一種治療糖尿病視網(wǎng)膜病變的中藥片劑及其用途
【專利摘要】本發(fā)明一種治療糖尿病視網(wǎng)膜病變的中藥片劑及其用途，提供一種中藥片劑，所述中藥片劑的原料藥組成為：黃芪30-60重量份、女貞子9-15重量份、益母草9-30重量份、烏梅3-10重量份、黃連2-9重量份、肉桂1-5重量份、密蒙花3-9重量份；通過(guò)如下方法制備：肉桂提取揮發(fā)油，揮發(fā)油用β-環(huán)糊精包合；肉桂藥渣與黃芪、女貞子、密蒙花、烏梅先用乙醇溶液I提取，再經(jīng)過(guò)大孔吸附樹(shù)脂精制，得干浸膏粉1；黃連和益母草先用乙醇溶液III提取，再經(jīng)過(guò)離子交換樹(shù)脂精制，得干浸膏粉2；干浸膏粉1和干浸膏粉2以及揮發(fā)油包合物，加入藥學(xué)上可以接受的輔料，壓片，即得所述中藥片劑。本發(fā)明所述片劑，與現(xiàn)有技術(shù)相比，單位制劑中的活性物質(zhì)含量更高，藥理作用更好。
【專利說(shuō)明】一種治療糖尿病視網(wǎng)膜病變的中藥片劑及其用途

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于中藥領(lǐng)域，具體涉及一種用于糖尿病視網(wǎng)膜病變的中藥片劑及其用途。

【背景技術(shù)】
[0002]糖尿病視網(wǎng)膜病變(Diabetic Retinopathy,簡(jiǎn)稱DR),是糖尿病嚴(yán)重而常見(jiàn)的眼部并發(fā)癥之一。隨著糖尿病病程的延長(zhǎng)，DR的發(fā)生率亦隨之增高。病程8年以上者中，糖尿病視網(wǎng)膜病變發(fā)生率約為50%。該病早期癥狀不明顯，易被忽視，晚期又沒(méi)有特效的控制方法，疾病纏綿，頑固難治。本病失治，后果嚴(yán)重，是導(dǎo)致成人失明的主要原因，致盲率高達(dá)8-12%，對(duì)患病人群的生活質(zhì)量造成了嚴(yán)重不良影響。因此，DR的防治已成為當(dāng)今醫(yī)學(xué)領(lǐng)域急需解決的重大攻關(guān)課題，日益受到國(guó)內(nèi)外醫(yī)學(xué)界和醫(yī)藥工作者的高度重視。但是，目前國(guó)內(nèi)外尚缺乏治療本病的有效藥物。為了滿足日益擴(kuò)大的市場(chǎng)需求，預(yù)防和延緩糖尿病患者視網(wǎng)膜病變的疾病進(jìn)程，提高廣大糖尿病患者的生活質(zhì)量，發(fā)揮中醫(yī)藥治療疑難疾病等優(yōu)勢(shì)病種的特長(zhǎng)，開(kāi)展治療DR的中藥新藥具有十分重要的社會(huì)意義和經(jīng)濟(jì)價(jià)值。
[0003]在 申請(qǐng)人:早前的一件名為“一種治療早期糖尿病視網(wǎng)膜病變的中藥制劑”專利中(專利號(hào)ZL200610087540.3，授權(quán)公告日2009年9月16日)，公開(kāi)了一種治療早期糖尿病視網(wǎng)膜病變的中藥制劑，處方組成為:
[0004]黃苗30_60g、女貞子9_15g、益母草9_30g、烏梅3_10g、黃連2_9g、肉桂2_5g、密蒙花 3-9g。
[0005]該專利文件還公開(kāi)了上述中藥制劑的制備方法，即:(1)取相應(yīng)配比的各種藥組分七劑；(2)用清潔冷水浸泡30分鐘；(3)放入煎藥機(jī)中，加入2500毫升浸泡水，煎煮40分鐘，機(jī)械擠壓出藥汁；(4)分裝14個(gè)密封塑料袋中，每袋175毫升。
[0006]上述方法僅是中藥煎劑的簡(jiǎn)單制備方法，并沒(méi)有考慮如何充分提取出藥物中的有效成分，使藥材資源浪費(fèi)嚴(yán)重，但是藥效作用不顯著；同時(shí)水煎劑帶來(lái)服用量大，口感差，不方便攜帶，不宜長(zhǎng)期儲(chǔ)存的問(wèn)題。
[0007]因此，有必要在充分考慮處方中各味藥物的活性成分在種類、結(jié)構(gòu)、理化性質(zhì)上的差異的基礎(chǔ)上，對(duì)上述水煎劑的劑型進(jìn)行改進(jìn)，以期能夠方便服用、提高藥效，為患者提供更好的治療糖尿病視網(wǎng)膜病變的藥物。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0008]針對(duì)上述問(wèn)題，本發(fā)明的一個(gè)目的在于提供一種治療糖尿病視網(wǎng)膜病變的中藥片齊U。與現(xiàn)有技術(shù)的水煎劑比較，本發(fā)明所述片劑單次僅需服用約1.6g，而且單位制劑中活性物質(zhì)的含量更高、藥效更顯著。
[0009]為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明采用了如下的技術(shù)方案:
[0010]一種中藥片劑，所述中藥片劑的原料藥組成為:
[0011]黃芪30-60重量份、女貞子9-15重量份、益母草9_30重量份、烏梅3_10重量份、黃連2-9重量份、肉桂1-5重量份、密蒙花3-9重量份；
[0012]通過(guò)如下方法制備:
[0013](I)按照所述重量份準(zhǔn)備各原料藥；
[0014](2)肉桂提取揮發(fā)油，肉桂藥渣備用，揮發(fā)油用環(huán)糊精包合，得揮發(fā)油包合物；
[0015](3)步驟⑵得到的肉桂藥渣與黃芪、女貞子、密蒙花、烏梅合并，用體積百分比濃度為30% -80%的乙醇溶液I提取，乙醇提取液回收乙醇，濃縮至80°C時(shí)測(cè)定相對(duì)密度為1.10-1.20的浸膏，得提取浸膏I ;
[0016](4)步驟(3)得到的提取浸膏I上大孔吸附樹(shù)脂，用水洗脫，棄去水洗液，再用體積百分比濃度為30% -100%的乙醇溶液II洗脫，收集乙醇洗脫部分，回收乙醇，濃縮，干燥，得浸膏粉I ;
[0017](5)益母草、黃連加體積百分比濃度為30% -80%的乙醇溶液III提取，醇提取液回收乙醇，濃縮至80°C時(shí)測(cè)定相對(duì)密度為1.10-1.20的浸膏，得提取浸膏2 ;
[0018](6)步驟(5)得到的提取浸膏2上酸性陽(yáng)離子交換樹(shù)脂，用水洗脫，棄去水洗液，再用洗脫劑洗脫至生物堿反應(yīng)呈陰性為止，收集洗脫液，濃縮，干燥，得浸膏粉2 ；
[0019](7)所述浸膏粉1、浸膏粉2和揮發(fā)油包合物，加入藥學(xué)上可以接受的輔料，混合均勻，直接壓片或者制粒后壓片，即得所述中藥片劑。
[0020]上述原料藥的單位處方組成優(yōu)選為:
[0021]黃芪30g、女貞子15g、益母草15g、烏梅9g、黃連6g、肉桂lg、密蒙花6g。
[0022]優(yōu)選的，所述步驟(2)中，肉桂用水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油，水的重量為藥材重量的6-16倍，提取時(shí)間為3-7小時(shí)。
[0023]更優(yōu)選的，所述步驟(2)中，肉桂用水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油，水的重量為藥材重量的8倍，提取時(shí)間5小時(shí)。
[0024]還優(yōu)選的，所述步驟(2)中，揮發(fā)油先用無(wú)水乙醇溶解，再與環(huán)糊精水溶液進(jìn)行包合。
[0025]更優(yōu)選的，所述步驟(2)中，所述無(wú)水乙醇的體積為揮發(fā)油體積的1-3倍，更優(yōu)選為揮發(fā)油體積的2倍。
[0026]更優(yōu)選的，所述步驟(2)中，環(huán)糊精的重量是揮發(fā)油體積的6-20倍，進(jìn)一步優(yōu)選為揮發(fā)油體積的10倍。
[0027]更優(yōu)選的，所述步驟(2)中，所述環(huán)糊精水溶液，水重量為環(huán)糊精重量的15-40倍；進(jìn)一步優(yōu)選的，水的重量為β -環(huán)糊精重量的25倍。
[0028]所述步驟(2)優(yōu)選的技術(shù)方案為:
