專利名稱：15－羥基前列腺素脫氫酶抑制劑刺激皮膚或皮膚附屬物著色的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種促進(jìn)皮膚和/或皮膚附屬物，尤其是毛發(fā)和/或體毛著色的化妝方法。本發(fā)明涉及15-羥基前列腺素抑制劑在用于防止灰發(fā)的組合物中的用途。本發(fā)明尤其涉及四唑，苯乙烯吡唑，苯基呋喃，苯基噻吩，苯基吡唑，吡唑羧酰胺，2-硫代乙酰胺或偶氮化合物作為促進(jìn)皮膚和/或皮膚附屬物著色，和/或限制和/或預(yù)防脫色素的制劑的用途。
人毛發(fā)和皮膚的顏色受不同因素影響，尤其是一年中的四季節(jié)，種族，性別以及年齡的影響。它主要由黑色素細(xì)胞產(chǎn)生的黑色素的濃度來決定。黑色素細(xì)胞是特化細(xì)胞，它通過特定的細(xì)胞器黑色素體合成黑色素。
黑色素的合成或黑素生成是復(fù)雜的，圖解表示包括以下主要步驟酪氨酸→多巴→多巴醌→多巴色素→黑色素酪氨酸(單酚二羥基苯丙氨酸氧氧化還原酶(oxygenoxidoreductase)EC 1.14.18.1)通過催化干預(yù)這一系列反應(yīng)，它特別催化從酪氨酸到多巴(二羥基苯丙氨酸)的轉(zhuǎn)化反應(yīng)和從多巴到多巴醌的轉(zhuǎn)化反應(yīng)。
毛囊上部象延伸到真皮深層的表皮的管狀內(nèi)陷(tubularinvagination)。下部或毛球本身包括一個內(nèi)陷，在其中可發(fā)現(xiàn)真皮乳頭。在真皮乳頭周圍，在毛球下部是由高度增殖性細(xì)胞組成的區(qū)域(細(xì)胞介質(zhì))。這些細(xì)胞是組成毛發(fā)的角質(zhì)化細(xì)胞的前體。由這些前體細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞垂直移動進(jìn)入毛球，然后在毛球上部逐漸變?yōu)榻琴|(zhì)化細(xì)胞，這組角質(zhì)化細(xì)胞會形成毛干。頭發(fā)和體毛的著色需要毛囊球部的黑色素細(xì)胞的參與。這些黑色素細(xì)胞處于活化狀態(tài)，即它們可合成黑色素。這些色素被輸送給形成毛干的角質(zhì)化細(xì)胞，這會導(dǎo)致有顏色的毛發(fā)或體毛生長。這種結(jié)構(gòu)被稱作“小囊色素單元(follicle pigmentaryunit)”。
眾所周知，在大部分群體中，棕色皮膚和保持固有的毛發(fā)顏色是主要潮流。
據(jù)信灰色形態(tài)或白色的體毛和/或毛發(fā)，或灰發(fā)與毛干中的黑色素減少有關(guān)。這個現(xiàn)象在一個人的一生中是自然發(fā)生的。但是人們追求更年輕的容貌，他們經(jīng)常試圖與這種現(xiàn)象斗爭，尤其是當(dāng)這種現(xiàn)象在較早年齡發(fā)生時。
在人工染色領(lǐng)域已經(jīng)提出了許多解決方法，通過引入外源性著色劑使毛發(fā)著色，這種顏色最大可能接近其天然色。另一種方法在于刺激天然著色途徑。
在所有已提出的方法中，可以提及含有磷酸二酯酶抑制劑的組合物(WO95/17161)，含有DNA片斷的組合物(WO95/01773)，含有二?；视?WO94/04122)的組合物，含有前列腺素的組合物(WO95/11003)或含有嘧啶3-氧化衍生物的組合物(EP829260)。
但是，仍然需要有效促進(jìn)皮膚，毛發(fā)和/或體毛著色的新方法，由此預(yù)防或減少灰發(fā)。
出乎意料地，申請人發(fā)現(xiàn)通過特別抑制由黑色素細(xì)胞合成或黑色素細(xì)胞存在的環(huán)境中的前列腺素的降解可促進(jìn)黑色素細(xì)胞合成黑色素。
由于這個原因，本發(fā)明的一個主題是至少一種15-羥基前列腺素脫氫酶抑制劑在組合物或制備用于促進(jìn)皮膚或皮膚附屬物，尤其是毛發(fā)和/或體毛著色的組合物中的用途。
先前已經(jīng)描述了人或動物體毛或皮膚著色涉及某些前列腺素(Wand M.，1997，Arch.Ophthalmol，115；Abdel Malek等，1987，Cancer Res.，47)。
但是前列腺素是具有非常短生物半衰期的分子，它以自分泌或旁分泌的方式起作用，這反映了前列腺素代謝局部和不穩(wěn)定的特性(Narumiya S等.，1999t Physiol Rev，79(4)1193-1226)。
令人驚奇地，申請人現(xiàn)在已經(jīng)證明在前列腺素降解中特別涉及的一種酶在毛發(fā)真皮乳頭的成纖維細(xì)胞中有表達(dá)，這是毛發(fā)壽命的決定作用(determining compartment)。特別地，申請人現(xiàn)在已經(jīng)證明15-羥基前列腺素脫氫酶(15-PGDH)在這個區(qū)域表達(dá)。
此外，在本發(fā)明的情況下已經(jīng)證明這種酶還在頭發(fā)黑色素細(xì)胞中表達(dá)，這是直到現(xiàn)在才證明了的。
15-PGDH是前列腺素滅活的關(guān)鍵酶；15-PGDH1型對應(yīng)類別EC1.1.1.141并且是NAD+依賴性的。這種酶催化在15碳的從羥基到酮的氧化反應(yīng)，這種酶可從豬腎臟分離；特別地，可觀察到這種酶被甲狀腺激素，三碘甲腺原氨酸以比生理劑量高的多的劑量所抑制。15-PGDH2型為NADP依賴性的。
但是，從來既沒有證明在真皮乳頭中存在15-PGDH也沒有證明在毛發(fā)黑色素細(xì)胞中存在15-PGDH，而且也從沒有提出使用15-PGDH抑制劑促進(jìn)皮膚，體毛和/或毛發(fā)著色。
根據(jù)本發(fā)明，通過作用于由黑色素細(xì)胞和真皮乳頭的成纖維細(xì)胞的15-PGDH催化的降解可以局部調(diào)節(jié)前列腺素(其作用方式是自分泌或旁分泌)的量，尤其是存在于黑色素細(xì)胞中，尤其是毛發(fā)黑色素細(xì)胞中的前列腺素的量。
令人驚奇地，申請人還證明了毛發(fā)黑色素細(xì)胞表達(dá)前列腺素H合酶1(PGHS-1或COX-1，E.C1.14.99.1)。這第一次證明毛發(fā)黑色素細(xì)胞具有自發(fā)的前列腺素代謝。
出乎意料地，在本發(fā)明的情況下已經(jīng)證明以真皮乳頭和/或毛發(fā)黑色素細(xì)胞的水平可特別地抑制存在的15-PGDH。因此，這種抑制可減少毛發(fā)黑色素細(xì)胞環(huán)境中的前列腺素的失活。因此，通過自分泌或旁分泌途徑前列腺素能夠繼續(xù)刺激黑色素細(xì)胞。實際上，這種抑制劑的應(yīng)用是通過黑色素細(xì)胞刺激黑色素的產(chǎn)生。
對于本發(fā)明來說，術(shù)語“15-PGDH”指能夠抑制或減少15-PGDH酶活性，和/或能夠抑制、減少或延緩由這種酶所催化的反應(yīng)的任何物質(zhì)，天然源或合成源的簡單或復(fù)雜的化合物。本發(fā)明的15-PGDH抑制劑優(yōu)選是15-PGDH1型抑制劑。
有利地，抑制劑是特異性的NAD-依賴性15-PGDH1型抑制劑。
術(shù)語“皮膚附屬物”用來指所有皮膚附加物，尤其是指甲，體毛和毛發(fā)。術(shù)語“體毛和毛發(fā)”用來指所有毛發(fā)附加物，還尤其是睫毛和眉毛。
本發(fā)明的組合物可以通過任何適宜的途徑施用，尤其是經(jīng)口服，腸道外施用或局部外用，本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠?qū)λ鼈兊闹苿绕涫腔瘖y或皮膚病學(xué)組合物的制劑進(jìn)行調(diào)整。有利地，本發(fā)明組合物用于局部涂敷。它們含有生理上可接受的介質(zhì)，特別是化妝品上或藥學(xué)上，尤其是皮膚病學(xué)上可接受的介質(zhì)。
在一個優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明的組合物含有適合給頭皮施用的賦形劑。
因此，本發(fā)明的一個主題尤其是至少一種15-PGDH抑制劑作為促進(jìn)和/或誘導(dǎo)和/或刺激皮膚和/或皮膚附屬物著色的制劑的用途，和/或作為預(yù)防和/或限制皮膚和/或皮膚附屬物脫色和/或變白的制劑用途，尤其是作為預(yù)防和/或限制揮發(fā)的制劑的用途；更優(yōu)選在哺乳動物中，尤其是人中使用這種制劑。
根據(jù)本發(fā)明的另一個方面，本發(fā)明涉及至少一種15-PGDH抑制劑在促進(jìn)和/或誘導(dǎo)和/或刺激皮膚和/或皮膚附屬物著色的化妝用護(hù)膚或護(hù)發(fā)組合物中的用途，和/或在預(yù)防和/或限制皮膚和/或皮膚附屬物脫色和/或變白的化妝用護(hù)膚或護(hù)發(fā)組合物中的用途，和/或在預(yù)防和/或限制灰發(fā)的化妝用護(hù)膚或擴(kuò)發(fā)組合物中的用途。
本發(fā)明還涉及至少一種15-PGDH抑制劑制備用于促進(jìn)和/或誘導(dǎo)和/或刺激皮膚和/或皮膚附屬物著色的組合物的用途，和/或制備用于預(yù)防和/或限制皮膚和/或皮膚附屬物脫色和/或變白的組合物的用途，和/或制備用于預(yù)防和/或限制灰發(fā)的合物的用途。
特別適合實施本發(fā)明的組合物是化妝用和或皮膚病學(xué)組合物或藥用組合物。
特別地，術(shù)語“化妝用組合物”指與人體不同表面部分(表皮，體毛和毛發(fā)體系，指甲，嘴唇和外生殖器)接觸或與牙齒接觸或與口腔粘膜接觸的任何物質(zhì)或制劑。這些制劑專門或主要用于清潔上述人體表面或牙齒或口腔粘膜，為其提供香味，修飾其外觀和/或改善人體氣味和/或保護(hù)或維持它們良好的狀態(tài)(補充化妝品指導(dǎo)16/168/EEC)。
但是，對于本發(fā)明來說，為了保護(hù)身體表面部分或使其維持良好狀態(tài)，或改善個體外觀，尤其是皮膚及皮膚附屬物的外觀，術(shù)語“化妝用組合物”還指可被系統(tǒng)傳遞的任何途徑吸收的組合物，尤其是經(jīng)口服吸收的組合物。
在其中使用本發(fā)明15-PGDH抑制劑的生理可接受介質(zhì)可以是無水或含水的。
本發(fā)明組合物可以包括化妝用可接受的介質(zhì)，它由水或水與至少一種選自親水有機(jī)溶劑、親脂有機(jī)溶劑，兩性有機(jī)溶劑及其混合物的溶劑的混合物組成。
術(shù)語“無水介質(zhì)”指含有少于1％的水的溶劑介質(zhì)。這種介質(zhì)可由一種溶劑或更優(yōu)選由選自C2-C4低級醇如乙醇，亞烷基二醇如丙二醇，以及亞烷基二醇或二亞烷基二元醇的烷基醚的溶劑的混合物組成，其中烷基或亞烷基含有1至4個碳原子。術(shù)語“含水介質(zhì)”指由水或水與另一種生理可接受的溶劑，特別是與選自上文提及的有機(jī)溶劑的溶劑的混合物組成。在后者的情況，當(dāng)它們存在時，這些其他溶劑占組合物重量的大約5至95％。
生理可接受的介質(zhì)可含有在化妝品或藥學(xué)領(lǐng)域常規(guī)使用的其他助劑，例如本領(lǐng)域眾所周知的表面活性劑，增稠劑或膠凝劑，化妝劑，防腐劑，或堿化劑或酸化劑，這些助劑以足以獲得所需劑型，尤其是較稠或較稀的洗液，凝膠，乳劑或乳膏的量存在。任選以加壓的氣溶膠或以從有泵裝置(pump-action)的瓶中噴霧的形式使用。
特別地，對于局部應(yīng)用，可使用的本發(fā)明組合物是水，醇，水-醇或油溶液或懸浮液的形式，洗液或乳漿類型的分散體形式，具有液體或半液體稠度或糊狀的乳液的形式，通過將脂相分散在水相(O/W)或相反(W/O)的方式或多重乳化而獲得，游離或壓實的粉末的形式，可用作或摻入生理可接受的介質(zhì)，或是微型膠囊或微粒的形式，或是離子和/或非離子型的泡狀分散體的形式。因此，本發(fā)明組合物可以是藥膏，酊劑，乳狀液，乳膏，軟膏，粉末，貼片，浸漬襯墊，溶液，乳液或泡狀分散體，洗液，含水或無水凝膠，噴霧劑，混懸液，洗發(fā)水，氣溶膠或泡沫劑的形式。本發(fā)明組合物可以是無水或含水的。本發(fā)明組合物還可以包括制成肥皂或清潔餅的固體制劑。
可根據(jù)常規(guī)的方法制備這些組合物。
特別地，可使用的本發(fā)明組合物包括護(hù)發(fā)組合物，特別是洗發(fā)水，毛發(fā)定型液，處理液，毛發(fā)定型乳或凝膠，毛發(fā)重構(gòu)洗液，面罩等。
本發(fā)明的化妝用組合物優(yōu)選是乳膏，洗發(fā)劑，洗發(fā)水或護(hù)發(fā)劑。特別地，可將本發(fā)明組合物用于使用化妝品后可進(jìn)行漂洗或不進(jìn)行漂洗的處理，或以洗發(fā)劑的形式使用。
還可預(yù)見組合物是泡沫或噴霧劑或含有加壓的推進(jìn)劑的氣溶膠形式。
因此本發(fā)明組合物可以是洗液，乳漿液，乳狀液，O/W或W/O乳膏，凝膠，藥膏，粉末，巴布劑，貼片，浸漬的襯墊，餅或泡沫的形式。
特別地，涂敷于頭皮或毛發(fā)的組合物的形式可以是護(hù)發(fā)洗液，例如每天或每周涂敷兩次，洗發(fā)劑或頭發(fā)調(diào)理劑，特別是每周兩次或每周一次涂敷，清潔頭皮的液體或固體皂，每天涂敷，發(fā)型定型產(chǎn)品(發(fā)漿，毛發(fā)定型產(chǎn)品或定型發(fā)膠)，處理面罩，或是泡沫凝膠或清潔毛發(fā)的乳膏。該組合物的形式還可以是染發(fā)劑或用毛刷或梳子施用的睫毛膏。
此外，對于局部涂敷于睫毛或體毛，涂敷的本發(fā)明組合物的形式可以是著色或未著色的睫毛膏，用毛刷涂敷于睫毛，或可選地涂敷于下巴的胡須或嘴唇上面胡須對于通過注射使用的組合物，該組合物的形式可以是含水洗液或含油的混懸液。對于口服使用，該組合物的形式可以是膠囊，顆粒，口服糖漿或片劑。
根據(jù)一個具體的實施方案，本發(fā)明組合物的形式是發(fā)膏或發(fā)用洗劑，洗發(fā)劑，頭發(fā)調(diào)理劑或用于頭發(fā)或睫毛的睫毛膏。
本發(fā)明組合物生理可接受介質(zhì)的各種組分的用量是本領(lǐng)域通常考慮的使用量。
本發(fā)明的組合物還可以染發(fā)劑或睫毛膏的形式用毛刷或梳子涂敷，尤其是涂敷于睫毛，眉毛或毛發(fā)。
本發(fā)明組合物還可以指甲油的形式涂敷于指甲的表面。
可以使用的本發(fā)明組合物的各種組分的量是本領(lǐng)域通常考慮的使用量。
當(dāng)可以使用的本發(fā)明組合物是乳劑時，相對于組合物總重，脂肪相的比例在5％至80％重量范圍，優(yōu)選5％至50％重量。在乳劑形式的組合物中使用的油，蠟，乳化劑以及輔助乳化劑選自化妝品領(lǐng)域通常使用的那些。在組合物中，相對于組合物總重，乳化劑和輔助乳化劑以0.3％至30％重量的比例范圍存在，優(yōu)選0.5％至20％，或更優(yōu)選1％至8％中。乳劑還可以含有脂質(zhì)小囊或小球。
當(dāng)可以使用的本發(fā)明組合物是油性溶液或凝膠時，脂肪相占組合物總重的90％以上。
有利地，本發(fā)明組合物是水，醇或水-醇的溶液或混懸液，且更好是水/乙醇溶液或混懸液。醇部分占5％至99.9％，更好是8％至80％。
特別地，對于用于睫毛的睫毛膏化妝品，本發(fā)明組合物是水包蠟或油包蠟的分散體，凝膠化的油或含水凝膠，這種睫毛膏還可以是著色或未著色的。
有利地，本發(fā)明組合物包括包封至少一種15-pgdh抑制劑的微球，毫微球，脂質(zhì)體，油質(zhì)體或毫微膠囊。特別地，這種制劑的實例在專利EP 199636，EP 375520，EP 447318，EP 557489，WO 97/72602，EP 1151741或US 5 914 126中有描述。
作為實例，可根據(jù)專利申請EP 0 375 520描述的方法制備微球。
納米球可以是含水混懸液的形式，并且可以根據(jù)專利申請F(tuán)R0015686和FR 0101438描述的方法進(jìn)行制備。
油質(zhì)體包括水包油乳劑，通過將具有層狀液晶覆蓋層的油滴分散在水相中形成油包水乳劑(參見專利申請EP 0 641 557和EP0 705593)。
如專利申請EP0 780 115所述，還可將15-PGDH抑制劑包封在納米膠囊中，納米膠囊由從硅酮油表面活性劑獲得的層狀覆蓋層組成；例如還可以根據(jù)專利申請F(tuán)R 0113337所述的技術(shù)，在水分散的磺基聚酯基礎(chǔ)上制備納米膠囊。
本發(fā)明組合物還可以已知方式含有化妝品領(lǐng)域常用的佐劑，例如親水或親脂的膠凝劑，親水或親脂的添加劑，防腐劑，抗氧劑，溶劑，芳香劑，填充劑，遮蔽劑，氣味吸收劑以及染料。這些不同助劑的用量是化妝品領(lǐng)域常規(guī)使用的量，例如是組合物總重的0.1％至20％，尤其少于或等于10％。根據(jù)它們的性質(zhì)，可將這些助劑引入脂肪相，水相和或脂質(zhì)小球中。
脂肪相可以含有脂肪或油性化合物，這些化合物在室溫(25℃)和大氣壓(760mm汞柱)是液體，一般稱作油。這些油可以是相互相容或不相容，并且能夠形成肉眼可見的均一或兩相或三相系統(tǒng)的液態(tài)脂肪相。
除油外，脂肪相可以含有蠟，樹膠，親脂性聚合物，和含有固體組分和液體組分的“糊狀”或粘稠的產(chǎn)品。
水相含有水以及任選地以任何比例與水混溶的成分，例如C1至C8低級醇，如乙醇或異丙醇，多元醇例如丙二醇，甘油或山梨糖醇，或丙酮或醚。
作為可在本發(fā)明使用的油或蠟，可以提及的有礦物油(液態(tài)礦脂)，植物油(牛油樹脂，葵花油的液體部分，)，動物油(全氫角鯊烯)，合成油(purcellin油)，硅酮油或蠟(環(huán)甲基硅氧烷)和氟油(全氟聚醚)，蜂蠟，巴西棕櫚蠟或石蠟?？蓪⒅敬己椭舅?硬脂酸)加到這些油中。
作為可在本發(fā)明使用的乳化劑，可以提及例如硬脂酸甘油酯或月桂酸甘油脂，硬脂酸或油酸山梨糖醇酯，烷基二甲基聚硅氧烷共聚多元醇(烷基度≥8)，以及其用于W/O乳劑的混合物。還可以使用聚乙二醇單硬脂酸脂或單月桂酸酯，聚氧乙烯化山梨糖醇硬脂酸酯或油酸酯，二甲聚硅氧烷共聚多元醇及其混合物，尤其是聚山梨醇酯60以及PEG-6/PEG-32/硬脂酸乙二醇酯的混合物，由Gattefosse公司以Tefose63名出售。
作為可在本發(fā)明使用的溶劑，可以提及低級醇，尤其是乙醇和異丙醇以及丙二醇。
作為可在本發(fā)明使用的親水性膠凝劑，可以提及羧乙烯聚合物(卡波姆)，丙烯酸共聚物例如丙烯酸酯/烷基丙烯酸酯共聚物，聚丙烯酰胺，多糖例如羥丙基纖維素，天然樹膠和粘土，作為親脂性膠凝劑，可以提及改性粘土如Bentones，脂肪酸的金屬鹽例如硬脂酸鋁，疏水二氧化硅和乙基纖維素。當(dāng)使用增稠劑增稠或膠凝本發(fā)明組合物時，相對于組合物的總重，后者通常以大約0.1％至6％的濃度存在。
優(yōu)選相對于組合物，抑制劑以大于或等于10-3％，尤其是0.001至5％w/v的濃度存在，更優(yōu)選0.01％至2％。但是根據(jù)所使用的化合物本領(lǐng)域技術(shù)人員可對這些用量進(jìn)行調(diào)整，以在本發(fā)明化合物施用條件下獲得與實際完全抑制15-PGDH酶相當(dāng)?shù)拿敢种苹钚?，所使用的濃度通常大于或等于體外觀察到的100％抑制15-PGDH的濃度。特別地，15-PGDH抑制劑的濃度比體外觀察到的100％抑制15-PGDH的濃度高50至500倍；例如可使用相當(dāng)于體外完全抑制濃度大約100倍的濃度。
根據(jù)所使用的抑制劑的性質(zhì)，所施用的個體以及施用的時間，本領(lǐng)域技術(shù)人員很容易估算與獲得所需效果(即促進(jìn)皮膚和/或皮膚附屬物著色，和/或限制其變白)的量相當(dāng)?shù)?5-PGDH抑制劑的量。
本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠確定適合的15-PGDH抑制劑特別地，15-PGDH抑制劑選自曲撤諾，其鹽及其酯，萘氧唑酮，柳氮磺吡啶，PhCL28A(Berry等.，J.Pharm.Pharmacol.，1985，31，622-628)，或噻唑烷二酮，如cho等人所述(Arch.19 Biochem.Biophys.，2002；4O5，247-251)。
優(yōu)選地，本發(fā)明的NAD-依賴性15-PGDH抑制劑不是前列腺素H合酶或環(huán)氧合酶(也簡寫為COX)的抑制劑，這些酶是前列腺素合成所涉及的酶。
特別地，如果以植物提取物的形式將15-PGDH抑制劑引入本發(fā)明的組合物，這些提取物基本上不含有黃酮和/或以所使用的劑量對COXs(PGHSs)沒有抑制活性。
根據(jù)本發(fā)明一個特別有利的實施方案，本發(fā)明組合物包括至少一種15-PGDH特異性抑制劑；術(shù)語“特異性抑制劑”指很少或根本不抑制前列腺素，尤其是PGF2α或PGE2合成的活性劑。優(yōu)選地，15-PGDH抑制劑很少或根本不抑制前列腺素合酶(PGF合酶)。
這是因為，在該研究的情況下，申請人現(xiàn)在出乎意料地發(fā)現(xiàn)PGF合酶在也真皮乳頭中表達(dá)。因此在作用部位維持有效量的前列腺素在這些分子的合成和降解之間產(chǎn)生了復(fù)雜的生物學(xué)平衡。因此，如果這種活性與抑制合成結(jié)合，那么外源引入抑制這種分解代謝的化合物將不是很有效。
作為這種外源引入的補充或替換，申請人現(xiàn)在已經(jīng)證明促進(jìn)維持前列腺素的外源積聚，由此維持或甚至增加皮膚和皮膚附屬物，特別是毛發(fā)的著色是可能的。
通過實施本發(fā)明，現(xiàn)在可將特定活性化合物作為目標(biāo)，這種化合物的15-PGDH-抑制活性顯著高于PGF-合酶-抑制活性。所給予的劑量分別抑制15-PGDH和PGF合酶活性的比例至少大于1，優(yōu)選至少3∶1，有利地是大于或等于5∶1，特別地，上述比例可以通過抑制50％酶活性的濃度來確定。特別適合實施本發(fā)明的制劑所具有的15-PGDH抑制活性和PGF-抑制活性的比例大于或等于10∶1，尤其是大于或等于15，優(yōu)選大于或等于25∶1。
在這點上，特別適合實施本發(fā)明的化合物是符合下式的化合物分子A 分子B 通過使用潛在的候選者進(jìn)行簡單試驗，本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠選擇具有有15-PGDH抑制活性的本發(fā)明的其他制劑。這項試驗是比較由這種酶所催化反應(yīng)的動力學(xué)，在反應(yīng)介質(zhì)中包括酶的底物和可能的協(xié)同底物，要求在該化合物存在或不存在的情況下，評價該化合物的15-PGDH抑制作用，反應(yīng)條件(pH，溫度，反應(yīng)時間等)是適合該反應(yīng)的條件，并且在該化合物或被試驗物質(zhì)存在或不存在的情況中測定的反應(yīng)條件是相同的。
對于這項試驗，例如15-PGDH酶的終濃度為7×10-3mg/ml，其輔助底物(β-NAD)和底物(PGE2)的濃度與這項試驗常規(guī)使用的條件相符，例如，如Cho和Ta所述(Inhibitlon of NAD-dependent15-hydroxyp rostaglandin dehydrogenase(15-PGDH)by cyclooxygenaseinhibitors and chemopreventive agents.Prostaglandins，Leukotrienesand Essential Fatty Acids，2002，67(6)461-465)，例如將1.5mM β-NAD和50mM前列腺素E2放在一起。在37℃測定反應(yīng)速率1分鐘。進(jìn)行同樣的反應(yīng)，但在反應(yīng)開始時，向反應(yīng)介質(zhì)中加入要試驗的化合物。在化合物存在的情況下，測定每單位時間的最大酶反應(yīng)速率(Vmax)，將其和不加該化合物的對照試驗的最大酶反應(yīng)速率進(jìn)行比較，然后確定抑制百分?jǐn)?shù)[100-(試驗Vmax×100)/對照Vmax]。
然后測定已知可作為15-PGDH抑制劑化合物抑制PGF合酶的能力。對于這項試驗，例如PGFS酶的終濃度為25×10-3mg/ml，其輔助底物(β-NADPH2)和底物(例如菲醌)的濃度與這項試驗常規(guī)使用的條件相符，例如，如Suzuki等所述(cDNA cloning，expression andmutagenesis study of liver-type prostaglandin F synthase.J BiolChem，1999，274(1)241-248)，即將100mM β-NADPH2和20mM菲醌放在一起，在37℃測定每單位時間最大反應(yīng)速率。進(jìn)行同樣的反應(yīng)，但在反應(yīng)開始時，向反應(yīng)介質(zhì)中加入要試驗的化合物。將該化合物的最大酶反應(yīng)速率和不加該化合物的對照試驗的最大酶反應(yīng)速率進(jìn)行比較，然后確定抑制百分?jǐn)?shù)[100-(試驗Vmax×100)/對照Vmax]。
然后將由15-PGDH催化的反應(yīng)的抑制百分?jǐn)?shù)和由PGFS所催化的反應(yīng)的抑制百分?jǐn)?shù)進(jìn)行比較。更具體地，確定該化合物相對于PGFS和15-PGDH的IC50值的比例(IC50PGFS/IC5015-PGDH)。IC50是使Vmax減少50％的該化合物的濃度。
對于本發(fā)明來說，還可以通過模擬毛發(fā)乳頭的酶環(huán)境的細(xì)胞模型中證明表現(xiàn)出的選擇性抑制15-PGDH的化合物的活性。這使得在產(chǎn)生在這些分子代謝中所涉及的各種類型的酶的復(fù)雜生物系統(tǒng)中評價15-PGDH選擇性抑制劑對前列腺素的保護(hù)效果成為可能。例如使用培養(yǎng)幼單核細(xì)胞的培養(yǎng)物，它在一定條件下是巨噬細(xì)胞的前體，該模型非常廣泛的用于研究前列腺素代謝。
實際上，在24小時內(nèi)，佛波醇酯(10nmPMA)可使U937幼單核細(xì)胞系向巨噬細(xì)胞分化，這種分化伴隨著誘導(dǎo)15-PGDH(Tong和Tai，Biochim Biophys Acta，2000149761-68).
