肝病中的脂肪酸合酶的制作方法

文檔序號：6143317閱讀：373來源：國知局

專利名稱：肝病中的脂肪酸合酶的制作方法
肝病中的脂肪酸合酶相關申請本申請要求2007年2月27日提交的美國臨時專利申請60/891， 928的優(yōu)先權權
益，其據(jù)此整體并入本文，如同完全陳述于本文一樣。本公開內容的領域公開了用于檢測受治療者肝臟中升高的脂肪酸合酶(FAS)表達的方法和組合物。所述檢測可以是受治療者肝臟細胞本身中或體液物質中的表達。還公開了用于鑒別存在或不存在與升高的FAS相關的肝病或病理的方法。所公開的方法可用包含本文所述的用于檢測FAS表達的試劑的各種組合物實施。
本公開內容的背景非酒精性脂肪性肝炎(NASH)也稱為非酒精性脂肪肝病(NAFLD)，它是一種特征為
從簡單的脂肪變性(脂肪肝)到NASH/NAFLD(進展至確定的肝硬化)的病理譜的慢性肝病
(1)。 NASH的診斷是基于肝臟活檢建立的，其中所述病理本質上無法與酒精性肝炎區(qū)分。脂
肪變性、具有肝細胞損傷的急性和慢性炎癥的病灶、馬洛里玻璃質(Mallory's hyaline)和
各種程度的纖維化是所述疾病的特點(2)，并且必須在不存在顯著的飲酒下發(fā)生。 NASH已細分為兩組繼發(fā)性和原發(fā)性(1)。繼發(fā)性NASH發(fā)生于脂肪性肝病環(huán)境，由
諸如以下的直接原因造成空腸回腸旁路手術、藥物、肝毒素或諸如脂肪營養(yǎng)不良、韋-克
氏病(Weber-Christian disease)或HIV的疾病。原發(fā)性NASH與肥胖癥、II型糖尿病、血
脂異常和胰島素抵抗、代謝綜合征的部分征兆和癥狀群有關，或可以是特發(fā)性的。在其早期，NASH本質上是無癥狀的，因此在癥狀發(fā)作之前確立診斷是重要的，所述
癥狀通常與肝硬化的發(fā)作相關。也可能在NASH中發(fā)展肝硬化而不顯現(xiàn)癥狀。雖然肝臟活
檢仍是診斷NASH的金標準，但是穿剌活檢伴有采樣誤差和可能的曲解兩方面(3，4)。此外，
肝臟活檢和成像技術諸如磁共振波譜(MRS)受成本的阻礙而在作為篩選檢驗時不實用。因
此，已嘗試采用普通的和相對廉價的對血清執(zhí)行的肝臟功能檢驗來檢測NASH。有許多測定用于檢測血清中肝臟酶的存在，所述肝臟酶可單獨或組合用作肝病
的標志物。血液中這些酶的存在指示肝細胞損傷。這些酶包括AST(天冬氨酸氨基轉移
酶)、ALT (丙氨酸氨基轉移酶)、堿性磷酸酶(ALP) 、GGT ( y -谷氨酰轉移酶)和乳酸脫氫酶
(LDH)。雖然血液中這些酶的升高指示肝細胞損傷，但ALP和GGT的小管(cannilcular)定
位可指示受阻的過程，諸如因結石或腫瘤的膽道阻塞(5)。遺憾的是，肝臟酶的水平對于一般的慢性肝病和具體地NASH是不敏感的和非特異性的(1、6-10)。例如，在K皿de等人最近的研究中，使用ALT〉 19U/L作為正常的截留值時，233名具有II/II類肥胖癥的婦女中血清ATL升高對于檢測NASH的靈敏度和特異性是 74%和42%。將截留值改為ALT〉30U/L使靈敏度和特異性增加至42X和80X。不過，作者的結論是ALT鑒別NASH的診斷用途仍然不大(6)。在對106名具有NASH的患者的縱向研究中，F(xiàn)assio等人顯示無論是ALT還是AST/ALT比值都不能用于預測NASH的進展(8)。在51名具有正常ATL水平的患者對比50名具有升高的ALT水平的患者的NASH研究中，在具有正常ALT水平的患者中觀察到了范圍從脂肪變性到確定的肝硬化的完整疾病譜。因
4此，正常的ALT值并不排除NASH向晚期纖維化的進展(10)。為了從另一途徑探究此問題，研究了乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒陰性但在捐血時間發(fā)現(xiàn)具有升高的ALT水平的119名患者的升高的ALT水平的原因。肥胖癥(30. 2% )和酒精中毒(28. 6% )與ALT升高最頻繁相關。40名患者中的肝臟組織學顯示脂肪變性(35% )、脂肪性肝炎(30% )、非特異性肝炎(12.5% )和正常肝臟(15% );肝硬化、血色素沉著病(hemochromotosis)和門靜脈纖維化各有一例。同樣，ALT升高并不高度預測此群體中的NASH(ll)?？傊瑳]有可用來篩選 NASH存在的實用檢驗。脂肪酸合酶(FAS)已作為人類癌癥治療的藥物靶標和癌癥診斷的生物標志物引起人們注意。FAS以高百分比表達于大多數(shù)常見的人類腫瘤中，諸如肺、前列腺、結腸、乳腺和卵巢腫瘤(12)。抑制FAS在人類癌細胞中誘導凋亡(13)，并且小分子FAS抑制劑抑制人類癌癥異種移植物的生長(14， 15)。此外，已報道了乳腺癌患者血液中升高的FAS水平 (16-18)。也有在具有肺癌、乳腺癌、卵巢癌、胰腺癌和結腸癌的患者中與對照相比顯著升高的FAS水平的報道(19)。最近，新配置的FAS ELISA測定已證實了這些先前的血清學研究 (圖l)。引用上述文件并不意在承認上述任何內容都是相關的現(xiàn)有技術。所有關于這些文件的日期的陳述或關于這些文件的內容的表示是基于申請人可得的信息，并不構成對這些文件的日期或內容正確性的任何承認。
本公開內容的概述本文公開了用于檢測或鑒別肝臟病況(包括包含各種病因的肝病和病理)的方法和組合物。所述方法可有利地結合或者隨后是治療所鑒別的肝臟病況、疾病或病理的方法。所述方法的方面和所述組合物的活性包括檢測或測量受治療者諸如人類患者肝臟中的脂肪酸合酶(FAS)表達。本公開內容的實施方案包括將檢測或測量的FAS表達水平應用于診斷疾病和選擇疾病的治療。在一個方面，本公開內容包括檢測或測量受治療者肝臟中脂肪酸合酶(FAS)表達的方法。所述檢測或測量可以是FAS表達的水平或量。在一些實施方案中，所述檢測或測量是FAS蛋白質或其片段。所述方法的非限制性實施方案包括使用來自受治療者的含有FAS 的樣品材料。在一些實施方案中，所述含有FAS的樣品包括體液，諸如血液或血清。在其他非限制性實施方案中，所述含有FAS的樣品包含來自受治療者的一個或多個肝臟細胞、肝臟細胞的勻漿物或含有FAS的肝臟細胞提取物。在一些實施方案中，所述樣品可來自認為、相信或預期具有肝臟病況的受治療者。