專利名稱：：吩噻嗪衍生物色素的檢測方法及用于該方法的顯色劑試劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及卩分瘞。秦書f生物色素的4全測方法、利用吩P塞。秦書f生物色素的纟企測來進行的目的成分的測定方法及用于上述方法的顯色劑試劑。
背景技術(shù)：
：作為目的成分的測定(定性、定量)方法，在實踐中廣泛采用利用氧化還原反應(yīng)的酶法。該方法為例如由名炎測定的目的成分生成氧化物質(zhì)，用氧化酶催化該氧化物質(zhì)與通過氧化生成顯色化合物的顯色劑反應(yīng)，測定生成的顯色的吸光度的方法。該方法中，吸光度的大小對應(yīng)于生成的顯色化合物的量，生成的顯色化合物的量對應(yīng)于生成的氧化物質(zhì)的量，氧化物質(zhì)的量對應(yīng)于目的成分的量。即，通過生成的顯色(生成的顯色化合物)的檢測，以如上所述的氧化還原反應(yīng)為媒介，可間接地測定目的成分。上述酶法中使用的顯色劑有例如特林德(Trinder)試劑及N-(羧曱基氨基羰基)-4，4，-雙(二曱氨基)二苯胺鈉鹽(商品名DA-64;和光純藥公司生產(chǎn))。此外，生成顯色化合物亞曱藍等的吩噻噢衍生物色素的顯色劑已知例如10-(羧甲基氨基羰基)-3,7-雙(二甲氨基)吩噻。秦鹽(商品名DA-67;和光純藥公司生產(chǎn)，以下也稱"DA-67")、10-(乙酰氨基羰基)-3，7-雙(二甲氨基)吩噻嗪、專利文獻3記載的10-(苯羰基)-3,7-雙(二甲氨基)吩噻嗪、專利文獻4記載的10-(3-(甲基羧基氨基)-六曱基-氨基)-吩噻嗪、10-(3-(甲基羧基氨基)-4-曱基-苯基-氨基)-吩噻嗪、10-((3-(曱基羧基氨基曱基)-苯基)-曱氨10基)-吩噻嗪、10-(1-萘基氨基)-吩噻溱、10-(甲基)-吩瘞嗪、10-(苯基氨基)-吩噻溱、10-(甲氨基)-吩噻溱等。吩遂口秦衍生物色素在相對長波長處如590~670nm處有極大吸收，因此其中生成亞甲藍等吩噻。秦衍生物色素的顯色劑如DA-67等由于以下原因而受到重一見。即，如體液那樣的樣品中，除含有目的成分外，還含有各種成分，其中也存在于500nm附近及其以下的波長區(qū)域有吸收的成分。因此，如上所述的酶法中，為避免目的成分以外的成分產(chǎn)生的影響，期望由氧化還原反應(yīng)生成的顯色化合物盡量可在長波長處^r測。因此，如上所述生成在590~670nm處有一及大吸收的吩p塞"秦衍生物色素的DA-67等顯色劑，；陂認為特別有用。然而，例如全血樣品及血細胞樣品那樣的含有血紅蛋白(以下稱"Hb，，)的樣品在約570~630nm處顯示影響色素檢測的程度的吸收，另夕卜，由于Hb的氧化(met化)而有可能在約570670nm處顯示影響吩噻溱衍生物色素檢測的程度的吸收。從而，即便是生成吩噻。秦衍生物色素的如上所述的顯色劑，應(yīng)用于此類樣品時也會擔心其對測定的影響。另外，臨床化學(xué)專用的自動分析裝置檢測波長被固定，例如有分析裝置在610~660nm處無檢觀'J波長，在700nm處有4全測波長。然而，610~670nm處有極大吸收的吩噻。秦衍生物色素因在700nm下的檢測極為困難，因此無法用這種在700nm處有檢觀'J波長的現(xiàn)有的裝置測定。此外，例如呈藍色的亞甲藍通過還原可成為無色的無色亞甲藍。利用這種性質(zhì)，將亞甲藍等吩噻。秦衍生物色素自身作為顯色劑使用，由目的成分生成還原物質(zhì)還原吩，塞。秦衍生物色素，通過測定還原導(dǎo)致的藍色的消失(吩噻溱衍生物色素的減少)也可測定目的成分(專利文獻1及專利文獻2)。然而，即便在該情況下也會產(chǎn)生與上述同樣的問題。專利文獻l:日本特開2000-214152號公報專利文獻2:日本特開2000-214155號7>報專利文獻3:日本特公平4-27839號公報專利文獻4:日本特乂>昭60-33479號7>#艮
發(fā)明內(nèi)容因此，本發(fā)明的目的在于^是供一種吩p塞。秦4汙生物色素檢測方法，其即〗更在比顯示纟及大吸收的波長更長波長處也可^r測p分p塞。秦書f生物色素。本發(fā)明的吩噻嗪衍生物色素的檢測方法的特征在于，其為一種通過吸光度測定來檢測反應(yīng)體系中的吩p塞。秦衍生物色素的方法，所述方法包4舌吩瘞。秦4汙生物色素的纟全測工序，上述4企測工序中，在選自下述式(I)表示的化合物、下述式(II)表示的化合物及類黃酮系色素所組成的組中的至少一種色素物質(zhì)的存在下，進4亍吩p塞n秦;f汁生物色素的^全測。R'-N二N-R2...(I)上述式(I)中，R〗為12R!及R2中，X為氬、卣素、鈉或鉀，Y為氬或S03X,各X相同或不同，各Y相同或不同，Z為氫、曱基或甲氧基，各Z相同或不同。上述式(II)中，X為氬、鹵素、鈉或鉀，各X相同或不同，Y為氫、鹵素、鈉或鉀，各Y相同或不同。本發(fā)明的目的成分的測定方法的特征在于，其為一種通過檢測吩p塞。秦書f生物色素來測定樣品中的目的成分的方法，所述方法包括下述(A)~(E)工序(A)由上述樣品中的目的成分生成氧化物質(zhì)或還原物質(zhì)的工序；(B)在上述樣品中，添加通過氧化還原反應(yīng)而生成吩p塞溱衍生物色素的顯色劑的顯色劑添加工序；(C)通過上述氧化物質(zhì)或還原物質(zhì)與上述顯色劑的氧化還原反應(yīng)而生成吩p塞。秦書f生物色素的工序；(D)通過本發(fā)明的卩分p塞。秦衍生物色素4企測方法來4全測吩噻。秦書于生物色素，以測定有無生成上述吩p塞。秦衍生物色素或生成量的工序；(E)由上述測定結(jié)果判斷上述樣品中的目的成分的有無或量的工序。此外，本發(fā)明的目的成分的測定方法也可為包括下述(B，)~(D，)工序來替換上述(B)~(D)工序的方法(B，)在上述樣品中，添加吩瘞溱衍生物色素作為顯色劑的工序；(C，)使由上述樣品中的目的成分生成的還原物質(zhì)與吩噻。秦衍生物色素發(fā)生氧化還原反應(yīng)的工序；(D，)通過本發(fā)明的吩噻。秦書f生物色素4全測方法來纟全測卩分p塞。秦4汙生物色素，以測定添加的上述吩p塞。秦4汙生物色素有無減少或減少量的工序。本發(fā)明的位移試劑的特征在于，其為一種使吩噻嗪衍生物色素的吸收光"i普位移的位移試劑，所述位移試劑含有選自上述式(I)表示的化合物、上述式(II)表示的化合物及類黃酮系色素所組成的組中的至少一種色素物質(zhì)。本發(fā)明的顯色劑試劑的特征在于，其為一種在上述本發(fā)明的檢測方法中使用的顯色劑試劑，所述顯色劑試劑含有通過氧化還原反應(yīng)而生成吩噻。秦杏T生物色素的底物和p分p塞溱4汙生物色素中的任一種的顯色劑、以及上述本發(fā)明的位移試劑。如本發(fā)明中所述，在上述色素物質(zhì)的存在下，即便在比吩蓉。秦書f生物色素原本的極大吸收波長590~670nm更長波長處，也能檢測吩噻。秦衍生物色素。因此，例如即便在樣品中含有在570~670nm附近顯示吸收的成分的情況下，也可避免其導(dǎo)致的影響而檢測吩p塞溱衍生物色素。此外，通過本發(fā)明，例如因700nm處的吸光度增加，即便為檢測波長固定于700nm的裝置也可檢測吩p塞。秦衍生物色素。如上所述，通過本發(fā)明的方法，改進了吩噻"秦衍生物色素的檢測條件，與以往相比進一步拓寬了生成吩p塞。秦衍生物色素的顯色劑及吩噻。秦衍生物色素的顯色劑14的應(yīng)用范圍，因此可稱為例如在臨床才全查等中才及為有用的方法。圖1為表示在本發(fā)明的實施例1中酒石黃共存時的亞曱藍光譜的圖表。圖2為表示在本發(fā)明的上述實施例1中可可色素共存時的亞甲藍光譜的圖表。圖3為表示在本發(fā)明的實施例3中各種色素物質(zhì)共存時的各種吩瘞。秦衍生物色素光鐠的圖表，(A)為亞曱藍、(B)為天青C、(C)為天青A(Fluka公司)的結(jié)果。圖4為表示在本發(fā)明的上述實施例3中各種色素物質(zhì)共存時的各種吩漆溱衍生物色素光譜的圖表，(D)為l,9-二曱基-吩噻。秦的結(jié)果、(E)為甲苯胺藍O的結(jié)果。的各種吩蓬。秦衍生物色素光譜的圖表，(F)為天青B、(G)為亞曱基綠的結(jié)果。具體實施例方式<吸收光譜的位移試劑>本發(fā)明的位移試劑的特征在于，其為一種使吩噻。秦衍生物色素的吸收光語位移的位移試劑，所述位移試劑含有選自上述式(I)表示的化合物、上述式(II)表示的化合物及類黃酮系色素所組成的組中的至少一種色素物質(zhì)。如上所述，通過使上述色素物質(zhì)與吩瘞。秦衍生物色素共存，吩噻。秦衍生物色素的吸收光譜可位移至長波長處。因此，如上所述，本發(fā)明中的色素物質(zhì)可作為使吩噻。秦衍生物色素的吸收光語發(fā)生變化的吸收光i普的位移試劑使用。此外，本發(fā)明中，"使吸收光i普位移"指例如吩噻"泰衍生物色素的原本的極大吸收波長位移至長波長處，或極大吸收波長雖不發(fā)生位移，但吸收光譜位移至長波長處等。本發(fā)明的位移試劑優(yōu)選為例如有二個具有適當距離的負電基團的物質(zhì)。推測該負電基團與吩瘞。秦骨架的兩側(cè)的帶+電的N靜電結(jié)合，加長共"f展結(jié)構(gòu)乂人而產(chǎn)生位移。予以說明，本發(fā)明不受限于該推測。本發(fā)明的位移試劑中可含有一種上述色素物質(zhì)，也可含有兩種以上。上述式(I)中，<formula>formulaseeoriginaldocumentpage16</formula>R'及R2中，x為氫、閨素、鈉或鉀，Y為氳或S03X，各X相同或不同，各Y相同或不同，Z為氫、甲基或甲氧基，各Z相同或不同。R為R2為<formula>formulaseeoriginaldocumentpage16</formula>YS03XS03X上述式(I)表示的色素物質(zhì)可舉出例如5-羥基-1-(4-磺酸笨基)_4_(4-磺酸苯基偶氮)吡唑-3-羧酸或其鹽(例如三鈉鹽)、6-羥基-5-(4-磺酸苯基偶氮)-2-萘磺酸或其鹽(例如二鈉鹽)、3-羥基-4-(4-磺酸萘基偶氮)-2，7-萘二磺酸(也稱"3-羥基-4-[(磺酰萘_1_基)偶氮]萘-2，7-二磺酸，，)或其鹽(例如三鈉鹽)、7-羥基_8_(4-磺酸萘基偶氮)-1,3-萘二磺酸或其鹽(例如三鈉鹽)或水合物(例如ll/2水合物)等。