水飛薊賓或其鹽在制備增強(qiáng)alk-tki療效、延緩其耐藥的藥物中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)藥用途領(lǐng)域，特別涉及水飛薊賓或其鹽在制備增強(qiáng)ALK-TKI療效、 延緩其耐藥的藥物中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 肺癌是目前人類因癌癥死亡的主要原因，近年來其發(fā)病率和死亡率不斷上升。非 小細(xì)胞肺癌（Non SmaLL CeLL Lung Cancer，NSCLC)占到了所有肺癌病例的80%-85%。 目前NSCLC的個(gè)體化治療備受關(guān)注。研究表明，棘皮動(dòng)物微管相關(guān)蛋白4/間變淋巴瘤激酶 (echinoderm microtubule-associated protein-like 4/anaplastic lymphoma kinase， EML4/ALK)在NSCLC的發(fā)生發(fā)展過程中起著非常重要的作用，EML4/ALK融合基因陽性的患 者占所有NSCLC患者的3 % -7 %。對(duì)于EML4/ALK融合基因陽性的晚期NSCLC患者，2013 年上市的肺癌分子革E向藥物間變淋巴瘤激酶/酪氨酸激酶抑制劑（anaplastic lymphoma kinase/tyrosine kinase inhibitor, ALK-TKI)即克唑替尼，展現(xiàn)出了顯著的治療效果，一 線治療與化療相比PFS從7個(gè)月提高到10個(gè)月，它可以顯著延長該類患者的生存期，使部 分晚期NSCLC患者的治療獲得了新的希望。AKK-TKI為代表的靶向藥物對(duì)NSCLC患者的客 觀有效率達(dá)60%，無進(jìn)展生存達(dá)8-10月，總生存顯著延長。盡管EML4/ALK融合基因陽性的 患者獲益顯著，但是這些患者往往在1-2年內(nèi)出現(xiàn)對(duì)AKK-TKI的耐藥，使得AKK-TKI的療效 降低。目前臨床上尚未出現(xiàn)有效的，能夠增強(qiáng)ALK-TKI療效、延緩其耐藥的藥物。因此，發(fā) 現(xiàn)有效的增強(qiáng)ALK-TKI療效、延緩其耐藥的藥物具有非常重要的科學(xué)意義和臨床價(jià)值。
[0003] 水飛薊賓（siLybin)是從植物水飛薊（SiLybumMarianimL. S. L)果實(shí)中提取的有 效成分，臨床上主要用于治療急慢性肝炎、肝硬變、脂肪肝、酒精引起的肝損傷、代謝中毒性 肝損傷、膽結(jié)石和脾臟病等。今年來公開了一些水飛薊賓的新用途，例如CN101961329公開 了水飛薊賓在制備抗雄性激素藥物中的用途。CN1666739公開了水飛薊賓或其鹽在制備治 療冠心病或用于增強(qiáng)治療冠心病藥物療效中的應(yīng)用。CN102727484公開了水飛薊賓在制備 預(yù)防或治療老年癡呆藥物中的用途；等。然而，目前尚未發(fā)現(xiàn)有文獻(xiàn)報(bào)道水飛薊賓或其鹽在 制備增強(qiáng)ALK-TKI療效、延緩其耐藥的藥物中的應(yīng)用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明提供一種水飛薊賓或其鹽的新用途，即水飛薊賓或其鹽在制備增強(qiáng) ALK-TKI療效、延緩其耐藥的藥物中的應(yīng)用。