[0029]肉桂用水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油，水的重量是肉桂重量的6-16倍，提取時(shí)間為
3-7小時(shí)；蒸餾后的水溶液另器收集，肉桂藥渣備用；揮發(fā)油加1-3倍體積的無(wú)水乙醇溶解，得到揮發(fā)油乙醇液；稱取重量為揮發(fā)油體積6-20倍的β-環(huán)糊精，加入β-環(huán)糊精重量15-40倍的水，混合均勻，得到β -環(huán)糊精水溶液；在轉(zhuǎn)速150轉(zhuǎn)/分鐘下，緩慢向所述β-環(huán)糊精水溶液加入揮發(fā)油乙醇液，加入完畢后，繼續(xù)攪拌1.5小時(shí)，冷藏12小時(shí)，過(guò)濾，將濾得物在45 V下低溫烘干，得白色疏松的揮發(fā)油包合物。
[0030]所述步驟(2)更優(yōu)選的技術(shù)方案為:
[0031]肉桂用水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油，水的重量是肉桂重量的10倍，提取時(shí)間為5小時(shí)；蒸餾后的水溶液另器收集，肉桂藥渣備用；揮發(fā)油加2倍體積的無(wú)水乙醇溶解，得到揮發(fā)油乙醇液；稱取重量為揮發(fā)油體積10倍的β-環(huán)糊精，加入環(huán)糊精重量25倍的水，混合均勻，得到環(huán)糊精水溶液；在轉(zhuǎn)速150轉(zhuǎn)/分鐘下，緩慢向所述β-環(huán)糊精水溶液加入揮發(fā)油乙醇液，加入完畢后，繼續(xù)攪拌1.5小時(shí)，冷藏12小時(shí)，過(guò)濾，將濾得物在45°C下低溫烘干，得白色疏松的揮發(fā)油包合物。
[0032]優(yōu)選的，所述步驟(3)中，乙醇溶液I的體積百分比濃度為40% -70%，更優(yōu)選為50%。
[0033]還優(yōu)選的，所述步驟(3)中，乙醇溶液I的體積為所述藥材總重量的6-14倍；更優(yōu)選的，乙醇溶液I的體積為所述藥材總重量的10倍。
[0034]還優(yōu)選的，所述步驟(3)中，提取2-3次，每次0.5-2小時(shí)；更優(yōu)選的，提取2次，每次1.5小時(shí)。
[0035]優(yōu)選的，所述步驟(4)中，所述大孔吸附樹(shù)脂選自非極性或弱極性大孔吸附樹(shù)脂中的一種；更優(yōu)選自AB-8、D101、HP-20和HPD400中的一種。
[0036]還優(yōu)選的，所述步驟(4)中，水的用量為柱體積的4-8倍；更優(yōu)選的，水的用量為柱體積的5倍。
[0037]還優(yōu)選的，所述步驟(4)中，所述乙醇溶液II的體積百分比濃度為40% -80%;更優(yōu)選為70%。
[0038]還優(yōu)選的，所述步驟(4)中，所述乙醇溶液II的用量為柱體積的3-8倍；更優(yōu)選為柱體積的5倍。
[0039]優(yōu)選的，所述步驟(5)中，乙醇溶液III的體積百分比濃度為40% _70%，更優(yōu)選為 60%。
[0040]還優(yōu)選的，所述步驟(5)中，乙醇溶液III的體積為所述藥材總重量的6-14倍；更優(yōu)選的，乙醇溶液III的體積為所述藥材總重量的10倍。
[0041]還優(yōu)選的，所述步驟(5)中，提取2-3次，每次0.5-2小時(shí)；更優(yōu)選的，提取3次，每次1.5小時(shí)。
[0042]優(yōu)選的，所述步驟￠)中，離子交換樹(shù)脂選自強(qiáng)酸性陽(yáng)離子交換樹(shù)脂。
[0043]還優(yōu)選的，所述步驟(6)中，提取浸膏2先調(diào)pH值1-3，再上離子交換樹(shù)脂；更優(yōu)選的，提取浸膏2先調(diào)pH值2。
[0044]還優(yōu)選的，所述步驟(6)中，水的用量為柱體積的8-14倍；更優(yōu)選的，水的用量為柱體積的10倍。
[0045]還優(yōu)選的，所述步驟(6)中，所述洗脫劑選自5% -12%的氨水溶液、含氨的10% -70%的乙醇溶液、2% -10%的鹽酸溶液和l-3mol/L氯化鈉溶液中的一種；更優(yōu)選的，所述洗脫劑為含5%氨水的50%乙醇溶液。
[0046]還優(yōu)選的，所述洗脫劑的用量為柱體積的3-12倍；更優(yōu)選的，所述洗脫劑的用量為柱體積的8倍。
[0047]作為本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方式，所述制備方法的具體操作步驟如下:
[0048](I)按照所述重量份準(zhǔn)備原料藥；
[0049](2)肉桂用水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油，水的重量是肉桂重量的6-16倍，提取時(shí)間為3-7小時(shí)；蒸餾后的水溶液另器收集，肉桂藥渣備用；揮發(fā)油加1-3倍體積的無(wú)水乙醇溶解，得到揮發(fā)油乙醇液；稱取重量為揮發(fā)油體積6-20倍的β-環(huán)糊精，加入β-環(huán)糊精重量15-40倍的水，混合均勻，得到β -環(huán)糊精水溶液；在轉(zhuǎn)速150轉(zhuǎn)/分鐘下，緩慢向所述β-環(huán)糊精水溶液加入揮發(fā)油乙醇液，加入完畢后，繼續(xù)攪拌1.5小時(shí)，冷藏12小時(shí)，過(guò)濾，將濾得物在45°C下低溫烘干，得白色疏松的揮發(fā)油包合物；
[0050](3)步驟⑵得到的肉桂藥渣與黃芪、女貞子、密蒙花、烏梅合并，用體積為藥材重量6-14倍的體積百分濃度為30% -80%的乙醇溶液I加熱回流提取2-3次，每次0.5-2小時(shí)，濾過(guò)，合并各次乙醇提取液，回收乙醇至無(wú)醇味，加入步驟(2)得到蒸餾后的水溶液，繼續(xù)減壓濃縮至80°C時(shí)測(cè)定相對(duì)密度為1.10-1.20的浸膏，得提取浸膏I ;
[0051](4)步驟(3)得到的浸膏上非極性或弱極性大孔吸附樹(shù)脂，用4-8倍柱體積的水洗脫，棄去水洗液，再用3-8倍柱體積的體積百分濃度30% -100%的乙醇溶液II洗脫，收集乙醇洗脫部分，回收乙醇，減壓濃縮，干燥，得浸膏粉I ;
[0052](5)益母草、黃連加藥材重量6-14倍的30% -80%乙醇溶液III提取2-3次，每次0.5-2小時(shí)，合并各次乙醇提取液，回收乙醇，減壓濃縮至80°C時(shí)測(cè)定相對(duì)密度為
1.10-1.20的浸膏，得提取浸膏2 ；
[0053](6)步驟(5)得到的提取浸膏2調(diào)pH值1-3，上酸性陽(yáng)離子交換樹(shù)脂，用8-14倍柱體積的水洗脫，棄去水洗液，再用3-12倍柱體積所述洗脫劑進(jìn)行洗脫，收集洗脫液，濃縮，干燥，得浸膏粉2;
[0054](7)所述浸膏粉1、浸膏粉2和揮發(fā)油包合物，加入藥學(xué)上可以接受的輔料，混合均勻，直接壓片或者制粒后壓片，即得所述中藥片劑。
[0055]作為本發(fā)明的一個(gè)更優(yōu)選的實(shí)施方式，所述制備方法的具體操作步驟如下:
[0056](I)按照所述重量份準(zhǔn)備原料藥；
[0057](2)肉桂用水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油，水的重量是肉桂重量的10倍，提取時(shí)間為5小時(shí)；蒸餾后的水溶液另器收集，肉桂藥渣備用；揮發(fā)油加2倍體積的無(wú)水乙醇溶解，得到揮發(fā)油乙醇液；稱取重量為揮發(fā)油體積10倍的環(huán)糊精，加入環(huán)糊精重量25倍的水，混合均勻，得到環(huán)糊精水溶液；在轉(zhuǎn)速150轉(zhuǎn)/分鐘下，緩慢向所述β-環(huán)糊精水溶液加入揮發(fā)油乙醇液，加入完畢后，繼續(xù)攪拌1.5小時(shí)，冷藏12小時(shí)，過(guò)濾，將濾得物在45°C下低溫烘干，得白色疏松的揮發(fā)油包合物；
