專利名稱：一種脂肪酸合成酶抑制劑及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種脂肪酸合成酶抑制劑及其應(yīng)用。

背景技術(shù)：
脂肪酸合成酶(EC2.3.1.85，fatty acid synthase，縮寫為FAS)是內(nèi)源性脂肪酸合成的重要的酶，是一種大分子蛋白復(fù)合物，具有7種酶活性。動(dòng)物體內(nèi)的脂肪酸合成酶稱為I型FAS，原核生物及植物中的脂肪酸合成酶稱為II型FAS。國內(nèi)外基礎(chǔ)研究表明，脂肪酸合成酶已成為減肥和抑癌的潛在靶位。
目前為止，已報(bào)道的脂肪酸合成酶抑制劑較少，只有合成的C75(Kuhajda F.P.，Pizer E.S.，Li J.N.，et al.Proc Natl Acad Sci USA，97，3450-3454(2000))，較早發(fā)現(xiàn)的天然產(chǎn)物淺藍(lán)菌素(cerulenin)(Vance D.，Goldberg I.，Mitsuhashi O.etal.Biochem Biophys Res Commun.48，649-656(1972))和綠茶中的酯型兒茶素EGCG(Wang X.，Tian W.X..Biochem Pharmacol Res Commun，288(5)1200-1206(2001))和ECG(Wang X.，Song K.S.，Guo Q.X.，et al.Biochem Phamacol，662039-2047(2003))。這些抑制劑所具有的共同缺點(diǎn)是抑制活性不夠高，應(yīng)用價(jià)值受到局限，因此，在天然產(chǎn)物中尋找抑制活性高的脂肪酸合成酶抑制劑具有重要的實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。
茶條槭(Acer ginnala Maxim)為槭樹科(Aceraceae)槭樹屬(AcerLinn)落葉大灌木或小喬木，廣泛分布于黃河流域、長江中下游及東北地區(qū)，資源非常豐富。


發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種脂肪酸合成酶抑制劑。
本發(fā)明所提供的脂肪酸合成酶抑制劑，其活性成分包括式I所示的五沒食子?；咸烟撬帷⑹絀I所示的沒食子酸甲酯和式III所示斛皮素-3-O-L-鼠李糖苷；其中，式III中的基團(tuán)Rha代表L-鼠李糖基。
每克所述脂肪酸合成酶抑制劑中含式I化合物、式II化合物和式III化合物的質(zhì)量依次為18-20μg、2-3μg、1-2μg。

(式I)
(式II) (式III) 所述脂肪酸合成酶抑制劑可按照如下方法制備以茶條槭葉為原料，用乙醇水混合溶劑提取得到的。
其中，所述乙醇-水混合溶劑中乙醇的體積百分?jǐn)?shù)可為55％～95％；所述混合溶劑與茶條槭干葉的質(zhì)量份數(shù)比可為(8-30)∶1，具體可為8∶1。
所述提取可為回流提取，所述回流提取的溫度為40-100℃；所述提取至少提取一次，具體可提取三次，每次提取的時(shí)間可為1-3小時(shí)，具體可為1.5小時(shí)。
為了提高所述脂肪酸合成酶抑制劑的純度，所述提取后還進(jìn)行過濾和濃縮；所述濃縮的方法為除去所述過濾得到的濾液中的乙醇，接著用石油醚萃取水相，除去其中的脂類物質(zhì)，再收集水相，然后再用乙酸乙酯進(jìn)行萃取，收集乙酸乙酯萃取液，再減壓蒸發(fā)除去所述乙酸乙酯萃取液中的乙酸乙酯，得到經(jīng)濃縮的脂肪酸合成酶抑制劑浸膏。可將所述浸膏進(jìn)一步(真空)干燥得到固態(tài)的脂肪酸合成酶抑制劑。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供所述脂肪酸合成酶抑制劑的用途。
