一種含有水飛薊賓、ve的藥物組合物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種藥物組合物，其是由下述重量比的原料藥制成：水飛薊賓8.75-60份，磷脂15-65份，普洱茶提取物25-200份，維生素E6.25-40份，該藥物具有治療非酒精性脂肪肝的作用。
【專利說明】
一種含有水飛薊賓、VE的藥物組合物
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及醫(yī)藥領(lǐng)域，尤其是治療肝病的含水水飛薊賓的藥物組合物。
【背景技術(shù)】
[0002] 20世紀60-80年代末，以H.wagner為代表的西德藥學家從菊科水飛薊屬植物水飛 薊（SiIybummarianum)果實中提取分離其有效成分，稱之為水飛薊素，是一類新型的具有 C一9取代基的黃酮類化合物，即以二氫黃酮醇和苯丙素類衍生物縮合而成的黃酮木脂素 類。水飛薊賓（Silybin，silibinin)系水飛薊的主要成分之一。經(jīng)藥理和毒理研究，表明其 具有明顯的保護及穩(wěn)定肝細胞膜，促進肝細胞恢復(fù)，改善肝功能的作用。對各種毒物，如四 氯化碳、硫代乙酰胺、毒蕈堿、鬼筆堿、豬屎豆堿等引起的肝損傷均具有不同程度的保護治 療作用?？捎糜诩甭愿窝?、早期肝硬化、脂肪肝、中毒性或藥物性肝病。
[0003] 由于水飛薊賓難溶于水及一般有機溶劑，口服吸收差，其生物利用度較低，從而影 響了其臨床療效。為改善其生物利用度，國內(nèi)外藥學工作者作了大量的工作。改善難溶性藥 物吸收的措施一般有超細粉碎、成鹽，添加助溶劑等。近年來采用制成環(huán)糊精包合物、固體 分散體，合成磷脂復(fù)合物，制成不同劑型等方法，研究表明，溶出度及生物利用度大大提高。
[0004] 從固體制劑角度來看，磷脂復(fù)合物為一種較為特殊的固體分散體，他有固定的熔 點，是一種其化學本質(zhì)較穩(wěn)定，不同于藥物和磷脂的分子化合物(絡(luò)合物），該類化合物隨磷 脂種類及藥物磷脂比例的不同而不同，一個磷脂分子可與不同數(shù)目的藥物分子結(jié)合。復(fù)合 物光譜學特征推斷，藥物與磷脂的極性基團部分發(fā)生了較強的相互作用，抑制了分子中單 鏈的自由轉(zhuǎn)動，而磷脂的兩個長脂肪酸鏈不參與復(fù)合反應(yīng)，可自由移動，包裹了磷脂的極性 部分形成一個親脂性的表面，使復(fù)合物表現(xiàn)出較強的脂溶性。它改變了藥物的理化性質(zhì)，使 藥物的脂溶性增加，水溶性減少。促進藥物分子與細胞膜結(jié)合而促進吸收，提高藥物的生物 利用度。普洱茶是云南特有的地方名茶。產(chǎn)地氣候溫和，雨量充沛，云霧繚繞。普洱茶。是以 云南原產(chǎn)地的大葉種曬青茶及其再加工而成兩個系列:直接再加工為成品的生普和經(jīng)過人 工速成發(fā)酵后再加工而成的熟普，型制上又分散茶和緊壓茶兩類;成品后都還持續(xù)進行著 自然陳化過程，具有越陳越香的獨特品質(zhì)。
[0005] 普洱茶是惟一的后發(fā)酵型的茶，它的茶堿、茶多酚等對人體有害的物質(zhì)在長期的 發(fā)酵過程中被分化掉了，因此品性溫和，對人體不刺激，還能夠促進新陳代謝，加速身體內(nèi) 脂肪、毒素的消解和轉(zhuǎn)化，現(xiàn)在困擾都市人的肥胖、三脂高等問題，普洱茶都能夠起到很好 的緩解作用，如排毒、養(yǎng)胃、消炎、降低膽固醇、消脂去膩、美容減肥。現(xiàn)代技術(shù)表明，普洱茶 具有改善胰島素抵抗、調(diào)節(jié)血脂和瘦素水平等作用可一定程度阻斷機體胰島素抵抗所帶來 的肝臟實質(zhì)細胞脂肪堆積等作用。
[0006] 非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD) -種與膜島 素抵抗和遺傳易感密切相關(guān)的代謝應(yīng)激性肝臟損傷，其病理學改變與酒精性脂肪肝病相 似。是一種病變主體在肝小葉以肝細胞脂肪變性和脂肪貯積為病理特征但無過量飲酒史的 臨床病理綜合征.NAFLD表現(xiàn)不同程度的肝臟病變，從沒有任何炎癥的單純脂肪肝至顯著纖 維化甚至肝硬化的嚴重炎癥反應(yīng)，主要包括單純性脂肪肝、脂肪性肝炎、脂肪性肝硬化3種 類型.