可選地，受治療者可被懷疑具有此類病況。在其他實施方案中，受治療者可以是被懷疑、認為、相信或診斷為無癌癥的受治療者。作為另外的可選實施方案，受治療者可以是已被診斷為具有特征為升高的FAS表達的肝臟病況，而且使用本公開內容的方法確認所述診斷或為所述診斷提供另外的支持的受治療者。在進一步的實施方案中，檢測或測量FAS表達的方法可用于確定或鑒別受治療者肝臟中升高的FAS水平?？蛇x地，所述方法可用于確定或鑒別受治療者肝臟中未升高的或正常的FAS水平。FAS水平可被確定為與來自無肝病或病理的受治療者的樣品中的FAS水平相比升高或未升高。所述方法的一些實施方案是基于檢測或測量樣品中反映其中的FAS表達水平的一種或多種組分。在一些情形中，所述組分可以是FAS蛋白質或其片段。在此類實施方案中，所述方法可包括使用結合FAS蛋白質或其片段的試劑。在其他實施方案中，所述組分可以是反映FAS表達的細胞的因子或中間物。在此類實施方案中，所述方法可包括使用檢測或測量所述因子或中間物的一種或多種試劑。作為非限制性實例，所述組分可以是編碼FAS 蛋白質的mRNA，而所述試劑可以是檢測所述mRNA的核酸探針。可選地，可使用用于反轉錄聚合酶鏈式反應(RT-PCR)的試劑組合，諸如引物和探針分子。另外的選擇是使用定量PCR，諸如檢測mRNA反轉錄后的FAS cDNA。在另一方面，本公開內容包括基于檢測或測量的FAS水平來診斷存在或不存在肝臟病況的方法。在一些實施方案中，所述診斷是基于升高的FAS表達診斷肝病或病理的存在。在其他實施方案中，所述診斷是基于未升高的FAS表達診斷肝病或病理的不存在。肝病或病理的非限制性實例包括脂肪性肝炎(或非酒精性脂肪性肝炎，NASH);酒精性肝炎；肝臟毒性；肝臟的病毒感染，或病毒性肝炎；自身免疫性肝炎；隱源性肝硬化；低灌注 (hypoperfusion)后的肝壞死；和其他疾病造成的肝炎，或繼發(fā)性NASH。
在進一步的方面，本公開內容包括基于檢測或測量的FAS表達水平來診斷受治療者肝臟中脂肪蓄積的方法。在一些實施方案中，診斷受治療者肝臟中存在脂肪蓄積是基于升高的FAS表達。可選地，診斷受治療者肝臟中不存在脂肪蓄積可以是基于未升高的FAS 表達水平的檢測或測量。在一些實施方案中，這些方法可組合肝臟炎癥的檢測或測量使用。不存在炎癥指示存在脂肪變性，而存在炎癥諸如具有相關的肝細胞損傷的肝臟小葉中病灶性急性炎癥指示存在脂肪性肝炎。已報道門管三聯(lián)(portal triad)的輕度慢性炎癥可存在于具有脂肪變性的患者中。在另外的方面，本公開內容的方法可與其他醫(yī)學或臨床方法組合使用作為鑒別診斷(differential diagnosis)方法的一部分。此類方法可包括將本文所述的FAS相關測定與其他測定組合實施，以通過包括或排除其他可能的疾病病況來促進醫(yī)學診斷過程。
在又一另外的方面，本公開內容包括基于本文所述的肝臟病況的診斷來選擇或應用治療或療法的方法。在一些實施方案中，所述治療或療法是技術人員已知或認為緩解或改善所診斷的病況的癥狀或方面的治療或療法。非限制性實例包括臨床醫(yī)師或其他醫(yī)學執(zhí) 業(yè)者認可和認為或已知對所診斷的疾病或病理有益的治療和療法。在又進一步的方面，本公開內容包括制備如本文所述的來自受治療者的生物材料樣品的方法。所述制備可通過技術人員已知的任何手段或方法。在一些實施方案中，可制備生物液體樣品，然后用于本文公開的方法。在其他實施方案中，可制備含有肝臟細胞的樣品或含有從該細胞得到的材料的樣品并用于本文所述的方法。本公開內容還包括用于實施本文所公開的方法的組合物。非限制性實施方案包括用于檢測FAS蛋白質或其片段，或用于檢測編碼FAS的核酸的試劑。當然，還公開了包含一種或多種此類試劑的組合物。另外的材料包括復合物，所述復合物包含用于檢測FAS表達的試劑和被所述試劑結合的配體。所述試劑和配體形成本公開內容的"結合對"，以使本公開內容的復合物可包含此類"結合對"。配體的非限制性實例包括生物液體或肝臟細胞中被所述試劑結合的組分和分子。在一些實施方案中，所述復合物是從通常發(fā)現(xiàn)與配體在一起的一種或多種分子分離或純化的。另外的實施方案的詳情在附圖和下面的描述中闡明。根據(jù)附圖和詳細描述以及根據(jù)權利要求，所述實施方案的其他特征、目標和優(yōu)點將是顯然的。
定義本文所用的術語"肝臟病況"和其變體指受治療者中不是正?；驘o疾病個體的肝臟狀況的那些病況。所述病況可以是異常肝臟的病況或不期望的生理狀態(tài)的病況。一個非限制性實例是脂肪肝。所述術語還包括諸如肝病和肝臟病理的病況。本文所用的"肝病"和其變體指受治療者肝臟中破壞它的正常水平或特征功能的病況。在一些情形中，所述破壞是肝臟功能的中斷、停止或失調。在其他情形中，所述破壞是肝臟功能的錯誤或異常水平或特性。所述疾病可由受治療者中遺傳因子或狀態(tài)造成或由一種或多種病原造成。本文所用的術語"肝臟病理"和其變體指包含可通過檢查肝臟細胞和/或組織鑒別的結構組分的肝臟疾病病況。病理通常是可通過研究組織、器官和/或體液鑒別的狀態(tài)或病況。所述研究可以基于視覺檢查，諸如在顯微鏡下，任選地通過染色和/或免疫組織化學增強。
如本文所用，"脂肪性肝炎"包括非酒精性脂肪性肝炎(NASH)和酒精性脂肪性肝炎兩種。術語"人類脂肪酸合酶"或"hFAS"指先前在美國專利5， 759， 791和其依賴的專利申請中被鑒別為癌癥相關抗原的多肽。所述抗原在本領域中也被稱為0A-519，并被生物化學和分子生物學國際聯(lián)盟命名委員會(NC-IUBMB)定義為脂肪酸合酶(E. C. 2. 3. 1.85)，如 www. chem. qmul. ac. uk/iubmb/enzyme/所述。所述術語不限于根據(jù)氨基酸序列的特定人類脂肪酸合酶，而是被本公開內容的抗體識別的任何hFAS或其片段。該術語還指hFAS蛋白質或肽，包括全長序列的片段，其保留細胞內形式以及在胞外環(huán)境和體液中發(fā)現(xiàn)的無細胞形式。在一些情形中，全長hFAS的片段是指示全長hFAS(全長hFAS獨有的)的片段。本文所用的術語"FAS多肽"、"FAS肽"和"FAS蛋白質"指整體上是FAS的全部或部分的氨基酸殘基的聚合物。這些術語還包括含有保守氨基酸置換以使所述聚合物整體上保持其功能性的聚合物，所述功能性諸如被本公開內容的抗-FAS抗體識別的功能性。
