shí)，使用化合物2和紫杉醇的組合療法體外治療HCT116癌細(xì)胞產(chǎn)生明顯協(xié)同抗癌活性。已經(jīng)表明，所述兩種藥物的給予順序在決定是否獲得協(xié)同作用方面很重要。首先給予紫杉醇20小時，然后在第二個20小時給予化合物2(0.33μM)，明顯起協(xié)同作用，用指示濃度的所述兩種藥物同時治療20小時也是如此。相反，發(fā)現(xiàn)化合物2(0.3μM)后接紫杉醇的組合是拮抗性的。
圖8顯示化合物2和化合物1組合化療人結(jié)腸癌細(xì)胞系HCT116。這些數(shù)據(jù)證實(shí)，使用化合物2和化合物1的組合療法體外治療HCT116癌細(xì)胞產(chǎn)生明顯協(xié)同抗癌活性。首先給予化合物120小時，然后在第二個20小時治療周期給予化合物2(1μM)。
圖9和10進(jìn)一步圖示說明使用化合物2和化合物1組合化療的協(xié)同作用。協(xié)同作用在一定范圍的化合物1和化合物2濃度獲得，似乎與組合使用的每種藥物的具體濃度無關(guān)。對于化合物2，1μM(圖8)、0.33μM(圖9)和0.11μM(圖10)的濃度都與各種濃度的化合物1產(chǎn)生協(xié)同作用。在這些實(shí)驗(yàn)中，首先給予化合物120小時，然后在第二個20小時治療周期給予化合物2。
圖11顯示，對于裸鼠中生長的人腫瘤異種移植物(HCT116人結(jié)腸癌)，使用化合物2和紫杉醇組合化療獲得體內(nèi)協(xié)同作用。在該實(shí)驗(yàn)中，通過長時間靜脈輸注(24小時)給予125mg/kg劑量的化合物2。在化合物2輸注結(jié)束時，以24mg/kg劑量腹膜內(nèi)給予紫杉醇(可認(rèn)為是同時給予)。
圖12顯示了使用化合物2和紫杉醇組合化療對裸鼠中生長的紫杉醇抗性人腫瘤異種移植物(Pat-7人卵巢癌)的體內(nèi)協(xié)同作用。同時給予紫杉醇和化合物2；紫杉醇通過靜脈內(nèi)途徑給予，而化合物2通過腹膜內(nèi)途徑給予。顯示的數(shù)據(jù)是最大耐受方案紫杉醇(36mg/kg，靜脈內(nèi)，q3dx3)；化合物2(350mg/kg，腹膜內(nèi)，q3dx3)。
圖13顯示了使用化合物2和化合物1的組合化療對裸鼠中生長的多藥物抗性人腫瘤異種移植物(HCTVM46人結(jié)腸癌)的體內(nèi)治療協(xié)同作用。在腹膜內(nèi)給予化合物2之前24小時靜脈內(nèi)給予化合物1。顯示的數(shù)據(jù)是最大耐受方案單獨(dú)的化合物1(15mg/kg，q4dx3)；單獨(dú)的化合物2(400mg/kg，q4dx3)；兩種藥物聯(lián)合應(yīng)用(6mg/kg的化合物1，接著是400mg/kg的化合物2)。
圖14顯示了組合化合物1和化合物2體內(nèi)抗裸鼠中生長的多藥物抗性人腫瘤異種移植物(HCTVM46人結(jié)腸癌)的時序相關(guān)性。與上述的其它報道的時序相反，在給予化合物1前1天給予化合物2沒有產(chǎn)生治療協(xié)同作用。顯示的數(shù)據(jù)是最大耐受方案單獨(dú)的化合物1(10mg/kg，靜脈內(nèi)，q4dx3)；單獨(dú)的化合物2(400mg/kg，腹膜內(nèi)，q4dx3)；兩種藥物聯(lián)合應(yīng)用(300mg/kg的化合物2，接著是10mg/kg的化合物1)。
圖15顯示了化合物2和CPT-11組合化療對裸鼠中生長的晚期(300-500mg)人結(jié)腸癌HCT116產(chǎn)生協(xié)同抗腫瘤活性。在給予化合物2之前1小時給予CPT-11。以最小中毒劑量(MTD)30mg/kg/inj或接近該劑量靜脈內(nèi)給予CPT-11。化合物2以兩種不同劑量水平靜脈內(nèi)給予60mg/kg/inj和80mg/kg/inj。
圖16(A)顯示了吉西他濱(Gem)和化合物2組合化療增強(qiáng)了對人結(jié)腸癌HT-29腫瘤生長的抑制。圖16(B)顯示在腫瘤消退作為腫瘤反應(yīng)終點(diǎn)時，吉西他濱和化合物2組合治療獲得的協(xié)同抗腫瘤活性也適用。在給予化合物2之前1小時給予Gem。Gem以兩種劑量水平靜脈內(nèi)給予24和36mg/kg/inj，Q2D×4(MTD＝36mg/kg/inj)。化合物2以兩種不同劑量水平靜脈內(nèi)給予60mg/kg/inj和80mg/kg/inj。
圖17(A)證實(shí)紫杉醇(Ptx1)和化合物2組合化療就腫瘤生長來說產(chǎn)生了抗人結(jié)腸癌HCT116的協(xié)同抗腫瘤活性。圖17(B)證實(shí)在腫瘤消退和治愈率用作腫瘤反應(yīng)終點(diǎn)時，紫杉醇和化合物2組合治療獲得的協(xié)同抗腫瘤活性也適用。在給予化合物2之前3小時給予紫杉醇。紫杉醇以20mg/kg/inj、Q7D×4靜脈內(nèi)給予?；衔?以兩種不同劑量水平靜脈內(nèi)給予40mg/kg/inj和80mg/kg/inj。
圖18A-18G顯示了單獨(dú)使用或組合使用的各種腫瘤藥物的抗癌作用。結(jié)果顯示化合物2和Her-1抑制劑(化合物8)在組合使用時具有體外抗Her-1激活的SAL-2癌細(xì)胞系的協(xié)同細(xì)胞毒性作用(對比圖18B與圖18D)。圖18A在接觸指示濃度的紫杉醇20小時后SAL-2細(xì)胞系的形成克隆性細(xì)胞存活率。圖18B在接觸指示濃度的化合物2達(dá)20小時后SAL-2細(xì)胞系的形成克隆性細(xì)胞存活率。圖18C紫杉醇和Her-1抑制劑化合物8之間的拮抗作用。SAL-2細(xì)胞首先接觸化合物8達(dá)20小時，然后再接觸紫杉醇20小時。圖18D化合物2和Her-1抑制劑化合物8之間的協(xié)同作用。SAL-2細(xì)胞首先接觸化合物8達(dá)20小時，然后再接觸化合物220小時。對于裸鼠中的Her-1過表達(dá)的A431人鱗狀細(xì)胞癌異種移植物模型，化合物2增強(qiáng)Her-1(EGFR)抑制劑Iressa的抗腫瘤活性。圖18EIressa(200mg/kg/adm，口服，Q1D×11)和化合物2(60mg/kg/inj，靜脈，Q2D×5)的組合作用。在開始用化合物2治療前3天開始Iressa治療。圖18FIressa(200mg/kg/adm，口服，Q1D×11)和化合物2(80mg/kg/inj，靜脈，Q2D×5)的組合作用。圖18GIressa(200mg/kg/adm，口服，Q1D×11)和紫杉醇(24mg/kg/inj，靜脈，Q2D×5)的組合作用。
圖19證實(shí)化合物2與Herceptin組合治療產(chǎn)生抗BT474人乳腺癌細(xì)胞系的協(xié)同抗增殖活性。如圖所示，在開始化合物2治療之前2天開始Herceptin治療。
圖20圖示化合物2增強(qiáng)他莫昔芬對裸鼠中的MCF-7雌激素依賴性人乳腺癌異種移植物模型的抗腫瘤活性。他莫昔芬以Q2D×14口服給予。如圖所示，化合物2以2個療程、Q1D×10口服給予。
圖21圖示化合物2增強(qiáng)手術(shù)閹割對裸鼠中的雄激素依賴性人前列腺癌異種移植物模型MDA-PCa-2b的抗腫瘤活性。在腫瘤移植后21天進(jìn)行手術(shù)閹割。在手術(shù)閹割后3天開始化合物2和紫杉醇治療。化合物2以Q1D×10口服給予。紫杉醇以Q2D×5靜脈給予。
圖22圖示化合物2增強(qiáng)雄激素受體抑制劑Casodex對裸鼠中的雄激素非依賴性、Casodex反應(yīng)型人前列腺癌異種移植物模型MDA-PCa-2b-AI的抗腫瘤活性。Casodex以Q1D×10口服給予。在Casodex治療開始后3天開始化合物2治療?；衔?以Q1D×10口服給予。
圖23顯示CDK抑制劑(CDKI)化合物9和化合物2組合產(chǎn)生對A2780人卵巢癌細(xì)胞的順序依賴性體外協(xié)同細(xì)胞毒性作用。將1.5μM化合物9(無效劑量)治療4小時與濃度逐漸增加的化合物2治療20小時組合。在第10天記錄集落形成。A圖化合物2治療前為CDKI治療。圖BCDKI治療前為化合物2治療。
發(fā)明詳述本發(fā)明有利地提供一種協(xié)同治療癌癥的方法，包括給予其需要哺乳動物(優(yōu)選為人)協(xié)同治療有效量的以下物質(zhì)(1)至少一種選自抗增殖細(xì)胞毒性劑和抗增殖細(xì)胞抑制劑的藥物，和(2)式I化合物。
令人驚奇的是，發(fā)現(xiàn)(1)至少一種抗增殖細(xì)胞毒性劑和/或抗增殖細(xì)胞抑制劑和(2)式I化合物在組合使用時提供協(xié)同的癌癥治療方法。本文使用的術(shù)語“協(xié)同”是指用本發(fā)明方法和組合物達(dá)到的作用大于以下方法和組合物產(chǎn)生的作用總和即包含單獨(dú)的所述細(xì)胞毒性劑或細(xì)胞抑制劑以及本發(fā)明式I化合物，其量為用于本發(fā)明所述方法和組合物的量。有利的是，所述活性成分之間的這種協(xié)同作用使得可以使用較小劑量的一種或兩種活性成分、可以使用較低劑量的抗腫瘤劑或放療、以相同的劑量提供較大的功效和/或防止或延遲形成多藥物抗性。
超越以前公開方法的其它優(yōu)勢包括本發(fā)明的式I化合物和至少一種選自細(xì)胞抑制劑和細(xì)胞毒性劑的藥物組合根據(jù)要治療的癌細(xì)胞的性質(zhì)而可以各自有所變化。還可以預(yù)期，所述組合物的治療效果在所述細(xì)胞毒性劑或細(xì)胞抑制劑以及式I化合物的量小于它們單獨(dú)給予時需要的量時就可以達(dá)到。該方法避免任何可能由于給予其量單獨(dú)給予時足以達(dá)到相同的治療效果的抗腫瘤劑或式I化合物或放療引起的非機(jī)理型毒副作用。所述組合物達(dá)到協(xié)同治療效果，并顯現(xiàn)出超過任何組成化合物或方法在單獨(dú)給予時的作用的意外治療優(yōu)勢。
構(gòu)成本發(fā)明方法的兩種或多種抗癌藥物的選擇性程度提供的治療優(yōu)勢超過先前公開的使用單一抗腫瘤劑治療癌癥的方法。特別是，使用兩種或多種具有互補(bǔ)性的基本不重疊活性的獨(dú)立藥用活性組分使人們可以使用本發(fā)明治療方法獨(dú)立精確地改變組合活性，而不必合成具有特定藥用活性譜的一種藥物。另外，這種組合應(yīng)當(dāng)同時有效針對增殖細(xì)胞和非增殖細(xì)胞。
包括放療在內(nèi)的抗增殖細(xì)胞毒性劑可以與式I化合物同時給予或在式I化合物之前給予。在本發(fā)明的一個優(yōu)選實(shí)施方案中，抗增殖細(xì)胞毒性劑和/或放療在式I化合物之前給予。本文使用的術(shù)語“同時”是指抗增殖細(xì)胞毒性劑或放療和式I化合物互相之間在24小時之內(nèi)給予，優(yōu)選12小時，更優(yōu)選6小時，最優(yōu)選3小時或更短。
除了上述抗增殖細(xì)胞毒性劑和放療之外，還可以將使細(xì)胞變成“非增殖”或“休眠”細(xì)胞的藥物(本文稱為“抗增殖細(xì)胞抑制劑”或“休眠劑”)選擇性地給予有需要的患者?？乖鲋臣?xì)胞抑制劑可與式I化合物或放療或細(xì)胞毒性劑同時給予或序貫給予。
本發(fā)明提供協(xié)同治療各種癌癥的方法，所述癌癥包括但不限于癌癥，包括膀胱癌(包括快速轉(zhuǎn)移性膀胱癌)、乳腺癌、結(jié)腸癌(包括結(jié)腸直腸癌)、腎癌、肝癌、肺癌(包括小細(xì)胞和非小細(xì)胞肺癌以及肺腺癌)、卵巢癌、前列腺癌、睪丸癌、泌尿生殖道癌、淋巴系統(tǒng)癌、直腸癌、喉癌、胰腺癌(包括外分泌胰腺癌)、食道癌、胃癌、膽囊癌、子宮頸癌、甲狀腺癌和皮膚癌(包括鱗狀細(xì)胞癌)；淋巴系造血腫瘤，包括白血病、急性淋巴細(xì)胞白血病、急性成淋巴細(xì)胞白血病、B細(xì)胞淋巴瘤、T細(xì)胞淋巴瘤、Hodgkin淋巴瘤、非Hodgkin淋巴瘤、毛細(xì)胞淋巴瘤、組織細(xì)胞淋巴瘤和Burkett淋巴瘤；骨髓系造血腫瘤，包括急性和慢性骨髓性白血病、骨髓發(fā)育異常綜合征、骨髓性白血病和早幼粒細(xì)胞性白血??；中樞神經(jīng)系統(tǒng)和周圍神經(jīng)系統(tǒng)的腫瘤，包括星形細(xì)胞瘤、成神經(jīng)細(xì)胞瘤、神經(jīng)膠質(zhì)瘤和神經(jīng)鞘瘤；間充質(zhì)源腫瘤，包括纖維肉瘤、橫紋肌肉瘤和骨肉瘤；以及其它腫瘤，包括黑素瘤、xenoderma pigmentosum、角化棘皮瘤、精原細(xì)胞瘤、甲狀腺濾泡癌和畸胎癌。
本發(fā)明最優(yōu)選用于治療快速轉(zhuǎn)移性膀胱癌、胰腺癌、前列腺癌、非小細(xì)胞肺癌、結(jié)腸直腸癌和乳腺癌。
在本發(fā)明的一個優(yōu)選實(shí)施方案中，提供一種協(xié)同治療癌性腫瘤的方法。本發(fā)明的協(xié)同方法有利地減慢了哺乳動物宿主的腫瘤發(fā)展、降低其腫瘤負(fù)荷或?qū)е缕淠[瘤消退。
本文使用的短語“放療”包括但不限于由外部施用的放療源(如光束)或植入的小放療源傳遞的X射線或γ射線。也可以認(rèn)為放療是一種抗增殖細(xì)胞毒性劑。
本文使用的短語“抗腫瘤劑”與“化療劑”同義，是指防止癌細(xì)胞增殖的化合物(即抗增殖劑)。一般而言，本發(fā)明所述抗腫瘤劑分為兩類抗增殖細(xì)胞毒性劑和抗增殖細(xì)胞抑制劑。細(xì)胞毒性劑通過以下途徑防止癌細(xì)胞增殖(1)干擾細(xì)胞復(fù)制DNA的能力和(2)誘導(dǎo)細(xì)胞死亡和/或癌細(xì)胞凋亡?？乖鲋臣?xì)胞抑制劑或休眠劑通過調(diào)節(jié)、干擾或抑制調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖的細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程而起作用。大部分化療劑是細(xì)胞毒性劑，針對增殖細(xì)胞。
可用作抗增殖細(xì)胞毒性劑的化合物類型包括烷化劑(包括但不限于氮芥、乙烯亞胺衍生物、烷基磺酸鹽、亞硝基脲和三氮烯)尿嘧啶氮芥、氮芥、環(huán)磷酰胺(Cytoxan)、異環(huán)磷酰胺、苯丙氨酸氮芥、苯丁酸氮芥、雙溴丙基哌嗪、曲他胺、三亞乙基硫代磷酰胺、白消安、亞硝脲氮芥、環(huán)己亞硝脲、鏈脲霉素、氮烯唑胺和Temozolomide。
抗代謝劑(包括但不限于葉酸拮抗物、嘧啶類似物、嘌呤類似物和腺苷脫氨酶抑制劑)甲氨蝶呤、5-氟尿嘧啶、5-氟脫氧尿苷、阿糖胞苷、6-巰基嘌呤、6-巰基鳥嘌呤、磷酸氟達(dá)拉濱、戊制菌素和吉西他濱。
天然產(chǎn)物及其衍生物(例如長春花屬生物堿、抗腫瘤抗生素、酶、淋巴因子和表鬼臼毒素)長春花堿、長春花新堿、長春堿酰胺、博來霉素、更生霉素、道諾紅菌素、阿霉素、表柔比星、伊達(dá)比星、Ara-C、紫杉醇(紫杉醇可以商品名Taxol購買)、光輝霉素、去氧助間型霉素、絲裂霉素C、L-天冬酰胺酶、干擾素(尤其是IFN-α)、依托泊苷和替尼泊苷。
其它的抗增殖細(xì)胞毒性劑為navelbene、CPT-11、anastrazole、letrazole、capecitabine、reloxafine、環(huán)磷酰胺、異環(huán)磷酰胺和droloxafine。
微管作用劑干擾細(xì)胞有絲分裂，其抗增殖細(xì)胞毒性活性在本領(lǐng)域眾所周知?？捎糜诒景l(fā)明的微管作用劑包括但不限于異秋水仙堿(NSC 406042)、Halichondrin B(NSC 609395)、秋水仙素(NSC 757)、秋水仙素衍生物(例如NSC 33410)、dolastatin 10(NSC 376128)、美坦素(NSC 153858)、根膽酸(NSC 332598)、紫杉醇(Taxol，NSC125973)、Taxol衍生物(例如衍生物(例如NSC 608832))、硫代秋水仙素(NSC 361792)、三苯甲基半胱氨酸(NSC 83265)、硫酸長春堿(NSC49842)、硫酸長春新堿(NSC 67574)、天然和合成epothilone(包括但不限于epothilone A、epothilone B和discodermolide(參見Service，(1996)Science，2742009)、雌二醇氮芥、諾考達(dá)唑、MAP4等。所述藥物的實(shí)例還描述于科技和專利文獻(xiàn)，參見例如Bulinski(1997)J.Cell Sci.1103055 3064；Panda (1997)Proc.Natl.Acad.Sci USA 9410560-10564；Muhiradt(1997)Cancer Res.573344-3346；Nicolaou (1997)Nature 387268-272；Vasquez(1997)Mol.Biol.Cell.8973-985；Panda(1996)J.Biol.Chem 27129807-29812。