[0005] 現(xiàn)有技術(shù)中公開了水飛薊賓或其鹽可制備治療肝炎、肺炎、肺部腫瘤的藥物中的 應(yīng)用。但是從未有文獻(xiàn)記載，水飛薊賓或其鹽可用于增強(qiáng)其ALK-TKI療效、延緩ALK-TKI耐 藥的報(bào)道。本發(fā)明經(jīng)過實(shí)驗(yàn)得出水飛薊賓或其鹽能夠顯著增強(qiáng)ALK-TKI的療效，并且能夠 延緩ALK-TKI的耐藥；水飛薊賓還能夠顯著降低耐藥細(xì)胞的侵襲性：使耐藥株H2228-CR發(fā) 生侵襲的細(xì)胞數(shù)平均值從238至86個(gè)；此外，水飛薊賓聯(lián)合克唑替尼可顯著減弱移植瘤的 生長；表明水飛薊賓可顯著增強(qiáng)克唑替尼的療效。
[0006] 本發(fā)明所述的ALK-TKI優(yōu)選克唑替尼或色瑞替尼，進(jìn)一步優(yōu)選ALK-TKI為克唑替 尼。
[0007] 克唑替尼對(duì)非小細(xì)胞肺癌的治療有效率可達(dá)到60%，但是在服用克唑替尼1-2年 后，也會(huì)出現(xiàn)耐藥性使得克唑替尼的療效降低。但是目前還未發(fā)現(xiàn)有任何藥物可克服克唑 替尼的耐藥性，本發(fā)明經(jīng)過大量的實(shí)驗(yàn)得出，水飛薊賓或其鹽可有效地逆轉(zhuǎn)克唑替尼的耐 藥性，從而使得克唑替尼的療效增強(qiáng)。
[0008] 進(jìn)一步改進(jìn)的方案中，水飛薊賓的鹽優(yōu)選水飛薊賓葡甲胺、水飛薊賓精氨酸或水 飛薊賓組氨酸。更進(jìn)一步的優(yōu)選，所述鹽選自水飛薊賓葡甲胺。
[0009] 進(jìn)一步的改進(jìn)，所述水飛薊賓或其鹽的使用劑量為70-700mg/日。
[0010] 優(yōu)選地，所述水飛薊賓或其鹽的使用劑量為300mg/日。
[0011] 本發(fā)明另一方面，提供了水飛薊賓或其鹽的制劑在制備增強(qiáng)ALK-TKI療效、延緩 其耐藥的藥物中的應(yīng)用。所述制劑優(yōu)選為緩釋制劑，進(jìn)一步優(yōu)選為緩釋片。
[0012] 本發(fā)明另一方面提供一種增強(qiáng)ALK-TKI療效、延緩其耐藥的緩釋片，該緩釋片包 括重量份數(shù)為5-15份的水飛薊賓或其鹽和重量份數(shù)為20-50份的輔料。
[0013] 以上緩釋片中，輔料包括辛基酚聚氧乙烯醚、海藻酸丙二醇酯、微晶纖維素、辛基 十二烷醇和羧甲基纖維素鈉；所述辛基酚聚氧乙烯醚、海藻酸丙二醇酯和微晶纖維素與水 飛薊賓或其鹽形成微囊；所述緩釋片各成分的重量份數(shù)為：
[0014] 水飛薊賓或其鹽 10
[0015] 辛基酸聚氧Zi錄_機(jī) IQ 海藻酸丙二醇酯 12.5 微晶纖維素 2.5 羊基十二焼醇 3 羧甲基纖維素鈉 6.
[0016] 本發(fā)明通過將水飛薊賓或其鹽制成微囊后延緩了水飛薊賓的釋放，使其釋放能夠 持續(xù)24h ;該緩釋片在1、2、6、12和24小時(shí)的累積溶出百分率分別達(dá)到33-35%、68-70%、 80-82%、87-89 %和90%以上；并且通過與辛基酚聚氧乙烯醚、海藻酸丙二醇酯和微晶纖 維素制成微囊后，提高了水飛薊賓的水溶性，促進(jìn)了水飛薊賓的吸收；同時(shí)還提高了緩釋片 的穩(wěn)定性，將緩釋片置于溫度為40±2°C和相對(duì)濕度75±5%的條件下放置6個(gè)月，緩釋片 內(nèi)水飛薊賓或其鹽的含量、緩釋片的形狀及崩解時(shí)限均未發(fā)生變化；置于25±2°C和相對(duì) 濕度60±10%的條件下放置36個(gè)月緩釋片內(nèi)水飛薊賓或其鹽的含量、緩釋片的形狀及崩 解時(shí)限均未發(fā)生變化。加入的辛基十二烷醇不但起到了粘合劑的作用還起到了潤滑劑的作 用。
