專(zhuān)利名稱(chēng)：：一種害蟲(chóng)的生物測(cè)定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明屬于植物保護(hù)
技術(shù)領(lǐng)域：
，特別是涉及一種害蟲(chóng)的生物測(cè)定方法
背景技術(shù)：
：藥劑是防治薊馬等r-對(duì)策小蟲(chóng)最快捷有效的方法，也是害蟲(chóng)綜合治理(IPM)的重要組成部分。任何藥劑投放到田間使用前必須經(jīng)過(guò)室內(nèi)的篩選過(guò)程，因此探索出簡(jiǎn)便實(shí)用有效的生物測(cè)定方法就成為藥劑防治的基礎(chǔ)。目前常用的藥劑生物測(cè)定的方法包括點(diǎn)滴法、浸葉法、浸蟲(chóng)法、玻璃藥膜法等，這些方法適合針對(duì)體積較大的害蟲(chóng)測(cè)試藥劑的有效劑量，但是上述方法對(duì)于最大體長(zhǎng)僅1毫米的害蟲(chóng)來(lái)講均不適用。比如近年來(lái)，在蔬菜和花卉上的危害呈逐年上升的趨勢(shì)的薊馬，2001年棕櫚薊馬在我國(guó)北方首次發(fā)現(xiàn)，并對(duì)保護(hù)地蔬菜造成嚴(yán)重威脅。2003年一種新的入侵害蟲(chóng)一西花薊馬入侵我國(guó)，由于其入侵性強(qiáng)，危害廣泛而引起各界的廣泛關(guān)注。歐曉明1996年(《測(cè)定薊馬抗藥性的一種新技術(shù)》.農(nóng)藥科學(xué)與管理，1996(4):23-24)提出了一種玻璃殘留處理法，用于測(cè)定薊馬的抗藥性，但該方法步驟多，還需要Potter噴霧塔作為輔助設(shè)備，Potter噴霧塔因價(jià)格昂貴、操作復(fù)雜而不易被大多數(shù)單位采用。Ru6daandSheHon2003年(RuedaAandSheltonAM.DevelopmentofabioassaysystemformonitoringsusceptibilityinThripstabaci.PestManag.Sci.2003,59:553-558.)提出了一種針對(duì)薊馬的生物測(cè)定方法一TIBS(thripsinsectcidebioassaysystem),該方法設(shè)備簡(jiǎn)單、便于操作，適用于對(duì)田間薊馬種群的生物測(cè)定，通過(guò)藥劑處理容器內(nèi)部，使用真空泵吸取害蟲(chóng)到容器中，使害蟲(chóng)接觸到容器內(nèi)避上的藥膜而起觸殺作用，其對(duì)具有觸殺活性的藥劑能夠很準(zhǔn)確地進(jìn)行藥效評(píng)價(jià)，適合于小蟲(chóng)子的藥劑生物測(cè)定。但是該方法雖然解決了小體積害蟲(chóng)的藥劑生物測(cè)定中存在的困難，卻與上述的其他方法都存在一個(gè)缺陷沒(méi)有考慮到很多藥劑對(duì)于害蟲(chóng)不僅僅具有觸殺活性，對(duì)于同時(shí)具有觸殺、胃毒作用的藥劑，不能真實(shí)地測(cè)出該類(lèi)藥劑的有效活性，導(dǎo)致測(cè)試出來(lái)的劑量大大超過(guò)致死劑量，環(huán)境污染嚴(yán)重，也浪費(fèi)藥劑，還給害蟲(chóng)施加了較大的選擇壓力。對(duì)于體積較大一點(diǎn)的害蟲(chóng)，不存在難以操作的問(wèn)題，測(cè)試人員一般會(huì)直接將蟲(chóng)子浸泡在藥劑中測(cè)試藥物的觸殺活性，或者直接給害蟲(chóng)喂藥劑浸泡過(guò)的植物組織以測(cè)試藥劑的胃毒活性，但仍然沒(méi)有兼顧到觸殺與胃毒同時(shí)起作用的情況，導(dǎo)致在防治體積較大一點(diǎn)的害蟲(chóng)時(shí)給的藥劑量也大大高于所需，施藥時(shí)給環(huán)境造成污染更是不言而喻。
