一種建立糖尿病小鼠結(jié)直腸癌模型的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種糖尿病小鼠結(jié)直腸癌模型的建立方法，所述方法為:B6.Cg?Lepob/JNju小鼠前肢腋下皮下注射小鼠結(jié)直腸癌細(xì)胞MCA38細(xì)胞懸液100ul，待局部成瘤后，每隔3天觀察瘤體大小變化。繼續(xù)飼養(yǎng)28天后予以處死，瘤組織部分10%中性福爾馬林固定繼續(xù)病理切片觀察。
【專利說明】
一種建立糖尿病小鼠結(jié)直腸癌模型的方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明屬于動物模型領(lǐng)域，具體涉及一種糖尿病小鼠結(jié)直腸癌模型的建立及鑒定方法。
【背景技術(shù)】
[0002]結(jié)腸直腸癌(carcinoma of colon and rectum)是胃腸道中常見的惡性腫瘤，早期癥狀不明顯，隨著癌腫的增大而表現(xiàn)排便習(xí)慣改變、便血、腹瀉、腹瀉與便秘交替、局部腹痛等癥狀，晚期則表現(xiàn)貧血、體重減輕等全身癥狀。其發(fā)病率和病死率在消化系統(tǒng)惡性腫瘤中僅次于胃癌、食管癌和原發(fā)性肝癌。
[0003]肝臟是結(jié)直腸癌的常見轉(zhuǎn)移部位。在新發(fā)的結(jié)直腸癌病例中，20%?25%存在肝轉(zhuǎn)移，而在經(jīng)手術(shù)切除的結(jié)直腸癌病例中，40%?50%最終會發(fā)生肝轉(zhuǎn)移。肝轉(zhuǎn)移是結(jié)直腸癌致死的主要原因，如何改善肝轉(zhuǎn)移患者的療效已成為結(jié)直腸癌研究領(lǐng)域的焦點之一。據(jù)國外文獻(xiàn)報道50%?60%的結(jié)直腸癌患者最終會發(fā)生肝轉(zhuǎn)移，術(shù)后復(fù)發(fā)的患者中肝轉(zhuǎn)移比例則高達(dá)70%，在對死于結(jié)直腸癌患者的尸體解剖中發(fā)現(xiàn)約70%存在肝轉(zhuǎn)移。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是提供一種建立糖尿病小鼠結(jié)直腸癌模型的方法。
[0005]為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案:
一種建立糖尿病小鼠結(jié)直腸癌模型的方法，其特征在于，包括以下步驟:
a)B6.Cg-Lep+/JNju小鼠按30mg/kg劑量用戊巴比妥鈉麻醉；
b)麻醉起效后固定；
c)前肢腋下消毒；
d)將小鼠結(jié)直腸癌細(xì)胞MCA38細(xì)胞懸液濃度調(diào)整為5X 107/ml，吸取ΙΟΟμΙ細(xì)胞懸液緩慢注入前肢腋下皮下；
e)繼續(xù)飼養(yǎng)。
[0006]本發(fā)明的另一個目的在于，提供糖尿病小鼠結(jié)直腸癌模型的鑒定方法。
[0007]—種糖尿病小鼠結(jié)直腸癌模型的鑒定方法，其特征在于，包括以下步驟:
a)B6.Cg-Lep+/JNju小鼠按30mg/kg劑量用戊巴比妥鈉麻醉；
b)麻醉起效后固定；
c)前肢腋下消毒；
d)將小鼠結(jié)直腸癌細(xì)胞MCA38細(xì)胞懸液濃度調(diào)整為5X 107/ml，吸取100μ1細(xì)胞懸液緩慢注入前肢腋下皮下；
e)繼續(xù)飼養(yǎng)；
f)待局部成瘤后，每隔3天測量瘤體長徑和短徑，記錄腫瘤大??；
g)28天后予以處死，瘤組織部分用10%中性福爾馬林固定，病理切片觀察。
[0008]用本發(fā)明方法建立的糖尿病小鼠結(jié)直腸癌模型成本低廉，易于復(fù)現(xiàn)，臨床癥狀明顯，可用于病理和臨床研究。
【附圖說明】
[0009]