[0058](3)步驟⑵得到的肉桂藥渣與黃芪、女貞子、密蒙花、烏梅合并，用體積為藥材重量10倍的體積百分濃度為50%的乙醇溶液加熱回流提取2次，每次1.5小時(shí)，濾過(guò)，合并兩次乙醇提取液，回收乙醇至無(wú)醇味，加入步驟(2)得到蒸餾后的水溶液，繼續(xù)減壓濃縮至80°C時(shí)測(cè)定相對(duì)密度為1.10-1.20的浸膏，得提取浸膏I ;
[0059](4)步驟(3)得到的浸膏上選自AB-8、DlOU HP-20和HPD400中的一種的大孔吸附樹(shù)脂，用5倍柱體積的水洗脫，棄去水洗液，再用5倍柱體積的體積百分濃度70%的乙醇溶液洗脫，收集乙醇洗脫部分，回收乙醇，減壓濃縮，干燥，得浸膏粉I ;
[0060](5)益母草、黃連加藥材重量10倍的60%乙醇溶液提取3次，每次1.5小時(shí)，合并三次乙醇提取液，回收乙醇，減壓濃縮至80°C時(shí)測(cè)定相對(duì)密度為1.10-1.20的浸膏，得提取浸膏2 ；
[0061](6)步驟(5)得到的提取浸膏2調(diào)pH值2，上強(qiáng)酸性陽(yáng)離子交換樹(shù)脂，用10倍柱體積的水洗脫，棄去水洗液，再用8倍柱體積含5%氨水的50%乙醇溶液進(jìn)行洗脫，收集洗脫液，濃縮，干燥，得浸膏粉2;
[0062](7)所述浸膏粉1、浸膏粉2和揮發(fā)油包合物，加入藥學(xué)上可以接受的輔料，混合均勻，直接壓片或者制粒后壓片，即得所述中藥片劑。
[0063]本發(fā)明所述藥學(xué)上可以接受的輔料，選自稀釋劑、粘合劑、崩解劑和潤(rùn)滑劑中的一種或多種，其中
[0064]稀釋劑:例如可以選自淀粉、糊精、預(yù)膠化淀粉、乳糖、微晶纖維素、硫酸鈣、磷酸氫鈣、碳酸鈣、氧化鎂、碳酸鎂、氫氧化鋁凝膠、β -環(huán)糊精、甘露醇、山梨醇、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、羥甲基纖維素鈉中的一種或多種。
[0065]粘合劑:例如可以選自蒸餾水、乙醇、淀粉漿、羧甲基纖維素鈉、羥丙基纖維素、甲基纖維素和乙基纖維素、羥丙甲纖維素中的一種或多種。
[0066]崩解劑:例如可以選自羧甲基淀粉鈉、低取代羥丙基纖維素、交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇、十二烷基硫酸鈉中的一種或多種。
[0067]潤(rùn)滑劑:例如可以選自十二烷基硫酸鎂、聚乙二醇、微粉硅膠、硬脂酸鎂、滑石粉中的一種或多種。
[0068]本發(fā)明的另一個(gè)目的在于，提供上述中藥片劑在制備治療糖尿病視網(wǎng)膜病變的藥物中的應(yīng)用。
[0069]本發(fā)明的有益技術(shù)效果在于:(I)采用不同的溶劑對(duì)方中不同的藥味、不同的有效成分采取分類提取，盡可能將方中有效成分提取完全，從而提高療效、節(jié)約中藥資源。(2)本發(fā)明在提取和精制方面，充分考慮處方中各味藥物的活性成分，并引入大孔吸附樹(shù)脂和離子交換樹(shù)脂等分離手段對(duì)處方中有效成分進(jìn)行精制。本發(fā)明處方中黃芪、女貞子、烏梅、密蒙花主要含皂苷、黃酮類成分，采用大孔吸附樹(shù)脂法對(duì)其進(jìn)行精制。黃連和益母草中主要含生物堿類成分，采用離子交換樹(shù)脂法對(duì)其進(jìn)行精制，使得主要有效成分得到了富集。(3)精制后樣品，即保證了有效成分，又降低口服劑量，便于制成片劑、膠囊等現(xiàn)代劑型，能提高患者順應(yīng)性?，F(xiàn)有技術(shù)的水煎劑，單次服用量為175ml，每日服用350ml，即使采用常規(guī)的水提-醇沉方法精制，出膏量仍然較大(可達(dá)20g左右)，即使制成片劑或膠囊劑等固體制劑，也會(huì)因服用量過(guò)大而無(wú)法在臨床推廣。經(jīng)過(guò)本發(fā)明的組合提取和精制方法，本發(fā)明所述片劑單次僅需服用約1.6g，特別適合需要長(zhǎng)期服藥的糖尿病病人。(4)肉桂提取揮發(fā)油，并采用β_環(huán)糊精技術(shù)進(jìn)行包合，最大限度地保留了揮發(fā)油的含量，保存了其藥效物質(zhì)(有文獻(xiàn)報(bào)道，肉桂揮發(fā)油具有一定降低血糖作用，且呈現(xiàn)劑量依賴性)，從而保證了其藥效的充分發(fā)揮；而傳統(tǒng)水煎煮則幾乎沒(méi)有任何保留揮發(fā)油。(5)本發(fā)明所述片劑，便于儲(chǔ)存、攜帶和服用。(6)本發(fā)明所述片劑質(zhì)量穩(wěn)定，光線、空氣、水分對(duì)其影響較小。
[0070]藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)(試驗(yàn)例2)從改善糖尿病大鼠血液流變學(xué)、視網(wǎng)膜毛細(xì)血管形態(tài)學(xué)方面證明，本發(fā)明所述不同工藝條件下制備得到的片劑，改善糖尿病大鼠視網(wǎng)膜微血管病變的作用都強(qiáng)于現(xiàn)有技術(shù)中的水煎劑。說(shuō)明本發(fā)明所述片劑與原制劑(水煎劑)比較，具有更好的療效。

【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0071]以下，結(jié)合附圖來(lái)詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明的實(shí)施方案，其中:
[0072]圖1的柱狀圖顯示的是試驗(yàn)例I中，本發(fā)明所述片劑與現(xiàn)有技術(shù)的水煎劑在主要藥效成分提取率方面的比較。

【具體實(shí)施方式】
[0073]以下參照具體的實(shí)施例來(lái)說(shuō)明本發(fā)明。本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠理解，這些實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明，其不以任何方式限制本發(fā)明的范圍。
[0074]下述實(shí)施例中的實(shí)驗(yàn)方法，如無(wú)特殊說(shuō)明，均為常規(guī)方法。下述實(shí)施例中所用的藥材原料、試劑材料等，如無(wú)特殊說(shuō)明，均為市售購(gòu)買(mǎi)產(chǎn)品。
[0075]實(shí)施例1 一種中藥片劑
[0076]原料藥處方:
[0077]黃芪6kg、女貞子3kg、益母草3kg、烏梅1.8kg、黃連1.2kg、肉桂0.2kg、密蒙花1.2kg
[0078]所述制備方法的具體步驟如下:
[0079](I)按照處方準(zhǔn)備各味藥材。
[0080](2)取肉桂，加藥材重量10倍的水，用水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油，蒸餾后的水溶液另器收集，藥渣備用；揮發(fā)油加2倍體積的無(wú)水乙醇溶解；取重量10倍于揮發(fā)油體積的β-環(huán)糊精，加環(huán)糊精重量25倍的水制成的β-環(huán)糊精水溶液；在轉(zhuǎn)速150轉(zhuǎn)/分鐘下，緩慢向所述β -環(huán)糊精水溶液加入揮發(fā)油乙醇液，加入完畢后，繼續(xù)攪拌1.5小時(shí)，冷藏12小時(shí)，過(guò)濾，將濾得物在45°C下低溫烘干，得白色疏松的揮發(fā)油包合物。
[0081](3)步驟⑵得到的肉桂藥渣與黃芪、女貞子、密蒙花、烏梅合并，加體積為藥材重量10倍的體積百分濃度為60%的乙醇溶液回流提取2次，每次1.5小時(shí)，濾過(guò)，合并兩次乙醇提取液，回收乙醇至無(wú)醇味，加入步驟(2)得到蒸餾后的水溶液，繼續(xù)減壓濃縮至80°C時(shí)測(cè)定相對(duì)密度為1.10-1.20的浸膏，得提取浸膏I。
[0082](4)步驟(3)得到的提取浸膏I上AB-8大孔樹(shù)脂，用5倍柱體積的水洗脫，棄去水洗液，再用5倍柱體積的體積百分濃度為70%的乙醇溶液洗脫，收集乙醇洗脫部分，回收乙醇，減壓干燥，得浸膏粉I。