本發(fā)明所提供的脂肪酸合成酶抑制劑的用途是脂肪酸合成酶抑制劑在制備減肥藥中的應(yīng)用，以及在制備預(yù)防和/或治療癌癥藥物中的應(yīng)用。
該脂肪酸合成酶抑制劑還可以作為食品添加劑、日用化學(xué)品添加劑及保健品添加劑等得到廣泛應(yīng)用。
以本發(fā)明所提供的脂肪酸合成酶抑制劑為活性成分制備的減肥藥物以及預(yù)防和/或治療癌癥的藥物也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
需要的時(shí)候，在上述這些藥物中還可以加入一種或多種藥學(xué)上可接受的載體。所述載體包括藥學(xué)領(lǐng)域常規(guī)的稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、崩解劑、吸收促進(jìn)劑、表面活性劑、吸附載體、潤滑劑等，必要時(shí)還可以加入香味劑、甜味劑、和著色劑等。
用本發(fā)明的脂肪酸合成酶抑制劑為活性成分制備的藥物可以制成注射液、片劑、粉劑、顆粒劑、膠囊、口服液、膏劑、霜?jiǎng)┑榷喾N形式。上述各種劑型的藥物均可以按照藥學(xué)領(lǐng)域的常規(guī)方法制備。
實(shí)驗(yàn)證明，本發(fā)明所提供的脂肪酸合成酶抑制劑具有較高的脂肪酸合成酶抑制活性。且對分離出的三種組分五沒食子?；咸烟撬?、沒食子酸甲酯和斛皮素-3-O-L-鼠李糖苷分別進(jìn)行抑制FAS的活性檢測，結(jié)果表明上述三種組分均能抑制脂肪酸合成酶的活性，是所述脂肪酸合成酶抑制劑的活性組分。
本發(fā)明所提供的以茶條槭葉為原料制備的脂肪酸合成酶抑制劑能有效抑制脂肪酸合成酶活性，且用不同季節(jié)采集的茶條槭葉為原料制備的脂肪酸合酶抑制劑對脂肪酸合酶的抑制活性無顯著性差異。本發(fā)明的脂肪酸合成酶抑制劑將在以脂肪酸合成酶為靶點(diǎn)的相關(guān)疾病的預(yù)防及輔助治療方面，在制備控制體重、防治與肥胖相關(guān)的疾病等方面的藥物，特別是在制備防治癌癥的藥物中發(fā)揮巨大作用。同時(shí)，本發(fā)明的脂肪酸合成酶抑制劑在保健品及化妝品的生產(chǎn)中也會(huì)有較大的應(yīng)用價(jià)值。



圖1為實(shí)施例1分離的五沒食子?；咸烟撬岬母咝б合嗌V圖(B)與實(shí)施例1中的脂肪酸合成酶抑制劑的高效液相色譜圖(A)。
圖2為實(shí)施例1分離的五沒食子?；咸烟撬岬臍渥V圖。
圖3為實(shí)施例1分離的五沒食子?；咸烟撬岬奶甲V圖。
圖4為實(shí)施例1分離的五沒食子?；咸烟撬岬馁|(zhì)譜圖。
圖5為實(shí)施例1分離的沒食子酸甲酯用氯仿-甲醇-甲酸(體積比為3∶0.5∶0.2)作展開劑的薄層色譜圖。
圖6為實(shí)施例1分離的沒食子酸甲酯用乙醇-水(體積比為95∶5)作展開劑的薄層色譜圖。
圖7為實(shí)施例1分離的沒食子酸甲酯的液相色譜圖(B)與實(shí)施例1中的脂肪酸合成酶抑制劑的液相色譜圖(A)。
圖8為實(shí)施例1分離的沒食子酸甲酯的氫譜圖。
圖9為實(shí)施例1分離的沒食子酸甲酯的碳譜圖。
圖10為實(shí)施例1分離的沒食子酸甲酯的質(zhì)譜圖。
圖11為實(shí)施例1分離的斛皮素-3-O-L-鼠李糖苷用氯仿-甲醇-甲酸(體積比為3∶0.5∶0.2)作展開劑的薄層色譜圖。