此外，在6小時內(nèi)用LPS(從細(xì)菌壁提取的脂多糖)刺激這些巨噬細(xì)胞可誘導(dǎo)(100ng/ml)PGHS-2(或COX-2)，該酶是負(fù)責(zé)(以和COX-1相同的途徑)PGH2合成，通過PGFS合成前體，(尤其是)PGF2α的酶(Arias-Negrete等.，1995，Biochem Biophys Res Commun，208(2)，582-589)。
在第一步，在刺激巨噬細(xì)胞前體分化和誘導(dǎo)15-PGDH的化合物存在的情況下，在適合的介質(zhì)中培養(yǎng)巨噬細(xì)胞前體，然后通過刺激這些細(xì)胞產(chǎn)生前列腺素，例如使用LPS提取物或純化的LPS；在存在或不存在試驗化合物的情況下進(jìn)行第二步。將在試驗的15-PGDH抑制化合物存在的情況下得到的前列腺素的濃度，特別是PGF2α的濃度與只含有15-PGDH誘導(dǎo)劑的對照所得到的濃度進(jìn)行比較，本領(lǐng)域技術(shù)人員可通過任何已知的方法，尤其是通過酶免疫分析進(jìn)行這些測定。因此，在試驗的時，所測定的PGF2α的量是試驗化合物的兩種酶活性多或少的結(jié)果PGFS的活性導(dǎo)致PGF2α的合成；而15-PGDH的活性導(dǎo)致降解。在非選擇性15-PGDH抑制劑(也是PGFS的抑制劑)存在的情況下，觀察到PGF2α的減少(相當(dāng)于通過產(chǎn)物對PGFS的作用使合成減少)。在選擇性15-PGDH抑制劑存在的情況下，觀察到PGF2α的增加，相當(dāng)于降解的減少。觀察到的化合物的PGF2α的量至少為5％，優(yōu)選至少10％，大于對照(只有前列腺素誘導(dǎo)劑)的量，因此對于前列腺素F2α具有保護(hù)作用。有利地，對于適合實施本發(fā)明的化合物來說，具有試驗化合物的前列腺素的濃度至少是20％，或30％，大于或等于對照的濃度。
特別地，這些化合物在申請WO03/090699中有描述；乙?；倪蚧衔镞@些化合物優(yōu)選是某些成鹽或未成鹽的乙?；倪颍鼈兪?5-羥基前列腺素脫氫酶抑制劑。
根據(jù)本發(fā)明的一個方面，15-PGDH抑制劑包括至少一種有效量的式(I)或是(II)的化合物或其鹽 其中
-R1和R2獨立地選自氫，鹵素，OR5，SR5，NR5R′5，COOR5，COR5，CONR5R′5，CF3，CN，NR5COR′5，SO2R5，SO2NR5R′5，NR5SO2R′5，CSR5，OCOR5，COSR5，SCOR5，CSNR5R′5，NR5CONR′5R″5，NR5C(＝NR′5)NR″5R5，NR5CSR′5，NR5CSNR′5R″5，直鏈或支鏈C1-C20烷基，以及具有4至7個原子的環(huán)，該環(huán)任選含有至少一個雜原子，這些環(huán)是分離的或連接的，烷基和環(huán)可以是飽和或不飽和的，它們?nèi)芜x用至少一個取代基A1取代，其中R5，R′5，R″5以及R表示氫，C1-C20烷基或具有4至7個原子的基于烴的環(huán)，基于烴的環(huán)或烷基是飽和或不飽和的，它們?nèi)芜x用至少一個取代基A2取代；-R3選自氫，鹵素，OR6，SR6，NR5R′6，CF3，NR6COR′6，NR6SO2R′6，NR5CONR′6R″6，NR6CSR′6，NR6CSNR′6R″6，直鏈或支鏈C1-C20烷基，以及分離或連接的具有4至7個原子的基于烴的環(huán)，烷基或基于烴的環(huán)還是飽和或不飽和的，它們?nèi)芜x用至少一個取代基A3取代，R6，R′6以及R″6表示氫，直鏈或支鏈C1-C20烷基，或具有4至7個原子的基于烴的環(huán)，烷基或基于烴的環(huán)可以是飽和或不飽和的，任選用至少一個取代基A4取代；-R4獨立地選自氫，COOR7，CONR7R′7，SO2R7，SO2NR7R′7，COR7，CSR7，COSR7，CSNR7R′7，直鏈或支鏈C1-C20烷基，以及分離或連接具有4至7個原子的基于烴的環(huán)，烷基和基于烴的環(huán)可以是飽和或不飽和的，任選用至少一個取代基A5取代；在式(II)的情況，R4還表示鹵素，OR7，SR7，NR7R′7，CF3，CN，NR7COR′7，NR77SO2R′7，OCOR7，SCOR7，NR7CONR′7R″7，NR7C(＝NR′7)NR″7R7，NR7CSR′7或NR7CSNR′7R″7，其中R7，R′7，R″7以及R+7獨立地表示鹵素，直鏈或支鏈C1-C20烷基或具有4至7個原子的基于烴的環(huán)，烷基或基于烴的環(huán)是飽和或不飽和的，任選用至少一個取代基A6取代；-A1和A2獨立地選自鹵素，含有4至7個原子和至少一個雜原子的雜環(huán)，OR8，SR8，NR8R′8，COOR8，CONR8R′8，CF3，CN，NR8COR′8，SO2R8，SO2NR8R′8，NR8SO2R′8，COR8，CSR8，OCOR8，COSR8，SCOR8，CSNR8R′8，NR8CONR′8R″8，NR8C(＝NR′8)NR″8R8，NR8CSR′8，NR8CSNR′8R″8；-A3和A4獨立地選自鹵素，R9，OR9，SR9，NR9R′9，COOR9，CONR9R′9，CF3，CN，NR9COR′9，SO2R9，SO2NR9R′9，NR9SO2R′9，CSR9，OCOR9，COSR9，SCOR9，CSNR9R′9，NR9CONR′9R″9，NR9C(＝NR′9)NR″9R9，NR9CSR′9，NR9CSNR′9R″9；-A5和A6獨立地選自鹵素，R10，OR10，SR10，NR10R′10，CF3，CN，NR10COR′10，SO2R10，SO2NR10R′10，NR10SO2R′10，CSR10，OCOR10，SCOR10，CSNR10R′10，NR10CONR′10R″10，NR10C(＝NR′10)NR″10R10，NR10CSR′10，NR10CSNR′10R″10；-R8，R′8，R″8，R8，R9，R′9，R″9，R9，R10，R′10，R″10，R10獨立地表示鹵素，飽和或不飽和的，直鏈或支鏈C1-C20烷基，飽和或不飽和的具有4至7個原子的基于烴的環(huán)，或芐基。
本發(fā)明還涉及至少一種如上述定義的式(I)或(II)的四唑化合物或其互變異構(gòu)的形式或其鹽作為誘導(dǎo)和/或刺激人毛發(fā)和/或皮膚著色的制劑的用途。
有利地，成鹽或未成鹽的形式的式(I)或(II)的化合物表現(xiàn)出的的抑制15-PGDH的活性大于抑制PGF合酶的活性。
在下文中，除非明確提及，使用的術(shù)語“式(I)或(II)的化合物”應(yīng)該理解為酸、堿或鹽形式的式(I)或式(II)的兩種化合物。
本發(fā)明術(shù)語“至少一種”指一種或更多(2種，3種或更多)。特別地，本發(fā)明組合物可含有一種或多種式(I)的化合物，一種或多種式(II)的化合物，或式(I)的和式(II)化合物的混合物。這種或這些化合物是順式或反式異構(gòu)體或順式/反式異構(gòu)體的混合物。它們還可以是互變異構(gòu)體的形式。它們還可以是對映異構(gòu)體和/或非對映異構(gòu)體或這些異構(gòu)體的混合物，尤其是外消旋混合物。
對于本發(fā)明來說，術(shù)語“基于烴”的環(huán)指只含有形成環(huán)的碳-碳鍵的環(huán)。
根據(jù)本發(fā)明，在式(I)和(II)中R1至R4使用的環(huán)獨立地含有4至7個原子，更好是5至6個原子。它們可以是飽和或不飽和的。它們還可以單獨或相互連接成化學(xué)結(jié)構(gòu)相同或不同的環(huán)。此外，R1和R2和任選含有一個或多個雜原子如S，N或O或其組合。
根據(jù)本發(fā)明，在式(I)和(II)中R5，R′5，R″5，R5，R6，R′6，R″6，R6，R7，R′7，R″7，R7，R8，R′8，R″8，R8，R9，R′9，R″9，R9，R10，R′10，R″10和R10所使用的環(huán)獨立地含有4至7個碳原子，更好是5至6個碳原子。它們可以是飽和或不飽和的。
而且，在式(I)和(II)中A1和A2使用的雜環(huán)含有一個或多個雜原子如S，N或O或其組合。它們也獨立地含有4至7個碳原子，更好是5至6個碳原子。它們可以是飽和或不飽和的。
作為可在式(I)或(II)中使用的飽和基于烴的環(huán)，可以提及的有環(huán)戊基或環(huán)己基。作為雜環(huán)，可以提及的有吡啶，哌啶，嗎啉，吡咯，呋喃以及噻唑環(huán)。作為不飽和的基于烴的環(huán)，可以提及的有苯基或萘基。此外，這些環(huán)可用一個或多個具有A1、A2、A3、A4、A5和A6的上文定義的取代基取代，這取決于它是否是R1，R2，R3，R4，R5，R′5，R″5，R5，R6，R′6，R″6，R6，R7，R′7，R″7或R7。
根據(jù)本發(fā)明，短語“直鏈或支鏈C1-C20烷基”指非環(huán)基，它來源于具有1至20個碳原子的直鏈或支鏈烴分子脫氫，尤其是甲基，乙基，丙基，異丙基，丁基，異丁基，叔丁基，戊基，己基或辛基，還有它們對應(yīng)的位置異構(gòu)體。作為可在本發(fā)明使用的(飽和的)烷基實例，可以提及的有甲基，乙基，正丁基，異丙基或正己基。
作為鹵素原子，可以提及的有氯，氟，碘或溴原子，更優(yōu)選氯原子。
根據(jù)本發(fā)明，式(I)或(II)的化合物是隔離型，即非聚合型。此外，取代基A1、A2、A3、A4、A5和A6可以位于具有上述取代基的環(huán)的任何位置，尤其是與具有四唑環(huán)的基團(tuán)相鄰的位置。
根據(jù)一個實施方案，R1和R2至少一個表示氫原子或鹵素原子，尤其是氟原子或氯原子，特別地，R1和R2表示氫。
有利地，R3表示NR6R′6或芳基，在一個具體的實施方案中，是萘基或苯基，任選用取代基A3取代，特別地，A3表示OR9。
根據(jù)一個實施方案，R6表示氫和R′6芳基，特別是苯基，任選用基團(tuán)OR9取代。
特別地，R9表示飽和的直鏈或支鏈C1-C20烷基，更好是C1-C10烷基，例如甲基。
根據(jù)本發(fā)明的一個實施方案，R4表示芳基，特別是萘基或苯基。
根據(jù)本發(fā)明，短語“式(I)或(II)的化合物的鹽”指式(I)或(II)的化合物的有機(jī)鹽或無機(jī)鹽。
根據(jù)本發(fā)明，作為可使用的無機(jī)鹽，可以提及的有鈉鹽或鉀鹽，還有鋅(zn2+)鹽，鈣(Ca2+)鹽，銅(Cu2+)鹽，鐵(Fe2+)鹽，鍶(Sr2+)鹽，鎂鹽(Mg2+)以及錳(Mn2+)鹽；氫氧化物和碳酸鹽。
根據(jù)本發(fā)明可以使用的有機(jī)鹽是例如三乙醇胺鹽，單乙醇胺鹽，二乙醇胺鹽，十六烷基胺鹽，N，N，N′，N′，-四(2-羥基-丙基)乙二胺鹽或三羥甲基氨基甲烷鹽。
特別適合實施本發(fā)明的化合物是如上定義的式(I)或(II)的化合物，其中-R1和R2獨立地選自氫，鹵素，OR5，SR5，NR5R′5，COOR5，CF3，CN，直鏈或支鏈C1-C20烷基，和具有4至7個原子的環(huán)，該環(huán)任選含有至少一個雜原子，這些環(huán)可是分離或連接的，烷基和環(huán)還可以是飽和或不飽和的，其中R5和R′5獨立地表示氫，直鏈或支鏈C1-C20烷基或具有4至7個原子的基于烴的環(huán)，基于烴的環(huán)或烷基是飽和或不飽和的，-R3選自氫，OR6，SR6，NR5R′6，CF3，直鏈或支鏈C1-C20烷基，和分離或連接的具有4至7個原子的基于烴的環(huán)，烷基或基于烴的環(huán)是飽和或不飽和的，任選用至少一個取代基A3，取代，R6和R′6獨立地表示氫，直鏈或支鏈C1-C20烷基，或具有4至7個原子的基于烴的環(huán)，烷基或基于烴的環(huán)可以是飽和或不飽和的，任選用至少一個取代基A4取代；-R4選自氫，COOR7，CSR7，直鏈或支鏈C1-C20烷基，和分離或連接的具有4至7個原子的環(huán)，烷基和基于烴的環(huán)可以是飽和或不飽和的；在式(II)的情況，R4還表示鹵素，OR7，SR7，NR7R′7，CF3或CN，其中R7和R′7獨立地表示氫，直鏈或支鏈C1-C20烷基或具有4至7個原子的基于烴的環(huán)，烷基或基于烴的環(huán)是飽和或不飽和的，任選用至少一個選自O(shè)R10，SR10，NR10R′10和CF3的取代基取代，其中R10和R′10表示飽和或不飽和的，直鏈或支鏈的C1-C20烷基；-A3和A4獨立地選自鹵素，R9，OR9，SR9，NR9R′9，COOR9和CF3，其中R9和R′9表示氫，飽和或不飽和的，直鏈或支鏈的C1-C20烷基，飽和或不飽和的，具有4至7個原子的基于烴的環(huán)，或芐基。
根據(jù)本發(fā)明另一個實施方案，15-PGDH抑制劑是如上定義的式(I)或(II)的化合物，-R3選自氫，OR6，SR6，NR5R′6，CF3，直鏈或支鏈C1-C20烷基，和分離或連接的具有4至7個原子的基于烴的環(huán)，烷基或基于烴的環(huán)還是飽和或不飽和的，任選用至少一個取代基A3，取代，R6和R′6獨立地表示氫，直鏈或支鏈C1-C20烷基，或具有4至7個原子的基于烴的環(huán)，烷基或基于烴的環(huán)可以是飽和或不飽和的，任選用至少一個取代基A4取代；-R4選自氫，直鏈或支鏈C1-C20烷基，和分離或連接的具有4至7個原子的基于烴的環(huán)，烷基和基于烴的環(huán)還是飽和或不飽和的，任選用至少一個選自O(shè)R10，SR10，NR10R′10和CF3的取代基所取代，其中R10和R′10表示飽和或不飽和的，直鏈或支鏈的C1-C20烷基；-A3和A4獨立地選自鹵素，R9，OR9，SR9，NR9R′9，COOR9和CF3，其中R9和R′9獨立地表示氫，飽和或不飽和的，直鏈或支鏈的C1-C20烷基，飽和或不飽和的，具有4至7個原子的基于烴的環(huán)，或芐基。
可在本發(fā)明中使用的式(I)的四唑化合物的實例，可以提及的有以下化合物化合物11-苯基-2-(2-苯基-2H-四唑-5-基)-乙酮(ethanone) 化合物21-(2-甲氧基苯基)-2-(2-苯基-2H-四唑-5-基)-乙酮 2-乙基-(2-苯基-2H-四唑-5-基)乙酸酯
2-(2-苯基-2H-四唑-5-基)乙酸 1-(3，4，5-三甲氧基苯基)-2-(2-苯基-2H-四唑-5-基)乙酮 4-[2-(2-苯基-2H-四唑-5-基)乙?；鵠苯甲酸 1-(4-苯甲氧基苯基)-2-(2-苯基-2H-四唑-5-基)乙酮 3-甲氧基-1-苯基-(2-苯基-2H-四唑-5-基)丙烷-1-酮
作為可在本發(fā)明中使用的式(II)四唑的化合物的實例，可以提及以下化合物化合物3N-(2-苯基)-2-(5-苯基-2H-四唑-2-基)-乙酰胺 化合物4N-(2-甲氧基苯基)-2-(5-苯基-2H-四唑-2-基)-乙酰胺 N-(4-甲基苯基)-2-{5-[3-(三氟甲基)苯基]-2H-四唑-2-基}-乙酰胺 N-(2-甲氧基苯基)-2-(2H-四唑-2-基)-乙酰胺
2-(5-苯基-2H-四唑-2-基)-乙酰胺 N-(2-甲氧基苯基)-2-[5-(2-萘基)-2H-四唑-2-基)-乙酰胺 N-(2-甲氧基苯基)-2-[5-(4-甲氧基苯基)-2H-四唑-2-基)-乙酰胺 N-(3-羥丙基)-2-(5-苯基-2H-四唑-2-基)-乙酰胺 3-羥基-N-(2-甲氧基苯基)-2-(5-苯基四唑-2-基)-丙酰胺
3-甲氧基-N-(2-甲氧基苯基)-2-(5-苯基四唑-2-基)-丙酰胺 可以已知的方法制備成鹽或未成鹽的式(I)或(II)的化合物。
1)5-乙?；倪虻闹苽?式I)可通過文獻(xiàn)D.Moderhack等，J.Chem.Soc.Perkin Trans.1，2001，720-728.記載的方法制備本發(fā)明式(I)的化合物。
反應(yīng)圖示如下 2)2-乙?；倪虻闹苽?式II)通過使用α-氯羰基化試劑使在5-取代的四唑的烷基化來制備本發(fā)明的式(II)的化合物。這個反應(yīng)特別適合合成5-苯基四唑(相應(yīng)地R4＝苯基)。這種類型的制備對于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是已知的，特別是根據(jù)文獻(xiàn)E.Eindberg，J.Org.Chem.，1970，35，11，3978-3980。
反應(yīng)圖示如下
式(I)或(II)化合物或其鹽的有效量相當(dāng)于獲得所需效果(即增加毛發(fā)和/或體毛和/或皮膚著色)所需的量。因此本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠估算這種有效量，這取決于所使用化合物的性質(zhì)，施用的個體，以及施用的時間的量。
在下文中，除非另外指明，所給出的本發(fā)明組合物中各種成分的量是相對于組合物總重量的重量百分?jǐn)?shù)。
根據(jù)本發(fā)明所給的數(shù)量級，式(I)的化合物或其鹽之一可以以組合物總重量的10-3％至5％的量，優(yōu)選以組合物總重量的10-2％至2％的量，例如0.5％至2％的量使用。
苯基呋喃，苯基噻吩以及苯基吡唑雜環(huán)化合物根據(jù)另一個實施方案，本發(fā)明有益的15-PGDH抑制劑是某些雜環(huán)化合物，特別是某些苯基呋喃，苯基噻吩，苯基吡唑，其可以成鹽或不成鹽。
因此，根據(jù)本發(fā)明可以使用至少一種式(I)的雜環(huán)化合物，或其鹽。
其中-Hy表示具有4，5，6或7個原子的雜環(huán)，任選含有至少一個羰基官能團(tuán)和/或硫代羰基官能團(tuán)，上述雜環(huán)任選用至少一個選自鹵素，基團(tuán)OR，SR，NRR′，COR，CSR，NRCONR′R″，C(＝NR)R′，C(＝NR)NR′NR″，NRC(＝NR)NR′NR″R+，OCOR，COSR，SCOR，CSNRR′，NRCSR′，NRCSNR′R″，COOR，CONRR′，CF3，CN，NRCOR′，SO2R′，SO2NRR′或NRSO2R′，飽和或不飽和的直鏈或支鏈C1-C20烷基，和飽和或不飽和的具有4至7個原子的環(huán)的基團(tuán)所取代，該環(huán)任選含有至少一個雜原子，這些環(huán)可以是分離或連接的，烷基和環(huán)也可以被取代，其中R，R′，R″和R可以是相同或不同的，表示氫，或直鏈或支鏈C1-C20烷基或芳基，芳基任選被取代；
-G表示O，S或NH；-R1，R2和R3相互獨立地表示氫，鹵素，基團(tuán)OR0，SR0，NR0R′0，COR0，CSR0，NR0CONR′0R″0，C(＝NR0)R′0，C(＝NR0)NR′0NR″0，NR0C(＝NR0)NR′0NR″0R+0，OCOR0，COSR0，SCOR0，CSNR0R′0，NR0CSR′0，NR0CSNR′0R″0，COOR0，CONR0R′0，CF3，NO2，CN，NR0COR′0，SO2R′0，SO2NR0R′0或NR0SO2R′0，飽和或不飽和的直鏈或支鏈C1-C20烷基，或至少一個飽和或不飽和的具有4至7個原子的環(huán)，該環(huán)任選含有至少一個雜原子，這些環(huán)可以是分離或連接的，烷基和環(huán)也可以被取代，其中R0，R′0，R″0和R0可以是相同或不同的，表示氫，或直鏈或支鏈C1-C20烷基或芳基，芳基任選被取代。
這些化合物和含有它們的組合物可用于誘導(dǎo)和/或刺激角蛋白纖維，特別是人角蛋白纖維，例如睫毛和人頭發(fā)，和/或皮膚的著色。
本發(fā)明還適用于動物種類中哺乳動物的角蛋白纖維(例如狗，馬或貓)。
本發(fā)明還涉及至少一種式(I)的雜環(huán)化合物，或其鹽在誘導(dǎo)和/或刺激人角蛋白纖維著色的角蛋白纖維化妝護(hù)理組合物和/或化妝品組合物中的化妝用途，還涉及至少一種式(I)的雜環(huán)化合物，或其鹽在制備用于誘導(dǎo)和/或刺激纖維著色的人角蛋白纖維護(hù)理組合物或處理組合物中的用途。
本發(fā)明特別適用的角蛋白纖維是毛發(fā)，眉毛，睫毛，下巴的胡須，上唇的胡須以及陰毛，更優(yōu)選，本發(fā)明適用于人毛發(fā)和/或人睫毛。
本發(fā)明一個主題還是角蛋白纖維(尤其是毛發(fā)或睫毛)和/或人皮膚，包括頭皮和眼瞼的化妝處理方法，特別是用于刺激角蛋白纖維和/或人皮膚著色，其特點在于將含有至少一種有效量的式(I)化合物或其鹽的化妝組合物涂敷于角蛋白纖維和/或皮膚，使上述組合物和角蛋白纖維和/或皮膚接觸，任選地對角蛋白纖維和/或上述皮膚進(jìn)行漂洗。
根據(jù)本發(fā)明，術(shù)語“至少一種”指一種或多種(2，3或更多)。特別地，本發(fā)明組合物可以包含一種或多種式(I)的化合物。這種或這些化合物是順式或反式或Z或E異構(gòu)體或順式/反式異構(gòu)體或Z/E異構(gòu)體的混合物。它們還可以是互變異構(gòu)體的形式。特別地，相對于鄰近的雙鍵，雜環(huán)Hy可以在順式或反式或Z或E的位置，更好在Z位。這種或這些化合物可以是對映異構(gòu)體或非對映異構(gòu)體或這些異構(gòu)體的混合物，尤其是外消旋混合物。
對于本發(fā)明來說，術(shù)語“烷基”指直鏈或支鏈并且飽和或不飽和的基于烴的環(huán)。優(yōu)選烷基包括1至10個碳原子。作為可在本發(fā)明中使用的烷基的實例，可以提及的有甲基，乙基，異丙基，正丁基，叔丁基，正己基，2-乙基己基，次乙基或亞丙基。任選這種取代基是被取代的，尤其用OR0取代，R0是H，飽和或不飽和的，直鏈或支鏈的C1-C20，更好是C1-C10，例如C1-C5烷基。
根據(jù)本發(fā)明，Hy的雜原子是O，N，S，P，Si或Se，尤其是O，N或S。雜環(huán)Hy可以是飽和或不飽和的。此外，它可以含有4，5，6或7個原子以及一個或多個羰基官能團(tuán)或硫代羰基官能團(tuán)或兩種官能團(tuán)都含有，這些官能團(tuán)的碳原子是雜環(huán)的一部分。
在一個特定的實施方案中，Hy表示具有5個原子的芳基，含有作為雜原子的硫，氮或其組合。此外，這種雜環(huán)Hy含有一個或兩個羰基，羰基中的碳原子是雜環(huán)的一部分。作為實例，這種雜環(huán)具有下式(II) 其中Z，Z′和X獨立地表示S或O，R表示H或飽和的，直鏈或支鏈的C1-C10烷基。X還可以表示NH。有利地，Z和Z′表示氧，相當(dāng)于1，3-噻唑烷基-2，4-二酮環(huán)。
根據(jù)本發(fā)明，作為取代基(S1)使用的環(huán)含有4至7個原子，更好是5至6個原子。它們還可以是飽和或不飽和的，并且任選含有一個或多個雜原子例如S，N或O，或其組合。此外，這些環(huán)可以單獨或和化學(xué)結(jié)構(gòu)相同或不同的另外的環(huán)連接。當(dāng)它們連接時，形成稠環(huán)。
作為可以使用的飽和基于烴的環(huán)，可以提及的有環(huán)戊基或環(huán)己基，作為不飽和的基于烴的環(huán)，可以提及的有環(huán)己烯環(huán)或苯環(huán)。作為連接的基于烴的環(huán)，可以提及的有萘基。作為雜環(huán)，可以提及的有吡啶，哌啶，嗎啉，吡咯，呋喃或噻唑環(huán)。此外，這些環(huán)可以用一個或多個具有上文R或R0定義的基團(tuán)取代。
根據(jù)本發(fā)明，式(I)的化合物是隔離型，即非聚合型，它們是苯基呋喃，苯基噻吩或苯基吡咯。此外，R1可以位于3-位或4-位，G在具有5個原子的雜環(huán)的1位。此外，R2和R3可以位于具有它們的苯環(huán)的任何位置，特別是位于相對于下式(A)部分的對位或間位。
優(yōu)選，R1表示氫原子。
有利地，R2和R3至少一個表示CF3，OR0或COOR0，R0是H或飽和或不飽和地，直鏈或支鏈的C1-C20烷基，更好是C1-C10烷基。作為可以使用的烷基的實例，可以提及的有甲基，乙基，叔丁基，異丙基，正丁基或正己基。特別地，COOR0表示COOH或COOCH2-CH3。特別地，OR0表示OH或OCH3。特別地，R2表示COOH或OH以及R3表示H；R2表示COOCH2-CH3以及R3表示H；或R2和R3表示CF3或OCH3。
根據(jù)本發(fā)明，短語“式(I)化合物的鹽”指式(I)化合物的單鹽或雙鹽，或有機(jī)鹽或無機(jī)鹽。
根據(jù)本發(fā)明，作為可使用的無機(jī)鹽，可以提及的有鈉鹽或鉀鹽，還有鋅(zn2+)鹽，鈣(Ca2+)鹽，銅(Cu2+)鹽，鐵(Fe2+)鹽，鍶(Sr2+)鹽，鎂鹽(Mg2+)以及錳(Mn2+)鹽；氫氧化物，碳酸鹽，鹵化物(例如氯化物)，硫酸鹽，硝酸鹽或磷酸鹽。優(yōu)選的鹽是鈉鹽。
根據(jù)本發(fā)明可以使用的有機(jī)鹽是例如三乙醇胺鹽，單乙醇胺鹽，二乙醇胺鹽，十六烷基胺鹽，N，N，N′，N′，-四(2-羥基-丙基)乙二胺鹽或三羥甲基氨基甲烷鹽。
根據(jù)本發(fā)明一個特定的實施方案，本發(fā)明施用的雜環(huán)化合物具有下式(III)，更好是下式(IIIa)或相應(yīng)的鹽的形式(單鹽或二鹽)。
其中Z，Z′和G獨立地表示O或S，R2和R3中至少一個表示CF3，OR0或COOR0，R0是H或飽和或不飽和的，直鏈或支鏈的C1-C20烷基，更好是C1-C10烷基。
特別地，本發(fā)明的一個主題還是下面新的式(IV)的雜環(huán)化合物，或其鹽，特別地該化合物具有抑制15-PGDH和/或保持人毛囊中前列腺素數(shù)量和/或活性的性質(zhì)。
其中，Z，Z′和G獨立地表示O或S，X表示O，NH或S，R表示氫或飽和的直鏈或支鏈的是C1-C10烷基；R2和R3中至少一個表示氫，CN，NO2，CF3，苯基，OR0或COOR0，或飽和的，直鏈或支鏈的C1-C20烷基，更好是C1-C10烷基，任選用OR0取代，R0是H或飽和或不飽和的，直鏈或支鏈的C1-C20烷基，更好是C1-C10烷基，條件是當(dāng)X＝S和Z＝Z′＝G或Z≠Z′時，R2和R3不是COOH。
根據(jù)本發(fā)明的一個特定實施方案，雜環(huán)化合物具有下式(V)的結(jié)構(gòu)式或是相應(yīng)的鹽
其中，Z，Z′和G獨立地表示O或S，R2和R3中至少一個表示苯，NO2，CF3，OR0或COOR0或飽和的，直鏈或支鏈的C1-C20烷基，更好是C1-C10烷基，任選用OR0取代，R0是H或飽和或不飽和的，直鏈或支鏈的C1-C20烷基，更好是C1-C10烷基，條件是當(dāng)X＝S和Z＝Z′＝G或Z≠Z′時，R2和R3不是COOH。
有利地，當(dāng)Z＝Z′＝G，R2和R3中至少有一個表示CF3，OR0或COOR0，R0是飽和的，直鏈或支鏈C1-C10，最好是C1-C5烷基。根據(jù)本發(fā)明另一個優(yōu)選的方案，除了G之外當(dāng)Z＝Z′時，R2和R3中至少有一個表示CF3或COOR0，R0是H。
根據(jù)本發(fā)明的另一個實施方案，該雜環(huán)化合物具有如下的通式(VI)或是相應(yīng)的鹽的形式 其中Z，Z′與G分別表示O或S；R2和R3中至少有一個表示氫，CN，CF3，NO2，OR0，COOR0或飽和的，直鏈或支鏈C1-C20，更好的是C1-C10烷基，任選用OR0取代，R0是H或飽和的，直鏈或支鏈C1-C20，更好的是C1-C10烷基。
根據(jù)本發(fā)明的另一個實施方案，該雜環(huán)化合物具有如下的式(VII)或是相應(yīng)的鹽的形式
其中Z，Z′與G獨立地表示O或S；R表示飽和的，直鏈或支鏈C1-C10烷基；R2和R3中至少一個表示飽和的，直鏈或支鏈C1-C20，更好的是C1-C10烷基，NO2或OR0，R0是H或飽和的，直鏈或支鏈C1-C20，更好的是C1-C10烷基。
優(yōu)選地，本發(fā)明的雜環(huán)化合物是Z形式。
式(I)的化合物或其鹽可以已知方法制備，如文獻(xiàn)WO 01/066541中所述。通式(I)的化合物在室溫下是固體。
苯乙烯吡唑化合物根據(jù)另一個實施方案，本發(fā)明有用的15-PGDH抑制劑包含至少一種苯乙烯吡唑化合物，或其生理上可接受的鹽.