[0007] 非酒精性脂肪肝病治療方法
[0008] 1.防治原發(fā)病或相關(guān)危險因素
[0009] 2.基礎(chǔ)治療：制定合理的能量攝人以及飲食結(jié)構(gòu)調(diào)整、中等量有氧運動、糾正不良 生活方式和行為。
[0010] 3.避免加重肝臟損害：防止體重急劇下降、濫用藥物及其他可能誘發(fā)肝病惡化的 因素。
[0011] 4.減肥:所有體重超重、內(nèi)臟性肥胖以及短期內(nèi)體重增長迅速的NAFLD患者，都需 通過改變生活方式控制體重、減少腰圍?；A(chǔ)治療6個月體重下降每月〈0.45kg，或體重指數(shù) (BMI )>27kg/m2合并血脂、血糖、血壓等兩項以上指標異常者，可考慮加用西布曲明或奧利 司他等減肥藥物，每周體重下降不宜超過1.2Kg(兒童每周不超過0.5Kg) ;BMI>40kg/m2或 BMI>35kg/m2合并睡眠呼吸暫停綜合征等肥胖相關(guān)疾病者，可考慮近端胃旁路手術(shù)減肥 (Π _1，Π _2，Π _3，m) 〇
[0012] 5.胰島素增敏劑:合并2型糖尿病、糖耐量損害、空腹血糖增高以及內(nèi)臟性肥胖者， 可考慮應(yīng)用二甲雙胍和噻唑烷二酮類藥物，以期改善胰島素抵抗和控制血糖（Π -1，Π -2， Π ~3) 〇
[0013] 6.降血脂藥:血脂紊亂經(jīng)基礎(chǔ)治療和(或)應(yīng)用減肥降糖藥物3-6個月以上，仍呈混 合性高脂血癥或高脂血癥合并2個以上危險因素者，需考慮加用貝特類、他汀類或普羅布考 等降血脂藥物（Π -1，Π -2，Π -3)。
[0014] 7.針對肝病的藥物:NAFLD伴肝功能異常、代謝綜合征、經(jīng)基礎(chǔ)治療3~6個月仍無 效，以及肝活體組織檢查證實為NASH和病程呈慢性進展性經(jīng)過者，可采用針對肝病的藥物 輔助治療，以抗氧化、抗炎、抗纖維化，可依藥物性能以及疾病活動度和病期合理選用多烯 磷脂酞膽堿、維生素 E、水飛薊素以及熊去氧膽酸等相關(guān)藥物（11-1，11-2，11-3，111)，但不宜 同時應(yīng)用多種藥物。
[0015] 8.肝移植:主要用于NASH相關(guān)終末期肝病和部分隱源J睦肝硬化肝功能失代償患 者的治療，肝移植前應(yīng)篩查代謝情況(III)。BMI>40kg/m2為肝移植的禁忌證(m)。
[0016] 在上述治療方法還沒有將幾種治療方法混合使用的方法，例如降糖和肝病藥物同 用，或者降血脂和肝病藥物同用的方法。因此，尋找一個能夠具有多種保健功能的藥物是迫 不及待的。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0017] 為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明提供一種藥物組合物及其制劑，對非酒精性脂肪 肝的有療效，四者者結(jié)合還具有治療非酒精性脂肪肝的協(xié)同增效作用。
[0018] 本發(fā)明提供了該藥物組合物及其制劑的制備方法。
[0019] 本發(fā)明是通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)的：
[0020] -種藥物組合物，其是由下述重量比的原料藥制成 水飛薊賓 8. 75-60份 磷脂 15-65份
[0021] 普洱茶提取物 25-150份 維生素 E 6. 25-40份
[0022]優(yōu)選其是由下述重量比的原料藥制成： 水飛薊賓 25-40份 磷脂 30-50份
[0023] 普洱茶提取物 80-120份 雒生素 E 20-30份
[0024]最優(yōu)選，其是由下述重量份的原料制成 水飛薊賓 35份 磷脂 42份
[0025] 普搏茶提取物 WO份 維生素 E 25份P
[0026] 本發(fā)明所述的磷脂是以磷脂酰膽堿為主的大豆磷脂或卵磷脂，優(yōu)選大豆磷脂。
[0027] 磷脂在本發(fā)明中的作用在于:促進藥物溶解與吸收，水飛薊賓屬低溶低滲藥物，磷 脂與其結(jié)合形成磷脂復(fù)合物后，可提高水飛薊賓溶解性，從而提高藥物的生物利用度。
[0028] 所述的水飛薊賓，磷脂均為現(xiàn)有技術(shù)，或者市購。為了更好的發(fā)揮本發(fā)明的療效， 本發(fā)明的水飛薊賓優(yōu)選如下方法制備，取水飛薊素，分別用80%乙醇溶解，過濾，沉淀用 95 %乙醇溶解洗脫三次，收集沉淀。沉淀用無水乙醇溶解，過濾，濾液加入一定量水使沉淀 析出，過濾，收集沉淀，減壓干燥，粉碎，混合即可。
[0029] 所述的普洱茶提取物市購，優(yōu)選帝泊洱普洱茶珍。還可以按照現(xiàn)有技術(shù)制備，為了 更好的發(fā)揮本發(fā)明的療效，優(yōu)選普洱茶珍或普洱茶提取物是按照專利公開號 CN101961061A、CN101961061B、CN101961425A、CN101961425B、CN101961060A、 CN101961059A、CN101961059B 制備。
