一種磷酸可待因的藥物組合物及其醫(yī)藥用圖
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種磷酸可待因的藥物組合物及其醫(yī)藥用途，本發(fā)明提供的磷酸可待因的藥物組合物中含有磷酸可待因和一種結(jié)構(gòu)新穎的天然產(chǎn)物化合物(Ⅰ)，磷酸可待因、化合物(Ⅰ)單獨(dú)作用時(shí)，對急性胃潰瘍損傷具有保護(hù)作用；磷酸可待因和化合物(Ⅰ)聯(lián)合作用時(shí)，對急性胃潰瘍損傷的保護(hù)作用進(jìn)一步增強(qiáng)，可以開發(fā)成治療急性胃潰瘍損傷的藥物，與現(xiàn)有技術(shù)相比具有突出的實(shí)質(zhì)性特點(diǎn)和顯著的進(jìn)步。
【專利說明】
一種磷酸可待因的藥物組合物及其醫(yī)藥用途
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及磷酸可待因的新用途，具體涉及磷酸可待因的藥 物組合物及其在急性胃潰瘍損傷中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 磷酸可待因化學(xué)名稱為17-甲基-3-甲氧基-4,5a-環(huán)氧-7,8_二去氫嗎啡喃-6a-醇 磷酸鹽倍半水合物，可做治療頻繁劇烈干咳的藥物。
[0003] 迄今為止，尚未見磷酸可待因及其藥物組合物與急性胃潰瘍損傷的相關(guān)性報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于提供一種磷酸可待因的藥物組合物，該藥物組合物中含有磷酸 可待因和一種天然產(chǎn)物，磷酸可待因和該天然產(chǎn)物可以協(xié)同治療急性胃潰瘍損傷。
[0005] 本發(fā)明的上述目的是通過下面的技術(shù)方案得以實(shí)現(xiàn)的：
[0006] 一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物（I)，
[0008] -種磷酸可待因的藥物組合物，包括磷酸可待因、如權(quán)利要求1所述的化合物（I) 和藥學(xué)上可以接受的載體，制備成需要的劑型。
[0009] 進(jìn)一步地，藥學(xué)上可以接受的載體包括稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、 崩解劑、吸收促進(jìn)劑、表面活性劑、吸附載體或潤滑劑。
[0010] 進(jìn)一步地，所述劑型包括片劑、膠囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、 膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注射劑、栓劑、噴霧劑、滴劑或貼劑。
[0011]上述化合物（I)的制備方法，包含以下操作步驟：（a)將谷精草粉碎，用80~90%乙 醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水飽和的正丁醇萃 取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步驟(a)中正丁醇取物用 大孔樹脂除雜，先用30 %乙醇洗脫6個(gè)柱體積，再用85 %乙醇洗脫12個(gè)柱體積，收集85 %洗 脫液，減壓濃縮得85%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中85%乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分 離，依次用體積比為100:1、50:1、25:1和12:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個(gè)組分；（d) 步驟(C)中組分4用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為20:1、12:1和2:1的二氯甲烷-甲 醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體 積百分濃度為88%的甲醇水溶液等度洗脫，收集13~16個(gè)柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮 得到化合物(I)。
[0012]進(jìn)一步地，化合物（I)的制備方法中，所述大孔樹脂為D101型大孔吸附樹脂。
[0013] 上述化合物(I)在制備治療急性胃潰瘍損傷的藥物中的應(yīng)用。
[0014] 上述磷酸可待因的藥物組合物在制備治療急性胃潰瘍損傷的藥物中的應(yīng)用。
[0015] 本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)：
[0016] 本發(fā)明提供的磷酸可待因的藥物組合物中含有磷酸可待因和一種結(jié)構(gòu)新穎的天 然產(chǎn)物，磷酸可待因和該天然產(chǎn)物單獨(dú)作用時(shí)，對急性胃潰瘍損傷具有治療作用;二者聯(lián)合 作用時(shí)，對急性胃潰瘍損傷的治療效果進(jìn)一步提高，可以開發(fā)成治療急性胃潰瘍損傷的藥 物。
【具體實(shí)施方式】