圖12為實(shí)施例1分離的斛皮素-3-O-L-鼠李糖苷用乙醇-水(體積比為95∶5)作展開劑的薄層色譜圖。
圖13為實(shí)施例1分離的斛皮素-3-O-L-鼠李糖苷的液相色譜圖(B)與實(shí)施例1中的脂肪酸合成酶抑制劑的液相色譜圖(A)。
圖14為實(shí)施例1分離的斛皮素-3-O-L-鼠李糖苷的氫譜圖。
圖15為實(shí)施例1分離的斛皮素-3-O-L-鼠李糖苷的碳譜圖。
圖16為實(shí)施例1分離的斛皮素-3-O-L-鼠李糖苷的質(zhì)譜圖。
圖17為實(shí)施例2中脂肪酸合成酶抑制劑對FAS全反應(yīng)的抑制作用的線性回歸曲線圖。
圖18為實(shí)施例3中五沒食子?；咸烟撬釋AS全反應(yīng)的抑制作用的線性回歸曲線圖。
圖19為實(shí)施例3中沒食子酸甲酯對FAS全反應(yīng)的抑制作用的線性回歸曲線圖。
圖20為實(shí)施例3中斛皮素-3-O-L-鼠李糖苷對FAS全反應(yīng)的抑制作用的線性回歸曲線圖。
圖21為實(shí)施例3中沒食子酸甲酯對FAS酮酰還原反應(yīng)的抑制作用的線性回歸曲線圖。

具體實(shí)施例方式 下述實(shí)施例中，所用的脂肪酸合成酶是采用常規(guī)方法自新鮮鴨肝中分離提純得到的，并經(jīng)聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測為單一帶(W.X.Tian etal.，1985.J.Biol.Chem.，260(20)11375-11387；田維熙等，1996，不同生長期蛋雞的體脂水平和肝臟脂肪酸合成酶活性的關(guān)系，生物化學(xué)雜志，12(2)234-236)。
脂肪酸合酶全反應(yīng)和酮酰反應(yīng)活性采用乙酰輔酶A、丙二酸單酰輔酶A、NADPH(還原性輔酶II)為底物的標(biāo)準(zhǔn)測活方法測定(W.X.Tian etal.，1985.J.Biol.Chem.，260(20)11375-11387；田維熙等，1996，不同生長期蛋雞的體脂水平和肝臟脂肪酸合成酶活性的關(guān)系，生物化學(xué)雜志，12(2)234-236)。
實(shí)施例1、脂肪酸合成酶抑制劑的制備 將在黑龍江省鏡泊湖九月采集的茶條槭葉洗凈，自然晾干或低溫烘干(＜50℃)后將其粉碎，用下述方法制備脂肪酸合成酶抑制劑 用乙醇-水混合溶劑(乙醇的體積百分?jǐn)?shù)為75％)與上述粉碎的茶條槭葉按質(zhì)量份數(shù)比8∶1混合，78℃回流1.5小時(shí)，過濾；在同樣條件下重復(fù)上述回流操作兩次，過濾，將三次濾液合并。減壓低溫(0.09MPa，55℃)蒸發(fā)濃縮，除去乙醇，得到含有效物質(zhì)的水相，用適量甲醇溶解，再用等體積的石油醚(沸點(diǎn)60～90℃)分3-4次進(jìn)行萃取，除去其中的脂類物質(zhì)，收集水相，再用乙酸乙酯萃取水相，將乙酸乙酯提取液減壓低溫(0.09MPa，55℃)蒸發(fā)濃縮，除去有機(jī)溶劑，得到經(jīng)濃縮的脂肪酸合成酶抑制劑的浸膏，可將該浸膏(真空)干燥得到固態(tài)的脂肪酸合成酶抑制劑。
三次重復(fù)實(shí)驗(yàn)的脂肪酸合成酶抑制劑的提取率(提取率＝脂肪酸合酶抑制劑的質(zhì)量/茶條槭干葉的質(zhì)量)為42.15±2.031g/kg干葉。