本文使用的術(shù)語“紫杉醇”是指可以商品名Taxol(NSC編號125973)購買的藥物。Taxol通過增強(qiáng)微管蛋白聚合為穩(wěn)定微管束，穩(wěn)定微管束不能重形成正確有絲分裂結(jié)構(gòu)，而抑制真核細(xì)胞復(fù)制。在眾多可用的化療藥物中，紫杉醇由于其在抗藥物難治性腫瘤(包括卵巢腫瘤和乳腺腫瘤)的臨床實(shí)驗(yàn)中的功效而引起注意(Hawkins(1992)Oncology，617-23，Horwitz(1992)Trends Pharmacol.Sci.13134-146，Rowinsky(1990)J.Natl.Canc.Inst.821247-1259)。
特別優(yōu)選的抗增殖細(xì)胞毒性劑是具有紫杉醇樣活性的化合物。這些化合物包括但不限于紫杉醇和紫杉醇衍生物(紫杉醇類化合物)或類似物。紫杉醇及其衍生物可由商業(yè)渠道購買。另外，制備紫杉醇以及紫杉醇類似物和衍生物的方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員眾所周知的(參見例如美國專利第5,569,729、5,565,478、5,530,020、5,527924、5,508,447、5,489,589、5,488,116、5,484,809、5,478,854、5,478,736、5,475,120、5,468,769、5,461,169、5,440,057、5,422,364、5,411,984、5,405,972和5,296,506號)。
因此，適用于本發(fā)明方法和組合物的抗增殖細(xì)胞毒性劑包括但不限于微管穩(wěn)定劑和微管破壞劑，所述微管穩(wěn)定劑如紫杉醇(也稱為Taxol)、docetaxel(也稱為Taxotere)、7-O-甲基硫代甲基-紫杉醇(公開于美國專利5,646,176號)、4-脫乙?；?4-甲基碳酸酯紫杉醇、3′-叔丁基-3′-N-叔丁氧羰基-4-脫乙?；?3′-脫苯基-3′-N-脫苯甲?；?4-O-甲氧羰基-紫杉醇(公開于2000年2月3日提交的USSN 60/179,965和本文的實(shí)施例17)、C-4甲基碳酸酯紫杉醇(公開于WO 94/14787)、epothilone A、epothilone B、epothilone C、epothilone D、脫氧epothiloneA、脫氧epothilone B、[1S-[1R*，3R*(E)，7R*，10S*，11R*，12R*，16S*]]-7-11-二羥基-8，8，10，12，16-五甲基-3-[1-甲基-2-(2-甲基-4-噻唑基)乙烯基]-4-氮雜-17氧雜雙環(huán)[14.1.0]十七烷-5，9-二酮(公開于WO99/02514)、[1S-[1R*，3R*(E)，7R*，10S*，11R*，12R*，16S*]]-3-[2-[2-(氨甲基)-4-噻唑基]-1-甲基乙烯基]-7，11-二羥基-8，8，10，12，16-五甲基-4-17-二氧雜雙環(huán)[14.1.0]十七烷-5，9-二酮(公開于2000年2月17日提交的USSN 09/506,481和本文的實(shí)施例7和8)以及它們的衍生物。
其它合適的細(xì)胞毒性劑諸如表鬼臼毒素、抗腫瘤酶、拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑、丙卡巴肼、米托蒽醌、鉑配位復(fù)合物如順鉑和卡鉑、生物反應(yīng)改進(jìn)劑、生長抑制劑、抗激素治療劑、甲酰四氫葉酸、替加氟和造血生長因子。
其它抗增殖細(xì)胞毒性劑包括苯丙氨酸氮芥、六甲三聚氰胺、塞替派、阿糖胞苷、idatrexate、三甲曲沙、達(dá)卡巴嗪、L-天冬酰胺酶、喜樹堿、托泊替堪、比卡魯胺、氟他胺、亮丙瑞林、吡啶苯并吲哚衍生物、干擾素和白介素。特別優(yōu)選的抗增殖細(xì)胞毒性劑類型為EGFR抑制劑、Her-2抑制劑、CDK抑制劑和Herceptin(trastuzumab)。一些特別優(yōu)選的抗增殖細(xì)胞抑制劑為紫杉醇、順鉑、卡鉑、epothilone、吉西他濱、CPT-11、5-氟尿嘧啶、替加氟、甲酰四氫葉酸和EGFR抑制劑如Iressa(ZD 1839，4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-甲氧基-6-(3-(4-嗎啉基)丙氧基)喹唑啉和OSI-774(4-(3-乙炔基苯氨基)-6，7-二(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉)。
在本發(fā)明的一個實(shí)施方案中，在用本發(fā)明治療前或治療過程中通過用細(xì)胞抑制劑治療，可使增殖癌細(xì)胞變成非增殖性細(xì)胞。本文使用的“細(xì)胞抑制劑”與“休眠劑”同義，是指任何減慢細(xì)胞分化和腫瘤生長速率的手段，使得所述細(xì)胞變成非增殖細(xì)胞或使得所述細(xì)胞的特性近似于非增殖細(xì)胞的特性。本發(fā)明的典型抗增殖細(xì)胞抑制劑或“休眠劑”包括但不限于激素和類固醇(包括合成類似物)17α-炔雌醇、己烯雌酚、睪丸素、強(qiáng)的松、氟甲睪酮、丙酸屈他雄酮、睪內(nèi)酯、醋酸甲地孕酮、甲基強(qiáng)的松龍、甲基睪丸素、強(qiáng)的松龍、去炎松、氯烯雌醚、羥孕酮、氨基乙哌啶酮、雌二醇氮芥、醋酸甲羥孕酮、亮丙瑞林、氟他胺、托瑞米芬、醋酸性瑞林。
其它適于用作細(xì)胞抑制劑的為抗生血管藥物，如基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑和其它VEGF抑制劑如抗VEGF抗體，還包括小分子如ZD6474和SU6668。還可以使用Genetech的抗Her-2抗體。一種合適的EGFR抑制劑是EKB-569(一種不可逆性抑制劑)。還包括EGFR免疫特異性的Imclone抗體C225和src抑制劑。
其它適于用作抗增殖細(xì)胞抑制劑的是Casodex(比卡魯胺，AstraZeneca)，Casodex使雄激素依賴性癌癥非增殖化。細(xì)胞抑制劑的另一個實(shí)例為抗雌激素藥他莫昔芬，該藥物抑制雌激素依賴性乳腺癌增殖或生長。細(xì)胞增殖信號轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制劑為細(xì)胞抑制劑。實(shí)例為表皮生長因子抑制劑、Her-2抑制劑、MEK-1激酶抑制劑、MAPK激酶抑制劑、PI3抑制劑、Src激酶抑制劑和PDGF抑制劑。
上述細(xì)胞抑制劑還包含抗生血管藥物和抗血管形成藥物，它們通過中斷流向?qū)嶓w瘤的血液剝奪其營養(yǎng)，使癌細(xì)胞休眠。還可以使用也使雄激素依賴性癌癥非增殖化的閹割。利用非手術(shù)手段中斷血流的饑餓療法是細(xì)胞抑制劑的另一個實(shí)例。一類特別優(yōu)選的抗血管形成細(xì)胞抑制劑為combretastatin。其它典型的細(xì)胞抑制劑包括MET激酶抑制劑、MAP激酶抑制劑、非受體和受體酪氨酸激酶抑制劑、整聯(lián)蛋白信號轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制劑和胰島素樣生長因子受體抑制劑。
在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，所述方法需要組合給予兩種或多種抗腫瘤劑。例如，本文提供的數(shù)據(jù)顯示，通過在用式I化合物治療人前列腺癌MDA-Pca-2b異種移植物之前手術(shù)閹割宿主動物，可以使人前列腺癌MDA-Pca-2b異種移植物休眠。
安全有效地給予大多數(shù)所述化療劑的方法是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的。另外，在權(quán)威著作中也描述了其給予方法。例如，在“Physicians′Desk Reference”(PDR)，1996版(Medical Economics Company，Montvale，NJ 07645-1742，USA)中描述了許多化療劑的給予，所述文獻(xiàn)公開內(nèi)容通過引用結(jié)合到本文中。
優(yōu)選的式I化合物為這樣的化合物，其中R1為Br或CN；
R2為任選取代的芐基；R3為任選取代的低級烷基、任選取代的苯基、任選取代的2-噻吩基或任選取代的1-哌啶基；R4為氫或甲基；Z1為CO、SO2或SO2N(R5)-；R5為任選取代的低級烷基或任選取代的苯基；而n為1。
用于本發(fā)明方法和組合物的更優(yōu)選的式I化合物為這樣的化合物，其中R1為CN；R2為任選取代的芐基；R3為任選取代的低級烷基、任選取代的苯基、任選取代的2-噻吩基或任選取代的1-哌啶基；R4為氫或甲基；Z為CO或SO2；而n為1。
用于本發(fā)明的最優(yōu)選的式I化合物為這樣的化合物，其中R1為CN；R2為芐基；R3為正丙基、正丁基、3-甲氧基丙基、2-噻吩基、5-溴-2-噻吩基、苯基、4-甲氧基苯基或1-哌啶基；R4為氫；Z為SO2；而n為1。
特別用于本發(fā)明方法和組合物的式I化合物包括以下物質(zhì)及其藥學(xué)上可接受的鹽(R)-2，3，4，5-四氫-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-4-(2-噻吩基磺?；?-1H-1，4-苯并二氮雜-7-腈；(R)-7-氰基-2，3，4，5-四氫-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-4-(1-氧代丁基)-3-(苯基甲基)-1H-1，4-苯并二氮雜??；(R)-4-[(5-溴-2-噻吩基)磺酰基]-7-氰基-2，3，4，5-四氫-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-1H-1，4-苯并二氮雜?。?R)-7-氰基-2，3，4，5-四氫-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-4-[(4-甲氧基苯基)磺酰基]-3-(苯基甲基)-1H-1，4-苯并二氮雜；(R)-7-氰基-2，3，4，5-四氫-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-4-(苯磺?；?-1H-1，4-苯并二氮雜；(R)-7-氰基-2，3，4，5-四氫-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-4-(丙磺?；?-1H-1，4-苯并二氮雜?。?R)-4-(丁磺?；?-7-氰基-2，3，4，5-四氫-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-1H-1，4-苯并二氮雜?。?R)-7-氰基-2，3，4，5-四氫-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-4-(1-哌啶基磺?；?-1H-1，4-苯并二氮雜；(R)-4-(3-甲氧基丙磺?；?-7-氰基-2，3，4，5-四氫-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-1H-1，4-苯并二氮雜。
特別優(yōu)選(R)-2，3，4，5-四氫-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-4-(2-噻吩基磺酰基)-1H-1，4-苯并二氮雜-7-腈的甲磺酸鹽用于本發(fā)明方法和組合物。
在本發(fā)明的一個優(yōu)選實(shí)施方案中，抗增殖細(xì)胞毒性基選自紫杉醇、docetaxel、7-O-甲基硫代甲基-紫杉醇、4-脫乙?；?4-甲基碳酸酯紫杉醇、3′-叔丁基-3′-N-叔丁氧羰基-4-脫乙?；?3′-脫苯基-3′-N-脫苯甲酰基-4-O-甲氧羰基-紫杉醇、C-4甲基碳酸酯紫杉醇、epothiloneA、epothilone B、epothilone C、epothilone D、脫氧epothilone A、脫氧epothilone B、[1S-[1R*，3R*(E)，7R*，10S*，11R*，12R*，16S*]]-7，11-二羥基-8，8，10，12，16-五甲基-3-[1-甲基-2-(2-甲基-4-噻唑基)乙烯基]-4-氮雜-17-氧雜雙環(huán)[14.1.0]十七烷-5，9-二酮和[1S-[1R*，3R*(E)，7R*，10S*，11R*，12R*，16S*]]-3-[2-[2-(氨甲基)-4-噻唑基]-1-甲基乙烯基]-7，11-二羥基-8，8，10，12，16-五甲基-4，17-二氧雜雙環(huán)[14.1.0]十七烷-5，9-二酮，而式I化合物為(R)-2，3，4，5-四氫-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-4-(2-噻吩基磺?；?-1H-1，4-苯并二氮雜-7-腈或其藥學(xué)上可接受的鹽。
在另一個優(yōu)選實(shí)施方案中，所述細(xì)胞毒性劑為紫杉醇，而式I化合物為(R)-2，3，4，5-四氫-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-4-(2-噻吩基磺?；?-1H-1，4-苯并二氮雜-7-腈或其藥學(xué)上可接受的鹽。
在本發(fā)明的另一個優(yōu)選實(shí)施方案中，所述細(xì)胞毒性劑為[1S-[1R*，3R*(E)，7R*，10S*，11R*，12R*，16S*]]-7，11-二羥基-8，8，10，12，16-五甲基-3-[1-甲基-2-(2-甲基-4-噻唑基)乙烯基]-4-氮雜-17-氧雜二環(huán)[14.1.0]十七烷-5，9-二酮，而式I化合物為(R)-2，3，4，5-四氫-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-4-(2-噻吩基磺?；?-1H-1，4-苯并二氮雜-7-腈或其藥學(xué)上可接受的鹽。
用于本發(fā)明組合方法的特別優(yōu)選的方法使用的細(xì)胞抑制劑選自Iressa、Herceptin、他莫昔芬和手術(shù)或化學(xué)閹割。
當(dāng)描述本發(fā)明的化合物時，短語“低級烷基”或“低級烷基...”(作為另一基團(tuán)的組成部分)是指1-6個碳原子、優(yōu)選1-4個碳原子的未取代烷基。
術(shù)語“芳烷基”是指直接結(jié)合低級烷基的芳基。優(yōu)選的芳烷基為芐基。
術(shù)語“芳基”是指單環(huán)或雙環(huán)芳香烴基團(tuán)，在環(huán)部分具有6-12個碳原子。本文典型芳基為苯基、萘基和聯(lián)苯基。
術(shù)語“雜環(huán)基”是指完全飽和或不飽和的芳香環(huán)或非芳香環(huán)基團(tuán)，為4-7元單環(huán)、7-11元雙環(huán)或10-15元三環(huán)系統(tǒng)，在至少一個含碳原子的環(huán)上具有至少一個雜原子。含有雜原子的雜環(huán)基團(tuán)的每個環(huán)可以具有1、2、3或4個選自氮、氧和硫的雜原子，其中氮和硫雜原子還可任選被氧化，氮雜原子還可以任選被季銨化。所述雜環(huán)基團(tuán)可連接在任何雜原子或碳原子上。
典型的單環(huán)雜環(huán)基團(tuán)包括吡咯烷基、吡咯基、吲哚基、吡唑基、oxetanyl、吡唑啉基、咪唑基、咪唑啉基、咪唑烷基、噁唑基、噁唑烷基、異噁唑啉基、異噁唑基、噻唑基、噻二唑基、噻唑烷基、異噻唑基、異噻唑烷基、呋喃基、四氫呋喃基、噻吩基、噁二唑基、哌啶基、哌嗪基、2-氧代哌嗪基、2-氧代哌啶基、2-氧代吡咯烷基、2-氧氮雜基、氮雜基、4-哌啶酮基、吡啶基、N-氧代-吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、噠嗪基、四氫硫代吡喃基、四氫吡喃基、嗎啉基、噻嗎啉基、噻嗎啉基亞砜、四氫硫代吡喃基砜、噻嗎啉基砜、1，3-二氧戊環(huán)、四氫-1，1-二氧代噻吩基、二噁烷基、異噻唑烷基、thietanyl、硫雜丙環(huán)基、三嗪基、三唑基等。