這些鹽或水合物可舉出例如市售品酒石黃(黃色4號)、黃色5號、紅色2號、紅色40號、紅色102號等。此類色素物質(zhì)可為食用，也可為非食用。17<formula>formulaseeoriginaldocumentpage18</formula>(II)上述式(II)中，x為氫、鹵素、鈉或鉀，各x相同或不同，Y為氫、卣素、鈉或鉀，各Y相同或不同。本發(fā)明中，"卣素"指任意的卣族元素。上述由素可舉出例如氟、氯、溴及石典。此外，上述式(II)表示的色素物質(zhì)可舉出例如3，，6，-二羥基-2，，4，，5，，7，-四碘螺[異苯并呋喃-l(3H),9，-(9H)咕噸]-3-酮或其鹽(例如二鈉鹽)或水合物(例如一水合物)、3，，6，-二羥基_2，，4，，5，，7，-四溴-4，5,6，7-四氯螺[異苯并呋喃-1(3H),9，-[9H]卩占p屯]-3-酮或其鹽(例如二鈉鹽)、4,5,6，7-四氯-3，，6，-二羥基-2，，4，，5，，7，-四碘螺[異苯并呋喃-1(3H)，9'-[9H]卩占噸]-3-酮或其鹽(例如二鈉鹽)、2,4,5，7-四溴-3，6-二羥基咕噸-9-螺-l，-3H-異苯并呋喃-3，-酮或其鹽(例如二鈉鹽)、3，6-二羥基咕噸-9-螺-1，-3'H-異苯并呋喃-3，-酮或其鹽(例如二鈉鹽)等。這些鹽或水合物可使用例如紅色3號、紅色104號、紅色105號、曙紅(酸性紅87)、熒光素鈉(uranine)等。這些色素物質(zhì)可為食用，也可為非食用。上述類黃酮系色素可舉出例如類黃酮及類黃酮的聚合物等。上述類黃酮可舉出例如市售的柿色素(JapanesepersimmoncolorfromDipospyroskakiTHUMB.)。上述柿色素通常以從果實抽提的類黃酮為主成分。此外，上述類黃酮的聚合物可舉出例i口市售的可可色素(CacaocolorfromTheobromacacaoLINNE)。上述可可色素通常以花色素苷的聚合物為主成分。上述花色素苷的聚合物例如用下述式表示。下述式中，n為聚合度。n不受特別限制，^:例如為5以上，優(yōu)選為6以上。n的上限不受特別限制。R為配糖物半乳糖醛酸。本發(fā)明中吩噻嗪衍生物色素不受特別限制，可舉出二氨基吩噻。秦或其衍生物。此夕卜，上述吩噻嗪衍生物色素可舉出例如下述式(III)表示的化合物、其互變異構(gòu)體或立體異構(gòu)體、或它們的鹽。上述式(III)中，113~116分別為氬原子或烷基，任選相同或不同，上述烷基可舉出例如碳原子數(shù)l~6的直鏈或支鏈烷基，特別優(yōu)選甲基。上述式(III)中，Z分別為氫原子、烷基、硝基、氨基、閨素、磺基或羧基，任選相同或不同。上述Z中，上述烷基可舉出例如碳原子數(shù)l~6的直鏈或支鏈烷基，特別優(yōu)選甲基。予以說明，本發(fā)明中上述式(1)、(II)及(III)表示的色素也可為其互變異構(gòu)體或立體異構(gòu)體(例如幾何異構(gòu)體、構(gòu)象異構(gòu)體及光學(xué)異構(gòu)體)等異構(gòu)體。此外，為鹽的情況下，上述式(in)中抗衡離子不受特別限制，可舉出例如六氟磷酸根19離子(PF6—)、四氟硼酸根離子(BF4-)、氬氧根離子(OH-)、醋酸根離子、碳酸根離子、磷酸根離子、硫酸根離子、硝酸根離子、鹵離子、次鹵酸根離子、亞鹵酸根離子、卣酸根離子、高鹵酸根離子、三氟曱基磺酸根離子(OS02CF3—)、四(五氟苯基)硼酸根離子[B(C6F5)4—]等陰離子(陰離子)。上述卣離子可舉出例如氟離子(F—)、氯離子(Cr)、溴離子(Br。、碘離子(r)等。上述次卣酸根離子可舉出例如次氟酸根離子、次氯酸根離子、次溴酸根離子、次碘酸根離子等。上述亞卣酸根離子可舉出例如亞氟酸根離子、亞氯酸根離子、亞溴酸根離子、亞碘酸根離子等。上述卣酸根離子可舉出例如氟酸根離子、氯酸根離子、溴酸根離子、碘酸根離子等。上述高卣酸根離子可舉出例如高氟酸根離子、高氯酸根離子、高溴酸根離子、高碘酸根離子等。本發(fā)明中"囟素"指任意的卣族元素。上述卣素可舉出例如氟、氯、溴及碘。此外，本發(fā)明中"烷基"不受特別限制，上述烷基可舉出例如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、己基、庚基、辛基、壬基、癸基、十一烷基、十二烷基、十三烷基、十四烷基、十五烷基、十六烷基、十七烷基、十八烷基、十九烷基、二十烷基等。此外，本發(fā)明中取代基等存在異構(gòu)體的情況下，若無特別限制則可為任意的異構(gòu)體。例如對于"丙基"的情況，可為正丙基及異丙基中的任一種。對于"丁基"的情況，可為正丁基、異丁基、仲丁基及叔丁基中的任一種。上述吩p塞。秦衍生物色素的具體例子可舉出例如下述化學(xué)式表示的亞甲藍、天青A、天青B、天青C、甲苯胺藍O、1，9-二甲基-3,7-雙(二甲氨基)吩噻嗪鹽、亞甲基綠等。亞曱藍天青A天青B天青C甲苯胺藍O3CI—1,9-二曱基-3，7-雙(二曱氨基)吩噻嗪鹽H3Cl—H3CCH31/2ZnCI2xH20CH3CH3亞甲基綠H3CI—1/2ZnCI2<吩瘞喚衍生物色素纟全測方法〉一種通過吸光度測定來檢測反應(yīng)體系中的吩噻。泰衍生物色素的方法，c丄H22o、其特征在于，其包括吩P塞溱衍生物色素的檢測工序，上述;f企測工序中，在選自上述式(I)表示的化合物、上述式(II)表示的化合物及類黃酮系色素所組成的組中的至少一種色素物質(zhì)(本發(fā)明的位移試劑)的存在下，進行吩噻溱書亍生物色素的^:測。如上所述，本發(fā)明中上述色素物質(zhì)可使用本發(fā)明的位移試劑。上述色素物質(zhì)只要在檢測吩噻嗪衍生物色素時存在于上述反應(yīng)體系中即可，例如可在上述4全測工序之前添加。如上所述，本發(fā)明中的吩噻。秦衍生物色素不受特別限制。本發(fā)明中檢測的吩噻嗪衍生物色素的來源不受特別限制，可舉出例如來源于通過氧化還原而反應(yīng)生成p分p塞"秦書f生物色素的顯色劑的吩噻。秦衍生物色素、以及作為顯色劑添加的p分噻嗪書f生物色素自身。上述通過氧化還原反應(yīng)而生成p分噻。秦書于生物色素的顯色劑不受特別限制，可舉出例如通過氧化或還原而游離(脫離)出吩噻。秦衍生物色素的底物。作為具體例子，通過氧化游離出吩噻,衍生物色素亞甲藍的底物可舉出例如IO-(羧甲基氨基羰基)-3,7-雙(二曱氨基)吩噻。秦或其鹽(例如商品名DA-67，和光純藥公司生產(chǎn))、10-(乙酰氨基羰基)-3,7-雙(二甲氨基)吩噻嗪或其鹽、專利文獻3記載的10-(苯基羰基)-3,7-雙(二曱氨基)吩噻。秦或其鹽等。此外，還可舉出作為專利文獻4中記載的化合物No.II-49、II-IO的10-(3-(曱基羧基氨基)-六甲基-氨基)-吩噻。秦、10-(3-(曱基羧基氨基)-4-甲基-苯基-氨基)-吩噻溱、10-((3-(甲基羧基氨基甲基)-苯基)-曱氨基)-吩噻嗪、10-(1-萘基氨基)-吩噻。秦、10-(曱基)-吩噻嗪、10-(苯基氨基)-吩噻溱、10-(甲氨基)-吩噻溱及這些物質(zhì)的鹽。其中由于水溶性22高的原因，優(yōu)選IO-(羧甲基氨基羰基)-3,7-雙(二曱氨基)吩p塞。秦鹽。此外，其他生成吩p塞"秦衍生物色素亞甲藍的顯色劑可舉出例如無色亞曱藍等無色化合物。無色亞曱藍為無色的化合物(還原型)，通過氧化成為亞曱藍(氧化型)。因此，無色亞曱藍例如可用作才全測氧化物質(zhì)用的底物。本發(fā)明中，例如在上述反應(yīng)體系中添加無色亞甲藍作為顯色劑，通過無色亞甲藍與上述反應(yīng)體系中的氧化物質(zhì)的氧化還原反應(yīng)，生成亞甲藍，對其進4亍吸光度測定即可。此外，生成亞甲藍以外的口分p塞。秦書f生物色素的顯色劑可舉出各種吩噻嗪衍生物色素的無色體等。這種顯色劑通常在利用氧化還原反應(yīng)來4全測樣品中的目的成分時使用。本發(fā)明中，例如在上述反應(yīng)體系中添加上述顯色劑，通過上述顯色劑與上述反應(yīng)體系中的氧化物質(zhì)或還原物質(zhì)的氧化還原反應(yīng)，由上述顯色劑生成(游離出)吩噻嗪衍生物色素。該游離出的吩噻嗪衍生物色素的量對應(yīng)于氧化物質(zhì)或還原物質(zhì)的量，因此通過檢測游離出的吩噻嗪衍生物色素的有無及量，可判斷反應(yīng)體系中的氧化物質(zhì)或還原物質(zhì)的有無或量。上述氧化物質(zhì)及還原物質(zhì)例如通過氧化還原反應(yīng)由才羊品中的目的成分生成即可。此外，樣品中的目的成分為氧化物質(zhì)或還原物質(zhì)的情況下，其可直接與上述顯色劑反應(yīng)，也可進一步由目的成分生成氧化物質(zhì)或還原物質(zhì)，使其與上述顯色劑反應(yīng)。予以說明，如上所述，本發(fā)明中"顯色劑"不僅指通過氧化還原反應(yīng)生成呈現(xiàn)顏色的吩噻。秦衍生物色素的底物，也包含吩噻嗪衍生物色素自身。例如，如上所述，對于亞甲藍的情況，亞甲藍(氧化型)通過還原成為無色的無色亞甲藍(還原型)。而，本發(fā)明中例如首先在上述反應(yīng)液中添加亞甲藍作為顯色劑，23通過添加的亞甲藍與上述反應(yīng)體系中的還原物質(zhì)的氧化還原反應(yīng)，生成無色亞甲藍。隨后對亞曱藍進行吸光度測定，測定亞甲藍有無減少或減少的量即可。即，通過測定作為顯色劑而添加的亞曱藍的減少，能夠判斷反應(yīng)體系中的還原物質(zhì)的有無及量。對于亞甲藍以外的P分P塞。秦書于生物色素也同樣，例如在上述反應(yīng)液中添加吩蓬漆衍生物色素作為顯色劑，添加的吩噻嗪衍生物色素與上述反應(yīng)體系中的還原物質(zhì)進行氧化還原反應(yīng)，對吩瘞。秦書t生物色素進4亍吸光度測定，測定吩P塞嗪書f生物色素有無減少或減少的量即可。本發(fā)明中，上述色素物質(zhì)在測定吩P塞。秦書t生物色素的吸光度之前添加在反應(yīng)體系中即可。