術語"接觸"指置于直接的物理聯(lián)系(association)，諸如將本公開內容的抗體與 hFAS多肽放置在一起以使可造成這兩種組分的復合物的形成。術語"升高的FAS水平"或其變體涉及樣品或其他材料中存在或不存在FAS多肽或包含F(xiàn)AS多肽的復合物的定性或定量評估。所述習語還可考慮檢測到存在的FAS多肽高于特定水平，諸如但不限于高于本底噪音或參考細胞或樣品(包括來自正常受治療者的細胞或樣品)水平的水平。如本文所用，所使用的"確定"或"檢測"FAS多肽水平指以定量或半定量水平評估多肽的量。所述評估不需是絕對精確的，而可以相反是近似的。
術語"軛合"、"鍵合"、"連接"和其變體指兩個實體通過形成至少一個共價鍵的物理聯(lián)接。在一些情況中，它們指使兩個多肽成為一個連續(xù)的多肽分子。在本公開內容的環(huán) 境中，所述術語包括指將抗體部分接合到固相支持物或其他固相材料，包括固相材料的表面以及另一分子。共價鍵的形成可以是使用化學反應來形成所述鍵。術語"支持物"指常規(guī)的支持物，諸如珠、粒子、量桿(dipstick)、纖維、過濾器、膜和硅烷或硅酸鹽支持物諸如載玻片。本公開內容的軛合抗體包括但不限于聯(lián)接至標記的抗體。
附圖簡述

圖1說明了具有乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、肺癌和結腸癌的患者與正常的對照相
7比的血清FAS水平。正常男性指0.21士0.27ng/ml(平均值±標準偏差)的結果，其中n =10。正常女性指0. 45±0. 67ng/ml (平均值±標準偏差)的結果，其中n = 20。"卵巢" 指卵巢癌病例，其中n = 13。"乳腺"指乳腺癌病例，其中n = 12。"結腸"指結腸癌病例，其中n = 10。"前列腺"指前列腺癌病例，其中n = 13。"肺"指肺癌病例，其中n = 11。男性和女性的正常上限分別是1. 02ng/ml和2. 46ng/ml (平均值+3標準偏差)。
圖2說明了 38(n = 38)名肥胖受治療者肝臟活檢中與脂肪變性和脂肪性肝炎相關的FAS表達。A部分顯示脂肪肝得分與脂肪性肝炎得分的圖，其中p < 0.0001單向 ANOVA，而***指示雙尾t檢驗p < 0. 001。 B部分顯示FAS表達得分與脂肪肝得分的圖，其中p < 0. Oil單向ANOVA， 1旨示p < 0. 05，而***指示雙尾t檢驗p < 0. 01。 C部分顯示 FAS表達得分與脂肪性肝炎得分的圖，其中p < 0. 0003單向ANOVA，而**指示雙尾t檢驗p < 0. 01。圖3顯示正常肝臟、脂肪變性、脂肪性肝炎和肝硬化樣品中的FAS表達。
本公開內容實施方式的詳述本公開內容包括用于檢測受治療者中肝臟病況的方法和組合物。所述病況的檢測可用于改善受治療者中疾病的診斷和/或治療。所述方法可以定性方式執(zhí)行，諸如通過檢測處于或高于一定水平的FAS表達?？蛇x地，所述方法可以定量方式執(zhí)行，諸如通過測量 FAS表達的水平或量。本公開內容包括檢測受治療者肝臟中升高的FAS的方法。在一些實施方案中，所述方法可包括分析一個或多個肝臟細胞中的FAS表達。在其他實施方案中，所述方法可包括分析已從肝臟中釋放的FAS，諸如受治療者體液中的FAS。在其中所述體液是血清的實施方案中，F(xiàn)AS水平在本文中公開為不與ALT、 AST、 ALP、總膽紅素、總蛋白質或白蛋白水平相關聯(lián)。在進一步的實施方案中，所述血清已在4t:儲存了約1、約1至2、約2、約2-3、約3、約3-4或約4天。分析的非限制性實例包括檢測或測量受治療者肝臟中的FAS表達或FAS水平。所述檢測或測量可直接進行，諸如通過檢測FAS蛋白質或其片段。可選地，所述檢測或測量可間接進行，諸如經(jīng)由指示FAS表達的中間物。所述檢測或測量可以是對樣品進行，諸如來自受治療者的一個或多個肝臟細胞樣品或來自受治療者的體液樣品。在一些實施方案中，所述受治療者是人類。在其他實施方案中，所述受治療者是非人類動物，諸如易感肝臟代謝綜合征的那些(參見Hansen, R.J.等人."Avian fatty liverhemorrhagic syndrome :a comparative review，，(禽類月旨肪月干出血性綜合征的比較回顧)Adv Vet Sci Comp Med 37:451-468,1993。)非限制性實例包括鳥類(如雞、鴨、鵝和其他農業(yè)上重要的禽類物種)、哺乳動物(如牛、豬和其他農業(yè)上重要的四足動物(quadr即eds))和人類伴侶動物(如貓、狗等)。在一些實施方案中，所述受治療者是人類患者，諸如非肥胖人員，其通常將具有低于肥胖人員的血清FAS水平的血清FAS水平。因此，非肥胖人員中升高的血清FAS水平指示存在脂肪變性或脂肪性肝炎。此外，具有肝病或病理的肥胖人員將通常比具有相同疾病或病理的非肥胖人員擁有更高的血清FAS水平。因此，具有炎性肝病諸如病毒性肝炎的患者中的高血清FAS水平可指示存在與所述炎性疾病聯(lián)合的脂肪變性或脂肪性肝炎。
在進一步的實施方案中，受治療者的升高的FAS表達是由于通過肝臟更具體地肝臟細胞的表達增加。因此在一些實施方案中，受治療者沒有貢獻于可檢測的或可測量的升高的表達水平的其他FAS表達來源。增加的FAS表達的可選來源的非限制性實例見于癌癥或其他惡性腫瘤病例。因此在一些實施方案中，受治療者是未患有或被認為不具有癌癥或惡性腫瘤的那些受治療者。換言之，受治療者是已被診斷或另外地確定或懷疑為無癌癥的那些受治療者。因此本公開內容的一個實施方案是檢測受治療者肝臟中升高的脂肪酸合酶(FAS) 的方法。所述方法包括檢測或測量來自被懷疑或診斷為無癌癥的受治療者的體液樣品中的脂肪酸合酶(FAS)的水平。升高的FAS水平指示所述受治療者肝臟中升高的FAS。