活性組分的分離 1)五沒食子?；咸烟撬? 將15g脂肪酸合成酶抑制劑的浸膏用60ml體積百分含量為30％的乙醇溶液溶解，有固體沉淀析出，過濾除去沉淀收集上清液。將收集得到的上清液(30％乙醇溶解部分)經(jīng)聚酰胺柱層析，用100-200目的聚酰胺裝柱，柱床的長度為90cm，柱的內(nèi)徑為5cm，按照3～7ml/min的流速用如下4個(gè)梯度的乙醇和水混合液依次進(jìn)行梯度洗脫乙醇和水的體積比為30∶70的混合液1，乙醇和水的體積比為50∶50的混合液2，乙醇和水的體積比為75∶25的混合液3，乙醇和水的體積比為95∶5的混合液4。每個(gè)梯度洗脫量為23倍柱床體積。收集乙醇-水體積比為30∶70時(shí)的洗脫組分，經(jīng)聚酰胺薄層檢測，合并相同餾分放入4℃冰箱，有黃色晶體析出，干燥得到0.04g五沒食子?；咸烟撬?，2，3，4，6-Penta-O-galloyl-beta-d-glucose-acid(1，2，3，4，6-五沒食子?；咸烟撬?。
五沒食子?；咸烟撬?，結(jié)構(gòu)如式I所示，為淡黃色晶體，其熔點(diǎn)為209℃～211℃，所用儀器為X4型顯微熔點(diǎn)測定儀(溫度計(jì)未校正)。

(式I) 結(jié)構(gòu)確證 a、高效液相色譜(HPLC)檢測 色譜條件如下 色譜柱SpherisorbC18(4.6mm×250mm，5μm) 流動(dòng)相乙腈-體積百分含量為2.5％的乙酸水溶液(0～30min)(乙腈和2.5％乙酸水溶液的體積比從25∶75到90∶10梯度洗脫) 流速0.5ml/min檢測波長280nm 將分離得到的五沒食子?；咸烟撬嵊眉状既芙?，配成濃度為0.3701mg/ml的溶液，取5μl進(jìn)樣，在上述色譜條件下進(jìn)行分析，所得色譜圖見圖1B。
將制備的脂肪酸合成酶抑制劑用甲醇溶解，配成濃度為0.1343mg/ml的溶液，取5μl進(jìn)樣，在上述色譜條件下進(jìn)行分析，所得色譜圖見圖1A。
由圖1可知五沒食子酰基葡萄糖酸為脂肪酸合成酶抑制劑的組成成分，計(jì)算得到五沒食子酰基葡萄糖酸在脂肪酸合成酶抑制劑總提物中的含量為19.04μg/g。
b、氫譜(見圖2) 1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm9.3(15H，s，galloyl-OH)，6.9(10H，s，galloyl-H)，6.97(1H，d，J＝9.5Hz，glu-H-1)，5.46(1H，t，J＝9.5Hz，glu-H-2)，5.46(1H，t，J＝9.5Hz，glu-H-3)，5.43(1H，t，J＝9.5Hz，glu-H-4)，4.77(1H，m glu-H-5)，4.75(1H，mglu-H-6)，4.48(1H，dd，J＝3.12Hz，glu-H-6). c、碳譜(見圖3) 13C NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm165.9-164.4
146.1-145.8(galloyl-C-3’，C-5’)，139.1-138.29(galloyl-C-4’)，119.4-117.9(galloyl-C-1’)，109.5-109.2(galloyl-C-2’，C-6’)，78.82(glu-C-1)，72.6～68.2(glu-C)，66.6(glu-C-6). d、液質(zhì)譜(見圖4) ESI-MS m/z957.6(M+1)。
