一種氣虛型胃腸功能障礙小鼠動(dòng)物模型的構(gòu)建方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種氣虛型胃腸功能障礙動(dòng)物模型的建立，通過給ICR小鼠灌服芒硝 過飽和溶液以達(dá)到讓小鼠產(chǎn)生腹脹、腹瀉、體重減輕等中醫(yī)氣虛臨床表現(xiàn)及胃腸動(dòng)力減退、 胃腸黏膜損傷等西醫(yī)胃腸功能障礙的臨床表現(xiàn)和病理改變，為研發(fā)治療胃腸功能障礙新物 提供一個(gè)穩(wěn)定、可靠的動(dòng)物模型。 (二）
【背景技術(shù)】
[0002] 胃腸功能障礙是指機(jī)體在受到創(chuàng)傷、感染、失血等嚴(yán)重?fù)p害時(shí)，胃腸道出現(xiàn)的嚴(yán)重 應(yīng)激反應(yīng)，表現(xiàn)為各種致病因素導(dǎo)致胃腸黏膜受損及腸道免疫系統(tǒng)功能下降，腸道屏障功 能被破壞，腸道內(nèi)的細(xì)菌與細(xì)菌毒素轉(zhuǎn)移到腸外（即發(fā)生細(xì)菌移位）。
[0003] 胃腸功能障礙的病因非常廣，近年來有學(xué)者對(duì)胃腸功能障礙提出了新的分類：I 型胃腸功能障礙多指腹部手術(shù)后自限性胃腸功能障礙；II型胃腸功能障礙是指危重病人的 胃腸功能障礙，這些患者除行小腸廣泛切除外，還并發(fā)有感染、代謝和營(yíng)養(yǎng)并發(fā)癥；III型胃 腸功能障礙是指需要長(zhǎng)期甚至終身營(yíng)養(yǎng)支持的慢性胃腸功能障礙。
[0004] 通過長(zhǎng)期的臨床觀察發(fā)現(xiàn)，很多危重癥患者在無明顯的創(chuàng)傷、感染、出血等應(yīng)激情 況下卻也出現(xiàn)了嚴(yán)重的胃腸功能障礙，常表現(xiàn)為腹脹、腹瀉和嚴(yán)重營(yíng)養(yǎng)不良，這類患者符合 胃腸功能障礙臨床表現(xiàn)但很難歸類到以上三型胃腸功能障礙，西醫(yī)學(xué)很難闡明其發(fā)病機(jī) 理。而中醫(yī)學(xué)卻能很好解釋這一理論：《黃帝內(nèi)經(jīng)?素問?宣明?五氣篇》有云"久臥傷氣"； 《素問?平人氣象論》又云"人以水谷為本"。重癥患者在搶救及恢復(fù)過程中往往需要長(zhǎng)期 臥床，致使氣機(jī)失調(diào)；這類病人由于病情危重，無法自主進(jìn)食而依靠全胃腸外營(yíng)養(yǎng)，致使喪 失了脾胃"后天之本一水谷精微"的濡養(yǎng)，導(dǎo)致氣血本源缺失，進(jìn)一步導(dǎo)致了脾胃氣虛，進(jìn) 而影響小腸的泌清別濁和大腸通降功能失常，出現(xiàn)腹脹、腹瀉等癥狀，同時(shí)脾的運(yùn)化功能減 退，氣血生化無緣，氣血虛虧，五臟六腑失去濡養(yǎng)，導(dǎo)致其他臟器功能衰竭，這與胃腸功能障 礙的臨床表現(xiàn)相一致。所以大部分此類胃腸功能障礙患者在癥型上符合中醫(yī)氣虛的臨床表 現(xiàn)，疾病上符合"痞滿"和"泄瀉"病范疇。
[0005] 國(guó)內(nèi)沒有涉及胃腸功能障礙中醫(yī)癥型動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)研究，因此本發(fā)明將對(duì)中醫(yī)藥 在胃腸功能衰竭疾病領(lǐng)域治療優(yōu)勢(shì)的發(fā)揮起到很大的促進(jìn)作用。 (三）

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明目的在于通過芒硝過飽和溶液灌胃建立一種氣虛型胃腸功能障礙的小鼠 動(dòng)物模型，為評(píng)價(jià)治療胃腸功能障礙藥物的療效提供一種可靠的動(dòng)物模型平臺(tái)。
[0007] 本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：
[0008] 本發(fā)明涉及一種氣虛型胃腸功能障礙小鼠動(dòng)物模型的構(gòu)建方法，所述方法為：用 過飽和芒硝水溶液灌胃小鼠10-15天，再灌胃四君子湯7-10天，當(dāng)小鼠出現(xiàn)下列第（1)、（4) 和（6)或多種癥狀時(shí)，氣虛型胃腸功能障礙的小鼠動(dòng)物模型構(gòu)建成功：⑴體重減少，小鼠 毛色變灰暗、無光澤，（2)進(jìn)食量減少，（3)糞便變稀，（4)小腸粘膜損傷評(píng)分變差，（5)胃體 積增大以及（6)胃腸碳粉推進(jìn)指數(shù)下降；所述過飽和芒硝水溶液的用量為0. 1-0. 3ml/10g 體重，所述四君子湯用量為〇. lml/10g體重；所述四君子湯為黨參、白術(shù)、茯苓和炙甘草按 重量比3:3:3:2混合后，加水煎煮而成。上述（1)-(6)癥狀中出現(xiàn)（1)、（4)和（6)或者還 出現(xiàn)其他3種癥狀中的一種或多種，則表明模型構(gòu)建成功。