因此，上述色素物質(zhì)可在生成(游離出)吩噻嗪4汙生物色素或使其消失的氧化還原反應(yīng)的前后任一時間添加在反應(yīng)體系中，也可在氧化還原反應(yīng)開始的同時或途中添加。予以i兌明，反應(yīng)體系可為試紙類的干體系、反應(yīng)液類的濕體系(容液)中的任一種。上述色素物質(zhì)的添加比例不受特別限制，例如相對于反應(yīng)體系中含有的lmol吩噻嗪衍生物色素，例如為1~lOOOmol,優(yōu)選為2200mo1,更優(yōu)選為4~lOOmol。此外，上述色素物質(zhì)的添加比例例如可依據(jù)反應(yīng)液中添加的顯色劑的量來決定，相只十于lmol顯色劑例^口為0.1~lOOOmol,4尤選為1~500mol,更4尤選為4~300mol。此外，反應(yīng)體系中上述色素物質(zhì)的終濃度例如為lxl(T70.1mol/L,優(yōu)選為2xl(T7~0.05mol/L,更優(yōu)選為5xl(T7~0.03mol/L。上述反應(yīng)液中上述顯色劑的終濃度不受特別限制，例如為lxl(T6~0.1mol/L，優(yōu)選為5xl(r6~0.01mol/L,更優(yōu)選為5xl0-6~0.001mol/;L。吩噻。秦衍生物色素的極大吸收波長已知通常分別為590~670nm左右。從而，由于其光譜，以往的方法僅能在波長約550~680nm的范圍內(nèi)進行吸光度測定。與此相對，采用本發(fā)明的方法，通過與上述色素物質(zhì)共存，吩，塞噪衍生物色素的光諳與原本的光譜相比位移至長波長處，因此可在比以往方法中的上述的檢測波長區(qū)更長波長區(qū)進行測定。即，采用本發(fā)明，例如可在670nm以上、680nm以上、690nm以上進行測定。本發(fā)明中的才全須'J〉皮長,j^口為560~730nm,4尤選為600~715nm。^口上聲斤述，釆用本發(fā)明的方法，可在以往方法無法檢測的700nm附近進行測定，因此，例如也可應(yīng)用于檢測波長固定于700nm的現(xiàn)有的自動分析裝置。作為具體例子，在上述色素物質(zhì)共存下測定吩噻。秦衍生物色素溶液(例如10"mol/L)的700nm處的吸光度時，與色素物質(zhì)不存在時的700nm處的吸光度相比，例如可得到2~20倍的吸光度。作為具體例子，例如亞甲藍的極大吸收波長通常為約660~670nm(例V666nm左右)，以4主方法例^口<義肯fe在；^皮長600~680nm的范圍內(nèi)進行吸光度測定。與此相對，采用本發(fā)明的方法例如可在670nm以上、680nm以上、690nm以上進4亍觀'j定。本發(fā)明中的亞曱藍的檢測波長例如為610730nm，優(yōu)選為650~715讓，更優(yōu)選為660~700謹。(天青A)天青A的極大吸收波長通常為約630~640nm(例如634nm左右)，以往方法例如僅能在波長550~675nm的范圍內(nèi)進行吸光度測定。與此相對，采用本發(fā)明的方法例如可在680nm左右以上、690nm左右以上、700nm左右以上進4亍測定，4全測波長例如為約590~715nm,伊乙選為約610~700nm。(天青B)天青B的極大吸收波長通常為約610~620nm(例如613nm25左右)，以往方法例如僅能在波長550~675nm的范圍內(nèi)進行吸光度測定。與此相對，采用本發(fā)明的方法例如可在675nm左右以上、690nm左右以上、700nm左右以上進4亍測定，才僉測波長例如為約575710讓，優(yōu)選為約600~700讓。(天青C)天青C的才及大吸收波長通常為約610~625nm(例如619nm左右)，以往方法例如僅能在波長540~650nm的范圍內(nèi)進行吸光度測定。與此相對，采用本發(fā)明的方法例如可在650nm左右以上、660nm左右以上、670nm左右以上進4亍測定，4全測波長例如為約580~690nm,優(yōu)選為約590~680nm。(曱苯胺藍O)曱苯胺藍0的4及大吸收波長通常為約625~635nm(例如631nm左右)，以往方法例如僅能在波長550~670nm的范圍內(nèi)進行吸光度測定。與此相對，采用本發(fā)明的方法例如可在670nm左右以上、690nm左右以上、700nm左右以上進行測定，檢測波長例如為約600~700跳優(yōu)選為約610~690謹。(1,9-二甲基-3,7-雙(二曱氨基)吩噻嗪鹽)1,9-二曱基-3,7-雙(二甲氨基)吩噻溱鹽的極大吸收波長通常為約590~600nm(例如592nm左右)，以往方法例如僅能在波長520~675nm的范圍內(nèi)進行吸光度測定。與此相對，釆用本發(fā)明的方法例如可在675nm左右以上、685nm左右以上、700nm左右以上進4亍測定，才全觀'H皮長例如為約540~710nm,優(yōu)選為約570~700證。(亞甲基綠)亞甲基綠的極大吸收波長通常為約605~615nm(例如609nm左右)，以往方法例如僅能在波長540~675nm的范圍內(nèi)進行吸光度測定。與此相對，采用本發(fā)明的方法例如可在675nm左右以上、690nm左右以上、700nm左右以上進4亍測定，4企測波長例如為約550~710謹，優(yōu)選為約580~700纖。本發(fā)明的吩謹:。秦書f生物色素的4全測方法可應(yīng)用于包4舌卩分p塞溱衍生物色素的4全測工序的所有測定(例如定性及定量)方法中。因此，優(yōu)選應(yīng)用于例如由氧化還原反應(yīng)佳7分p塞"秦書于生物色素生成或消失，通過測定吩噻溱衍生物色素的有無或其量的增減，來定性或定量目的物質(zhì)的方法等。<目的成分的測定方法>其次，如上所述，本發(fā)明的第1種4企測方法的特4正在于，其為通過檢測吩p塞。秦衍生物色素來測定樣品中的目的成分的方法，所述方法包括下述(A)~(E)工序(A)由上述樣品中的目的成分生成氧化物質(zhì)或還原物質(zhì)的工序；(B)在上述樣品中，添加通過氧化還原反應(yīng)而生成p分p塞"秦衍生物色素的顯色劑的顯色劑添加工序；(C)通過上迷氧化物質(zhì)或還原物質(zhì)與上述顯色劑的氧化還原反應(yīng)而生成吩p塞喚4汙生物色素的工序；(D)通過本發(fā)明的吩噻，秦衍生物色素的4僉測方法來4全測p分蓉"秦書亍生物色素，以測定有無生成上述p分p塞。秦書亍生物色素或生成量的工序；(E)由上述測定結(jié)果判斷上述樣品中的目的成分的有無或量的工序。此外，本發(fā)明的第2種檢測方法的特征在于，其包括下述(B，)~(D，)工序替換上述(B)~(D)工序(A)由上述樣品中的目的成分生成氧化物質(zhì)或還原物質(zhì)的工序；(B，)在上述樣品中，添加吩噻"秦衍生物色素作為顯色劑27的工序；(C，)使由上述樣品中的目的成分生成的還原物質(zhì)與吩p塞。秦衍生物色素發(fā)生氧化還原反應(yīng)的工序；(D，)通過本發(fā)明的吩漆。秦衍生物色素的檢測方法來4全測吩瘞溱書f生物色素，以測定添加的上述吩漆p秦衍生物色素有無減少或減少量的工序；(E)由上述測定結(jié)果判斷上述樣品中的目的成分的有無或量的工序。此外，本發(fā)明的特4正在于，其在如上所述的本發(fā)明的位移試劑(上述色素物質(zhì))的存在下進行吩噻溱衍生物色素的檢測，關(guān)于其他的工序及條件等不受任何限制。本發(fā)明中的目的成分例如可利用吩遂:p秦衍生物色素的4企測進行測定即可，其種類不受任何限制，可舉出例如能由目的成分通過氧化還原反應(yīng)而生成氧化物質(zhì)或還原物質(zhì)的目的成分。上述目的成分自身為氧化物質(zhì)或還原物質(zhì)的情況下，如上所述，可由目的成分進一步生成氧化物質(zhì)、還原物質(zhì)，也可例如省略上述(A)工序，在上述(B)工序或上述(B，)工序中，使作為氧化物質(zhì)或還原物質(zhì)的目的成分自身與上述顯色劑反應(yīng)。上述目的成分的具體例子可舉出例如糖化血紅蛋白(Hb)、糖化白蛋白等糖化蛋白質(zhì)、糖化肽、糖化氨基酸、葡萄糖、尿酸、膽固醇、肌酐、肌氨酸、甘油等。例舉的目的成分中，優(yōu)選應(yīng)用于測定反映生物體狀態(tài)的重要指標的糖化Hb。糖化Hb中例如有Hb的p鏈N末端氨基酸(纈氨酸)的a-氨基結(jié)合了葡萄糖的Hb(以下也稱"HbAlc")及Hb的賴氨酸的側(cè)鏈氨基結(jié)合了葡萄糖的Hb(以下也稱"GHbLys")。且前者的值(HbAlc%)表示為相對于Hb量的HbAlc量的比率(比例，％),已知其反映著生物體內(nèi)血糖值的過去(約l~228個月)的履歷。此外，后者的值(GHbLys%)表示為相對于Hb量的GHbLys量的比率(比例，％),最近，由本發(fā)明人等闡明了其可反映著餐后高血糖(另外專利申請中)。如上所述，Hb的糖化率在糖尿病的診斷、預(yù)防、治療等中為非常重要的指標，期待其改進為更優(yōu)良的測定方法，因此期望在其測定中應(yīng)用本發(fā)明。本發(fā)明的測定方法中，上述樣品的種類不受任何限制。具體例子可舉出例如全血、血漿、血清、血細胞等血液樣品，尿、腦脊液等生物樣品及々大用水、食品類等。目的成分為血細胞內(nèi)成分的情況下，例如可將血細胞或含有血細胞的全血進行溶血處理來制備樣品。溶血方法不受特別限制，例如可使用利用滲透壓差的方法、采用超聲波的方法、表面活性劑處理方法等。利用滲透壓差的情況下，對于全血(或血細力包)例如添加2~100^咅體積量的純4b水溶血即可。本發(fā)明的測定方法中，樣品的種類不受任何限制，但出于以下的理由，優(yōu)選應(yīng)用于血液樣品。如上所述，利用p分p塞。秦矛;亍生物色素檢測進行的目的成分的測定方法可在相對長波長處進行測定，因此能被廣泛采用。然而，血液樣品(特別是含有血細胞成分的樣品)中存在Hb,若Hb被氧化，其在吩p塞溱衍生物色素的原本的極大吸收波長處顯示吸收，因此有可能影響吩漆。秦衍生物色素檢測。與此相對，采用本發(fā)明，因可在更長波長區(qū)才全測吩噻。