[0017] 本發(fā)明另一方面提供了緩釋片的制備方法，該方法包括如下步驟：a.將水飛薊賓 或其鹽加入辛基酚聚氧乙烯醚和海藻酸丙二醇酯中，研磨至均勻，制得水飛薊賓或其鹽研 磨物；將微晶纖維素按體積比為1:3加入水中，制得水溶液；將水飛薊賓或其鹽研磨物和水 溶液混合均勻，于高速剪切乳化，制得水飛薊賓或其鹽初乳；將水飛薊賓或其鹽初乳置于高 壓勻質(zhì)機(jī)中乳化，制得水飛薊賓或其鹽乳液；將水飛薊賓或其鹽乳液噴霧干燥，制得粒徑范 圍為15-25 μπι的水飛薊賓或其鹽微囊；b.將水飛薊賓或其鹽微囊與羧甲基纖維素鈉混合 均勻，制得混合粉；c.將3/4的辛基十二烷醇溶于無水乙醇中，加入混合粉，混合均勻，制軟 材；
[0018] d.將軟材過20目篩，制濕顆粒，將濕顆粒噴霧干燥，進(jìn)行整粒，與剩余的辛基十二 烷醇混合均勻，壓片，制得。
[0019] 本發(fā)明另一方面還提供了所述緩釋片在制備增強(qiáng)ALK-TKI療效、延緩其耐藥的藥 物中的應(yīng)用。
[0020] 本發(fā)明的有益效果在于，獲得了水飛薊賓或其鹽的新用途，用于增強(qiáng)ALK-TKI療 效、延緩ALK-TKI耐藥；從而增強(qiáng)非小細(xì)胞肺癌患者對(duì)ALK-TKI的敏感性，克服ALK-TKI容 易耐藥的缺點(diǎn)，提高ALK-TKI的療效；進(jìn)而提高ALK-TKI的客觀有效率達(dá)60% ;此外，通過 試驗(yàn)得出，水飛薊賓只能增強(qiáng)克唑替尼等ALK-TKI對(duì)非小細(xì)胞肺癌的治療效果，不能增強(qiáng) 其他類型的抑制劑例如索拉菲尼、厄洛替尼等對(duì)非小細(xì)胞肺癌的治療效果；并且只會(huì)延緩 克唑替尼等ALK-TKI的耐藥性，不會(huì)延緩其他類型的非小細(xì)胞肺癌抑制劑的耐藥。
【附圖說明】
[0021] 圖1為EGFR-TKI敏感株H1650、EGFR-TKI耐藥株H1650-M3對(duì)厄洛替尼的敏感性 實(shí)驗(yàn)結(jié)果；
[0022] 圖2為ALK-TKI敏感株H2228對(duì)克唑替尼的敏感性實(shí)驗(yàn)結(jié)果；
[0023] 圖3為ALK-TKI耐藥株H2228-CR對(duì)克唑替尼的敏感性實(shí)驗(yàn)結(jié)果；
[0024] 圖4為EGFR-TKI敏感株P(guān)C-9、EGFR-TKI耐藥株P(guān)C-9GR對(duì)索拉菲尼的敏感性實(shí)驗(yàn) 結(jié)果；
[0025] 圖5為ALK-TKI耐藥株H2228-CR發(fā)生侵襲的侵襲性實(shí)驗(yàn)結(jié)果；
[0026] 圖6為EGFR-TKI耐藥株H1650-M3發(fā)生侵襲的侵襲性實(shí)驗(yàn)結(jié)果；
[0027] 圖7為EGFR-TKI耐藥株P(guān)C-9GR發(fā)生侵襲的侵襲性實(shí)驗(yàn)結(jié)果；
[0028] 圖8為體內(nèi)實(shí)驗(yàn)的各組裸鼠腫瘤變化情況示意圖；
[0029] 圖9腫瘤生長曲線圖。
【具體實(shí)施方式】
[0030] 實(shí)施例1 一種水飛薊賓緩釋片
[0031] 水飛薊賓 IQg 辛基酚聚氧乙烯醚： IOg 海藻酸丙二醇酯 12. Sg 微晶纖維素 2. Sg 辛基十二燒醇 Sg 羧甲基纖維素鈉 6g