這些化合物符合式(I) 其中-R1，R2，R4與R5可以是相同或不同的，選自氫，鹵素，基團(tuán)OR7，SR7，NR7R’7，COOR7，CONR7R’7，CF3，CN，，NR7COR’7，SO2R7，SO2NR7R’7，NR7SO2R’7，COR7，CSR7，OCOR7，COSR7，SCOR7，CSNR7R’7，NR7CONR’7R″7，NR7C(＝NR’7)NR″7R7，NR7CSR’7或NR7CSNR’7R″7，飽和或不飽和的，直鏈或支鏈C1-C20烷基，以及飽和或不飽和的具有4至7個原子的環(huán)，任選包含至少一個雜原子，這些環(huán)可是分離或連接的，烷基和環(huán)還被至少一個取代基A1取代，R7，R’7，R″7和R7獨立地表示氫，直鏈或支鏈C1-C20烷基或具有4至7個原子的環(huán)，該環(huán)任選包含至少一個雜原子，該環(huán)是單獨的或與另外的環(huán)連接，烷基或上述的環(huán)是飽和或不飽和的，任選用至少一個取代基A2取代；-R3選自CN，COOR8，CONR8R’8，COR8，SO2R8和SO2NR8R’8，R8和R’8獨立地表示氫，直鏈或支鏈的C1-C20烷基或具有4至7個原子的環(huán)，該環(huán)是單獨的或與另外的環(huán)連接，任選含有至少一個雜原子，烷基和上述環(huán)是飽和或不飽和的，任選用至少一個取代基A3取代。
-R6選自氫，基團(tuán)COOR9，COR9，CSR9，COSR9，CONR9R’9，SO2R9或SO2NR9R’9，飽和或不飽和的，直鏈或支鏈的C1-C20烷基，和飽和或不飽和的具有4至7個原子的環(huán)，該環(huán)任選含有至少一個雜原子，這些環(huán)可以是分離或連接的，烷基和環(huán)可以用至少一個取代基A4取代，R9和R’9可以是相同或不同的，表示氫，直鏈或支鏈的C1-C20烷基，或具有4至7個原子的環(huán)，該環(huán)任選含有至少一個雜原子，這些環(huán)是分離的或和相互連接，烷基或上述環(huán)是飽和或不飽和的，任選用至少一個取代基A5取代。
-A1，A2，A3，A4和A5獨立地選自鹵素，基團(tuán)OR10，SR10，NR10R′10，COOR10，CH2COOR10，CONR10R′10，CF3，CN，NR10COR′10，SO2R10，SO2NR10R′10，NR10SO2R′10，COR10，CSR10，OCOR10，COSR10，SCOR7，CSNR10R′10，NR10CONR′10R″10，NR10C(＝NR′10)NR″10R10，NR10CSNR′10R″10或NR10CSR′10，R10，R′10，R″10或R10可以是相同或不同，表示氫，直鏈或支鏈的C1-C20烷基，或具有4至7個原子的環(huán)，該環(huán)任選含有至少一個雜原子，這些環(huán)是分離的或和相互連接，烷基或上述環(huán)是飽和或不飽和的。
本發(fā)明還涉及至少一種如上定義的式(I)的吡唑化合物或其鹽作為誘導(dǎo)和/或刺激角蛋白纖維，特別是人角蛋白纖維如睫毛或人的頭發(fā)，和/或皮膚著色的制劑的用途，特別是化妝用途。
本發(fā)明還可應(yīng)用于動物種類中哺乳動物的角蛋白纖維(例如狗，馬或貓)。
本發(fā)明還涉及至少一種式(I)的吡唑化合物或其鹽在誘導(dǎo)和/或刺激人角蛋白纖維著色和/或皮膚著色的人角蛋白纖維化妝護(hù)理組合物和/或化妝品組合物中的用途，還涉及至少一種式(I)的吡唑化合物或其鹽制備誘導(dǎo)和/或刺激人角蛋白纖維和/或皮膚著色的人角蛋白纖維護(hù)理組合物或處理組合物的用途。
本發(fā)明特別適用的角蛋白纖維是毛發(fā)，眉毛，睫毛，下巴的胡須，上唇的胡須以及陰毛，更優(yōu)選，本發(fā)明適用于人毛發(fā)和/或人睫毛。
本發(fā)明還涉及至少一種式(I)的吡唑化合物或其鹽在促進(jìn)毛發(fā)和/或皮膚著色的人化妝護(hù)發(fā)組合物中的用途。
本發(fā)明的一個主題還涉及至少一種式(I)的吡唑化合物或其鹽在誘導(dǎo)和/或促進(jìn)睫毛著色和/或增加睫毛密度的人睫毛化妝護(hù)理組合物和/或化妝品組合物中的化妝用途，還涉及至少一種式(I)的吡唑化合物或其鹽制備誘導(dǎo)和/或刺激睫毛著色的人睫毛護(hù)理組合物和/或處理組合物的用途。因此，這種組合物可使睫毛保持良好狀態(tài)和/或改善它們的狀態(tài)和/或外觀。
根據(jù)本發(fā)明，術(shù)語“至少一種”至一種或多種(2，3或更多)。特別地，本發(fā)明組合物可以包含一種或多種式(I)的化合物。這種或這些化合物是順式或反式或Z或E位置異構(gòu)體或順式/反式異構(gòu)體或Z/E異構(gòu)體的混合物。特別地，相對于吡唑環(huán)，芳基可以在順式或反式或Z或E位置，更好在Z位。這種或這些化合物還可以是互變異構(gòu)體的形式。它們還可以是對映異構(gòu)體或非對映異構(gòu)體或這些異構(gòu)體的混合物，尤其是外消旋混合物。
根據(jù)本發(fā)明，R1至R10，R′7，R″7，R7，R′8，R″8，R8，R′9，R″9，R9，R′10，R″10和R10所使用的環(huán)含有4至7個原子，更好是5至6個原子。它們可以是飽和或不飽和的，任選可含有一個或多個雜原子如S，N或O或其組合。它們是獨立的或與另外的環(huán)連接，這些環(huán)相同或不同。作為可使用的飽和碳環(huán)，可以提及的有環(huán)戊基或環(huán)己基。作為雜環(huán)，可以提及的有吡啶，哌啶，嗎啉，吡咯，呋喃以及噻唑環(huán)。作為不飽和的碳環(huán)，可以提及的有苯基或萘基。此外，這些環(huán)可用具有上文A1定義的取代基取代。有利地，當(dāng)R6含有一個或多個雜原子，吡唑環(huán)的氮鍵以N-C鍵的形式存在。
根據(jù)本發(fā)明的一個實施方案，烷基或芳基具有的取代基即A1至A5是鹵原子，特別是氯，溴，碘或氟原子，優(yōu)選氯原子，或是直鏈或支鏈的C1-C20烷基或全氟烴基。作為可以使用的全氟烴基的實例，可以提及CF3。
對于本發(fā)明來說，術(shù)語“烷基”指直鏈或支鏈，飽和或不飽和的基于烴的基團(tuán)。優(yōu)選，烷基含有1至10個碳原子。
作為本發(fā)明可以使用的烷基的實例，可以提及的有甲基，乙基，異丙基，正丁基，正己基，2-乙基己基，次乙基或亞丙基。
根據(jù)本發(fā)明，式(I)的化合物(或其鹽)是隔離型，即非聚合型。此外，R1和R2可以位于苯環(huán)的任何位置，尤其是相對于吡唑部分支鏈的鄰位。
有利地，R1和R2不同時表示OR7。
優(yōu)選地，R1和R2中至少一個表示氫原子，OR7，CF3或鹵素原子，特別是氯原子。R7表示C1-C10烷基，例如甲基。特別地，R1和/或R2表示鹵原子，特別是氯原子。
有利地，R3表示CN，COOR8，CONR8R′8或COR8，例如CN。
根據(jù)本發(fā)明的一個實施方案，R4，R5和R6相互獨立地表示C1-C10烷基，任選用OR10如CH2CH2OR10，NH2，H或CN取代，或是飽和或不飽和的基于烴的環(huán)，例如苯環(huán)，例如R10表示H。有利地，R6表示CH2CH2OR10，特別是CH2CH2OH，或苯基。優(yōu)選R4表示NH2或H。根據(jù)一個有利的實施方案，R5表示CN或H。
根據(jù)本發(fā)明，短語“式(I)化合物的鹽”指式(I)化合物的有機(jī)鹽或無機(jī)鹽。
作為本發(fā)明可使用的無機(jī)鹽，可以提及的有鈉鹽或鉀鹽，還有鋅(zn2+)鹽，鈣(Ca2+)鹽，銅(Cu2+)鹽，鐵(Fe2+)鹽，鍶(Sr2+)鹽，鎂鹽(Mg2+)以及錳(Mn2+)鹽；氫氧化物，碳酸鹽，鹵化物(氯化物)，硫酸鹽，硝酸鹽或磷酸鹽。
根據(jù)本發(fā)明可以使用的有機(jī)鹽是例如三乙醇胺鹽，單乙醇胺鹽，二乙醇胺鹽，十六烷基胺鹽，N，N，N′，N′，-四(2-羥基-丙基)乙二胺鹽或三羥甲基氨基甲烷鹽。
根據(jù)本發(fā)明一個特定的實施方案，本發(fā)明施用的吡唑化合物具有式(II)或是其鹽
其中-R1，R2，R4與R5獨立地表示H，鹵素OR7，SR7，NR7R’7，COOR7，CONR7R’7，CF3或CN，飽和或不飽和的C1-C10烷基，或飽和或不飽和的環(huán)，它是單獨的或和另外的環(huán)連接，該環(huán)任選包含至少一個雜原子，烷基和環(huán)可用至少一個取代基A1取代，R7和R’7獨立地表示氫，直鏈或支鏈C1-C10烷基或環(huán)，它是單獨的或和另外的環(huán)連接。
-R3表示CN，COOR8，CONR8，CONR8R’8或COR8，R8和R’8獨立地表示氫，C1-C10烷基或環(huán)，該環(huán)是單獨的或和另外的環(huán)連接，該環(huán)任選含有至少一個雜原子，上述環(huán)是飽和或不飽和的，任選用至少一個A1取代基取代.
-R6表示氫，COOR9，COR9，飽和或不飽和的C1-C10烷基，或飽和或不飽和的環(huán)，該環(huán)是單獨的或與另外的環(huán)連接，該環(huán)任選含有至少一個雜原子，烷基和環(huán)可以用至少一種取代基A1取代基取代，R9和R’9獨立地表示氫，C1-C20烷基，環(huán)，該環(huán)是單獨的或與另外的環(huán)連接；-環(huán)具有5至6個原子；-雜原子是O，N或S或其組合。
有利地，式(I)或(II)的化合物是Z型。
根據(jù)本發(fā)明的另一個實施方案，吡唑化合物具有式(III)或是其鹽
R7表示a)飽和或不飽和，直鏈或支鏈C1-C10烷基，任選用至少一個取代基A1取代；或b)飽和或不飽和的具有4至7個原子的環(huán)C1，該環(huán)任選含有至少一個雜原子和/或任選用至少一種取代基A1取代和/或與至少一個飽和或不飽和的具有4至7個原子的環(huán)C2連接，該環(huán)任選含有一個雜原子；R2表示-OR7，SR7，NR7R′7，COOR7，CONR7R′7，CF3，CN，NR7COR′7，SO2R7，SO2NR7R′7，NR7SO2R′7，COR7，CSR7，OCOR7，COSR7，SCOR7，CSNR7R′7，NR2CONR′7R″7，NR7C(＝NR′7)NR″7R7，NR7CSR′7或NR7CSNR′7R″7，飽和或不飽和的C1-C10烷基，或飽和不飽和的環(huán)C3，它是單獨的或與另外的環(huán)C4連接，該環(huán)任選含有至少一個雜原子，烷基和環(huán)可用至少一個取代基A1取代，R7和R′7相同或不同，表示-氫原子或飽和或不飽和，直鏈或支鏈C1-C10烷基，-C5芳基，任選包括至少一個雜原子，任選用至少一個取代基A2取代；和雜原子選自N，O或S或其組合。
由于式(III)的化合物或其鹽是新的，本發(fā)明的一個主題還是式(III)的苯乙烯吡唑化合物或其鹽。
有利地，R2表示OR7，R7表示飽和的C1-C10烷基如甲基。
作為可在本發(fā)明中使用的式(I)的吡唑化合物的實例，可以提及以下化合物化合物1
化合物2 化合物3 化合物4
化合物5 式(I)的化合物或其鹽中有些是已知的，可通過苯甲醛縮合制備，任選用具有活化的亞甲基的取代吡唑，用具有腈，酸，酯，酰胺或酮官能團(tuán)之一的取代吡唑進(jìn)行取代。同時通過共沸蒸餾和安裝“Dean-Stark”裝置除去水。根據(jù)文獻(xiàn)EP 0 245 825這種類型的制備對于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是已知的。這些組合物以固體的形式，特別是粉狀的形式或液體形式存在。
在下文中，除非另外指明，所給出的本發(fā)明組合物中各種成分的量是相對于組合物總重量的重量百分?jǐn)?shù)。
根據(jù)本發(fā)明所給的數(shù)量級，式(I)的化合物或其鹽可以以組合物總重量的10-3％至105％的量，優(yōu)選以組合物總重量的10-3％至5％的量，更好是以組合物總重量的10-2％至2％的量，例如0.5％至2％的量使用。
吡唑羧酰胺化合物根據(jù)另一個實施方案，本發(fā)明有益的15-PGDH抑制劑包括至少一種式(I)的吡唑化合物或是其鹽
其中·R1和R2獨立選自-氫，-飽和或不飽和，直鏈或支鏈的C1-C20烷基，任選用至少一個取代基T1，-飽和或不飽和的含有至少一個選自O(shè)，N或S的雜原子的環(huán)，飽和的基于烴的環(huán)，這些環(huán)含有4至7個原子，任選是連接的，含有羰基或硫代羰基官能團(tuán)和/或被至少一種選自A和R的取代基T2取代，R1和R2和它們連接的氮原子還可形成具有4至7個原子的雜環(huán)；·R3和R5獨立選自-氫，-A；-鹵素；-基團(tuán)OR6，SR6，NR6R′6，CN，CF3，COR6，CSR6，COOR6，COSR6，CSSR6，NR6COR’6，NR6CSR’6，OCOR6，SCOR6，CSNR6R’6，SO2R6，SO2NR6R’6，NR6SO2R’6，NR6C(＝NR’6)NR″6R+6和SiR6R’6R″6，-飽和或不飽和的含有4至7個原子的環(huán)，任選含有至少一個選自O(shè)，N或S的雜原子，任選這些環(huán)是可連接的，含有羰基或硫代羰基官能團(tuán)和/或被至少一個選自A和R的取代基T3取代，·R4選自-氫，-A，-基團(tuán)COR6，CSR6，COOR6，CONR6R’6，CSNR6R’6，SO2R6和SO2NR6R’6，-飽和或不飽和的基于烴的具有4至7個原子的環(huán)，具有5個原子的含有1至4個雜原子的雜環(huán)，具有6個原子的含有1至3個非相鄰雜原子的雜環(huán)，具有4或7個原子的含有1至3個雜原子的雜環(huán)，雜原子選自O(shè)，N或S，這些雜環(huán)是飽和或不飽和的，上述環(huán)和上述雜環(huán)任選是連接的，含有羰基或硫代羰基官能團(tuán)和/或被至少一種選自A和R的取代基T4取代；·R6，R′6，R″6和R+6選自-氫，-飽和或不飽和，直鏈或支鏈的C1-C20烷基，任選用至少一個取代基R′取代，-飽和或不飽和的具有4至7個原子的環(huán)，任選含有至少一個選自O(shè)，N或S的雜原子的環(huán)，這些環(huán)任選是連接的，含有羰基或硫代羰基官能團(tuán)和/或被至少一種取代基R取代；·R選自-飽和或不飽和，直鏈或支鏈的C1-C20烷基，-鹵素，-基團(tuán)OR7，SR7，NR7R’7，CN，CF3，COR7，CSR7，COOR7，COSR7，CSOR7，CSSR7，NR7COR’7，NR7CSR’7，OCOR7，SCOR7，CSNR7R’7，SO2R7，SO2NR7R’7，NR7SO2R’7，NR7C(＝NR’7)NR″7R7和SiR7R’7R″R7，·R′選自-飽和或不飽和，直鏈或支鏈的C1-C20烷基，-鹵素，-基團(tuán)OR7，SR7，NR7R’7，CN，CF3，COR7，CSR7，COOR7，COSR7，CSOR7，CSSR7，NR7COR’7，NR7CSR’7，OCOR7，SCOR7，CSNR7R’7，SO2R7，SO2NR7R’7，NR7SO2R’7，NR7C(＝NR’7)NR″7R7和SiR7R’7R″7，-飽和或不飽和的具有4至7個原子的環(huán)，任選含有至少一個選自O(shè)，N或S的雜原子，這些環(huán)任選是連接的和/或含有羰基和/或硫代羰基官能團(tuán)；·R7，R′7，R″7和R7獨立地表示氫或飽和或不飽和，直鏈或支鏈的C1-C20烷基；·A表示飽和或不飽和，直鏈或支鏈的C1-C20烷基，任選用至少一個取代基T5取代，T5選自R′和飽和或不飽和的具有4至7個原子的環(huán)，任選含有至少一個選自O(shè)，N或S的雜原子的環(huán)，這些環(huán)任選是連接的，含有羰基和/或硫代羰基官能團(tuán)和/或被至少一種取代基R取代；·T1選自O(shè)R6，SR6，NR6R’6，CN，CF3，COR6，CSR6，COOR6，COSR6，CSOR6，CSSR6，NR6COR’6，NR6CSR’6，OCOR6，SCOR6，CSNR6R’6，SO2R6，SO2NR6R’6，NR6SO2R’6，NR6C(＝NR’6)NR″6R6和SiR6R’6R″6，鹵素，飽和或不飽和的具有4至7個原子的環(huán)，任選含有至少一個選自O(shè)，N或S的雜原子環(huán)，這些環(huán)任選是連接的，含有羰基或硫代羰基官能團(tuán)以及被至少一個取代基R取代；本發(fā)明還涉及至少一種如上定義的式(I)的吡唑化合物或其鹽作為誘導(dǎo)和/或刺激角蛋白纖維，特別是人角蛋白纖維如人毛發(fā)和睫毛，和/或皮膚著色的制劑的用途。
本發(fā)明還可應(yīng)用于動物種類中哺乳動物的角蛋白纖維(例如狗，馬或貓)。
本發(fā)明還涉及至少一種式(I)的吡唑化合物或其鹽在誘導(dǎo)和/或刺激人角蛋白纖維著色的人角蛋白纖維化妝護(hù)理組合物和/或化妝品組合物中的用途，還涉及至少一種至少一種式(I)的吡唑化合物或其鹽在制備誘導(dǎo)和/或刺激人角蛋白纖維著色的人角蛋白纖維護(hù)理組合物或處理組合物中的用途。
本發(fā)明特別適用的角蛋白纖維是毛發(fā)，眉毛，睫毛，下巴的胡須，上唇的胡須以及陰毛，更優(yōu)選，本發(fā)明適用于人毛發(fā)和/或人睫毛。
本發(fā)明還涉及至少一種式(I)的吡唑化合物或其鹽在減少灰發(fā)和/或增加著色的人化妝護(hù)發(fā)組合物中的化妝用途。本發(fā)明的一個主題還是至少一種式(I)的吡唑化合物或其鹽在制備誘導(dǎo)和/或刺激毛發(fā)著色和/或減少毛發(fā)變白的人毛發(fā)組合物中的用途。
特別地，本發(fā)明的一個主題是式III的新吡唑羧酰胺化合物或其鹽
其中R8表示OH或-S-(CH2)m-R9，R9表示H或Hy；T4表示H或4-COOH；n表示從1到10的整數(shù)，m表示從1到10的整數(shù)；Hy表示具有4-7個原子的雜環(huán)。
在下文中，除非明確提及，使用的術(shù)語“式(I)的化合物”應(yīng)該理解為酸、堿形式的式(I)的化合物，及其鹽。
根據(jù)本發(fā)明，術(shù)語“至少一種”指一種或多種(2，3或更多)。特別地，本發(fā)明組合物可以包含一種或多種式(I)的化合物。這種或這些化合物是順式或反式或Z或E異構(gòu)體或順式/反式異構(gòu)體或Z/E異構(gòu)體的混合物。它們還可以是互變異構(gòu)體的形式。這種或這些化合物還可以是對映異構(gòu)體或非對映異構(gòu)體或這些異構(gòu)體的混合物，尤其是外消旋混合物。
根據(jù)本發(fā)明，R1，R2，R3，R4，R5，R6，R′6，R″6，R6，R′，T1和T5所使用的環(huán)獨立地含有4至7個原子，更好是5至6個原子。它們可以是飽和或不飽和的，任選可含有一種或多個雜原子如S，N或O或其組合。作為可使用的飽和碳環(huán)，可以提及的有環(huán)戊基或環(huán)己基。作為雜環(huán)，可以提及的有吡啶，哌啶，嗎啉，吡咯，呋喃，噻吩，咪唑，噁唑，噻唑，吡唑，嘧啶，吡嗪或噠嗪環(huán)。作為不飽和的碳環(huán)，可以提及的有苯基。此外，特別地，這些環(huán)可用取代基例如A或R取代。此外，R1與R2和它們連接的氮原子可形成含有4至7個原子的雜環(huán)，更好是5至6個原子，含有1至3個選自O(shè)，N或S的雜原子。
對于R4，可以使用吡啶，哌啶，嗎啉，吡咯，呋喃，噻吩，咪唑，噁唑，噻唑，吡唑，嘧啶，吡嗪或噠嗪環(huán)作為雜環(huán)。
此外，這些環(huán)(或雜環(huán))是單獨或和化學(xué)結(jié)構(gòu)相同或不同的其他環(huán)連接，因此可形成稠環(huán)。作為稠環(huán)，可以提及萘基，苯并呋喃，苯并噻吩或吲哚基。
對于本發(fā)明來說，術(shù)語“烷基”指基于烴的直鏈或支鏈，飽和或不飽和的基團(tuán)。特別地，烷基含有1至10個碳原子。
作為本發(fā)明可使用的烷基的實例，可以提及甲基，乙基，異丙基，正丁基，叔丁基，正己基，2-乙基己基，次乙基或亞丙基。
作為鹵原子，可以提及氯，氟或溴原子，更好是氟和氯原子。
根據(jù)本發(fā)明，式(I)的化合物是隔離型，即非聚合型。
根據(jù)本發(fā)明一個特定的實例，吡唑羧酰胺化合物具有式(II)或是其鹽 其中·R1和R2獨立選自-氫，-飽和或不飽和，直鏈或支鏈的C1-C20烷基，任選用至少一個取代基T1取代，R1與R2和它們連接的氮原子還可形成含有4至7個原子的雜環(huán)，·R3和R5獨立選自-氫，-A，-鹵素；-基團(tuán)OR6，SR6，NR6R’6，CN，CF3，COOR6，-飽和或不飽和的含有4至7個原子的環(huán)，任選含有至少一個選自O(shè)，N或S的雜原子，任選這些環(huán)是連接的和/或被至少一種選自A和R的取代基T3取代，·R4選自-氫，
-A，-基團(tuán)COR6，COOR6，-飽和或不飽和的基于烴的具有4至7個原子的環(huán)，這些環(huán)任選可被至少一種選自A和R的取代基T4取代；·R6和R′6選自-氫，-飽和或不飽和，直鏈或支鏈的C1-C20烷基，任選用至少一個取代基R′取代，-飽和或不飽和的具有4至7個原子的環(huán)，任選含有至少一個選自O(shè)，N或S的雜原子的環(huán)，這些環(huán)任選是連接的和/或被至少一種取代基R取代；·R選自-飽和或不飽和，直鏈或支鏈的C1-C20烷基，-鹵素，-基團(tuán)OR7，SR7，NR7R’7，CN，CF3，COOR7；·R’選自-飽和或不飽和，直鏈或支鏈的C1-C20烷基，-鹵素，-基團(tuán)OR7，SR7，NR7R’7，CN，CF3，COOR7，-飽和或不飽和的具有4至7個原子的環(huán)，任選含有至少一個選自O(shè)，N或S的雜原子，這些環(huán)任選是連接的；·R7和R′7獨立地表示氫或飽和或不飽和，直鏈或支鏈的C1-C20烷基；·A表示飽和或不飽和，直鏈或支鏈的C1-C20烷基，任選用至少一個取代基T5取代，T5選自鹵素，基團(tuán)OR7，SR7，NR7R’7，CN，CF3，COOR7，飽和或不飽和的具有4至7個原子的環(huán)，任選含有至少一個選自O(shè)，N或S的雜原子，這些環(huán)任選是連接的和/或被至少一個取代基R取代；·T1選自O(shè)R6，SR6，NR6R’6，CN，CF3，COOR6，鹵素，飽和或不飽和的具有4至7個原子的環(huán)，任選含有至少一個選自O(shè)，N或S的雜原子，這些環(huán)任選是連接的和被至少一種取代基R取代。