如本文所公開的，樣品中升高的FAS水平指示所述受治療者肝臟中升高的FAS。不受理論束縛和提供以加強對本公開內容的理解，本文描述的方面和實施方案部分是基于這樣的認識升高的FAS表達發(fā)生于具有肝臟病況，像作為非限制性實例的脂肪變性和脂肪性肝炎的受治療者中。因此，在具有肝臟病況的受治療者中，檢測或測量升高的FAS表達可用于指示存在所述病況。因此升高的水平可以是受治療者中存在所述病況的標志或指示。
見于脂肪變性和脂肪性肝炎的FAS表達增加指示，脂肪蓄積的來源至少部分是源自于肝臟中的從頭合成。因此本公開內容還包括通過檢測或測量一個或多個肝臟細胞、肝臟細胞勻漿物或含有FAS的肝臟細胞提取物的樣品中的FAS表達，來檢測被稱為脂肪肝或脂肪變性的肝臟病況的方法。所述樣品可以來自被發(fā)現(xiàn)或診斷為具有變大的肝臟和/或懷疑具有脂肪變性的受治療者。此類樣品可用于所述方法，以基于FAS表達將受治療者診斷或鑒別為具有或患有脂肪變性。在其他實施方案中，具有脂肪變性的受治療者中升高的 FAS水平可指示存在未被肝臟活檢鑒別出的脂肪性肝炎。本公開內容的方法允許技術人員通過與肝臟活檢聯(lián)合使用的同一標準來區(qū)分非酒精性脂肪性肝炎(NASH)和酒精性脂肪性肝炎。本公開內容還包括通過檢測或測量已從肝臟中釋放的FAS，來檢測被稱為脂肪性肝炎的肝臟病況的方法。在一些實施方案中，所述釋放是由于肝細胞損傷，其將FAS釋放到體液諸如血清中。所述方法可包括分析所述體液樣品，以基于所述液體中升高的FAS水平將受治療者診斷或鑒別為具有或患有脂肪性肝炎。因此一個非限制性實施方案包括使用來自受治療者的血清樣品檢測或測量升高的FAS水平，其指示存在脂肪性肝炎。任選地，所述方法可與一種或多種另外的測定聯(lián)合執(zhí)行，所述另外的測定諸如檢測如本文所述的肝癌或脂肪變性。在相關的方面，本公開內容包括檢測或測量肝臟中FAS表達的方法。在一些實施方案中，所述方法可包括檢測或測量包含肝臟細胞、肝臟細胞勻漿物或含有FAS的肝臟細胞提取物的樣品中FAS蛋白質或其片段的量。任選地，所述樣品是肝臟活檢諸如穿剌活檢的全部或部分。在一些實施方案中，對所述樣品進行癌癥存在篩選，諸如在經(jīng)由免疫組織化學方法檢測FAS水平之前。任選地還可通過組織學手段，諸如常規(guī)蘇木精和伊紅染色后進行分析，來對所述樣品進行脂肪變性存在的篩選。在其他實施方案中，所述方法可包括檢測或測量受治療者的體液樣品中FAS蛋白質或其片段的量。如本文所用的，F(xiàn)AS蛋白質片段是指示FAS蛋白質存在或水平的FAS蛋白質部分。在一些實施方案中，所述片段被也檢測FAS蛋白質的試劑檢測。
在一些實施方案中，通過與沒有肝臟病況并因而沒有肝病或病理的正常受治療者中的FAS表達比較，可將檢測或測量的FAS表達水平確定為升高的。在其他實施方案中，所述比較可以是在具有FAS的正常生理表達的受治療者中。當公開的方法包括確定FAS表達水平時，所述水平可被確定為相對于沒有肝臟病況的受治療者中的水平是升高的。這允許將所檢驗的受治療者鑒別為具有肝臟病況，諸如肝病或病理?？蛇x地，所述水平可被確定為相對于沒有肝病或病理的受治療者中的水平是相同的，因此是未升高的。這將所檢驗的受治療者鑒別為不具有肝臟病況。
因此，本公開內容的實施方案包括通過分析FAS表達，來鑒別受治療者中肝臟病況諸如肝病或病理存在或不存在的方法。所述方法可包括檢測或測量來自所述受治療者的體液樣品中的脂肪酸合酶(FAS)的水平，其中
i)相對于無肝病或病理的受治療者中的水平升高的FAS水平鑒別所述受治療者中肝臟病況的存在，禾口 ii)相對于無肝病或病理的受治療者中的水平相同的FAS水平鑒別所述受治療者中肝臟病況的不存在。在一些實施方案中，所述受治療者被懷疑患有特征為升高的FAS水平的肝病或病理，諸如脂肪性肝炎，包括非酒精性脂肪性肝炎或酒精性肝炎。在其他實施方案中，所述疾病或病理的特征不是升高的FAS水平，諸如肝臟毒性；肝臟的病毒感染，或病毒性肝炎；自身免疫性肝炎；隱源性肝硬化；低灌注后的肝壞死；和其他疾病造成的肝炎。在其他實施方案中，所述受治療者被懷疑患有肝病或病理，任選地在肝硬化癥狀發(fā)作之前。
在所公開的方法中，可能受治療者具有脂肪肝并發(fā)一種或多種另外的病況，所述病況使血清或一種或多種其他體液中FAS升高。當FAS的升高是來自肝臟時，所述另外的病況是本文所述的肝臟病況。如果所述FAS升高是來自非肝臟來源，則技術人員可通過本領域已知的方法，諸如作為非限制性實例的肝臟組織學(或組織病理學)檢查，來區(qū)分所述脂肪肝病況和非肝臟病況。在其中所述疾病或病理是肝臟毒性的實施方案中，其可能是由于受治療者接觸外源藥物或化學劑。在一些情形中，所述藥物或化學劑是四環(huán)素或四氯化碳?？蛇x地，和在所述疾病或病理是由于病毒感染或病毒性肝炎時，其可由選自甲型肝炎、乙型肝炎、丙型肝炎或丁型肝炎的病毒造成。在其他實施方案中，所述病毒是巨細胞病毒或皰疹病毒，或系統(tǒng)性或局部性病毒感染。在其中所述疾病或病理是自身免疫相關或基于自身免疫的實施方案中，其可能是由于系統(tǒng)性紅斑狼瘡、硬皮病、CREST綜合征或其他自身免疫疾病。當所述疾病或病理是低灌注后的肝壞死時，其可以是嚴重的低血壓、肝臟的機械性損傷或血管危象(vascular compromise)。可選地，所述疾病或病理可以是由于潰瘍性結腸炎、克羅恩病、硬化性膽管炎或隱源性肝硬化。在進一步的實施方案中，所述疾病或病理可以是因惡性疾病的肝臟病灶性或彌漫性浸潤。此類惡性疾病的非限制性實例包括肝細胞癌、白血病、淋巴瘤或其他原發(fā)性或轉移性惡性腫瘤。如本文所述的，所公開的方法可通過使用結合FAS蛋白質或其片段的試劑來實施。在一些實施方案中，所述試劑是針對FAS的抗體，諸如針對人類脂肪酸合酶(hFAS)的抗體。如本文所用的，"抗體"指與特定抗原免疫學反應的免疫球蛋白分子和其片段。在一些情形中，所述抗體可與來自人類癌細胞的FAS反應，并且還與來自非轉化細胞的肝臟FAS 反應。在一些情形中，單克隆抗體或其FAS結合片段可用于所公開的方法。