[0032] a.將水飛薊賓或其鹽加入辛基酚聚氧乙烯醚和海藻酸丙二醇酯中，研磨至均勻， 制得水飛薊賓或其鹽研磨物；將微晶纖維素按體積比為1:3加入水中，制得水溶液；將水飛 薊賓或其鹽研磨物和水溶液混合均勻，于高速剪切乳化，制得水飛薊賓或其鹽初乳；將水飛 薊賓或其鹽初乳置于高壓勻質(zhì)機(jī)中乳化，制得水飛薊賓或其鹽乳液；將水飛薊賓或其鹽乳 液噴霧干燥，制得粒徑范圍為15-25 μ m的水飛薊賓或其鹽微囊；
[0033] b.將水飛薊賓或其鹽微囊與羧甲基纖維素鈉混合均勻，制得混合粉；
[0034] c.將3/4的辛基十二烷醇溶于無水乙醇中，加入混合粉，混合均勻，制軟材；
[0035] d.將軟材過20目篩，制濕顆粒，將濕顆粒噴霧干燥，進(jìn)行整粒，與剩余的辛基十二 烷醇混合均勻，壓片，制得。
[0036] 實(shí)施例2 -種水飛薊賓葡甲胺緩釋片
[0037] 水飛薊賓葡甲胺 IQg 辛基酚聚氧乙烯醚 IOg 海藻酸丙二醇酯 Igjg 微晶纖維素 Ejg 辛基十二燒醇 3g 羧甲基纖雛素鈉 6g
[0038] 按照實(shí)施例1的方法制備。
[0039] 實(shí)驗(yàn)例1體外實(shí)驗(yàn)
[0040] 1.實(shí)驗(yàn)?zāi)康模核w薊賓能否提高ALK-TKI細(xì)胞株及其耐藥株對(duì)ALK-TKI的敏感 性；
[0041] 2.實(shí)驗(yàn)方法：采用MTT方法計(jì)算肺癌細(xì)胞的活性；
[0042] 3.實(shí)驗(yàn)步驟：
[0043] (1)對(duì) ALK-TKI 敏感株 Η2228 細(xì)胞、EGFR-TKI 敏感株 Η1650 細(xì)胞、ALK-TKI 耐藥株 H2228-CR 細(xì)胞、EGFR-TKI 耐藥株 H1650-M3 細(xì)胞、EGFR-TKI 敏感株 PC-9 細(xì)胞、EGFR-TKI 耐 藥株P(guān)C-9GR細(xì)胞分別進(jìn)行擴(kuò)增，分別收集對(duì)數(shù)期人肺癌細(xì)胞株，用胰蛋白酶消化細(xì)胞，離 心細(xì)胞懸液，使細(xì)胞沉積下來；用培養(yǎng)基重懸細(xì)胞，計(jì)數(shù)；
[0044] (2)計(jì)數(shù)后將細(xì)胞密度稀釋至2X 104/mL，用加樣器在平底96孔板的各孔中加入 100 μ L細(xì)胞懸液，每孔含2000個(gè)細(xì)胞；將接種好細(xì)胞的96板放入5% C02, 37°C細(xì)胞培養(yǎng)箱 中過夜培養(yǎng)；
[0045] (3)次日配置30 μ M水飛薊賓（M表不moL/L，μ M表不微摩爾μ moL/L，下同），加 入藥物的濃度梯度，共設(shè)5個(gè)濃度，每個(gè)濃度設(shè)3個(gè)復(fù)孔；實(shí)驗(yàn)共12組，具體如下：
[0046] EGFR-TKI 敏感株 H1650 組：給予（20 μΜ、15 μΜ、10 μΜ、5 μΜ、2· 51 μΜ、0 μΜ)厄洛 替尼；
[0047] EGFR-TKI 敏感株 Η1650+ 水飛薊賓組：給予（20 μ Μ、15 μ Μ、10 μ Μ、5 μ Μ、2· 51 μ Μ、 0 μ Μ)厄洛替尼+30 μ M水飛薊賓；
[0048] EGFR-TKI 耐藥株 Η1650-Μ3 組：給予（20 μΜ、15 μΜ、10 μΜ、5 μΜ、2· 51 μΜ、0 μΜ) 厄洛替尼；
[0049] EGFR-TKI 耐藥株 Η1650-Μ3+ 水飛薊賓組：給予（20 μ Μ、15 μ Μ、10