根據(jù)本發(fā)明的一個實施方案，R1和R2中至少一個表示飽和C1-C20，更好是C1-C10烷基，烷基用SR6或OH取代。特別地，R6表示C1-C20，更好是C1-C10烷基，烷基任選用具有4至7個原子的雜環(huán)Hy取代。例如，R1和R2中至少一個表示基團(tuán)(CH2)nSnR8，R8表示OH或-S-(CH2)mR9，R9表示H或Hy(CH2)Hy，n和m分別表示從1至20的整數(shù)，更好是1至10。特別地，R1表示氫，R2表示(CH2)mS(CH2)mR9Hy，n值為2，m值為1。Hy表示具有5個原子地雜環(huán)，含有例如作雜原子的氧，例如呋喃。
有利地，R3和R5中至少一個表示CF3，特別地，R3表示CF3，R5表示H。
根據(jù)一個特定實施方案，R4表示基于烴的含有5至6個原子的環(huán)，特別地該環(huán)是不飽和的，尤其是苯基，任選用T4取代，例如用4-COOH取代。
根據(jù)本發(fā)明的一個特定的實施方案，吡唑羧酰胺化合物具有式(III)或是其鹽 其中，R8表示OH或-S-(CH2)mR9，R9表示H或Hy(CH2)Hy，T4表示H或4-COOH，n和m每個獨立地表示從1至10的整數(shù)，更好是1至5。Hy表示雜環(huán)，特別是具有5至6個原子的雜環(huán)。
根據(jù)本發(fā)明，短語“式(I)化合物的鹽”指式(I)化合物的有機(jī)鹽或無機(jī)鹽。
作為本發(fā)明可使用的無機(jī)鹽，可以提及的有鈉鹽或鉀鹽，還有鋅(zn2+)鹽，鈣(Ca2+)鹽，銅(Cu2+)鹽，鐵(Fe2+)鹽，鍶(Sr2+)鹽，鎂鹽(Mg2+)，錳(Mn2+)鹽，銨鹽，氫氧化物，碳酸鹽，鹵化物，氯化物，硫酸鹽，磷酸鹽或硝酸鹽。
根據(jù)本發(fā)明可以使用的有機(jī)鹽是例如三乙醇胺鹽，單乙醇胺鹽，二乙醇胺鹽，十六烷基胺鹽，N，N，N′，N′，-四(2-羥基-丙基)乙二胺鹽或三羥甲基氨基甲烷鹽。
式(I)的化合物可是成鹽或未成鹽，它們中的一些是已知的。它們可以以已知的方法制備，特別地如文獻(xiàn)T.W.Waldrep等.，J.Agr.Food Chem.，1990，38，541-544所述。它們可是固體形式，特別是粉狀形式。
根據(jù)本發(fā)明所給的數(shù)量級，式(I)的化合物或其鹽或式(I)化合物和/或其鹽地混合物可以組合物總重量的10-3％至10％的量，優(yōu)選以組合物總重量的10-3％至5％的量，更好是以組合物總重量的10-2％至2％的量，例如0.5％至2％的量使用。
本發(fā)明組合物適合化妝用或藥用。優(yōu)選地，本發(fā)明組合物適合化妝用。因此本發(fā)明組合物應(yīng)該含有無毒生理可接受的介質(zhì)，該介質(zhì)可涂敷于皮膚，包括頭皮和眼瞼，或涂敷于人角蛋白纖維。對于本發(fā)明來說，術(shù)語“化妝用”指具有令人舒適地外觀，氣味和感覺的組合物。
式(I)化合物可以成鹽或未成鹽，可在可吞咽，可注射或可涂敷于皮膚或角蛋白纖維(涂敷于皮膚或被處理纖維的任何區(qū)域)的組合物中使用。
根據(jù)本發(fā)明，式(I)的化合物可以以每天0.1至300mg的量，5至10mg/天的量口服。
優(yōu)選的本發(fā)明組合物是化妝用組合物，尤其是局部涂敷于皮膚和角蛋白纖維，更優(yōu)選涂敷于頭皮，毛發(fā)以及睫毛的組合物。
本發(fā)明的組合物可以是任何適于上述使用方法的已知的藥劑形式。
2-亞烷基氨基氧代乙酰胺化合物另外根據(jù)另一個方面，本發(fā)明有利的15-PGDH抑制劑包括某些2-亞烷基氨基氧代乙酰胺化合物，特別是某些噻吩-或呋喃-氨基氧代乙酰胺，它們可以是成鹽或未成鹽的。因此本發(fā)明的一個主題還是至少一種式(I)的2-亞烷基氨基氧代乙酰胺化合物或其鹽的用途
其中a)R1和R2獨立選自1)飽和或不飽和的，直鏈或支鏈的C1-C20烷基，任選用至少一個取代基T1取代，T1選自■鹵素，■基團(tuán)CF3，CN，OR，SR，NRR’，NRC(＝NR’)NR″R+，COR，CSR，COOR，CONRR’，NRCOR’，NRCOR’R″，SO2NRR’，NRSO2R’，SO2R和SiRR’R″，■飽和或不飽和的含有4至7個原子的環(huán)，任選含有至少一個雜原子以形成雜環(huán)Hy，這些環(huán)任選是連接的，含有羰基或硫代羰基官能團(tuán)和/或被至少一個取代基T2取代，2)飽和或不飽和的具有4至7個原子的環(huán)，任選含有至少一個雜原子以形成雜環(huán)Hy，這些環(huán)任選是連接的，含有羰基或硫代羰基官能團(tuán)和/或被至少一個取代基T3取代，T3選自■鹵素，■基團(tuán)CF3，CN，OR，SR，NRR’，NRC(＝NR’)NR″R+，COR，CSR，COOR，CONRR’，NRCOR’，NRCOR’R″，SO2NRR’，NRSO2R’，SO2R，SiRR’R″，■飽和或不飽和的，直鏈或支鏈的C1-C20烷基，任選用至少一個取代基T1取代，■飽和或不飽和的含有4至7個原子的環(huán)，任選含有至少一個雜原子以形成雜環(huán)Hy，這些環(huán)任選是連接的，含有羰基或硫代羰基官能團(tuán)和/或被至少一個取代基T2取代，如果當(dāng)R1和R2都是雜環(huán)Hy，那么至少一個雜環(huán)通過碳和式(I)的N1連接；3)基團(tuán)CN，C(＝NR)R’，C(＝NR)NR’R″，COR，CSR，COOR，CONRR’；
4)R1還可以是氫原子或基團(tuán)SO2R或SO2NRR’；5)R1和R2還可以形成雜環(huán)Hy，任選用至少一個取代基取代基T2取代，任選與芳基，或與飽和或不飽和的，具有4至7個原子以及可含有羰基或硫代羰基官能團(tuán)的碳環(huán)連接，或與另一個雜環(huán)Hy連接。
b)R3和R4獨立選自1)直鏈或支鏈的C1-C20烷基，或具有4至7個原子的碳環(huán)，碳環(huán)可含有羰基或硫代羰基官能團(tuán)，這些烷基或這些環(huán)是飽和或不飽和的，任選用至少一個取代基T4取代，T4選自■鹵素，■基團(tuán)CF3，CN，OR，SR，NRR’，NRC(＝NR’)NR″R+，COR，CSR，COOR，CONRR’，NRCOR’，NRCOR’R″，SO2NRR’，NRSO2R’，SO2R和SiRR’R″，■芳基或雜環(huán)Hy，這些基團(tuán)和雜環(huán)任選用至少一個取代基T2取代，任選與芳基或碳環(huán)連接，碳環(huán)是飽和或不飽和的，具有4至7個原子，含有羰基或硫代羰基官能團(tuán)，或與另一個雜環(huán)Hy連接；2)芳基或雜環(huán)Hy，這些芳基和雜環(huán)任選與任何芳基或碳環(huán)連接，碳環(huán)是飽和或不飽和的，具有4至7個原子，可含有羰基或硫代羰基官能團(tuán)，或與雜環(huán)Hy連接，這些芳基，這種碳環(huán)或這些雜環(huán)Hy任選用至少一個取代基T3取代；3)基團(tuán)CF3，CN，OR，SR，NRR’，NRC(＝NR’)NR″R+，COR，CSR，COOR，CH2COOR，CONRR’，NRCOR’，NRCOR’R″，SO2NRR’，NRSO2R’，SO2R，SiRR’R″；4)R3和R4還可以是氫原子；C)R，R′，R″和R+可以是相同或不同，表示下面的基團(tuán)之一·氫，·飽和或不飽和的，直鏈或支鏈的C1-C20烷基，任選用至少一個取代基T2取代，·飽和或不飽和的含有4至7個原子的環(huán)，任選含有至少一個雜原子以形成雜環(huán)Hy，這些環(huán)任選是連接的，含有羰基或硫代羰基官能團(tuán)和/或被至少一個取代基T2取代，；d)T2表示·飽和或不飽和的，直鏈或支鏈的C1-C20烷基，任選用至少一個取代基T2取代，·鹵素，·選自CF3，CN，OR5，SR5，NR5R6，NR5C(＝NR6)NR7R8，COR5，CSR5，COOR5，CH2COOR5，CONR5R6，NR5COR6，NR5COR5R7，SO2NR5R6，NRSO2R5，SO2R5，SiR5R6R7的基團(tuán)，其中R5，R6，R7和R8可以是相同或不同，表示氫或飽和或不飽和的直鏈或支鏈的C1-C20烷基，·芳基或雜環(huán)Hy，任選與芳基或碳環(huán)連接，碳環(huán)是飽和或不飽和的，具有4至7個原子，或和另一個雜環(huán)Hy連接；e)Hy表示飽和或不飽和的具有4至7個原子的雜環(huán)，其含有1至4個選自N，O或S的雜原子，和/或可以含有羰基或硫代羰基官能團(tuán)。
本發(fā)明還適用于動物種類中哺乳動物的角蛋白纖維(例如狗，馬，羊或貓)。
本發(fā)明還涉及至少一種式(I)的氧代乙酰胺化合物，或其鹽在誘導(dǎo)和/或刺激人角蛋白纖維著色，或減少人角蛋白纖維變白的人角蛋白纖維化妝護(hù)理組合物和/或化妝品組合物中的化妝用途，還涉及至少一種式(I)的化合物，或其鹽在制備誘導(dǎo)和/或刺激角蛋白纖維著色和/或減少頭發(fā)變白的角蛋白纖維護(hù)理組合物或處理組合物中的用途。
本發(fā)明特別適用的角蛋白纖維是頭發(fā)，眉毛，睫毛，下巴的胡須，上唇的胡須以及陰毛，更優(yōu)選，本發(fā)明適用于人頭發(fā)和/或人睫毛。
因此，本發(fā)明一個主題還涉及角蛋白纖維護(hù)理或化妝品組合物，特別是局部涂敷的護(hù)發(fā)或睫毛膏組合物，含有生理可接受的介質(zhì)和有效量的至少一種如上所述的式(I)的化合物或其鹽。
本發(fā)明還涉及至少一種如上定義的式(I)的2-亞烷基氨基氧代乙酰胺化合物或其鹽作為誘導(dǎo)和/或刺激角蛋白纖維，特別是人膠蛋白纖維，和/或皮膚著色的制劑的用途，特別是化妝用途。
在下文中，除非另外明確提及，使用的術(shù)語“式(I)的化合物”應(yīng)理解為中性，酸或堿形式，以及鹽形式的式(I)的化合物根據(jù)本發(fā)明，術(shù)語“至少一種”至一種或多種(2，3或更多)。特別地，本發(fā)明組合物可以包含一種或多種式(I)的化合物。這種或這些化合物是順式或反式或Z或E位置異構(gòu)體或順式/反式異構(gòu)體或Z/E異構(gòu)體的混合物。它們還可以是互變異構(gòu)體的形式。這種或這些化合物可以是對映異構(gòu)體和/或非對映異構(gòu)體或這些異構(gòu)體的混合物，尤其是外消旋混合物。
對于本發(fā)明來說，術(shù)語“烷基”指直鏈或支鏈，飽和或不飽和的基于烴的環(huán)。優(yōu)選烷基包括1至10個碳原子。
根據(jù)本發(fā)明，R1，R2，R3，R4，R5，R6，R7，R8，R′，R″，R+，T1，T2和T3所使用的環(huán)含有4至7個原子，更好是5至6個原子。它們可以是飽和或不飽和的，可含有一個或多個雜原子如S，N或O或其組合。環(huán)還可含有一個或多個羰基或硫代羰基官能團(tuán)或兩者都含有，這些官能團(tuán)的碳是雜環(huán)的一部分。作為可使用的飽和碳環(huán)，可以提及的有環(huán)丁基，環(huán)戊基，環(huán)己基或環(huán)庚基。作為雜環(huán)Hy，可以提及的有吡啶，哌啶，嗎啉，吡咯，呋喃，噻吩，咪唑，噁唑，噻唑，吡唑，嘧啶，哌嗪，吡嗪，噠嗪，三嗪，吡咯烷或噻唑烷環(huán)。作為不飽和碳環(huán)，可以提及的有環(huán)己烯基或苯環(huán)，作為芳基，可以提及苯基或萘基。此外，特別地這些環(huán)可用取代基T2取代。
此外，這些環(huán)是單獨或與另一個化學(xué)結(jié)構(gòu)相同或不同的環(huán)連接，因此形成稠環(huán)。
對于R1至R8以及R，R′，R″和R+的所有定義，飽和或不飽和碳環(huán)或具有4，5，6或7個原子地雜環(huán)的某些碳原子還可以是羰基或硫代羰基官能團(tuán)的一部分，例如 其中R1和R2形成雜環(huán)，例如這種雜環(huán)是吡咯烷，吡唑，咪唑，三唑，哌啶，嗎啉，哌嗪或四唑環(huán)。
作為可在本發(fā)明使用的烷基的實例，可以提及的有甲基，乙基，異丙基，正丁基，叔丁基，正己基，2-乙基己基或可選地次乙基或亞丙基。任選這種基團(tuán)可以用一個或多個取代基T4取代，T4例如選自O(shè)R和COOR。
作為鹵素原子，可以提及的有氯，氟或溴原子，更好是氟原子以及氯原子。
根據(jù)本發(fā)明，式(I)的化合物是隔離型，即非聚合型。
根據(jù)本發(fā)明，R3至R4至少一個表示飽和的C1-C20烷基，更好是C1-C10烷基，例如甲基或乙基，或雜環(huán)Hy。例如R3和R4至少一個表示飽和的C1-C20烷基，另一個表示雜環(huán)Hy。特別地，R3表示甲基或乙基，而R4表示具有5個原子的雜環(huán)。例如Hy表示具有5個原子的雜環(huán)，含有例如做雜原子的硫或氧，例如噻吩或呋喃。
有利地，R1和R2至少一個表示氫原子，飽和或不飽和的碳環(huán)，特別是芳基基。特別地，R2表示氫而R1表示苯基，任選用烷基或烷氧基如甲氧基取代。
根據(jù)本發(fā)明，術(shù)語“式(I)化合物的鹽”指式(I)化合物的單鹽或雙鹽，或有機(jī)鹽或無機(jī)鹽。
作為本發(fā)明可使用的無機(jī)鹽，可以提及的有鈉鹽或鉀鹽，還有鋅(zn2+)鹽，鈣(Ca2+)鹽，銅(Cu2+)鹽，鐵(Fe2+)鹽，鍶(Sr2+)鹽，鎂鹽(Mg2+)，銨鹽以及錳(Mn2+)鹽，氫氧化物，碳酸鹽，鹵化物，硫酸鹽，硝酸鹽或磷酸鹽。
根據(jù)本發(fā)明可以使用的有機(jī)鹽是例如三乙醇胺鹽，單乙醇胺鹽，二乙醇胺鹽，十六烷基胺鹽，N，N，N′，N′，-四(2-羥基-丙基)乙二胺鹽或三羥甲基氨基甲烷鹽。
式(I)的化合物可成鹽或未成鹽，是已知的，可通過已知的方法制備。例如，通過三個步驟進(jìn)行合成。酮和鹽酸羥胺的縮合產(chǎn)生肟。用2-氯醋酸的鈉鹽使后者烷基化。然后通過形成酰氯和后者與胺的反應(yīng)將形成的酸轉(zhuǎn)化為酰胺。A.Buzas等.，Chimie Therapeutique[Therapeutic Chemistry]，1972，2，140-142對這種制備進(jìn)行了描述。
根據(jù)本發(fā)明所給的數(shù)量級，式(I)的化合物和/或其鹽或式(I)的化合物和/或其鹽的混合物可以組合物總重量的10-3％至10％的量，優(yōu)選以組合物總重量的10-3％至5％的量，更好是以組合物總重量的10-2％至2％的量，例如0.5％至2％的量使用。
根據(jù)本發(fā)明，式(I)的化合物可以以每天0.1至300mg的量，5至10mg/天的量口服。
2-硫代乙酰胺化合物根據(jù)另一個實施方案，本發(fā)明有益的15-PGDH抑制劑包括至少一種式(I)的2-硫代乙酰胺化合物或其鹽 其中a)R1和R2獨立表示1)氫原子，2)C1-C20烷基，任選用至少一個取代基A1取代，3)基于烴的環(huán)C1，任選與環(huán)C2連接，環(huán)C2任選含有至少一個雜原子以形成雜環(huán)Hy1，這些環(huán)C1與C2可含有至少一個羰基或硫代羰基官能團(tuán)，可被至少一個取代基A3取代，4)雜環(huán)Hy2，任選與環(huán)C2連接，環(huán)C2任選含有至少一個雜原子以形成雜環(huán)Hy3，這些環(huán)Hy2與C2可含有至少一個羰基或硫代羰基官能團(tuán)，可被至少一個取代基A3取代，或5)基團(tuán)C(＝NR)R’，C(＝NR)NR’R″，COR，CSR，COOR，CONRR’，SO2R或SiRR’R″；a)R3表示1)C1-C20烷基，任選用至少一個取代基A2取代，2)基于烴的環(huán)C3，任選與環(huán)C4連接，環(huán)C4任選含有至少一個雜原子以形成雜環(huán)Hy3，這些環(huán)C3與C4可含有至少一個羰基或硫代羰基官能團(tuán)，可被至少一個取代基A3取代，3)表示吡咯，呋喃，噻吩或吡唑環(huán)的雜環(huán)Hy4，任選與表示苯，吡啶或嘧啶環(huán)的環(huán)C5連接，這兩種環(huán)Hy4與C5可被至少一個取代基A3取代，4)吡啶環(huán)，任選與環(huán)C2連接，環(huán)C2任選含有至少一個雜原子以形成雜環(huán)Hy3，吡啶環(huán)與環(huán)C2可含有至少一個羰基或硫代羰基官能團(tuán)，并可被至少一個取代基A4取代，5)雜環(huán)Hy5，不同于Hy4和吡啶環(huán)，任選與環(huán)C2連接，環(huán)C2任選含有至少一個雜原子以形成雜環(huán)Hy1，這些環(huán)Hy5和C2可含有至少一個羰基或硫代羰基官能團(tuán)，被至少一個取代基A3取代，6)基團(tuán)C(＝NR)R’，C(＝NR)NR’R″，COR，CSR，COOR或CONRR’；c)A1表示1)鹵素，2)基團(tuán)CF3，CN，OR，SR，NRR’，NRC(＝NR’)NR″R，COR，CSR，COOR，CONRR’，CSNRR’，NRCSR’，NRCSNR’R″，NRCOR’，NRCOR’R″，SO2NRR’，NRSO2R’，SO2R和SiRR’R″，3)基于烴的環(huán)C6，任選與環(huán)C7連接，環(huán)C7任選含有至少一個雜原子以形成雜環(huán)Hy6，這些環(huán)C6與C7可含有至少一個羰基或硫代羰基官能團(tuán)，可被至少一個取代基A5取代，4)雜環(huán)Hy7，任選與環(huán)C7連接，環(huán)C7任選含有至少一個雜原子以形成雜環(huán)Hy7，這些環(huán)Hy7與C7可含有至少一個羰基或硫代羰基官能團(tuán)，可被至少一個取代基A5取代；d)A2表示1)鹵素，2)基團(tuán)CF3，CN，OR，SR，NRR’，NRC(＝NR’)NR″R，COR，CSR，COOR，CONRR’，CSNRR’，NRCSR’，NRCSNR’R″，NRCOR’，NRCOR’R″，SO2NRR’，NRSO2R’，SO2R或SiRR’R″，或3)環(huán)C8，任選與環(huán)C9連接，這些環(huán)C8與環(huán)C9任選含有至少一個雜原子以形成雜環(huán)Hy8和/或含有至少一個羰基或硫代羰基官能團(tuán)和/或可被至少一個取代基A5取代，e)A3表示1)A2，或2)C1-C20烷基，任選用至少一個取代基A5取代，f)A4表示1)鹵素，2)基團(tuán)CF3，CN，OR，SR，NRC(＝NR’)NR″R，COR，CSR，COOR，CONRR’，CSNRR’，NRCSR’，NRCSNR’R″，NRCOR’，NRCOR’R″，SO2NRR’，NRSO2R’，SO2R或SiRR’R″，3)C1-C20烷基，任選用至少一個取代基A5取代，4)環(huán)C8，任選與環(huán)C9連接，這些環(huán)C8與環(huán)C9任選含有至少一個雜原子以形成雜環(huán)Hy8和/或含有至少一個羰基或硫代羰基官能團(tuán)和/或可被至少一個取代基A5取代，g)A4表示1)鹵素，2)基團(tuán)CF3，CN，OR5，SR5，NR5R’5，NR5C(＝NR5’)NR″5R5，COR5，CSR5，COOR5，CONR5R’5，CSNR5R’5，NR5CSR’5，NR5CSNR’5R″5，NR5COR’5，NR5COR’5R″5，SO2NR5R’5，NR5SO2R’5，SO2R5或SiR5R’5R″5，R5，R’5和R″5是氫原子或C1-C20烷基，3)C1-C20烷基，或4)環(huán)C10，任選與另一個環(huán)C11連接，這些環(huán)任選含有至少一個雜原子以形成雜環(huán)Hy9和/或含有至少一個羰基或硫代羰基官能團(tuán)；h)R，R’，R″和R可以是相同或不同，表示1)氫原子，2)C1-C20烷基，任選用至少一個取代基A5取代，或3)環(huán)C12，任選與另一個環(huán)C13連接，這些環(huán)任選含有至少一個雜原子以形成雜環(huán)Hy10，可被至少一個取代基A5取代；i)Hy1至Hy10獨立地表示可含有1至4個選自N，O或S的雜原子的雜環(huán)。
本發(fā)明還涉及至少一種如上定義的式(I)的2-硫代乙酰胺化合物，或其鹽作為在誘導(dǎo)和/或刺激人角蛋白纖維，特別是睫毛和/或毛發(fā)，和/或皮膚著色的制劑的用途，特別是化妝用途。
在下文中，除非明確提及，使用的術(shù)語“式(I)的化合物”應(yīng)該理解為酸、堿形式的式(I)的化合物，及其鹽。其還可以是互變異構(gòu)的形式根據(jù)本發(fā)明，術(shù)語“至少一種”指一種或多種(2，3或更多)。特別地，本發(fā)明組合物可以包含一種或多種式(I)的化合物。這種或這些化合物是順式或反式異構(gòu)體或順式/反式異構(gòu)體的混合物。它們還可以是互變異構(gòu)的形式。這種或這些化合物還可以是對映異構(gòu)體和/或非對映異構(gòu)體或這些異構(gòu)體的混合物，尤其是外消旋混合物。
對于本發(fā)明來說，術(shù)語“基于烴”指氫原子和碳原子的基團(tuán)。
對于本發(fā)明來說，術(shù)語“烷基”指基于烴的直鏈或支鏈，飽和或不飽和的環(huán)。特別地，烷基含有1至20個碳原子，優(yōu)選1至10個碳原子。作為可在本發(fā)明中使用的烷基的實例，可以提及的有甲基，乙基，異丙基，正丁基，叔丁基，正己基，2-乙基己基，次乙基或亞丙基。
根據(jù)本發(fā)明，式(I)的環(huán)C1至C13，Hy2，Hy4和Hy5含有3至7個原子，更好是5至6個原子，可以是飽和或不飽和的。此外，環(huán)C2，C4，C7，C8，C9，C10，C11，C12和C13可任選包括一個或多個雜原子如S，N或O，或其組合。Hy7表示含有1至4個選自N，S或O或其組合的雜原子的雜環(huán)，它含有3至15個原子，更好是5至6個原子。根據(jù)本發(fā)明的一個特定實施方案，雜環(huán)Hy7含有高達(dá)15個原子，例如具有5-CH2-CH2-單元的冠醚。這些環(huán)還可以與另一個化學(xué)結(jié)構(gòu)相同或不同的環(huán)連接。此外，這些環(huán)可被取代，特別是用取代基A3或A5取代。
作為可在本發(fā)明中使用的飽和的基于烴的環(huán)，可以提及環(huán)丙基，環(huán)丁基，環(huán)戊基，環(huán)己基或環(huán)庚基。作為不飽和的基于烴的環(huán)，可以提及的有環(huán)己烯基或苯環(huán)。作為可以使用的連接的基于烴的環(huán)，可以提及的有萘基。