[0030] 例如，普洱茶珍生產(chǎn)工藝
[0031] 步驟1，普洱茶葉加水煎煮提取2-4次，每次0.5~2小時，6-12倍體積的水;提取液 過濾，濾液在< 70°C條件下減壓濃縮至茶葉重量:濃縮液體積=1:2-1:3;
[0032] 步驟2，濃縮液用離心機離心，離心液減壓濃縮至45-65°C比重1.1一1.25，濃縮膏 噴霧干燥或微波干燥，即得。
[0033] 優(yōu)選的，步驟如下：
[0034]步驟1，普洱茶葉加水劇烈沸騰煎煮提取3次，每次0.5~2小時，加水量6-12倍體積 的水;提取液過濾，濾液在< 70°C條件下減壓濃縮至茶葉重量:濃縮液體積=1:2-1:3; [0035] 步驟2,濃縮液用三足離心機離心，三足離心液用管式離心機離心，離心液減壓濃 縮至45-65 °C比重1.1一1.25，濃縮膏噴霧干燥或微波干燥，即得；
[0036]其中管式離心條件:離心機轉(zhuǎn)速：15000-19000轉(zhuǎn)/min;噴霧干燥條件:進風溫度： 140-190 °C，出風溫度：75-95 °C。
[0037] 最優(yōu)選的，步驟如下：
[0038] 普洱茶葉加水劇烈沸騰煎煮提取3次，第1次煎煮1.5h，加水10倍體積;第2次煎煮 1.5h，加水8倍體積;第3次煎煮Ih，加水8倍體積，提取液過濾，濾液在< 70°C條件下減壓濃 縮至茶葉重量:濃縮液體積=1:2-1:3,濃縮液用三足離心機離心，三足離心液用管式離心 機離心，離心液減壓濃縮至45-65°C比重1.1一1.25,濃縮膏噴霧干燥或微波干燥，即得； [0039]其中管式離心條件:離心機轉(zhuǎn)速：15000-19000轉(zhuǎn)/min;噴霧干燥條件:進風溫度： 140-190 °C，出風溫度：75-95 °C。
[0040] 所述的維生素 E，為市售可供膳食補充或藥用的維生素 E或維生素 E醋酸酯或維生 素 E琥珀酸酯中的任意一種。
[0041] 以上組成是按重量作為配比的，在生產(chǎn)時可按照相應(yīng)比例增大或減少，如大規(guī)模 生產(chǎn)可以以kg為單位，或以t(噸)為單位;小規(guī)模制劑也可以以g為單位。重量可以增大或者 減小，但各組成之間的生藥材重量配比的比例不變。
[0042] 以上重量配比的比例是經(jīng)過科學篩選得到的，對于特殊病人，如重癥或輕癥，肥胖 或瘦小的病人，可以相應(yīng)調(diào)整組成的量的配比，增加或減少不超過10%，藥效基本不變。
[0043] 在制成藥物制劑時可以制成任何可藥用的劑型，這些劑型選自：片劑、糖衣片劑、 薄膜衣片劑、腸溶衣片劑、膠囊劑、硬膠囊劑、軟膠囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、丸劑、散 劑、膏劑、丹劑、混懸劑、溶液劑、注射劑、栓劑、軟膏劑、硬膏劑、霜劑、噴霧劑、貼劑。優(yōu)選的 是口服制劑形式，最佳優(yōu)選的是片劑，膠囊劑，顆粒劑。
[0044] 本發(fā)明的組合物，根據(jù)需要可以加入一些藥物可接受的載體，可以采用制劑學常 規(guī)技術(shù)制備該藥物制劑，如將藥物活性物質(zhì)與藥物可接受的載體混合。所述藥物可接受的 的載體選自：甘露醇、山梨醇、山梨酸或鉀鹽、焦亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、硫代硫酸鈉、鹽酸半 胱氨酸、巰基乙酸、蛋氨酸、維生素 A、維生素 C、維生素 E、維生素 D、氮酮、EDTA二鈉、EDTA鈣 鈉，一價堿金屬的碳酸鹽、醋酸鹽、磷酸鹽或其水溶液、鹽酸、醋酸、硫酸、磷酸、氨基酸、氯化 鈉、氯化鉀、乳酸鈉、木糖醇、麥芽糖、葡萄糖、果糖、右旋糖苷、甘氨酸、淀粉、蔗糖、乳糖、甘 露糖醇、硅衍生物、纖維素及其衍生物、藻酸鹽、明膠、聚乙烯吡咯烷酮、甘油、丙二醇、乙醇、 土溫60-80、司班-80、蜂蠟、羊毛脂、液體石蠟、十六醇、沒食子酸酯類、瓊脂、三乙醇胺、堿性 氨基酸、尿素、尿囊素、碳酸鈣、碳酸氫鈣、表面活性劑、聚乙二醇、環(huán)糊精、β-環(huán)糊精、磷脂 類材料、高嶺土、滑石粉、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂等。優(yōu)選所述的載體為微晶纖維素、乳糖、淀 粉、羧甲基纖維素鈉、低取代羥丙基纖維素、滑石粉中不含或含有一種或以上。
[0045] 本發(fā)明的組合物，在制成藥劑時，單位劑量的藥劑可含有本發(fā)明的藥物活性物質(zhì) 0.1-1000mg，其余為藥學上可接受的載體。藥學上可接受的載體以重量計可以是制劑總重 量的0.1-99.9%。優(yōu)選所述的藥學上可接受的載體以重量計可以是制劑總重量的40-70%。