典型的雙環(huán)雜環(huán)基團(tuán)包括苯并噻唑基、苯并噁唑基、苯并噻吩基、喹啉基、喹啉基-N-氧化物、四氫異喹啉基、異喹啉基、苯并咪唑基、苯并吡喃基、中氮茚基、苯并呋喃基、色酮基、香豆素基、肉啉基、喹喔啉基、吲唑基、吡咯并吡啶基、呋喃吡啶基(如呋喃[2，3-c]吡啶基、呋喃[3，1-b]吡啶基、呋喃[2，3-b]吡啶基)、二氫異吲唑基、二氫喹唑啉基(如3，4-二氫-4-氧代-喹唑啉基)、苯并異噻唑基、苯并異噁唑基、苯并二嗪基、苯并呋咱基、苯并硫代吡喃基、苯并三唑基、苯并吡唑基、二氫苯并呋喃基、二氫苯并噻吩基、二氫苯并硫代吡喃基、二氫苯并硫代吡喃基砜、二氫苯并吡喃基、二氫吲哚基、異苯并二氫吡喃基、異二氫吲哚基、1，5-二氮雜萘基、2，3-二氮雜萘基、胡椒基、嘌呤基、吡啶并吡啶基、喹唑啉基、四氫喹啉基、噻吩并呋喃基、噻吩并吡啶基、噻吩并噻吩基等。
當(dāng)提到一個基團(tuán)為任選取代時，其可以被1-5個取代基取代，優(yōu)選1-3個取代基取代，取代基例如F、Cl、Br、I、三氟甲基、三氟甲氧基、羥基、低級烷氧基、環(huán)烷氧基、雜環(huán)氧基、氧代、低級烷?；?、芳氧基、低級烷?；趸被?、低級烷基氨基、芳基氨基、芳烷基氨基、環(huán)烷基氨基、雜環(huán)氨基、雙取代的胺(其中兩個氨基取代基獨(dú)立地選自低級烷基、芳基或芳烷基)、低級烷?；被⒎减；被?、芳烷?；被?、取代的低級烷?；被?、取代的芳基氨基、取代的芳烷酰基氨基、硫羥基、低級烷硫基、芳硫基、芳烷硫基、環(huán)烷硫基、雜環(huán)硫基、低級烷硫羰基、芳硫羰基、芳烷硫羰基、低級烷磺?；?、芳磺酰基、芳烷磺?；?、氨磺酰基(例如SO2NH2)、取代的氨磺?；?、硝基、氰基、羧基、氨基甲?；?例如CONH2)、取代的氨基甲?；?例如CONH-低級烷基、CONH-芳基、CONH-芳烷基或在氮原子上存在兩個獨(dú)立選自低級烷基、芳基或芳烷基的取代基的氨基甲?；?、低級烷氧羰基、芳基、取代的芳基、胍基和雜環(huán)基(例如吲哚基、咪唑基、呋喃基、噻吩基、噻唑基、吡咯烷基、吡啶基、嘧啶基等)。以上提及的取代基進(jìn)一步被取代時，其取代基可以為F、Cl、Br、I、任選取代的低級烷基、羥基、任選取代的低級烷氧基、任選取代的芳基或任選取代的芳烷基。
設(shè)想了本發(fā)明式I化合物的所有立體異構(gòu)體或者為混合物形式，或者為純或基本純形式。式I化合物的定義包含所有可能的立體異構(gòu)體及其混合物。式I化合物的定義非常特別地包括具有特定活性的外消旋形式和分離的旋光異構(gòu)體。
可利用美國專利6,011,029描述的方法制備式I化合物。本文涉及的所有中請和專利都通過引用結(jié)合到本文中。
式I化合物以各種藥學(xué)上可接受的鹽形式使用。術(shù)語“藥學(xué)上可接受的鹽”是指對藥化工作者來說顯而易見的鹽形式，即基本上無毒并提供需要的藥代動力學(xué)特性、可口性、吸收性、分布性、代謝和排泄的鹽形式。其它在性質(zhì)上更實(shí)用的因素在選擇時也很重要，如原材料的成本、結(jié)晶的容易程度、收率、穩(wěn)定性、獲得的原料藥的吸濕性和流動性。藥用組合物可方便地由活性成分或其藥學(xué)上可接受的鹽和藥學(xué)上可接受的載體制備。
適用于本發(fā)明方法和組合物的式I化合物、細(xì)胞毒性劑和細(xì)胞抑制劑的藥學(xué)上可接受的鹽包括但不限于與各種有機(jī)酸或無機(jī)酸形成的鹽，所述酸例如鹽酸、羥甲基磺酸、氫溴酸、甲磺酸、硫酸、乙酸、三氟乙酸、馬來酸、苯磺酸、甲苯磺酸、氨基磺酸、乙醇酸、硬脂酸、乳酸、蘋果酸、撲酸、磺胺酸、2-乙酸基苯甲酸、富馬酸、甲苯磺酸、甲磺酸、乙二磺酸、草酸、羥乙磺酸，包括各種其它藥學(xué)上可接受的鹽，例如硝酸鹽、磷酸鹽、硼酸鹽、酒石酸鹽、檸檬酸鹽、琥珀酸鹽、苯甲酸鹽、抗壞血酸鹽、水楊酸鹽等。設(shè)想將陽離子如季銨離子作為藥學(xué)上可接受的陰離子部分的陽離子。
式I化合物的優(yōu)選鹽包括鹽酸鹽、甲磺酸鹽和三氟乙酸鹽，更優(yōu)選甲磺酸鹽。另外，可以用堿金屬如鈉、鉀和鋰；堿土金屬如鈣和鎂；有機(jī)堿如二環(huán)己胺、三丁胺和吡啶以及氨基酸如精氨酸、賴氨酸等，制備式I化合物的藥學(xué)上可接受的鹽。
可用常規(guī)方法合成本發(fā)明的藥學(xué)上可接受的鹽。一般來說，通過將游離堿或酸與化學(xué)計(jì)量或過量的形成需要鹽的無機(jī)或有機(jī)酸或堿在合適溶劑或溶劑組合中反應(yīng)，制備所述鹽。
本發(fā)明還包括一種用于治療癌癥的藥用組合物，包括給予治療有效量的本發(fā)明組合物，具有或沒有藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑。本發(fā)明的協(xié)同作用藥用組合物包含任選的抗增殖細(xì)胞毒性劑、任選的休眠劑、式I化合物和藥學(xué)上可接受的載體。所述方法必須組合使用細(xì)胞毒性劑和/或細(xì)胞抑制劑與式I化合物。本發(fā)明的組合物還可含有一種或多種藥學(xué)上可接受的添加成分，如明礬、穩(wěn)定劑、抗微生物劑、緩沖劑、著色劑、調(diào)味劑、佐劑等。本發(fā)明的抗腫瘤劑、任選的細(xì)胞抑制劑(如果為化學(xué)物質(zhì)的話)、式I化合物和組合物可口服或胃腸外給藥，包括靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、腹膜內(nèi)、皮下、直腸和局部途徑給藥。
口服使用的本發(fā)明的抗腫瘤劑、細(xì)胞抑制劑、式I化合物和組合物可以例如片劑或膠囊劑、粉劑、可分散顆粒劑或扁囊劑或以水溶液或懸浮液形式給藥。在口服使用片劑的情況下，通常使用的載體包括乳糖、玉米淀粉、碳酸鎂、滑石粉和糖，通常加入潤滑劑如硬脂酸鎂。當(dāng)以膠囊劑形式口服給藥時，使用的載體包括乳糖、玉米淀粉、碳酸鎂、滑石粉和糖。當(dāng)使用水性懸浮液口服給藥時，通常加入乳化劑和/或懸浮劑。另外，可將甜味劑和/或調(diào)味劑加入到口服組合物中。對于肌內(nèi)、腹膜內(nèi)、皮下和靜脈內(nèi)使用，通常使用所述活性成分的無菌溶液，溶液的pH應(yīng)當(dāng)適當(dāng)調(diào)節(jié)并緩沖。對于靜脈內(nèi)使用，應(yīng)當(dāng)控制溶質(zhì)的總濃度，以便使制備物等滲。在本發(fā)明的一個優(yōu)選實(shí)施方案中，式I化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽用硫丁醚-7-β-環(huán)糊精或2-羥丙基-β-環(huán)糊精配制，靜脈內(nèi)給藥。
為制備按照本發(fā)明的栓劑，首先將低熔點(diǎn)蠟如脂肪酸甘油酯或可可油的混合物融化，通過例如攪拌將活性成分均一地分配在蠟中。然后將熔融的均一混合物傾倒入適宜大小的模子中，讓其冷卻，并由此固化。
液體制劑包括溶液劑、懸浮液劑和乳濁液劑。這種制劑的實(shí)例為胃腸外注射的水溶液劑或水/丙二醇溶液劑。液體制劑還可以包括鼻內(nèi)給藥的溶液劑。
適于吸入的氣溶膠制劑可以包括溶液和粉末形式的固體，它們可與藥學(xué)上可接受的載體(如惰性壓縮氣體)混合。
還包括在使用前馬上轉(zhuǎn)變?yōu)榭诜蛭改c外給藥的液體制劑的固體制劑。這樣的液體形式包括溶液、懸浮液和乳濁液。
本文描述的式I化合物以及細(xì)胞毒性劑和細(xì)胞抑制劑還可以經(jīng)皮傳遞。經(jīng)皮組合物可采用乳膏、洗劑、氣溶膠和/或乳劑的形式，并可以包含在基質(zhì)或儲庫型的經(jīng)皮貼片中，這在本領(lǐng)域是常規(guī)性的。
本發(fā)明的組合應(yīng)用還可以結(jié)合其它廣為人知的療法，選擇這些療法是因?yàn)槠鋵σ委煹牟“Y特別有用。
如果以固定劑量配制，則本發(fā)明組合的組合物的活性成分在以下描述的劑量范圍內(nèi)使用?；蛘?，所述細(xì)胞毒性劑、細(xì)胞抑制劑和式I化合物可分別以下文描述的劑量范圍給藥。在本發(fā)明的一個優(yōu)選實(shí)施方案中，在以下文描述的劑量范圍給予式I化合物之前，以下文描述的劑量范圍給予所述抗腫瘤劑。
表I列出了用于本發(fā)明方法的優(yōu)選化療組合和典型劑量。當(dāng)出現(xiàn)“式I化合物”時，設(shè)想本文提供的式I化合物的任何變化形式都可用于化療組合。最好使用化合物2。
化療組合 劑量mg/m2(每劑)式I化合物 2.5-750mg/m2+順鉑 5-150mg/m2式I化合物 2.5-750mg/m2+卡鉑 5-1000mg/m2式I化合物 2.5-750mg/m2+放療 200-8000cGy式I化合物 2.5-750mg/m2+CPT-115-400mg/m2式I化合物 2.5-750mg/m2+紫杉醇40-250mg/m2式I化合物 2.5-750mg/m2+紫杉醇40-250mg/m2+卡鉑 5-1000mg/m2式I化合物 2.5-750mg/m2+5FU 5-5000mg/m2任選+甲酰四氫葉酸 5-1000mg/m2式I化合物 2.5-750mg/m2+Epothilone1-500mg/m2式I化合物 2.5-750mg/m2
+吉西他濱 100-3000mg/m2式I化合物 2.5-750mg/m2+UFT 50-800mg/m2任選+甲酰四氫葉酸 5-1000mg/m2式I化合物 2.5-750mg/m2+吉西他濱 100-3000mg/m2+順鉑 5-150mg/m2式I化合物 2.5-750mg/m2+UFT 50-800mg/m2+甲酰四氫葉酸 5-1000mg/m2式I化合物 2.5-750mg/m2+順鉑 5-150mg/m2+紫杉醇 40-250mg/m2式I化合物 2.5-750mg/m2+順鉑 5-150mg/m2+5FU 5-5000mg/m2式I化合物 2.5-750mg/m2+奧沙利鉑 5-200mg/m2+CPT-11 4-400mg/m2式I化合物 2.5-750mg/m2+5FU 5-5000mg/m2+CPT-11 4-400mg/m2任選+甲酰四氫葉酸 5-1000mg/m2式I化合物 2.5-750mg/m2
+5FU 5-5000mg/m2+放療 200-8000cGy式I化合物 2.5-750mg/m2+放療 200-8000cGy+5FU 5-5000mg/m2+順鉑 5-150mg/m2式I化合物 2.5-750mg/m2+奧沙利鉑 5-200mg/m2+5FU 5-5000mg/m2任選+甲酰四氫葉酸 5-1000mg/m2式I化合物 2.5-750mg/m2+紫杉醇 40-250mg/m2+CPT-11 4-400mg/m2式I化合物 2.5-750mg/m2+紫杉醇 40-250mg/m2+5FU 5-5000mg/m2式I化合物 2.5-750mg/m2+UFT 50-800mg/m2+CPT-11 4-400mg/m2任選+甲酰四氫葉酸 5-1000mg/m2在上表I中，“5FU”表示5-氟尿嘧啶，“甲酰四氫葉酸”可以使用甲酰四氫葉酸鈣，“UFT”是1∶4摩爾比的替加氟∶尿嘧啶，而“Epothilone”最好為WO 99/02514或WO 00/50423中描述的化合物，這兩個專利都通過引用整體結(jié)合到本文中。
盡管表I提供了本發(fā)明式I化合物和某些抗腫瘤藥物的典型劑量范圍，但在配制本發(fā)明的藥用組合物時，臨床醫(yī)師可根據(jù)治療患者病情的許可使用優(yōu)選的劑量。例如，化合物2(一種式I化合物)優(yōu)選可以約25-500mg/m2的劑量范圍每三周給藥一次，只要需要進(jìn)行治療。順鉑的優(yōu)選劑量為約75-120mg/m2，每三周給予一次?？ㄣK的優(yōu)選劑量在約200-600mg/m2的范圍內(nèi)，或AUC約0.5-8mg/ml×分鐘；最優(yōu)選為AUC約4-6mg/ml×分鐘。當(dāng)所用的方法使用放療時，優(yōu)選的劑量范圍為約200-6000cGY。CPT-11的優(yōu)選劑量為約100-125mg/m2，每周一次。紫杉醇的優(yōu)選劑量約130-225mg/m2，每21天給藥一次。吉西他濱的優(yōu)選劑量在約80-1500mg/m2的范圍內(nèi)，每周一次。UFT在與甲酰四氫葉酸組合給予時，其優(yōu)選使用范圍為約每天300-400mg/m2。甲酰四氫葉酸的優(yōu)選劑量為約10-600mg/m2，每周給藥一次。
實(shí)際使用的劑量可根據(jù)患者的需要以及治療病癥的嚴(yán)重程度而有所改變。確定特定情況下的正確劑量屬于本領(lǐng)域的技術(shù)范疇。一般來說，以小于所述化合物的最優(yōu)劑量的劑量開始治療。此后，小量增加劑量，直至達(dá)到在所述情況下的最佳效果。為方便起見，在需要治療的天數(shù)內(nèi)，可將總?cè)談┝糠珠_并按份給藥。還可以使用間歇療法(例如三周中的一周或四周中的三周治療)。
某些癌癥可用式I化合物和多種抗癌劑有效治療。這樣的三種藥物或四種藥物的組合可提供更大的功效。當(dāng)使用這樣的三藥或四藥組合時，可以使用以上列出的劑量。因此，在以上表I中的其它組合可包括組合“化合物2”與(1)米托蒽醌+強(qiáng)的松；(2)阿霉素+紫杉烷(taxane)；或(3)herceptin+紫杉烷。在以上的任何組合中，5-FU都可用UFT替換。
當(dāng)使用本發(fā)明的方法或組合物時，還可根據(jù)需要給予其它在臨床環(huán)境下用于調(diào)節(jié)腫瘤生長或轉(zhuǎn)移的藥物，如止吐藥。
還可以進(jìn)行使用本發(fā)明組合化療方法的臨床研究。所述研究特別優(yōu)選給予約3小時的Taxol(135mg/m2)輸注，然后以三周的間隔給予約1小時的化合物2(50mg/m2)輸注。在另一個方案中，輸注Taxol(80mg/m2)約1小時，然后輸注化合物2(80mg/m2)。該方案需要每周給予一次。另一個方案需要給予三種藥物的組合，包括約3小時的Taxol(135mg/m2)輸注，然后為約20分鐘的卡鉑輸注(AUC＝6)，以此方式每三周給予一次Taxol和卡鉑。在此方案中，化合物2以80mg/m2每周輸注給患者約1小時。
本發(fā)明包括一種協(xié)同治療癌癥的方法，其中細(xì)胞毒性劑和/或細(xì)胞抑制劑和式I化合物同時或序貫給予。因此，盡管包含抗腫瘤劑和式I化合物的藥用制劑對一個特定治療可有利地給予所述組合，但先給予細(xì)胞毒性劑或細(xì)胞抑制劑可能在其它治療中具有優(yōu)勢。還應(yīng)當(dāng)理解的是，本發(fā)明的抗腫瘤劑和式I化合物的組合可與其它治療癌癥(優(yōu)選癌性腫瘤)的方法(包括但不限于放療和手術(shù))聯(lián)合使用。進(jìn)一步應(yīng)當(dāng)理解的是，細(xì)胞抑制劑，如果有的話，可與任何或所有其它協(xié)同療法先后或同時給予。
本發(fā)明的組合還可以與其它眾所周知的治療劑同時給予，選擇這些治療劑是因?yàn)槠鋵σ委煹牟“Y特別有用。當(dāng)多組合配方不合適時，作為替代，本發(fā)明的組合可以與已知的藥學(xué)上可接受的藥物先后使用。
可按照本領(lǐng)域眾所周知的治療方案給予化療劑和/或放療。對本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見的是，化療劑和/或放療的給予可根據(jù)治療的疾病和所述化療劑和/或放療對該疾病的已知作用而有所變化。此外，按照熟練臨床醫(yī)師的知識，治療方案(例如劑量和給藥時間)可根據(jù)觀察到的所給予治療劑(即抗腫瘤劑或放療)對患者的作用以及觀察到的疾病對所給予治療劑的反應(yīng)而改變。
在本發(fā)明方法中，式I化合物與細(xì)胞毒性劑和/或放療和/或細(xì)胞抑制劑同時或先后給予。因此，化療劑和式I化合物或者放療與式I化合物同時給予或基本同時給予并不是必須的。同時給予或基本同時給予的優(yōu)勢完全在熟練臨床醫(yī)師的掌握之中。