根據(jù)本發(fā)明，R1和/或R2可以表示如上定義的基于烴的環(huán)，特別地，該環(huán)是飽和的。根據(jù)本發(fā)明，R1和/或R2還可以表示雜環(huán)Hy2，該環(huán)含有3至7個原子，更好是5至6個原子的，以及含有1至4個選自N，O或S或其組合的雜原子。另外，該雜環(huán)還可含有一個或多個羰基或硫代羰基官能團(tuán)。作為實例，Hy2可表示以下雜環(huán)之一吖丁啶，吡咯，二氫吡咯，吡咯烷，呋喃，二氫呋喃，四氫呋喃，噻吩，二氫噻吩，四氫噻吩，咪唑，二氫咪唑，咪唑烷，二氫噻唑，噻唑烷，二氫吡唑，吡唑烷，噁唑，二氫噁唑，噁唑烷，異噁唑，二氫異噁唑，異噁唑烷，異噻唑，二氫異噻唑，異噻唑烷，三唑，二氫三唑，三唑烷，噁二唑，二氫噁二唑，噁二唑烷，噻重氮，二氫噻重氮，噻重氮烷，四唑，吡啶，二氫吡啶，四氫吡啶，哌啶，吡喃，二氫吡喃，四氫吡喃，嘧啶，二氫嘧啶，四氫嘧啶，哌嗪，噠嗪，吡嗪，三嗪，嗎啉，氮雜或二氮雜。優(yōu)選地，Hy2表示哌啶環(huán)。該雜環(huán)Hy2還可以是與飽和或不飽和的具有4至7個原子的環(huán)C2連接，C2任選含有至少一個選自O(shè)，N和S的雜原子以形成雜環(huán)Hy1。C2還可以含有一個或多個羰基或硫代羰基官能團(tuán)。作為可在本發(fā)明使用的雜環(huán)Hy1的實例，可以提及的有吡啶，哌啶，嗎啉，吡咯，呋喃，噻吩，咪唑，噁唑，噻唑，吡唑，嘧啶，哌嗪，吡嗪，噠嗪，三嗪，吡咯烷或噻唑烷環(huán)。
根據(jù)本發(fā)明，R1和/或R2還可以表示烷基，該烷基的至少一個氫被雜環(huán)Hy7取代。該雜環(huán)含有含有3至7個原子，更好是5至6個原子，可以含有1至4個選自N，O或S或其組合的雜原子。根據(jù)本發(fā)明的一個特定實施方案，雜環(huán)Hy7含有高達(dá)15個原子，例如包括5-CH2-CH2-單元的冠醚。根據(jù)另一個實施方案，雜環(huán)Hy7含有羰基官能團(tuán)。作為可在本發(fā)明使用的雜環(huán)Hy7，可以提及下列的環(huán)吖丁啶，吡咯，二氫吡咯，吡咯烷，呋喃，二氫呋喃，四氫呋喃，噻吩，二氫噻吩，四氫噻吩，咪唑，二氫咪唑，咪唑烷，噻唑，二氫噻唑，噻唑烷，吡唑，二氫吡唑，吡唑烷，噁唑，二氫噁唑，噁唑烷，異噁唑，二氫異噁唑，異噁唑烷，異噻唑，二氫異噻唑，異噻唑烷，三唑，二氫三唑，三唑烷，噁二唑，二氫噁二唑，噁二唑烷，噻重氮，二氫噻重氮，噻重氮烷，四唑，吡啶，二氫吡啶，四氫吡啶，吡喃，二氫吡喃，四氫吡喃，嘧啶，二氫嘧啶，四氫嘧啶，哌嗪，噠嗪，吡嗪，三嗪，嗎啉，氮雜，二氮雜，包括15個原子以及5-CH2-CH2-單元的冠醚，或吡咯烷酮。優(yōu)選Hy7表示下列環(huán)之一吡咯，噁唑，吡啶，吡咯烷，嗎啉，四氫呋喃，包括15個原子(5-CH2-CH2-單元)的冠醚，或吡咯烷酮。
根據(jù)本發(fā)明，R3可以表示飽和或不飽和的基于烴的環(huán)C3，該環(huán)具有3至7個碳原子，更好是5至6個碳原子，任選和雜環(huán)Hy3連接。雜環(huán)Hy3可含有4至7個原子，更好是5至6個原子，可以含有1至4個選自N，O或S或其組合的雜原子。此外，雜環(huán)Hy3可含有一個或多個羰基或硫代羰基官能團(tuán)。
作為可在本發(fā)明中使用的雜環(huán)Hy3，可以提及的有吖丁啶，吡咯，二氫吡咯，吡咯烷，呋喃，二氫呋喃，四氫呋喃，噻吩，二氫噻吩，四氫噻吩，咪唑，二氫咪唑，咪唑烷，二氫噻唑，噻唑烷，吡唑，二氫吡唑，吡唑烷，噁唑，二氫噁唑，噁唑烷，異噁唑，二氫異噁唑，異噁唑烷，異噻唑，二氫異噻唑，異噻唑烷，三唑，二氫三唑，三唑烷，噁二唑，二氫噁二唑，噁二唑烷，噻重氮，二氫噻重氮，噻重氮烷，四唑，吡啶，二氫吡啶，四氫吡啶，哌啶，吡喃，二氫吡喃，四氫吡喃，嘧啶，二氫嘧啶，四氫嘧啶，哌嗪，噠嗪，吡嗪，三嗪，嗎啉，氮雜或二氮雜環(huán)。優(yōu)選Hy3表示下列環(huán)之一吡咯，吡啶，嘧啶，咪唑，三唑，呋喃，噻吩，噁唑或噻唑。
根據(jù)本發(fā)明，R3還可以表示-吡啶環(huán)，任選與化學(xué)性質(zhì)相同或不同的環(huán)C2連接，-雜環(huán)Hy4，選自吡咯，呋喃，噻吩以及吡唑環(huán)，任選與苯基，吡啶或嘧啶環(huán)連接，-另一個雜環(huán)Hy5，含有3至7個原子，更好是5至6個原子，含有1至4個選自N，O或S或其組合的雜原子。該雜環(huán)Hy5還可以含有一個或多個羰基或硫代羰基官能團(tuán)，可以與另一個化學(xué)性質(zhì)相同或不同的環(huán)C2連接。
作為實例，雜環(huán)Hy5選自吖丁啶，二氫吡咯，吡咯烷，二氫呋喃，四氫呋喃，二氫噻吩，四氫噻吩，咪唑，二氫咪唑，咪唑烷，噻唑，二氫噻唑，噻唑烷，二氫吡唑，吡唑烷，噁唑，二氫噁唑，噁唑烷，異噁唑，二氫異噁唑，異噁唑烷，異噻唑，二氫異噻唑，異噻唑烷，三唑，二氫三唑，三唑烷，噁二唑，二氫噁二唑，噁二唑烷，噻重氮，二氫噻重氮，噻重氮烷，四唑，二氫吡啶，四氫吡啶，哌啶，吡喃，二氫吡喃，四氫吡喃，嘧啶，二氫嘧啶，四氫嘧啶，哌嗪，噠嗪，吡嗪，三嗪，嗎啉，氮雜，二氮雜，2-苯并噻唑基以及噻唑并[2，3-c][1，2，4]三唑環(huán)。優(yōu)選Hy5表示下列環(huán)之一2-苯并噻唑基，噻唑并[2，3-c][1，2，4]三唑，咪唑，噻唑，三唑，噁唑，嘧啶，吡嗪或噠嗪。
作為本發(fā)明可使用的雜環(huán)Hy1，Hy6，Hy8，Hy9以及Hy10的實例，可以分別提及吖丁啶，吡咯，二氫吡咯，吡咯烷，呋喃，二氫呋喃，四氫呋喃，噻吩，二氫噻吩，四氫噻吩，咪唑，二氫咪唑，咪唑烷，噻唑，二氫噻唑，噻唑烷，吡唑，二氫吡唑，吡唑烷，噁唑，二氫噁唑，噁唑烷，異噁唑，二氫異噁唑，異噁唑烷，異噻唑，二氫異噻唑，異噻唑烷，三唑，二氫三唑，三唑烷，噁二唑，二氫噁二唑，噁二唑烷，噻重氮，二氫噻重氮，噻重氮烷，四唑，吡啶，二氫吡啶，四氫吡啶，哌啶，吡喃，二氫吡喃，四氫吡喃，嘧啶，二氫嘧啶，四氫嘧啶，哌嗪，噠嗪，吡嗪，三嗪，嗎啉，氮雜和二氮雜環(huán)。優(yōu)選使用吡咯，吡咯烷，咪唑，呋喃，吡唑，吡啶，嘧啶，三唑，吡嗪，噠嗪，哌啶，哌嗪或嗎啉環(huán)。
式(I)的雜環(huán)還可以與化學(xué)性質(zhì)相同或不同的環(huán)連接。
作為可在本發(fā)明使用的連接環(huán)，可以提及的有嘌呤或蝶啶環(huán)。作為可在本發(fā)明中使用的與基于烴的環(huán)連接的雜環(huán)，可以提及的有苯并呋喃，苯并噻吩，苯并噻唑，吲哚，苯并咪唑，喹啉，異喹啉或喹唑啉基。
作為可在本發(fā)明中使用的鹵素原子，可以提及的有氯，氟或溴原子，更好是氟原子和氯原子。
根據(jù)本發(fā)明，式(I)化合物是隔離型，即非聚合型。
根據(jù)本發(fā)明一個特定的實施方案，R1和R2至少一個表示氫原子；C1-C20烷基，其中至少一個氫被至少一個取代基A1取代；飽和或不飽和的基于烴的具有3至6個碳原子的環(huán)，其中任選至少一個氫原子用鹵基如CF3或鹵原子取代，特別是當(dāng)環(huán)為苯基時，用1或2個氯或溴原子取代。相對于R1和R2具有的氮原子，該基團(tuán)和這些鹵原子可位于其對位，間位或鄰位。特別地，基于烴的環(huán)是環(huán)戊基，環(huán)丙基，環(huán)丁基或環(huán)己基，或是芳基如苯基。特別地，R1表示H而R2表示環(huán)戊基，環(huán)丙基，環(huán)丁基或環(huán)己基或苯基，苯基用一個溴原子或2個氯原子取代。
根據(jù)本發(fā)明另一個實施方案，R1表示H而R2表示飽和或不飽和的具有5至6個原子的雜環(huán)，該環(huán)含有1至4個選自N，O或S的雜原子，任選用至少一個烷基，CF3，OR，SR，NRR’，COR，COOR，CONRR’或NRCOR’取代，R和R’表示氫或烷基。例如R2表示哌啶環(huán)，任選用至少一個C1-C10烷基，特別是甲基取代。
根據(jù)本發(fā)明的一個實施方案，R1表示H而R2表示飽和的C1-C20烷基，該烷基任選用至少一個取代基A1取代。特別地，A1表示飽和或不飽和的具有5至6個原子的環(huán)，任選含有1至4個選自N，O或S的雜原子，可含有至少一個羰基官能團(tuán)，可被至少一個選自烷基，F(xiàn)，CF3，OR，SR，NRR’，COR，COOR，CONRR’或NRCOR’的基團(tuán)取代，R和R’表示氫或烷基；包括15個原子和5-CH2-CH2-單元的冠醚；選自CF3，OR，SR，NRR’，COR，COOR，CONRR’，NRCOR’或SiRR’R″的基團(tuán)，R，R’和R″表示氫或烷基。
根據(jù)本發(fā)明的另一個實施方案，R3表示苯基或具有5至6個原子的雜環(huán)，用一個或兩個取代基A3取代或與基于烴的環(huán)或具有5至6個原子的雜環(huán)連接。特別地，R3表示含有至少一個氮原子做雜原子和任選的硫原子的雜環(huán)，任選該雜環(huán)與苯環(huán)或噻唑環(huán)連接，其本身任選與基于烴的環(huán)，特別是苯基連接，或用一個COR或CN基團(tuán)或兩個基團(tuán)COR和CN分別取代。特別地，R3表示苯基，2-苯并噻唑基，2-吡啶基，6-乙酰基煙酰腈，三唑基或4a，8a-二氫苯并[4，5]噻唑并-[2，3-c][1，2，4]三唑基。
根據(jù)本發(fā)明一個特定的實施方案，2-硫代乙酰胺化合物具有下面式(II)和(III)之一 其中X和Y獨立地表示氫原子或鹵素；C1表示飽和或不飽和的基于烴的具有3至6個碳原子的環(huán)；Hy11表示具有5至6個原子的雜環(huán)，含有至少一個選自N和S，以及其組合的雜原子；A6和A7獨立地表示選自氫，烷基，COR，OR，SR，CN，COOR以及飽和或不飽和具有5至6個原子環(huán)C8的基團(tuán)，該環(huán)任選含有1至4個選自S和N，以及其組合的雜原子，和/或任選與基于烴的具有5至6個碳原子的環(huán)C9連接；R1表示飽和或不飽和的，直鏈或支鏈的C1-C20烷基，任選用至少一個取代基A1取代，基于烴的環(huán)或雜環(huán)Hy2，任選該雜環(huán)用至少一個具有上文定義的取代基A3，C8，C9，A1，Hy2和A3取代。
根據(jù)本發(fā)明，術(shù)語“式(I)化合物的鹽”指式(I)化合物的有機(jī)鹽或無機(jī)鹽。
作為本發(fā)明可使用的無機(jī)鹽，可以提及的有鈉鹽或鉀鹽，還有鋅(zn2+)鹽，鈣(Ca2+)鹽，銅(Cu2+)鹽，鐵(Fe2+)鹽，鍶(Sr2+)鹽，鎂鹽(Mg2+)以及錳(Mn2+)鹽；氫氧化物和碳酸鹽。
根據(jù)本發(fā)明可以使用的有機(jī)鹽是例如三乙醇胺鹽，單乙醇胺鹽，二乙醇胺鹽，十六烷基胺鹽，N，N，N′，N′，-四(2-羥基-丙基)乙二胺鹽或三羥甲基氨基甲烷鹽。
作為可在本發(fā)明中使用的式(I)的2-硫代乙酰胺化合物的實例，可以提及以下化合物化合物1 化合物2 化合物3 化合物4
化合物5 化合物6 化合物7 化合物8 化合物9 化合物10
化合物11 化合物12 化合物13 化合物14 化合物15
化合物16 化合物17 化合物18 化合物19 化合物20
化合物21 化合物22 化合物23 化合物24 化合物25
化合物26 化合物27 化合物28 化合物29 化合物30
化合物31 化合物32 化合物33 化合物34
化合物35 化合物36 化合物37 化合物38
化合物39 化合物40 化合物41 化合物42
化合物43 式(I)的化合物可是成鹽或未成鹽的，通常通過兩個親核分子和氯乙酰氯(chloroacetyl acid chloride)的連續(xù)縮合進(jìn)行制備。例如通過在堿介質(zhì)中胺和氯乙酰氯的縮合制備酰胺官能團(tuán)。所得產(chǎn)品自身和硫醇鹽縮合。
根據(jù)本發(fā)明所給的數(shù)量級，式(I)的化合物或其鹽或式(I)化合物和/或其鹽的混合物可以組合物總重量的10-3％至5％的量，優(yōu)選以組合物總重量的10-2％至2％的量，例如0.5％至2％的量使用。
式(I)化合物可以成鹽或未成鹽，其可在可吞咽，可注射或可涂敷于皮膚或角蛋白纖維(涂敷于皮膚或被處理角蛋白纖維的任何區(qū)域)的組合物中使用。
根據(jù)本發(fā)明，式(I)的化合物或式(I)化合物的混合物可以以每天0.1至300mg的量，5至10mg/天的量口服。
偶氮化合物另外根據(jù)另一個實施方案，適合實施本發(fā)明的15-PGDH抑制劑包括至少一種式(I)的偶氮化合物或其鹽
其中1 Ra和Rb可以相同或不同，選自a)氫原子，鹵原子，基團(tuán)CF3，CN，OR，SR，NRR’，NRC(＝NR’)NR″R+，COR，CSR，COOR，CONRR’，CH2COOR，CSNRR’，NRCSR’，NRCSNR’R″，NRCOR’，NRCOR’R″，SO2NRR’，NRSO2R’，NRSO2R’R″，SO2R，NO2，b)飽和或不飽和的，直鏈或支鏈的C1-C10烷基，任選用至少一個取代基A1或飽和或不飽和的環(huán)C1取代，該環(huán)含有3至7個原子和/或任選包括至少一個雜原子和/或任選用至少一個取代基A2和/或任選與至少一個環(huán)C3連接，該環(huán)包括至少一個雜原子(封閉稠環(huán))或c)芳香環(huán)C2，任選包括至少一個雜原子和/或任選用至少一個取代基A2和/或任選與環(huán)C3連接，該環(huán)包括至少一個雜原子(封閉稠環(huán))；2X和Y可以相同或不同，表示-CRc或氮原子，任選是NO形式或季銨化的氮原子，Rc具有Ra或Rb的含義，條件是X和Y不同時表示NO或季銨化形式的氮原子；3n和m表示從0至5的整數(shù)；-其中R，R′，R″以及R+可以相同或不同，表示·氫原子，或飽和或不飽和的，直鏈或支鏈的C1-C10烷基，·芳香環(huán)C2，任選包括至少一個雜原子，任選用至少一個取代基A2取代；-其中A1選自鹵原子，基團(tuán)CF3，CN，OR，SR，NRR’，NRC(＝NR’)NR″R，COR，CSR，COOR，CONRR’，CSNRR’，NRCSR’，NRCSNR’R″，NRCOR’，NRCOR’R″，SO2NRR’，NRSO2R’，NRSO2R’R″，SO2R，NO2；-其中A2選自直鏈或支鏈的C1-C10烷基，OR1，SR1，NR1R’1，COOR1，COR1和CH2COOR1，R1和R’1可以是相同或不同的，表示氫原子，飽和或不飽和的，直鏈或支鏈C1-C10烷基；
-其中雜原子選自N，O，S和Se。
在下文中，除非明確指出，使用的術(shù)語“式(I)的化合物”應(yīng)該理解為式(I)化合物及其鹽。
根據(jù)本發(fā)明，術(shù)語“至少一種”指一種或更多(2種，3種或更多)。特別地，本發(fā)明組合物可含有一種或多種式(I)的化合物。這種或這些化合物是順式或反式異構(gòu)體或順式/反式異構(gòu)體的混合物。
對于本發(fā)明來說，術(shù)語“烷基”指直鏈或支鏈，飽和或不飽和的基于烴的環(huán)。優(yōu)選烷基包括1至10個碳原子，特別是1至5個原子。作為可在本發(fā)明中使用的烷基的實例，可以提及的有甲基，乙基，異丙基，叔丁基或異丙基。
作為鹵素原子，可以使用氯原子，氟原子或溴原子，更好是氯原子或氟原子。
根據(jù)本發(fā)明，式(I)的環(huán)C1，C2和C3含有3至7個原子，更好時5至6個原子，可以含有一個或多個雜原子例如S，N，O或Se，或其組合，因此形成雜環(huán)Hy。這些環(huán)的氫原子可以部分被取代基A2取代。另外，環(huán)C1和C3還可以是飽和或不飽和的。
作為可在本發(fā)明中使用的飽和基于烴的環(huán)，可以提及的有環(huán)丙基，環(huán)丁基，環(huán)戊基，環(huán)己基或環(huán)庚基。作為不飽和基于烴的環(huán)，可以提及的有環(huán)己烯基或苯基。
根據(jù)本發(fā)明，C1和/或C2和/或C3可以表示雜環(huán)Hy，其含有3至7個原子，更好是5至6個原子，包括1至4個選自N，O，S和Se及其組合，更好是選自N和O及其組合的雜原子。作為可在本發(fā)明中使用的飽和雜環(huán)的實例，可以提及以下雜環(huán)吖丁啶，吡咯烷，四氫呋喃，四氫噻吩，咪唑烷，噻唑烷，吡唑烷，噁唑烷，異噁唑烷，異噻唑，二氫異噻唑，異噻唑烷，三唑烷，噁二唑烷，噻重氮烷，四氫吡啶，哌啶，四氫吡喃，四氫嘧啶，哌嗪，hexahydrotriazines以及嗎啉。
作為不飽和(或芳香族的)雜環(huán)的實例，可以使用以下雜環(huán)吡咯，二氫吡咯，呋喃，二氫呋喃，噻吩，二氫噻吩，咪唑，二氫咪唑，二氫噻唑，二氫吡唑，吡唑烷，噁唑，二氫噁唑，異噁唑，二氫異噁唑，三唑，二氫三唑，噁二唑，二氫噁二唑，噻重氮，二氫噻重氮，四唑，吡啶，二氫吡啶，吡喃，二氫吡喃，嘧啶，二氫嘧啶，噠嗪，吡嗪，二氮雜和三嗪。
另外，環(huán)C2和環(huán)C3可以形成稠和雜環(huán)或稠和環(huán)，其是飽和或不飽和的，例如萘，四氫萘，喹啉，異喹啉，吲哚，苯并咪唑，苯并噻吩，苯并呋喃，嘌呤或蝶啶或咔唑環(huán)。
根據(jù)本發(fā)明，式(I)化合物是隔離型，即非聚合型。另外，取代基Ra和Rb可以位于具有它們的苯環(huán)的任何位置。
根據(jù)本發(fā)明，同一環(huán)所具有的Ra和Rb可以是相同或不同的。相似的，由同一烷基或同一環(huán)具有的取代基A1和A2分別可以是相同或不同的。
優(yōu)選，n是表示0，1，2，3或5的整數(shù)。并且，m尤其是具有值0，1或2的整數(shù)。
有利地，Ra和Rb至少一個表示基團(tuán)COOR，OR，NO2，CF3，SO2NRR’或CH2COOR1，或飽和或不飽和的C1-C5烷基，例如甲基，乙基或烯丙基，任選用嗎啉雜環(huán)或COOH基團(tuán)取代，R和R’具有上文所指出的含義。特別地，R和/或R’表示氫原子，甲基或吡啶基團(tuán)。
另外，X和Y獨立地表示氮原子，更好是CRc基團(tuán)，特別地，Rc表示氫原子，NO2，OH，COOR基團(tuán)，或飽和或不飽和的C1-C5烷基，例如甲基或烯丙基，R表示H，甲基或乙基。
根據(jù)本發(fā)明，短語“式(I)的化合物的鹽”指式(I)化合物的有機(jī)或無機(jī)鹽。
作為本發(fā)明可使用的無機(jī)鹽，可以提及的有鈉鹽或鉀鹽，還有鋅(zn2+)鹽，鈣(Ca2+)鹽，銅(Cu2+)鹽，鐵(Fe2+)鹽，鍶(Sr2+)鹽，鎂鹽(Mg2+)，錳(Mn2+)鹽，銨鹽；氫氧化物，碳酸鹽，鹵化物(例如氯化物)，硫酸鹽，硝酸鹽或磷酸鹽。優(yōu)選的鹽是鈉鹽。
根據(jù)本發(fā)明可以使用的有機(jī)鹽是例如三乙醇胺鹽，單乙醇胺鹽，二乙醇胺鹽，十六烷基胺鹽，N，N，N′，N′，-四(2-羥基-丙基)乙二胺鹽或三羥甲基氨基甲烷鹽。
作為可在本發(fā)明中使用的偶氮化合物的實例，可以提及下列的化合物化合物1
化合物2 化合物3 化合物4 化合物5
化合物6 化合物7 化合物8 化合物9
化合物10 化合物11 化合物12 式(I)的化合物可是成鹽或未成鹽的，其本身是已知的。它們可以通過已知的方法制備，特別是如文獻(xiàn)Vogel′s Textbook of PracticalOrganic Chemistry，第5版，1989所述。
特別地，在下文將下式的化合物1還以縮寫PhCL28A提及。
根據(jù)一個優(yōu)選的實施方案，本發(fā)明的組合物還包括至少一種有益于毛發(fā)的制劑，例如硅酮油，植物油，動物油或合成的油，蠟，神經(jīng)酰胺，假神經(jīng)酰胺，陽離子聚合物，遮光劑或維生素。
可以在本發(fā)明中使用的硅酮特別是在組合物中不溶的聚有機(jī)硅氧烷，可以是油，蠟，樹脂或樹膠的形式。
在Walter Noll的著作“Chemistry and Technology of Silicones”(1968)Academie press中對聚有機(jī)硅氧烷做了更詳細(xì)的說明。它們可以是揮發(fā)或不揮發(fā)的。
根據(jù)它的一個方面，本發(fā)明的一個主題是含有至少一種處理灰發(fā)的15-羥基前列腺素脫氫酶抑制劑的化妝組合物的非治療用途。特別地，本發(fā)明的這種組合物的用于預(yù)防或限制白色體毛或白色毛發(fā)的出現(xiàn)，或減少其數(shù)量。
根據(jù)本發(fā)明的至少一個方面，使用15-PGDH抑制劑的優(yōu)點之一是恢復(fù)了與著色介質(zhì)生理合成對應(yīng)的皮膚和/或毛發(fā)著色，這產(chǎn)生接近天然色的顏色。尤其當(dāng)它們是偶氮類化合物如PhCL28A時，15-PGDH抑制劑的主要活性不是直接對皮膚和/或皮膚附屬物染色，根據(jù)一個優(yōu)選的實施方案，本發(fā)明使用的組合物還含有至少一種滲透促進(jìn)劑。
這種制劑對于本領(lǐng)域技術(shù)人員來說是已知的，尤其包括尿素或在申請WO 01/74313中提及的化合物。通常它們以0.01至20％，尤其是0.1至5％的濃度存在。
有利地，本發(fā)明使用的組合物還含有至少一種促進(jìn)皮膚，毛發(fā)和/或體毛著色的制劑，其不同于15-羥基前列腺素脫氫酶抑制劑。
特別地，這樣的化合物是酪氨酸酶底物，例如酪氨酸或L-DOPA，或激活cAMP途徑的化合物，例如阿黑皮素衍生物，腺苷，福斯高林或其衍生物。還可以提及的植物提取物例如柏樹，Burnet，地榆，或菊花(Chrysanthemum morifolium)提取物，尤其描述于EP 1 014 934中。
包括至少一種15-PGDH抑制劑的本發(fā)明組合物還可以含有包括2種組分的催化系統(tǒng)，即第一組分選自Mn(II)鹽及其氧化物和/或Zn(II)鹽及其氧化物，及其混合物，第二組分選自堿金屬碳酸氫鹽，堿土金屬碳酸氫鹽及其混合物。特別地，在申請F(tuán)R 2 814 947，F(xiàn)R 2 814 943，F(xiàn)R 2 814 946或FR 2 847 469中對這種促進(jìn)著色的組合物進(jìn)行了描述。
根據(jù)一個優(yōu)選的變化形式，可將15-PGDH抑制劑與促進(jìn)毛發(fā)著色的活性化合物組合使用，這使該化合物不易于被這種酶代謝。這是因為由于申請人的研究，已知由于15-PGDH的存在，通過它的作用減少了作用部位該物質(zhì)的濃度和效果，使通常提出的用于該目的的某些化合物活性低。