[0046] 本發(fā)明的中藥組合物或制劑在使用時根據(jù)病人的情況確定用法用量。
[0047] 本發(fā)明所述的藥物組合物制劑，例如片劑、膠囊劑、顆粒劑等，在溶出條件:漿法， 轉(zhuǎn)速為IOOrpm，溫度為37°C，釋放介質(zhì)為:pHl. 2的鹽酸溶液1000 ml，投藥量：1粒膠囊/1片/1 袋顆粒。其體外溶出2h累積溶出度不低于60%，30min時溶出度大于等于15%。
[0048] 本發(fā)明的一種藥物組合物的制備方法，包括如下步驟：
[0049]①取處方量的原料備用；
[0050] ②水飛薊賓復(fù)合液的制備:稱取處方量水飛薊賓、磷脂溶解到無水乙醇中，加熱回 流使溶液澄清后再繼續(xù)加熱一定時間，再將澄清溶液減壓濃縮至一定體積，得到水飛薊賓 復(fù)合液，備用；
[0051] ③制粒:稱取處方量普洱茶提取物作為底料，以②中制備得水飛薊賓復(fù)合液為料 液，以流化床流化噴液方式制顆粒，待液態(tài)復(fù)合物全部噴入后，干燥，備用；
[0052] ④總混:維生素 E與步驟③顆?；旌暇鶆蚣吹盟幬锝M合物；
[0053]本發(fā)明還包括制劑步驟⑤，取步驟④藥物組合物與藥學上可接受的載體，按照常 規(guī)制劑工藝制成藥學上可接受的劑型。
[0054]進一步優(yōu)選本發(fā)明的制備方法，包括如下步驟：
[0055] ①取處方量的原料備用；
[0056] ②水飛薊賓復(fù)合液的制備:稱取處方量水飛薊賓、磷脂溶解到無水乙醇中，加熱回 流使溶液澄清后再繼續(xù)加熱一定時間，再將澄清溶液減壓濃縮至一定體積，得到水飛薊賓 復(fù)合液，備用；
[0057] ③制粒:稱取處方量普洱茶提取物作為底料，以②中制備得水飛薊賓復(fù)合液為料 液，以流化床流化噴液方式制顆粒，待液態(tài)復(fù)合物全部噴入后，干燥，備用；
[0058]④總混:維生素 E與步驟③顆粒按等量遞增方式混合均勻，即得藥物組合物；
[0059] ⑤按照常規(guī)制劑工藝制成藥學上可接受的劑型。
[0060] 其中步驟②中所述的加熱時間為0.5~1.5小時；所述的濃縮的體積為原體積的 5 %~20 %，減壓濃縮溫度為60~80 °C。
[0061 ]其中步驟③中流化床的參數(shù)為:物料溫度40~65°C，制粒過程調(diào)節(jié)風機頻率，進風 溫度和輸液頻率等參數(shù)，保持物料良好流化狀態(tài)。
[0062] 制粒完成后，干燥10-60分鐘，干燥溫度為55~65°C。
[0063]普洱茶可改善胰島素抵抗、調(diào)節(jié)血脂和瘦素水平等作用可一定程度阻斷機體胰島 素抵抗所帶來的肝臟實質(zhì)細胞脂肪堆積，同時聯(lián)合水飛薊賓較強的自由基清除和抗氧化應(yīng) 激能力，增加 Ve進一步提升產(chǎn)品美容養(yǎng)顏的功效，三者具有較好的抗NAFLD(非酒精性脂肪 性肝病)效果同時具備養(yǎng)顏功效。
[0064]試驗例一體外溶出試驗
[0065] 在以下條件下測定實施例18-22制得的水飛薊賓-磷脂-普洱茶-維生素 E組合物的 溶出：溶出方法的選擇是基于組合物中主要組份水飛薊賓的性質(zhì)而定，水飛薊賓屬生物藥 劑學分類系統(tǒng)(BCS)中第四類，低溶低滲藥物，溶出、吸收均為限速步驟，提高藥物生物利用 度應(yīng)當從提高藥物溶出與吸收兩方面同時解決。水飛薊賓的溶出階段主要在胃中進行，吸 收階段主要在小腸中進行，檢測藥物體外溶出度有助于提高藥物生物利用度。因此選擇以 下溶出方法進行組合物溶出評價:漿法，轉(zhuǎn)速為IOOrpm，溫度為37 °C，釋放介質(zhì)為:pHl. 2的 鹽酸溶液1000ml，投藥量：1粒膠囊/1片/1袋顆粒。取樣點分別為：15、30、45、60、90、120min。 測定其累積溶出度。結(jié)果如下述表1所示。
[0066] 表 1
[0068] 對參比制劑(水飛薊賓-磷脂復(fù)合物制劑，實驗室自制)進行溶出測定，與實施例18 ~22制備的水飛薊賓-磷脂-普洱茶-維生素 E組合物進行比較，結(jié)果見圖1。從表1的數(shù)據(jù)及 圖1的曲線可以看出：
[0069] 采用本發(fā)明的制備方法制得的水飛薊賓-磷脂-普洱茶-維生素 E組合物，其體外釋 放均顯著優(yōu)于參比制劑水飛薊賓-磷脂復(fù)合物，令人驚奇的是，組合物在PHI.2的鹽酸溶液 中2h的累積溶出度達到80%，近乎完全溶出，較參比制劑溶出度提高了一倍，解決了水飛薊 賓一直以來存在的溶解度小，生物利用度低的難題，將為后續(xù)水飛薊賓組合物的劑量設(shè)定 及體內(nèi)安全性和有效性的研究提供依據(jù)。