2、沒食子酸甲酯和斛皮素-3-O-L-鼠李糖苷 取脂肪酸合成酶抑制劑的浸膏5g，拌200目硅膠5g，經(jīng)常壓硅膠柱層析，用200目的硅膠裝柱，柱床的長度為50cm，柱的內(nèi)徑為5cm，按照6ml/min的流速用如下6個(gè)梯度的氯仿和甲醇混合液依次進(jìn)行梯度洗脫氯仿-甲醇的體積比為12∶1的混合液1，氯仿-甲醇的體積比為11∶1的混合液2，氯仿-甲醇的體積比為10∶1的混合液3，氯仿-甲醇的體積比為8∶1的混合液4，氯仿-甲醇的體積比為4∶1的混合液5，氯仿-甲醇的體積比為1∶1的混合液6，每250ml為一個(gè)流份，每個(gè)梯度洗脫量為40～60個(gè)流分不等(根據(jù)薄層檢測的結(jié)果進(jìn)行判定)，共洗脫313份。
將2-37流份合并，經(jīng)過硅膠柱層析(洗脫劑為體積比為12∶1的氯仿與甲醇的混合液)，在60℃進(jìn)行常壓濃縮，得0.05g式II所示的化合物沒食子酸甲酯。
將40-70流份合并，反復(fù)硅膠柱層析(洗脫液為體積比為10∶1的氯仿與甲醇的混合液)，常壓60℃濃縮溶劑，濃縮后的流分放4℃冰箱靜置，有黃色晶體析出，對析出的晶體采用熱溶冷析法進(jìn)行重結(jié)晶(用無水乙醇反復(fù)溶解4℃冷析)，得0.025g式III所示的化合物斛皮素-3-O-L-鼠李糖苷。

(式II) (式III) 分離得到的沒食子酸甲酯的結(jié)構(gòu)確證 a、硅膠薄層色譜檢測 色譜條件如下 采用硅膠G硅膠板 展開劑氯仿-甲醇-甲酸(體積比為3∶0.5∶0.2) 制備樣品將分離得到的沒食子酸甲酯用甲醇溶解，配成濃度為4mg/ml的溶液，取30μl點(diǎn)樣，所得色譜圖如圖5所示。圖5中1為沒食子酸甲酯，2為脂肪酸合成酶抑制劑(乙酸乙酯總提物)。
另采用聚酰胺薄層板，以乙醇-水(體積比為95∶5)作展開劑，對沒食子酸甲酯進(jìn)行薄層色譜分析，所得色譜圖如圖6所示。
圖6中1為脂肪酸合成酶抑制劑(乙酸乙酯總提物)，2為槲皮素-3-O-L-鼠李糖，3為五沒食子?；咸烟撬幔?為沒食子酸甲酯。
b、液相色譜(見圖7) 色譜條件如下 色譜柱SpherisorbC18(4.6mm×250mm，5μm) 流動(dòng)相乙腈-體積百分含量為2.5％乙酸水溶液(0～30min)(乙腈和2.5％乙酸水溶液的體積比從25∶75到90∶10梯度洗脫) 流速0.5ml/min檢測波長280nm 將分離得到的沒食子酸甲酯用甲醇溶解，配成濃度為0.0486mg/ml的溶液，取5μl進(jìn)樣，在上述色譜條件下進(jìn)行分析，所得色譜圖見圖7B。
將制備的脂肪酸合成酶抑制劑用甲醇溶解，配成濃度為0.1343mg/ml的溶液，取5μl進(jìn)樣，在上述色譜條件下進(jìn)行分析，所得色譜圖見圖7A。
由圖7可知沒食子酸甲酯為脂肪酸合成酶抑制劑的組成成分，計(jì)算得到?jīng)]食子酸甲酯在脂肪酸合成酶抑制劑總提物中的含量為2.502μg/g。
c、氫譜(見圖8) 1H NMR(500MHz，DMSO-d6)6.94(2H，s，H-2，6)，3.73(3H，s，-OCH3). d、碳譜(見圖9) 13C NMR(500MHz，DMSO-d6)166.8(-COOH)，146.0(C-3，5)，138.9(C-4)，119.8(C-1)，109.0(C-2，6)，52.0(-OCH3) e、質(zhì)譜(見圖10) FAB-MS m/z182(M++1) 分離得到的斛皮素-3-O-L-鼠李糖苷的結(jié)構(gòu)確證 a、硅膠薄層色譜檢測 色譜條件如下 采用硅膠G硅膠板 展開劑氯仿-甲醇-甲酸(體積比為3∶0.5∶0.2) 制備樣品將分離得到的斛皮素-3-O-L-鼠李糖苷用甲醇溶解，配成濃度為4mg/ml的溶液，取30μl點(diǎn)樣，所得色譜圖如圖11所示。
圖11中1為斛皮素-3-O-L-鼠李糖苷，2為脂肪酸合成酶抑制劑(乙酸乙酯總提物)。