秦衍生物色素，可減輕以往方法中氧化Hb帶來的影響，可進一步提高測定精度。因此，其在測定作為血液成分的糖化Hb及糖化白蛋白等時，可稱為特別有用的方法。下面，對本發(fā)明的目的成分的測定方法舉一例進行說明，目的成分為糖化Hb,采用通過氧化游離出吩遂。秦衍生物色素的顯色劑測定其HbAlc。/。。予以說明，本發(fā)明不受此例限制。(蛋白酶處理)首先，用蛋白酶處理樣品中的糖化Hb。該工序雖非必需，但因后續(xù)工序中果糖氨基酸氧化酶(以下稱"FAOD")可高效地作用于Hb的一唐化部分而優(yōu)選該工序。上述蛋白酶例如可使用金屬蛋白酶、絲氨酸蛋白酶、絲氨酸羧肽酶、蛋白酶K、菠蘿蛋白酶、木瓜蛋白酶、豬胰臟來源的月夷蛋白酶、B"c〃/mssmZj/z7^來源的蛋白酶、y^/7eg〃/wsor少zae來源的蛋白酶等，優(yōu)選為內(nèi)切蛋白酶。市售品可舉出例如金屬蛋白酶(愛科來公司生產(chǎn))、蛋白酶A"7^乂"G(天野工7if4厶乂>司生產(chǎn))、蛋白酶M"7t乂，，G(天野工>4厶公司生產(chǎn))、蛋白酶S"7t乂，，G(天野工》f4厶^^司生產(chǎn))、肽酶R(天野工>f厶/>司生產(chǎn))、木瓜蛋白酶M-40(天野工7if^f厶公司生產(chǎn))、商品名/口r7—七N(7乂l力公司生產(chǎn))、商品名/口r7—七、N"77乂"(天野制藥7>司生產(chǎn))、5a"7/w屬來源的金屬蛋白酶(東洋紡公司生產(chǎn)商品名卜3千一厶)等。特別在切出Hb的p鏈N末端肽的情況下，優(yōu)選特異性作用于卩鏈N末端、催化N末端肽斷裂的蛋白酶(例如，日本特開2000-300294號7>凈艮、曰本斗爭開2004-344052號7>凈艮等)。it匕夕卜，催化P鏈N末端纈氨酸的斷裂的蛋白酶可舉出例如國際公開第2000/50579號小冊子(日本特許3668801)、國際公開第2000/61732號小冊子、日本特開2002-315600號公報等公開的蛋白酶。該反應(yīng)液中的蛋白酶的添力口比例例如在0.001~300000KU/L的范圍，優(yōu)選為O.Ol~30000KU/L。上述反應(yīng)液中的Hb濃度為0.005mM時，蛋白酶的添力口比例例如在0.01~300000KU/L的范圍，伊0選為0.05~30000KU/L。蛋白酶的活性單位"U"為35°C下l分鐘內(nèi)能增加相當于l微摩爾酪氨酸在275nm處的吸光度的酶量為1U。上述蛋白酶處理優(yōu)選例如在緩沖液中進4亍，可<吏用Tris-鹽酸緩沖液、EPPS緩沖液、PIPES緩沖液、磷酸緩沖液、ADA緩沖液、MES緩沖液、MOPS緩沖液、檸4象酸纟爰沖液、醋酸緩沖液等。此夕卜，蛋白酶反應(yīng)液的pH例如在4-IO的范圍，優(yōu)選為6~9，也可例如通過如上所述的緩沖液調(diào)整pH。蛋白酶處理的條件不受特別限制，處理溫度例如在IO~40。C的范圍，優(yōu)選為25-37。C。處理時間例如在l~IOO分鐘左右，優(yōu)選為1~IO分鐘。此外，該蛋白酶處理例如也可在以下所示的促進化合物的存在下進行。在這類促進化合物的存在下對Hb進行蛋白酶處理，可實現(xiàn)蛋白酶處理的高效率化和縮短化。此外，由于可高效地進行蛋白酶處理，例如，也不需要增加處理中使用的蛋白酶的量。上述促進化合物可舉出例如下述式(IV)表示的化合物。R誦X…(IV)上述式(IV)中，R為碳原子數(shù)為9以上的烷基、取代烷基、酰基或取代?；?。具體例子可舉出碳原子數(shù)為9~16的直鏈烷基或直鏈?；?、碳原子數(shù)為10~40且主鏈碳原子數(shù)為9~16的支鏈烷基或支鏈?；?、或被環(huán)烷基取代的直鏈烷基(例如，環(huán)烷基的碳原子數(shù)為38，除環(huán)烷基外的直鏈的碳原子數(shù)為4~13)等。上述環(huán)烷基可舉出例如環(huán)己基、環(huán)戊基、環(huán)丁基等。上述式(IV)中，X為糖殘基，優(yōu)選為例如單糖或二糖的殘基。上述單糖可舉出例如甘露糖苷、葡萄糖苷、硫代葡萄糖苷等，二糖可舉出麥芽糖苦、吡喃果糖基-吡喃葡萄糖苷、硫代麥芽糖苷等。這些糖的構(gòu)象可為a、p、D、L中的任一種。此外，結(jié)合在糖的環(huán)結(jié)構(gòu)上的氫以及OH基的氫也可被例如Na、K、囟素等取代。此外，本發(fā)明中，將介于R與糖殘基的環(huán)結(jié)構(gòu)的鍵間的原子(例如，-O-、-S-等)作為糖殘基的組成部分。上述式(IV)的促進化合物的具體例子可舉出例如正十二烷基-(3-D-麥芽糖苷(正十二烷基-J3-D-麥芽吡喃糖苷)、6-環(huán)己基己基-(3-D-麥芽糖普、蔗糖單月桂酸酯((3-D-吡喃果糖基-a-D畫吡喃葡萄糖苷單十二酸酯)、正癸基-p-D-麥芽糖苷(正癸基-卩-D-麥芽吡喃糖苷)、正壬基-(3-D-硫代麥芽糖苷(正壬基-卩-D曙硫代麥芽糖苷)、5-環(huán)己基戊基-(3-D-麥芽糖苷、十一烷基-p-D-麥芽糖苷、正十二烷基-ap-D-麥芽糖苷、十六烷基-(3-D-麥芽糖苦及3-氧十三烷基-a-D-甘露糖苷等。這些化合物的化學(xué)式示意如下。其中，優(yōu)選上述式(IV)中的R(烷基鏈)的碳原子數(shù)為12以上的正十二烷基-P-D-麥芽糖苷、蔗糖單月桂酸酯、十六烷基-(3-D-麥芽糖苷等。此外，若R的碳原子數(shù)相同時(例如，碳原子數(shù)相同的烷基與酰基)，更優(yōu)選為?；?，如優(yōu)選正十二烷基-(3-D-麥芽糖苷(正十二烷基-P-D-吡喃麥芽糖苷)。在O.Ol~200mM的范圍，優(yōu)選為0.4~100mM。上述反應(yīng)液中的Hh^農(nóng)度為0.005mM時，上述4足進<匕合物的添力口比例例^口在0.4~lOOmM的范圍，優(yōu)選為l100mM。此外，上述促進化合物與蛋白酶的添加順序不受任何限制，可同時添加，也可以不同順^另"^力口。如上所述，蛋白酶的處理條件不受特別限制，同時存在促進化合物的情況下，其處理時間不受限制，尤其是上限不受限制，例如，可進行O.l~60分鐘左右的蛋白酶處理。處理時間優(yōu)選為0.145分4f,更優(yōu)選為0.2~20分鐘，特別優(yōu)選為0.25分鐘。在上述促進化合物存在下進行蛋白酶處理時，能更迅速32地切出氨基酸或多肽，因此即便采用如上所述的處理時間也可充分進行切斷處理。此外，除上述式(IV)的化合物外，上述4足進化合物還可舉出例如硝基化合物。這些化合物可使用任意一種，也可兩種以上同時使用。硝基化合物可舉出例如亞硝酸及其鹽。亞硝酸鹽不受特別限制，可舉出例如亞硝酸鉀、亞硝酸戊酯、亞硝酸丁酯、硝化甘油、亞硝酸鈉、對硝基氯苯、三硝基甲苯、硝基苯等。蛋白酶處理的反應(yīng)液中的上述硝基々匕合物的添加比例不受特別限制，例如上述反應(yīng)液中的Hb濃度為0.005mM的情況下，上述硝基化合物的添加比例優(yōu)選為例如0.005mM以上，更優(yōu)選為0.05~2mM。除上述的化合物以外，上述促進化合物還可舉出例如四唑化合物。上述四唑化合物不受特別限制，可舉出例如2-(4-碟苯基)-3—(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯基)-二氫-四唑鹽、2_(4-碘苯基)-3-(2，4-二硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯基)-二氫-四唑鹽、2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯基)-二氫-四唑鹽、2-(4-碘苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-苯基-二氫-四唑鹽、3,3，-(1，1，-聯(lián)苯基-4,4，-二基)-雙(2，5-二苯基)-二氫-四唑鹽、3，3，-[3，3，-二甲氧基-(l,l，-耳關(guān)苯基)—4，4，-二基]-雙[2-(4-硝基苯基)-5-苯基-二氫-四唑鹽]、2,3-二苯基-5-(4-氯苯基)四唑鹽、2,5-二苯基-3-(對二苯基)四唑鹽、2，3-二苯基-5-(對二苯基)四唑鹽、2,5-二苯基-3-(4-苯乙烯基苯基)四唑鹽、2，5-二苯基-3-(間甲苯基)四唑鹽、2,5-二苯基-3-(對甲苯基)四唑鹽、2,3-二苯基-5-(2-噻吩基)四唑鹽、2-苯并噻唑基-3-(4-羧基-2-甲氧基苯基)-5-[4-(2-磺乙基氨甲?；?苯基]-二氳-四唑鹽、2,2，-二苯并噻唑基-5,5，-雙[4-二(2-磺乙基)氨甲酰基苯基]-3，3，-(3，3，-二甲氧基-4,4，-亞聯(lián)苯基)二四唑鹽、3-(4，5-二曱基-2-噻唑基)-2,5-二苯基-二氫-四唑鹽、2，3-二苯基-5-氰基四唑鹽、2，3-二苯基-5-羧基四唑鹽、2,3-二苯基-5-甲基四唑鹽、2，3-二苯基-5-乙基四唑鹽等，特別優(yōu)選為2-(4-碘苯基)-3-(2,4-二硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯基)-二氫-四唑鹽。上述四唑化合物除作為促進化合物的功能外，在血液樣品這樣的含有抗壞血酸等還原物質(zhì)的樣品的情況下，例如還可避免這些物質(zhì)對氧化還原反應(yīng)的影響。以避免上述影響為目的的情況下，可在下一工序FAOD處理之前在樣品中添加四峻化合物。予以i兌明，四唑化合物也具有如上所述的作為促進化合物的功能，因此優(yōu)選在蛋白酶處理之前添加。上述四唑化合物的添加量不受特別限制，優(yōu)選例如每1^L樣品中添力口0.001~lOOjxmol，更優(yōu)選在0.005~lO,ol的范圍，特別優(yōu)選在O.Ol~lnmol的范圍。(FAOD處理工序)隨后，向由上述蛋白酶處理得到的Hb片段中添加FAOD，使FAOD作用于N末端纈氨酸的糖化部分，生成氧化物質(zhì)過氧化氳。