[0070] 綜合體外溶出試驗和體內(nèi)藥效研究的數(shù)據(jù)，本發(fā)明通過延續(xù)水飛薊賓與磷脂復(fù)合 后提高藥物與生物膜的相容性改善藥物的吸收，進一步通過將水飛薊賓-磷脂復(fù)合物與普 洱茶、維生素 E組合后提高藥物的溶出，從提高溶出與吸收兩方面共同提高主要組份水飛薊 賓的生物利用度。
[0071] 試驗例二、體內(nèi)藥效學評價
[0072] 1實驗動物
[0073] 6周齡雄性C57BL/6J瘦素缺失小鼠（ob/ob)小鼠80只，SPF級，6周齡雄性C57BL/6J (ob/m)小鼠10只，SPF級，由北京華阜康生物科技股份有限公司提供，飼養(yǎng)于天士力研究院 藥理毒理研究中心屏障動物房，溫度20°C~25°C，相對濕度60%，每籠5只，照明時間12小 時，定時定量添加飼料，ob/ob小鼠采用高脂飼料喂養(yǎng)(HFD，D12492)，C57BL/6J小鼠采用普 通飼料喂養(yǎng)，均由北京華阜康生物科技股份有限公司提供，自由飲水，每日更換墊料。
[0074] 2受試物
[0075]水飛薊賓磷脂復(fù)合物，由天士力制藥集團股有限公司提供，批號500902031;普洱 茶珍，棕褐色粉末，由天士力制藥集團股有限公司提供，批號Z001PE(2014)C06(H);水溶性 維生素 E，由sigma公司生產(chǎn)；以上供試品均存放于藥理所供試品室樣品柜內(nèi)，避光室溫下保 存。
[0076] 3實驗方法
[0077] 3.1實驗劑量設(shè)計及分組
[0078]水飛薊賓磷脂復(fù)合物按人日用量為3g(含水飛薊賓420mg、大豆磷脂504mg、）計算 該實驗動物給藥劑量;普洱茶提取物按人日用量為1.2g計算該實驗動物給藥劑量;5種不同 組合物的配伍比例以及實驗劑量設(shè)計見表1，實驗動物的劑量均設(shè)為相應(yīng)受試物的臨床等 效劑量，計算公式如下：
[0079] 動物實驗劑量=推薦人用劑量/60kg* 12.3
[0080] 表1不同組合物的給藥劑量
[0082] 3.2受試物給予
[0083]經(jīng)適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，將80只6周齡的ob/ob小鼠隨機分為8組，分別為模型組、水飛 薊賓磷脂復(fù)合物組、普洱茶提取物組、組合1組、組合2組、組合3組、組合4組、組合5組，每組 10只。另外10只6周齡的C57BL/6J小鼠為正常組。正常組小鼠給予普通飼料喂養(yǎng)，模型組和 給藥組均以高脂飼料喂養(yǎng)(HFD，D12492)。另外，不同藥物干預(yù)組小鼠灌胃給予相應(yīng)劑量的 藥物，五種組合物劑量見表1，正常組和模型組均給予等量蒸餾水，連續(xù)灌胃6周。
[0084]小鼠在實驗期間自由進食和飲水，每周稱體重一次，根據(jù)體重調(diào)整用藥量。末次給 藥后禁食不禁水12h，稱量體重，摘眼球取血后斷頸處死小鼠，迅速解剖摘取肝臟，生理鹽水 漂洗，濾紙吸干稱重后置于_20°C冰箱中保存。
[0085] 3.3檢測指標及方法
[0086] 3.3.1-般情況的觀察
[0087] 實驗期間每周稱一次各組小鼠的體重。
[0088] 3.3.2計算肝指數(shù)并觀察肝臟大體形態(tài)
[0089] 實驗結(jié)束后取肝臟稱重，計算肝臟指數(shù)，肝指數(shù)（％ )=肝濕重/體重*100%。
[0090] 3.3.3血清生化指標檢測
[0091] 所有小鼠經(jīng)摘眼球取血，3000r/min離心15分鐘，分離血清，收集于EP管中，置于-20 °C冰箱保存?zhèn)溆谩２捎?020全自動生化儀檢測血清中谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶 (ALT)、總膽固醇(TC、）、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)含量。
[0092] 3.3.4胰島素抵抗指數(shù)
[0093] 采用Elisa試劑盒檢測血清FINS，并通過公式計算胰島素抵抗指數(shù)。 r n " Tn FBG χ FINS
[0094] Home-IR=. .厶D
[0095] 3.3.5肝臟組織病理學檢測
[0096] 取冰凍肝組織制備冰凍切片，釆用油紅〇染色觀察肝臟脂肪變性程度。油紅〇染色 操作步驟:冰凍切片-蒸餾水充分洗滌-油紅〇稀釋液避光染10-15分鐘-取出油紅0飽和 液6ml，加蒸餾水4ml，靜置5-10分鐘后過濾后使用-60%乙醇鏡下分化至間質(zhì)清晰-水洗 -蘇木素復(fù)染核-水洗-中性樹膠封片-顯微鏡觀察。
[0097] 3.4數(shù)據(jù)處理
[0098]統(tǒng)計學方法采用SPSS 15.0統(tǒng)計學軟件進行分析，數(shù)據(jù)以均數(shù)土標準差表示，采用 t檢驗，分析比較各組治療前后以及組間各項觀察指標有無差異，以P〈0.05為差異有統(tǒng)計學 意義。
