核因子－κB多肽及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】：
[0001] 本發(fā)明涉及藥物領(lǐng)域，具體涉及用于預(yù)防和治療或預(yù)防類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的核因 子一 KB多肽抑制劑。
【背景技術(shù)】：
[0002] 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis，RA)是臨床最常見的炎性關(guān)節(jié)病和主要致 殘因素之一。在全世界約為0.5%-1.0%，1^的發(fā)病在我國(guó)約為0.4%。1^可發(fā)生于任何年 齡，隨著年齡的增長(zhǎng)，發(fā)病率也隨之增高。女性高發(fā)年齡為45-55歲，性別與RA發(fā)病關(guān)系密 切，男女之比約1: 3。RA是一種病因尚未明了的慢性全身性炎癥性疾病，以慢性、對(duì)稱性、多 滑膜關(guān)節(jié)炎和關(guān)節(jié)外病變?yōu)橹饕R床表現(xiàn)，屬于自身免疫炎性疾病。患者常以手部或腕部 疼痛及腫脹(特別是腕背部的腫脹)為首發(fā)癥狀，癥狀持續(xù)不緩解，普通的對(duì)癥治療雖可以 緩解癥狀，但常常由于用藥不規(guī)則或不足量而導(dǎo)致癥狀反復(fù)。病情進(jìn)展時(shí)可以出現(xiàn)明顯的 晨僵，通常可達(dá)1小時(shí)以上，并不斷加重;同時(shí)出現(xiàn)一定的關(guān)節(jié)功能障礙。
[0003] 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎的病因和發(fā)病機(jī)制尚未完全明了，其基本病理特點(diǎn)是血管炎和滑膜 炎。關(guān)節(jié)內(nèi)滑膜血管增生，形成血管翳，導(dǎo)致滑膜增厚，滲出增多，分泌多種細(xì)胞因子，侵犯 軟骨并引起骨質(zhì)損害。對(duì)其周圍的肌腔、韌帶、腱鞘以及肌肉等組織也均可侵蝕，從而影響 關(guān)節(jié)的穩(wěn)定，容易發(fā)生關(guān)節(jié)畸形而出現(xiàn)功能障礙。血管炎亦可侵犯周身各臟器組織，形成系 統(tǒng)性疾病。
[0004] 目前治療RA的藥物分為兩大類:控制癥狀藥和控制疾病藥。由于RA病因不明，故當(dāng) 今并無(wú)堪稱控制疾病的藥?？刂瓢Y狀的抗風(fēng)濕藥分為四類:一、非留體類抗炎藥，通常稱為 一線藥，這類藥物種類繁多，國(guó)內(nèi)市場(chǎng)已多達(dá)數(shù)十種。二、類固醇激素，激素是一個(gè)非常好的 止痛抗炎藥，但長(zhǎng)期單獨(dú)使用不能改善病情，反而帶來許多副作用，激素作為二線慢作用藥 起效前的過渡性用是可以的，但用量要小，時(shí)間不宜過長(zhǎng)。在病情較重，伴有關(guān)節(jié)外表現(xiàn)的 患者，短期治療沖擊，并聯(lián)合二線藥治療時(shí)必須的。三、慢作用抗風(fēng)濕藥，通常稱為二線藥， 所謂慢作用藥包括抗瘧藥、金鹽、青霉胺和柳氮碘胺吡啶，它們治療RA起效慢，長(zhǎng)期作用對(duì) RA病情有一定緩解作用，故也稱病情改善藥。四、免疫抑制劑:常用有甲氨喋呤、環(huán)磷酰胺、 硫唑嘌呤、雷公藤、青風(fēng)藤等。
[0005] 核因子-KB是一種廣泛存在于細(xì)胞內(nèi)的核轉(zhuǎn)錄因子，與關(guān)節(jié)炎中炎癥的發(fā)生，軟骨 損傷，細(xì)胞迀移以及血管翳的形成都有重要的關(guān)系。以核因子-KB為作用靶點(diǎn)，可能成為治 療關(guān)節(jié)炎等疾病的新途徑。非留體類抗炎藥，糖皮質(zhì)激素、糖胺聚糖以及新型蛋白酶體抑制 劑等發(fā)現(xiàn)都可抑制核因子-KB的激活。另外，核因子-KB誘騙性寡脫氧核苷酸和SiRNA干擾治 療也取得了可喜的成就。盡管如此，并沒有成熟開發(fā)的核因子一 κΒ多肽抑制劑問世，用于治 療RA 〇

【發(fā)明內(nèi)容】
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[0006] 本發(fā)明目的是針對(duì)現(xiàn)有核因子-KB拮抗劑的特點(diǎn)，設(shè)計(jì)一種分子量小的核因子-KB 多肽拮抗劑，可以避免產(chǎn)生抗原反應(yīng)，更加適用于臨床的應(yīng)用。