對糖化Hb的HbAlc進行測定的情況下，通過蛋白酶得到的Hb切斷產(chǎn)物為p《連N末端糖化纈氨酸或含有上述壽唐化纈氨酸的肽，使FAOD作用于P鏈N末端纈氨酸的糖化部分即可。予以說明，如上所述，Hb片段取決于使用的蛋白酶的種類的選擇。上述FAOD不受特別限制，但優(yōu)選作用于a-氨基被糖化的氨基酸或肽、催化產(chǎn)生過氧化氫與a-酮醛的反應(yīng)的酶(以下稱"FAOD-a")。這種催化反應(yīng)，例如可用下述式(1)表示。R、CO-CH2-NH-R2+H20+02—R)-CO-CHO+NH2-R2+H202...(1)上述式(1)中，R4旨羥基或來源于糖化反應(yīng)前的糖的殘基(糖殘基)。若反應(yīng)前的糖為醛糖時，上述糖殘基(RM為醛糖殘基，若反應(yīng)前的糖為酮糖時，上述糖殘基(R1)為酮糖殘基。例如，反應(yīng)前的4唐為葡萄糖時，雖然可通過阿馬道里重排(AmadodRearrangement)<吏反應(yīng)后的纟吉診勾#^匕為果4唐結(jié)構(gòu)，但這時糖殘基(R1)為葡萄糖殘基(醛糖殘基)。此糖殘基(R1)例^口可表示為-[CH(OH)]n-CH2OH其中n為06的整數(shù)。上述式(1)中，RS不受特別限制，例如為下述式(2)所示的氨基酸殘基或肽殘基。-CHR3-CO-R4…(2)上述式(2)中，W表示氨基酸側(cè)鏈基團，R"表示羥基、氨基酸殘基或肽殘基，例如可用下述式(3)表示。下述式(3)中，n為0以上的整數(shù)，與上述同樣，Rs表示氨基酸側(cè)鏈基團，氨基酸側(cè)鏈基團全部相同或不同。-(NH-CHR3-CO)n-OH...(3)這種FAOD-a可使用例如國際公開第2004/029251號小冊子記載的果糖胺氧化酶(fructosylamineoxidase,FAOD)、日本特開2004-275013號公報及日本特開2004-275063號公報記載的果糖胺氧化酶、青霉屬來源的FAOD(日本特開平8-336386號公報)等。使用這種FAOD,例如即使p鏈N末端纈氨酸以外被糖化，也難以作用于纈氨酸糖化部分以外的糖化部分，因此，能以更高的精度進行HbAlc的測定。FAOD還可進一步具有上述(1)以外的底物特異性。這種FAOD可舉出例如可作用于上述被糖化的oc-氨基與被糖化的氨基酸側(cè)鏈基團雙方的FAOD(以下稱"FAOD-aS")。具體例子可舉出例如商品名-CE(矢7-—77公司生產(chǎn))、商品名FPOX-EE(軒7:i—7》公司生產(chǎn))、市售的商品名FOD(旭化成公司生產(chǎn))、赤霉(Gibberella)屬來源的FAOD(日本特開平8-154672號公報)、鐮刀菌(Fusarium)屬來源的FAOD(日本特開平7-289253號/>才艮)、曲霉菌(Aspergillus)屬來源的FAOD(WO99/20039)等。這種FAOD例如可適當選#奪蛋白酶的種類，通過與能特異性切斷(3鏈N末端的氨基酸或肽的蛋白酶進行組合，可抑制作用于其他糖化部位。FAOD處理優(yōu)選與上述蛋白酶處理同樣在緩沖液中進4亍，上述緩沖液不受特別限制，可使用與上述蛋白酶處理相同的緩沖液。FAOD處理的條件不受特別限制，反應(yīng)液的pH例如可為6~9,處理溫度例如在10-38。C的范圍，優(yōu)選為2537。C。處理時間也不受特別限制，例如為0.160分鐘，優(yōu)選為0.1~5分鐘。FAOD處理的反應(yīng)液中的FAOD的添力口比例例如在0.01~50KU/L的范圍，優(yōu)選為0.5~10KU/L。FAOD的活性"U"定義為以果糖基纈氨酸作為底物，1分鐘內(nèi)催化生成1微摩爾過氧化氬的酶量為1U。(p分。塞。秦書f生物色素生成工序)隨后，在反應(yīng)液中添加如上所述的顯色劑，4吏通過上述FAOD處理生成的過氧化氫與上述顯色劑進4于氧化還原反應(yīng)。通過該反應(yīng)，上述顯色劑:帔氧化，生成吩p塞。秦書t生物色素。該氧化還原反應(yīng)中，優(yōu)選使用氧化酶作為催化劑，可舉出例如過氧化物酶(POD)。該反應(yīng)優(yōu)選與上述FAOD處理同樣在緩沖液中進4亍，可使用如上所述的緩沖液。POD處理的條件不受特別限制，反應(yīng)液的pH例如為5~9。處理溫度例如在1040。C的范圍，優(yōu)選為2537。C。處理時間也不受特別限制，例如為0.1~5分鐘。反應(yīng)液中的POD的添力p比例例如在O.Ol~300KU/L的范圍，優(yōu)選為0.5~40KU/L。POD的活性"U"定義為l分鐘內(nèi)能氧化l微摩爾愈創(chuàng)木酚的酶量為1U。jt匕夕卜，反應(yīng)液中的顯色劑的添力口比例例3口在0.001~10mM的范圍，優(yōu)選為0.005~2mM。(吸光度測定工序)隨后，在反應(yīng)液中添加上述的色素物質(zhì)，之后對吩p塞。秦有f生物色素的p及光度進4亍測定。如上所述，該色素物質(zhì)的添加時間在吸光度測定前即可，此外不受任何限定，例如在吩噻漆衍生物色素的生成工序的前后均可，也可與上述顯色劑及氧化酶同時添力口。上述色素物質(zhì)的添加比例不受特別限制，相對于lmol顯色劑例^口為0.1~lOOOmol,優(yōu)選為1~500mol，更4尤選為5~300mol,jt匕夕卜，反應(yīng)液中的終;農(nóng)度i"列^口為0.001~100mmol/L，4尤選為0.005~5Ommol/L,更^尤選為0.01~1Ommol/L。吸光度測定例如可使用分光光度計及目前7>知的一全測4義器。反應(yīng)液的吸光度指示著生成的吩噻。秦衍生物色素量，生成的吩噻嗪衍生物色素的量對應(yīng)于過氧化氫的量，過氧化氳的量對應(yīng)于Hb中的[34連N末端纈氨酸的糖化量。從而通過吸光度測定，可間接地求得Hb的糖化量(HbAlc濃度)。進而，通過另外測定樣品中的總Hb量(Hb濃度)，按下述式中所示，算出Hb的卩鏈N末端纈氨酸的糖化量(HbAlc濃度)與樣品中的總Hb量(Hb濃度)之比(百分比)，可求得HbAlc。/。。此外，Hb量可采用目前^知的方法或市售的試劑盒來測定。HbAlc%=((3鏈N末端纈氨酸的糖化量/Hb量)xiOO由吸光度算出Hb糖化量例如可采用由Hb的(H連N末端的已知糖化量對吸光度作圖而得到標準曲線。例如，對于(3鏈N末端糖化量已知的Hb標準液，與上述同樣進行吸光度測定，作出表示該標準液的測定值與已知的^f唐化量的關(guān)系的標準曲線。然后在該標準曲線中代入如上所述進行測定;f孚到的吸光度，即可算出卩《連N末端的糖化量。此夕卜，測定糖化Hb的GHbLys。/o的情況下，例如除以下幾點外，可與上述的HbAlcO/o測定同樣進行。蛋白酶可使用與上述同樣的酶，其中切出賴氨酸或賴氨酸肽的情況下，優(yōu)選使用例如國際公開第2002/006519號小冊子中記載的蛋白酶等。FAOD不受特別限制，但優(yōu)選作用于氨基酸側(cè)鏈的氨基(例如s-氨基)被糖化的氨基酸或肽、催化下述式(l，)中所示的反應(yīng)的酶(FAOD-S)。R1-CO-CH2-NH-R2+H20+02—Ri-CO-CHO+NHrR^+HA...(1，)上述式(1，)中，R^與上述式(1)的R^相同，Pe可用下述式(4，)表示。下述式(4，)中"-(CH2)4-"表示賴氨酸的側(cè)鏈基團中被糖化的氨基以外的部分。國(CH2)4-CH(NH-R6)-CO-R7...(4，)此外，上述式(4，)中，W為氫、氨基酸殘基或肽殘基，例如可用下述式(5，)表示。予以說明，下述式(5，)中，n為0以上的整數(shù)，R"表示氨基酸側(cè)鏈基團，氨基酸側(cè)鏈基團全部相同或不同。'-(CO-CR3H-NH)n-H...(5，)此外，上述式(4，)中，R^為羥基、氨基酸殘基或肽殘基，例如可用下述式(6，)表示。予以說明，下述式(6，)中，n為0以上的整數(shù)，113與上述同樣表示氨基酸側(cè)鏈基團，氨基酸側(cè)鏈基團全部相同或不同。-(NH-CHR3-CO)n畫OH...(6，)特異性作用于上述被糖化的氨基酸側(cè)鏈的FAOD-S可舉出例如鐮刀菌屬來源的FAOD(日本生物工學(xué)會大會平成12年度「Fusadumoxysporum由來7S/酸才*〉f一七O基質(zhì)特異性O(shè)変換；藤原真紀他」)(日本生物工學(xué)會大會平成12年度"Fusariumoxysporum來源的氨基酸氧化酶的底物特異性的變換；藤原真紀等，，)等。予以說明，F(xiàn)AOD還可進一步具有上述式(1，)以外的底物特異性，也可4吏用如上所述的FAOD-aS。這種FAOD的情況下，例如可選擇與國際7>開第2002/006519號小冊子中記載的蛋白酶等類似的、不生成N末端的a位氨基被糖化的糖化氨基酸的蛋白酶(例如特異地切斷賴氨酸及含有賴氨酸的肽的蛋白酶)，通過與其進行組合，可抑制對其他糖化部位的作用。GHbLys%可如下求得通過吸光度測定間接地求得Hb的Lys的側(cè)鏈氨基的糖化量(GHbLys濃度)，再如下述式中所示，算出Lys的側(cè)鏈氨基酸的糖化量(GHbLys濃度)與樣品中的總Hb量(Hb濃度)之比(百分比)。GHbLys%=(Lys的側(cè)鏈氨基的糖化量/Hb量)xioo予以說明，Hb的糖化率(％)的測定中，各處理工序可如上所述分別進行，但在不影響測定的范圍內(nèi)也可同時進行各處理。作為具體例子，可按如下的組合同時進行各處理。此外，蛋白酶、FAOD、POD、顯色底物的添加順序不受特別限制，其中，上述色素物質(zhì)只需在吩噻。秦衍生物色素的吸光度測定前添力。即可，可在任一工序中添加。1:;容血處理+蛋白酶處理2:蛋白酶處理+FAOD處理3:FAOD處理+POD處理4:蛋白酶處理+FAOD處理+POD處理<顯色劑試劑>其次，本發(fā)明的顯色劑試劑的特征在于，其為在上述本發(fā)明的吩噻溱衍生物色素的檢測方法或本發(fā)明的目的成分的測定方法中使用的顯色劑試劑，所述顯色劑試劑含有通過氧化還原反應(yīng)而生成吩p塞。秦衍生物色素的化合物或吩塞。秦衍生物色素兩者中任一種顯色劑、以及本發(fā)明的位移試劑(上述的色素物質(zhì))。