[0099] 4實驗結(jié)果
[0100] 4.1各受試物對體重的影響
[0101] 實驗期間每周稱一次各組小鼠的體重，考察各組藥物非酒精性脂肪肝小鼠體重的 影響。如表2,正常照組小鼠體重增長緩慢，模型組小鼠體重增長較快。給藥6周后，除水飛薊 賓磷脂復(fù)合物組外，其他各給藥組均能不同程度地抑制小鼠體重增長(P<〇.05)，水飛薊賓 磷脂復(fù)合物、普洱茶提取物、VE聯(lián)合應(yīng)用明顯優(yōu)于水飛薊賓磷脂復(fù)合物單獨使用。
[0102] 表2各受試物對小鼠體重的影響(g，n = 10，r ± S )
[0104] *與模型組比較P<0.05 與模型組比較P<0.01;
[0105] 4.2各受試物對肝臟指數(shù)的影響
[0106]如表3所示，與正常組比較，模型組小鼠體重，肝臟濕重及肝臟指數(shù)均明顯增大(P <0.01)，水飛薊賓磷脂復(fù)合物可降低小鼠肝臟濕重(P<0.05)，但對小鼠體重和肝臟指數(shù) 未見明顯影響(P>〇.05);水飛薊賓磷脂復(fù)合物+普洱茶提取物+VE配伍組均能不同程度降 低小鼠肝臟濕重及肝臟指數(shù)(P<〇.05)，三者聯(lián)用應(yīng)用組效果明顯優(yōu)于水飛薊賓磷脂復(fù)合 物單獨使用。
[0107]表3各受試物對小鼠肝臟指數(shù)的影響
L0109J *與模型組比較P<0.05;#與模型組比較Ρ<0·01;
[0110] 4.3各受試物對血脂、肝功能及胰島素抵抗指數(shù)的影響
[0111] 如表4所示，與正常組比較，非酒精性脂肪肝模型小鼠血清1'(：、0)^1^^51'及胰島 素抵抗指數(shù)均明顯升高(P<〇.05);水飛薊賓磷脂復(fù)合物各異常升高指標均未見明顯的改 善(P>0.05);不同比例的水飛薊賓磷脂復(fù)合物、普洱茶提取物、VE配伍組，除組合物2對血 清ALT未見明顯改善外(P>0.05)，其他各組合物均可顯著降低1'(：、1^-〇1^)51'及胰島素 抵抗指數(shù)(P<〇.05)，且效果優(yōu)于水飛薊賓磷脂復(fù)合物。
[0112] 表4各受試物對小鼠血脂、肝功能及胰島素抵抗指數(shù)的影響
[0114] *與模型組比較P<0.05;#與模型組比較Ρ<0·01;
[0115] 4.4各受試物對小鼠肝臟病理的影響
[0116] 油紅0染色:根據(jù)肝冰凍組織油紅0染色光鏡下肝細胞內(nèi)紅色顆粒的大小與多少， 分為輕度、中度、重度三型。輕度，即光鏡下每單位面積見1/3-2/3的紅色顆粒，評為1分；中 度，即2/3以上的肝細胞內(nèi)含紅色顆粒，評為2分;重度，即幾乎所有的肝細胞內(nèi)均有紅色顆 粒，評為3分;未見脂肪變性評為0分。
[0117]如表5所示，模型組肝臟組織幾乎所有的肝細胞均發(fā)生脂肪變性，病理評分較正常 組明顯升高(Ρ<〇.01);單獨使用水飛薊賓磷脂復(fù)合物或普洱茶提取物對肝臟病理評分未 見明顯改善(Ρ>〇.05);不同比例水飛薊賓磷脂復(fù)合物、普洱茶提取物、VE搭配使用可明顯 改善肝臟脂肪變性，降低病理評分(Ρ<〇.05)，效果優(yōu)于水飛薊賓磷脂復(fù)合物、普洱茶提取 物單獨使用。
[0118]表5各受試物對小鼠肝臟病理的影響

[0121] *與模型組比較P<0 · 05 與模型組比較P<0 · 01;
[0122] 5實驗結(jié)論
[0123] 以上實驗結(jié)果表明：與空白組相比，非酒精性脂肪肝模型組小鼠體重、肝臟指數(shù)、 血脂、ALT、AST、胰島素抵抗指數(shù)均明顯升高，肝臟組織重度脂肪變性。普洱茶提可改善胰島 素抵抗、調(diào)節(jié)血脂，同時聯(lián)合具有較強清除自由基和抗氧化應(yīng)激能力的水飛薊賓和VE，三者 配合使用對肝臟脂肪變性具有明顯的改善。
【附圖說明】
[0124] 圖1為體外釋放曲線，其中，各樣品為：參比制劑水林佳，無普洱茶的水林佳，實施 例16~20制備的水飛薊賓-磷脂-普洱茶組合物。 具體實施例
[0125] 通過以下具體實施例對本發(fā)明作進一步的說明，但不作為本發(fā)明的限制。
[0126] 實施例1
[0127] 取水飛薊賓26.25g、大豆磷脂45g、普洱茶提取物75g、維生素 E 18.75g。
[0128] ①水飛薊賓復(fù)合液的制備:稱取處方量水飛薊賓、大豆磷脂溶解到無水乙醇中，加 熱回流使溶液澄清后繼續(xù)加熱1小時，減壓濃縮回收乙醇至原體積的15%，備用；
[0129] ②制粒:稱取處方量普洱茶提取物作為底料，以①中制備得水飛薊賓復(fù)合液為料 液，以流化床流化噴液方式制粒，控制物料溫度為40攝氏度，待液態(tài)復(fù)合物全部噴入后，干 燥20min，干燥溫度為60攝氏度，備用；