圖1是B6.Cg-Lepob/JN ju小鼠成瘤位置示意圖。
[0010]圖2是病理切片的橫切標(biāo)本示意圖。
[0011]圖3是病理切片的縱切標(biāo)本示意圖。
【具體實施方式】
[0012]下面結(jié)合【具體實施方式】對本發(fā)明做進(jìn)一步詳細(xì)說明。
[0013]實施例1 一、實驗材料
1.實驗動物
B6.Cg-Lepob/JNju:肥胖自發(fā)突變的純合子小鼠(Lepob，通常寫作ob)，除了肥胖以夕卜，突變鼠還表現(xiàn)出攝食過量，糖尿病樣高血糖綜合癥。購自南京大學(xué)-南京生物醫(yī)藥研究所，4-6周齡，體重平均36.0g。
[0014]2.主要試劑和材料
DMEM高糖培養(yǎng)液:杭州吉諾生物醫(yī)藥技術(shù)有限公司。
[0015]膜酶0.25% Trypsin-EDTA (IX)，Phenol Red:gibco0
[0016]氣相(尖頭)微量進(jìn)樣器(10ul):華東醫(yī)藥股份有限公司。
[0017]MCA-38小鼠結(jié)腸癌細(xì)胞:上海復(fù)祥生物科技有限公司。
[0018]10%中性福爾馬林:中山市康乃欣生物醫(yī)療科技有限公司。
[0019]二、實驗方法
1.動物的飼養(yǎng)
所有小鼠飼養(yǎng)在實驗動物中心SPF級動物實驗室，12小時晝夜節(jié)律，濕度50-60%，溫度24度土I度。
[0020]2.注射 MCA-38 懸液
2.1用含有10%胎牛血清的高糖DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)MCA-38細(xì)胞，培養(yǎng)細(xì)胞至對數(shù)生長期，且足量，收集細(xì)胞，用生理鹽水洗I遍，接著用生理鹽水將細(xì)胞密度調(diào)整為5 X 107/ml，備用。[0021 ] 2.2將小鼠按30mg/kg劑量用戊巴比妥鈉麻醉。麻醉起效后固定，前肢腋下消毒，將小鼠結(jié)直腸癌細(xì)胞MCA38細(xì)胞懸液濃度調(diào)整為5 X 107/ml，吸取ΙΟΟμΙ細(xì)胞懸液緩慢注入前肢腋下皮下，繼續(xù)飼養(yǎng)。
[0022]2.3糖尿病小鼠結(jié)直腸癌模型的鑒定
待局部成瘤后，每隔3天觀察瘤體是否變大，繼續(xù)飼養(yǎng)28天后予以處死，瘤組織部分10%中性福爾馬林固定繼續(xù)病理切片觀察。
【主權(quán)項】
1.一種建立糖尿病小鼠結(jié)直腸癌模型的方法，其特征在于，包括以下步驟: a)B6.Cg-Lep+/JNju小鼠按30mg/kg劑量用戊巴比妥鈉麻醉； b)麻醉起效后固定； c)前肢腋下消毒； d)將小鼠結(jié)直腸癌細(xì)胞MCA38細(xì)胞懸液濃度調(diào)整為5X 107/ml，吸取ΙΟΟμΙ細(xì)胞懸液緩慢注入前肢腋下皮下； e)繼續(xù)飼養(yǎng)。2.—種糖尿病小鼠結(jié)直腸癌模型的鑒定方法，其特征在于，包括以下步驟: a)B6.Cg-Lep+/JNju小鼠按30mg/kg劑量用戊巴比妥鈉麻醉； b)麻醉起效后固定； c)前肢腋下消毒； d)將小鼠結(jié)直腸癌細(xì)胞MCA38細(xì)胞懸液濃度調(diào)整為5X 107/ml，吸取ΙΟΟμΙ細(xì)胞懸液緩慢注入前肢腋下皮下； e)繼續(xù)飼養(yǎng)； f)待局部成瘤后，每隔3天測量瘤體長徑和短徑，記錄腫瘤大??； g)28天后予以處死，瘤組織部分用10%中性福爾馬林固定，病理切片觀察。
【文檔編號】A61B5/107GK106037987SQ201610511851
【公開日】2016年10月26日
【申請日】2016年6月28日
【發(fā)明人】潘月龍, 白瑞, 李鑫, 鄭松, 王建, 劉繼洪, 張瑋
【申請人】杭州市第人民醫(yī)院, 杭州市第一人民醫(yī)院