術語"抗體"指多種此類分子，并且不限于單個類型的抗體的均一群體。術語"抗體"還包括遺傳加工形式諸如嵌合抗體(如，人源化鼠抗體)、異種軛合物 (heteroconjugate)抗體(如，雙特異性抗體)和重組單鏈Fv片段(scFv)和二硫化物穩(wěn)定的(dsFv)Fv片段(參見，例如美國專利5， 747， 654)。術語"抗體"還包括抗體的抗原結合形式(如，F(xiàn)ab' 、F(ab' )2、Fab、Fv禾口rlgG。另夕卜參見，Pierce Catalog and Handbook (Pierce 目錄和手冊)，1994-1995 (Pierce Chemical Co. ， Rockford， 111.)。術語"抗-hFAS"指針對hFAS產(chǎn)生的抗體。如本文所述的與FAS或hFAS免疫學反應的抗體可通過已知的方法諸如用FAS或 hFAS多肽免疫接種產(chǎn)生抗體的動物來產(chǎn)生。單克隆抗體可通過本領域技術人員熟悉的各種技術獲得。制備此類單克隆抗體的技術的描述可參見，如，Stites等人(編輯)BASIC AND CLINICAL IMMUNOLOGY(基礎和臨床免疫學)(第4版)，Lange Medical Publications, Los Altos, Calif.，和其中引用的參考文獻；Harlow&Lane，同上;Goding， MONOCLONAL ANTIBODIES PRINCIPLES AND PRACTICE (單克隆抗體原理和實踐)(第2版)，Academic Press, New York, N. Y. (1986) ;Kohler&Milstein， Nature 256:495497(1975);和特別是 (Chowdhury， P. S.等人Mol. Immunol. 34 :9 (1997))，其討論了一種產(chǎn)生單克隆抗體的非限制性方法。制備單克隆抗體的方法包括用編碼期望的免疫原(在本發(fā)明情形中為FAS多肽)
的核酸序列免疫接種動物。此技術具有超過基于蛋白質的免疫接種的至少兩個優(yōu)點避免
了對蛋白質純化的需要；和所述免疫原進行正確的翻譯后修飾的增加的可能性。在一些實施方案中，所述抗體可被稱為是FAS蛋白質或其片段"特異性的"或與
FAS蛋白質或其片段"特異性免疫反應"。這些術語指抗體在結合反應中與FAS諸如人類FAS
或其片段反應的能力。所述反應可在存在其他蛋白質、細胞或材料時確定FAS的存在或量。
在技術專業(yè)人員期望的測定條件包括本文公開的非限制性條件下，所述抗體優(yōu)先結合FAS，
而不以顯著或可檢測的方式結合樣品中的其他因子。本公開內容的非限制性實施方案利用
其中所述抗體或其可選形式選擇性結合而產(chǎn)生信號的條件，所述信號是本底信號或噪音的
至少兩倍、三倍、四倍、五倍、六倍、七倍、八倍、九倍、或至少10倍至100倍。本底信號或噪
音可包括與其他蛋白質或生物材料的低水平交叉反應性。本公開內容的FAS特異性抗體的可選形式可通過技術人員已知的方法容易地產(chǎn) 生。產(chǎn)生抗體的抗原結合片段的能力是公知的，并可用于產(chǎn)生用于如本文所公開的用途的雙價F(ab' )2和單價Fab片段。如本文所用的，"Fab"指抗體的雙鏈結合片段，其包含至少功能完整的輕鏈和重鏈可變域。另外，產(chǎn)生抗體的雜合(hybrid)、嵌合、改變的、重組(包括單鏈)或人源化形式的方法也是技術人員已知的。這些抗體形式可考慮本文公開的抗體和單克隆抗體的衍生物。在一些實施方案中，所述可選形式是"單鏈Fv"或"scFv"，其指其中傳統(tǒng)兩條鏈的抗體的重鏈和輕鏈被接合在一起形成具有單個結合位點的一條鏈的抗體。通常，在所述兩條鏈之間置有連接體肽，以允許可變區(qū)進行正確的折疊和定位來生成活性結合位點。術語 "連接體肽"指抗體結合片段(如，F(xiàn)v片段)中的多肽鏈，其作用是間接聯(lián)接可變重鏈與可變輕鏈。更通常地，"連接體"是用于將所述抗體接合至另一分子的分子。連接體能夠與所述抗體和與所述其他分子形成共價鍵。合適的連接體是技術人員公知的，并且包括但不限于直鏈或支鏈碳連接體、雜環(huán)碳連接體或肽連接體。當抗體和另一分子是多肽時，所述連接體可通過其側基(如，通過與半胱氨酸的二硫鍵)接合至組成氨基酸?？蛇x地，所述連接體將接合至末端氨基酸的a碳氨基和羧基基團。另外的衍生形式包括已被軛合至其他化學部分的本公開內容的抗體和其可選形式。非限制性實例包括標記的抗體或其可選形式。術語"標記"、"可檢測地標記"或"用可檢測的標志物標記"指能夠被檢測(直接或間接)以指示"被標記的"分子的存在的抗體組合物。檢測可定量或定性進行。因此標記產(chǎn)生指示存在被標記的分子的可檢測信號，并且本公開內容的被標記的抗體可借助所述標記檢測。合適的標記包括結合對的一個成員(諸如生物素_親和素或生物素_鏈霉親和素結合對中的生物素)、放射性同位素、發(fā)色團、酶(如，辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶和ELISA中通常使用的其他酶)、底物、染料、熒光分子(如，熒光素異硫氰酸酯、得克薩斯紅、若丹明、綠色熒光蛋白和類似熒光分子)、化學發(fā)光部分、磁 ?；蛑?、生物發(fā)光部分、量熱標記(諸如膠體金)和類似標記。同樣地，標記是通過分光鏡、光化學、生物化學、免疫化學、電學、光學或化學手段直接或間接可檢測的任何組合物。在一些實施方案中，所述標記產(chǎn)生可視信號，所述可視信號可通過視覺檢查諸如通過肉眼檢測。
檢測此類標記的手段是技術人員公知的。例如，放射性標記可使用照相膠片或閃爍計數(shù)器檢測，熒光標志物可使用光檢測器檢測發(fā)射的光照來檢測。酶標記通常通過向酶提供底物并檢測酶作用于所述底物產(chǎn)生的反應產(chǎn)物來檢測，而比色標記只需通過肉眼觀察有色的標記來檢測。本公開內容的抗體和其可選形式還可通過已知的方法和手段軛合于固相支持物，諸如但不限于，玻璃、塑料、合成膜。其他非限制性實例包括珠、粒子、量桿、纖維、過濾器、培養(yǎng)皿、ELISA(酶聯(lián)免疫吸附測定)板、微滴定板、硅烷或硅酸鹽支持物，諸如載玻片、和器皿、孔或容器以及其側壁。所述抗體的此類固定形式可用于本文公開的檢測方法。