此外，一般而言，式I化合物、任選細(xì)胞抑制劑和任選細(xì)胞毒性劑不是必須以同一藥用組合物給予，而且因?yàn)椴煌奈锢砗突瘜W(xué)性質(zhì)，可能必須通過不同的途徑給予。例如，盡管化療劑可靜脈內(nèi)給藥，但式I化合物可口服給藥，以產(chǎn)生和保持其良好的血液濃度水平。在有可能以同一藥用組合物給藥時，對給藥方式和給藥合理性的確定完全在熟練臨床醫(yī)師的知識范圍內(nèi)?？砂凑毡绢I(lǐng)域建立的已知方法進(jìn)行初始給藥，然后熟練臨床醫(yī)師可根據(jù)觀察到的效果修改劑量、給藥方式和給藥時間。
式I化合物和細(xì)胞毒性劑和/或放療和/或細(xì)胞抑制劑的具體選擇取決于主治醫(yī)師的診斷及其對患者病情和合適治療方案的判斷。根據(jù)增殖性疾病的性質(zhì)、患者的病情以及實(shí)際選擇的與式I化合物聯(lián)合給予(即在單一治療方案中)的化療劑和/或細(xì)胞抑制劑和/或放療，式I化合物和/或細(xì)胞毒性劑和/或細(xì)胞抑制劑和/或放療可同時(例如同時、基本同時或?qū)儆谕恢委煼桨?或先后給予。
如果式I化合物和細(xì)胞毒性劑和/或放療和/或細(xì)胞抑制劑不同時或基本同時給予，那么式I化合物和化療劑和/或細(xì)胞抑制劑和/或放療的初始給予順序可以改變。因此，例如，可首先給予式I化合物，接著給予細(xì)胞毒性劑和/或放療；或者，可首先給予細(xì)胞毒性劑和/或放療，接著給予式I化合物。這種交替給予在單一治療方案中可以重復(fù)。在評價了要治療的疾病和患者的狀況之后，對給予順序、治療方案中每種治療劑的重復(fù)給予次數(shù)的確定，完全在熟練醫(yī)師的知識范圍內(nèi)。例如，開始可給予細(xì)胞抑制劑和/或放療，特別是在使用細(xì)胞毒性劑時。然后給予式I化合物以及任選接著給予細(xì)胞抑制劑繼續(xù)治療，直至完成治療方案。
因此，根據(jù)經(jīng)驗(yàn)和知識，執(zhí)業(yè)醫(yī)師可根據(jù)各個患者的需要，隨著治療的進(jìn)行修改每個方案的治療組分(治療劑，即式I化合物、細(xì)胞抑制劑、細(xì)胞毒性劑或放療)的給予。
主治醫(yī)師在判斷以給予的劑量治療是否有效時，將考慮患者的一般健康狀態(tài)以及更明確的體征，例如疾病相關(guān)癥狀的減輕、腫瘤生長的抑制、腫瘤的實(shí)際收縮或轉(zhuǎn)移抑制。腫瘤大小可通過標(biāo)準(zhǔn)方法如放療性檢查(例如CAT或MRI掃描)檢測，連續(xù)檢測可用于判斷腫瘤生長是否已經(jīng)減速甚至逆轉(zhuǎn)。疾病相關(guān)癥狀(如疼痛)的減輕和整體狀況的改善也可用于幫助判斷治療的有效性。
為了有助于進(jìn)一步理解本發(fā)明，提供以下的實(shí)施例，這主要是為了闡釋本發(fā)明更具體的細(xì)節(jié)。不應(yīng)當(dāng)認(rèn)為本發(fā)明的范圍限于所述實(shí)施例，而是應(yīng)當(dāng)包含權(quán)利要求定義的完整主題。實(shí)驗(yàn)方案化合物以下命名的化合物用于鑒定全部實(shí)施例中的測試化合物化合物1[1S-[1R*，3R*(E)，7R*，10S*，11R*，12R*，16S*]]-7，11-二羥基-8，8，10，12，16-五甲基-3-[1-甲基-2-(2-甲基-4-噻唑基)乙烯基]-4-氮雜-17-氧雜雙環(huán)[14.1.0]十七烷-5，9-二酮化合物2(R)-2，3，4，5-四氫-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-4-(2-噻吩基磺?；?-1H-1，4-苯并二氮雜-7-腈，鹽酸鹽化合物3(R)-4-(丁磺?；?-7-氰基-2，3，4，5-四氫-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-1H-1，4-苯并二氮雜，鹽酸鹽化合物4(R)-4-(3-甲氧基丙磺?；?-7-氰基-2，3，4，5-四氫-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-1H-1，4-苯并二氮雜，鹽酸鹽化合物5(R)-4-[(5-溴-2-噻吩基)磺酰基]-7-氰基-2，3，4，5-四氫-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-1H-1，4-苯并二氮雜，鹽酸鹽化合物6(R)-7-氰基-2，3，4，5-四氫-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-4-(1-哌啶基磺?；?-1H-1，4-苯并二氮雜，鹽酸鹽化合物7(R)-7-氰基-2，3，4，5-四氫-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-4-[(4-甲氧基苯基)磺?；鵠-3-(苯基甲基)-1H-1，4-苯并二氮雜，鹽酸鹽化合物84-(3-溴苯氨基)-6，7-二(甲氧基)喹唑啉化合物9N-[5-[[[5-(1，1-二甲基乙基)-2-噁唑基]甲基]硫代]-2-噻唑基]-4-哌啶甲酰胺藥物給予為將化合物1(一種epothilone)給予嚙齒動物，使用兩種不同的賦形劑(1)乙醇/水(1∶9，v/v)和(2)Cremophor/乙醇/水(1∶1∶8，v/v)。首先將化合物1溶解在乙醇或Cremophor/乙醇(50∶50)混合物中。在給藥之前1小時之內(nèi)最終稀釋至需要的劑量濃度。對于胃腸外給藥(IV)，用水進(jìn)行稀釋，使得定量溶液中含有上述的特定賦形劑組合物。對于口服給藥(PO)，用0.25M磷酸鈉緩沖液(pH＝8.0)以30/70(v/v)比率進(jìn)行稀釋。將紫杉醇溶解在乙醇和Cremophor的50/50混合物中，并儲存于4℃；在給藥之前用0.9％NaCl稀釋，獲得紫杉醇的最終稀釋液。所有注射化合物的體積都是0.01ml/g小鼠和0.005ml/g大鼠。集落形成性細(xì)胞的集落-形成測定通過集落形成測定評價化合物體外殺死形成集落腫瘤細(xì)胞(能夠無限分裂形成集落的細(xì)胞)的能力。在接觸藥物16小時結(jié)束時，通過將細(xì)胞于37℃接觸0.05％胰蛋白酶5分鐘，解離單層細(xì)胞培養(yǎng)物。將細(xì)胞重懸浮在完全培養(yǎng)基(含10％FBS)中，用Coulter Channelyzer計(jì)數(shù)，稀釋，并以每個稀釋度5個復(fù)孔平板接種到塑料有蓋組織培養(yǎng)板中。在濕潤氣氛下于37℃溫育所述細(xì)胞10天。用結(jié)晶紫對細(xì)胞集落染色，記錄每個集落多于50個細(xì)胞的集落。測定殺死90％的形成集落的HCT-116人結(jié)腸癌細(xì)胞需要的濃度(即IC90)。異步生長腫瘤的BrdUrd標(biāo)記將BrdUrd溶解在無菌磷酸緩沖鹽水(PBS)溶液pH7.4中，并以100mpk的劑量經(jīng)尾靜脈長時間輸注(24小時)給小鼠。在輸注過程結(jié)束時處死帶腫瘤小鼠，并割除腫瘤進(jìn)行BrdUrd/DNA分析。腫瘤細(xì)胞分散和細(xì)胞染色割除腫瘤并用剪刀切碎，使用含0.025％膠原酶(Sigma ChemicalCo.，St Louis，MO)、0.05％鏈霉蛋白酶(Calbiochem，LaJolla，CA)和0.04％Dnase(Sigma)的酶混合物于37℃離解1小時。去除碎片后，將細(xì)胞懸浮液通過70μm的尼龍篩，用PBS清洗細(xì)胞、計(jì)數(shù)并重懸浮在75％甲醇中。將固定的細(xì)胞保持在4℃冷凍，直至分析。
在測定當(dāng)天，用PBS將固定在75％甲醇中的細(xì)胞清洗1次，重懸浮在胃蛋白酶的2N HCl溶液(0.2mg/ml)中，并于37℃溫育20分鐘。然后用含0.5％胎牛血清(FBS)和0.5％Tween 80的1ml PBS清洗細(xì)胞2次。在兩次清洗之后，將細(xì)胞重懸浮在含2％FBS的1ml PBS中，并于室溫溫育20分鐘。然后將細(xì)胞旋轉(zhuǎn)下來，并將沉淀重懸浮在100μl抗-BrdUrd-FITC(10μg/ml)(Boehringer Mannheim)中。在45分鐘溫育之后，用含0.5％FBS和0.5％Tween 80的1ml PBS清洗細(xì)胞。將清洗的細(xì)胞重懸浮在1ml RNase(1mg/ml)中，并于室溫溫育30分鐘。最后，以10μg/ml的濃度加入碘化丙啶(Sigma)的PBS溶液。體內(nèi)抗腫瘤測試用Balb/c nu/nu裸鼠保持人腫瘤異種移植物。使用由供體小鼠獲得的腫瘤碎片作為皮下移植物在合適的小鼠品系中繁殖腫瘤。
在實(shí)驗(yàn)開始時，將需要檢測有意義反應(yīng)的需要數(shù)目的小鼠(6-10)集中在一起，并用13-標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格的套針皮下給予每只小鼠一塊腫瘤碎片移植物(約50mg)。為治療早期腫瘤，再次將小鼠集中在一起，然后分配到各個治療組和對照組。為治療患晚期癌癥的小鼠，讓腫瘤生長至預(yù)先確定的尺寸框(將范圍外的腫瘤排除在外)，并將動物均勻地分配到各個治療組和對照組。每個動物的治療都是基于各自的體重。每天檢查受治療動物的治療相關(guān)毒性/死亡率。在開始治療之前對每組動物稱重(Wt1)，然后在最后治療劑量之后再稱重(Wt2)。體重差(Wt2-Wt1)提供了治療相關(guān)毒性的檢測結(jié)果。
每周通過用測徑器檢測腫瘤兩次來測定腫瘤反應(yīng)，直至腫瘤達(dá)到預(yù)先確定的“目標(biāo)”大小0.5或1.0g。由下式估算腫瘤重量(mg)腫瘤重量＝(長度×寬度2)÷2以僅僅低于出現(xiàn)過度毒性(即超過1個死亡)的劑量水平確定最大耐受劑量(MTD)。MTD常常等于最佳劑量(OD)?；钚砸設(shè)D表示。在其腫瘤達(dá)到目標(biāo)大小之前死亡的受治療小鼠被認(rèn)為是死于藥物毒性。所患腫瘤小于目標(biāo)大小的對照小鼠沒有死亡。有1個以上由藥物毒性引起的死亡的治療組被認(rèn)為是獲得過度毒性治療，其數(shù)據(jù)未包括在對化合物抗腫瘤效果的評價當(dāng)中。
腫瘤反應(yīng)終點(diǎn)以腫瘤生長遲緩(T-C值)表示，T-C值的定義是治療達(dá)到預(yù)先確定的目標(biāo)大小的腫瘤(T)需要的時間(天數(shù))相比于對照組所需時間(C)的差值。
為估算殺死的腫瘤細(xì)胞，首先用下式計(jì)算腫瘤體積倍增時間(TVDT)TVDT＝對照腫瘤達(dá)到目標(biāo)大小的平均時間(天數(shù))-對照腫瘤達(dá)到目標(biāo)大小一半的平均時間(天數(shù))以及，Log殺死的細(xì)胞(LCK)＝T-C÷(3.32×TVDT)研究中止時(天數(shù)＞腫瘤移植后75天)不存在可檢測的腫瘤時將腫瘤定義為“治愈”；研究中止和藥物治療結(jié)束之間的間隔總是超過任何特定腫瘤類型的體積倍增時間的10倍。
所有治療組和對照組通常都由8只小鼠組成。使用Gehan的廣義Wilcoxon檢驗(yàn)對反應(yīng)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
實(shí)施例1同時包含增殖性細(xì)胞群和非增殖性細(xì)胞群的腫瘤隨著腫瘤生長，血管生長經(jīng)常不能與惡性細(xì)胞群的快速增殖同步。因此，實(shí)體腫瘤塊通常呈現(xiàn)出異常的血管網(wǎng)絡(luò)，這些血管網(wǎng)絡(luò)與正常組織中的血管不同，它們不能為腫瘤細(xì)胞最優(yōu)生長提供足夠的營養(yǎng)。因此，實(shí)體瘤既包含增殖性腫瘤細(xì)胞，也包含非增殖性腫瘤細(xì)胞。對于大多數(shù)實(shí)體瘤而言，非增殖性腫瘤細(xì)胞占總腫瘤細(xì)胞群的大部分?，F(xiàn)有的抗癌劑針對增殖細(xì)胞的生化過程。這些抗癌劑對非增殖性腫瘤細(xì)胞群和/或穩(wěn)定細(xì)胞僅具有最小作用。因此，放療或化療治愈腫瘤疾病失敗的主要影響因素是這些化合物不能針對休眠腫瘤細(xì)胞群。使用長時間(24小時)輸注BrdUrd方案對HCT116人結(jié)腸癌異種移植物進(jìn)行評價，結(jié)果是體內(nèi)各種腫瘤的增殖性細(xì)胞部分僅占總細(xì)胞群的一小部分。對于200-300mg的HCT-116腫瘤來說，細(xì)胞群僅有約20％包含增殖性細(xì)胞，而剩余的80％包含非增殖性細(xì)胞(圖1)。還檢查了許多其他腫瘤，在每種情況下非增殖細(xì)胞都占腫瘤中存在細(xì)胞的大部分(表2)。
表2
通過控制培養(yǎng)基的生長條件可以在體外細(xì)胞培養(yǎng)時重現(xiàn)實(shí)體瘤的營養(yǎng)限制性微環(huán)境。因此，通過去除營養(yǎng)供應(yīng)(培養(yǎng)第8天)可以將腫瘤細(xì)胞誘導(dǎo)入非增殖狀態(tài)或休眠期(穩(wěn)定期，約90％非增殖細(xì)胞)，而在最佳營養(yǎng)條件下(培養(yǎng)第3天)，實(shí)際上所有的腫瘤細(xì)胞都以指數(shù)增殖(對數(shù)期，約90％增殖細(xì)胞)。
實(shí)施例2本發(fā)明組合物選擇性殺死非增殖腫瘤細(xì)胞通過集落形成測定評價化合物2體外殺死形成集落腫瘤細(xì)胞(能夠無限分裂形成集落的細(xì)胞)的能力。在接觸藥物16小時結(jié)束時，通過將細(xì)胞于37℃接觸0.05％胰蛋白酶5分鐘，解離單層細(xì)胞培養(yǎng)物。將細(xì)胞重懸浮在完全培養(yǎng)基(含10％FBS)中，用Coulter Channelyzer計(jì)數(shù)，稀釋，并以每個稀釋度5個復(fù)份平板接種到塑料有蓋組織培養(yǎng)板中。在濕潤氣氛下于37℃溫育所述細(xì)胞10天。用結(jié)晶紫對細(xì)胞集落染色，記錄每個集落多于50個細(xì)胞的集落。測定殺死90％的形成集落的HCT-116人結(jié)腸癌細(xì)胞需要的濃度(即IC90)。
與增殖性(Log)細(xì)胞相比，化合物2和類似物選擇性殺死非增殖性(穩(wěn)定)HCT-116人結(jié)腸癌細(xì)胞(圖2-4和表3)。增殖和非增殖群之間敏感性的差異程度(倍數(shù))在2.7-181的范圍內(nèi)。
表3
大多數(shù)抗癌藥物的作用是影響DNA合成或其功能，并因此針對增殖細(xì)胞而保持休眠細(xì)胞完整，除非休眠細(xì)胞在接觸藥物后馬上分裂。因此，抗癌藥物的效力經(jīng)常受限于這部分難以控制的腫瘤細(xì)胞。例如，與化合物2正相反，通常使用的抗癌藥物如紫杉醇、epothiloneB和5-氟尿嘧啶優(yōu)選對增殖腫瘤細(xì)胞具有細(xì)胞毒性，而對非增殖細(xì)胞基本無效(圖5和6以及表4)。
表4
實(shí)施例3抗增殖劑與本發(fā)明化合物組合起體外協(xié)同殺死腫瘤細(xì)胞的作用如上所述，機(jī)理研究強(qiáng)有力地提示，化合物2對非增殖腫瘤細(xì)胞具有選擇性細(xì)胞毒性。這種獨(dú)一無二的特性獲得了與現(xiàn)有的主要針對增殖腫瘤細(xì)胞的抗腫瘤藥物進(jìn)行協(xié)同組合治療的前景。例如，紫杉醇對對數(shù)期HCT-116細(xì)胞具有高度的體外細(xì)胞毒性，獲得的IC90值為17.8nM(圖5)。然而，對非增殖穩(wěn)定細(xì)胞群，在高至162nM的濃度完全無毒(圖5)。用epothilone B(圖6)觀察到相似的顯著差異，對增殖細(xì)胞和非增殖細(xì)胞的IC90分別為1.3nM和＞108nM(表3)。紫杉醇和化合物2組合獲得體外協(xié)同細(xì)胞毒性，使得所述組合產(chǎn)生的細(xì)胞殺傷力高于累加的細(xì)胞殺傷力(圖7)。而且發(fā)現(xiàn)為了觀察到這種協(xié)同組合，兩種藥物應(yīng)當(dāng)按照特定的順序給予。當(dāng)用兩種藥物同時治療細(xì)胞或紫杉醇先于化合物2治療細(xì)胞時觀察到協(xié)同作用。當(dāng)化合物2先于紫杉醇24小時給予時，觀察到拮抗作用?；衔?和化合物1組合觀察到相似的協(xié)同作用和時序相關(guān)性(圖8-10)。
實(shí)施例4抗增殖劑與本發(fā)明化合物組合對人腫瘤異種移植物起協(xié)同殺死腫瘤細(xì)胞的作用使用sc HCT-116腫瘤模型進(jìn)行輸注化合物2+快速靜脈濃注紫杉醇的組合療法(圖11)。盡管各個藥物單獨(dú)給予無效(化合物2和紫杉醇分別為0.4和0.6LCK)，但所述組合(化合物2，125mpk 24小時靜脈輸注+紫杉醇，24mg/kg靜脈給予)產(chǎn)生1.8LCK的協(xié)同效果。