根據(jù)本發(fā)明，現(xiàn)在可通過將促進(jìn)毛發(fā)著色，易于被15-PGDH代謝的活性化合物與如上定義的15-PGDH抑制劑組合物獲得具有增強效果的組合物。因此在這些組合物中獲得了促進(jìn)毛發(fā)著色的活性劑的協(xié)同效果。
本發(fā)明組合物例如還可含有至少一種選自前列腺素的化合物，尤其是前列腺素PGE1和PGE2，它們的鹽，酯，類似物以及衍生物，尤其是在WO 98/33497，WO 95/11003，JP 97-100091以及JP 96 134242中描述的那些，尤其是前列腺素受體激動劑。特別地，可含有至少一種化合物，例如前列腺素F2-α受體(FP-R)激動劑(酸形式或前體形式，尤其是酯形式)，正如拉坦前列素，氟前列醇，氯前列醇，曲伏前列素或比馬前列素，前列腺素E2受體(EP1-R，EP2-R，EP3-R，EP4-R)激動劑(及其前體，特別是酯)例如17-苯基PGE2，維前列醇，布他前列素，米索前列醇，硫前列酮，16，16-二甲基PGE2，11-脫氧-PGE1或1-脫氧-PGE1，前列腺環(huán)素(IP)受體激動劑及其前體，特別是酯，例如西卡前列素，伊洛前列素，異碳前列環(huán)素(Isocarbacyclin)或貝前列素，前列腺素D2受體激動劑及其前體，特別是其酯，例如BW245C((4S)-(3-[(3R，S)-3-環(huán)己基-3-異丙基]-2，5-二氧)4-咪唑烷-庚烯酸)或BW246C((4R)-(3-[(3R，S)-3-環(huán)己基-3-異丙基]-2，5-二氧)-4-咪唑烷-庚烯酸)，或血栓素A2(TP)受體激動劑以及前體，特別是酯，例如I-BOP([1S-[1a，2a(Z)，3b(1E，3S)，4a]]-7-[3-[3-羥基-4-[4-(碘苯氧基)-1-丁基]-7-氧雜二環(huán)[2.2.1]七-2-基]-5-庚烯酸。
有利地，本發(fā)明的組合物包括至少一種如上定義的15-PGDH抑制劑以及至少一種前列腺素或前列腺素衍生物例如2型前列腺素，尤其包括PGF2α和PGE2，其以鹽形式或前體形式存在，特別是酯(例如異丙酯)，它們的衍生物是例如16，16-二甲基PGE2，17-苯基PGE2，16，16-二甲基PGE2α，17-苯基PGE2α，1型前列腺素例如11-脫氧-前列腺素E1或1-脫氧-前列腺素E1，其以鹽形式或前體形式存在，特別是酯(例如異丙酯)，或EP2和/或EP4受體的非前列腺素激動劑，特別如EP 1 175 892中所述。
優(yōu)選，15-羥基前列腺素脫氫酶抑制劑很少抑制或根本不抑制毛發(fā)中前列腺素合成涉及的酶，或前列腺素合酶(特別是PGHS-1或前列腺素環(huán)氧H合酶COX-1，或PGF合酶的合成)。
在組合物中還可存在其他有利于毛發(fā)或體毛健康或活力的活性劑。
尤其可以提及促進(jìn)頭發(fā)再生和/或限制脫發(fā)的活性化合物。
特別地，這些化合物可以選自如EP 648488中所述的脂肪氧化酶抑制劑，尤其可以選自如EP 845700中所述的緩激肽抑制劑，如上文所述的前列腺素及其衍生物，如EP 1175891和EP 1175890，WO01/74307，WO01/74313，WO 01/74314，WO 01/74315或WO 01/72268所述的非前列腺烷前列腺素類似物。
在本發(fā)明組合物中可以存在促進(jìn)毛發(fā)生長的制劑，包括單獨的血管舒張劑，抗雄激素物質(zhì)，環(huán)孢霉素及其類似物，抗菌劑，維甲酸以及三萜，或其混合物。
因此，血管舒張劑例如鉀通道激動劑包括米諾地爾，以及美國專利3 382 247，5 756 092，5 772 990，5 760 043，5 466 694，5 438 058以及4 973 474中提及的化合物；cromakalin，尼可地爾以及diaxozide可以在組合物中存在。
特別地，可以使用的抗雄激素物質(zhì)包括5α-還原酶抑制劑，例如非那司提以及US 5 516 779中描述的化合物，環(huán)丙孕酮醋酸酯，壬二酸，其鹽以及衍生物，US 5 480 913中描述的化合物，氟他米特以及在美國專利5 411 981，5 565 467和4 910 226中描述的化合物。
抗菌化合物可以選自硒衍生物，酮康唑，三氯卡班，三氯生，吡硫翁鋅，伊曲康唑，積雪草酸，扁柏酚，米吡曲班，以及在EP 680145中描述的化合物，clinycine hydrochloride，過氧苯甲?；蚱S基過氧化物以及米諾環(huán)素。
維甲酸可選自異維甲酸，阿維A以及他佐羅汀。在組合物中存在的其他促進(jìn)毛發(fā)生長和/或防止脫發(fā)的活性化合物還可選自包括阿米昔爾及其衍生物，6-O-[(9Z，12Z)-十八-9，12-二烯酰]吡喃己糖，benzaconium chloride，氯化芐乙氧銨，酚，雌二醇，馬來酸氯苯那敏，葉綠酸衍生物，膽固醇，半胱氨酸，甲硫氨酸，benzyl nictotinate，薄荷醇，薄荷油，泛酸鈣，泛醇，間苯二酚，蛋白激酶C活化劑，糖苷酶抑制劑，glycosaminoglycanase抑制劑，吡咯谷氨酸酯，hexosa-ccharide或acylhexosaccharide酸，取代的芳基乙烯，N-?；被幔运褂脛┝繉OXs沒有作用的黃酮，子囊霉素衍生物以及類似物，組胺拮抗劑，三萜例如熊果酸以及在US 5 529 769，US 5 468 888以及US 5 631 282中描述的化合物，皂甙，proteoglycanase抑制劑，雌激素激動劑以及拮抗劑，假三烯，細(xì)胞因子以及生長因子促進(jìn)劑，IL-1抑制劑或IL-6抑制劑，IL-10促進(jìn)劑，TNF抑制劑，維生素，例如維生素D，維生素B12類似物以及panthotenol，羥酸，二苯甲酮以及乙內(nèi)酰脲。
本發(fā)明的一個主題還是促進(jìn)皮膚，指甲，體毛和/或毛發(fā)著色的化妝方法，其特征在于將至少一種如上定義的15-羥基前列腺素脫氫酶抑制劑或組合物涂敷于皮膚和/或頭皮和/或皮膚附屬物。將組合物或15-羥基前列腺素脫氫酶抑制劑涂敷于作用部位，使其和作用部位接觸較長或較短的時間，可以有規(guī)律或無規(guī)律的間隔幾個小時，幾天，幾周或幾個月重復(fù)涂敷。
可將15-PGDH抑制劑和提出的其他活性劑組合同時涂敷，或隨時間順序涂敷。
以下的實施例用于解釋本發(fā)明，而絕不是限制本發(fā)明的范圍。在這些實施例中，參考下圖。


圖1由培養(yǎng)物中毛發(fā)黑色素細(xì)胞表達(dá)的15-羥基前列腺素脫氫酶。
圖2由培養(yǎng)物中毛發(fā)黑色素細(xì)胞表達(dá)的前列腺素H合酶1。
實施例1a在著色的毛發(fā)黑色素細(xì)胞中編碼PGHS-1的mRNA(對照，編碼甘油醛3-磷酸脫氫酶的mRNA)和編碼15-PGDH的mRNA(對照，肌動蛋白mRNA)表達(dá)的證明。
a-著色毛發(fā)黑色素細(xì)胞的分離將人頭皮活組織切成小片，放置在分散酶溶液中(2.4U/ml，Boehringer Mannheim，Gmbh，Germany)在+04℃培養(yǎng)18個小時。然后用PBS洗滌碎片。在雙目放大鏡下用鑷子從真皮分離上皮層。然后將上皮結(jié)構(gòu)顯微切割以分離毛囊和真皮，然后歸類。將單獨的頭發(fā)放在一起并在37℃用胰蛋白酶處理五分鐘，然后中和胰蛋白酶(胰蛋白酶中和系統(tǒng)(TNS)，C4ll10，PromoceIl，Heidelberg，Germany)。將得到的細(xì)胞混懸液接種在黑色素細(xì)胞原代培養(yǎng)介質(zhì)中(M2，Promocell，Heidelberg，Germany)。培養(yǎng)6天后，每兩天或每三天更新介質(zhì)。在十至二十天后，培養(yǎng)基包括角蛋白細(xì)胞(keratinocytes)和黑色素細(xì)胞。通過在37℃培養(yǎng)具有0.05％-0.02％(w/v)胰蛋白酶-EDTA的培養(yǎng)物3分鐘經(jīng)由特異的胰蛋白酶作用(differentialtrypsination)對黑色素細(xì)胞進(jìn)行選擇，然后用TNS中和胰蛋白酶。原代培養(yǎng)物可以含有一些雜質(zhì)成纖維細(xì)胞；通過用25μg/mL遺傳霉素重復(fù)處理除去后者。
b-信使RNA的提取和純化從毛囊黑色素細(xì)胞的兩個不同的培養(yǎng)物中提取信使RNA，毛囊黑色素細(xì)胞來源于從不同個體的采集兩份樣品。根據(jù)試驗方案用QuickPrepr mRNA試劑盒(pharmacia Biotech，Brussels，Belgium)試劑進(jìn)行信使RNA提取(在P3或P4傳代進(jìn)行，35mm碟融合)。
對每個研究的樣品(細(xì)胞培養(yǎng)物在35mm直徑碟中融合)，實施以下試驗方案。
去除細(xì)胞培養(yǎng)物上清夜，以800μl溶胞緩沖液(lysis buffer)代替，然后回收所得溶胞產(chǎn)物，倒入1.5ml聚丙烯微型管中(管1)。
將1ml低聚(oligo)(Dt-18)纖維素微球混懸液加入1.5ml微型管中(管2)，14000rpm離心1分鐘。除去上清夜，然后將管1的內(nèi)容物加到管2中，通過輕輕振搖微型管3分鐘使微球在溶胞產(chǎn)物中重新懸浮。
通過洗滌將附著于微型管的聚A+RNAs與雜質(zhì)分離。將該管以14000rpm離心1分鐘，然后除去上清液。用1ml洗滌緩沖液(高鹽緩沖液)代替。如上重新懸浮微球，輕輕振搖該管1分鐘。以14000rpm離心該管1分鐘，再次除去上清夜，用1ml低鹽緩沖液代替。
如此用低鹽緩沖液總共洗滌5次，隨后用高鹽緩沖液洗滌3次。
將第3次洗滌的內(nèi)容物(微球+緩沖液)裝填到在底部含有濾器的微型柱(microspinTMcolumn)上，放置在1.5ml微型管中。將整個裝置以14000rpm離心1分鐘。回收微型柱放置在1.5ml微型管中。然后用總終體積0.4ml的洗脫緩沖液洗脫聚A+信使RNA，預(yù)先調(diào)整至65℃。
c-互補DNA(cDNA)鏈的合成使用第一鏈cDNA合成試劑盒(pharmacia Biotech，Brussels，Belgium)進(jìn)行這個步驟。
在PCR前將獲得的互補DNA的樣品用無菌水稀釋至1/10。
d-引物的選擇，PCR(聚合酶鏈反應(yīng))由Genset SA，rue Robert et 25 Sonia Delaunay，paris使用委托人自己的材料合成后，使用對目的序列特異的引物。
將第一對引物雜交到編碼遍在型蛋白質(zhì)(甘油醛-3磷酸脫氫酶)的序列，將另外兩對引物分別雜交到編碼前列腺素H合酶1和15-羥基前列腺素脫氫酶抑制劑的序列。
人β-肌動蛋白；genbank登記號NM_001101正義引物5′-ATGGATGATGATATCGCCGCGCT-3′，反義引物5′-CGGACTCGTCATACTCCTGCTTG-3′擴(kuò)增片段1095個堿基對。
前列腺素H合酶1(PGHS-1)；genbank登記號.S36271正義引物5′-CTCATAGGGGAGACCATCAAG-3′反義引物5′-CCTTCTCTCCTACGAGCTCCT-3′擴(kuò)增片段451個堿基對。
人15-羥基前列腺素(15-PGDH)；genbank登記號NM_000860正義引物5′-TGCCAATGGATTGATAACACTCAT-3′反義引物5′-ACAGCAGTTTTCATCTGGGATATG-3′擴(kuò)增片段706個堿基對。
根據(jù)Takara TaqTM試驗方案，Takara Shuzo Co.，Ltd.BiomedicalGroup，Seta 3-4-1，Otsu，Shiga，520-2193，Japan進(jìn)行PCR反應(yīng)。雜交溫度(THs)分別是54℃(15-PGDH)和57℃(肌動蛋白，GAPDH和PGHS-1)；循環(huán)數(shù)目＝35。
在反應(yīng)中每個互補DNA樣品放入1μl。
在反應(yīng)中引物對以40ng/μl放入5μl(2.5μl+2.5μl)4′95℃，1個循環(huán)30″94℃1′THs℃ 35個循環(huán)1′72℃7′72℃ 1個循環(huán)d-鑒別1.1瓊脂糖凝膠的制備稱出0.65g瓊脂(分子生物學(xué)檢定的瓊脂糖，Bio-RadLaboratories，2000 Arfred Nobel Dr.，Hercules，CA 94547，USA)。
加入50ml 1 TAE緩沖液，Amresco，Solon，Ohio 44139，USA。
將瓊脂糖混懸液煮沸，然后加入含有一滴ethydium bromide(25μg)(Amresco，Solon，Ohio 44139，USA)的容器中。
將沉積樣品的“梳子”放置在容器的一端。
在冷卻30分鐘之后(室溫)，將20μlPCR產(chǎn)物和10μl分子量ladder標(biāo)準(zhǔn)物((AmplisizerTM，molecular ruler 170-8200)，Bio-Rad.)一起逐一加入凝膠孔。
將整個裝置浸漬于過量的1 TAE緩沖液中，經(jīng)受100伏特的電場作用45分鐘，。
將凝膠暴露于紫外光，通過熒光可觀察到獲得的產(chǎn)物。
15-PGDH表達(dá)的研究結(jié)果見圖1。
A.來源于捐獻(xiàn)者1的黑色素細(xì)胞的cDNA源。
B.來源于捐獻(xiàn)者2的黑色素細(xì)胞的cDNA源。
M.堿基對(bp)中的分子標(biāo)志ladderA1，B115-PGDH(706個bp)的表達(dá)A2，B2肌動蛋白(對照基因)(1096個bp)的表達(dá)凝膠顯示的PGHS-1的表達(dá)見圖2
A.來源于捐獻(xiàn)者1的黑色素細(xì)胞的cDNA源。
B.來源于捐獻(xiàn)者2的黑色素細(xì)胞的cDNA源。
M.在堿基對(bp)中的分子標(biāo)記ladderA1，B1PGHs-1(451個bp)的表達(dá)A2，B2肌動蛋白(對照基因)的表達(dá)，(1096個bp)。
實施例2a培養(yǎng)物中的毛發(fā)真皮乳頭成纖維細(xì)胞中15-PGDHmRNA表達(dá)的證明1.毛囊剝離根據(jù)B.Bernard/O.Gaillard專利FR 273612 A1，01/17/97；US 5 712169 A，01/28/98的中記載的方法將來源于志愿捐獻(xiàn)者面部整容(facelift)的毛囊剝離。
將分離的毛囊浸漬于Petri碟中，Petri碟含有20ml Gibco 199培養(yǎng)介質(zhì)，標(biāo)準(zhǔn)31153-018，Life Technologies，BP 96，Cergy PontoiseCedex，用1％的抗生素溶液補充，Gibco標(biāo)準(zhǔn)15240-096。
使用兩種注射針，標(biāo)準(zhǔn)NN-2516R，Terumo Europe N.V.Leuven，Belgium，將每種注射針裝配在1ml注射器上，標(biāo)準(zhǔn)BS-01N，Terumo，從毛囊球莖部提取15個真皮乳頭。
將這15個真皮乳頭放置在35mm直徑的Petri碟中，Petri碟含有2ml以前使用的199培養(yǎng)介質(zhì)，含有20％的胎牛血清，Gibco，標(biāo)準(zhǔn)10091-130。然后在5％CO2下將該碟放入37℃恒溫培養(yǎng)箱。
在培養(yǎng)3個星期后進(jìn)行第一次傳代，預(yù)先沒有更換介質(zhì)。除去介質(zhì)，在Petri碟中放入1ml胰蛋白酶溶液，Gibco，標(biāo)準(zhǔn)25050-022，將該碟放回培養(yǎng)箱4分鐘。如此將在胰蛋白酶溶液中再懸浮的細(xì)胞(乳頭成纖維細(xì)胞)(微觀對照)放入15ml試管中，標(biāo)準(zhǔn)Falcon，352097，Becton Dickinson，Chemin des sources，BP 37，Meylan 38241，含有10ml以前使用的199介質(zhì)(含有20％的胎牛血清)。
以1500rpm離心5分鐘后，除去上清液，用5ml先前使用的199介質(zhì)(這里含有10％的胎牛血清)溶解細(xì)胞顆粒。將細(xì)胞懸浮液放置在35mm Petri碟中，放回培養(yǎng)器(37℃，5％CO2)。
根據(jù)同一個方法進(jìn)行以下傳代P2，P3，P4。細(xì)胞一融合就進(jìn)行傳代。
2.信使RNA的提取和純化根據(jù)試驗方案，使用QuickPrepr mRNA試劑盒的試劑(pharmaciaBiotech，Brussels，Belgium)進(jìn)行真皮乳頭成纖維細(xì)胞信使RNA提取(在P3或P4傳代進(jìn)行，35mm碟融合)。
對于每個研究的樣品(細(xì)胞培養(yǎng)物在35mm直徑碟中融合)，實施以下試驗方案。
除去細(xì)胞培養(yǎng)物上清液，以800μl溶胞緩沖液(lysis buffer)代替，然后回收所得溶胞產(chǎn)物，并倒入1.5ml聚丙烯微型管中(管1)。
將1ml低聚(oligo)(Dt-18)纖維素微球混懸液加入1.5ml微型管中(管2)，14000rpm離心1分鐘。除去上清液，然后將管1的內(nèi)容物加到管2中，通過輕輕振搖微型管3分鐘使微球在溶胞產(chǎn)物中再懸浮。
通過洗滌將附著于微型管的聚A+RNAs與雜質(zhì)分離。將該管以14000rpm離心1分鐘，除去上清液用1ml洗滌緩沖液(高鹽緩沖液)代替。如上重新懸浮微球，輕輕振搖該管1分鐘。以14000rpm離心該管1分鐘，再次除去上清液，用1ml低鹽緩沖液代替。
如此用低鹽緩沖液總共洗滌5次，隨后用高鹽緩沖液洗滌3次。
將第3次洗滌的內(nèi)容物(微球+緩沖液)裝填到在底部含有濾器的微型柱(microspinTM柱)上，放置在1.5ml微型管中。將整個裝置以14000rpm離心1分鐘。回收微型柱放置在1.5ml微型管中。然后用總終體積0.4ml的洗脫緩沖液洗脫聚A+信使RNA，預(yù)先調(diào)整至65℃。
3.信使mRNA的沉淀在-20℃向含有洗脫物的管中加入10μl糖原溶液，40μl 2.5M醋酸鉀和1ml無水乙醇。將該管放置于干冰中(-80℃)。1小時后，在4℃以17500rpm離心該管15分鐘。在-20℃仔細(xì)除去上清液(mRNA形成形成非常小的顆粒)，用1ml80％的乙醇(乙醇/水；v/v))代替。在4℃以17500rpm離心該管15分鐘，完全除去上清液。用8μl無菌蒸餾水溶解顆粒。
4.互補DNA(cDNA)鏈的合成使用第一鏈cDNA合成試劑盒(pharmacia Biotech，Brussels，Belgium)進(jìn)行這個步驟。
將含有mRNA的試管在65℃放置10分鐘，然后在冰中放置5分鐘，然后加入以下試劑5μl緩沖液，含有逆轉(zhuǎn)錄酶的混懸液。
1μl低dT(18)引物，0.8μg/ml。
1μl二硫蘇糖醇水溶液，200nM。
將該試管在37℃培養(yǎng)1小時。通過將該試管放入冰中阻斷反應(yīng)。
5.引物的選擇，聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)根據(jù)供應(yīng)商的數(shù)據(jù)，在緩沖介質(zhì)中，在特異性引物對(滴度40ng/ml)，Taq聚合酶以及核苷酸的存在的情況下使獲得的1μl(用無菌蒸餾水稀釋至1/10)互補DNA進(jìn)行聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)。
通過Genset SA，rue Robert et Sonia Delaunay，Paris使用委托人自己的材料，通過合成獲得對使用的目的序列特異的引物。
第一對引物雜交到編碼普遍存在蛋白質(zhì)(β-肌動蛋白)的序列。第二對引物雜交到編碼15-羥基前列腺素酶的序列。
人β-肌動蛋白；genbank登記號NM_OO11O1正義引物 5′-ATGGATGATGATATCGCCGCGCT-3′反義引物5′CGGACTCGTCATACTCCTGCTTG-3′擴(kuò)增片段1096個堿基對。
人15-羥基前列腺素(15-PGDH)；genbank登記號NM_000860正義引物5′-TGCCAATGGATTGATAACACTCAT-3′反義引物5′-ACAGCAGTTTTCATCTGGGATATG-3′擴(kuò)增片段706個堿基對。
根據(jù)修正的Takara TaqTM試驗方案，Takara Shuzo Co.，Ltd.Biomedical Group，Seta 3-4-1，Otsu，Shiga，520-2193，Japan進(jìn)行PCR反應(yīng)。引物對(β-肌動蛋白，PGFS，15-PGHD)雜交溫度是54℃，循環(huán)數(shù)目＝35。
*通過將171μl蒸餾水，24.5μl來自試劑盒的10緩沖液，以及20μl來自試劑盒的核苷酸(dNTPs)混合物混合制備核苷酸緩沖溶液。
向適于PCR的微型管中引入下列試劑1μl(稀釋至1/10)互補DNA，43μl核苷酸混合物緩沖溶液*在反應(yīng)中使用5μl(2.5μl+2.5μl)引物對，40ng/ml，50μl礦物油。
將試管放在PCR儀中，按程序進(jìn)行以下循環(huán)。
4′95℃ 1個循環(huán)30″94℃1′54℃ 35個循環(huán)1′72℃7′72℃ 1個循環(huán)6.鑒別a.瓊脂糖凝膠的制備稱出0.65g瓊脂(分子生物學(xué)檢定的瓊脂糖，Bio-RadLaboratories，2000 Arfred Nobel Dr.，Hercules，CA 94547，USA)。
加入50ml 1 TAE緩沖液，Amresco，Solon，Ohio 44139，USA。
將瓊脂糖混懸液煮沸，然后加入含有一滴ethydium bromide(25μg)(Amresco，Solon，Ohio 44139，USA)的容器中。
將沉積樣品的“梳子”放置在容器的一端。
在冷卻30分鐘之后(室溫)，將20μlPCR產(chǎn)物逐一加入凝膠孔，同時引入10μl分子量標(biāo)準(zhǔn)物的混合物(AmplisizerTM，molecular ruler170-8200，Bio-Rad Laboratories，2000 Alfred Nobel Dr.，Hercules，CA 94547，USA).
