一種改良馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于微生物培養(yǎng)基技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種改良馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基的制備方法，具體為一種加速真菌培養(yǎng)速度的改進(jìn)型馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]PDA培養(yǎng)基是馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基的簡(jiǎn)稱，即Potato Dextrose Agar Medium，是一種固體的半合成培養(yǎng)基。馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基是一種運(yùn)用十分廣泛的培養(yǎng)基，適宜培養(yǎng)酵母菌、霉菌及蘑菇等真菌。在食品安全國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)GB4789.15- 2010中，馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基可用于檢測(cè)食品中的酵母菌含量。
[0003]PDA培養(yǎng)基使用廣泛，歷史深遠(yuǎn)，關(guān)于PDA培養(yǎng)基改進(jìn)的研究較少。傳統(tǒng)PDA培養(yǎng)基的制作方法是:稱取200g馬鈴薯，洗凈去皮切成0.5cm3小塊，加水1000mL煮沸l(wèi)Omin，用雙層紗布過(guò)濾，補(bǔ)足水分至1000mL，根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要加葡萄糖20g和瓊脂15-20g，溶化后再分裝滅菌待用。傳統(tǒng)的做法存在著原料浪費(fèi)嚴(yán)重、操作較為繁瑣與耗時(shí)長(zhǎng)、不同批次培養(yǎng)基之間差別較大等問(wèn)題。
[0004]丁浩等通過(guò)對(duì)PDA培養(yǎng)基在制作方法上進(jìn)行改進(jìn)，舍棄耗時(shí)長(zhǎng)的馬鈴薯煮沸再過(guò)濾的方式，而采用馬鈴薯打漿的方式，達(dá)到簡(jiǎn)便工序，節(jié)省原料，提高PDA培養(yǎng)基質(zhì)量，并切實(shí)提高該培養(yǎng)基酵母檢出率的目的，旨在探索縮短培養(yǎng)基制作時(shí)間，提高培養(yǎng)基質(zhì)量和酵母檢出率。現(xiàn)有技術(shù)方案主要是縮短了培養(yǎng)基制作時(shí)間，但并未涉及PDA培養(yǎng)基培養(yǎng)真菌的速度問(wèn)題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明旨在通過(guò)對(duì)馬鈴薯原料進(jìn)行化學(xué)試劑預(yù)處理，使以該馬鈴薯為主要原料所制作的PDA培養(yǎng)基在真菌培養(yǎng)中的培養(yǎng)速度明顯加快，有效改進(jìn)培養(yǎng)效率。
[0006]本發(fā)明具體通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn):
一種改良馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基的制備方法，具體包括以下步驟:
1)取新鮮馬鈴薯，在25±1°C，相對(duì)濕度85%，避光條件下，在密閉容器內(nèi)用溴乙烷浸泡馬鈴薯96 h~108 h ；
2)打開(kāi)容器，通氣30min以上；
3)稱取處理好的馬鈴薯，切成小塊，加水煮沸l(wèi)Omin；
4)用雙層紗布過(guò)濾，補(bǔ)足水至步驟(3)加水量，分別加入萄糖和瓊脂，待完全熔化后滅菌。
[0007]進(jìn)一步，本發(fā)明步驟(3)中將馬鈴薯切成0.5 cm3小塊。
[0008]進(jìn)一步，本發(fā)明步驟(3)中馬鈴薯塊與所加水的的質(zhì)量體積比為1:5 g/mL。
[0009]進(jìn)一步，本發(fā)明步驟(4)中萄糖和瓊脂的添加量與馬鈴薯塊的質(zhì)量比分別為10:1和 40:3-10:Ιο
[0010]本發(fā)明的有益效果為:本發(fā)明技術(shù)方案可以有效加快PDA培養(yǎng)基對(duì)真菌的培養(yǎng)速度，能夠廣泛用于食品發(fā)酵工業(yè)、食用菌行業(yè)和相關(guān)微生物領(lǐng)域，縮短真菌培養(yǎng)時(shí)間，明顯提升培養(yǎng)效率。
【附圖說(shuō)明】
[0011]圖1是本發(fā)明實(shí)施例青霉培養(yǎng)效果圖；
圖2是本發(fā)明實(shí)施例毛霉培養(yǎng)效果圖；
圖3是本發(fā)明實(shí)施例黑曲霉培養(yǎng)效果圖。
【具體實(shí)施方式】
[0012]下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的說(shuō)明，以下所述，僅是對(duì)本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并非對(duì)本發(fā)明做其他形式的限制，任何熟悉本專業(yè)的技術(shù)人員可能利用上述揭示的技術(shù)內(nèi)容加以變更為同等變化的等效實(shí)施例。凡是未脫離本發(fā)明方案內(nèi)容，依據(jù)本發(fā)明的技術(shù)實(shí)質(zhì)對(duì)以下實(shí)施例所做的任何簡(jiǎn)單修改或等同變化，均落在本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。
[0013]本發(fā)明通過(guò)對(duì)馬鈴薯原料進(jìn)行化學(xué)試劑預(yù)處理，以提高以該馬鈴薯為主要原料所制作的PDA培養(yǎng)基在真菌培養(yǎng)中的培養(yǎng)速度，具體通過(guò)以下過(guò)程完成。
[0014]取新鮮馬鈴薯洗凈，在25±1°C，相對(duì)濕度85%，避光條件下，在密閉容器內(nèi)用溴乙烷浸泡馬鈴薯96 h~108 h，打開(kāi)容器，通氣30min以上，稱取處理好的馬鈴薯，去皮后切成0.5 cm3小塊，加水煮沸l(wèi)Omin，馬鈴薯塊與所加水的的質(zhì)量體積比為1:5 g/mL ;用雙層紗布過(guò)濾，補(bǔ)足水至原加水量，分別加入萄糖和瓊脂，萄糖和瓊脂的添加量與馬鈴薯塊的質(zhì)量比分別為10:1和40:3~10:1，待完全熔化后滅菌。