通過快速濃注給藥的化合物2和紫杉醇的組合化療還顯示了對Pat-7人卵巢癌細(xì)胞的協(xié)同作用，Pat-7人卵巢癌細(xì)胞得自出現(xiàn)TAXOL抗性的癌癥患者。對該抗性腫瘤模型，分別以最大耐受劑量給予紫杉醇和化合物2作為單一藥物治療，獲得的腫瘤反應(yīng)小于1對數(shù)殺死細(xì)胞(LCK)。然而，以最大耐受劑量組合的化合物2和紫杉醇產(chǎn)生治療協(xié)同作用和1.7LCK的顯著抗腫瘤活性(圖12)。對HCT116人結(jié)腸癌異種移植物也觀察到協(xié)同抗腫瘤活性(圖13)。在人類患者觀察到產(chǎn)生相似的全身接觸的劑量水平(20-80μM小時)的化合物2顯示與紫杉醇的抗腫瘤作用協(xié)同作用。
化合物1和化合物2組合對多藥物抗性人結(jié)腸癌異種移植物HCT/VM46也清楚了顯示了體內(nèi)治療協(xié)同作用。化合物1和化合物2作為單一藥物治療對此模型的抗腫瘤活性都不大(圖13)。兩種藥物產(chǎn)生的腫瘤反應(yīng)超過1LCK(分別為1.6和1.1LCK)，但不能誘導(dǎo)腫瘤痊愈。然而，當(dāng)所述兩種藥物組合給藥時(給予化合物124小時以后給予化合物2)，觀察到抗腫瘤活性急劇升高。值得注意的是，7只小鼠中的3只觀察到腫瘤生長延遲有非常顯著的增加(3.7LCK)，包括增強(qiáng)治療效果(圖13)。
證實(shí)了所述組合的時序相關(guān)性。當(dāng)化合物2治療在化合物1之前24小時給予時，未觀察到治療協(xié)同作用(圖14)，實(shí)施的該組合僅與單獨(dú)給予化合物1一樣。
實(shí)施例5本發(fā)明化合物增強(qiáng)拓?fù)洚悩?gòu)酶I抑制劑CPT-11對人實(shí)體癌的體內(nèi)抗腫瘤活性CPT-11是一種抗增殖細(xì)胞毒性抗癌藥物，它與通過誘導(dǎo)可逆性單鏈斷裂而解除DNA扭應(yīng)變的拓?fù)洚悩?gòu)酶I特異性相互作用。CPT-11的細(xì)胞毒性緣自DNA合成過程中復(fù)制酶和三元復(fù)合物(由拓?fù)洚悩?gòu)酶I-DNA和CPT-11或其活性代謝物SN-38形成)相互作用時產(chǎn)生的雙鏈DNA損傷。因此，CPT-11選擇性針對進(jìn)行有效DNA合成的增殖細(xì)胞。我們在本實(shí)施例中已經(jīng)證實(shí)，組合(使用化合物2前1小時使用CPT-11)治療攜帶晚期(300-500mg)HCT116人結(jié)腸癌異種移植物的小鼠產(chǎn)生協(xié)同抗腫瘤活性，該活性遠(yuǎn)超過單獨(dú)給予每種藥物時獲得的活性(圖15A和15B)。在此研究中，CPT-11以MTD 30mg/kg/inj或接近該MTD靜脈內(nèi)給藥?；衔?以兩種不同劑量水平靜脈內(nèi)給藥60mg/kg/inj和80mg/kg/inj。選擇所述劑量的化合物2，是因?yàn)樗鼈儺a(chǎn)生的藥物接觸接近臨床能實(shí)現(xiàn)的接觸。如圖15A和15B所示，在與CPT-11組合時，化合物2的兩種劑量水平產(chǎn)生的抗腫瘤活性都顯著高于每種藥物單獨(dú)給予時獲得的抗腫瘤活性。而且，所述組合產(chǎn)生的部分或全部腫瘤消退率顯著高于單獨(dú)的單一藥物。表5 化合物2和CPT-11組合化療對晚期HCT116人結(jié)腸癌的抗腫瘤活性
1藥物治療方案為IV、Q2D×5。CPT-22在化合物2之前1小時給予。2在治療開始時腫瘤在300-500(中值約200mg)的范圍內(nèi)。3LCK＝殺死細(xì)胞的對數(shù)4PR＝部分反應(yīng)，腫瘤尺寸減小50％或更多。5CR＝完全反應(yīng)，定義為通過治療根除了所有容易檢測的腫瘤。當(dāng)腫瘤小于35mg時定義為不可檢測。完全反應(yīng)與治愈的不同之處在于可能存在顯微鏡可見的或潛在腫瘤，這些腫瘤可導(dǎo)致隨后腫瘤發(fā)展。
實(shí)施例6本發(fā)明化合物增強(qiáng)吉西他濱(GEMZAR)對人實(shí)體瘤的體內(nèi)抗腫瘤活性吉西他濱是一種具有細(xì)胞分裂時相特異性的抗代謝型抗增殖細(xì)胞毒性化療劑。該藥物主要?dú)⑺肋M(jìn)行DNA合成(S-期)的細(xì)胞，還將細(xì)胞進(jìn)程阻斷在G1/S期交界處。因此，吉西他濱對活躍分裂或增殖的細(xì)胞具有選擇性毒性。我們已經(jīng)證明，吉西他濱和化合物2組合(在給予化合物2之前1小時給予吉西他濱)對裸鼠晚期HT-29人結(jié)腸癌異種移植物產(chǎn)生增強(qiáng)的抗腫瘤活性(圖16A和16B)。值得注意的是，不僅在生長延遲方面觀察到增強(qiáng)的抗腫瘤活性，更重要的是，增強(qiáng)抗腫瘤活性還導(dǎo)致反應(yīng)率(腫瘤消退)顯著提高。因此，盡管單一藥物化合物2產(chǎn)生12.5％PR，單一藥物吉西他濱在24和6mg/kg/inj劑量分別產(chǎn)生0和25％的反應(yīng)率，但化合物2和吉西他濱的組合在所有受治療小鼠中產(chǎn)生100％PR(圖16B)。
實(shí)施例7紫杉醇與本發(fā)明化合物組合起協(xié)同殺死人結(jié)腸癌異種移植物的作用紫杉醇?xì)⑺肋M(jìn)入細(xì)胞分裂周期的有絲分裂期的腫瘤細(xì)胞。因此，紫杉醇對增殖細(xì)胞具有選擇性毒性(圖5)。我們證實(shí)，化合物2和紫杉醇組合對裸鼠人結(jié)腸癌模型HCT116產(chǎn)生協(xié)同抗腫瘤活性。圖17A和17B顯示，靜脈給予紫杉醇后(20mpk，每周4次)3小時靜脈給予40或80mpk的化合物2，相對于單獨(dú)的任一種藥物的抗腫瘤作用顯著增強(qiáng)；治療的獲益程度明顯超出如果兩種藥物僅僅發(fā)揮出累加的抗腫瘤活性所獲得的結(jié)果。這種協(xié)同作用不僅可見于腫瘤生長延遲，而且可見于臨床上更相關(guān)的腫瘤反應(yīng)檢測指標(biāo)，即部分和完全腫瘤消退(或反應(yīng)，分別為PR和CR)和腫瘤治愈。這在表6和圖17C中說明。表6 化合物2與紫杉醇組合化療對晚期HCT116人結(jié)腸癌的抗腫瘤活性
1藥物治療方案為IV、Q7D×4。紫杉醇在化合物2之前3小時給予。2治療開始時腫瘤在130-300(中值約200mg)的范圍內(nèi)。3LCK＝殺死細(xì)胞的對數(shù)4PR＝部分反應(yīng)，腫瘤尺寸減小50％或更多。5CR＝完全反應(yīng)，定義為通過治療根除所有容易檢測的腫瘤。當(dāng)腫瘤小于35mg時定義為不可檢測。完全反應(yīng)與治愈的不同之處在于可能存在顯微鏡可見的或潛在腫瘤，這些腫瘤可導(dǎo)致隨后的腫瘤發(fā)展。6治愈-根據(jù)尸體解剖確定在腫瘤移植后第77天沒有證據(jù)顯示有存活的腫瘤。
實(shí)施例8Her-1抑制劑(化合物8)與本發(fā)明化合物組合起體外殺死SAL-2癌細(xì)胞和體內(nèi)殺死A431鱗狀細(xì)胞癌的協(xié)同作用表皮生長因子(EGF或Her-1)受體涉及許多人上皮和鱗狀細(xì)胞癌。EGF與其腫瘤細(xì)胞受體結(jié)合導(dǎo)致蛋白酪氨酸激酶活性活化和酪氨酸自體磷酸化。這些事件又導(dǎo)致激活一連串的涉及癌細(xì)胞促有絲分裂(增殖)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的生化反應(yīng)。已經(jīng)證明，抑制敏感細(xì)胞EGF受體結(jié)合導(dǎo)致抑制細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期停滯和凋亡。因此，EGF或Her-1抑制劑選擇性針對增殖細(xì)胞，并通過干擾促有絲分裂信號轉(zhuǎn)導(dǎo)使癌細(xì)胞非增殖化。已知本發(fā)明化合物針對非增殖細(xì)胞的選擇性，我們提出了一個構(gòu)思我們可以利用Her-1抑制劑的這種特別的作用模式，通過使癌細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)榉窃鲋硲B(tài)，使它們對本發(fā)明的化合物2和類似化合物的促凋亡活性“敏化”。這個假說在體外和體內(nèi)實(shí)驗(yàn)條件下都被證實(shí)是正確的。對于體外，為了評價Her-1抑制劑和化合物2組合的治療功效，使用組成型過表達(dá)活化形式的Her-1受體的SAL-2腫瘤細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。為此使用Her-1抑制劑化合物8。作為參比，紫杉醇用作僅針對增殖細(xì)胞的藥物實(shí)例，并按照我們的假說在本實(shí)驗(yàn)條件下不能有效作用，即依序進(jìn)行藥物接觸Her-1抑制劑首先誘導(dǎo)細(xì)胞停滯，接著用化合物2或紫杉醇。數(shù)據(jù)揭示，當(dāng)化合物2和紫杉醇每種都作為單一藥物給予時，指數(shù)生長的SAL2癌細(xì)胞對化合物2和紫杉醇具有相對抗性，如圖18A-18G所示。正如我們的假說所預(yù)測，Her-1抑制劑′832后接紫杉醇的時序組合是拮抗性的(圖18C)。相反，Her-1抑制劑(化合物8)后接化合物2的時序組合是協(xié)同性的(圖18D)。
為證實(shí)Her-1抑制劑和本發(fā)明化合物組合的體內(nèi)作用，我們使用Her-1抑制劑Iressa組合化合物2對抗已知過表達(dá)Her-1受體的人鱗狀細(xì)胞癌A431。如圖18E和F所示，兩個單獨(dú)劑量水平的化合物2當(dāng)與Iressa組合使用時，相比于單獨(dú)給予每種藥物產(chǎn)生增強(qiáng)的抗腫瘤活性。應(yīng)當(dāng)注意的是，Iressa以日治療方案Q1D×11給藥，在化合物2治療開始前3天開始Iressa治療。以Q2D×5的程序給予化合物2。重要之處在于，使用紫杉醇的該時序藥物治療方案(即先用Iressa)效果很差(圖18G)。Iressa和紫杉醇組合產(chǎn)生的抗腫瘤作用不比單獨(dú)使用任一種單個藥物獲得的抗腫瘤作用好。
實(shí)施例9化合物2和Her-2直接抗體Herceptin組合對Her-2過表達(dá)人乳腺癌細(xì)胞的生長產(chǎn)生協(xié)同抑制作用HER-2(或c-erbB2)原癌基因編碼一種185kDa的跨膜受體蛋白，該蛋白在結(jié)構(gòu)上與表皮生長因子受體或Her-1相關(guān)。在25％-30％的原發(fā)性乳腺癌中可觀察到HER2蛋白過表達(dá)。Herceptin是一種選擇性結(jié)合Her-2蛋白胞外結(jié)構(gòu)域的重組DNA衍生的人源化單克隆抗體。已經(jīng)表明，Herceptm在體外測定和動物中都抑制過表達(dá)Her-2的人腫瘤細(xì)胞增殖。因此，按照本發(fā)明提出的構(gòu)思，Herceptm是這樣一類藥物的實(shí)例其作用是使癌細(xì)胞非增殖化，從而使腫瘤細(xì)胞對選擇性針對非增殖細(xì)胞的本發(fā)明化合物的抗癌作用敏化。因此，在本實(shí)施例中，在用化合物2治療前預(yù)處理過表達(dá)Her-2的人乳腺癌細(xì)胞系BT-474兩天，對癌細(xì)胞生長產(chǎn)生協(xié)同抗增殖作用(圖19)。
實(shí)施例10他莫昔芬與本發(fā)明化合物組合對雌激素依賴性人乳腺癌異種移植物起協(xié)同殺死癌細(xì)胞的作用大多數(shù)人乳腺癌的生長和腫瘤發(fā)育需要雌激素(雌激素依賴型)。已經(jīng)表明，用抗雌激素(如他莫昔芬)治療雌激素依賴性乳腺癌在體外和體內(nèi)都抑制腫瘤細(xì)胞增殖。為了評價本發(fā)明的組合抗癌藥物對人乳腺癌模型MCF-7異種移植物的功效，在裸鼠中培育該模型，并如本文所述治療。使用化合物2和他莫昔芬組合化療產(chǎn)生增強(qiáng)的抗腫瘤活性。實(shí)際上，在8只為MCF-7人乳腺癌異種移植物模型的小鼠中觀察到3只小鼠腫瘤癥狀緩解。圖20顯示，化合物2作為單一藥物給予對腫瘤生長僅產(chǎn)生非常一般的作用。單獨(dú)的他莫昔芬對該模型明顯更有效，大約和切除卵巢(estradial pellet removal)等效，但盡管如此，在用他莫昔芬治療或切除卵巢之后，所有的腫瘤都再生長，沒有觀察到治愈的情況。相反，40mpk他莫昔芬與化合物2(口服、100mpk、qdx10，兩個療程)組合，除了上述的治愈情況以外，還導(dǎo)致平均腫瘤重量急劇下降。
實(shí)施例11雄激素去除療法(手術(shù)或化學(xué)方法)通過誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞非增殖態(tài)(休眠)增強(qiáng)了雄激素依賴性人前列腺癌對化合物2的敏感性如前所述，可在各種生物條件下使細(xì)胞非增殖化或“休眠”。一種治療人前列腺癌的常規(guī)方案是化學(xué)閹割。盡管本發(fā)明不依靠任何特定的理論或機(jī)制，但認(rèn)為對于雄激素依賴性前列腺癌，去除激素通過去除對腫瘤增殖很關(guān)鍵的生長刺激而起促休眠藥物的作用。因此，以人前列腺癌異種移植物模型評價本發(fā)明抗癌藥物的功效。
對雄激素依賴性sc MDA-Pca-2b人前列腺癌異種移植物模型，用單獨(dú)的化合物2(400mpk、口服、q1d×10)治療對腫瘤生長具有一般作用，如圖21所示。去除雄激素療法(手術(shù)閹割)也降低腫瘤生長速率，但不引起消退。如數(shù)據(jù)所揭示(圖21)，閹割后3天給予化合物2導(dǎo)致腫瘤迅速消退。
另一個使雄激素依賴性前列腺癌細(xì)胞非增殖化的方法是使用化學(xué)抗雄激素藥物，例如Casodex。實(shí)際上，現(xiàn)在已經(jīng)知道，某些前列腺癌甚至在其雄激素非依賴性越來越增加以后仍保持對Casodex治療的敏感性，反之亦然。猜測這種現(xiàn)象是由于雄激素受體特異性突變所致，這種突變區(qū)別性影響雄激素和抗雄激素受體結(jié)合。為測試Casodex和化合物2組合的抗腫瘤功效，我們使用Casodex反應(yīng)型但雄激素非依賴性人前列腺癌模型Pca-2b-AI。如圖22所示，對于這種腫瘤模型，Casodex和化合物2組合的作用顯著好于單獨(dú)使用任一種藥物的作用，這兩種藥物都以其最大耐受劑量和方案給予(分別為化合物2為600mpk、口服、q1d×10；Casodex為150mpk、口服、q1d×4)。因此，根據(jù)定義，Casodex和化合物2組合產(chǎn)生的協(xié)同抗腫瘤活性超過單獨(dú)給予的每一種藥物。
實(shí)施例12化合物2組合cdk抑制劑(化合物9)以嚴(yán)格時序相關(guān)方式產(chǎn)生協(xié)同殺死細(xì)胞的作用(圖23)哺乳動物細(xì)胞的有絲分裂需要絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶家族(稱作依賴細(xì)胞周期蛋白的激酶(CDK))的協(xié)同活性。已經(jīng)表明，CDK(具體地說是CDK2)抑制劑抑制細(xì)胞增殖，并將細(xì)胞停滯在細(xì)胞周期的G1/S交界處。為測定CDK抑制劑(CDKI)和本發(fā)明化合物組合化療的作用，進(jìn)行了一個研究用1.5μM選擇性CDK2抑制劑處理指數(shù)增殖的A2780人卵巢癌細(xì)胞4小時的時間。化合物9(無效劑量)與逐漸增加濃度的化合物2的20小時治療組合。使用兩種治療次序(1)化合物9治療4小時，接著化合物2治療20小時；或(2)化合物2治療20小時，接著化合物9治療4小時。如圖23所示，當(dāng)首先給予CDKI時，觀察到協(xié)同殺死細(xì)胞，而首先給予化合物2時沒觀察到作用。這支持所述假說通過首先給予CDKI使細(xì)胞非增殖化，這又使細(xì)胞對化合物2的細(xì)胞毒性作用敏感。
實(shí)施例13Epothilone B轉(zhuǎn)變?yōu)镋pothilone F (i)將1.98g(3.90mmol)Epothilone B置于氬氣下，并溶解在60ml無水CH2Cl2中。向該溶液中加入0.720g mCPBA(4.17mmol、1.07當(dāng)量)。讓該混合物于25℃攪拌5.5小時。用60ml NaHCO3猝滅反應(yīng)混合物，并用3×75ml CHCl3提取。依次用100ml水、70ml 5％Na2SO3(水溶液)和70ml鹽水清洗有機(jī)相。有機(jī)相然后經(jīng)Na2SO4干燥。用硅膠對粗反應(yīng)產(chǎn)物進(jìn)行層析，用2％MeOH的CHCl3溶液洗脫，獲得0.976g N-氧化物(48％)，為白色松軟固體。