[0083](5)益母草、黃連加藥材重量10倍的60%乙醇溶液提取3次，每次1.5小時(shí)，濾過(guò)，合并三次乙醇提取液，回收乙醇，減壓濃縮至80°C時(shí)測(cè)定相對(duì)密度為1.10-1.20的浸膏，得提取浸膏2 ；
[0084](6)提取浸膏2調(diào)節(jié)pH值2，上(732) 001 X 7陽(yáng)離子交換樹(shù)脂，用10倍柱體積的水洗脫，棄去水洗液，再用8倍柱體積含5%氨水的50%乙醇溶液進(jìn)行洗脫，收集洗脫液，回收乙醇，減壓濃縮，干燥，得浸膏粉2 ;
[0085](7)取浸膏粉I和浸膏粉2，加入糊精210g和羧甲基淀粉鈉50g，混合均勻，以水為粘合劑，采用噴霧制粒的方法，制得顆粒，整粒，加入步驟(2)得到的揮發(fā)油包合物和微粉硅膠4g，混合均勻，壓片，得到片劑1kg，片重:0.42g/片。
[0086]用量用法:口服，一次4片，一日3次；飯后服用或遵醫(yī)囑。
[0087]實(shí)施例2 一種中藥片劑
[0088]原料藥處方:
[0089]黃芪6kg、女貞子3kg、益母草3kg、烏梅1.8kg、黃連1.2kg、肉桂0.2kg、密蒙花1.2kg
[0090]所述制備方法的具體步驟如下:
[0091](I)按照處方準(zhǔn)備各味藥材。
[0092](2)取肉桂，加藥材重量8倍的水，用水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油，蒸餾后的水溶液另器收集，藥渣備用；揮發(fā)油加I倍體積無(wú)水乙醇溶解，取重量6倍于揮發(fā)油體積的β-環(huán)糊精，加環(huán)糊精重量15倍的水制成的環(huán)糊精水溶液；在轉(zhuǎn)速150轉(zhuǎn)/分鐘下，緩慢向所述β -環(huán)糊精水溶液加入揮發(fā)油乙醇液，加入完畢后，繼續(xù)攪拌1.5小時(shí)，冷藏12小時(shí)，過(guò)濾，將濾得物在45°C下低溫烘干，得白色疏松的揮發(fā)油包合物。
[0093](3)步驟⑵得到的肉桂藥渣與黃芪、女貞子、密蒙花、烏梅合并，加體積為藥材重量6倍的體積百分濃度為30%的乙醇溶液回流提取2次，每次0.5小時(shí)，濾過(guò)，合并兩次乙醇提取液，回收乙醇至無(wú)醇味，加入步驟(2)得到蒸餾后的水溶液，繼續(xù)減壓濃縮至80°C時(shí)測(cè)定相對(duì)密度為1.10-1.20的浸膏，得提取浸膏I。
[0094](4)步驟(3)得到的提取浸膏I上DlOl大孔樹(shù)脂，用4倍柱體積的水洗脫，棄去水洗液，再用8倍柱體積的體積百分濃度為30%的乙醇溶液洗脫，收集乙醇洗脫部分，回收乙醇，減壓干燥，得浸膏粉I。
[0095](5)益母草、黃連加藥材重量6倍的30%乙醇溶液提取2次，每次0.5小時(shí)，濾過(guò)，合并兩次乙醇提取液，回收乙醇，減壓濃縮至80°C時(shí)測(cè)定相對(duì)密度為1.10-1.20的浸膏，得提取浸膏2 ；
[0096](6)提取浸膏2調(diào)節(jié)pH值1，上(732) 001 X 7陽(yáng)離子交換樹(shù)脂，用8倍柱體積的水洗脫，棄去水洗液，再用12倍柱體積10%氨水溶液進(jìn)行洗脫，收集洗脫液，回收乙醇，減壓濃縮，干燥，得浸骨粉2 ；
[0097](7)取浸膏粉I和浸膏粉2，加入淀粉130g、乳糖130g、硫酸鈣30g、磷酸氫鈣30g和步驟(2)得到的揮發(fā)油包合物，混合均勻，以80%乙醇為粘合劑，采用濕法制粒的方法，制得顆粒，干燥，整粒，加入硬脂酸鎂3g，混合均勻，壓片，得到片劑1kg，片重:0.42g/片。
[0098]用量用法:口服，一次4片，一日3次；飯后服用或遵醫(yī)囑。
[0099]實(shí)施例3 一種中藥片劑
[0100]原料藥處方:
[0101]黃芪6kg、女貞子3kg、益母草3kg、烏梅1.8kg、黃連1.2kg、肉桂0.2kg、密蒙花1.2kg
[0102]所述制備方法的具體步驟如下:
[0103](I)按照處方準(zhǔn)備各味藥材。
[0104](2)取肉桂，加藥材重量12倍的水，用水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油，蒸餾后的水溶液另器收集，藥渣備用；揮發(fā)油加3倍體積無(wú)水乙醇溶解，取重量20倍于揮發(fā)油體積的β-環(huán)糊精，加環(huán)糊精重量40倍的水制成的β-環(huán)糊精水溶液；在轉(zhuǎn)速150轉(zhuǎn)/分鐘下，緩慢向所述β -環(huán)糊精水溶液加入揮發(fā)油乙醇液，加入完畢后，繼續(xù)攪拌1.5小時(shí)，冷藏12小時(shí)，過(guò)濾，將濾得物在45°C下低溫烘干，得白色疏松的揮發(fā)油包合物。
[0105](3)步驟⑵得到的肉桂藥渣與黃芪、女貞子、密蒙花、烏梅合并，加體積為藥材重量14倍的體積百分濃度為80%的乙醇溶液回流提取3次，每次2小時(shí)，濾過(guò)，合并三次乙醇提取液，回收乙醇至無(wú)醇味，加入步驟(2)得到蒸餾后的水溶液，繼續(xù)減壓濃縮至80°C時(shí)測(cè)定相對(duì)密度為1.10-1.20的浸膏，得提取浸膏I。
[0106](4)步驟(3)得到的提取浸膏I上HP-20大孔樹(shù)脂，用8倍柱體積的水洗脫，棄去水洗液，再用3倍柱體積的體積百分濃度為100%的乙醇溶液洗脫，收集乙醇洗脫部分，回收乙醇，減壓干燥，得浸膏粉I。
[0107](5)益母草、黃連加藥材重量14倍的80%乙醇溶液提取3次，每次2小時(shí)，濾過(guò)，合并三次乙醇提取液，回收乙醇，減壓濃縮至80°C時(shí)測(cè)定相對(duì)密度為1.10-1.20的浸膏，得提取浸膏2 ；
[0108](6)提取浸膏2調(diào)節(jié)pH值3，上(732) 001 X 7陽(yáng)離子交換樹(shù)脂，用14倍柱體積的水洗脫，棄去水洗液，再用3倍柱體積的3mol/L氯化鈉溶液進(jìn)行洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮，干燥，得浸膏粉2;
[0109](7)取浸膏粉I和浸膏粉2，加入微晶纖維素200g、甘露醇50g、山梨醇20g、低取代羥丙基纖維素20g、硬脂酸鎂1g和步驟(2)得到的β-環(huán)糊精包合物，混合均勻，直接壓片，得到片劑lkg，片重:0.42g/片。
[0110]用量用法:口服，一次4片，一日3次；飯后服用或遵醫(yī)囑。
[0111]實(shí)施例4 一種中藥片劑
[0112]原料藥處方“
[0113]黃芪6kg、女貞子3kg、益母草3kg、烏梅1.8kg、黃連1.2kg、肉桂0.2kg、密蒙花1.2kg
[0114]所述制備方法的具體步驟為:
[0115](I)按照處方準(zhǔn)備各味藥材。
[0116](2)取肉桂，加藥材重量8倍的水，用水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油，蒸餾后的水溶液另器收集，藥渣備用；揮發(fā)油加2倍體積的無(wú)水乙醇溶解；取重量20倍于揮發(fā)油體積的β -環(huán)糊精，加β -環(huán)糊精重量30倍的水制成的β -環(huán)糊精水溶液；在轉(zhuǎn)速150轉(zhuǎn)/分鐘下，緩慢向所述β -環(huán)糊精水溶液加入揮發(fā)油乙醇液，加入完畢后，繼續(xù)攪拌1.5小時(shí)，冷藏12小時(shí)，過(guò)濾，將濾得物在45°C下低溫烘干，得白色疏松的揮發(fā)油包合物。
[0117](3)步驟⑵得到的肉桂藥渣與黃芪、女貞子、密蒙花、烏梅合并，加體積為藥材重量1倍的體積百分濃度為40 %的乙醇溶回流提取2次，每次1.5小時(shí)，濾過(guò)，合并兩次乙醇提取液，回收乙醇至無(wú)醇味，加入步驟(2)得到蒸餾后的水溶液，繼續(xù)減壓濃縮至80°C時(shí)測(cè)定相對(duì)密度為1.10-1.20的浸膏，得提取浸膏I。