將整個裝置浸漬于過量的1 TAE緩沖液中，經(jīng)受100伏特的電場作用45分鐘，。
將凝膠暴露于紫外光，通過熒光可觀察到獲得的產(chǎn)物。
要求的擴(kuò)增引物重量。
肌動蛋白＝1096個堿基對；15-PGDH＝706個堿基對；PGFS＝1061個堿基對。
樣品1，2，3來源于人毛發(fā)真皮乳頭成纖維細(xì)胞的不同培養(yǎng)物。
15-羥基前列腺素脫氫酶表達(dá)的研究需要指出在不同樣品中表達(dá)的15-PGDH，具有706bp特征性分子量帶。
實施例3a由真皮乳頭成纖維細(xì)胞進(jìn)行克隆從毛發(fā)真皮乳頭成纖維細(xì)胞培養(yǎng)物提取聚-A+信使RNA并純化，然后如實施例1所述合成互補DNA(cDNA)。
選擇適于15-PGDH(genbank登記號＝NM_000860)的添加到編碼限制位點序列的引物對(由Genset合成)a)15-PGDH引物5′-GGG GAT CCA TGC ACG TGA ACG GCA AAG TG-3′；正義引物BamHl位點(黑體字表示)5′-TCT CGA GAG CTG TTC ATT GGG T-3′；反義引物Xhol位點(黑體字表示)b)聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)用于15-PGDH克隆的PCR試驗方案基本上使重復(fù)上文所述試驗方案，除了以下不同根據(jù)供應(yīng)商的數(shù)據(jù)(Pfu TurborDNA聚合酶)，StratageneCloning Systems，11011 North Torrey Pines Road，La Jolla，CA 92037使用Taq聚合酶。
雜交溫度59℃，延長時間2分鐘，15-PGDH總共25個循環(huán)，要求擴(kuò)增引物＝815bp。
c)根據(jù)供應(yīng)商的數(shù)據(jù)(Amersham Pharmacia Biotech，12 avenuedes Tropiques，ZA Courtaboeuf，91944 Les UIis)，用限制性內(nèi)切酶(BamH1；15-PGDH用Xhol)消化PCR產(chǎn)物，然后逐一轉(zhuǎn)移到1.3％瓊脂糖凝膠上(參見實施例1；6.鑒別)a)在(紫外光下檢測之后)用手術(shù)刀將與要求的擴(kuò)增引物(參見ac)相應(yīng)的條帶挖去，根據(jù)WizardrPCR Preps DNA純化系統(tǒng)試劑盒的供應(yīng)商(Promega Corporation，2800 Woods Hol-IoW 10Road，Madison，WI 53711-5399)的介紹純化這些挖去的條帶。
e)15-PGDH根據(jù)Fast-LinkTMDNA連接試劑盒的供應(yīng)商(Epicentre，1202AnnStreet，WI 53713)的說明，將15-PGDH連接到預(yù)先消化(BamH1/Xhol)和及純化的載體pGEX 4T3(Amersham Pharmacia Biotech，12avenuedes Tropiques，ZA Courtaboeuf，91944 Les Ulis)。
f)轉(zhuǎn)化將BL21DE3plys型感受態(tài)菌用于構(gòu)建體(pGEX4T3/15
-PGDH)的轉(zhuǎn)化。這種菌株由Stratagene公司出售。根據(jù)常規(guī)使用的試驗方案進(jìn)行轉(zhuǎn)化，例如如上文使用的Fast-LinkTMDNA連接試劑盒所述。沉積后對感染細(xì)菌(克隆體)進(jìn)行選擇(白色菌落)，將這些轉(zhuǎn)化產(chǎn)物的一部分在Petri碟中冷卻的LB-瓊脂培養(yǎng)基上37℃培養(yǎng)24小時，(L-2897，D′Abeau Chesne，BP701，38297 Saint euentinFallavier)Sigma-A1drich，L′isle D′Abeau Chesne，BP701，38297，Saint Quentin Fallavier)，它含有100μg/ml氨比西林。
g)15-PGDH的產(chǎn)生采用來源于“15-PGDH轉(zhuǎn)化”Petri碟的菌落，將其放在250ml LB介質(zhì)(L-3022，Sigma-A1drich，L′isle t0 D′Abeau Chesne，BP 701，38297，saint Quentin Fallavier)中，介質(zhì)含有100μg/ml氨比西林，將培養(yǎng)瓶在37℃振搖培養(yǎng)16小時。
16小時后，將每個培養(yǎng)瓶放入含有2.51 LB介質(zhì)的Erlenmeyer瓶中，介質(zhì)含有100μg/ml氨比西林。將這兩個Erlenmeyer瓶37℃振搖培養(yǎng)3至4小時(直到在630nm測定的吸光度在0.6至0.9之間)。
加入異丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)(16758，Sigma-Aldrich，L′isle D′Abeau Chesne，BP 701，38297，Saint QuentinFallavier)使終濃度為0.1mM。
在室溫(20-25℃)將Erlenmeyer瓶振搖培養(yǎng)另外24小時。
如此，將獲得的培養(yǎng)物(250ml部分)以5000rpm離心7分鐘，用3ml10mMpH＝7.00的磷酸鹽緩沖液溶解顆粒(4℃)，磷酸鹽緩沖液含有蛋白酶抑制劑混合物(protease inhibitor cocktail set I 539131，Calbiochem-Novabiochem Corporation，10394 Pacific Center Court，SanDiego，CA 92121)。在冰中封閉細(xì)菌混懸液(在聚丙烯管中收集40ml部分)，經(jīng)受超聲處理(Vibra eell 20kHz，72434，Bioblock Scientific，Parc d′innovation，BP111，67403 Illkirch)，將探針浸于每個試管15秒鐘(每個試管15秒振蕩6次)。4℃以16000rpm將每個試管離心1小時。
h)15-PGDH的純化根據(jù)供應(yīng)商的介紹(Amersham pharmacia Biotech，12 avenue desTropiques，ZA Courtaboeuf，91944 Les Ulis)回收上清液，將其放在的聚丙烯管中，聚丙烯試管含有預(yù)先洗過的1ml Gluthatione-Sepharoser4B(每1ml Gluthatione-Sepharoser4B 40ml上清液)。
將試管垂直放置在旋轉(zhuǎn)混合器上，室溫(20-25℃)以10rpm旋轉(zhuǎn)1小時。
將試管以1000rpm離心3分鐘，除去上清液，向每個試管加入40ml10mM pH-7.0的磷酸鹽緩沖液。輕輕振搖后(顛倒)，將試管以1000rpm再次離心3分鐘。
進(jìn)行上述操作5次。第6次洗滌使用40mlpH7.2的磷酸鹽緩沖鹽水(PBS，Bio-Merieux S，69280 Marcy-l′Etoile)進(jìn)行。離心后，再次保留上清液。
i)15-PGDH洗脫根據(jù)供應(yīng)商的介紹(Amersham pharmacia Biotech，12 avenue desTropiques，ZA Courtaboeuf，91944 Les Ulis)在PBS中，以1單位/μl重構(gòu)凝血酶混懸液。
向含有1ml Gluthatione-Sepharoser4B的每個試管中加入950μlPBS和50μl重構(gòu)凝血蛋白酶混懸液。以250rpm斜位輕輕振搖試管16小時。16小時后，以3000rpm將試管離心5分鐘，收集上清液。
通過按照Bio-Rad DC蛋白質(zhì)分析方法(Bio-Rad Laboratories，2000 Alfred Nobel Dr.，Hercufes，CA 94547)測定蛋白質(zhì)的量。
因此，獲得的15-PGDH為每ml蛋白質(zhì)0.2至5mg，大多數(shù)通常為1mg/ml。
因此，分別用添加10％甘油的PBS，PBS稀釋獲得的蛋白質(zhì)混懸液，以使15-PGDH終蛋白質(zhì)濃度是0.2mg/ml的滴度。在-80℃封閉混懸液直到使用時。
因此，在標(biāo)準(zhǔn)條件下進(jìn)行電泳分析(SDS-Page)證明獲得的產(chǎn)物的性質(zhì)實施例4a分子對這些酶的影響的評價以及某些分子家族例如15-PGDH抑制劑的特性a)15-PGDH試驗獲得的酶濃度是0.3mg/ml，將其在-80℃封閉。將混懸液解凍，儲存在冰中。
制備100mM Tris緩沖液，pH-7.4，含有0.1mM二硫蘇糖醇(D5545，Sigma-Aldrich，L′isIe D′Abeau Chesne，BP 701，38297，SaintQuentin FalIavier)，1.5mM β-NAD(N6522，Sigma-Aldrich，L′isleD′Abeau Chesne，BP 701，38297，Saint euentln Fallavier)，以及50μM前列腺素E2(P4172，Sigma-Aldrich，L′isle D′Abeau Chesne，BP 701，38297，Saint Quentin Fallavier)。
將0.965ml這種緩沖液(預(yù)先調(diào)整至37℃)放在分光光度計(Perkin-Elmer，Lambda 2)的吸收池中，37℃恒溫，測定波長設(shè)定在340nm。在37℃將0.035ml酶混懸液同時放在吸收池中，進(jìn)行記錄(340nm吸光度的增加)。
記錄最大反應(yīng)速率。
將測定值(分子)和對照值(不含分子)進(jìn)行比較，結(jié)果表示為對照值的百分?jǐn)?shù)。
分子A和B獲得的結(jié)果如下
實施例1可在本發(fā)明中使用的式(I)的苯基呋喃，苯基噻吩以及苯基吡咯雜環(huán)化合物的實例化合物14-{5-[(2，4-二氧-1，3-噻唑烷基-5-亞基)甲基]-2-呋喃基}苯甲酸
更優(yōu)選化合物1a
化合物2乙基4-{5-[(2，4-二氧-1，3-噻唑烷基-5-亞基)甲基]-2-呋喃基}苯甲酸酯 化合物35-({5-[3，5-二(三氟甲基)苯基]-2呋喃基}亞甲基-1，3-噻唑烷-2，4-二酮 化合物43-{5-[(2，4-二氧-1，3-噻唑烷基-5-亞基)甲基]-2-呋喃基}苯甲酸
化合物54-{5-[(2，4-二氧-1，3-噻唑烷基-5-亞基)甲基]-2-thiophyl}苯甲酸 化合物64{5-[(2-磺基-4-氧-1，3-噻唑烷基-5-亞基)甲基]-2-呋喃基}苯甲酸 化合物74-{5-[(2，4-二磺基-1，3-噻唑烷基-5-亞基)甲基]-2-呋喃基}苯甲酸 化合物84-{5-[(2，4-磺基-1，3-噻唑烷基-5-亞基)甲基]-2-呋喃基}苯甲酸的二鈉鹽(Z型異構(gòu)體)
有利地，式(I)的化合物是4-{5-[(2，4-二磺基-1，3-噻唑烷基-5-亞基)甲基]-2-呋喃基}苯甲酸的二鈉鹽，尤其是Z型異構(gòu)體。
作為可在本發(fā)明中使用式(I)的其他化合物，可以提及


*LC液相色波譜**MS質(zhì)波譜可根據(jù)下文所述方法合成本發(fā)明的化合物。
結(jié)構(gòu)D，E，F(xiàn)或G的化合物合成的一般方法這些雜環(huán)化合物分別對應(yīng)于3-乙基-2-硫代-4-噁唑烷酮(CAS號10574-66-0，摩爾質(zhì)量145，結(jié)構(gòu)D)，2-硫乙內(nèi)酰脲(CAS號503-87-7，摩爾質(zhì)量116，結(jié)構(gòu)E)，2，4-噻唑烷二酮(CAS號2295-31-0，摩爾質(zhì)量117，結(jié)構(gòu)F)，噻吩并(thiazolo)(2，3-b)苯并咪唑基-3(2H)-酮(CAS號3042-01-1，摩爾質(zhì)量117，結(jié)構(gòu)F)在Stem公司的Discover的微波照射下將100mg乙醛，1當(dāng)量的結(jié)構(gòu)D，E，F(xiàn)或G的雜環(huán)，50μl哌啶以及1.5ml無水乙醇放入合成系統(tǒng)的Pyrex反應(yīng)試管中。
試管配有磁棒(magnetic bar)，然后通過折邊的塞子(crimpedstopper)密封。
然后根據(jù)以下參數(shù)在Discover裝置中對反應(yīng)介質(zhì)進(jìn)行照射-釋放功率250W-設(shè)定溫度150℃-照射時間2分鐘-達(dá)到設(shè)定的最大時間4分鐘。
冷卻后，將反應(yīng)介質(zhì)通過燒結(jié)玻璃濾器過濾，用最小量的無水乙醇洗滌，然后真空干燥。
產(chǎn)率40-100％根據(jù)以下條件通過LC-UV-MS對樣品進(jìn)行分析梯度8分鐘內(nèi)乙腈10/水90到乙腈90/水10柱X-terra_MS C18 3.5 3×50mm流速0.5ml/minUV290nm-450nm二極管陣列MS陽性和陰性大氣壓離子化電噴射。
通過實例下面給出了化合物1，3，4和6的反應(yīng)圖示。
實施例I-1化合物14-{5-[(2，4-二氧-1，3-噻唑烷基-5-亞基)甲基]-2-呋喃基}苯甲酸的制備反應(yīng)圖示
方法步驟1在配有冷卻系統(tǒng)和磁力攪拌器的50ml三頸圓底燒瓶中將1.99g(6.16mmol)的四丁基溴化銨溶于100ml水中，然后加入1.12g(6.7mmol)的4-羧基苯硼酸(反應(yīng)物B)，1.08g(6.16mmol)5-溴代-2-呋喃甲醛(反應(yīng)物A)，30mg(2mol％)醋酸鈀和2.12g(15.4mmol)碳酸鉀。將反應(yīng)介質(zhì)在室溫(20-25℃)放置12小時。隨后用乙酸乙酯洗滌混合物(50ml 3次)。用35％鹽酸溶液將水相酸化至pH＝1-2。將形成的黃褐色(yellow-beige)固體(化合物A)濾出，然后用水洗凈(20ml3次)，在有1.2g五氧化二磷的情況下真空干燥。反應(yīng)產(chǎn)率90％。
步驟2在配有Dean和Stark裝置，溫度計以及磁力攪拌器的50ml三頸圓底燒瓶中將0.38g(3.25mmol)噻唑烷基-2，4-二酮溶解在20ml甲苯中，然后加入0.7g(3.25mmol)上文形成的黃褐色固體(化合物A)。隨后加入0.15ml醋酸和0.15哌啶，然后將混合物回流5小時。
形成黃色固體，濾出，然后用甲苯洗凈(20ml2次)，在有0.85g五氧化二磷的情況下將產(chǎn)物真空干燥。粗反應(yīng)物產(chǎn)率78％。
分析核磁共振得到的波波譜和提出的結(jié)構(gòu)一致。
實施例I-2化合物35-({5-[3，5-二(三氟甲基)苯基]-2呋喃基}亞甲基-1，3-噻唑烷-2，4-二酮的制備反應(yīng)圖示 方法在配有Dean and Stark裝置，溫度計以及磁力攪拌器的50ml三頸圓底燒瓶中將0.38g(3.25mmol)的噻唑烷基-2，4-二酮溶于20ml甲苯中，然后加入1g(3.25mmol)的5-[3，5-二(三氟甲基)苯基]-2-呋喃甲醛(反應(yīng)物B)。隨后加入0.15ml醋酸(AcOH)和0.15ml哌啶，然后將混合物回流5小時。在反應(yīng)期間形成黃色固體。將其濾出，然后用甲苯洗凈(20ml 2次)，在有0.86g五氧化二磷的情況下真空干燥。反應(yīng)產(chǎn)率65％。
分析-質(zhì)波譜法主要測定了理論分子C16H7F6NO3S的準(zhǔn)分子離子。
-核磁共振得到的波譜和提出的結(jié)構(gòu)一致。
實施例I-3化合物43-{5-[(2，4-二氧-1，3-噻唑烷基-5-亞基)甲基]-2-呋喃基}苯甲酸的制備反應(yīng)圖示 方法步驟1在配有冷卻系統(tǒng)和磁力攪拌器的50ml三頸圓底燒瓶中將1.99g(6.16mmol)的四丁基溴化銨溶于100ml水中，然后加入1.12g(6.7mmol)的3-羧基苯硼酸(反應(yīng)物B)，1.08g(6.16mmol)5-溴代-2-呋喃甲醛(反應(yīng)物A)，30mg(2mol％)醋酸鈀和2.12g(15.4mmol)碳酸鉀。將反應(yīng)介質(zhì)在室溫(20-25℃)放置12小時。隨后用乙酸乙酯洗滌(50ml 3次)。用35％鹽酸溶液將混合物酸化至pH＝1-2。將形成的淡紅褐色(pinkish-beige)固體(化合物A)濾出，然后用水洗凈(20ml3次)，在有1.1g五氧化二磷的情況下真空干燥。所得反應(yīng)產(chǎn)率82％。
步驟2在配有Dean和Stark裝置，溫度計以及磁力攪拌器的50ml三頸圓底燒瓶中將0.542g(4.62mmo1)噻唑烷基-2，4-二酮溶解在20ml甲苯中，然后加入1g(4.62mmol)上文形成的淡紅褐色固體(化合物A)。隨后加入0.15ml醋酸(AcOH)和0.15ml哌啶，然后將混合物回流5小時。觀察到形成黃色固體，濾出，然后用甲苯洗凈(20ml 2次)。隨后將固體分散在100ml水中。然后加入2N氫氧化鈉水溶液直到產(chǎn)物完全溶解，然后用1N鹽酸溶液進(jìn)行酸化直到pH是1-2。將形成的褐色固體濾出，然后用水洗滌(50ml 2次)，在有0.86g五氧化二磷的情況下將產(chǎn)物真空干燥。反應(yīng)產(chǎn)率63％。
分析-核磁共振得到的波譜和提出的結(jié)構(gòu)一致。
實施例I-4化合物83-{5-[(2，4-二氧-1，3-噻唑烷基-5-亞基)甲基]-2-呋喃基}苯甲酸的二鈉鹽的制備反應(yīng)圖示 方法將15g3-[5-[(2，4-二氧-1，3-噻唑烷基-5-亞基)甲基]-2-呋喃基]苯甲酸溶解在500ml氫氧化鈉水溶液中(2當(dāng)量)。用50ml二氯甲烷洗滌這個溶液兩次，然后部分濃縮，然后將該溶液倒入丙酮中，如此得到11g橙黃色沉淀，即3-{5-[(2，4-二硫代-1，3-噻唑烷基-5-亞基)甲基]-2-呋喃基}苯甲酸的二鈉鹽，其為Z型。
分析核磁共振得到的波譜和提出的結(jié)構(gòu)一致。
實施例I-5式(I)化合物的15-PGDH特異性抑制特性的證明1.15-PGDH試驗如實施例4a所述進(jìn)行這項試驗。
將測定值(包括化合物(I))和對照值(不包括化合物(I))進(jìn)行比較；所顯示的結(jié)果表示化合物(I)抑制50％15-PGDH酶活性的濃度，稱作IC50dh。
2.PGFS試驗如文獻(xiàn)FR-A-02/05067所述獲得PGF合酶在適宜介質(zhì)中的混懸液，濃度0.5mg/ml，在-80℃封閉。為了試驗需要，將混懸液解凍并貯藏在冰中。
此外，在棕色瓶(避光)中制備100mM Tris緩沖液，pH＝6.5，含有20mg 9，10-菲醌*(P2896，Sigma-Aldrich，L′isle D′Abeau Chesne′BP 701，38297，Saint Quentin Fallavier)和100mM β-NAPDH(N1630，Sigma-AIdrich，L′isle D′Abeau Chesne，Bp 701，38291，SaintQuentin Fallavier)。
*用無水乙醇制備具有1mM滴度的儲備溶液，調(diào)整至40℃，將燒瓶放置在超聲槽中以促進(jìn)產(chǎn)物溶解。
將這種緩沖液0.950ml(預(yù)先調(diào)整至37℃)放入分光光度計(Perkin-Elmer，Lambda 2)的吸收池中，37℃控制恒溫，測定波長設(shè)在340nm。相伴隨地37℃向吸收池加入0.05ml酶混懸液，并記錄(相當(dāng)于在340nm吸收度的減少)。記錄最大反應(yīng)速率。
將測定值(包括化合物(I))和對照值(不包括化合物(I))進(jìn)行比較；所顯示的結(jié)果表示化合物(I)抑制50％PGFS酶活性的濃度，稱作IC50fs。
從該表可看出化合物(I)的IC50dh/IC50fs比例大于13。因此，化合物1明顯具有15-PGDH抑制活性，尤其是對PGFS的選擇性。
實施例I-6對細(xì)胞模型15-PGDH特異性抑制效果的證明這項研究目的在于在細(xì)胞模型中對實施例I的化合物進(jìn)行評價。這項研究可在比簡單反應(yīng)介質(zhì)更復(fù)雜的實驗條件下測定滲入胞質(zhì)溶膠的有效成分以及其15-PGDH選擇性抑制劑的效果。
材料和方法D-2.37℃，5％CO2下，在RPMI 1640介質(zhì)+10％胎牛血清+2mML-谷氨酰胺+抗生素中的U397培養(yǎng)物(CRL-1593 American Type CellCollection)。
D-1.在RPMI 1640介質(zhì)+10％胎牛血清+2mM L-谷氨酰胺+抗生素+10nM PMA(卟啉醇12肉豆蔻酸13乙酸酯)中制備U397混懸液(1×106細(xì)胞/ml)；向96孔板的每個試驗孔引入這種混懸液200μl(3個微孔，每種分子和每個試驗濃度+相應(yīng)的對照)；37℃，5％CO2下培養(yǎng)36小時，D0.除去上清液(細(xì)胞附著于微孔底部，在顯微鏡下觀察)，向每個微孔引入100RPMI 1640+2mM L-谷氨酰胺+10ng脂多糖(LPS)(除了無水乙醇外)+需要濃度的試驗分子(在這種情況是5和25)。
37℃，5％CO2下培養(yǎng)6小時。
試驗分子的儲備溶液在二甲基壓砜中是25mM。
所有微孔含有相同終濃度的DMSO。
使用酶免疫測定試劑盒(Cayman，ref516011)立即對不同條件下(分子或?qū)φ?由細(xì)胞(50)分泌的PGF2α的量進(jìn)行測定。
以下結(jié)果為LPS對照的％
該結(jié)果證實了在細(xì)胞環(huán)境中本發(fā)明化合物是15-PGDH的選擇性抑制劑，可保護(hù)前列腺素。
通過化妝品或藥劑學(xué)領(lǐng)域的常規(guī)方法獲得以下組合物。
實施例I-7洗發(fā)劑-化合物1 0.80g-丙二醇 10.00g-異丙醇 適量 100.00g將該洗發(fā)劑涂敷于頭皮，每次涂敷1ml每天1到2次，輕微按摩頭皮以使活性成分滲透。隨后將頭發(fā)風(fēng)干。
實施例I-8洗發(fā)劑-化合物2 1.00g-丙二醇 30.00g-乙二醇 40.00g-水 適量 100.00g將該洗發(fā)劑涂敷于頭皮，每次涂敷1ml每天1到2次，輕微按摩頭皮以使活性成分滲透。隨后將頭發(fā)風(fēng)干。
實施例I-9洗發(fā)劑-化合物1 1.00g-乙二醇 40.00g-NaOH適量(*)-水 適量 100.00g(*)足以中和由苯環(huán)(R1)攜帶的酸性官能團(tuán)的量。
將該洗發(fā)劑涂敷于頭皮，每次涂敷1ml每天1到2次，輕微按摩頭皮以使活性成分滲透。
實施例I-10洗發(fā)劑-化合物81g-乙二醇 40.00g-丙二醇 30.00g-水適量 100.00g實施例I-11蠟/水睫毛膏-蜂蠟 6.00％-石蠟 13.00％-氫化希蒙得木油 2.00％-水溶性成膜聚合物 3.00％-硬脂酸三乙醇胺 8.00％-化合物51.00％-黑色顏料 5.00％-防腐劑適量-水適量 100.00％如同常規(guī)的睫毛膏，用睫毛刷將該睫毛膏涂敷于睫毛。
實施例I-12洗發(fā)劑-化合物80.10g-拉坦前列素 0.10g-丙二醇 30.00g-乙二醇 40.00g-水適量 100.00g實施例I-13洗發(fā)劑-化合物81％-乙醇 49.5％-水適量 100％將該洗發(fā)劑涂敷于頭皮，每次涂敷1ml每天1到2次，輕微按摩頭皮以使活性成分滲透。隨后將頭發(fā)風(fēng)干。
實施例5a15-PGDH抑制劑對黑色素細(xì)胞系MeWo的選擇性效果(保護(hù)PGF2α)方法學(xué)D＝0-在DMEM介質(zhì)(Gibco)+10％胎牛血清+2mM L-谷氨酰胺+1％抗生素(Gibco)中將1安瓿的MeWo黑色素細(xì)胞(American Type CellCollection，HTB-65)進(jìn)行擴(kuò)增(75cm3燒瓶，Costar)。融合后，在胰蛋白酶作用后(根據(jù)細(xì)胞培養(yǎng)常規(guī)使用的方法)，以每ml600000個細(xì)胞的比例將這些細(xì)胞(48小時至72小時)在同樣培養(yǎng)介質(zhì)中再懸浮。
-分n次向96孔板(Costar)的6個孔加入200該混懸液(n是試驗次數(shù)，即x個分子，2個濃度)。37℃，5％CO2下將96孔板放入培養(yǎng)箱。
D＝1-用DMSO制備待評價活性劑的1000X儲備溶液(即5和25mM)。
-從先前制備的培養(yǎng)物(96孔板)除去上清液，用預(yù)熱至37℃的100/孔DMEM介質(zhì)+添加劑(參見上文所述)漂洗。
-加入100/孔DMEM介質(zhì)(+添加劑)，其含有0.1DMSO(對照)或0.1待評價活性劑的儲備溶液(每種分子每個濃度6個試驗孔)。
實際上對于每種試驗活性劑(每個濃度)制備1ml溶液，因此是1ml介質(zhì)+1DMSO(對照)或1000X儲備溶液。
-37℃，5％CO2下將96孔板再次放入培養(yǎng)箱4小時，然后使用免疫酶試劑盒(根據(jù)供應(yīng)商的介紹(PGF2α，EIA試劑盒，ref.516011，Cayman))對50的每種上清液(不同的試驗)進(jìn)行PGF2α測定。
結(jié)果(為在對照條件下測定的PGF2α量的％)
這些結(jié)果表明與對照條件相比，15-PGDH抑制劑的選擇性對PGF2α產(chǎn)生保護(hù)作用。
因此，就著色而言，這些活性劑和所述前列腺素一樣對黑素生成的作用是有利的實施例II作為可在本發(fā)明中使用的吡唑化合物的實例，可以提及以下化合物化合物1 更優(yōu)選化合物1a(相對于雙鍵，環(huán)在Z位)化合物1a 化合物2
化合物3 化合物4 化合物5
化合物6 化合物7 化合物8 化合物9
化合物10 作為式(I)和(III)的新吡唑化合物，可以提及化合物11化合物11 實施例II-15-氨基-3-[1-氰基-2-(2，6二甲氧基苯基)乙烯基]-1-苯基-1H-吡唑-4-腈(化合物11)的合成方法在頂部配有Dean和Stark裝置的50ml三頸圓底燒瓶中，氬氣氛下將1g(4.48mmol)5-氨基-4-氰-1-苯基-3-吡唑乙腈在15ml甲苯中混懸。向混合物中加入0.744g(1當(dāng)量)2，6二甲氧基苯甲醛和0.030ml哌啶，將反應(yīng)介質(zhì)回流過夜，然后恢復(fù)至室溫。形成白色沉淀，將其濾出用甲苯洗滌。濃縮濾液至變干，殘渣用乙醇溶解，振搖15分鐘。將混懸液過濾，濃縮濾液至變干。將所得殘渣和先前獲得的殘渣混合，用硅膠純化(洗脫液98/2二氯甲烷/甲醇)。如此，獲得619mg產(chǎn)物，產(chǎn)率37％。
分析質(zhì)譜法(CH3OH/H2O中ESI+/-)372(MH)+，394(MNa)+，743(2MH)+，765(2MNa)+，370(M-H)-；核磁共振1H(400MHz；DMSO-d6)δppm3.85(s，6H，OCH3(13)和OCH3(9))；6.78(d，2It，H(10)和H(12))；6.95(s，2H，NH2(3))；7.42至7.57(m，6H，H(2′)至H(6′)和H(11))；7.86(s，1H，H(7))元素分析理論值C 67.91％；H 4.61％；N 18.86％；O 8.62％分析值C 67.30％；H 4.46％；N 18.88％；O 8.96％實施例II-2實施例II的化合物15-PGDH特異性抑制特性的證明115-PGDH試驗方法是實施例I-5所述方法。
將測定值(包括試驗化合物)和對照值(不包括試驗化合物)進(jìn)行比較；所顯示的結(jié)果表示化合物(I)抑制50％15-PGDH酶活性的濃度，稱作IC50dh。