(ii)在氬氣下向可再密封的管中加入0.976g溶解在35ml無水CH2Cl2、2，6-二甲基吡啶(1.73ml、14.88mmol、8當(dāng)量)和(CF3CO)2O(1.84ml、13.02mmol、7當(dāng)量)中的N-氧化物(1.86mmol)。密封該管并于70℃加熱25分鐘。讓混合物冷卻，在氬氣流下去除溶劑，接著真空濃縮成幾毫升的暗黃色溶液。用25ml MeOH稀釋反應(yīng)物，并加入2.9ml 28％的NH4OH(水溶液)?；旌衔镉?5℃加熱20分鐘，然后冷卻至室溫。將粗產(chǎn)物于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器上濃縮，并使用硅膠層析，用4％MeOH的CHCl3溶液洗脫，獲得0.815g Epothilone F(84％)。
實(shí)施例14制備[1S-[1R*，3R*(E)，7R*，10S*，11R*，12R*，16S*]]-3-[2-[2-(疊氮甲基)-4-噻唑基]-1-甲基乙烯基]-7，11-二羥基-8，8，10，12，16-五甲基-4，17-二氧雜雙環(huán)[14.1.0]十七烷-5，9-二酮 于0℃、氬氣下向攪拌的以上實(shí)施例13的Epothilone F(957mg，1.83mmol)的20.0ml四氫呋喃溶液中加入0.47ml二苯基磷酰疊氮化物(604mg，2.19mmol，1.2當(dāng)量)。攪拌混合物約3分鐘。然后加入1，8-二氮雜雙環(huán)[5.4.0]十一碳-7-烯(0.27ml，278mg，1.83mmol，1當(dāng)量)，于0℃攪拌混合物。2小時后，將混合物溫至25℃，攪拌20小時。用150ml乙酸乙酯稀釋反應(yīng)混合物，用50ml H2O清洗。用35ml乙酸乙酯提取水層。合并的有機(jī)層經(jīng)Na2SO4干燥，并真空濃縮。使用硅膠對粗產(chǎn)物層析，用50％乙酸乙酯的己烷溶液洗脫，獲得913mg(91％)的21-疊氮基-epothilone B，為清澈無色油狀物。MS(ESI+)549.3(M+H)+；1H-NMR(300 MHz，CDCl3)；δ＝6.59(bs，17-H)，7.04(s，19-H)，4.63(s，21-H2)；HRMS(DCI)；C27H40N4O6S[M+]計(jì)算值549.2747，實(shí)測值549.2768。
實(shí)施例15制備[1S-[1R*，3R*(E)，7R*，10S*，11R*，12R*，16S*]]-3-[2-[2-(氨甲基)-4-噻唑基]-1-甲基乙烯基]-7，11-二羥基-8，8，10，12，16-五甲基-4，17-二氧雜雙環(huán)[14.1.0]十七烷-5，9-二酮在H2氣氛下將18.0mg的Lindler催化劑懸浮在500μl乙醇中并飽和。然后，加入溶解在乙醇-甲醇混合物中的15.9mg(29.0μmol)以上實(shí)施例14的21-疊氮基-epothilone B。于室溫?cái)嚢?0分鐘后，經(jīng)硅藻土過濾懸浮液，用乙酸乙酯清洗。去除有機(jī)相中的溶劑，并經(jīng)高真空干燥。通過PSC(溶劑CH2Cl2/甲醇90∶10)純化粗產(chǎn)物，由此獲得12.3mg(81％)的21-氨基-epothilone B和1mg(6％)的離析物。
1H-NMR(300 MHz，CDCl3)；δ＝6.58(bs，17-H)，7.05(s，19-H)，4.15(s，21-H2)；HRMS(DCI)；C27H42N2O6S[M+H+]計(jì)算值522.2764，實(shí)測值522.2772。
實(shí)施例16制備[1S-[1R*，3R*(E)，7R*，10S*，11R*，12R*，16S*]]-3-[2-[2-(氨甲基)-4-噻唑基]-1-甲基乙烯基]-7，11-二羥基-8，8，10，12，16-五甲基-4，17-二氧雜雙環(huán)[14.1.0]十七烷-5，9-二酮(替代方法) 在氬氣下向攪拌的21-疊氮基-epothilone B(實(shí)施例14)(1.070g，1.950mmol)的30.0ml四氫呋喃溶液中加入0.22ml三甲基磷化氫(0.163g，2.145mmol，1.1當(dāng)量)。然后加入H2O(5.5ml)，讓混合物于25℃攪拌。3小時后，疊氮化物完全耗盡，加入3ml 28％的NH4OH水溶液，以將磷酰亞胺完全轉(zhuǎn)變?yōu)榱柞０?。?5℃攪拌1小時后，真空下去除溶劑。使用硅膠對粗產(chǎn)物進(jìn)行層析，用1％Et3N、2.5％MeOH的CHCl3溶液洗脫，獲得924mg(91％)的21-氨基-epothiloneB，為白色固體。MS(ESI+)523.3(M+H)+。
實(shí)施例17制備(+)-順-4-叔丁基-1-叔丁氧羰基-3-三乙基甲硅烷氧基-氮雜環(huán)丁烷基-2-酮 于室溫向?qū)籽趸桨?18.4g，0.150mol)和無水Na2SO4(150g)的無水CH2Cl2(250ml)溶液中加入三甲基乙醛(20.3ml，1.25當(dāng)量)。2小時后，對其過濾，并用另外的無水CH2Cl2清洗固體。去除濾過液中的溶劑，將結(jié)晶的殘余物溶解在無水CH2Cl2(750ml)中，并置于氮?dú)夥障隆＜尤肴野?48.0ml，2.3當(dāng)量)，將反應(yīng)混合物冷卻至-78℃。滴加芐氧基乙酰氯(27.2ml，1.15當(dāng)量)，然后讓反應(yīng)物溫至室溫。24小時后，用0.5M HCl(2次)、飽和NaHCO3水溶液、鹽水清洗并干燥(Na2SO4)。去除溶劑，殘余物在硅膠柱上層析(洗脫梯度為含0-20％EtOAc的20％CH2Cl2的己烷溶液)，獲得為結(jié)晶固體的(±)-順-4-叔丁基-3-芐氧基-1-對甲氧基芐基-氮雜環(huán)丁烷酮(46.9g，92％)1H-NMR(CDCl3)；δ1.09(s，9H)，3.81(s，3H)，4.15(d，1H，J＝5.5Hz)，4.77(d，1H，J＝11.9Hz)，4.81(d，1H，J＝5.5Hz)，5.03(d，1H，J＝11.9Hz)，6.87-7.43(m，9 Hz)；LRMS(ESI)340([M+H]+)。在冰浴中于1小時之內(nèi)將硝酸高鈰銨(60.4g，3.6當(dāng)量)的900ml水溶液加入到充分?jǐn)嚢璧牡s環(huán)丁烷酮(10.38g，30.6mmol)的乙腈(600ml)溶液中。然后用EtOAc提取反應(yīng)物(兩次)，用飽和NaHCO3水溶液(兩次)、20％NaHSO3水溶液、飽和NaHCO3水溶液和鹽水清洗合并的有機(jī)提取物。干燥(Na2SO4)后去除溶劑，殘余物在硅膠柱上層析(洗脫梯度為含10-40％EtOAc的己烷)，獲得5.64g較純的(±)-順-3-芐氧基-4-叔丁基-氮雜環(huán)丁烷-2-酮1H-NMR(CDCl3)；δ1.04(s，9H)，3.51(d，1H，J＝5.2Hz)，4.71(m，2H)，4.96(d，1H，J＝11.9Hz)，6.10(brs，1H)，7.35(m，5H)。將該物質(zhì)(5.54g，23.8mmol)和2.5g 10％披鈀碳的無水EtOH(100ml)懸浮液氫化(34psiH2，Parr儀器)23小時。加入另外2g鈀催化劑，在50psi H2下再繼續(xù)氫化17小時。過濾去除催化劑，去除濾過液中的溶劑，獲得粗品(±)-順-3-羥基-4-(叔丁基)-氮雜環(huán)丁烷-2-酮1H-NMR(CDCl3+1滴D2O)δ1.05(s，9H)，3.48(d，1H，J＝5.0Hz)，4.98(d，1H，J＝5.0Hz)。將該物質(zhì)溶解在無水N，N-二甲基甲酰胺(40ml)中，加入咪唑(3.24g，2當(dāng)量)和三乙基甲硅烷基氯(4.0ml，1當(dāng)量)。10分鐘后，反應(yīng)物分配在水與EtOAc和己烷(1∶1)的混合物之間。用水(兩次)、鹽水清洗有機(jī)相，然后干燥(Na2SO4)。去除溶劑，殘余物在硅膠柱上層析(洗脫梯度為20-25％EtOAc的己烷溶液)，獲得(±)-順-4-叔丁基-3-三乙基甲硅烷氧基-氮雜環(huán)丁烷-2-酮(3.86g)1H-NMR(CDCl3)δ0.70(m，6H)，0.98(m，18H)，3.39(d，1H，J＝5.0Hz)，4.88(dd，1H，J＝2.1，5.0Hz)，6.08(brs，1H)。于室溫下攪拌此氮雜環(huán)丁烷酮(2.04g，7.92mmol)、二異丙基乙胺(1.66ml，1.2當(dāng)量)、二-叔丁基碳酸氫酯(1.90g，1.1當(dāng)量)和對二甲基氨基吡啶(194mg，0.2當(dāng)量)的無水CH2Cl2(24ml)溶液3小時。用二氯甲烷稀釋反應(yīng)混合物，用鹽水清洗并干燥(Na2SO4)。去除溶劑，然后用硅膠柱層析(洗脫梯度為0-20％EtOAc的己烷溶液)，獲得2.71g(96％)油狀物標(biāo)題化合物1H-NMR(CDCl3)δ0.70(m，6H)，1.00(m，9H)，1.09(s，9H)，1.53(s，9H)，3.90(d，1H，J＝6.5Hz)，4.93(d，1H，J＝6.5Hz)。
實(shí)施例18制備漿果赤霉素衍生物A 于室溫向10-脫乙酰基漿果赤霉素(47.4g，87mmol)的無水N，N-二甲基甲酰胺(DMF)(500ml)溶液中加入咪唑(47g，691mmol)。攪拌溶液10-15分鐘，直至觀察到溶液澄清。向反應(yīng)混合物中滴加二異丙基二氯硅烷(58ml，322mmol)。于室溫?cái)嚢璺磻?yīng)混合物16小時。向溶液中加入額外量的二異丙基二氯硅烷(6ml)，攪拌反應(yīng)混合物60分鐘。此時HPLC顯示反應(yīng)完成。向混合物中加入甲醇(36ml)，攪拌溶液60分鐘。終止反應(yīng)，用叔丁基甲基酮(TMBE)(500ml)和水(200ml)的混合物終止并稀釋反應(yīng)物。分離各層，有機(jī)相用鹽水(250ml)清洗、干燥(Na2SO4)并蒸發(fā)，獲得為白色無定形化合物的三甲硅烷化漿果赤霉素衍生物A(91g，＞100％得率)，其不需要進(jìn)一步純化即用于下一步。
LRMS(ESI)M+C50H84O13Si3計(jì)算值977；實(shí)測值977實(shí)施例19制備漿果赤霉素衍生物B 于0℃向漿果赤霉素衍生物A(90g，92mmol)的DMF(500ml)溶液中加入咪唑(22g，320mmol)。于0℃滴加二甲基氯硅烷(35ml，320mmol)。此時觀察到化合物沉淀。于0℃攪拌反應(yīng)混合物(淤漿)0.5小時。過濾固體，用冷DMF(3×150ml)清洗?？諝飧稍锖?，在TBME(700ml)中重溶解固體，用水(3×200ml)、鹽水(250ml)清洗溶液并干燥(Na2SO4)。通過短硅墊過濾溶液。真空去除溶劑，獲得B，收率77％(70g)。
LRMS(ESI)M+C50H90O13Si4計(jì)算值1035；實(shí)測值1035
實(shí)施例20制備漿果赤霉素衍生物C 于-34℃、10分鐘之內(nèi)，向攪拌的B(66.3g，64mmol)的甲苯(680ml)溶液中滴加入Red-Al(50ml，160mmol，65％(重量)雙(2-甲氧基乙氧基)氫化鋁鈉的甲苯溶液)。將反應(yīng)混合物溫至-25℃并攪拌1.5小時。向反應(yīng)混合物中滴加入甲醇(62ml)，保持內(nèi)部溫度在-20℃至-25℃之間。用TBME(500ml)稀釋溶液，接著加入1N NaOH溶液(60ml)和鹽水(60ml)。攪拌溶液30分鐘。向混合物中加入硅藻土(12g)，攪拌10分鐘，通過硅藻土墊過濾。分離各層。用水、鹽水清洗有機(jī)層，干燥(Na2SO4)。接著，讓溶液通過短硅墊，然后去除溶劑。獲得為白色固體的化合物，收率97％(62g)。
LRMS(ESI)M+C50H88O12Si4計(jì)算值993；實(shí)測值993實(shí)施例21制備漿果赤霉素衍生物D 在氬氣氛下，于-60℃向漿果赤霉素衍生物C(62g，62mmol)的無水四氫呋喃(THF)(600ml)溶液中滴加入雙(三甲基甲硅烷基)酰胺鋰(125ml，125mmol，1M的THF溶液)。攪拌溶液15分鐘，接著加入氯甲酸甲酯(9ml，116mmol)；溶液內(nèi)部溫度保持在-60℃。將反應(yīng)物緩慢溫至0℃，攪拌混合物3小時。反應(yīng)結(jié)束后，加入飽和氯化銨溶液(300ml)。用TBME(100ml)提取反應(yīng)混合物。用飽和氯化銨溶液(200ml)、水(200ml)、鹽水(200ml)清洗有機(jī)層，干燥(Na2SO4)并蒸發(fā)，獲得為油狀物的D(67g，得率＞100％)。粗產(chǎn)物不需要進(jìn)一步純化即用于下一步。
LRMS(ESI)M+C52H90O14Si4計(jì)算值1051；實(shí)測值1051。
實(shí)施例22制備漿果赤霉素衍生物E 于室溫向漿果赤霉素衍生物D(62g，59mmol)的無水THF(260ml)溶液中加入三乙胺-氫氟酸復(fù)合物(56ml，344mmol)。攪拌反應(yīng)物3小時。用乙酸乙酯(350ml)稀釋反應(yīng)混合物，用水(200ml)、鹽水(200ml)清洗，干燥(Na2SO4)并蒸發(fā)，獲得E(43g，粗品得率＞100％)。使粗品化合物在熱乙酸乙酯(350ml)和己烷(50ml)混合物中重新成漿(resluring)，獲得純E，收率90％。
LRMS(ESI)M+C29H36O11計(jì)算值560；實(shí)測值560
實(shí)施例23制備漿果赤霉素衍生物F 于-65℃、氬氣下，向攪拌的漿果赤霉素衍生物E(32g，57mmol)和咪唑(11.7g，172mmol)的DMF(220ml)溶液中加入二異丙基二氯硅烷(26.8ml)。將反應(yīng)混合物的溫度保持在-60℃，攪拌混合物2小時。反應(yīng)結(jié)束(HPLC)后，加入咪唑的甲醇溶液(11.7g咪唑溶解在35ml甲醇中)，于0℃攪拌溶液30分鐘。用TBME(500ml)提取混合物。用水(4×150ml)清洗有機(jī)相，干燥(Na2SO4)并蒸發(fā)，獲得粗品F(45g)。將粗品再溶解在乙腈(150ml)中，用己烷(3×100ml)清洗溶液。去除乙腈后獲得為白色固體的純F(34g，收率84％)。
LRMS(ESI)M+C36H52O12Si計(jì)算值704；實(shí)測值704實(shí)施例24制備4-脫乙酰基-7-[雙異丙基(甲氧基)]甲硅烷氧基-4-甲氧羰基-漿果赤霉素 于-43℃向漿果赤霉素衍生物F(33.2g，47mmol)的DMF(200ml)溶液中加入雙(三甲基甲硅烷基)酰胺鋰(61.2ml，61.2mmol，1M的THF溶液)。攪拌反應(yīng)混合物15分鐘，接著加入乙酸酐(5.8ml，63mmol)。于-40℃攪拌反應(yīng)混合物30分鐘。加入乙酸(3.6ml)并去除冷卻浴。用TBME(300ml)提取反應(yīng)混合物。分離有機(jī)層，用水(3×150ml)、鹽水(150ml)清洗，干燥(Na2SO4)并蒸發(fā)，獲得粗產(chǎn)物。通過由THF庚烷(1∶6)的混合物結(jié)晶，對該化合物進(jìn)行純化。投料40g獲得21g結(jié)晶標(biāo)題產(chǎn)物(60％收率)。