[0118](4)步驟(3)得到的提取浸膏I上AB-8大孔樹(shù)脂，用5倍柱體積的水洗脫，棄去水洗液，再用5倍柱體積的體積百分濃度為50%的乙醇溶液洗脫，收集乙醇洗脫部分，回收乙醇，減壓干燥，得浸膏粉I。
[0119](5)益母草、黃連加藥材重量10倍的40%乙醇溶液提取3次，每次1.5小時(shí)，濾過(guò)，合并三次乙醇提取液，回收乙醇，減壓濃縮至80°C時(shí)測(cè)定相對(duì)密度為1.10-1.20的浸膏，得提取浸膏2 ；
[0120](6)提取浸膏2調(diào)節(jié)pH值2，上(732) 001 X 7陽(yáng)離子交換樹(shù)脂，用10倍柱體積的水洗脫，棄去水洗液，再用10倍柱體積的8%鹽酸溶液進(jìn)行洗脫，收集洗脫液，回收溶劑，減壓濃縮，干燥，得浸膏粉2;
[0121](7)取浸膏粉I和浸膏粉2，加入糊精220g、氧化鎂20g、碳酸鎂20g、聚乙二醇20g和步驟(2)得到的β環(huán)糊精包合物，混合均勻，采用濕法制粒的方法，以0.3%羥丙基甲基纖維素90%乙醇溶液為粘合劑，制得顆粒，干燥，整粒，加入十二烷基硫酸鎂6g，混合均勻，壓片，得到片劑1kg，片重:0.42g/片。
[0122]用量用法:口服，一次4片，一日3次；飯后服用或遵醫(yī)囑。
[0123]對(duì)比例I 一種中藥煎劑
[0124]原料藥處方:
[0125]黃芪6kg、女貞子3kg、益母草3kg、烏梅1.8kg、黃連1.2kg、肉桂0.2kg、密蒙花1.2kg
[0126]所述中藥煎劑的制備方法，具體步驟為:
[0127](I)按照處方準(zhǔn)備各味藥材。
[0128](2)取各味藥材，用清潔冷水浸泡30分鐘，放入煎藥機(jī)中，加入71.43升浸泡水，煎煮40分鐘，機(jī)械擠壓出藥汁，減壓濃縮至18.74升，即得所述中藥煎劑。
[0129](3)噴霧干燥，得到干浸膏4.16kg。
[0130]試驗(yàn)例I本發(fā)明所述中藥片劑與現(xiàn)有技術(shù)的煎劑的比較
[0131]測(cè)試樣品:
[0132]I)本發(fā)明實(shí)施例1-4制備的中藥片劑
[0133]2)對(duì)比例制備的煎劑的干浸膏
[0134]試驗(yàn)方法:
[0135]I)黃芪甲苷的含量測(cè)定
[0136]色譜條件:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-水(35:65)為流動(dòng)相；蒸發(fā)光散射檢測(cè)器檢測(cè)。
[0137]對(duì)照品溶液的制備:取黃芪甲苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每Iml含
0.3mg的溶液，即得。
[0138]供試品溶液的制備:取測(cè)試樣品3g，精密稱定，精密加甲醇100ml，稱定重量，加熱回流I小時(shí)，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足重量，搖勻，過(guò)濾，棄去初濾液，精密吸取續(xù)濾液50ml，蒸干，加水25ml使溶解，用水飽和正丁醇振搖提取4次，每次25ml，合并正丁醇，用氨試液充分洗滌3次，每次40ml，棄去氨液，正丁醇液蒸干，殘?jiān)蛹状既芙?，轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。
[0139]藥材供試品溶液的制備:按2010年版《中國(guó)藥典》283頁(yè)黃芪藥材【含量測(cè)定】項(xiàng)下“供試品溶液的制備”方法制備。
[0140]測(cè)定法:分別精密吸取對(duì)照品溶液10μ 1、30μ 1，供試品溶液20 μ 1，注入液相色譜儀，測(cè)定，用外標(biāo)兩點(diǎn)法對(duì)數(shù)方程計(jì)算，即得。
[0141]提取率=黃芪甲苷總量/投入藥材中含黃芪甲苷總量X 100%
[0142]2)蒙花苷的含量測(cè)定
[0143]色譜條件:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以甲醇-水-醋酸(45:54.5:0.5)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為326nm。
[0144]對(duì)照品溶液的制備:取蒙花苷對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每Iml含0.3mg的溶液，即得。
[0145]供試品溶液的制備:取測(cè)試樣品lg，精密稱定，精密加50%乙醇50ml，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補(bǔ)足重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。
[0146]藥材供試品溶液的制備:按2010年版《中國(guó)藥典》308頁(yè)密蒙花藥材【含量測(cè)定】項(xiàng)下“供試品溶液的制備”方法制備。測(cè)定法:分別精密吸取對(duì)照品溶液和供試品溶液各10μ 1，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
[0147]提取率=蒙花苷總量/投入藥材中含蒙花苷總量X 100%
[0148]3)小檗堿的含量測(cè)定
[0149]色譜條件:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈-0.05mol/L磷酸二氫鉀(50:50)(每10ml加入十二烷基硫酸鈉0.4g，再以磷酸調(diào)節(jié)pH值為4.0)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為345nm
[0150]對(duì)照品溶液的制備:取鹽酸小檗堿對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每Iml含
0.1mg的溶液，即得。
[0151]供試品溶液的制備:取測(cè)試樣品0.3g，精密稱定，精密加甲醇50ml，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。
[0152]藥材供試品溶液的制備:按2010年版《中國(guó)藥典》285頁(yè)黃連藥材【含量測(cè)定】項(xiàng)下“供試品溶液的制備”方法制備。
[0153]測(cè)定法:分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μ 1，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
[0154]提取率=小檗堿總量/投入藥材中含小檗堿總量X 100%
[0155]4)益母草堿的含量測(cè)定
[0156]色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn)以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以乙腈-0.4%辛烷磺酸鈉的0.1 %磷酸溶液(24:76)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長(zhǎng)為277nm。
[0157]對(duì)照品溶液的制備:取益母草堿對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每Iml含
0.03mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。
[0158]供試品溶液的制備:取測(cè)試樣品2g，精密稱定，精密加75%甲醇25ml，稱定重量，超聲處理30分鐘，放冷，再稱定重量，用75 %甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。
[0159]藥材供試品溶液的制備:按2010年版《中國(guó)藥典》272頁(yè)益母草藥材【含量測(cè)定】項(xiàng)下“供試品溶液的制備”方法制備。