發(fā)明內(nèi)容針對(duì)上述領(lǐng)域中的缺陷，本發(fā)明提供了適用廣泛，對(duì)觸殺、胃毒同時(shí)作用的藥劑均能夠進(jìn)行有效測(cè)定的新方法-一命名為葉管藥膜法，該方法能準(zhǔn)確測(cè)定出一種藥劑對(duì)于害蟲(chóng)的最低有效劑量，既能有效毒殺害蟲(chóng)，又最高程度地減輕了環(huán)境污染和藥劑浪費(fèi)。一種害蟲(chóng)的生物測(cè)定方法，其特征是在內(nèi)置有害蟲(chóng)的且內(nèi)壁附著有藥劑的容器中放置經(jīng)相同濃度藥劑處理過(guò)的害蟲(chóng)喜食的植物組織。所述內(nèi)壁附著藥劑的容器是通過(guò)藥劑浸泡容器內(nèi)部得到。所述藥劑處理指藥劑浸泡植物組織。所述內(nèi)置的害蟲(chóng)可以用鑷子或毛筆等器具移入。所述容器底部有小孔，內(nèi)置的害蟲(chóng)可以采用真空泵產(chǎn)生的氣流吸入容器中。所述容器為塑料離心管。所述塑料離心管為0.5ml或1.5ML的有封口蓋的離心管。所述害蟲(chóng)為薊馬類(lèi)害蟲(chóng)。所述植物為害蟲(chóng)的寄生植物。本發(fā)明提供的藥劑測(cè)定方法以藥物對(duì)害蟲(chóng)的綜合作用方式測(cè)出被試藥劑的最低有效劑量，在內(nèi)壁附著有藥劑的容器中放置經(jīng)藥劑處理過(guò)的害蟲(chóng)喜食的植物組織，放入害蟲(chóng)后，害蟲(chóng)通過(guò)接觸容器內(nèi)壁的藥膜而使藥劑對(duì)其觸殺作用起效，放入的植物材料一方面起到喂養(yǎng)害蟲(chóng)的作用，另一方面通過(guò)被食用而使藥劑發(fā)揮胃毒作用。對(duì)于具有熏蒸作用的藥劑，可以采用密閉容器，即可保證觸殺作用、胃毒作用、熏蒸作用同時(shí)有效，因而能準(zhǔn)確有效地評(píng)價(jià)被試劑藥劑的效果。本方法所用的容器可以用很多方式使其內(nèi)壁附著藥膜，是藥劑劑型而定，本發(fā)明采用藥劑浸泡容器內(nèi)部使內(nèi)壁附著一層藥膜。對(duì)于植物材料的處理也可以采用很多方式使其成為藥劑的載體，例如噴霧、浸泡，本發(fā)明中用最簡(jiǎn)單的浸泡方法。對(duì)于被試害蟲(chóng)，體積若較大，大至用鑷子或者柔軟毛筆可以將其轉(zhuǎn)移到容器中而不會(huì)對(duì)起生命力造成損傷的，則直接用鑷子或毛筆將其移入容器中，而對(duì)于體積小至肉眼難以逐個(gè)分辨的害蟲(chóng)，如薊馬類(lèi)害蟲(chóng)，本發(fā)明采用了真空泵的氣流將蟲(chóng)子吸入容器的方法，此時(shí)所用的容器是底部有小孔的管子，蟲(chóng)子被氣流經(jīng)小孔送入容器內(nèi)，然后用封口膜將小孔封住。這樣避免了傳統(tǒng)方法中用毛筆或者鑷子直接挑取害蟲(chóng)時(shí)對(duì)害蟲(chóng)的生命力造成損傷而影響準(zhǔn)確測(cè)定，操作方便。本發(fā)明采用實(shí)驗(yàn)室常用的塑料帶密封蓋的離心管，這類(lèi)管子使用成本低，易于獲得，且方便在其底部穿刺出吸蟲(chóng)的小孔。本發(fā)明提供的藥劑生物測(cè)定方法所用的容器視被試的害蟲(chóng)的體積而定，對(duì)于蚜蟲(chóng)、薊馬類(lèi)微小體積的害蟲(chóng)，1.5ML或者0.5ML的塑料離心管就可以達(dá)到要求，而不必使用玻璃或塑料的培養(yǎng)皿、試管或三角瓶等作為實(shí)驗(yàn)容器，這些需占用較大空間，而且許多玻璃器皿容易破損，刷洗不便，費(fèi)工費(fèi)力。本發(fā)明的生物測(cè)定方法對(duì)于防治r-對(duì)策小蟲(chóng)是一種快捷有效的方法，特別是薊馬這種危害嚴(yán)重，難以防治的害蟲(chóng)，因此本發(fā)明以薊馬作為試蟲(chóng)，試驗(yàn)證明本發(fā)明的藥劑生物測(cè)試方法對(duì)于防治種類(lèi)害蟲(chóng)能快速提供有效的用藥標(biāo)準(zhǔn)。本發(fā)明提供的藥物測(cè)定方法中使用了害蟲(chóng)食用的植物材料，該植物材料最好是被試害蟲(chóng)的寄主植物且是其喜歡食用的組織，這樣能最大程度地接近實(shí)際生產(chǎn)中防治害蟲(chóng)的環(huán)境條件，對(duì)于準(zhǔn)確測(cè)定藥劑的效果非常重要。