[0007] 本發(fā)明技術(shù)方案是提供一種核因子一 κ B多肽抑制劑，其序列為 RGDTRILAQHRLYYYNSQSE，及在治療或預(yù)防類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎藥物中的應(yīng)用。
[0008] 有益結(jié)果：
[0009] 本發(fā)明中的核因子一 KB多肽序列RGDTRILAQHRLYYYNSQSE，可以靶向抑制核因子一 KB，抑制核因子一 κΒ受體產(chǎn)生的生理或病理的效應(yīng)，達(dá)到預(yù)防或治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的效 果。
[0010] 發(fā)明人經(jīng)過大量實(shí)驗(yàn)獲知核因子一 KB多肽抑制劑3能夠抑制佐劑型大鼠類風(fēng)濕關(guān) 節(jié)炎，體內(nèi)實(shí)驗(yàn)證明具有顯著的治療類風(fēng)濕型關(guān)節(jié)炎的效果，并且副作用少，用量少成本降 低。說明本發(fā)明設(shè)計(jì)的核因子一 κΒ多肽抑制劑3科學(xué)、合理、可行有效，能作為治療或預(yù)防類 風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎藥物。
【具體實(shí)施方式】
[0011] 所述的多肽由上海吉爾合成。
[0012] 實(shí)施例1
[0013] 多肽對(duì)佐劑型大鼠關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型體內(nèi)免疫保護(hù)作用
[0014] 構(gòu)建佐劑型大鼠關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型，研究多肽對(duì)佐劑性關(guān)節(jié)炎（A d j u V a n t arthri ti s，AA)大鼠的治療作用。采用大鼠作為受試動(dòng)物，SPF級(jí)SD大鼠90只（由上海西普 爾-必凱實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司（Sino-British SIPPR Lab.Animal Ltd)提供，動(dòng)物生產(chǎn)許可證 號(hào)碼:SCXK(滬）2008-0016)，雄性，體重為140g-160g，隨機(jī)分成9組，分別是正常對(duì)照組，模 型對(duì)照組，多肽低中高3個(gè)劑量組(0.1，0.2，0.4mg/kg)和陽(yáng)性藥對(duì)照組（甲氨蝶呤lmg/kg)。 除正常組外，第0天各實(shí)驗(yàn)組建立大鼠 AA模型，方法是在大鼠的左側(cè)后足足跎注射含滅活的 結(jié)核分枝桿菌(H37RA，10mg/ml)完全弗氏佐劑0.08ml造成大鼠佐劑性關(guān)節(jié)炎模型。造模第 10天起皮下注射給藥:多肽3個(gè)劑量組(0.1，0.2，0.4mg/kg):每日兩次，連續(xù)10天；陽(yáng)性藥對(duì) 照組（甲氨蝶呤lmg/kg):每五天一次，連續(xù)3次;正常對(duì)照組和模型對(duì)照組(生理鹽水）：連續(xù) 10天。分別于造模后第8，11，14，17,20,23和26天，關(guān)節(jié)評(píng)分、分別檢測(cè)左右后足足踝直徑來 觀察藥物對(duì)大鼠佐劑型關(guān)節(jié)炎的影響。關(guān)節(jié)炎評(píng)價(jià)指標(biāo)如下：
[0015] 1)關(guān)節(jié)評(píng)分
[0016] 四肢:按0-4五級(jí)評(píng)分:0 =無(wú)紅斑或紅腫；1 =輕微的紅斑或腫脹，其中的一個(gè)前/ 后趾關(guān)節(jié)有紅斑或腫脹;2 =多于一只趾出現(xiàn)紅斑或腫脹；3 =踝或腕關(guān)節(jié)下的足爪腫脹;4 =包括踝關(guān)節(jié)在內(nèi)的全部足爪腫脹。大鼠四只足分別評(píng)分，最高評(píng)分為16分。
[0017] 分別于造模后8，11，14，17，20，23和26天進(jìn)行關(guān)節(jié)評(píng)分，并記錄結(jié)果。
[0018] 2)測(cè)量足踝直徑