[0015]實(shí)施例1
一種改良馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基，通過(guò)以下方法制備得到。
[0016]取新鮮馬鈴薯洗凈，在25±1°C，相對(duì)濕度85%，避光條件下，在密閉容器內(nèi)用溴乙烷浸泡馬鈴薯96 h~108 h，打開(kāi)容器，通氣30min以上，稱取處理好的馬鈴薯去皮后切成0.5cm3小塊200g，加水lOOOmL煮沸l(wèi)Omin，用雙層紗布過(guò)濾，補(bǔ)足水分至lOOOmL，分別加葡萄糖20g和瓊脂17.5g，待完全熔化后滅菌備用。
[0017]實(shí)施例2
一種改良馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基，通過(guò)以下方法制備得到。
[0018]取新鮮馬鈴薯洗凈，在25±1°C，相對(duì)濕度85%，避光條件下，在密閉容器內(nèi)用溴乙烷浸泡馬鈴薯塊96 h~108 h，打開(kāi)容器，通氣30min以上，稱取處理好的馬鈴薯去皮后切成0.5 cm3小塊200g，加水1000mL煮沸l(wèi)Omin，用雙層紗布過(guò)濾，補(bǔ)足水分至1000mL，分別加葡萄糖20g和瓊脂15g，待完全熔化后滅菌備用。
[0019]實(shí)施例3
一種改良馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基，通過(guò)以下方法制備得到。
[0020]取新鮮馬鈴薯洗凈，在25±1°C，相對(duì)濕度85%，避光條件下，在密閉容器內(nèi)用溴乙烷浸泡馬鈴薯塊96 h~108 h，打開(kāi)容器，通氣30min以上，稱取處理好的馬鈴薯去皮后切成
0.5 cm3小塊200g，加水1000mL煮沸l(wèi)Omin，用雙層紗布過(guò)濾，補(bǔ)足水分至1000mL，分別加葡萄糖20g和瓊脂20g，待完全熔化后滅菌備用。
[0021]實(shí)施例4 以實(shí)施例1制備所得PDA培養(yǎng)基接種青霉、毛霉、黑曲霉三種不同類型真菌，恒溫培養(yǎng)l-3d，依據(jù)真菌菌落分布情況確定培養(yǎng)效果，以常規(guī)馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基為對(duì)照。
[0022]常規(guī)馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基通過(guò)以下方法制備:稱取200g馬鈴薯，洗凈去皮切成
0.5cm3小塊，加水lOOOmL煮沸l(wèi)Omin，用雙層紗布過(guò)濾，補(bǔ)足水分至lOOOmL，根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要加葡萄糖20g和瓊脂15-20g，溶化后再分裝滅菌待用。
[0023]實(shí)驗(yàn)結(jié)果如圖1~3所示，實(shí)施例1培養(yǎng)基即處理組真菌菌落分布情況明顯優(yōu)于對(duì)照組，說(shuō)明本發(fā)明PDA培養(yǎng)基可以明顯的提高真菌培養(yǎng)中的培養(yǎng)速度，具有顯著的意義。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種改良馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基的制備方法，其特征在于，包括以下步驟: 1)取新鮮馬鈴薯，在25±1°C，相對(duì)濕度85%，避光條件下，在密閉容器內(nèi)用溴乙烷浸泡馬鈴薯96 h~108 h ； 2)打開(kāi)容器，通氣30min以上； 3)稱取處理好的馬鈴薯，切成小塊，加水煮沸l(wèi)Omin； 4)用雙層紗布過(guò)濾，補(bǔ)足水至步驟(3)加水量，分別加入萄糖和瓊脂，待完全熔化后滅菌。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種改良馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基的制備方法，其特征在于，步驟(3)中將馬鈴薯切成0.5 cm3小塊。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種改良馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基的制備方法，其特征在于，步驟(3)中馬鈴薯塊與所加水的的質(zhì)量體積比為1:5 g/mL。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種改良馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基的制備方法，其特征在于，步驟(4)中萄糖和瓊脂的添加量與馬鈴薯塊的質(zhì)量比分別為10:1和40:3~10:1。
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種改良馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基的制備方法，取新鮮馬鈴薯洗凈，在25±1℃，相對(duì)濕度85%，避光條件下，在密閉容器內(nèi)用溴乙烷浸泡馬鈴薯塊96？h~108？h，打開(kāi)容器，通氣30min以上，稱取處理好的馬鈴薯切塊加水煮沸10min，用雙層紗布過(guò)濾，補(bǔ)足水至原加水量，分別加入萄糖和瓊脂，待完全熔化后滅菌。本發(fā)明方法簡(jiǎn)單實(shí)用，可明顯加快PDA培養(yǎng)基對(duì)真菌的培養(yǎng)速度，具有廣泛的推廣實(shí)用價(jià)值。
【IPC分類】C12N1/14
【公開(kāi)號(hào)】CN105296361
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510658236
【發(fā)明人】楊薇紅, 童斌, 張小華, 操慶國(guó), 宋金耀, 呂興萍, 陳賡
【申請(qǐng)人】江蘇農(nóng)林職業(yè)技術(shù)學(xué)院
【公開(kāi)日】2016年2月3日
【申請(qǐng)日】2015年10月14日