本公開內容的抗體和其可選形式還可配制成組合物。所述組合物還可包含用于檢測FAS或其片段的一種或多種其他試劑。非限制性實例包括抗體結合于其關聯(lián)FAS的復合物和抗體與用于基于抗體的檢測方法的其他試劑的組合。其他實例包括與其他FAS結合抗體或檢測劑的混合物?？贵w和其可選形式與其他檢測劑的組合還可以是用于檢測FAS的制造物品諸如檢驗設備的一部分。用于檢測或測量FAS或其片段的方法不受設計的限制。非限制性實例包括如本文所述的利用本公開內容的抗體和其可選形式的方法，和基于蛋白質印跡或其他免疫印跡、ELISA、側向流動(lateral flow)設備、三明治測定、顯微鏡目視觀察、競爭性和非競爭性免疫測定、免疫酶測定(immunoenzymetric assay)、免疫熒光、免疫磁性選擇和流式細胞術(包括通過多色流式細胞術檢測)原理的方法。另外的免疫測定形式參見Harlow和 Lane (1988) Antibodies, A Laboratory Manual (抗體實驗室手冊)，ColdSpring Harbor Publications, New York。本公開內容的方法用于定性或定量檢測或測量FAS在本文所述的樣品或"檢驗樣品"中的存在或不存在。如本文所用的，"樣品"或"檢驗樣品"指分離自被懷疑具有升高的FAS或包括升高的FAS作為可檢測征兆的病況的個體的樣品?？蛇x地，所述術語指已知含有FAS諸如人類 FAS的樣品，以在所公開的檢測方法中用作對照，或用于所公開的檢測方法以確認FAS的存在或定量FAS的量。樣品可通過任何適當?shù)氖侄问占?，包括在含有細胞的樣品情形中的?檢和穿剌活檢，和在含有血清的樣品情形中的采血。本公開內容的樣品還可以是作為非限制性實例的肝臟細胞勻漿物或提取物。樣品還可以是血清稀釋液，諸如在測定前用樣品稀釋劑稀釋。所述稀釋劑可以是技術人員期望的任何合適溶劑。在一個實施方案中，本公開內容的方法是基于使用結合FAS或其片段以與之形成復合物的捕獲試劑。所述捕獲試劑可以是如本文所述的單克隆抗體或其可選形式?？蛇x地，所述試劑可以是結合FAS的另一抗體，包括但不限于結合多種FAS和其他細胞組分的多克隆或重組抗體。捕獲試劑可固定于固相支持物上，任選地在接觸本公開內容的樣品之前，如本文對本公開內容的抗體所述的。當然，結合FAS蛋白質和FAS特異性抗體的復合物而不是單獨的抗體的捕獲劑也可用于實施本公開內容。無論是否與捕獲試劑一起使用，本公開內容還包括結合FAS蛋白質或其片段以直接或間接指示其存在或量的檢測劑。所述檢測劑可以是結合FAS蛋白質或其片段的本公開內容的抗體或其可選形式。結合后，檢測劑與其結合配偶體形成結合復合物。所述檢測劑可被可檢測地標記，以使所述標記在結合所述檢測劑之后指示關聯(lián)結合配偶體和因此的 FAS蛋白質或其片段的存在或量?？蛇x地，所述檢測劑本身被可檢測地標記的第二劑結合。
當與捕獲試劑聯(lián)合使用時，形成了包含所述試劑、FAS蛋白質或其片段和檢測劑的三明治復合物。可于此三明治復合物之前形成包含捕獲試劑和FAS蛋白質或其片段的復合物，此復合物接觸檢測劑形成所述三明治復合物?？蛇x地，可于所述三明治復合物之前形成包含檢測試劑和FAS蛋白質或其片段的復合物，此復合物隨后接觸捕獲試劑形成所述三明治復合物。所述三明治復合物以及其他形式的特異性可通過捕獲試劑、檢測試劑或二者引入。本公開內容的實施方案包括使用下列捕獲試劑和檢測試劑的組合結合FAS蛋白質或其片段的多克隆抗體，和結合FAS蛋白質或其片段的單克隆抗
體；結合包含F(xiàn)AS蛋白質或其片段的復合物的多克隆抗體，和結合FAS蛋白質或其片段的單克隆抗體；結合FAS蛋白質或其片段的單克隆抗體，和結合FAS蛋白質或其片段的多克隆抗體；結合FAS蛋白質或其片段的單克隆抗體，和結合包含F(xiàn)AS蛋白質或其片段的復合物的多克隆抗體；禾口結合FAS蛋白質或其片段的單克隆抗體，和結合FAS蛋白質或其片段的單克隆抗體。本公開內容的方法還包括競爭性結合測定作為實施方案。這些包括如本文所述的且與本領域已知的競爭性測定方法類似的、使用FAS蛋白質或其片段的標記形式，所述標記形式競爭與檢測劑和/或捕獲試劑的結合。本公開內容提供的方法還可全部或部分自動化。用于本公開內容的方法的材料理想地適于制備根據(jù)公知的程序產(chǎn)生的試劑盒。本公開內容包括試劑盒，所述試劑盒包含如本文所述的用于檢測和/或定量樣品中的FAS蛋
白質或其片段的劑。此類試劑盒任選地包含所述劑和/或試劑與和本公開內容的方法中所
述試劑盒的用途或所述試劑盒的適用性相關的鑒別描述或標簽或說明。此類試劑盒可包含
容器，每個容器具有所述方法中使用的各種劑和/或試劑中的一種或多種(任選地以濃縮
的形式)，包括，例如，檢測劑和/或捕獲試劑的預固定形式。通常還將包括一組說明或試劑
標識。其他示例性試劑盒含有用于實施所公開的方法的設備或固相支持物，諸如但不限于，
側向流動設備、試紙條(test strip)、珠、膜或容器的包被表面、器皿或孔。所述試劑盒還可任選地包括對照樣品，諸如具有免疫反應性FAS蛋白質或其片段
的已知樣品。對照可以已知的量存在，以便使用用于稀釋樣品的樣品稀釋劑稀釋而用作外
部對照，或被加入實際樣品而用作內部對照，任選地用于確定所述測定在被檢驗的樣品類
型環(huán)境中的靈敏度。所述試劑盒可包含用于單次測定或用于多次測定的材料。因此，本公開內容的實施方案包括這樣的方法，所述方法包括形成和然后檢測或
測量FAS結合抗體或其FAS結合片段和FAS蛋白質或其片段之間的復合物。在一些實施
方案中，所述復合物可通過使FAS結合抗體或其FAS結合片段接觸可含有FAS蛋白質或其
片段的樣品來形成。所述接觸在如果樣品中存在FAS，則允許形成所述復合物的條件下發(fā)
生。如本文所公開的，所述樣品可以是含有肝臟細胞的樣品或肝臟細胞衍生的樣品或體液
樣品。在進一步的實施方案中，所述樣品可以是含有FAS的陽性對照。在一些情形中，檢測或測量通過使用酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)或放射免疫測定
執(zhí)行?？蛇x地，檢測或測量是通過使用側向流動設備，其中可在所述側向流動設備的固相組分上分離如上文所述的復合物。在另一方面，本公開內容包括檢測受治療者肝臟中的脂肪蓄積的方法。在一些實
施方案中，所述方法可包括檢測或測量來自受治療者的包含一個或多個肝臟細胞、肝臟細