另采用聚酰胺薄層板，以乙醇-水(體積比為95∶5)作展開劑，對斛皮素-3-O L-鼠李糖苷進(jìn)行薄層色譜分析，所得色譜圖如圖12所示。
圖12中1為脂肪酸合成酶抑制劑(乙酸乙酯總提物)，2為槲皮素-3-O-L-鼠李糖，3為五沒食子?；咸烟撬?，4為沒食子酸甲酯。
b、液相色譜(見圖13) 色譜條件如下 色譜柱SpherisorbC18(4.6mm×250mm，5μm) 流動(dòng)相乙腈-體積百分含量為2.5％的乙酸水溶液(O～30min)(乙腈和2.5％乙酸水溶液的體積比從25∶75到90∶10梯度洗脫) 流速0.5ml/min檢測波長373nm 將分離得到的斛皮素-3-O-L-鼠李糖苷用甲醇溶解，配成濃度為0.02958mg/ml的溶液，取5μl進(jìn)樣，在上述色譜條件下進(jìn)行分析，所得色譜圖見圖13B。
將制備的脂肪酸合成酶抑制劑用甲醇溶解，配成濃度為0.1343mg/ml的溶液，取5μl進(jìn)樣，在上述色譜條件下進(jìn)行分析，所得色譜圖見圖13A。
由圖13可知斛皮素-3-O-L-鼠李糖苷為脂肪酸合成酶抑制劑的組成成分，計(jì)算得到斛皮素-3-O-L-鼠李糖苷在脂肪酸合成酶抑制劑總提物中的含量為1.522μg/g。
c、氫譜(見圖14) 1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm12.60(1H，s，5-OH)，7.29(1H，d，J＝1.5Hz，H-2)，7.24(1H，d，J＝8.4Hz，H-6)，6.85(1H，d，J＝8.4Hz，H-5)，6.36(1H，br.s，H-8)，6.19(1H，br.s，H-6)，5.25(1H，s，H-1)，0.81(3H，d，J＝6.0Hz，-CH3). d、碳譜(見圖15) 13C NMR(500MHz，DMSO-d6)δppm156.9(C-2)，134.6(C-3)，178.2(C-4)，161.8(C-5)，99.3(C-6)，165.1(C-7)，94.1(C-8)，157.7(C-9)，104.4(C-10)，121.6(C-1’)，115.9(C-2’)，145.7(C-3’)，149.0(C-4’)，116.1(C-5’)，121.2(C-6’)，102.3(C-1”)，70.8(C-2”)，71.0(C-3”)，71.7(C-4”)，70.5(C-5”)，18.0(C-6”) e、質(zhì)譜(見圖16) FAB-MS m/z449(M++1) 綜上，可以得出每克脂肪酸合成酶抑制劑中所含五沒食子酰基葡萄糖酸、沒食子酸甲酯和斛皮素-3-O-L-鼠李糖苷的質(zhì)量依次為19.04μg、2.502μg、1.522μg。
實(shí)施例2、本發(fā)明的脂肪酸合成酶抑制劑對FAS抑制活性的檢測 試驗(yàn)中所用的NADPH、乙酰輔酶A、丙二酸單酰輔酶A、DTT(二硫蘇糖醇)均購于為羅氏診斷公司。
在37℃下，在2ml石英比色皿中加入FAS的底物0.2mM乙酰輔酶A溶液25μl，0.4mM丙二酸單酰輔酶A溶液50μl和1.3mM NADPH溶液50μl，再加入0.1M pH7.0磷酸鹽緩沖液1.85ml及FAS溶液25μl混勻，啟動(dòng)酶促反應(yīng)。用分光光度計(jì)檢測單位時(shí)間內(nèi)340nm波長處吸光值A(chǔ)的變化(ΔA/min)來表示FAS的活力。在一定濃度實(shí)施例1制備的脂肪酸合成酶抑制劑溶液存在下FAS全酶反應(yīng)的活力下降，當(dāng)其活力下降一半時(shí)所需脂肪酸合成酶抑制劑的濃度即為IC50，用該數(shù)值表示脂肪酸合成酶抑制劑對FAS的抑制能力。每個(gè)測定設(shè)三次重復(fù)。