LRMS(ESI)M+C38H54O13Si計(jì)算值746；實(shí)測值746實(shí)施例25制備3′-叔丁基-3′-N-叔丁氧羰基-4-脫乙?；?3′-脫苯基-3′-N-脫苯甲?；?4-O-甲氧羰基-紫杉醇 在N2下將(±)-順-4-叔丁基-1-(叔丁氧羰基)-3-三乙基甲硅烷氧基-氮雜環(huán)丁烷-2-酮(2.71g，5當(dāng)量)和4-脫乙?；?7-[雙異丙基(甲氧基)]甲硅烷氧基-4-甲氧羰基-漿果赤霉素(1.13g，1.52mmol)的無水THF(100ml)溶液冷卻至-50℃，加入雙(三甲基甲硅烷基)酰胺鋰的溶液(1.97ml，1.3當(dāng)量，1.0M的THF溶液)。5分鐘后，將溶液轉(zhuǎn)移至浴器，保持在-35℃至-30℃20小時，然后保持于-25℃24小時。然后用飽和NH4Cl水溶液猝滅反應(yīng)，用EtOAc和己烷(1∶1)的混合物提取。用鹽水清洗有機(jī)提取物并干燥(Na2SO4)。去除溶劑，殘余物層析(在6mm硅膠板上徑向?qū)游觯幌疵撎荻葹?-20％EtOAc的己烷溶液)，獲得1.55g 3’-叔丁基-3′-N-叔丁氧羰基-7-[雙異丙基(甲氧基)]甲硅烷氧基-4-脫乙?；?3′-脫苯基-3′-N-脫苯甲?；?4-O-甲氧羰基-2′-三乙基甲硅烷氧基紫杉醇，為2′，3′-非對映體的混合物。將該混合物溶解在無水THF(60ml)中，加入三乙胺三氫氟酸鹽(0.92ml，4當(dāng)量)。于室溫22小時后，用飽和NaHCO3水溶液中和反應(yīng)混合物，然后用EtOAc提取。用鹽水清洗有機(jī)提取物，干燥(Na2SO4)，去除溶劑。殘余物層析(徑向?qū)游觯?mm硅膠板；洗脫梯度為10-50％EtOAc的己烷溶液)，獲得(按洗脫順序)；210mg(18％)的2′S，3′R-3′-叔丁基-3′-N-叔丁氧羰基-4-脫乙酰基-3′-脫苯基-3′-N-脫苯甲酰基-4-O-甲氧羰基-紫杉醇{1HNMR(CDCl3)δ1.04(s，9H)，1.13(s，3H)，1.20(s，3H)，1.37(s，9H)，1.65(s，1H)，1.66(s，3H)，1.84-1.93(m，2H)，2.17(s，3H)，2.25(s，3H)，2.55(m，3H)，3.00(d，1H，J＝6.5Hz)，3.74(d，1H，J＝10.8Hz)，3.79(d，1H，J＝6.9Hz)，3.92(s，3H)，4.16(d，1H，J＝8.5Hz)，4.33(d，1H，J＝8.5Hz)，4.42(m，1H)，4.54(d，1H，J＝6.5Hz)，4.87(d，1H，J＝10.6Hz)，5.01(d，1H，J＝7.7Hz)，5.68(d，1H，J＝7.0Hz)，5.76(m，1H)，6.32(s，1H)，7.44-8.05(m，5H)；LRMS(ESI)846[(M+H)+]}和668mg(56％)的標(biāo)題化合物{1HNMR(CDCl3)δ1.07(s，9H)，1.14(s，3H)，1.24(s，3H)，1.33(s，9H)，1.66(s，4H)，2.23(s，3H)，2.38-2.59(m，4H)，3.11(d，1H，J＝5.8Hz)，3.77(d，1H，J＝11.1Hz)，3.82(d，1H，J＝7.0Hz)，3.96(s，3H)，4.20(d，1H，J＝8.6Hz)，4.33(d，1H，J＝8.6Hz)，4.39(m，1H)，4.53(d，1H，J＝5.4Hz)，4.88(d，1H，J＝10.6Hz)，4.98(d，1H，J＝7.9Hz)，5.69(d，1H，J＝7.1Hz)，6.03(m，1H)，6.28(s，1H)，7.40-8.11(m，5H)；LRMS(ESI)846[(M+H)+]}。
本發(fā)明不限于以上具體描述的實(shí)施方案，而是可以在不背離所附權(quán)利要求書范圍的情況下對本發(fā)明進(jìn)行變更和修改。
權(quán)利要求
1.一種治療癌癥的方法，該方法包括給予需要哺乳動物協(xié)同治療有效量的以下物質(zhì)(1)至少一種選自抗增殖細(xì)胞毒性劑和抗增殖細(xì)胞抑制劑的藥物，以及(2)下式I化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽 其中R1是Cl、Br、CN、任選取代的苯基或任選取代的2-、3-或4-吡啶基；R2是任選取代的低級烷基或任選取代的芳烷基；R3和R5各自獨(dú)立為任選取代的低級烷基、任選取代的芳基或任選取代的雜環(huán)基；R4為氫或低級烷基；Z1為CO、SO2、CO2或SO2N(R5)-；而n為1或2；前提是所述細(xì)胞毒性劑和/或細(xì)胞抑制劑與所述式I化合物同時給予或在式I化合物之前給予。
2.按照權(quán)利要求1的方法，其中所述細(xì)胞毒性劑在所述式I化合物之前給予。
3.按照權(quán)利要求1的方法，其中所述細(xì)胞毒性劑包括放療。
4.按照權(quán)利要求1的方法，其中所述細(xì)胞抑制劑在所述式I化合物之前給予。
5.按照權(quán)利要求1的方法，該方法用于協(xié)同治療癌性實(shí)體瘤。
6.按照權(quán)利要求1的方法，其中所述細(xì)胞毒性劑選自微管穩(wěn)定劑、微管破壞劑、烷化劑、抗代謝劑、表鬼臼毒素、抗腫瘤酶、拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑、丙卡巴肼、米托蒽醌和鉑配位復(fù)合物。
7.按照權(quán)利要求1的方法，其中所述細(xì)胞毒性劑選自蒽環(huán)藥物、長春花藥物、絲裂霉素、博來霉素、細(xì)胞毒性核苷、紫杉烷、epothilone、discodermolide、蝶啶藥物、diynene、芳香酶抑制劑和鬼臼毒素。
8.按照權(quán)利要求1的方法，其中所述細(xì)胞毒性劑選自紫杉醇、docetaxel、7-O-甲基硫代甲基-紫杉醇、4-脫乙?；?4-碳酸二甲酯紫杉醇、3′-叔丁基-3′-N-叔丁氧羰基-4-脫乙?；?3′-脫苯基-3′-N-脫苯甲?；?4-O-甲氧羰基-紫杉醇、C-4甲基碳酸酯紫杉醇、epothilone A、epothiloneB、epothilone C、epothilone D、脫氧epothilone A、脫氧epothilone B、[1S-[1R*，3R*(E)，7R*，10S*，11R*，12R*，16S*]]-7，11-二羥基-8，8，10，12，16-五甲基-3-[1-甲基-2-(2-甲基-4-噻唑基)乙烯基]-4-氮雜-17-氧雜雙環(huán)[14.1.0]十七烷-5，9-二酮、[1 S-[1R*，3R*(E)，7R*，10S*，11R*，12R*，16S*]]-3-[2-[2-(氨甲基)-4-噻唑基]-1-甲基乙烯基]-7，11-二羥基-8，8，10，12，16-五甲基-4，17-二氧雜雙環(huán)[14.1.0]十七烷-5，9-二酮、阿霉素、洋紅霉素、道諾紅菌素、氨蝶呤、氨甲蝶呤、甲蝶呤、二氯-氨甲蝶呤、絲裂霉素C、紫菜霉素、5-氟尿嘧啶、6-巰基嘌呤、吉西他濱、阿糖胞苷、鬼臼毒素、依托泊苷、磷酸依托泊苷、替尼泊苷、苯丙氨酸氮芥、長春花堿、長春新堿、異長春堿、長春地辛、環(huán)氧長春堿、雌二醇氮芥、順鉑、卡鉑、環(huán)磷酰胺、博來霉素、異環(huán)磷酰胺、苯丙氨酸氮芥、六甲三聚氰胺、塞替派、阿糖胞苷、idatrexate、三甲曲沙、達(dá)卡巴嗪、L-天冬酰胺酶、喜樹堿、CPT-11、托泊替堪、ara-C、比卡魯胺、氟他胺、亮丙瑞林、吡啶苯并吲哚、干擾素和白介素。
9.按照權(quán)利要求1的方法，其中所述細(xì)胞毒性劑選自紫杉烷和epothilone。
10.按照權(quán)利要求1的方法，其中所述細(xì)胞毒性劑選自紫杉醇、docetaxel、7-O-甲基硫代甲基-紫杉醇、4-脫乙?；?4-甲基碳酸酯紫杉醇、3′-叔丁基-3′-N-叔丁氧羰基-4-脫乙?；?3′-脫苯基-3′-N-脫苯甲?；?4-O-甲氧羰基-紫杉醇、C-4甲基碳酸酯紫杉醇、epothilone A、epothiloneB、epothilone C、epothilone D、脫氧epothilone A、脫氧epothilone B、[1S-[1R*，3R*(E)，7R*，10S*，11R*，12R*，16S*]]-7，11-二羥基-8，8，10，12，16-五甲基-3-[1-甲基-2-(2-甲基-4-噻唑基)乙烯基]-4-氮雜-17-氧雜雙環(huán)[14.1.0]十七烷-5，9-二酮、[1S-[1R*，3R*(E)，7R*，10S*，11R*，12R*，16S*]]-3-[2-[2-(氨甲基)-4-噻唑基]-1-甲基乙烯基]-7，11-二羥基-8，8，10，12，16-五甲基-4，17-二氧雜雙環(huán)[14.1.0]十七烷-5，9-二酮。
11.按照權(quán)利要求1的方法，其中R1為Br或CN；R2為任選取代的芐基；R3為任選取代的低級烷基、任選取代的苯基、任選取代的2-噻吩基或任選取代的1-哌啶基；R4為氫或甲基；Z1為CO、SO2或SO2N(R5)-；R5為任選取代的低級烷基或任選取代的苯基；而n為1。
12.按照權(quán)利要求1的方法，其中R1為CN；R2為任選取代的芐基；R3為任選取代的低級烷基、任選取代的苯基、任選取代的2-噻吩基或任選取代的1-哌啶基；R4為氫或甲基；Z為CO或SO2；而n為1。
13.按照權(quán)利要求1的方法，其中R1為CN；R2為芐基；R3為正丙基、正丁基、3-甲氧基丙基、2-噻吩基、5-溴-2-噻吩基、苯基、4-甲氧基苯基或1-哌啶基；R4為氫；Z為SO2；而n為1。
14.按照權(quán)利要求1的方法，其中所述式I化合物選自以下物質(zhì)及其藥學(xué)上可接受的鹽(R)-2，3，4，5-四氫-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-4-(2-噻吩基磺酰基)-1H-1，4-苯并二氮雜-7-腈；(R)-7-氰基-2，3，4，5-四氫-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-4-(1-氧代丁基)-3-(苯基甲基)-1H-1，4-苯并二氮雜?。?R)-4-[(5-溴-2-噻吩基)磺?；鵠-7-氰基-2，3，4，5-四氫-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-1H-1，4-苯并二氮雜?。?R)-7-氰基-2，3，4，5-四氫-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-4-[(4-甲氧基苯基)磺?；鵠-3-(苯基甲基)-1H-1，4-苯并二氮雜；(R)-7-氰基-2，3，4，5-四氫-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-4-(苯磺?；?-1H-1，4-苯并二氮雜?。?R)-7-氰基-2，3，4，5-四氫-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-4-(丙磺?；?-1H-1，4-苯并二氮雜?。?R)-4-(丁磺?；?-7-氰基-2，3，4，5-四氫-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-1H-1，4-苯并二氮雜??；(R)-7-氰基-2，3，4，5-四氫-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-4-(1-哌啶基磺?；?-1H-1，4-苯并二氮雜?。?R)-4-(3-甲氧基丙磺?；?-7-氰基-2，3，4，5-四氫-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-1H-1，4-苯并二氮雜。
15.按照權(quán)利要求14的方法，其中所述藥學(xué)上可接受的鹽選自鹽酸鹽、甲磺酸鹽和三氟乙酸鹽。
16.按照權(quán)利要求10的方法，其中所述式I化合物為(R)-2，3，4，5-四氫-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-4-(2-噻吩基磺?；?-1H-1，4-苯并二氮雜-7-腈或其藥學(xué)上可接受的鹽。
17.按照權(quán)利要求1的方法，其中所述細(xì)胞毒性劑為紫杉醇，而所述式I化合物為(R)-2，3，4，5-四氫-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-4-(2-噻吩基磺酰基)-1H-1，4-苯并二氮雜-7-腈或其藥學(xué)上可接受的鹽。
18.按照權(quán)利要求1的方法，其中所述細(xì)胞毒性劑為[1S-[1R*，3R*(E)，7R*，10S*，11R*，12R*，16S*]]-7，11-二羥基-8，8，10，12，16-五甲基-3-[1-甲基-2-(2-甲基-4-噻唑基)乙烯基]-4-氮雜-17-氧雜雙環(huán)[14.1.0]十七烷-5，9-二酮，而所述式I化合物為(R)-2，3，4，5-四氫-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-4-(2-噻吩基磺?；?-1H-1，4-苯并二氮雜-7-腈或其藥學(xué)上可接受的鹽。
19.按照權(quán)利要求1的方法，其中所述哺乳動物為人。
20.按照權(quán)利要求1的方法，其中所述細(xì)胞抑制劑選自手術(shù)閹割、化學(xué)閹割、他莫昔芬、4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-甲氧基-6-(3-(4-嗎啉基)丙氧基)喹唑啉、4-(3-乙炔基苯氨基)-6，7-二(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉、激素、類固醇、類固醇合成類似物、17α-炔雌醇、己烯雌酚、睪丸素、強(qiáng)的松、氟甲睪酮、丙酸屈他雄酮、睪內(nèi)酯、醋酸甲地孕酮、甲基強(qiáng)的松龍、甲基睪丸素、強(qiáng)的松龍、去炎松、氯烯雌醚、羥孕酮、氨基乙哌啶酮、雌二醇氮芥、醋酸甲羥孕酮、亮丙瑞林、氟他胺、托瑞米芬、醋酸性瑞林、抗血管生成劑、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑、VEGF抑制劑、ZD6474、SU6668、抗Her-2抗體、EGFR抑制劑、EKB-569、Imclone抗體C225、src抑制劑、比卡魯胺、表皮生長因子抑制劑、Her-2抑制劑、MEK-1激酶抑制劑、MAPK激酶抑制劑、PI3抑制劑、PDGF抑制劑、combretastatm、MET激酶抑制劑、MAP激酶抑制劑、非受體和受體酪氨酸激酶抑制劑、整聯(lián)蛋白信號轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制劑和胰島素樣生長因子受體抑制劑。
21.按照權(quán)利要求1的方法，其中所述細(xì)胞抑制劑選自比卡魯胺、他莫昔芬、4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-甲氧基-6-(3-(4-嗎啉基)丙氧基)喹唑啉、Her-1抑制劑和trastuzumab。
22.一種用于協(xié)同治療癌癥的藥用組合物，其包括細(xì)胞抑制劑和細(xì)胞毒性劑中的一種或兩種，并且還包括權(quán)利要求1所述的式I化合物以及藥學(xué)上可接受的載體。
23.按照權(quán)利要求22的組合物，它用于協(xié)同治療癌性實(shí)體瘤。
24.按照權(quán)利要求22的組合物，其中所述細(xì)胞毒性劑是一種或多種抗腫瘤劑，所述抗腫瘤劑選自微管穩(wěn)定劑、微管破壞劑、烷化劑、抗代謝劑、表鬼臼毒素、抗腫瘤酶、拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑、丙卡巴肼、米托蒽醌和鉑配位復(fù)合物。
25.按照權(quán)利要求22的組合物，其中所述細(xì)胞毒性劑是一種或多種抗腫瘤劑，所述抗腫瘤劑選自蒽環(huán)藥物、長春花藥物、絲裂霉素、博來霉素、細(xì)胞毒性核苷、紫杉烷、epothilone、discodermolide、蝶啶藥物、diynene、芳香酶抑制劑和鬼臼毒素。
26.按照權(quán)利要求22的組合物，其中所述細(xì)胞毒性劑是一種或多種抗腫瘤劑，所述抗腫瘤劑選自紫杉醇、docetaxel、7-O-甲基硫代甲基紫杉醇、4-脫乙酰基-4-甲基碳酸酯紫杉醇、3′-叔丁基-3′-N-叔丁氧羰基-4-脫乙?；?3′-脫苯基-3′-N-脫苯甲?；?4-O-甲氧羰基-紫杉醇、C-4甲基碳酸酯紫杉醇、epothilone A、epothilone B、epothilone C、epothiloneD、脫氧epothilone A、脫氧epothilone B、[1S-[1R*，3R*(E)，7R*，10S*，11R*，12R*，16S*]]-7，11-二羥基-8，8，10，12，16-五甲基-3-[1-甲基-2-(2-甲基-4-噻唑基)乙烯基]-4-氮雜-17-氧雜雙環(huán)[14.1.0]十七烷-5，9-二酮、[1S-[1R*，3R*(E)，7R*，10S*，11R*，12R*，16S*]]-3-[2-[2-(氨甲基)-4-噻唑基]-1-甲基乙烯基]-7，11-二羥基-8，8，10，12，16-五甲基-4，17-二氧雜雙環(huán)[14.1.0]十七烷-5，9-二酮、阿霉素、洋紅霉素、道諾紅菌素、氨蝶呤、氨甲蝶呤、甲蝶呤、二氯-氨甲蝶呤、絲裂霉素C、紫菜霉素、5-氟尿嘧啶、6-巰基嘌呤、吉西他濱、阿糖胞苷、鬼臼毒素、依托泊苷、磷酸依托泊苷、替尼泊苷、苯丙氨酸氮芥、長春花堿、長春新堿、異長春堿、長春地辛、環(huán)氧長春堿、雌二醇氮芥、順鉑、卡鉑、環(huán)磷酰胺、博來霉素、異環(huán)磷酰胺、苯丙氨酸氮芥、六甲三聚氰胺、塞替派、阿糖胞苷、idatrexate、三甲曲沙、達(dá)卡巴嗪、L-天冬酰胺酶、喜樹堿、CPT-11、托泊替堪、ara-C、比卡魯胺、氟他胺、亮丙瑞林、吡啶苯并吲哚、干擾素和白介素。