[0160]測(cè)定法:分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μ 1，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
[0161]提取率=益母草堿總量/投入藥材中含益母草堿總量X 100%
[0162]5)桂皮醛的含量測(cè)定
[0163]色譜條件:以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-水(35:75)為流動(dòng)相；檢測(cè)波長(zhǎng)為290nm。
[0164]對(duì)照品溶液的制備:取桂皮醛對(duì)照品適量，精密稱定，加甲醇制成每Iml含10μ g的溶液，即得。
[0165]供試品溶液的制備:取測(cè)試樣品0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25ml，稱定重量，超聲處理(功率350W，頻率35kHz) 10分鐘，放置過(guò)夜，同法超聲處理一次，再稱定重量，用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，即得。
[0166]藥材供試品溶液的制備:按2010年版《中國(guó)藥典》127頁(yè)肉桂藥材【含量測(cè)定】項(xiàng)下“供試品溶液的制備”方法制備。
[0167]測(cè)定法:分別精密吸取對(duì)照品溶液與供試品溶液各10μ 1，注入液相色譜儀，測(cè)定，即得。
[0168]提取率=桂皮醛總量/投入藥材中含桂皮醛總量X 100%
[0169]試驗(yàn)結(jié)果:見(jiàn)表I和圖1。
[0170]I)表I顯示，本發(fā)明所述制備方法，不同工藝參數(shù)下下制備的所述中藥片劑，檢測(cè)的各個(gè)成分的提取率均高于相同原料藥處方的對(duì)比例的中藥煎劑的干浸膏；尤其是桂皮醒，在對(duì)比例的水煎劑中未測(cè)出。
[0171]2)實(shí)施例1的中藥片劑，其黃芪甲苷、蒙花苷和小檗堿的量及提取率高于其它實(shí)施例，其次是實(shí)施例4的中藥片劑。
[0172]試驗(yàn)結(jié)論:
[0173]I)本發(fā)明實(shí)施例1-4的中藥片劑，藥效成分的含量及提取率均明顯高于對(duì)比例，使本發(fā)明所述的中藥片劑在臨床應(yīng)用時(shí)具有更加可靠的藥效學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)。
[0174]2)黃芪甲苷、蒙花苷和小檗堿是治療糖尿病及糖尿病視網(wǎng)膜病變的有效成分。實(shí)施例I和4的中藥片劑中，上述三種成分的含量均高于實(shí)施例2和3。因此，實(shí)施例1和4的中藥片劑本發(fā)明優(yōu)選的，更優(yōu)選的是實(shí)施例1所述的片劑。
[0175]表I對(duì)比例與實(shí)施例藥效成分對(duì)比表
[0176]
藥效成分對(duì)比對(duì)比例實(shí)施例1 實(shí)施例2 實(shí)施例3 實(shí)施例4
投藥量黃裏啤、女貞子3%、益母草3%、烏悔1,8%、黃連12%、肉桂02唉、密毅& 121?
黃芪曱苷 3.5225.6424.5284.9255.270
藥效蒙花苷4.6536.5335.5155.8806.292
成分小檗堿17.58332.65526.00130,24830.857
量(g)益母草堿1.7961.8501.8261.8401.842
桂皮醛O1.6071.5581.5851.604
藥效黃芪甲苷 49.1278.6963.1568.6973.50
成分蒙花苷58.9382.7469.8474.4779.68
量提小檗堿25.7147.7538.0244.2345.12
取率益母草堿78.1580.5179.4580.0880.15
(%)桂皮醛O5UW48.6949.5250.14
[0177]試驗(yàn)例2本發(fā)明所述中藥片劑對(duì)STZ誘導(dǎo)的糖尿病大鼠視網(wǎng)膜病變的影響
[0178]糖尿病視網(wǎng)膜病變?yōu)樘悄虿￠L(zhǎng)期發(fā)展導(dǎo)致的眼底微血管病變，其主要病理改變是因長(zhǎng)期高血糖直接或間接影響其血液流變性，最終造成視網(wǎng)膜血管結(jié)構(gòu)的損傷和功能改變。STZ誘導(dǎo)的糖尿病大鼠模型是目前國(guó)際上比較公認(rèn)的糖尿病模型，經(jīng)長(zhǎng)期造模后逐步形成糖尿病視網(wǎng)膜病變。本試驗(yàn)采用一次腹腔注STZ的方法制備糖尿病大鼠模型，通過(guò)藥物干預(yù)比較本發(fā)明所述制備的片劑與現(xiàn)有技術(shù)所制備的煎劑對(duì)糖尿病大鼠視網(wǎng)膜微血管病變的影響。
[0179]1、實(shí)驗(yàn)方法
[0180]1.1動(dòng)物分組
[0181]取SPF級(jí)SD大鼠，適應(yīng)性飼養(yǎng)I周后，隨機(jī)分成2組:空白組(15只)，糖尿病組(100只)。所有動(dòng)物禁食16h后，空白組大鼠腹腔注射(1.p.) 55mg/kg的0.01mol/L, pH4.4檸檬酸緩沖液；糖尿病組大鼠腹腔注射1% STZ55mg/kg(臨時(shí)溶于0.01mol/L, pH4.4的檸檬酸緩沖液中)。造模I周后尾靜脈取血測(cè)空腹血糖，以血糖彡16.7mmol/L為模型成功標(biāo)準(zhǔn)。血糖未達(dá)標(biāo)的大鼠再補(bǔ)加STZ40mg/kg，7天后再次檢測(cè)其空腹血糖，篩選兩次造模成功的大鼠(兩次成功率為90%)。將符合糖尿病標(biāo)準(zhǔn)的大鼠按血糖、體重水平再隨機(jī)分為6組，模型組、實(shí)施例1組、實(shí)施例2組、實(shí)施例3組、實(shí)施例4組、對(duì)比例組,每組15只。
[0182]該處方人用劑量為:人每天用生藥量82g/60kg，即1.4g/kg。根據(jù)折算系數(shù)表，查出大鼠體重折算系數(shù)為6.25，折算大鼠的等效劑量為6.25X1.4g/kg = 8.75g/kg，即8.75g生藥量/kg。除模型組外，各組的給藥劑量折算成生藥都為8.75g生藥量/kg。
[0183]1.2藥物干預(yù)
[0184]取實(shí)施例1-4得到的中藥片劑，分別加去離子水制成0.107g/ml的溶液，分別灌胃給實(shí)施例1組-實(shí)施例4組的大鼠，給藥劑量:5ml/kg。對(duì)比例制備得到的藥物組合物，力口去離子水制成0.222g/ml的溶液，灌胃給對(duì)比例的大鼠，給藥劑量:10ml/kg。模型組和空白對(duì)照組給予相應(yīng)體積的去離子水。所有各組每天給藥I次，共給藥3個(gè)月。給藥期間給予充足的飲水、食物，每日更換墊料。
[0185]1.3指標(biāo)檢測(cè)
[0186]1.3.1血液流變學(xué)檢測(cè)
[0187]實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí),大鼠腹主動(dòng)脈取血,肝素抗凝，3000r/min,離心15min,留取血衆(zhòng)。用血液粘度儀測(cè)定不同切變率下的全血粘度和血漿粘度；用紅細(xì)胞變形聚集儀測(cè)定紅細(xì)胞聚集指數(shù)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。
[0188]1.3.2視網(wǎng)膜毛細(xì)血管形態(tài)學(xué)變化