[0009] 本發(fā)明所述小鼠為ICR小鼠，優(yōu)選所述小鼠為健康成年ICR小鼠，體重18_22g。
[0010] 本發(fā)明所述過飽和芒硝水溶液的用量?jī)?yōu)選為〇. 3ml/10g體重。
[0011] 本發(fā)明所述四君子湯用量為0. lml/10g體重，所述四君子湯的生藥量為500mg/ ml〇
[0012] 本發(fā)明的有益效果主要體現(xiàn)在：現(xiàn)有盲腸結(jié)扎穿刺法大鼠膿毒癥胃腸功能衰竭模 型存在造模不穩(wěn)定，致死率高，且無法觀測(cè)治療效果等缺點(diǎn)，本發(fā)明提供一種穩(wěn)定性高、易 于推廣、重復(fù)性好、經(jīng)濟(jì)實(shí)用的氣虛型胃腸功能障礙小鼠動(dòng)物模型，為中醫(yī)藥治療胃腸功能 障礙的臨床前期研究提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 (四）
【附圖說明】
[0013] 圖1為小腸組織標(biāo)本HE染色的光學(xué)顯微鏡圖，其中A為對(duì)照組（100倍），B為對(duì) 照組（400倍），C為造模安慰劑組（100倍），D為造模安慰劑組（400倍），E為模型組（100 倍），F(xiàn)為模型組（400倍），G為自愈組（100倍），H為自愈組（400倍），I為四君子湯組 (100倍），J為四君子湯組（400倍）。 (五）
【具體實(shí)施方式】
[0014] 下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步描述，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不僅限于 此：
[0015] 本發(fā)明實(shí)施例所述黨參、白術(shù)、茯苓、炙甘草均采用藥學(xué)2010版中國(guó)藥典制備。
[0016] 實(shí)施例1:藥物的制備
[0017] (1)四君子湯：黨參9g、白術(shù)9g、茯苓9g、炎甘草6g
[0018] 各生藥均用清水浸泡30分鐘，由浙江省中醫(yī)院中藥房煎熬至每mL含生藥材 500mg。按照體表系數(shù)換算法，與人臨床劑量等效的小鼠劑量為42. 9mg/10g ? d(計(jì)算公式 為：小鼠用量g/kg ? d =人一天劑量*0. 0026/0. 02)。
[0019] (2)芒硝過飽和水溶液：將芒硝（十水合硫酸鈉Na2S04 ? 10H20)粉碎后過20目篩 網(wǎng)，逐漸加入到室溫（約20°C )蒸餾水中，用磁力攪拌器攪拌，直到出現(xiàn)芒硝結(jié)晶體析出，再 攪拌15分鐘，析出的結(jié)晶體不再溶解，此時(shí)的溶液即為芒硝過飽和水溶液。
[0020] 實(shí)施例2:動(dòng)物模型的構(gòu)建及驗(yàn)證
[0021] 1 ?動(dòng)物分組
[0022] 健康成年雄性ICR小鼠120只，體重18_22g，根據(jù)數(shù)字隨機(jī)表隨機(jī)選取24只為對(duì) 照組，24只為造模安慰劑組，72只為實(shí)驗(yàn)組。實(shí)驗(yàn)組小鼠再隨機(jī)分成模型組、自愈組、四君 子湯組各24只。
[0023] 2.分組給藥方法
[0024] 對(duì)照組給予小鼠飼料正常飲食10天，造模安慰劑組正常飲食的同時(shí)給予生理 鹽水0.3ml/10g的劑量灌胃10天。實(shí)驗(yàn)組小鼠正常飲食的同時(shí)給予芒硝過飽和水溶液 0. 3ml/10g的劑量灌胃10天。10天后，對(duì)照組、造模安慰劑組、模型組的部分小鼠立即處死 進(jìn)行（一般情況觀察，平均稀便級(jí)，體重變化增值曲線，胃體積，碳粉推進(jìn)指數(shù)，顯微鏡下腸 上皮損傷情況大體及chiu評(píng)分等指標(biāo)檢測(cè)檢測(cè)，剩余小鼠進(jìn)行實(shí)驗(yàn)；四君子湯組小鼠繼續(xù) 正常飲食的同時(shí)給予四君子湯〇. lml/10g灌胃7天，進(jìn)行檢測(cè)（一般情況觀察，平均稀便 級(jí)，體重變化增值曲線，胃體積，碳粉推進(jìn)指數(shù)，顯微鏡下腸上皮損傷情況大體及chiu評(píng)分 等指標(biāo)檢測(cè)）；自愈組小鼠繼續(xù)正常飲食的同時(shí)給予〇. lml/10g生理鹽水灌胃7天，進(jìn)行檢 測(cè)（一般情況觀察，平均稀便級(jí)，體重變化增值曲線，胃體積，碳粉推進(jìn)指數(shù)，顯微鏡下腸上 皮損傷情況大體及chiu評(píng)分等指標(biāo)檢測(cè)）。