[0019] 分別于造模前和造模后8，11，14，17，20，23和26天用游標(biāo)卡尺測(cè)量大鼠左、右足踝 內(nèi)側(cè)到外側(cè)的直徑和足踝厚度，并記錄結(jié)果。
[0020]試驗(yàn)結(jié)果的計(jì)量資料以數(shù)學(xué)平均數(shù)加減標(biāo)準(zhǔn)差(mean 土 SD)表示，用SPSSl 1.0軟件 進(jìn)行各給藥組與對(duì)照組之間進(jìn)行t檢驗(yàn)，表中*表示p〈0.05，**表示p〈0.01。
[0021]結(jié)果:造模后大鼠與正常大鼠相比較，在大鼠左后足跎處注射含滅活的結(jié)核分枝 桿菌完全弗氏佐劑后，左后足會(huì)迅速產(chǎn)生原發(fā)性關(guān)節(jié)炎，出現(xiàn)明顯的腫脹，并伴有潰爛;右 后足大約IOd后開始出現(xiàn)繼發(fā)性關(guān)節(jié)炎，評(píng)分的分值逐漸增大；同時(shí)耳部血管增生明顯，紅 腫明顯;尾部關(guān)節(jié)出現(xiàn)腫脹。多肽在膠原誘導(dǎo)大鼠關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型體內(nèi)免疫保護(hù)作用結(jié)果 見表2,由表可知，多肽在膠原誘導(dǎo)大鼠關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型都能發(fā)揮體內(nèi)免疫保護(hù)作用，具體 結(jié)果如下：
[0022] 多肽對(duì)大鼠原發(fā)性關(guān)節(jié)炎左足足爪腫脹度的影響，大鼠陽(yáng)性對(duì)照組、多肽中劑量 組左后足踝直徑與模型組比較，有極顯著性差異(P〈〇.01);整合素阻斷劑多肽低、高劑量組 左后足踝直徑與模型組比較，均有顯著性差異(P〈〇.05)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。多肽對(duì) 大鼠繼發(fā)性關(guān)節(jié)炎右足足爪腫脹度的影響，大鼠陽(yáng)性對(duì)照組、多肽低、中、高劑量組右后足 踝直徑與模型組比較，有顯著性差異(P〈〇.05)。多肽對(duì)佐劑型關(guān)節(jié)炎大鼠臨床評(píng)分的影響， 多肽低、中、高劑量組四肢評(píng)分顯著低于模型對(duì)照組(P〈〇.05)，與模型對(duì)照組比較差異均有 統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
[0023] 表1多肽對(duì)佐劑型類大鼠關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型體內(nèi)免疫保護(hù)作用
[0025] *表示卩〈0.05，**表示卩〈0.01·
[0026] 結(jié)論:多肽對(duì)AA大鼠關(guān)節(jié)炎具有治療作用。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 核因子一 KB多肽，其特征在于其序列為RGDTRILAQHRLYYYNSQSE。2. 核因子一!cB多肽，在治療或預(yù)防類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎藥物中的應(yīng)用。
【專利摘要】本發(fā)明涉及藥物領(lǐng)域，具體涉及具有抑制核因子－κB，能預(yù)防和治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的多肽。其序列為RGDTRILAQHRLYYYNSQSE是全新的序列，本發(fā)明的有益效益是可用于治療類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，具有潛在的新藥開發(fā)價(jià)值。
【IPC分類】C07K7/08, A61P19/02, A61K38/10, A61P29/00
【公開號(hào)】CN105504022
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201610072657
【發(fā)明人】羅瑞雪
【申請(qǐng)人】蘇州普羅達(dá)生物科技有限公司
【公開日】2016年4月20日
【申請(qǐng)日】2016年2月2日