上述顯色劑試劑中的上述顯色劑與上述色素物質(zhì)的添加比例不受特別限制，例如相對于lmol顯色劑，色素物質(zhì)例如為0.1~lOOOmol，^尤選為1~500mol,更^尤選為4~300mol。jt匕夕卜，上述顯色劑試劑中的顯色劑與色素物質(zhì)的濃度不受特別限制，例如可考慮添加于反應(yīng)體系時的終濃度及添加在反應(yīng)體系后的稀釋比例等而適當決定。上述顯色劑試劑可為固體(dry)或液體(wet)中的任一種。添加該試劑的反應(yīng)體系為液體的情況下，例如可在使用時溶解于適當?shù)娜軇┲凶鳛橐后w試劑，也可以液體狀態(tài)保存使用。上述的色素物質(zhì)，其中特別是5-羥基-1-(4-磺酸苯基)-4-(4-磺酸苯基偶氮)吡唑-3-羧酸及其鹽、黃色5號及紅色2號等，優(yōu)選應(yīng)用于液體試劑。使該色素物質(zhì)以液體狀態(tài)與顯色劑共存的情況下，由于上述色素物質(zhì)的存在，例如遮擋了對液體內(nèi)的顯色劑的光照，上述顯色劑的自然顯色被抑制。因此，采用本發(fā)明，顯色劑試劑可長時間以液體狀態(tài)保存，特別適合于使用DA-67這樣的對光不穩(wěn)定的顯色劑的場合。上述顯色劑試劑的pH不受特別限制，例如可依據(jù)顯色劑的種類及目的的測定方法中的反應(yīng)體系的pH條件等適當決定。具體例子例如為4~9，優(yōu)選為5~9。此外，顯色劑為10-(羧甲基氨基羰基)-3,7-雙(二甲氨基)吩噻嗪鹽(商品名DA-67;和光純藥公司生產(chǎn))的情況下，例如為4~10，優(yōu)選為5~9。本發(fā)明的顯色劑試劑例如可為僅含有顯色劑與本發(fā)明的位移試劑(色素物質(zhì))的試劑，也可例如依據(jù)目的的測定方法進一步含有各種酶及添加物等。針對本發(fā)明的顯色劑試劑，舉出一個使用于上述糖化Hb測定方法中的例子進行說明。予以說明，本發(fā)明不受該例限制。如上所述，糖化Hb的測定(糖化率的測定)中，例如可使用蛋白酶、FAOD、POD、顯色劑，^旦也可將以下的第l試劑與本發(fā)明的顯色劑試劑即第2試劑組合使用。第l試劑例如為含有FAOD、POD的試劑，此外例如也可含有緩沖劑、血細胞溶血用的表面活性劑、促進蛋白酶處理的上述促進化合物等。這些各成分的含有比例不受特別限制，例如反應(yīng)體系中的第l試劑的最終稀釋倍率設(shè)定為1.3倍的情況下，例如FAOD為0.3~10KU/L,POD為1~50KU/L，緩沖劑為10~200mrnol/L,表面活性劑為0.1~10g/L，促進4匕合物為0.1~10g/L,pH侈寸^口為5~8。第2試劑例如為含有色素物質(zhì)、蛋白酶、顯色劑的試劑，此外例如也可含有緩沖劑、氯化鈣等的鹽、十六烷基三曱基氯化銨等。這些各成分的含有比例不受特別限制，例如反應(yīng)體系中的第2試劑的最終稀釋倍率設(shè)定為5.3倍的情況下，例如色素物質(zhì)為10~1000mg/L,蛋白酶為100~5000KU/L，顯色劑為0.005~0.1mmol/L，纟爰沖劑為10~300mmol/L,氯化4丐為0.520mmol/L，十六烷基三甲基氯化銨為0.1~3mmol/L,pH例如為4~7。本發(fā)明的顯色劑試劑可作為在本發(fā)明的吩噻溱衍生物色素的檢測方法或目的成分的測定方法中使用的試劑盒的組成試劑使用。本發(fā)明中的試劑盒含有本發(fā)明的顯色劑試劑，具體例子可舉出含有如上所述的第l試劑及本發(fā)明的顯色劑試劑即第2試劑的組成。此外，采用本發(fā)明的顯色劑試劑，通過使本發(fā)明的位移試劑(上述色素物質(zhì))與顯色劑共存，例如也可抑制吩p塞。秦衍生物色素的自然產(chǎn)生。因此，本發(fā)明的位移試劑例如也可作為抑制由上述顯色劑自然產(chǎn)生吩p塞。秦衍生物色素的抑制劑使用。上述色素物質(zhì)作為上述抑制劑使用的情況下，與上述同樣，上述顯色劑試劑中的顯色劑與色素物質(zhì)的含有比例及濃度不受特別限制。<吸收光i普的位移方法〉本發(fā)明的位移方法的特征在于，其為一種4吏反應(yīng)體系中的吩漆。秦書f生物色素的吸收光譜位移的方法，該方法在上述反應(yīng)體系中添加上述色素物質(zhì)(本發(fā)明的位移試劑)。如上所述，采用本發(fā)明的位移試劑，可使吩瘞。秦書f生物色素的吸收光譜位移至長波長處。具體方法例如與本發(fā)明的吩噻。秦衍生物色素檢測方法相同。以下，通過實施例進一步具體說明本發(fā)明，但本發(fā)明不受限于此。實施例1使各種位移試劑與亞甲藍共存，對于亞曱藍，確認其是否發(fā)生吸光度峰的位移或光譜向長波長處的位移。(位移試劑)No.l酒石黃No.2食品添加劑食用黃色5號No.3食品添力口劑食用紅色2號No.4食品添加劑食用紅色3號No.5食品添力口劑食用紅色102號No.6食品添力口劑食用紅色104號No.7食品添力口劑食用紅色105號No.8可可色素(關(guān)東化學(xué)公司生產(chǎn))No.9柿色素(關(guān)東化學(xué)/^司生產(chǎn))(反應(yīng)液組成)亞甲藍0.4mg/LMOPS300mmol/L(pH6.5)j立牙多i式劑300mg/L采用分光光度計(商品名HITACHIU-3300:日立/>司生產(chǎn))測定上述反應(yīng)液的光i昝，確認了亞曱藍的光i普中的極大吸收波長、最大吸光度及700nm處的吸光度。此外，對不添加位移試劑的反應(yīng)液同樣進行了測定，將其作為比較例l。其結(jié)果如下述表1中所示。此外，含有位移試劑No.l(酒石黃)或位移試劑No.8(可可色素)的反應(yīng)液(實施例)及不添加位移試劑的反應(yīng)液(比較例)的光譜分別如圖l及圖2所示。予以說明，兩圖中實線為實施例的光謙，虛線為比較例的光錯。<table>tableseeoriginaldocumentpage43</column></row><table>如上述表l中所示，使用任一位移試劑的情況下，或顯示最大的吸光度的極大吸收波長位移至長波長處，或極大吸收波長雖不改變但可觀察到光諳有整體向長波長處位移的傾向。前者的現(xiàn)象在位移試劑No.l~3及5中觀察到。具體以圖1中所示為例，使用位移試劑No.l的反應(yīng)液中，極大吸收波長從666nm位移至長波長處，與比較例l相比，700nm處的吸光度也增加到約5倍左右，可知其為能夠進行充分測定的吸光度。此外，后者的現(xiàn)象在位移試劑No.4及6~9中乂見察到。具體以圖2中所示為例，使用位移試劑No.8的反應(yīng)液中，極大吸收波長雖為664nm,但664nm處的吸光度減少，且光譜整體位移至長波長處。因此700nm處的吸光度與比4支例l相比也有增加。予以-說明，吸光度測定中，通常吸光度若顯示0.05左右即可判斷為可充分可靠的測定值。因此，根據(jù)實施例，可判斷700nm處得到了充分的測定值。實施例2采用通過氧化生成亞甲藍的顯色劑DA-67與上述實施例1的位移試劑，進^f亍了HbAlc。/。的測定。(樣品)將下述商品用下述稀釋液稀釋27倍后的溶液(以下分別稱"低"、"中"、"高，，)作為樣品。此外，z使用純化水作為對照。<低>IFCCcontrolBarcelona,LowHbAlc，NormalHemoglobin(HbAlc%=3.2%)(IFCC對照，巴塞羅那，低HbAlc,正常血紅蛋白(HbAlc%=3.2%))<中〉IFCCcontrolBarcelona,MediumHbAlc，MediumHemoglobin(HbAlc%=5.1%)(IFCC對照，巴塞羅那，中HbAlc,中等血紅蛋白(HbAlc%=5.1%))IFCCcontrolBarcelona,HighHbAlc,NormalHemoglobin(HbAlc%=7.5%)(IFCC對照，巴塞羅那，高HbAlc，正常血紅蛋白(HbAlc%=7.5%))(稀釋液)PIPES30mmol/L(pH7)正十二烷基-aP-D-麥芽糖苷0.5g/LKN0235mM(方法)將上述各樣品6.5nL與純化水6.5jiL混合后，再與78pL下述第l試劑(Rl)混合。將該混合液于37。C下孵育5分鐘后，添加19.5)iL下述第2試劑(R2),于37。C下進行蛋白酶處理及顯色反應(yīng)。隨后，采用生化自動分析裝置(商品名JCA-BM8:日本電子7>司制)測定添加第2試劑前的反應(yīng)液在波長658nm處的吸光度(A。)及在波長694nm處的吸光度(AQ，)、以及添加第2試劑5分鐘后的反應(yīng)液在波長658nm處的吸光度(A5)及在波長694nm處的吸光度(A5，)，求得其差(A5-Aq)及(A5，-Aq，)。予以說明，對于^f吏用不添加位移試劑的第2試劑的樣品，也進行了同樣測定，將其作為比較例2。其結(jié)果如下述表4中所示。<table>tableseeoriginaldocumentpage46</column></row><table>如上述表4中所示，不添加位移試劑的比4交例2中，隨著樣品的HbAlcO/。上升({氐—中—高)，658nm處的吸光度差(A5-A。)逐一增加0.01左右，但694nm處的吸光度差(A5，-Ao，)基本未見變化。此外，即便對于HbAlcy。高的樣品"高"，694nm處的吸光度差為0.009，不滿足作為具有可靠性的測定值所需的量級(0.01左右以上)。與此相對，添加了位移試劑的實施例2中，無論4吏用何種位移試劑，隨著樣品的HbAlc。/o的上升(低—中—高)，694nm處^T及光度差(A5，-A0，)逐一i曽力口0.005~0.006。此外，即便對于HbAlcQ/o最低的樣品"低"，也顯示0.01以上的上述吸光度差，滿足了作為具有充分可靠性的測定值所需的量級。由以上的結(jié)果可知，在亞甲藍的4企測中，^吏用如上所述的位移試劑可在比以往的660nm附近更長波長處進4于亞甲藍的4全測，且利用長波長處的亞甲藍的檢測可進行HbAlc。/Q的測定。使各種吩噻漆衍生物色素與各種位移試劑共存，對于上述色素，確認其是否產(chǎn)生吸光度峰的位移或光譜向長波長處的位(吩p塞。