胞勻漿物或含有FAS的肝臟細胞提取物的樣品中的FAS表達。FAS表達水平可被確定為如
本文所述的升高。升高的水平可用于指示受治療者肝臟中從頭合成的脂肪的蓄積。在進一步的實施方案中，此方法還可包括檢測肝臟炎癥和/或肝細胞損傷。不存
在炎癥或損傷指示存在脂肪變性，而存在炎癥或損傷指示存在脂肪性肝炎。在另外的實施方案中，指示存在脂肪蓄積的升高的FAS表達水平還可用于指示大
于約5%的肝臟總重量，或肝臟小葉中多于約30%的肝臟細胞具有脂肪沉積。所公開的方法可包括另外的操作。在一些實施方案中，所述另外的操作是將FAS
表達水平傳達至所述受治療者。在其他實施方案中，所述另外的操作是請求或接收用于檢
測或測量FAS表達的付款。現(xiàn)在已大體上列舉了本公開內容，通過參考下列實施例將更易于理解本公開內容，所述實施例是通過例證方式提供的，除非指明，并不意于限制本公開內容。
實施例實施例1 : 為了檢查脂肪變性、脂肪性肝炎和FAS表達之間的關系，用單克隆抗_人類FAS抗體以免疫組織化學研究了來自38名肥胖受治療者的穿剌活檢中的FAS表達。脂肪變性、脂肪性肝炎和FAS表達半定量分級為0-4+，增幅為0. 5。數(shù)據(jù)分析揭示脂肪變性和FAS表達最佳地被分成三類0-0. 5+，其代表陰性或很少的表達，1. 0-2. 5+，其指示輕度至中度的表達，和3. 0-4. O，指示強烈表達。圖2顯示了此研究的結果。圖2，版塊A比較了脂肪性肝炎和脂肪肝之間的關聯(lián)。如所預期的，沒有脂肪肝的患者(0-0. 5+)幾乎沒有脂肪性肝炎，而具有顯著的脂肪變性的那些患者(3.0-4.0+)具有最高的脂肪性肝炎水平，p〈0. 0001(單向AN0VA分析，Prism 4.00 for Windows,Gr即hPad Software, San Diego California USA， www. graphpad. com)。這些發(fā)I見與已知的月旨肪月干禾口脂肪性肝炎之間的關聯(lián)一致(2)。圖2，版塊B比較了脂肪肝(脂肪變性)和FAS表達之間的關系。增加的脂肪變性和FAS表達之間存在關聯(lián)(p = 0. 011)。不受理論束縛和提供以加強對本公開內容的理解，這些結果表明肝臟中蓄積的脂肪的一部分或大部分可能是肝臟中從頭脂肪酸合成的產(chǎn) 物，而不代表脂肪酸從脂肪組織向肝臟的動員和運輸。圖2，版塊C比較了 FAS表達與活動性脂肪性肝炎。增加的FAS表達和存在脂肪性肝炎之間具有強烈的關聯(lián)(P = 0. 0003)。因此，與脂肪肝類似，F(xiàn)AS表達也與存在脂肪性肝炎高度關聯(lián)。同樣不受理論束縛和提供以加強對本公開內容的理解，這些結果表明脂肪性肝炎和升高的血液和血清FAS水平之間存在關聯(lián)。
實施例2 : 圖3是說明FAS表達與脂肪變性、脂肪性肝炎和肝硬化的關聯(lián)的一系列顯微照片。圖3A是蘇木精和伊紅染色的福爾馬林固定石蠟包埋的肝臟切片，所述肝臟是沒有脂肪變性或脂肪性肝炎跡象的組織學上尋常的肝臟。在3B中，大致連續(xù)的正常肝臟活檢切片用抗-人類FAS小鼠單克隆抗體染色。此肝臟具有輕微的FAS反應性，如對應于FAS表達的磚色染色所示(箭頭)。相反，圖3C是蘇木精和伊紅染色的具有嚴重脂肪變性的肝臟的切片。應注意到代表甘油三酯(triglyeride)液滴的大的圓形空間，甘油三酯充盈了肝臟細胞(箭頭)。這是大泡性脂肪變性的實例。此外，還有少量具有小泡的細胞，所述小泡賦予細胞質"肥皂泡"外觀，指示小泡性脂肪變性組成。圖3D說明了相同活檢中FAS的免疫組織化學。應注意到具有大量甘油三酯的細胞(箭頭)中FAS的強烈細胞質染色，其指示與3B中正常肝臟相比FAS表達的上調。脂肪性肝炎顯示于圖3E。應注意到主要的大泡性脂肪變性區(qū)域中肝細胞之間的炎癥病灶(箭頭)。 3F中FAS的免疫組織化學染色在所有肝細胞中顯示強烈的FAS細胞質染色，甚至參與炎癥的肝細胞中也如此(箭頭)。具有脂肪性肝炎的患者可繼續(xù)發(fā)展肝硬化。圖3G是蘇木精和伊紅染色的來自具有晚期肝硬化的患者的肝臟活檢，所述晚期肝硬化是在脂肪性肝炎環(huán)境中發(fā)展的。應注意到造成肝硬化的結節(jié)性外觀的致密的纖維狀疤痕(箭頭)。如圖3H中所示，此硬化肝臟中保持高FAS表達水平(箭頭)。總之，高FAS表達水平顯示與脂肪變性和脂肪性肝炎關聯(lián)，直到在具有NASH的患
者中發(fā)展確定的肝硬化。實施例3 : 為了確定具有可檢測的循環(huán)FAS的脂肪變性或脂肪性肝炎之間的關系，測量了丟棄的手術前血清中的FAS，所述血清來自經(jīng)歷病態(tài)肥胖癥減肥手術的16名患者。此外，還對這些患者中的12名執(zhí)行手術肝臟活檢，以評估脂肪變性或脂肪性肝炎的存在。血清FAS水平使用單克隆抗_人類FAS三明治ELISA測定進行測量。與20名正常受治療者相比，所述16名肥胖患者具有更高的血清FAS水平，如圖4A所示(3. 5±1. 17ng/ml，肥胖；0. 17±0. 07ng/ml，正常；p = 0. 003，雙尾不配對t檢驗，Gr即hPad Prism version4. 00 forWindows, GraphPad Software, San Diego California USA，www. graphpad. com)。
對于可從手術獲得其肝臟組織的12名患者，基于脂肪變化、炎癥和纖維化的程度，使用0-4+的半定量量度將脂肪性肝炎和脂肪變性分級。增加的血清FAS水平與脂肪性肝炎而不是脂肪變性有關(p = 0. 03，單尾t檢驗，Prism 4. O，Gr即h Pad Software)。圖4B是與沒有脂肪性肝炎的患者相比，具有脂肪性肝炎的患者中升高的血清FAS水平的圖繪。