[0017] 下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明保護(hù)范 圍。盡管參照較佳實(shí)施例對本發(fā)明作了詳細(xì)說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對 本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實(shí)質(zhì)和范圍。
[0018] 實(shí)施例1:化合物(I)分離制備及結(jié)構(gòu)確證
[0019] 試劑來源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷為分析純，購自上海凌峰化 學(xué)試劑有限公司，甲醇，分析純，購自江蘇漢邦化學(xué)試劑有限公司。
[0020] 分離方法：（a)將谷精草(2kg)粉碎，用85%乙醇熱回流提?。?5LX 3次），合并提取 液，濃縮至無醇味（3L)，依次用石油醚（3L X 3次）、乙酸乙酯（3L X 3次）和水飽和的正丁醇 (3LX3次）萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步驟(a)中 乙酸乙酯萃取物用D101型大孔樹脂除雜，先用30%乙醇洗脫6個(gè)柱體積，再用85%乙醇洗脫 12個(gè)柱體積，收集85%洗脫液，減壓濃縮得85%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中85%乙醇洗 脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為100:1 (12個(gè)柱體積）、50 :1 (10個(gè)柱體積）、25:1 (8個(gè)柱體積)和12:1(8個(gè)柱體積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個(gè)組分；（d)步驟(c)中組 分4用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為20:1(6個(gè)柱體積）、12:1(8個(gè)柱體積)和2:1(6 個(gè)柱體積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵 合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為88 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集13~16個(gè)柱體積 洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到化合物（I) (HPLC歸一化純度大于98% )。
[0021] 結(jié)構(gòu)確證：冊131]\^顯示[]\1+11]+為111/2 439.3538，結(jié)合核磁特征可得分子式為 C30H46〇3，不飽和度為8。核磁共振氫譜數(shù)據(jù)SH(ppm，CDC13，600MHz): H-l (1 ? 62，dd，J = 12 ? 4， 8.9Hz)，H-l(2.11，dd，J=12.4,3.6Hz)，H-2(5.82，ddd，J=10.9,8.9,3.6Hz)，H-3(5.68，d， J = 10.9Hz)，H-5(0.77，d，J=ll .2Hz)，H-6(1.48，m)，H-6(1.63，m)，H-7(1.68，m)，H-7 (1.87，m)，H-9(1.54，d，J = 8.4Hz)，H-ll(4.27，d，J = 8.8,3.3Hz)，H-12(5.28，d，J = 3.3Hz)，H-16(2.43，d，J=13.1Hz)，H-16(2.21，d，J = 13.1Hz)，H-18(2.46，d，J = 8.4Hz)，H-19(1.41，m)，H-20(1.10，m)，H-21(1.28，m)，H-21(1.48，m)，H-22(1.36，m)，H-22(1.51，m)， H-23(1.02，s)，H-24(0.82，s)，H-25(1.19，s)，H-26(1.22，s)，H-27(1.36，s)，H-28(0.87， s)，H-29(0.85，d，J = 6.3Hz)，H-30(0.93，d，J = 6.1Hz)，ll-OH(2.83，br，s);核磁共振碳譜 數(shù)據(jù)8。（口口111，0)(：13，12510^):40.2(012，1-(：)，122.6(01，2-〇，138.3(01，3-〇,36.8((：，4-C)，52.7(CH，5-C)，19.7(CH2,6-C)，38.9(CH 2,7-C)，51.8(C，8-C)，56.1(CH，9-C)，33.2(C， 10-C)，67.9(CH，n-C)，126.7(CH，12-C)，138.2(C，13-C)，66.6(C，14-C)，209.1(C，15-C)， 52.5(CH2，16-C)，52.7(C，17-C)，59.3(CH，18-C)，39.9(CH，19-C)，40.5(CH，20-C)，30.8 (CH2,21-C)，38.8(CH 2,22-C)，26.6(CH3,23-C)，15.7(CH3,24-C)，13.7(CH 3,25-C)，19.7 (CH3，26-C)，14 ? 3 (CH3，27-C)，19 ? 3 (CH3，28-C)，17 ? 