具體實(shí)施方式實(shí)施例1葉管藥膜法步驟l:浸管藥劑配制6-7個(gè)濃度如表1，另加l個(gè)空白對(duì)照，將每個(gè)濃度藥液分別注滿(mǎn)1.5mL離心管4只，每只為1重復(fù)，用記號(hào)筆標(biāo)記好相應(yīng)對(duì)照和處理濃度，放置4h。然后倒掉藥液，將離心管置于實(shí)驗(yàn)臺(tái)上晾千，待用。步驟2:浸葉將采集的新鮮甘藍(lán)葉洗干凈，晾干。分別在每個(gè)濃度藥液中浸漬10秒鐘，藥劑處理后的葉片置實(shí)驗(yàn)臺(tái)上晾干，待用。用剪刀將晾干的甘藍(lán)葉片剪成2cmX4cm的長(zhǎng)方形小條，用小鑷子夾入相應(yīng)藥液濃度的離心管中，每管1片，放置平整。步驟3:吸蟲(chóng)將長(zhǎng)約10cm左右的細(xì)針針尖經(jīng)酒精燈加熱，刺晾干的離心管管底，燙直徑約2-3mm的孔。真空泵的接口用紗布封好，套在以上處理好的離心管管口，打開(kāi)真空泵，調(diào)節(jié)氣流大小(以剛好能夠吸起試蟲(chóng)為宜)，把離心管管底的燙孔對(duì)準(zhǔn)薊馬，使蟲(chóng)順氣流吸入離心管。先對(duì)照后處理，每管吸2齡若蟲(chóng)10-20頭，然后蓋好管蓋，用封口膜封好燙孔。最后置于25。C恒溫箱內(nèi)，光照16L:8D，于48h后檢查結(jié)果。步驟4:檢查結(jié)果將離心管內(nèi)蟲(chóng)子及葉片倒出于白紙上，先對(duì)照后處理。判斷死亡標(biāo)準(zhǔn)為，用毛筆輕觸蟲(chóng)體，不能爬行視為死亡。記錄相應(yīng)濃度下每管內(nèi)的蟲(chóng)子總數(shù)、活蟲(chóng)數(shù)和死蟲(chóng)數(shù)。試驗(yàn)數(shù)據(jù)參照機(jī)率值Finney分析法，求出毒力回歸方程和LCs。等值。計(jì)算各處理的蟲(chóng)子的死亡率并應(yīng)用SAS軟件分析不同處理(不同方法和不同濃度)之間的差異顯著性。表1比較了用葉管藥膜法和TIBS方法測(cè)定10%除盡SC對(duì)西花薊馬的毒殺效果，除盡的主要作用方式是胃毒作用。表1西花薊馬在10%除盡sc不同處理濃度和不同處理方法下的死亡率藥劑濃度(mg/L)TIBS葉管藥膜法1004.7士1.2aA89.4士4.5aB507.0士0.8aA7L5士3.1bB258.3士2.4aA65.3士2.3cB12.511.5士3.3aA58.4士2.4cB6.255.5士1.0aA50.3士4.0cBCK5.0士0.9aA1.6士0.1dA注小寫(xiě)字母表示西花薊馬在不同處理濃度之間；大寫(xiě)字母表示西花薊馬在藥劑不同處理方法之間可以看出，采用葉管藥膜法處理西花薊馬的死亡率隨處理濃度的提高而提高，而TIBS法不同濃度之間無(wú)差異，且沒(méi)有規(guī)律性，不能真實(shí)反映除盡的實(shí)際殺蟲(chóng)活性。實(shí)施例2葉管藥膜法的驗(yàn)證試驗(yàn)藥劑有機(jī)磷類(lèi):40%毒死蜱EC(山東大成農(nóng)藥股份有限公司)，擬除蟲(chóng)菊酯類(lèi):4.5%高效氯氰菊酯EC(上海正華農(nóng)藥有限公司)、20%殺滅菊酯EC(江蘇粟陽(yáng)農(nóng)藥廠(chǎng))，微生物類(lèi)殺蟲(chóng)劑1.8%愛(ài)福丁(阿維菌素)EC(北京中農(nóng)大生物技術(shù)股份有限公司)2.5y。菜喜(多殺菌素)SC(美國(guó)陶氏益農(nóng)公司)甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽ME，植物源農(nóng)藥0.3y。苦參堿AS(銀川市滿(mǎn)春工業(yè)園集真路58號(hào))，新型殺蟲(chóng)劑35%吡蟲(chóng)啉SC(江蘇常隆化工有限公司)10%吡蟲(chóng)啉WP(蘇州華源集團(tuán)有限公司)、25y。