2.PGFS試驗方法學(xué)是實施例I-6所述方法學(xué)。
將測定值(包括試驗化合物)和對照值(不包括試驗化合物)進(jìn)行比較；所顯示的結(jié)果表示化合物(I)抑制50％PGFS酶活性的濃度，稱作IC50fs。
從該表可看出化合物1a，6，7，8和9的IC50fs/IC50dh比大于161.56。因此，化合物1a，6，7，8和9，更優(yōu)選化合物1a，6，7和9相對于PGF合酶具有15-PGDH選擇性抑制活性。
實施例III可在本發(fā)明中使用的吡唑化合物的實例化合物1 化合物2 化合物3 化合物4 化合物5
化合物6 化合物7 化合物8 以下給出了實施例III的化合物3，5，6，7和8的合成實施例。
化合物3的合成乙基5-三氟甲基-1H-吡唑-4-羧酸酯的成
反應(yīng)物乙基2-(乙氧基亞甲基-4，4，4-三氟)-3-氧代丁酸酯C19H11F3O4MW240.18m ＝4.49g 18.71mmol/1當(dāng)量肼(1M四氫呋喃)H4N2V＝18.71ml 18.71mmol/1當(dāng)量乙醇 V＝25ml方法在氬氣和磁力攪拌下在100ml三頸燒瓶中將1M肼溶液(THF)加到25ml乙醇中。將混懸液冷卻至-15℃(CCl4/N2浴)，30分鐘內(nèi)將氧代丁酸酯滴加到肼中。
室溫2小時30分后，由于通過薄層色波譜沒有見到變化，用乙醇(EtOH)回流加熱反應(yīng)介質(zhì)16小時。一將反應(yīng)介質(zhì)恢復(fù)至室溫，然后就蒸發(fā)除去溶劑，用10ml戊烷將得到的固體洗滌兩次，通過燒結(jié)玻璃濾器過濾。
如此回收3g白色晶體固體(產(chǎn)率77％)。
分析獲得的淺褐色固體結(jié)構(gòu)的(1H NMR)(13C NMR)一致。
5-三氟甲基-1H-吡唑-4-羧酸的合成 反應(yīng)物乙基5-三氟甲基-1H-吡唑-4-羧酸酯C7H7N2O2F3MW208.14 m＝2.97g 14.3mmol/1當(dāng)量氫氧化鈉HNaO MW39.00 m＝5.71g 142mmol/10當(dāng)量乙醇 V＝30ml
方法磁力攪拌在250ml反應(yīng)器中將吡唑溶解在乙醇中。室溫15分鐘后，加入1.2N氫氧化鈉溶液(120ml水)。然后將反應(yīng)介質(zhì)回流18小時。
隨后將溶液恢復(fù)至10℃，然后用1N鹽酸酸化。減壓蒸發(fā)除去全部乙醇和三分之二的水后，通過燒結(jié)玻璃濾器過濾回收形成的白色沉淀，用水洗滌，然后強真空干燥。
對獲得的極細(xì)白色粉末(2.30g)進(jìn)行鑒別，與預(yù)期產(chǎn)物一致分析獲得的白色固體結(jié)構(gòu)的(1H NMR)(13C NMR)一致。
N-{2-[(2-呋喃基甲基)硫代]乙基}-5-三氟甲基-1H-吡唑-4-羧酸的合成 反應(yīng)物·5-三氟甲基-1H-C5H3N2O2F3MW180.08 m＝0.80g吡唑-4-羧酸4.44mmol/1當(dāng)量·羰基二咪唑C7H6N4O MW162.15 m＝0.815g 5.39/1當(dāng)量·2-(糠基硫代)乙胺C7H11NOS MW157.234 m＝3.22g21.9mmol/4.6當(dāng)量·二甲基甲酰胺 V＝10ml方法在氮氣和磁力攪拌下在100ml反應(yīng)器中將吡唑溶解在DMF中，然后迅速加入一份比例的CDI，攪拌混合物約45分鐘。觀察到持久不溶的產(chǎn)物。然后使用注射器快速滴加胺。過夜攪拌后，將反應(yīng)介質(zhì)傾倒入100ml冰/水混合物中。通過過濾回收形成的白色沉淀，用乙酸乙酯(2×25ml)萃取濾液。將有機(jī)相加到沉淀，濃縮至變干。
然后在硅膠上對粗制混合物進(jìn)行色層分析(快速色譜法，用3/1己烷/乙酸乙酯，1％氨水洗脫)。然后將相當(dāng)于預(yù)期產(chǎn)物的部分(在CH2Cl2/1％NH3中Rf0.45)分離，濃縮至變干。將獲得的油狀物用2ml乙醇溶解，倒入100ml冰/水混合物。通過過濾回收獲得的沉淀，燒結(jié)玻璃濾器濾過，濃縮至變干。
如此獲得402mg白色晶體固體(產(chǎn)率30％)。
分析白色固體1H NMR(DMSO)；7.93(s，1H，CH吡唑)，7.26(s，1H，CH呋喃基)，7.19(m，2H，NH+CONH)，6.10(d，2H，H呋喃基)，3.61(，2H，CH2)，3.37(q，2H，CH2)，2.43(t，2H，CH2)。
13C NMR(DMSO/CDCl3)；158.43(CONH)，143.1(CH)，111.41(2CH)，108.7(CH)，39.3(CH2)，32.1(CH2)，28.8(CH2)。由于試管中化合物量少，沒有觀察到季碳。
化合物5和6的合成乙基5-甲基-1-苯基-1H-吡唑-4-羧酸酯的合成 反應(yīng)物乙基2-(乙氧基亞甲基-4，4，4-三氟)-3-氧代丁酸酯C9H11F3O4MW240.18 m＝15.00g 62mmol/1當(dāng)量苯肼C7H8N2O2MW108.14 m＝6.38g 60mmol/1.1當(dāng)量乙醇 V＝500ml方法在氬氣和磁力攪拌下在1l三頸燒瓶中將苯肼在500ml無水乙醇中混懸。將混懸液冷卻至-15℃(CCl4/N2浴)，45分鐘內(nèi)將氧代丁酸酯滴加到肼溶液中。室溫4小時后，將溶液濃縮至變干。用戊烷洗滌得到的黃色固體，真空干燥，如此分離得到18.5g白色固體(產(chǎn)率大于100％)。
分析獲得的白色固體結(jié)構(gòu)的(1H NMR)(13C NMR)一致。
乙基5-甲基-1-苯基-1H-吡唑-4-羧酸酯的合成 反應(yīng)物·乙基5-三氟甲基-1-苯基-1H-吡唑-4-羧酸酯C21H17N2O4F3MW418.37 m＝18.5g 65mmol/1當(dāng)量·氫氧化鉀(85％)HKO MW56.11 m＝6.43g 97.5mmol/1.5當(dāng)量·乙醇V＝150ml方法磁力攪拌在250ml反應(yīng)器中將吡唑加到氫氧化鉀乙醇溶液中。室溫15分鐘后，將反應(yīng)介質(zhì)回流3小時。一將其恢復(fù)至室溫，就向溶液中加入600ml水。用250ml乙醚洗滌混合物3次。水相用37％的鹽酸酸化直到pH＝1。蒸發(fā)掉剩余的乙醇，溶液中出現(xiàn)黃色沉淀。將沉淀通過燒結(jié)玻璃過濾器過濾，用水洗滌，強真空干燥72小時。
如此獲得14.5g黃色粉末(產(chǎn)率87％)分析獲得的黃色固體結(jié)構(gòu)的(1H NMR)(13C NMR)一致。
N-(2-甲基硫代乙基)-1-苯基-5-三氟甲基-1H-吡唑-4-羧酰胺(化合物5)
反應(yīng)物·1-苯基5-三氟甲基-1H-吡唑羧酸C10H8N2O2MW188.19 m＝1.20g 4.71mmol/1當(dāng)量·羰基二咪唑(CDI)C7H6N4OMW162.15 m＝0.88g 5.42mmol/1.15當(dāng)量·2-(硫代甲基)乙胺C3H9NSMW91.18.234 m＝2.00g 21.97mmol/4.7當(dāng)量·DMFV＝8.3ml方法在氮氣和磁力攪拌下在反應(yīng)器中將吡唑溶解在DMF中.然后迅速加入一份比例的CDI，攪拌混合物約20分鐘。然后使用注射器快速滴加胺。攪拌3小時后，TLC檢查反應(yīng)，顯示初始產(chǎn)物已經(jīng)完全消失。
然后將反應(yīng)介質(zhì)傾倒入80ml冰/水混合物中。攪拌15分鐘后，然后通過燒結(jié)玻璃濾器過濾回收形成的白色沉淀，通過抽吸干燥。然后用50ml乙酸乙酯溶解得到的橙色固體，用水洗滌一次，在硫酸鈉上干燥。通過燒結(jié)玻璃濾器過濾后，在部分真空下蒸發(fā)，如此得到0.8g黃色固體。再次用50ml二氯甲烷溶解后，在硫酸鈉上干燥，在硅膠上對產(chǎn)物進(jìn)行色層分析(洗脫液7/3己烷/乙酸乙酯)，然后從甲苯中重結(jié)晶，得到530mg固體(產(chǎn)率34％)，通過NMR鑒別為一水合物的形式(峰在1.6ppm)。
分析白色固體1H NMR(CDCl3)；7.93(s，1H，H吡唑)，7.52-7.32(m，5H，H芳香族)6.35(m，1H，NH)，3.68(q，2H，CH2)，2.72(t，2H，CH2)，2.15(s，3H，CH3)，
13C NMR(CDCl3)；161.7(CO-NH)，140.0(CH芳香族)，139.6(C芳香族)，130.3(CH芳香族)，129.8(C)，129.6(2CH芳香族)，126.2(2CH芳香族)，121.2(C)，119(不可見，CF3)，38.3(CH2)，34.0(CH2)，15.2(CH3)。
N-(2-羥乙基)-1-苯基-5-三氟甲基-1H-吡唑-4-羧酰胺(化合物6) 反應(yīng)物·1-苯基5-三氟甲基-1H-吡唑羧酸C10H8N2O2MW188.19 m＝0.83g 4.41mmol/1當(dāng)量·羰基二咪唑(CDI)C7H6N4OMW162.15 m＝0.82g 5.05mmol/1.15當(dāng)量·2-乙醇胺C2H7O MW61.08 m＝1.34g 20.5mmol/4.7當(dāng)量·DMF V＝10ml方法在氮氣和磁力攪拌下在反應(yīng)器中將吡唑溶解在DMF中.然后迅速加入一份比例的CDI，攪拌混合物約20分鐘。使用注射器快速滴加胺。攪拌3小時后，TLC檢查反應(yīng)，顯示初始產(chǎn)物已經(jīng)完全消失。
然后將反應(yīng)介質(zhì)倒入75ml冰/水混合物中。攪拌15分鐘后，然后通過燒結(jié)玻璃濾器過濾回收形成的白色沉淀，通過抽吸干燥。然后用50ml二氯甲烷溶解得到的橙色固體，用水洗滌一次，在硫酸鈉上干燥。通過燒結(jié)玻璃濾器過濾后，在部分真空下蒸發(fā)，如此得到1.1g黃色固體。
將后者用最小量甲苯溶解，但是發(fā)現(xiàn)該產(chǎn)物在溶劑中部分溶解。因此在低溫條件下將該產(chǎn)物重結(jié)晶，得到470mg白色固體(產(chǎn)率33％)，經(jīng)鑒別為與0.5個水分子結(jié)合的衍生物。
分析白色固體1H NMR(CDCl3)；7.93(s，1H，H吡唑)，7.60-7.20(m，5H，H芳香族)6.48(m，1H，NH)，3.85(t，2H，CH2)，3.63(t，2H，CH2)，2.00(寬s，2H，OH+H2O)，13C NMR(CDCl3)；162.4(CO-NH)，140.0(CH芳香族)，139.4(C芳香族)，130.4(CH芳香族)，130.3(C)，129.6(2CH芳香族)，126.2(2CH芳香族)，121.2(C)，119.8(q，CF3)。
化合物7的合成1-苯基-1H-吡唑甲醛(carbaldehyde)的合成 反應(yīng)物1-苯基-1H-吡唑C2H3N[75-05-8]MW41.05 V＝39.9ml 77mmol/1當(dāng)量DMF C2H6O[64-17-5]MW46.06 V＝1.1l磷酰氯[7803-49-8]MW33.03 V＝100ml1.63mmol/2.13當(dāng)量方法(Vilsmeier-型甲?；磻?yīng))在氮氣和磁力攪拌下向100ml反應(yīng)器中加入10mlDMF，通過冰/水浴迅速將其冷卻至0℃，通過注射器在12分鐘內(nèi)滴加磷酰氯。0℃1小時后，通過注射器在2分鐘內(nèi)快速滴加1-苯基吡唑(在10mlDMF中)。0℃另外5分鐘后，將混合物恢復(fù)至室溫15分鐘，然后100℃放置2小時30分鐘。通過TLC(9/1己烷/乙酸乙酯(EtOAC)Rf0.35)觀察到初始產(chǎn)物完全消失。一恢復(fù)到室溫，就在通風(fēng)柜下小心地將反應(yīng)介質(zhì)加到20g冰冷的水。
攪拌18小時后，用250ml乙酸乙酯萃取混合物兩次。在硫酸鈉上將混合的有機(jī)相干燥，通過燒結(jié)玻璃濾器過濾，蒸發(fā)至變干，然后將殘渣通過燒結(jié)玻璃濾器上的二氧化硅片過濾(洗脫液純己烷，8/2己烷/CH2Cl2，1/1己烷/CH2Cl2，100％CH2Cl2)。純氯化部分可分離1.17g黃色油狀物，它一在己烷中溶解，同時會結(jié)晶。用己烷溶解的第二部分(用1/1己烷/CH2Cl2洗脫)也可分離出固體。將固體混合，用10ml己烷洗滌3次，得到2.21g白色固體(產(chǎn)率37％)。
分析白色固體TLC(純二氯甲烷)Rf0.05(UV)，1H NMR，13C NMR。
1-苯基-1H-吡唑羧酸的合成 反應(yīng)物·1-苯基-1H-吡唑甲醛 -C10H8N2O MW172.18 m＝2.12g12.31mmol/1當(dāng)量·H2O2(30％水溶液)H2O2MW34.01 m＝8.02g70.6mmol/6.1當(dāng)量·氫氧化鈉HNaO MW40.0 m＝1.04g26mmol/2.1當(dāng)量方法在氮氣和磁力攪拌下在100ml三頸反應(yīng)器中將氫氧化鈉溶解在20ml水中。然后單次步驟加入吡唑。觀察到持久不溶的產(chǎn)物，即使在45-50℃也不溶。在50分鐘內(nèi)分6份將過氧化氫加到混懸液。50℃5小時后，TLC檢查可觀察到保留了底物基本的部分。加入10ml1N氫氧化鈉(0.4gNaOH)和5g含水過氧化氫。50℃攪拌另外1小時，不溶性產(chǎn)物完全消失，TLC檢查可發(fā)現(xiàn)初始產(chǎn)物已經(jīng)完全被消耗(顯色劑；二硝基苯肼)。
將反應(yīng)介質(zhì)恢復(fù)至室溫，然后加到150ml冰/2N鹽酸混合物(2/1)中。攪拌30分鐘后將形成的白色沉淀通過布氏漏斗過濾，用水洗滌3次。用250ml乙酸乙酯重新溶解后，在MgSO4上干燥，然后過濾，蒸發(fā)至干。由此分離得到2.25g白色產(chǎn)物(產(chǎn)率96％)。
分析白色固體結(jié)構(gòu)的(1H NMR)(13C NMR)一致。
N-{2-[(2-呋喃甲基)硫代]乙基}-1-苯基-1H-吡唑-4-羧酰胺的合成 反應(yīng)物·1-苯基-1H-吡唑羧酸C10H8N2O2MW188.19m＝0.83g 4.41mmol/1當(dāng)量·羰基二咪唑(CDI)C7H6N4O MW162.15 m＝0.82g 5.05/1.15當(dāng)量·2-(糠基硫代)乙胺C7H11NOS MW157.234 m＝3.23g20.5mmol/4.7當(dāng)量·DMF V＝10ml方法在氮氣和磁力攪拌下在反應(yīng)器中將吡唑溶解在DMF中。然后迅速加入一份CDI，攪拌混合物約20分鐘。然后使用注射器快速滴加胺。攪拌3小時30分鐘后，TLC檢查反應(yīng)，顯示初始產(chǎn)物已經(jīng)完全消失。
然后將反應(yīng)介質(zhì)傾倒入80ml冰/水混合物中。攪拌15分鐘后，通過燒結(jié)玻璃過濾器過濾回收形成的白色沉淀，抽吸干燥。然后將得到的橙色固體溶解在50ml二氯甲烷中，用水洗滌一次，在硫酸鈉上干燥。通過燒結(jié)玻璃過濾器過濾后，在部分真空下蒸發(fā)，由此得到0.8g黃色固體。
在二氧化硅上對后者進(jìn)行色層分析(洗脫液7/3己烷/乙酸乙酯)，然后從甲苯重結(jié)晶。
由此回收得到0.80g淺褐色固體(產(chǎn)率56％)。經(jīng)鑒別為與半個水分子結(jié)合的化合物的形式。
分析淺褐色固體TLC(3/7己烷/EtOAc)Rf＝0.701H NMR(CDCl3)；8.38(s，1H，CH)，7.95(s，1H，CH)，7.72(m，2H，H芳香族)，7.45(m，2H，H芳香族)，7.36(m，2H)，6.36(m，3H，2CH+NH)，3.78(s，2H，S-CH2)3.60(q，2H，N-CH2)，2.78(t，2H，CH2-S)。
13C NMR(CDCl3)；162.5(CO)，151.6(C)，14.5(CH)，139.7(2CH)，139.4(C)，129.8(CH)，128.6(CH)，127.6(CH)，120.3(C)，119.7(CH)，110.8(CH)，108.1(CH)，38.2(CH2)，31.8(CH2)，28.2(CH2)。
化合物8的合成4-[4-(乙氧基羰基)-5-甲基-1H-吡唑基-1-基]苯甲酸的合成 反應(yīng)物乙基2-(乙氧基亞甲基-4，4，4-三氟)-3-氧代丁酸酯C9H11F3O4MW240.18 m＝6.50g 27.07mmol/1當(dāng)量4-肼基苯甲酸C7H8N2O2MW152.17 m＝4.12g 27.07mmol/1當(dāng)量乙醇 V＝90mlTHF V＝10ml方法在氬氣和磁力攪拌下在250ml三頸反應(yīng)器中將肼基苯甲酸溶解在無水乙醇中。加入10mlTHF以促進(jìn)反應(yīng)物的溶解(沒有成功)。將混懸液冷卻至-15℃(CCl4/N2浴)，向30分鐘內(nèi)向肼中滴加氧代丁酸酯。室溫2小時30分鐘后，溶液完全變澄清(通過TLC，用特征性吡唑顯色劑在254nmUV可見1個單斑)。然后蒸發(fā)除去溶劑，將得到的黃色固體用20ml戊烷洗滌2次，通過燒結(jié)玻璃過濾器過濾，將得到的黃色粉末真空干燥，由此分離得到7.70g淺褐色固體。
分析獲得的淺褐色固體結(jié)構(gòu)的(TLC，1H NMR，13C NMR)一致。
1-(4-羧基苯基)-5-三氟甲基-1H-吡唑-4-羧酸 反應(yīng)物4-[4-(乙氧基羰基)-5-甲基-1H-吡唑基-1-基]苯甲酸C14H11N2O4F3MW328.24 m＝3.25g 9.9mmol/1當(dāng)量氫氧化鈉HNaO MW39.99 m＝1.38g 150mmol/15當(dāng)量乙醇 V＝30ml方法磁力攪拌在100ml反應(yīng)器中(配有冷卻系統(tǒng))將吡唑溶解在乙醇中。室溫15分鐘后，加入氫氧化鈉溶液(50ml水中1.38g)。室溫攪拌反應(yīng)介質(zhì)5分鐘，回流13小時。
然后將混合物恢復(fù)至室溫，用3NHCl溶液酸化。然后通過燒結(jié)玻璃過濾器將得到的白色沉淀過濾，用水漂洗，然后在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀中干燥，然后使用干燥泵干燥。
由此得到2.03g固體(產(chǎn)率77％)。
分析獲得的白色固體結(jié)構(gòu)的(1H NMR)(13C NMR)一致。
4-{4-[({2-[(2-呋喃甲基)-硫代]乙基}氨基)羰基]-5-三氟甲基-1H-吡唑基-1-基}苯甲酸的合成 反應(yīng)物·1-(4-羧基苯基)-5-三氟甲基-1H-吡唑-4-羧酸C12H7N2O2F3MW268.19 m＝1.03g 3.04mmol/1當(dāng)量·羰基二咪唑(CDI)C7H6N4O MW162.15 m＝0.81g 5.0mmol/1.3當(dāng)量·2-(糠基硫代)乙胺C7H11NOS MW157.23 m＝2.25g 14.3mmol/4.7當(dāng)量DMFV＝12ml方法在氮氣和磁力攪拌下在反應(yīng)器中將吡唑溶解在DMF中.然后迅速加入一份比例的CDI，攪拌混合物約30分鐘。然后使用注射器快速滴加胺。過夜攪拌后，TLC檢查反應(yīng)，顯示初始產(chǎn)物完全消失。
然后將反應(yīng)介質(zhì)傾倒入100ml冰/水混合物中。攪拌15分鐘，然后通過燒結(jié)玻璃濾器過濾回收形成的白色沉淀，抽吸干燥。然后對所得白色固體進(jìn)行分析(TLC，NMR)，如此經(jīng)鑒別有兩種產(chǎn)物。然后在硅膠上對粗制混合物進(jìn)行色層分析(快速色波譜法，用己烷/乙酸乙酯2/1洗脫，然后用含有1％甲酸的己烷/乙酸乙酯1/1洗脫)。
第一部分(在純CH2Cl2，1％HCO2H中，Rf0.65)含有140mg預(yù)期產(chǎn)物(產(chǎn)率11％)。通過NMR進(jìn)行鑒別，其他合成的化合物類似。
第二部分(Rf0.48)含有500mg具有兩個酰胺官能團(tuán)的產(chǎn)物(30％產(chǎn)率)。
分析獲得的白色固體的結(jié)構(gòu)的(1H NMR；13C NMR)一致。
實施例IV可在本發(fā)明中使用的2-亞烷基氨基氧基乙酰胺化合物的實例化合物1N-苯基-2-({[(1Z)-1-噻吩-2-基亞乙基]-氨基}氧基)乙酰胺 化合物22-({[(1Z)-1-(呋喃基)亞乙基]氨基}氧基)-N-苯乙酰胺 化合物3N-(4-甲氧基苯基)-2-({[(1Z)-1-噻吩-2-基亞乙基]-氨基}氧基)乙酰胺 化合物4N-苯基-2-({[(1Z)-1-噻吩-2-基亞丙基]-氨基}氧基)乙酰胺
化合物52-{[(1-甲基亞乙基)氨基]氧基}-N-苯乙酰胺 化合物6N-甲基-2-({[(1Z)-1-噻吩-2-基亞乙基]-氨基}氧基)乙酰胺 化合物77N-甲基-N-苯基-2-({[(1Z)-1-噻吩-2-基亞乙基]-氨基}氧基)乙酰胺 化合物8N-(2-羥乙基)-N-苯基-2-({[(1Z)-1-噻吩-2-基亞乙基]-氨基}氧基)乙酰胺
根據(jù)實施例I-7至I-13中描述的方法，用實施例I至IV的化合物或本申請?zhí)峒暗哪切┗衔镏苽浠瘖y用組合物。
權(quán)利要求
1.至少一種15-羥基前列腺素脫氫酶抑制劑(或15-PGDH)在組合物或在制備組合物，抑制劑或促進(jìn)皮膚或皮膚附屬物著色的組合物中的用途。
2.如權(quán)利要求1的至少一種15-羥基前列腺素脫氫酶抑制劑的用途，其特征在于將組合物局部施用。
3.如權(quán)利要求1和2的用途，其特征在于將組合物涂敷于皮膚，毛發(fā)和/或體毛。
4.如權(quán)利要求1至3之一的至少一種15-羥基前列腺素脫氫酶抑制劑的用途，其特征在于將15-羥基前列腺素脫氫酶抑制劑包封在選自微球，毫微球，油質(zhì)體以及毫微膠囊的結(jié)構(gòu)中。
5.含有至少一種15-羥基前列腺素脫氫酶抑制劑的化妝組合物處理灰發(fā)的非治療用途。
6.如權(quán)利要求1至5之一的至少一種15-PGDH抑制劑的用途，其特征在于抑制劑是15-PGDH1型特異抑制劑。
7.如權(quán)利要求1至6之一的用途，其特征在于15-PGDH抑制活性與前列腺素F合酶抑制活性之比大于1。
8.如權(quán)利要求1至7中至少一項的用途，其特征在于15-PGDH抑制劑是至少一種式(I)的雜環(huán)化合物或其鹽 其中-Hy表示具有4，5，6或7個原子的雜環(huán)，任選含有至少一個羰基官能團(tuán)和/或一個硫代羰基官能團(tuán)，上述雜環(huán)任選用至少一種選自鹵素，基團(tuán)OR，SR，NRR′，COR，CSR，NRCONR′R″，C(＝NR)R′，C(＝NR)NR′NR″，NRC(＝NR)NR′NR″R，OCOR，COSR，SCOR，CSNRR′，NRCSR′，NRCSNR′R″，COOR，CONRR′，CF3，CN，NRCOR′，SO2R′，SO2NRR′或NRSO2R′，飽和或不飽和的直鏈或支鏈C1-C20烷基，和飽和或不飽和的具有4至7個原子的環(huán)的基團(tuán)所取代，上述環(huán)至少含有一個雜原子，這些環(huán)可以是分離或連接的，烷基和環(huán)也可以被取代，其中R，R′，R″和R可以是相同或不同的，表示氫，或直鏈或支鏈C1-C20烷基或芳基，芳基任選被取代；-G表示O，S或NH；-R1，R2和R3相互獨立地表示氫，鹵素，基團(tuán)OR0，SR0，NR0R′0，COR0，CSR0，NR0CONR′0R″0，C(＝NR0)R′0，C(＝NR0)NR′0NR″0，NR0C(＝NR0)NR′0NR″0R+0，OCOR0，COSR0，SCOR0，CSNR0R′0，NR0CSR′0，NR0CSNR′0R″0，COOR0，CONR0R′0，CF3，NO2，CN，NR0COR′0，SO2R′0，SO2NR0R′0或NR0SO2R′0，飽和或不飽和的直鏈或支鏈C1-C20烷基，或至少一種飽和或不飽和的具有4至7個原子的環(huán)，任選含有至少一個雜原子，這些環(huán)可以是分離或連接的，烷基和環(huán)也可以被取代，其中R0，R′0，R″0和R+0可以是相同或不同的，表示氫，或直鏈或支鏈C1-C20烷基或芳基，芳基任選被取代。
9.如權(quán)利要求1至8中至少一項的用途，其特征在于組合物還含有至少一種促進(jìn)毛發(fā)和/或體毛著色的制劑，該制劑不同于15-羥基前列腺素抑制劑。
10.如權(quán)利要求1至9中至少一項的用途，其特征在于組合物還含有至少一種滲透促進(jìn)劑。前列腺素或前列腺素衍生物。
11.如權(quán)利要求1至10中至少一項的用途，其特征在于組合物還含有至少一種前列腺素或前列腺素衍生物。
12.如權(quán)利要求11的用途，其特征在于組合物還含有至少一種選自前列腺素PGE1和PGE2，它們的鹽，酯，類似物以及衍生物，前列腺素F2-α受體(FP-R)激動劑，尤其是拉坦前列素，氟前列醇，氯前列醇，曲伏前列素或比馬前列素，前列腺素E2受體(EP1-R，EP2-R，EP3-R，EP4-R)激動劑，例如17-苯基PGE2，維前列醇，布他前列素，米索前列醇，硫前列酮，16，16-二甲基PGE2，11-脫氧-PGE1或1-脫氧-PGEl，前列腺環(huán)素(IP)受體激動劑及其酯，例如西卡前列素，伊洛前列素，異碳前列環(huán)素或貝前列素，前列腺素D2受體激動劑及其酯，例如BW245C((4S)-(3-[(3R，S)-3-環(huán)己基-3-異丙基]-2，5-二氧)4-咪唑烷庚烯酸)或((4R)-(3-[(3R，S)-3-環(huán)己基-3-異丙基]-2，5-二氧)-4-咪唑烷-庚烯酸)，或血栓素A2(TP)受體激動劑，例如I-BOP([1S-[1a，2a(Z)，3b(1E，3S)，4a]]-7-[3-[3-羥基-4-[4-(碘苯氧基)-1-丁基]-7-氧雜二環(huán)[2.2.1]七-2-基]-5-庚烯酸，這些化合物的前體，它們的酯及其衍生物的化合物。
13.如權(quán)利要求1至7以及9至12中至少一項的用途，其特征在于15-羥基前列腺素脫氫酶抑制劑選自曲撤諾，其鹽及其酯，萘氧唑酮，柳氮磺吡啶，PhCL28A或噻唑烷二酮。
14.如權(quán)利要求7的用途，其特征在于15-羥基前列腺素脫氫酶抑制劑選自下列分子分子A 分子B
15.如權(quán)利要求2至14之一的用途，其特征在于組合物包括一種化妝用可接受的介質(zhì)，該介質(zhì)由水，或水與至少一種選自親水性有機(jī)溶劑，親脂性有機(jī)溶劑，兩性有機(jī)溶劑，兩性有機(jī)溶劑及其混合物的混合物組成。
16.如權(quán)利要求1至15之一的用途，其特征在于15-羥基前列腺素酶抑制劑在組合物中以0.001％至5％w/v的濃度存在。
17.如權(quán)利要求1至12，15或16中至少一項的用途，其特征在于化合物選自
18.促進(jìn)皮膚，體毛和/或毛發(fā)著色的化妝方法，其特征在于將至少一種如上述權(quán)利要求之一定義的15-羥基前列腺素脫氫酶抑制劑或組合物涂敷于皮膚和/或頭皮。
19.可如權(quán)利要求1至17之一使用的組合物，其特征在于，該組合物含有至少一種15-羥基前列腺素脫氫酶抑制劑以及一種促進(jìn)皮膚，毛發(fā)和/或體毛著色制劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及至少一種15－羥基前列腺素脫氫酶抑制劑在組合物或在制備用于刺激皮膚和/或皮膚附屬物著色的組合物中的用途。本發(fā)明還涉及含有一種這種抑制劑的組合物以及刺激皮膚和/或毛發(fā)著色的化妝方法。
文檔編號A61Q19/00GK1774229SQ200480009721
公開日2006年5月17日 申請日期2004年2月12日 優(yōu)先權(quán)日2003年2月12日
發(fā)明者J·F·米歇爾特, S·科莫 申請人:萊雅公司