2 (CH3，29-C)，20 ? 4 (CH3，30-C)。紅外波譜 表明該化合物含有羥基(3478cm-羰基（1760cm-雙鍵(1663cm-〇和偕二甲基（1380cm- 1) 基團(tuán)。13C-NMR、DEPT和HSQC譜中顯示有30個(gè)碳信號，包括八個(gè)甲基，六個(gè)亞甲基，九個(gè)次甲基 (一個(gè)連氧碳和三個(gè)烯烴碳），以及七個(gè)季碳(一個(gè)羰基，一烯烴碳），以上功能結(jié)構(gòu)再結(jié)合不 飽和數(shù)表明該化合物為五環(huán)三萜結(jié)構(gòu)。 1H-NMR譜結(jié)合HSQC譜顯示的六個(gè)單峰甲基質(zhì)子信號 知1.02(311，8)，0.82(311，8)，1.19(311，8)，1.22(311，8)，1.36(311，8)和0.87(311，8)和兩個(gè)雙 峰甲基質(zhì)子信號知0.85(311，(1，1 = 6.3抱），0.93(311，(1，1 = 6.1抱）以及111-匪1?數(shù)據(jù)表明該化 合物為烏蘇烷型三萜類化合物。從紅外譜中可知結(jié)構(gòu)中含有羥基，根據(jù)HMBC譜中11-OH與C-11的相關(guān)信號以及碳化學(xué)位移確認(rèn)-OH連在C-11位。通過HMBC譜中單烯烴質(zhì)子信號S H 5.28 (111，(1，1 = 3.3抱）與(：-12相關(guān)信號以及(：-12與(：-13的碳化學(xué)位移可以確認(rèn)(：-12與(：-13形成 雙鍵結(jié)構(gòu)。此外，C-2與C-3也形成雙鍵結(jié)構(gòu)，C-15位形成酮基。HMBC譜中H 2-16和Me-27與C-15的相關(guān)性確認(rèn)了C-15位為酮基。綜合氫譜、碳譜、HMBC譜和NOESY譜，以及文獻(xiàn)關(guān)于相關(guān)類 型核磁數(shù)據(jù)，可基本確定該化合物如下所示，立體構(gòu)型進(jìn)一步通過ECD試驗(yàn)確定，理論值與 實(shí)驗(yàn)值基本一致。
[0022]該化合物化學(xué)式及碳原子編號如下：
〇
[0024] 實(shí)施例2:藥理作用
[0025]本實(shí)施例采用乙醇制備小鼠急性胃粘膜損傷模型，測定胃粘膜損傷指數(shù)包括小鼠 胃組織S0D活性、MAD及PEG2含量，觀察藥物對急性胃黏膜損傷的治療作用。
[0026] 1、材料與方法
[0027] 1.1動(dòng)物
[0028]昆明小鼠，（25 ±4)g，雌雄各半，山東中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物中心提供。
[0029] 1.2試劑與樣品
[0030] 磷酸可待因購自中國藥品生物制品檢定所?；衔铮↖)自制，制備方法見實(shí)施例1。 三九胃泰顆粒購自三九醫(yī)藥股份有限公司。超氧化物歧化酶(S0D)試劑盒、丙二醛(MAD)試 劑盒均購自上海藍(lán)基生物科技有限公司。
[0031] 1.3儀器
[0032] 紫外可見分光光度計(jì)(型號:UV-2450/2550)，日本島津公司生產(chǎn)。
[0033] 1.4小鼠分組及模型制備
[0034]選取健康小鼠60只（雌雄各半），隨機(jī)分為6組，分別為空白對照組、模型對照組、陽 性對照組(三九胃泰顆粒)和磷酸可待因組(80mg ? kg-4、化合物（I)組(80mg ? kg-3、磷酸 可待因與化合物（I)組合物組【40mg ? kg^1磷酸可待因+40mg ? kg^1化合物（I)】。模型對照組 和空白對照組給予生理鹽水，其他給藥連續(xù)灌胃l〇d。末次給藥后禁食不進(jìn)水24h，在最后一 次給藥lh后，除空白對照組外，每只均灌胃給無水乙醇，按0.1mL/10g給藥。
[0035] 1 ? 5胃組織S0D活性、MAD含量測定
[0036]胃大體標(biāo)本的制備:動(dòng)物處死后，將其置于冰盒上，快速取全胃，沿胃大彎剪開，用 生理鹽水沖洗胃壁內(nèi)側(cè)，展平置于體顯微鏡下觀察胃粘膜損傷程度。根據(jù)試劑盒說明測定 組織S0D活性、MAD含量測定。
[0037] 1 ? 6胃組織PGE2含量測定
[0038] 取胃組織勻漿2mL，4°C3000rpm離心15min后取上清液，以放射法測定PGE2含量。
[0039] 1.7統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
[0040]用Excel工作表進(jìn)行分析，各試驗(yàn)組與對照組之間采用t檢驗(yàn)進(jìn)行比較。
[0041 ] 2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0042] 2.1對急性胃粘膜損傷模型小鼠胃組織中S0D、MAD、PGE2含量的影響
[0043] 與空白對照組比，模型對照組S0D含量降低(？〈0.05)、1^0含量升高(？〈0.05)、？6￡ 2 含量降低（P〈 〇. 〇 5 )，說明造模成功；與模型對照組比，陽性對照組S 0 D含量顯著升高（P〈 0.01)、1^含量顯著降低(？〈0.01)、？6￡2含量升高(？〈0.05);與模型對照組比，磷酸可待因 與化合物（I)組合物組S0D含量顯著升高(P〈0.01)、MAD含量顯著降低(P〈0.01)、PGE2含量顯 著升高(P〈0.01);與模型對照組比，磷酸可待因組、化合物（I)組SOD含量升高(P〈0.05)、MAD 含量降低(？〈〇.〇5)、？6￡2含量升高(？〈0.05)。