27.按照權(quán)利要求22的組合物，其中所述細(xì)胞毒性劑是一種或多種選自紫杉烷和epothilone的細(xì)胞毒性劑。
28.按照權(quán)利要求22的組合物，其中所述細(xì)胞毒性劑是一種或多種抗腫瘤劑，所述抗腫瘤劑選自紫杉醇、docetaxel、7-O-甲基硫代甲基紫杉醇、4-脫乙?；?4-甲基碳酸酯紫杉醇、3′-叔丁基-3′-N-叔丁氧羰基-4-脫乙?；?3′-脫苯基-3′-N-脫苯甲?；?4-O-甲氧羰基-紫杉醇、C-4甲基碳酸酯紫杉醇、epothilone A、epothilone B、epothilone C、epothiloneD、脫氧epothilone A、脫氧epothilone B、[1S-[1R*，3R*(E)，7R*，10S*，11R*，12R*，16S*]]-7，11-二羥基-8，8，10，12，16-五甲基-3-[1-甲基-2-(2-甲基-4-噻唑基)乙烯基]-4-氮雜-17-氧雜雙環(huán)[14.1.0]十七烷-5，9-二酮和[1S-[1R*，3R*(E)，7R*，10S*，11R*，12R*，16S*]]-3-[2-[2-(氨甲基)-4-噻唑基]-1-甲基乙烯基]-7，11-二羥基-8，8，10，12，16-五甲基-4，17-二氧雜雙環(huán)[14.1.0]十七烷-5，9-二酮。
29.按照權(quán)利要求22的組合物，其中所述細(xì)胞抑制劑選自手術(shù)閹割、化學(xué)閹割、他莫昔芬、4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-甲氧基-6-(3-(4-嗎啉基)丙氧基)喹唑啉、4-(3-乙炔基苯氨基)-6，7-二(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉)、激素、類固醇、類固醇合成類似物、17α-炔雌醇、己烯雌酚、睪丸素、強(qiáng)的松、氟甲睪酮、丙酸屈他雄酮、睪內(nèi)酯、醋酸甲地孕酮、甲基強(qiáng)的松龍、甲基睪丸素、強(qiáng)的松龍、去炎松、氯烯雌醚、羥孕酮、氨基乙哌啶酮、雌二醇氮芥、醋酸甲羥孕酮、亮丙瑞林、氟他胺、托瑞米芬、醋酸性瑞林、抗血管生成劑、基質(zhì)金屬蛋白酶抑制劑、VEGF抑制劑、ZD6474、SU6668、抗Her-2抗體、EGFR抑制劑、EKB-569、Imclone抗體C225、src抑制劑、比卡魯胺、表皮生長因子抑制劑、Her-2抑制劑、MEK-1激酶抑制劑、MAPK激酶抑制劑、PI3抑制劑、PDGF抑制劑、combretastatin、MET激酶抑制劑、MAP激酶抑制劑、非受體和受體酪氨酸激酶抑制劑、整聯(lián)蛋白信號轉(zhuǎn)導(dǎo)抑制劑和胰島素樣生長因子受體抑制劑。
30.按照權(quán)利要求22的組合物，其中所述細(xì)胞抑制劑選自比卡魯胺、他莫昔芬、4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-甲氧基-6-(3-(4-嗎啉基)丙氧基)喹唑啉、Her-1抑制劑和trastuzumab。
31.按照權(quán)利要求22的組合物，其中R1為Br或CN；R2為任選取代的芐基；R3為任選取代的低級烷基、任選取代的苯基、任選取代的2-噻吩基或任選取代的1-哌啶基；R4為氫或甲基；Z1為CO、SO2或SO2N(R5)-；R5為任選取代的低級烷基或任選取代的苯基；而n為1。
32.按照權(quán)利要求22的組合物，其中R1為CN；R2為任選取代的芐基；R3為任選取代的低級烷基、任選取代的苯基、任選取代的2-噻吩基或任選取代的1-哌啶基；R4為氫或甲基；Z為CO或SO2；而n為1。
33.按照權(quán)利要求22的組合物，其中R1為CN；R2為芐基；R3為正丙基、正丁基、3-甲氧基丙基、2-噻吩基、5-溴-2-噻吩基、苯基、4-甲氧基苯基或1-哌啶基；R4為氫；Z為SO2；而n為1。
34.按照權(quán)利要求22的組合物，其中所述式I化合物選自以下物質(zhì)及其藥學(xué)上可接受的鹽(R)-2，3，4，5-四氫-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-4-(2-噻吩基磺酰基)-1H-1，4-苯并二氮雜-7-腈；(R)-7-氰基-2，3，4，5-四氫-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-4-(1-氧代丁基)-3-(苯基甲基)-1H-1，4-苯并二氮雜??；(R)-4-[(5-溴-2-噻吩基)磺酰基]-7-氰基-2，3，4，5-四氫-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-1H-1，4-苯并二氮雜?。?R)-7-氰基-2，3，4，5-四氫-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-4-[(4-甲氧基苯基)磺?；鵠-3-(苯基甲基)-1H-1，4-苯并二氮雜?。?R)-7-氰基-2，3，4，5-四氫-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-4-(苯磺?；?-1H-1，4-苯并二氮雜??；(R)-7-氰基-2，3，4，5-四氫-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-4-(丙磺?；?-1H-1，4-苯并二氮雜??；(R)-4-(丁磺?；?-7-氰基-2，3，4，5-四氫-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-1H-1，4-苯并二氮雜??；(R)-7-氰基-2，3，4，5-四氫-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-4-(1-哌啶基磺?；?-1H-1，4-苯并二氮雜??；(R)-4-(3-甲氧基丙磺?；?-7-氰基-2，3，4，5-四氫-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-1H-1，4-苯并二氮雜。
35.按照權(quán)利要求34的組合物，其中所述藥學(xué)上可接受的鹽選自鹽酸鹽、甲磺酸鹽和三氟乙酸鹽。
36.按照權(quán)利要求34的組合物，其中所述式I化合物為(R)-2，3，4，5-四氫-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-4-(2-噻吩基磺酰基)-1H-1，4-苯并二氮雜-7-腈或其藥學(xué)上可接受的鹽。
37.按照權(quán)利要求22的組合物，其中所述細(xì)胞毒性劑為紫杉醇，而所述式I化合物為(R)-2，3，4，5-四氫-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-4-(2-噻吩基磺酰基)-1H-1，4-苯并二氮雜-7-腈或其藥學(xué)上可接受的鹽。
38.按照權(quán)利要求22的組合物，其中所述細(xì)胞毒性劑為[1S-[1R*，3R*(E)，7R*，10S*，11R*，12R*，16S*]]-7，11-二羥基-8，8，10，12，16-五甲基-3-[1-甲基-2-(2-甲基-4-噻唑基)乙烯基]-4-氮雜-17-氧雜雙環(huán)[14.1.0]十七烷-5，9-二酮，而所述式I化合物為(R)-2，3，4，5-四氫-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-4-(2-噻吩基磺酰基)-1H-1，4-苯并二氮雜-7-腈或其藥學(xué)上可接受的鹽。
39.按照權(quán)利要求1的方法，其中所述癌癥為前列腺癌、乳腺癌、非小細(xì)胞肺癌、轉(zhuǎn)移性膀胱癌、結(jié)腸直腸癌或胰腺癌。
40.按照權(quán)利要求22的組合物，其中所述細(xì)胞毒性劑是一種或多種細(xì)胞毒性劑，所述細(xì)胞毒性劑選自紫杉醇、順鉑、卡鉑、吉西他濱、CPT-11、甲酰四氫葉酸、替加氟、尿嘧啶、5-氟尿嘧啶、4-(3-乙炔基苯氨基)-6，7-二(2-甲氧基乙氧基)喹唑啉和4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-甲氧基-6-(3-(4-嗎啉基)丙氧基)喹唑啉。
41.按照權(quán)利要求1的方法，其中所述至少一種細(xì)胞毒性劑為紫杉醇，其在給予(R)-2，3，4，5-四氫-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-4-(2-噻吩基磺酰基)-1H-1，4-苯并二氮雜-7-腈或其藥學(xué)上可接受的鹽之前給予。
42.按照權(quán)利要求1的方法，其中所述至少一種細(xì)胞毒性劑為[1S-[1R*，3R*(E)，7R*，10S*，11R*，12R*，16S*]]-7，11-二羥基-8，8，10，12，16-五甲基-3-[1-甲基-2-(2-甲基-4-噻唑基)乙烯基]-4-氮雜-17-氧雜雙環(huán)[14.1.0]十七烷-5，9-二酮，其在給予(R)-2，3，4，5-四氫-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-4-(2-噻吩基磺?；?-1H-1，4-苯并二氮雜-7-腈或其藥學(xué)上可接受的鹽之前給予。
43.按照權(quán)利要求1的方法，其中所述至少一種細(xì)胞毒性劑為CPT-11，其在給予(R)-2，3，4，5-四氫-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-4-(2-噻吩基磺?；?-1H-1，4-苯并二氮雜-7-腈或其藥學(xué)上可接受的鹽之前給予。
44.按照權(quán)利要求1的方法，其中所述至少一種細(xì)胞毒性劑為吉西他濱或其藥學(xué)上可接受的鹽，其在給予(R)-2，3，4，5-四氫-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-4-(2-噻吩基磺?；?-1H-1，4-苯并二氮雜-7-腈或其藥學(xué)上可接受的鹽之前給予。
45.按照權(quán)利要求1的方法，其中所述至少一種細(xì)胞抑制劑為4-(3-溴苯基氨基)-6，7-二(甲氧基)喹唑啉，其在給予(R)-2，3，4，5-四氫-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-4-(2-噻吩基磺酰基)-1H-1，4-苯并二氮雜-7-腈或其藥學(xué)上可接受的鹽之前給予。
46.按照權(quán)利要求1的方法，其中所述至少一種細(xì)胞抑制劑為trastuzumab，其在給予(R)-2，3，4，5-四氫-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-4-(2-噻吩基磺?；?-1H-1，4-苯并二氮雜-7-腈或其藥學(xué)上可接受的鹽之前給予。
47.按照權(quán)利要求1的方法，其中所述至少一種細(xì)胞抑制劑為4-(3-氯-4-氟苯氨基)-7-甲氧基-6-(3-(4-嗎啉基)丙氧基)喹唑啉，其在給予(R)-2，3，4，5-四氫-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-4-(2-噻吩基磺?；?-1H-1，4-苯并二氮雜-7-腈或其藥學(xué)上可接受的鹽之前給予。
48.按照權(quán)利要求1的方法，其中所述至少一種細(xì)胞抑制劑為他莫昔芬，其在給予(R)-2，3，4，5-四氫-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-4-(2-噻吩基磺?；?-1H-1，4-苯并二氮雜-7-腈或其藥學(xué)上可接受的鹽之前給予。
49.按照權(quán)利要求1的方法，其中所述至少一種細(xì)胞抑制劑為閹割，其在給予(R)-2，3，4，5-四氫-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-4-(2-噻吩基磺酰基)-1H-1，4-苯并二氮雜-7-腈或其藥學(xué)上可接受的鹽之前給予。
50.按照權(quán)利要求1的方法，其中所述至少一種細(xì)胞毒性劑為N-[5-[[[5-(1，1-二甲基乙基)-2-噁唑基]甲基]硫代]-2-噻唑基]-4-哌啶甲酰胺或其藥學(xué)上可接受的鹽，其在給予(R)-2，3，4，5-四氫-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-4-(2-噻吩基磺?；?-1H-1，4-苯并二氮雜-7-腈或其藥學(xué)上可接受的鹽之前給予。
51.按照權(quán)利要求1的方法，其中所述至少一種細(xì)胞毒性劑為紫杉醇，其以約135mg/m2輸注給藥約3小時，其后以約50mg/m2輸注給予(R)-2，3，4，5-四氫-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-4-(2-噻吩基磺?；?-1H-1，4-苯并二氮雜-7-腈或其藥學(xué)上可接受的鹽約1小時，紫杉醇和(R)-2，3，4，5-四氫-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-4-(2-噻吩基磺?；?-1H-1，4-苯并二氮雜-7-腈或其藥學(xué)上可接受的鹽都根據(jù)需要間隔約3周給藥。
52.按照權(quán)利要求1的方法，其中所述至少一種細(xì)胞毒性劑為紫杉醇，其以約80mg/m2輸注給藥約1小時，其后以約80mg/m2輸注給予(R)-2，3，4，5-四氫-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-4-(2-噻吩基磺酰基)-1H-1，4-苯并二氮雜-7-腈或其藥學(xué)上可接受的鹽約1小時，紫杉醇和(R)-2，3，4，5-四氫-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-4-(2-噻吩基磺?；?-1H-1，4-苯并二氮雜-7-腈或其藥學(xué)上可接受的鹽都根據(jù)需要間隔約1周給藥。
53.按照權(quán)利要求1的方法，其中給予兩種細(xì)胞毒性劑，所述細(xì)胞毒性劑為紫杉醇，其以約135mg/m2輸注約3小時，其后以大約等于6的AUC輸注卡鉑約20分鐘，紫杉醇和卡鉑間隔約3周給藥，所述方法還包括以約80mg/m2、約每周一次給予(R)-2，3，4，5-四氫-1-(1H-咪唑-4-基甲基)-3-(苯基甲基)-4-(2-噻吩基磺?；?-1H-1，4-苯并二氮雜-7-腈或其藥學(xué)上可接受的鹽。
全文摘要
本發(fā)明提供一種治療癌癥的協(xié)同方法，包括給予哺乳動物協(xié)同治療有效量的以下物質(zhì)(1)至少一種選自細(xì)胞毒性劑和細(xì)胞抑制劑的藥物，和(2)下式式(I)化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽。本發(fā)明進(jìn)一步提供一種協(xié)同治療癌癥的藥用組合物，其包括至少一種選自抗增殖細(xì)胞毒性劑和抗增殖細(xì)胞抑制劑的藥物、式(I)化合物以及藥學(xué)上可接受的載體。
文檔編號C07D409/12GK1419452SQ01807162
公開日2003年5月21日 申請日期2001年3月22日 優(yōu)先權(quán)日2000年3月27日
發(fā)明者F·Y·李 申請人:布里斯托爾-邁爾斯斯奎布公司