[0130]③將處方量的維生素 E與步驟②制得的顆粒按等量遞增方式混合均勻，裝袋，制成 1000袋顆粒。
[0131] 實施例2
[0132] 取水飛薊賓180g、大豆磷脂195g、普洱茶提取物600g、維生素 E 120g。
[0133] ①水飛薊賓復(fù)合液的制備:稱取處方量水飛薊賓、大豆磷脂溶解到無水乙醇中，加 熱回流使溶液澄清后繼續(xù)加熱1.5小時，減壓濃縮回收乙醇至原體積的20%，備用；
[0134] ②制粒:稱取處方量普洱茶提取物作為底料，以①中制備得水飛薊賓復(fù)合液為料 液，以流化床流化噴液方式制粒，控制物料溫度為65攝氏度，待液態(tài)復(fù)合物全部噴入后，干 燥60min，干燥溫度為65攝氏度，備用；
[0135] ③將處方量的維生素 E與步驟②制得的顆粒按等量遞增方式混合均勻，裝袋，制成 1000 袋顆粒。
[0136] 實施例3
[0137] 取水飛薊賓26.25g、磷脂195g、普洱茶提取物600g、維生素 E 18.75g。
[0138] ①水飛薊賓復(fù)合液的制備:稱取處方量水飛薊賓、大豆磷脂溶解到無水乙醇中，加 熱回流使溶液澄清后繼續(xù)加熱0.5小時，減壓濃縮回收乙醇至原體積的5%，備用；
[0139] ②制粒:稱取處方量普洱茶提取物作為底料，以①中制備得水飛薊賓復(fù)合液為料 液，以流化床流化噴液方式制粒，控制物料溫度為50攝氏度，待液態(tài)復(fù)合物全部噴入后，干 燥IOmin，干燥溫度為55攝氏度，備用；
[0140] ③將處方量的維生素 E與步驟②制得的顆粒按等量遞增方式混合均勻，裝袋，制成 1000袋顆粒。
[0141] 實施例4
[0142] 取水飛薊賓26.25g、磷脂195g，普洱茶提取物75g，維生素 E 120g，按照實施例1的 方法制備，制成1 〇〇〇袋顆粒。
[0143] 實施例5
[0144] 取水飛薊賓180g、磷脂45g、普洱茶提取物75g，維生素 E 18.75g，按照實施例1的方 法制備，制成1000袋顆粒。
[0145] 實施例6
[0146] 取水飛薊賓180g、磷脂45g、普洱茶提取物600g，維生素 E 120g，按照實施例1的方 法制備，制成1000袋顆粒。
[0147] 實施例7
[0148] 取水飛薊賓180g、磷脂195g、普洱茶提取物75g，維生素 E 120g，按照實施例1的方 法制備，制成1000袋顆粒。
[0149] 實施例8
[0150] 取水飛薊賓26.25g、磷脂48.75g、普洱茶提取物75g，維生素 E 37.5g，按照實施例1 的方法制備，制成1 〇〇〇袋顆粒。
[0151] 實施例9
[0152] 取水飛薊賓26.25g、磷脂48.75g、普洱茶提取物300g，維生素 E37.5g，按照實施例1 的方法制備，制成1 〇〇〇袋顆粒。
[0153] 實施例10
[0154] 取水飛薊賓52.5g、磷脂97.5g、普洱茶提取物300g，維生素 E 9.375g，按照實施例1 的方法制備，制成1 〇〇〇袋顆粒。
[0155] 實施例11
[0156] 取水飛薊賓75g、磷脂90g、普洱茶提取物240g，維生素 E 90g，按照實施例1的方法 制備，制成1000袋顆粒。
[0157] 實施例12
[0158] 取水飛薊賓90g、磷脂108g、普洱茶提取物270g，維生素 E 75g，按照實施例1的方法 制備，制成1000袋顆粒。
[0159] 實施例13
[0160] 取水飛薊賓105g、磷脂126g、普洱茶提取物300g，維生素 E 75g，按照實施例1的方 法制備，制成1000 袋顆粒。
[0161] 實施例14
[0162] 取水飛薊賓105g、磷脂195g、普洱茶提取物300g，維生素 E 75g，按照實施例1的方 法制備，制成1000袋顆粒。
[0163] 實施例15
[0164] 取水飛薊賓120g、磷脂150g、普洱茶提取物360g，維生素 E 90g，按照實施例1的方 法制備，制成1000袋顆粒。
[0165] 實施例16
[0166] 取水飛薊賓105g、磷脂126g、普洱茶提取物300g，維生素 E醋酸酯82.3g，按照實施 例1的方法制備，制成1 〇〇〇袋顆粒。
[0167] 實施例17
[0168] 取水飛薊賓105g、磷脂126g、普洱茶提取物300g，維生素 E琥珀酸酯92.4g，按照實 施例1的方法制備，制成1 〇〇〇袋顆粒。
[0169] 實施例18
[0170] 取實施例8的顆粒，加入微晶纖維素549g，羧甲基淀粉鈉64g，混合均勻，裝入0號膠 囊，制成1000粒。
[0171] 實施例19
[0172] 取實施例9的顆粒，加入微晶纖維素324g，羧甲基淀粉鈉64g，混合均勻，裝入0號膠 囊，制成1000粒。
[0173] 實施例20
[0174]取實施例10的顆粒，加入微晶纖維素 308g，羧甲基淀粉鈉 32g，混合均勻，裝入膠 囊，制成1000粒。
[0175] 實施例21