[0044] 試驗(yàn)結(jié)果見表1。
[0045] 表1對急性胃粘膜損傷模型小鼠胃組織中S0D、MAD、PGE2含量的影響
[0046]
[0047] 急性胃粘膜損傷是臨床常見的急癥，近幾年發(fā)現(xiàn)病理機(jī)制主要是內(nèi)源及外源性攻 擊因子和胃粘膜保護(hù)機(jī)制的平衡關(guān)系失衡，目前已證實(shí)，0H?自由基和0?自由基與多種類 型的胃粘膜損傷有關(guān)，研究認(rèn)為〇 ?自由基既參與組織細(xì)胞的損傷過程，也是細(xì)胞正常代謝 的中間產(chǎn)物。由于氧自由基與胃粘膜損傷有關(guān)，即參與組織細(xì)胞的損傷也是細(xì)胞正常代謝 產(chǎn)物。MAD含量的高低間接反映了機(jī)體受氧自由基攻擊的程度，S0D能消除自由基，其活性高 低間接反映了機(jī)體清除氧自由基的能力。PGE2有抑制胃酸分泌的作用，并且能促進(jìn)胃粘液 分泌并增加胃粘膜血流量而發(fā)揮保護(hù)作用，所以其含量高低反映了對胃粘膜的保護(hù)能力。 [0048]上述結(jié)果表明，磷酸可待因、化合物（I)單獨(dú)作用時(shí)，對急性胃潰瘍損傷具有保護(hù) 作用；磷酸可待因和化合物（I)聯(lián)合作用時(shí)，對急性胃潰瘍損傷的保護(hù)作用進(jìn)一步增強(qiáng)，可 以開發(fā)成治療急性胃潰瘍損傷的藥物。
[0049]上述實(shí)施例的作用在于說明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明的保護(hù) 范圍。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換， 而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實(shí)質(zhì)和保護(hù)范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物（I)，2. -種憐酸可待因的藥物組合物，其特征在于:包括憐酸可待因、如權(quán)利要求1所述的 化合物(I)和藥學(xué)上可W接受的載體，制備成需要的劑型。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的憐酸可待因的藥物組合物，其特征在于:藥學(xué)上可W接受的載 體包括稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、崩解劑、吸收促進(jìn)劑、表面活性劑、吸附載 體或潤滑劑。4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的憐酸可待因的藥物組合物，其特征在于:所述劑型包括片劑、 膠囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注射 劑、栓劑、噴霧劑、滴劑或貼劑。5. 權(quán)利要求1所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于，包含W下操作步驟：（a)將谷 精草粉碎，用80~90%乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油酸、乙酸乙 醋和水飽和的正下醇萃取，分別得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃取物；（b) 步驟(a)中正下醇取物用大孔樹脂除雜，先用30%乙醇洗脫6個(gè)柱體積，再用85%乙醇洗脫 12個(gè)柱體積，收集85%洗脫液，減壓濃縮得85%乙醇洗脫濃縮物；（C)步驟(b)中85%乙醇洗 脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為100:1、50:1、25:1和12:1的二氯甲燒-甲醇梯度 洗脫得到4個(gè)組分；（d)步驟(C)中組分4用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為20:1、12:1 和2:1的二氯甲燒-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的 反相硅膠分離，用體積百分濃度為88 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集13~16個(gè)柱體積洗脫 液，洗脫液減壓濃縮得到化合物(I)。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:所述大孔樹脂為D101型 大孔吸附樹脂。7. 權(quán)利要求1所述的化合物（I)在制備治療急性胃潰瘍損傷的藥物中的應(yīng)用。8. 權(quán)利要求2~4任一所述的憐酸可待因的藥物組合物在制備治療急性胃潰瘍損傷的 藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號】A61P1/04GK105968164SQ201610380049
【公開日】2016年9月28日
【申請日】2016年5月31日
【發(fā)明人】蔣靈錕
【申請人】蔣靈錕