秦衍生物溶液)下述々亍生物以lmmol/mL溶解于純化水中。亞曱藍(東京化成工業(yè))天青C(Fluka公司)天青A(Fluka公司)1，9-二甲基-吩噻溱(1,9-二曱基-3,7-雙(二曱氨基)吩噻。秦鹽，Sigma^/^司)甲苯胺藍O(Sigma公司)天青B(和光純藥公司)亞甲基綠(MPBiomedica)(色素物質(zhì)溶液)下述色素物質(zhì)以1Ommol/mL溶解于純化水中。實施例3No.l酒石黃No.2食品添加劑食用黃色5號No.3食品添加劑食用紅色2號(緩沖液)MES-NaOH緩沖液30mmol/mLpH5.8MOPS-NaOH緩沖液30mmol/mLpH7.6[表5〗(反應(yīng)液組成)_對照例_實施例_p分p塞"秦書f生物溶液0.05ml0.05ml色素物質(zhì)'溶液0ml0.05ml緩沖液3ml2.95ml在制備后立即用分光光度計(商品名V-550:日本分光公司生產(chǎn))對上述反應(yīng)液進行光譜測定，確認一及大吸收波長以及700nm處的吸光度。此夕卜，對不添加色素物質(zhì)的反應(yīng)液進行了同樣的測定，將其作為比較例。首先，上述反應(yīng)液的4及大吸收波長如表6所示。予以說明，下述表中括號內(nèi)的數(shù)值表示對照與實施例的極大吸收波長之差。如下述表中所示，在各色素物質(zhì)的存在下，與對照相比，任一吩噻。秦衍生物色素的極大吸收波長都能位移至長波長處。[表6]緩沖液(pH5.8)<table>tableseeoriginaldocumentpage49</column></row><table>其次，上述反應(yīng)液的700nm處的吸光度如下述表7所示。下述表中，括號內(nèi)的數(shù)值表示對照與實施例在700nm處的吸光度的差。如下述表中所示，在各位移試劑的存在下，任一吩p塞溱衍生物色素在700nm處的吸光度都上升了。緩沖液(pH5.8)<table>tableseeoriginaldocumentpage50</column></row><table>另外，含有各種吩噻。秦衍生物色素與各種位移試劑的反應(yīng)液的光鐠如圖3圖5所示。予以說明，這些結(jié)果為扣除位移試劑單獨的吸收光譜后的光譜。圖3圖5中，(A)為亞曱藍，(B)為天青C,(C)為天青A(Fluka公司)，(D)為1,9-二曱基-吩噻溱，(E)為甲苯胺藍O,(F)為天青B,(G)為亞甲基綠的結(jié)果。此外，該圖中O的實線為對照(不添加位移試劑)，No.l的虛線為酒石黃，No.2的虛線為食用黃色5號，No.3的虛線表示食用紅色2號的結(jié)果。如各圖中所示，在位移試劑的存在下，與對照(l的實線)相比，確認了任一吩瘞。秦衍生物色素的吸收光譜都位移至長波長處。實施例4生成亞曱藍的顯色劑通常顯示易被光分解的性質(zhì)，對此類顯色劑，在色素物質(zhì)(上述位移試劑)的共存下，確認了上述色素物質(zhì)抑制了亞甲藍的自然產(chǎn)生而導(dǎo)致的背景上升。與實施例2同樣制備第2試劑(R2)后，以暴露于光中的狀態(tài)在冰箱中保存30天。予以說明，第2試劑中添加的色素物質(zhì)為實施例2中的No.1(酒石黃100mg/L)及No.3(食品添力口劑食用黃色4號100mg/L)。將78pL下述第l試劑(Rl-3)與13^L純化水混合，于37。C下孵育5分鐘后，添加19.5^iL保存后的上述第2試劑(R2)。隨后，采用生化自動分析裝置(商品名JCA-BM8:日本電子公司制)測定添加第2試劑前的反應(yīng)液在波長694nm的雙ib1(A。，)，以及添加第2試劑5分鐘后的反應(yīng)液在波長694nm處的吸光度(A5，)，求得其差(A5，-AQ，)。此外，對于使用不添加色素物質(zhì)的第2試劑的樣品，也對其進行了同樣測定，將其作為比較例3。予以說明，為公平比較第2試劑的背景的上升，在下述第l試劑(R1-3)中添加了大量的酒石黃。(第l試劑.Rl-3)FPOX-CE7乂公司生產(chǎn))1.3KU/LPOD5KU/LPIPES30mmol/L(pH7)EmulgenA-500(花王公司生產(chǎn))0.05g/L正十二烷基-aP-D-麥芽糖苷2.5g/L酒石黃1g/L[表9]<table>tableseeoriginaldocumentpage52</column></row><table>如上述表9中所示，與采用不添加色素物質(zhì)的第2試劑的比較例3相比，采用添加了色素物質(zhì)的第2試劑的各實施例4中，可抑制694nm處的吸光度上升(背景上升)。即，上述顯色劑雖有易被光分解的性質(zhì)，^旦通過在第2試劑中添加色素物質(zhì)，光^皮遮擋，亞甲藍的自然產(chǎn)生受到抑制。因此，使顯色劑與上述色素物質(zhì)共存時，如上所述，不僅可在長波長區(qū)進行測定，例如，也可以液體狀態(tài)保存至使用時止，在使用不耐光的顯色劑的測定方法中為非常有用的試劑。實施例5在上述色素物質(zhì)的共存下，對于通過氧化生成亞曱藍的亞曱藍生成顯色劑DA-67進行光照，確認了由上述色素物質(zhì)(位移試劑)引起的生成顯色劑的分解抑制效果(抑制亞曱藍的自然產(chǎn)生)。(DA-67溶液)與實施例2同樣的DA-67以0.05mmol/mL溶解于30mmol/mL的MOPS-NaOH(pH7.6)中。(色素物質(zhì)溶液)下述色素物質(zhì)以10mmol/mL溶解于純化水中。No.l酒石黃No.2食品添加劑食用黃色5號No.3食品添加劑食用紅色2號以DA-67的終濃度為0.025mmol/mL、色素物質(zhì)的終濃度按規(guī)定濃度(0.1mmol/mL、0.2mmol/mL、0.4mmol/mL)的方式，將上述DA-67溶液、色素物質(zhì)及純化水混合，制備成樣品(各10mL)。在15點~16點的1小時中，將裝有這些樣品的透明je皮璃容器置于朝南的毛玻璃附近，暴露于日光中。溫度為25。C。暴露后，采用分光光度計(V-550,日本分光)測定光譜。此外，作為對照，使用純化水代替色素物質(zhì)溶液，進行了同樣的測定。對于各樣品，在各色素物質(zhì)相應(yīng)的最大吸收波長處的吸光度測定結(jié)果如下述表中所示。上述最大吸收波長分別為No.l(酒石黃)666腿、No.2(黃色5號)681nm、No.3(紅色2號)646nm。予以說明，下述表中最大顯色吸光度為在各樣品組成中含有的DA-67全部生成亞甲藍的情況下的吸光度，亞甲藍的生成率為暴露后的亞甲藍的生成率，采用以最大顯色吸光度作為100%時的暴露后的吸光度的比率表示。[表IO]<table>tableseeoriginaldocumentpage53</column></row><table>如上述表中所示，在色素物質(zhì)的共存下，將DA-67暴露于曰光中的情況下，與不添加色素物質(zhì)的對照相比，由暴露導(dǎo)致的吸光度的上升受到了抑制。即，通過色素物質(zhì)抑制了由DA-67生成(自然產(chǎn)生)亞曱藍。產(chǎn)業(yè)上的可利用性如上所述，釆用本發(fā)明，例如通過在含有吩p塞、秦衍生物色素的反應(yīng)體系中添加上述色素物質(zhì)，即1更在比顯示最大吸收的波長更長波長處，也可^r測p分p羞。泰4汙生物色素。因jl:匕，例力O即便樣品中含有在660nm處顯示吸收的目的成分外的成分，也可避免其導(dǎo)致的影響而一僉測吩p塞。秦書于生物色素。此外，因700nm處的吸收增加，例如，即便是檢測波長i殳定于700nm的裝置也可檢測吩p塞。秦衍生物色素。從而，采用本發(fā)明的方法，改進了吩噻溱4汙生物色素的4全測條件，因此與以往相比可進一步拓寬生成吩p塞。秦衍生物色素的顯色劑及吩瘞。秦衍生物色素作為顯色劑的應(yīng)用范圍。權(quán)利要求1.一種吩噻嗪衍生物色素檢測方法，其特征在于，其為通過吸光度測定來檢測反應(yīng)體系中的吩噻嗪衍生物色素的方法，所述方法包括吩噻嗪衍生物色素的檢測工序，上述檢測工序中，在選自下述式(I)表示的化合物、下述式(II)表示的化合物及類黃酮系色素所組成的組中的至少一種色素物質(zhì)的存在下，進行吩噻嗪衍生物色素的檢測；R1-N＝N-R2...(I)上述式(I)中，R1為R2為R1及R2中，X為氫、鹵素、鈉或鉀，Y為氫或SO3X，各X相同或不同，各Y相同或不同，Z為氫、甲基或甲氧基，各Z相同或不同，上述式(II)中，X為氫、鹵素、鈉或鉀，各X相同或不同，Y為氫、鹵素、鈉或鉀，各Y相同或不同。2.才艮據(jù)權(quán)利要求1所述的#全測方法，其中，上述式(I)表示的化合物為選自5-羥基-1-(4-磺酸苯基)-4-(4-磺酸苯基偶氮)吡唑-3-羧酸及其鹽、6-羥基-5-(4-磺酸苯基偶氮)-2-萘磺酸及其鹽、3-羥棊-4_(4-磺酸萘基偶氮)-2，7-萘二磺酸及其鹽、6_羥基_5_[(2-曱氧基-5-甲基-4-磺酸苯基)偶氮]萘-2-磺酸及其鹽以及7-羥基-8-(4-磺酸萘基偶氮)-1,3-萘二磺酸及其鹽所組成的組中的至少一種色素物質(zhì)。3.根據(jù)權(quán)利要求l所述的檢測方法，其中，上述式(II)表示的化合物為選自3，，6，-二羥基-2，,4，，5，，7，-四碘螺[異苯并呋喃誦l(3H),9，-(9H)站噸]-3-酮及其鹽、3，，6，-二羥基-2，,4，，5，，7，-四溴-4，5,6,7-四氯螺[異苯并呋喃-l(3H),9，-[9H]咕噸]-3-酮及其鹽、4，5，6,7-四氯-3，，6，-二羥基-2，,4，，5，，7，-四碘螺[異苯并呋喃-l(3H)，9，-[9H]口占噸]國3畫酮及其鹽、2,4,5,7-四溴國3,6-二鞋基站噸-9-螺-l，-3H-異苯并呋喃-3，-酮及其鹽以及3,6-二鞋基卩占噸-9-螺-l，-3'H-異苯并呋喃-3，-酮及其鹽所組成的組中的至少一種色素物質(zhì)。4.才艮據(jù);k利要求l所述的檢測方法，其中，上述類黃酮系色素為柿色素及柿色素中的至少一種。5.才艮據(jù)權(quán)利要求l所述的檢測方法，其中，相對于lmol吩p塞。