[0176] 取實施例13的顆粒，加入微晶纖維素194g，混合均勻，裝入膠囊，制成1000粒。
[0177] 實施例22
[0178] 取實施例14的顆粒，加入微晶纖維素61g，羧甲基淀粉鈉64g，混合均勻，裝入膠囊， 制成1000粒。
[0179] 實施例23
[0180] 取實施例8的組合物，加入乳糖400g，淀粉149g，羧甲基淀粉鈉64g，混合均勻，裝入 〇號膠囊，制成1000粒。
[0181] 實施例24
[0182] 取實施例13的組合物，加入乳糖90g，滑石粉10g，低取代羥丙基纖維素94g，混合均 勻，裝入0號膠囊，制成1000粒。
[0183] 實施例25
[0184] 取實施例13的組合物，加入微晶纖維素194g，混合均勻，壓片，制成1000片。
【主權(quán)項】
1. 一種藥物組合物，其是由下述重量比的原料藥制成2. 如權(quán)利要求1所述的- ；的原料藥制成3. 如權(quán)利要求1所述的- ；的原料藥制成4. 如權(quán)利要求1-3任意-W巧I 日化'、」'切組?'口 W，A啊'1止1工于，所述的維生素 E可W用維 生素 E醋酸醋或維生素 E班巧酸醋替代。5. -種藥物制劑，其特征在于，包括如權(quán)利要求1-3任意一項所述的藥物組合物，和藥 學上可接受的載體； 優(yōu)選藥學上可接受的載體W重量計可W是制劑總重量的0.1-99.9%; 優(yōu)選藥學上可接受的載體W重量計可W是制劑總重量的40-70%。6. 如權(quán)利要求5所述的制劑，其特征在于，所述的載體包括甘露醇、山梨醇、山梨酸或鐘 鹽、焦亞硫酸鋼、亞硫酸氨鋼、硫代硫酸鋼、鹽酸半脫氨酸、琉基乙酸、蛋氨酸、維生素A、維生 素C、維生素E、維生素D、氮酬、EDTA二鋼、EDTA巧鋼，一價堿金屬的碳酸鹽、醋酸鹽、憐酸鹽或 其水溶液、鹽酸、醋酸、硫酸、憐酸、氨基酸、氯化鋼、氯化鐘、乳酸鋼、木糖醇、麥芽糖、葡萄 糖、果糖、右旋糖巧、甘氨酸、淀粉、薦糖、乳糖、甘露糖醇、娃衍生物、纖維素及其衍生物、藻 酸鹽、明膠、聚乙締化咯燒酬、甘油、丙二醇、乙醇、上溫60-80、司班-80、蜂蠟、羊毛脂、液體 石蠟、十六醇、沒食子酸醋類、瓊脂、=乙醇胺、堿性氨基酸、尿素、尿囊素、碳酸巧、碳酸氨 巧、表面活性劑、聚乙二醇、環(huán)糊精、e-環(huán)糊精、憐脂類材料、高嶺±、滑石粉、硬脂酸巧、硬 脂酸儀、微晶中不含或含有一種或W上;優(yōu)選所述的載體優(yōu)選為微晶纖維素、乳糖、淀粉、簇 甲基纖維素鋼、低取代徑丙基纖維素、滑石粉中一種或W上。7. 如權(quán)利要求5所述的制劑，其特征在于，所述的制劑為片劑、糖衣片劑、薄膜衣片劑、 腸溶衣片劑、膠囊劑、硬膠囊劑、軟膠囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、丸劑、散劑、膏劑、丹劑、 混懸劑、溶液劑、注射劑、栓劑、軟膏劑、硬膏劑、霜劑、噴霧劑、貼劑任意一種;優(yōu)選所述的制 劑為膠囊劑、顆粒劑或片劑。8. 如權(quán)利要求5所述的制劑制備方法，其特征在于，包括如下步驟： ① 取處方量的原料備用； ② 水飛劑賓復(fù)合液的制備:稱取處方量水飛劑賓、憐脂溶解到無水乙醇中，加熱回流使 溶液澄清后再持續(xù)加熱一定時間，再將澄清溶液減壓濃縮至一定體積，得到水飛劑賓復(fù)合 液，備用； ③ 粒:稱取處方量普巧茶提取物作為底料，W②中制備得水飛劑賓復(fù)合液為料液，W流 化床流化噴液方式制顆粒，待液態(tài)復(fù)合物全部噴入后，干燥，備用； ④ 總混:取處方量VE與步驟③顆?；旌暇鶆蚣吹盟幬锝M合物； ⑤ 制劑:取藥物組合物與藥學上可接受的載體制成常規(guī)制劑。9. 權(quán)利要求8的方法，其特征在于，步驟②中所述的加熱時間為0.5~1.5小時;所述濃 縮的體積為原體積的5%~20%，減壓濃縮溫度為60~80°C ;步驟③中流化床的參數(shù)為物料 溫度40~65°C，制粒過程調(diào)節(jié)風機頻率，進風溫度和輸液頻率等參數(shù)，保持物料良好流化狀 態(tài);制粒完成后，干燥10~60分鐘，干燥溫度為55~65°C。10. 如權(quán)利要求1-3任意一項所述的藥物組合物或權(quán)利要求5所述的制劑在制備治療非 酒精性脂肪肝和/或減肥降脂、美容養(yǎng)顏藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號】A61K31/355GK105983015SQ201610158593
【公開日】2016年10月5日
【申請日】2016年3月18日
【發(fā)明人】孫鶴, 閆希軍, 吳迺峰, 閆凱境, 朱永宏, 章順楠, 白曉林, 孫艷, 馬曉慧, 何毅, 李婷, 李磊, 曼麗·愛德華, 李盛亭, 弗萊德·澳赫, 周王誼, 王相陽, 李欣欣, 王寶藝
【申請人】天士力制藥集團股份有限公司