對具有血清FAS測量的17名患者，進行了一組肝臟功能檢驗。所述檢驗包括ALT、AST、 ALP、總膽紅素、總蛋白質和白蛋白。使用皮爾森相關性檢驗(Pearsons correlationtest)，這些分析物未顯示與血清FAS值的顯著相關性。這表明血清FAS水平很可能獨立于這組常規(guī)的肝臟功能研究。本文引用的所有參考文獻，包括專利、專利申請和公布，據(jù)此通過引用整體并入本文，無論前面是否明確將其并入。現(xiàn)在已充分提供了本公開內容，本領域技術人員應理解，可在大范圍內的等效參數(shù)、濃度和條件下執(zhí)行本公開內容，而不背離本公開內容的精神和范圍，并且無需過多的實驗。雖然已聯(lián)系本公開內容的具體實施方案對其進行了描述，但是應理解其能夠進行進一步的修飾。本申請意于涵蓋本公開內容的任何變化、用途或修改，所述變化、用途或修改一般依據(jù)所公開的原理并包括對本公開內容的如下變更——諸如落入本公開內容所屬的領域內已知或慣例的做法的變更，以及諸如可以應用于上文列舉的必要特征的變更。
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權利要求
一種檢測受治療者肝臟中升高的脂肪酸合酶(FAS)的方法，所述方法包括檢測或測量來自懷疑為無癌癥或診斷為無癌癥的受治療者的體液樣品中的脂肪酸合酶(FAS)的水平，其中升高的FAS水平指示所述受治療者肝臟中升高的FAS。
2. 如權利要求1所述的方法，其還包括鑒別所述受治療者中肝病的存在或不存在，其中i) 相對于無肝病受治療者中的水平升高的FAS水平鑒別所述受治療者中肝病的存在，和ii) 相對于無肝病受治療者中的水平相同的FAS水平鑒別所述受治療者中肝病的不存在。
3. 如權利要求2所述的方法，其中所述肝病特征為升高的FAS水平，該肝病是脂肪性肝炎，諸如非酒精性脂肪性肝炎或酒精性肝炎；或所述肝病特征不是升高的FAS水平，該肝病諸如肝臟毒性；肝臟的病毒感染，或病毒性肝炎；自身免疫性肝炎；隱源性肝硬化；低灌注后的肝壞死；和其他疾病造成的肝炎。
4. 如權利要求3所述的方法，其中所述肝臟毒性是由于受治療者接觸外源藥物或化學劑，諸如四環(huán)素或四氯化碳；所述病毒感染或病毒性肝炎選自甲型肝炎、乙型肝炎、丙型肝炎或丁型肝炎，或是由于巨細胞病毒或皰疹病毒的感染；所述自身免疫性肝炎是由于所述受治療者中的系統(tǒng)性紅斑狼瘡、硬皮病或CREST綜合征；所述低灌注后的肝壞死選自嚴重的低血壓、肝臟的機械性損傷或血管危象；或所述其他疾病造成的肝炎選自潰瘍性結腸炎、克羅恩病或硬化性膽管炎。
5. 如權利要求1或2或3或4所述的方法，其中所述受治療者是人類。
6. 如權利要求l或2或3或4或5所述的方法，其中所述體液是血液或血清。
7. 如權利要求1或2或3或4或5或6所述的方法，其中所述檢測或測量包括形成和檢測或測量FAS結合抗體或抗體片段和，如果存在，所述樣品中的FAS之間的復合物。
8. 如權利要求7所述的方法，其中所述檢測或測量是通過ELISA或測向流動試紙條。
9. 如權利要求l或2或3或4或5或6或7或8所述的方法，其還包括將FAS水平傳達至所述受治療者。
10. 如權利要求2或3或4所述的方法，其中所述受治療者被懷疑患有肝病，任選地在肝硬化癥狀發(fā)作之前。
11. 一種檢測受治療者肝臟中升高的脂肪酸合酶(FAS)的方法，所述方法包括檢測或測量包含來自受治療者的肝臟細胞的樣品中的脂肪酸合酶(FAS)表達的水平，其中升高的FAS表達水平指示所述受治療者肝臟中升高的FAS。
12. 如權利要求11所述的方法，其還包括鑒別所述受治療者中肝病的存在或不存在，射i) 相對于無肝病受治療者中的水平升高的FAS水平鑒別所述受治療者中肝病的存在，和ii) 相對于無肝病受治療者中的水平相同的FAS水平鑒別所述受治療者中肝病的不存在。
13. 如權利要求12所述的方法，其中所述肝病選自脂肪性肝炎(非酒精性脂肪性肝炎或酒精性肝炎)；酒精性肝炎；肝臟毒性；肝臟的病毒感染，或病毒性肝炎；自身免疫性肝炎；隱源性肝硬化；低灌注后的肝壞死；和其他疾病造成的肝炎。
14. 如權利要求13所述的方法，其中所述肝臟毒性是由于受治療者接觸外源藥物或化學劑，諸如四環(huán)素或四氯化碳；所述病毒感染或病毒性肝炎選自甲型肝炎、乙型肝炎、丙型肝炎或丁型肝炎，或是由于巨細胞病毒或皰疹病毒的感染；所述自身免疫性肝炎是由于所述受治療者中的系統(tǒng)性紅斑狼瘡、硬皮病或CREST綜合征；所述低灌注后的肝壞死選自嚴重的低血壓、肝臟的機械性損傷或血管危象；或所述其他疾病造成的肝炎選自潰瘍性結腸炎、克羅恩病或硬化性膽管炎。
15. 如權利要求11或12或13或14所述的方法，其中所述受治療者是人類。
16. 如權利要求11或12或13或14或15所述的方法，其中所述體液是血液或血清。
17. 如權利要求11或12或13或14或15或16所述的方法，其中所述檢測或測量包括形成和檢測或測量FAS結合抗體或抗體片段和，如果存在，所述樣品中的FAS之間的復合物。
18. 如權利要求17所述的方法，其中所述檢測或測量是通過ELISA或測向流動試紙條。
19. 如權利要求11或12或13或14或15或16或17或18所述的方法，其還包括將 FAS水平傳達至所述受治療者。
20. 如權利要求12或13或14所述的方法，其中所述受治療者被懷疑患有肝病，任選地在肝硬化癥狀發(fā)作之前。
21. —種檢測受治療者肝臟中脂肪蓄積的方法，所述方法包括檢測或測量包含來自受治療者的肝臟細胞的樣品中的脂肪酸合酶(FAS)表達的水平，其中升高的FAS水平指示所述受治療者肝臟中從頭合成的脂肪的蓄積。
22. 如權利要求21所述的方法，其還包括檢測肝臟炎癥，其中不存在炎癥指示脂肪變性的存在，而存在炎癥指示脂肪性肝炎的存在。
23. 如權利要求21所述的方法，其中所述FAS表達水平指示大于約5%的肝臟總重量，或肝臟小葉中多于約30%的肝臟細胞具有脂肪沉積。
全文摘要
公開了用于檢測受治療者肝臟中升高的脂肪酸合酶(FAS)表達的方法和組合物。所述檢測可以是受治療者的肝臟細胞本身中或體液中的表達。還公開了用于鑒別存在或不存在與升高的FAS相關的肝病或病理的方法。所公開的方法可用包含本文所述的用于檢測FAS表達的試劑的各種組合物實施。
文檔編號G01N33/50GK101720434SQ200880013430
公開日2010年6月2日申請日期2008年2月27日優(yōu)先權日2007年2月27日
發(fā)明者F·P·庫哈杰達, S·M·邁杰豪西申請人:菲思根診斷學有限公司

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