秦衍生物色素，上述反應(yīng)體系中添加的上述色素物質(zhì)的比例在1~1000mol的范圍。6.根據(jù)權(quán)利要求l所述的檢測方法，其中，上述檢測工序中吸光度的測定波長在610~730nm的范圍。7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的4企測方法，其中，于上述4企測工序之前在上述反應(yīng)體系中添加上述色素物質(zhì)。8.根據(jù)權(quán)利要求l所述的檢測方法，其中，上述吩噻溱衍生物色素為二氨基吩噻，秦或其書f生物。9.根據(jù)權(quán)利要求l所述的檢測方法，其中，上述吩p塞。秦衍生物色素為下述式(III)表示的化合物、其互變異構(gòu)體或立體異構(gòu)體、或它們的鹽，R4YYR6...(III)上述式(III)中，113~116分別為氫原子或烷基，任選相同或不同，Z分別為氫原子、烷基、硝基、氨基、卣素、磺基或羧基，任選相同或不同。10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的檢測方法，其中，r3RS中，上述烷基為碳原子數(shù)l~6的直鏈或支鏈烷基。11.根據(jù)權(quán)利要求9所述的檢測方法，其中，R3~R6t,上述烷基為甲基。12.根據(jù)權(quán)利要求9所述的檢測方法，其中，Z中，上述烷基為碳原子數(shù)l~6的直鏈或支鏈烷基。13.根據(jù)權(quán)利要求9所述的檢測方法，其中，Z中，上述烷<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>基為曱基。14.根據(jù)權(quán)利要求l所述的檢測方法，其中，上述吩p塞。泰衍生物色素為選自亞曱藍、天青A、天青B、天青C、甲苯胺藍O、1,9-二甲基-3,7-雙(二甲氨基)吩噻溱鹽及亞甲基綠所組成的組中的至少一種。15.根據(jù)權(quán)利要求l所述的檢測方法，其中，上述吩蓬。秦衍生物色素為亞曱藍。16.根據(jù)權(quán)利要求l所述的檢測方法，其包括顯色劑添加工序在上述反應(yīng)體系中添加通過氧化還原反應(yīng)而生成p分p塞溱務(wù)亍生物色素的顯色劑，通過上述顯色劑與上述反應(yīng)體系中的氧化物質(zhì)或還原物質(zhì)的氧化還原反應(yīng)，生成卩分p塞溱彩f生物色素，上述吩p塞溱書f生物色素的檢測工序中，通過吸光度測定來測定有無生成p分噻嗪書f生物色素或生成量。17.才艮據(jù)4又利要求16所述的才企測方法，其中，上述p分瘞。秦衍生物色素為亞甲藍，上述顯色劑為選自10-(羧甲基氨基羰基)-3,7-雙(二曱氨基)吩噻嗪及其鹽以及無色亞曱藍所組成的組中的至少一種。18.根據(jù)權(quán)利要求l所述的檢測方法，其包括如下工序在上述反應(yīng)體系中添加吩噻。秦衍生物色素作為顯色劑，使上述吩噻"秦衍生物色素與上述反應(yīng)體系中的還原物質(zhì)發(fā)生氧化還原反應(yīng)，上述吩噻溱衍生物色素的檢測工序中，通過吸光度測定來測定上述反應(yīng)體系中添加的吩p塞溱書于生物色素有無減少或減少量。19.根據(jù)權(quán)利要求18所述的檢測方法，其中，上述吩瘞。秦衍生物色素為亞甲藍，通過上述亞甲藍與上述反應(yīng)體系中的還原物質(zhì)的氧化還原反應(yīng)，由亞曱藍生成無色亞甲藍。20.根據(jù)權(quán)利要求15或17所述的檢測方法，其中，相對于lmol上述顯色劑，上述反應(yīng)體系中上述色素物質(zhì)的比例在O.l~1000mol的范圍。21.根據(jù)權(quán)利要求16或18所述的檢測方法，其中，上述反應(yīng)體系中上述色素物質(zhì)的終濃度在lxl(T60.1mol/L的范圍。22.—種測定方法，其特征在于，其為通過一全測吩噻"秦衍生物色素來測定樣品中的目的成分的方法，所述方法包括下述(A)~(E)工序(A)由上述樣品中的目的成分生成氧化物質(zhì)或還原物質(zhì)的工序；(B)在上述樣品中，添加通過氧化還原反應(yīng)而生成吩噻。秦衍生物色素的顯色劑的顯色劑添加工序；(C)通過上述氧化物質(zhì)或還原物質(zhì)與上述顯色劑的氧化還原反應(yīng)而生成吩p塞。秦書于生物色素的工序；(D)通過權(quán)利要求1所述的吩噻。秦衍生物色素的檢測方法來檢測吩p塞溱衍生物色素，以測定有無生成上述吩噻溱衍生物色素或生成量的工序；(E)由上述測定結(jié)果判斷上述樣品中的目的成分的有無或量的工序。23.根據(jù)權(quán)利要求22所述的檢測方法，其包括下述(B，)~(D，)工序來替換上述(B)~(D)工序(B，)在上述樣品中，添加吩噻嗪衍生物色素作為顯色劑的工序；(C，)使由上述樣品中的目的成分生成的還原物質(zhì)與吩p塞。秦衍生物色素發(fā)生氧化還原反應(yīng)的工序；(D，)通過權(quán)利要求1所述的吩噻。秦衍生物色素的檢測方法來4全測吩p塞溱書f生物色素，以測定添加的上述p分p塞。秦衍生物色素有無減少或減少量的工序。24.根據(jù)權(quán)利要求22所述的測定方法，其中，上述目的成分為糖化蛋白質(zhì)。25.根據(jù)權(quán)利要求22所述的測定方法，其中，上述(A)工序中，使果糖氨基酸氧化酶作用于糖化蛋白質(zhì)，生成作為氧化物質(zhì)的過氧化氫。26.根據(jù)權(quán)利要求22所述的測定方法，其中，上述(C)工序中，在氧化酶作用下，上述過氧化氫與上述顯色劑進行氧化還原反應(yīng)，生成吩瘞。秦衍生物色素。27.根據(jù)權(quán)利要求22所述的測定方法，其中，上述吩噻溱衍生物色素為亞曱藍，上述(B)工序中的上述顯色劑為IO-(羧甲基氨基羰基)_3，7_雙(二甲氨基)吩噻嗪及其鹽中的至少一種。28.—種位移試劑，其特征在于，其為使吩噻嗪衍生物色素的吸收光譜位移的位移試劑，所述位移試劑含有選自下述式(I)表示的化合物、下述式(II)表示的化合物及類黃酮系色素所組成的組中的至少一種色素物質(zhì)，R、N,-R2...(I)上述式(I)中，R'為R2為<formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula>R'及R2中，x為氫、鹵素、鈉或鉀，Y為氫或S03X，各X相同或不同，各Y相同或不同，Z為氫、曱基或甲氧基，各Z相同或不同，上述式(II)中，X為氬、卣素、鈉或鉀，各X相同或不同，Y為氬、卣素、鈉或鉀，各Y相同或不同。29.根據(jù)權(quán)利要求28所述的位移試劑，其中，上述式(I)表示的化合物為選自5-羥基-1-(4-磺酸苯基)-4-(4-磺酸苯基偶氮)吡唑-3-羧酸及其鹽、6-羥基-5-(4-磺酸苯基偶氮)-2-萘磺酸及其鹽、3-羥基-4-(4-磺酸萘基偶氮)-2,7-萘二磺酸及其鹽、6-羥基-5-[(2-甲氧基-5-曱基-4-磺酸苯基)偶氮]萘-2-磺酸及其鹽以及7-羥基-8-(4-磺酸萘基偶氮)-1,3-萘二磺酸及其鹽所組成的組中的至少一種色素物質(zhì)。30.根據(jù)權(quán)利要求28所述的位移試劑，其中，上述式(II)表示的化合物為選自3，,6，-二羥基-2，,4，，5，,7，-四碘螺[異苯并呋喃國l(3H),9，-(9H)站噸]-3-酮及其鹽、3，，6，-二鞋基-2，,4，，5，，7，-四溴-4，5,6，7-四氯螺[異苯并呋喃-l(3H),9，-[9H]卩占噸]-3-酮及其鹽、4,5,6,7-四氯-3，，6，-二羥基-2，，4，，5'，7，-四硪螺[異苯并呋喃-1(3H)，9'-[9H]口占噸]-3-酮及其鹽、2，4，5,7-四溴-3,6-二羥基口占噸-9-螺-l，-3H-異苯并呔喃-3，-酮及其鹽以及3,6-二羥基咕噸-9-螺-1，-3，H-異苯并呋喃-3，-酮及其鹽所組成的組中的至少一種色素物質(zhì)。31.根據(jù)權(quán)利要求28所述的位移試劑，其中，上述類黃酮系色素為可可色素及柿色素中的至少一種。32.—種顯色劑試劑，其特征在于，其為權(quán)利要求l所述的檢測方法中使用的顯色劑試劑，所述顯色劑試劑含有通過氧化還原反應(yīng)而生成吩p塞嗪衍生物色素的化合物及吩噻。秦書于生物色素中任一種顯色劑、以及沖又利要求28所述的位移試劑。33.根據(jù)權(quán)利要求32所述的顯色劑試劑，其中，上述顯色劑為IO-(羧甲基氨基羰基)-3,7-雙(二甲氨基)吩噻嗪及其鹽中的至少一種。34.根據(jù)權(quán)利要求32所述的顯色劑試劑，其中，相對于lmol上述顯色劑，上述位移試劑的添加比例在O.l~1000mol的范圍。35.根據(jù)權(quán)利要求32所述的顯色劑試劑，其中，上述顯色劑i式劑的pH為49。全文摘要本發(fā)明提供一種吩噻嗪衍生物色素檢測方法，該方法即便在比顯示最大吸收的波長更長波長處也能檢測吩噻嗪衍生物色素。在含有吩噻嗪衍生物色素的反應(yīng)體系中，添加5-羥基-1-(4-磺酸苯基)-4-(4-磺酸苯基偶氮)吡唑-3-羧酸鹽、6-羥基-5-(4-磺酸苯基偶氮)-2-萘磺酸鹽、3-羥基-4-(4-磺酸萘基偶氮)-2，7-萘二磺酸鹽、7-羥基-8-(4-磺酸萘基偶氮)-1，3-萘二磺酸鹽、3’，6’-二羥基-2’，4’，5’，7’-四碘螺[異苯并呋喃-1(3H)，9’-(9H)呫噸]-3-酮鹽、3’，6’-二羥基-2’，4’，5’，7’-四溴-4，5，6，7-四氯螺[異苯并呋喃-1(3H)，9’-[9H]呫噸]-3-酮鹽、4，5，6，7-四氯-3’，6’-二羥基-2’，4’，5’，7’-四碘螺[異苯并呋喃-1(3H)，9’-[9H]呫噸]-3-酮鹽或類黃酮系色素后，通過波長610～730nm處的吸光度測定來檢測吩噻嗪衍生物色素。文檔編號G01N21/78GK101595386SQ200880003539公開日2009年12月2日申請日期2008年1月30日優(yōu)先權(quán)日2007年1月30日發(fā)明者稻村范郎,米原聰申請人:愛科來株式會社