阿克泰(噻蟲(chóng)嗪)WDGS(先正達(dá)(中國(guó))投資有限公司)、1oy。除盡(溴蟲(chóng)腈)sc(氰胺國(guó)際)、5呢銳勁特(氟蟲(chóng)腈)SC(拜耳作物科學(xué)公司)。結(jié)果如表2所示，24小時(shí)后40%毒死蜱EC、4.5%高效氯氰菊酯EC、20%殺滅菊酯EC、1.8%愛(ài)福丁(阿維菌素)EC、2.5。/。菜喜(多殺菌素)SC、3。/。甲氨基阿維菌素苯甲酸鹽ME，0.3%苦參堿AS、10。/。除盡(溴蟲(chóng)腈)SC、5。/。銳勁特(氟蟲(chóng)腈)SC毒力效果較好，LCs。分別為7.0、13.0、13.0、2.0、0.2、0.5、3.5、25.6和1.6mg/L，可以作為防治西花薊馬有效藥劑。各種藥劑的對(duì)照死亡率均在0-6.9%，符合生物測(cè)定要求的對(duì)照死亡率控制在10%以?xún)?nèi)的要求，進(jìn)一步說(shuō)明了本方法的可靠性和有效性。表2不同藥劑對(duì)西花薊馬的室內(nèi)生測(cè)結(jié)果<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>權(quán)利要求1、一種害蟲(chóng)的生物測(cè)定方法，其特征是在內(nèi)置有害蟲(chóng)的且內(nèi)壁附著有藥劑的容器中放置經(jīng)相同濃度藥劑處理過(guò)的害蟲(chóng)喜食的植物組織。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的害蟲(chóng)的生物測(cè)定方法，所述內(nèi)壁附著藥劑的容器是通過(guò)藥劑浸泡容器內(nèi)部得到。3、根據(jù)權(quán)利要求1所述的害蟲(chóng)的生物測(cè)定方法，所述藥劑處理指藥劑浸泡植物組織。4、根據(jù)權(quán)利要求1所述的害蟲(chóng)的生物測(cè)定方法，所述內(nèi)置的害蟲(chóng)可以用鑷子或毛筆等器具移入。5、根據(jù)權(quán)利要求1所述的害蟲(chóng)的生物測(cè)定方法，所述容器底部有小孔，內(nèi)置的害蟲(chóng)可以采用真空泵產(chǎn)生的氣流吸入容器中。6、根據(jù)權(quán)利要求5所述的害蟲(chóng)的生物測(cè)定方法，所述容器為塑料離心管。7、根據(jù)權(quán)利要求6所述的害蟲(chóng)的生物測(cè)定方法，所述塑料離心管為0.5ml或1.5ML的有封口蓋的離心管。8、根據(jù)權(quán)利要求5所述的害蟲(chóng)的生物測(cè)定方法，所述害蟲(chóng)為薊馬類(lèi)害蟲(chóng)。9、根據(jù)權(quán)利要求l所述的害蟲(chóng)的生物測(cè)定方法，所述植物為害蟲(chóng)的寄生植物。全文摘要本發(fā)明屬于植物保護(hù)
技術(shù)領(lǐng)域：
，特別是涉及一種害蟲(chóng)的生物測(cè)定方法。一種害蟲(chóng)的生物測(cè)定方法，其特征是在內(nèi)置有害蟲(chóng)的且內(nèi)壁附著藥劑的容器中放置經(jīng)相同濃度藥劑處理過(guò)的害蟲(chóng)喜食的植物組織。本發(fā)明提供的方法適用廣泛，對(duì)觸殺、胃毒同時(shí)作用的藥劑均能夠進(jìn)行有效測(cè)定，能準(zhǔn)確測(cè)定出藥劑對(duì)于害蟲(chóng)的最低有效劑量，既能有效毒殺害蟲(chóng)，又最高程度地減輕了環(huán)境污染和藥劑浪費(fèi)。文檔編號(hào)G01N33/00GK101315360SQ20081011711公開(kāi)日2008年12月3日申請(qǐng)日期2008年7月24日優(yōu)先權(quán)日2008年7月24日發(fā)明者吳青君,張友軍,張治軍,徐寶云申請(qǐng)人:中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜花卉研究所