[0189]采用大鼠視網(wǎng)膜鋪片法觀察其視網(wǎng)膜毛細(xì)血管形態(tài)學(xué)變化。大鼠麻醉后，用生理鹽水經(jīng)心臟灌注沖干凈血液，當(dāng)眼球由紅潤(rùn)變?yōu)樯n白后，摘取帶有視神經(jīng)的眼球，固定于40C 4% PFA48-72h。從4% PFA中取出眼球，流水輕輕沖洗1min,放入盛有PBS的培養(yǎng)皿中；從睫狀體后部沿鍋齒緣環(huán)形剪開(kāi)鞏膜，去除角膜及晶狀體，將后眼杯以視乳頭為中心桔瓣樣切成3塊，小心分離出視網(wǎng)膜；PBS(0.01mol/L ρΗ7.4)漂洗lOmin，置于0.15mol/LpH7.4甘氨酸緩沖液中浸泡過(guò)夜；3%胰蛋白酶(現(xiàn)用現(xiàn)配)37°C空氣浴振蕩器消化視網(wǎng)膜2-4h，隨時(shí)觀察，待內(nèi)界膜邊緣浮起，與視網(wǎng)膜剩余部分即將分離時(shí)，終止消化；轉(zhuǎn)移視網(wǎng)膜到0.1MPBS中，輕輕吸吹除去內(nèi)界膜，再反復(fù)輕吹、吸打，僅剩下一層透明的血管網(wǎng)，漂取并平鋪于防脫載坡片上，置室溫自然干燥后，存放于4°C切片盒中以備PAS染色，中性樹(shù)膠封固，備用。
[0190]2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0191]2.1各處理組對(duì)糖尿病大鼠血液流變學(xué)的影響
[0192]2.1.1與空白組比較，模型組大鼠的紅細(xì)胞聚集指數(shù)、全血粘度(高切、中切、低切)、血漿粘度水平都顯著增加(p〈0.01)，說(shuō)明造模成功。
[0193]2.1.2與模型組比較，實(shí)施例1、2、3、4組和對(duì)比例組的紅細(xì)胞聚集指數(shù)、全血粘度(中切、低切)、血漿粘度水平都顯著或極顯著降低(p〈0.05或P〈0.01)，其中實(shí)施例1、2、3、4組的各項(xiàng)檢測(cè)指標(biāo)的下降更顯著，下降程度均大于對(duì)比例組。實(shí)施例1組與對(duì)比例組比較，具有極顯著差異(P〈0.01);實(shí)施例2、3、4組與對(duì)比例組比較，具有顯著差異(P〈0.05)。各組作用大小的排序?yàn)?實(shí)施例1組>實(shí)施例4組>實(shí)施例3組>實(shí)施例2組>對(duì)比例組。
[0194]表2對(duì)糖尿病大鼠血液流變學(xué)的影響
[0195]

【權(quán)利要求】
1.一種中藥片劑，所述中藥片劑的原料藥組成為: 黃芪30-60重量份、女貞子9-15重量份、益母草9-30重量份、烏梅3_10重量份、黃連2-9重量份、肉桂1-5重量份、密蒙花3-9重量份； 優(yōu)選的，所述原料藥的單位處方組成為: 黃芪30g、女貞子15g、益母草15g、烏梅9g、黃連6g、肉桂lg、密蒙花6g ； 所述中藥片劑通過(guò)如下方法制備: (1)按照所述重量份準(zhǔn)備各原料藥； (2)肉桂提取揮發(fā)油，肉桂藥渣備用，揮發(fā)油用β_環(huán)糊精包合，得揮發(fā)油包合物； (3)步驟⑵得到的肉桂藥渣與黃芪、女貞子、密蒙花、烏梅合并，用體積百分比濃度為30% -80%的乙醇溶液I提取，醇提取液回收乙醇，濃縮至80°C時(shí)測(cè)定相對(duì)密度為1.10-1.20的浸膏，得提取浸膏I ; (4)步驟(3)得到的提取浸膏I上大孔吸附樹(shù)脂，用水洗脫，棄去水洗液，再用體積百分比濃度為30% -100%的乙醇溶液II洗脫，收集乙醇洗脫部分，回收乙醇，濃縮，干燥，得浸膏粉I ; (5)益母草、黃連加體積百分比濃度為30%-80%的乙醇溶液III提取，醇提取液回收乙醇，濃縮至80°C時(shí)測(cè)定相對(duì)密度為1.10-1.20的浸膏，得提取浸膏2 ； (6)步驟(5)得到的提取浸膏2上酸性陽(yáng)離子交換樹(shù)脂，用水洗脫，棄去水洗液，再用洗脫劑洗脫至生物堿反應(yīng)呈陰性為止，收集洗脫液，濃縮，干燥，得浸膏粉2 ; (7)所述浸膏粉1、浸膏粉2和揮發(fā)油包合物，加入藥學(xué)上可以接受的輔料，混合均勻，直接壓片或者制粒后壓片，即得所述中藥片劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥片劑，其特征在于，所述步驟(2)中，肉桂用水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油，水的重量為藥材重量的6-16倍，提取時(shí)間為3-7小時(shí)；優(yōu)選的，水的重量為藥材重量的8倍，提取時(shí)間5小時(shí)； 優(yōu)選的，所述步驟(2)中，揮發(fā)油先用無(wú)水乙醇溶解，再與環(huán)糊精水溶液進(jìn)行包合； 更優(yōu)選的，所述步驟(2)中，所述無(wú)水乙醇的體積為揮發(fā)油體積的1-3倍，進(jìn)一步優(yōu)選為揮發(fā)油體積的2倍； 更優(yōu)選的，所述步驟(2)中，環(huán)糊精的重量是揮發(fā)油體積的6-20倍，進(jìn)一步優(yōu)選為揮發(fā)油體積的10倍； 更優(yōu)選的，所述步驟(2)中，所述環(huán)糊精水溶液，水重量為環(huán)糊精重量的15-40倍；進(jìn)一步優(yōu)選的，水的重量為β_環(huán)糊精重量的25倍； 所述步驟(2)優(yōu)選的技術(shù)方案為: 肉桂用水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油，水的重量是肉桂重量的6-16倍，提取時(shí)間為3-7小時(shí)；蒸餾后的水溶液另器收集，肉桂藥渣備用；揮發(fā)油加1-3倍體積的無(wú)水乙醇溶解，得到揮發(fā)油乙醇液；稱取重量為揮發(fā)油體積6-20倍的β-環(huán)糊精，加入β-環(huán)糊精重量15-40倍的水，混合均勻，得到環(huán)糊精水溶液；在轉(zhuǎn)速150轉(zhuǎn)/分鐘下，緩慢向所述β-環(huán)糊精水溶液加入揮發(fā)油乙醇液，加入完畢后，繼續(xù)攪拌1.5小時(shí)，冷藏12小時(shí)，過(guò)濾，將濾得物在45°C下低溫烘干，得白色疏松的揮發(fā)油包合物； 所述步驟(2)更優(yōu)選的技術(shù)方案為: 肉桂用水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油，水的重量是肉桂重量的6-16倍，提取時(shí)間為3-7小時(shí)；蒸餾后的水溶液另器收集，肉桂藥渣備用；揮發(fā)油加2倍體積的無(wú)水乙醇溶解，得到揮發(fā)油乙醇液；稱取重量為揮發(fā)油體積10倍的β-環(huán)糊精，加入環(huán)糊精重量25倍的水，混合均勻，得到環(huán)糊精水溶液；在轉(zhuǎn)速150轉(zhuǎn)/分鐘下，緩慢向所述β-環(huán)糊精水溶液加入揮發(fā)油乙醇液，加入完畢后，繼續(xù)攪拌1.5小時(shí)，冷藏12小時(shí)，過(guò)濾，將濾得物在45°C下低溫烘干，得白色疏松的揮發(fā)油包合物。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的中藥片劑，其特征在于，所述步驟(3)中，乙醇溶液I的體積百分比濃度為40% -70%，更優(yōu)選為50% ； 優(yōu)選的，所述步驟(3)中，乙醇溶液I的體積為所述藥材總重量的6-14倍；更優(yōu)選的，乙醇溶液I的體積為所述藥材總重量的10倍； 優(yōu)選的，所述步驟(3)中，提取2-3次，每次0.5-2小時(shí)；更優(yōu)選的，提取2次，每次1.5小時(shí)。
4.根據(jù)權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)所述的中藥片劑，其特征在于，所述步驟(4)中，所述大孔吸附樹(shù)脂選自非極性或弱極性中的一種，更優(yōu)選自AB-8、D101、HP-20和HPD400中的一種； 優(yōu)選的，所述步驟(4)中，水的用量為柱體積的4-8倍；更優(yōu)選的，水的用量為柱體積的5倍； 優(yōu)選的，所述步驟(4)中，所述乙醇溶液II的體積百分比濃度為40% -80%;更優(yōu)選為70% ； 優(yōu)選的，所述步驟(4)中，所述乙醇溶液II的用量為柱體積的3-8倍；更優(yōu)選為柱體積的5倍。