脂肪酸合成酶(FAS)活性被抑制的用I％(抑制程度)來表示，其計(jì)算方法為底物中加入脂肪酸合成酶抑制劑溶液的為實(shí)驗(yàn)組，測得其脂肪酸合成酶活性值為Ai，以底物中只加入相應(yīng)提取溶劑的為對照，測定其脂肪酸合成酶的活性值，該值用A0表示，并設(shè)定其為100％； RA％(剩余活性)＝Ai/A0×100％ I％(抑制程度)＝(1-Ai/A0)×100％ 脂肪酸合成酶抑制劑溶液的制備將3mg實(shí)施例1制備的脂肪酸合成酶抑制劑溶于1ml的甲醇中，得到濃度為3mg/ml的脂肪酸合成酶抑制劑溶液。
表1、不同濃度的脂肪酸合成酶抑制劑對FAS的抑制活性 根據(jù)表1數(shù)據(jù)繪制脂肪酸合成酶抑制劑對FAS全反應(yīng)的抑制作用的線性回歸曲線見圖17，回歸方程為y＝-0.0575x+0.8855，計(jì)算得到脂肪酸合成酶抑制劑對FAS的IC50為0.0067mg/ml。
實(shí)施例3、五沒食子?；咸烟撬?、沒食子酸甲酯和斛皮素-3-O-L-鼠李糖苷分別對FAS抑制活性的檢測 具體的測定方法同實(shí)施例2中脂肪酸合成酶抑制劑對FAS抑制活性的檢測。
五沒食子酰基葡萄糖酸溶液的制備將16.8mg實(shí)施例1分離得到的五沒食子?；咸烟撬崛苡?ml的甲醇中，得到濃度為16.8mg/ml的五沒食子?；咸烟撬崛芤?。
沒食子酸甲酯溶液的制備將16mg實(shí)施例1分離得到的沒食子酸甲酯溶于1ml的甲醇中，得到濃度為16mg/ml的沒食子酸甲酯溶液。
斛皮素-3-O-L-鼠李糖苷溶液的制備將20mg實(shí)施例1分離得到的斛皮素-3-O-L-鼠李糖苷溶于1ml的甲醇中，得到濃度為20mg/ml的斛皮素-3-O-L-鼠李糖苷溶液。
五沒食子?；咸烟撬帷]食子酸甲酯和斛皮素-3-O-L-鼠李糖苷分別對FAS抑制活性的結(jié)果分別見表2-4。
表2、不同濃度的五沒食子酰基葡萄糖酸對FAS的抑制活性 根據(jù)表2數(shù)據(jù)繪制五沒食子?；咸烟撬釋AS全反應(yīng)的抑制作用的線性回歸曲線見圖18，回歸方程為y＝-0.0167x+0.996，計(jì)算得到計(jì)算得到五沒食子?；咸烟撬釋AS的IC50為0.0297mg/ml。
表3、不同濃度的沒食子酸甲酯對FAS的抑制活性 由表3可知，沒食子酸甲酯對FAS全反應(yīng)的抑制作用的線性回歸曲線見圖19，回歸方程為y＝-0.0121x+0.9328，計(jì)算得到?jīng)]食子酸甲酯對FAS的IC50為0.03576mg/ml。
表4、不同濃度的斛皮素-3-O-L-鼠李糖苷對FAS的抑制活性 由表4可知，斛皮素-3-O-L-鼠李糖苷對FAS全反應(yīng)的抑制作用的線性回歸曲線見圖20，回歸方程為y＝-0.0033x+1.0364，計(jì)算得到斛皮素-3-O-L-鼠李糖苷對FAS的IC50為0.1625mg/ml。
綜上，五沒食子?；咸烟撬帷]食子酸甲酯和斛皮素-3-O-L-鼠李糖苷均對FAS具有抑制活性，表明上述三種物質(zhì)均為本發(fā)明的脂肪酸合成酶抑制劑的活性成分。