[0025] 3. -般情況觀察
[0026]對(duì)照組與造模安慰劑組小鼠毛色光亮、爪尾紅潤(rùn)、食欲正常，糞便成形，紡錘狀，含 水量適中，未出現(xiàn)異常特征，無死亡。實(shí)驗(yàn)組小鼠體毛光亮度減退、毛色偏黃、爪尾蒼白、食 欲明顯減退，糞便稀軟糊狀，排泄物異味重，活動(dòng)減少，精神出現(xiàn)不同程度的萎靡。經(jīng)歷7天 恢復(fù)期后，自愈組小鼠體毛仍無光澤、毛色發(fā)黃、爪尾蒼白、進(jìn)食量略有增加、糞便質(zhì)軟不成 形、靜臥少動(dòng)。四君子湯組小鼠體毛光亮度仍不滿意、進(jìn)食量較自愈組明顯增多、糞便成形、 活動(dòng)正常。
[0027]4?平均稀便級(jí)
[0028] (1)小鼠稀便級(jí)表示稀便的程度，反映小鼠消化吸收能力，以稀便污染濾紙形成污 跡的直徑大小定級(jí)。本實(shí)驗(yàn)采用平均稀便級(jí)（見表1)
[0029] 表1平均稀便級(jí)分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)
[0030]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種氣虛型胃腸功能障礙小鼠動(dòng)物模型的構(gòu)建方法，其特征在于所述方法為：用 過飽和芒硝水溶液灌胃小鼠10-15天，再灌胃四君子湯7-10天，當(dāng)小鼠出現(xiàn)下列第（1)、 (4) 和（6)或多種癥狀時(shí)，氣虛型胃腸功能障礙的小鼠動(dòng)物模型構(gòu)建成功：⑴體重減少， 小鼠毛色變灰暗、無光澤，（2)進(jìn)食量減少，（3)糞便變稀，（4)小腸粘膜損傷評(píng)分變差， (5) 胃體積大小變大以及(6)胃腸碳粉推進(jìn)指數(shù)下降；所述過飽和芒硝水溶液的用量為 0. 1-0. 3ml/10g體重,所述四君子湯用量為0. lml/10g體重；所述四君子湯為黨參、白術(shù)、獲 苓和炙甘草按重量比3:3:3:2混合后，加水煎煮而成。
2. 如權(quán)利要求1所述氣虛型胃腸功能障礙小鼠動(dòng)物模型的構(gòu)建方法，其特征在于所述 小鼠為ICR小鼠。
3. 如權(quán)利要求2所述氣虛型胃腸功能障礙小鼠動(dòng)物模型的構(gòu)建方法，其特征在于所述 小鼠為健康成年ICR小鼠，體重18-22g。
4. 如權(quán)利要求1所述氣虛型胃腸功能障礙小鼠動(dòng)物模型的構(gòu)建方法，其特征在于過飽 和芒硝水溶液的用量為0. 3ml/10g體重。
5. 如權(quán)利要求1所述氣虛型胃腸功能障礙小鼠動(dòng)物模型的構(gòu)建方法，其特征在于所述 四君子湯的生藥量為500mg/ml，用量為0. lml/lOg體重。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種氣虛型胃腸功能障礙小鼠動(dòng)物模型的構(gòu)建方法，所述方法為：用過飽和芒硝水溶液灌胃小鼠10-15天，再灌胃四君子湯7-10天，當(dāng)小鼠出現(xiàn)下列第(1)、(4)和(6)或多種癥狀時(shí)，氣虛型胃腸功能障礙的小鼠動(dòng)物模型構(gòu)建成功：(1)體重減少，小鼠毛色變灰暗、無光澤，(2)進(jìn)食量減少，(3)糞便變稀，(4)小腸粘膜損傷評(píng)分變差，(5)胃體積增大以及(6)胃腸碳粉推進(jìn)指數(shù)下降；氣虛型胃腸功能障礙的小鼠動(dòng)物模型構(gòu)建成功；本發(fā)明提供一種穩(wěn)定性高、易于推廣、重復(fù)性好、經(jīng)濟(jì)實(shí)用的氣虛型胃腸功能障礙小鼠動(dòng)物模型，為中醫(yī)藥治療胃腸功能障礙的臨床前期研究提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
【IPC分類】A61K36-484, A61K49-00
【公開號(hào)】CN104622945
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201410853675
【發(fā)明人】黃立權(quán), 王靈聰, 江榮林, 雷澍, 智屹惠, 吳艷春, 朱美飛
【申請(qǐng)人】浙江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院
【公開日】2015年5月20日
【申請(qǐng)日】2014年12月31日