5.根據(jù)權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)所述的中藥片劑，其特征在于，所述步驟(5)中，乙醇溶液III的體積百分比濃度為40% -70%，更優(yōu)選為60% ； 還優(yōu)選的，所述步驟(5)中，乙醇溶液III的體積為所述藥材總重量的6-14倍；更優(yōu)選的，乙醇溶液III的體積為所述藥材總重量的10倍； 還優(yōu)選的，所述步驟(5)中，提取2-3次，每次0.5-2小時(shí)；更優(yōu)選的，提取3次，每次1.5小時(shí)。
6.根據(jù)權(quán)利要求1至5中任一項(xiàng)所述的中藥片劑，其特征在于，所述步驟(6)中，離子交換樹(shù)脂選自強(qiáng)酸性陽(yáng)離子交換樹(shù)脂； 還優(yōu)選的，所述步驟(6)中，提取浸膏2先調(diào)pH值1-3，再上離子交換樹(shù)脂；更優(yōu)選的，提取浸膏2先調(diào)pH值2 ; 還優(yōu)選的，所述步驟￠)中，水的用量為柱體積的8-14倍；更優(yōu)選的，水的用量為柱體積的10倍； 還優(yōu)選的，所述步驟(6)中，所述洗脫劑選自5% -12%的氨水溶液、含氨的10% -70%的乙醇溶液、2% -10%的鹽酸溶液和l-3mol/L氯化鈉溶液中的一種； 更優(yōu)選的，所述洗脫劑為含5%氨水的50%乙醇溶液； 還優(yōu)選的，所述洗脫劑的用量為柱體積的3-12倍；更優(yōu)選的，所述洗脫劑的用量為柱體積的8倍。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥片劑，其特征在于，所述制備方法的具體操作步驟如下: (1)按照所述重量份準(zhǔn)備原料藥； (2)肉桂用水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油，水的重量是肉桂重量的6-16倍，提取時(shí)間為3-7小時(shí)；蒸餾后的水溶液另器收集，肉桂藥渣備用；揮發(fā)油加1-3倍體積的無(wú)水乙醇溶解，得到揮發(fā)油乙醇液；稱取重量為揮發(fā)油體積6-20倍的β-環(huán)糊精，加入β-環(huán)糊精重量15-40倍的水，混合均勻，得到環(huán)糊精水溶液；在轉(zhuǎn)速150轉(zhuǎn)/分鐘下，緩慢向所述β-環(huán)糊精水溶液加入揮發(fā)油乙醇液，加入完畢后，繼續(xù)攪拌1.5小時(shí)，冷藏12小時(shí)，過(guò)濾，將濾得物在45°C下低溫烘干，得白色疏松的揮發(fā)油包合物； (3)步驟(2)得到的肉桂藥渣與黃芪、女貞子、密蒙花、烏梅合并，用體積為藥材重量6-14倍的體積百分濃度為30% -80%的乙醇溶液I加熱回流提取2-3次，每次0.5-2小時(shí)，濾過(guò)，合并各次乙醇提取液，回收乙醇至無(wú)醇味，加入步驟(2)得到蒸餾后的水溶液，繼續(xù)減壓濃縮至80°C時(shí)測(cè)定相對(duì)密度為1.10-1.20的浸膏，得提取浸膏I ; (4)步驟(3)得到的浸膏上大孔吸附樹(shù)脂，用4-8倍柱體積的水洗脫，棄去水洗液，再用3-8倍柱體積的體積百分濃度30% -100%的乙醇溶液II洗脫，收集乙醇洗脫部分，回收乙醇，減壓濃縮，干燥，得浸膏粉I ; (5)益母草、黃連加藥材重量6-14倍的30%-80%乙醇溶液III提取2_3次，每次0.5-2小時(shí)，合并各次乙醇提取液，回收乙醇，減壓濃縮至80 V時(shí)測(cè)定相對(duì)密度為1.10-1.20的浸膏，得提取浸膏2 ； (6)步驟(5)得到的提取浸膏2調(diào)pH值1-3，上離子交換樹(shù)脂，用8-14倍柱體積的水洗脫，棄去水洗液，再用3-12倍柱體積所述洗脫劑進(jìn)行洗脫，收集洗脫液，濃縮，干燥，得浸膏粉2 ； (7)所述浸膏粉1、浸膏粉2和揮發(fā)油包合物，加入藥學(xué)上可以接受的輔料，混合均勻，直接壓片或者制粒后壓片，即得所述中藥片劑。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的中藥片劑，其特征在于，所述制備方法的具體操作步驟如下: (1)按照所述重量份準(zhǔn)備原料藥； (2)肉桂用水蒸氣蒸餾法提取揮發(fā)油，蒸餾后的水溶液另器收集，肉桂藥渣備用；揮發(fā)油加2倍體積的無(wú)水乙醇溶解，得到揮發(fā)油乙醇液；稱取重量為揮發(fā)油體積10倍的β -環(huán)糊精，加入環(huán)糊精重量25倍的水，混合均勻，得到β-環(huán)糊精水溶液；在轉(zhuǎn)速150轉(zhuǎn)/分鐘下，緩慢向所述β -環(huán)糊精水溶液加入揮發(fā)油乙醇液，加入完畢后，繼續(xù)攪拌1.5小時(shí)，冷藏12小時(shí)，過(guò)濾，將濾得物在45°C下低溫烘干，得白色疏松的揮發(fā)油包合物； (3)步驟(2)得到的肉桂藥渣與黃芪、女貞子、密蒙花、烏梅合并，用體積為藥材重量10倍的體積百分濃度為50%的乙醇溶液加熱回流提取2次，每次1.5小時(shí)，濾過(guò)，合并兩次乙醇提取液，回收乙醇至無(wú)醇味，加入步驟(2)得到蒸餾后的水溶液，繼續(xù)減壓濃縮至80°C時(shí)測(cè)定相對(duì)密度為1.10-1.20的浸膏，得提取浸膏I ; (4)步驟(3)得到的浸膏上大孔吸附樹(shù)脂，用5倍柱體積的水洗脫，棄去水洗液，再用5倍柱體積的體積百分濃度70%的乙醇溶液洗脫，收集乙醇洗脫部分，回收乙醇，減壓濃縮，干燥，得浸膏粉I; (5)益母草、黃連加藥材重量10倍的60%乙醇溶液提取3次，每次1.5小時(shí)，合并三次乙醇提取液，回收乙醇，減壓濃縮至80°C時(shí)測(cè)定相對(duì)密度為1.10-1.20的浸膏，得提取浸膏2 ； (6)步驟(5)得到的提取浸膏2調(diào)pH值2，上離子交換樹(shù)脂，用10倍柱體積的水洗脫，棄去水洗液,再用8倍柱體積含5%氨水的50%乙醇溶液進(jìn)行洗脫，收集洗脫液，濃縮，干燥，得浸膏粉2 ; (7)所述浸膏粉1、浸膏粉2和揮發(fā)油包合物，加入藥學(xué)上可以接受的輔料，混合均勻，直接壓片或者制粒后壓片，即得所述中藥片劑。
9.權(quán)利要求1至8中任一項(xiàng)所述的中藥片劑，其特征在于，所述藥學(xué)上可以接受的輔料選自稀釋劑、粘合劑、崩解劑和潤(rùn)滑劑中的一種或多種，其中， 稀釋劑:選自淀粉、糊精、預(yù)膠化淀粉、乳糖、微晶纖維素、硫酸鈣、磷酸氫鈣、碳酸鈣、氧化鎂、碳酸鎂、氫氧化鋁凝膠、β -環(huán)糊精、甘露醇、山梨醇、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、羥甲基纖維素鈉中的一種或多種； 粘合劑:選自蒸餾水、乙醇、淀粉漿、羧甲基纖維素鈉、羥丙基纖維素、甲基纖維素和乙基纖維素、羥丙甲纖維素中的一種或多種； 崩解劑:選自干燥淀粉、羧甲基淀粉鈉、低取代羥丙基纖維素、交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇、十二烷基硫酸鈉中的一種或多種； 潤(rùn)滑劑:選自十二烷基硫酸鎂、聚乙二醇、微粉硅膠、硬脂酸鎂、滑石粉中的一種或多種。
10.權(quán)利要求1至9中任一項(xiàng)所述的中藥片劑在制備治療糖尿病視網(wǎng)膜病變的藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】A61P3/10GK104161849SQ201410359490
【公開(kāi)日】2014年11月26日 申請(qǐng)日期:2014年7月25日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月25日
【發(fā)明者】林德良 申請(qǐng)人:北京漢典制藥有限公司