實(shí)施例4、沒食子酸甲酯對酮酰還原反應(yīng)抑制活性的檢測 酮酰還原反應(yīng)活性測定 在37℃下，在2ml石英比色皿中加入0.1M pH7.0磷酸鹽緩沖液(KH2PO4-K2HPO4緩沖液，含1mmol/L EDTA 1.90ml)，60mmol/L乙酰乙酸乙酯，1.3mMNADPH溶液50μl，及FAS溶液15～25μl混勻，啟動(dòng)酶促反應(yīng)。用分光光度計(jì)檢測單位時(shí)間內(nèi)340nm波長處吸光值A(chǔ)的變化(ΔA/min)來表示FAS的活力。在一定濃度實(shí)施例1制備的沒食子酸甲酯溶液存在下FAS的活力下降，當(dāng)其活力下降一半時(shí)所需沒食子酸甲酯的濃度即為IC50，用該數(shù)值表示沒食子酸甲酯對FAS的抑制能力。每個(gè)測定設(shè)三次重復(fù)。
脂肪酸合成酶(FAS)活性被抑制的用I％(抑制程度)來表示，其計(jì)算方法為底物中加入脂肪酸合成酶抑制劑溶液的為實(shí)驗(yàn)組，測得其脂肪酸合成酶活性值為Ai，以底物中只加入相應(yīng)提取溶劑的為對照，測定其脂肪酸合成酶的活性值，該值用A0表示，并設(shè)定其為100％； RA％(剩余活性)＝Ai/A0×100％ I％(抑制程度)＝(1-Ai/A0)×100％ 表5、不同濃度的沒食子酸甲酯對FAS酮酰還原反應(yīng)的抑制活性 根據(jù)表5數(shù)據(jù)繪制，沒食子酸甲酯對FAS酮酰還原反應(yīng)的抑制作用的線性回歸曲線見圖21，回歸方程為y＝-0.0154x+1.1065，計(jì)算得到?jīng)]食子酸甲酯對酮酰還原反應(yīng)的IC50為0.03938mg/ml。
權(quán)利要求
1.一種脂肪酸合成酶抑制劑，其活性成分包括式I所示的化合物、式II所示的化合物和式III所示的化合物；
(式I)
(式II)(式III)
其中，式III中的基團(tuán)Rha代表L-鼠李糖基。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的脂肪酸合成酶抑制劑，其特征在于每克所述脂肪酸合成酶抑制劑中含式I化合物、式II化合物和式III化合物的質(zhì)量依次為18-20μg、2-3μg、1-2μg。
3.權(quán)利要求1或2所述的脂肪酸合成酶抑制劑在制備預(yù)防和/或治療癌癥藥物中的應(yīng)用。
4.權(quán)利要求1或2所述的脂肪酸合成酶抑制劑在制備減肥藥中的應(yīng)用。
5.權(quán)利要求1或2所述的脂肪酸合成酶抑制劑在作為食品添加劑中的應(yīng)用。
6.權(quán)利要求1或2所述的脂肪酸合成酶抑制劑在作為保健品添加劑中的應(yīng)用。
7.權(quán)利要求1或2所述的脂肪酸合成酶抑制劑在作為日用化學(xué)品添加劑中的應(yīng)用。
8.一種預(yù)防和/或治療癌癥的藥物，其活性成分為權(quán)利要求1或2所述的脂肪酸合成酶抑制劑。
9.一種減肥藥，其活性成分為權(quán)利要求1或2所述的脂肪酸合成酶抑制劑。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種脂肪酸合成酶抑制劑及其應(yīng)用。本發(fā)明所提供的脂肪酸合成酶抑制劑，其活性成分包括五沒食子?；咸烟撬?、沒食子酸甲酯和斛皮素-3-O-L-鼠李糖苷。每克所述脂肪酸合成酶抑制劑中含所述三種活性成分的質(zhì)量依次為18-20μg、2-3μg、1-2μg。該脂肪酸合成酶抑制劑可在制備減肥藥物、制備防治癌癥的藥物中得到應(yīng)用，也可作為食品、保健品以及日用化學(xué)品添加劑得到廣泛應(yīng)用。
文檔編號A61K31/352GK101768081SQ200910076219
公開日2010年7月7日 申請日期2009年1月6日 優(yōu)先權(quán)日2009年1月6日
發(fā)明者李珺, 趙光, 孫彬, 屈愛桃, 宋豐宇, 李教社 申請人:首都醫(yī)科大學(xué)