一種適合板栗花粉培養(yǎng)的液體培養(yǎng)基及培養(yǎng)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種適合板栗花粉培養(yǎng)的液體培養(yǎng)基及培養(yǎng)方法。
【背景技術(shù)】
[0002]花粉是具有獨(dú)特結(jié)構(gòu)和生物學(xué)功能的微小生命有機(jī)體，一般由2-5個(gè)細(xì)胞組成，由于其結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，易于離體操作，因此是研究植物細(xì)胞生長(zhǎng)發(fā)育、物質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)、信號(hào)傳遞等生命過(guò)程的理想實(shí)驗(yàn)體系。同時(shí)花粉萌發(fā)和花粉管生長(zhǎng)又是完成種子植物有性生殖的重要環(huán)節(jié)，這一過(guò)程是植物生殖生物學(xué)研究領(lǐng)域的重點(diǎn)。因此，建立合適的離體培養(yǎng)方法非常重要。
[0003]板栗是我國(guó)重要的木本糧食，雄、雌花比例非常高。大量花粉消耗了樹(shù)體許多營(yíng)養(yǎng)。有關(guān)花粉的研究至關(guān)重要。目前現(xiàn)存的有關(guān)板栗花粉培養(yǎng)的方法均為固體培養(yǎng)，其收集比較困難，為后續(xù)的細(xì)胞學(xué)、分子生物學(xué)及代謝組學(xué)的研究帶來(lái)不便。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是克服現(xiàn)有的缺陷，提供了一種液體培養(yǎng)基及相應(yīng)的培養(yǎng)方法。
[0005]本發(fā)明的目的通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)具體實(shí)現(xiàn):
一種適合板栗花粉培養(yǎng)的液體培養(yǎng)基，以雙蒸水為溶劑，每10g溶劑中含有13_18g的蔗糖、0.005-0.0lg 硼酸、0.02-0.06g 氯化鈣。
[0006]作為優(yōu)選方案，上述的適合板栗花粉培養(yǎng)的液體培養(yǎng)基，每10g溶劑中含有15g的鹿糖、0.005g硼酸、0.04g氯化I丐。
[0007]優(yōu)選的，所述培養(yǎng)基pH值為5.6-6.2。
[0008]進(jìn)一步優(yōu)選的，所述培養(yǎng)基pH值為6。
[0009]—種板栗花粉培養(yǎng)方法，將收集板栗花粉置于上述的花粉液體培養(yǎng)基中振蕩培黑暗培養(yǎng)，即可。
[0010]優(yōu)選的，收集板栗花粉時(shí)，用15%滅過(guò)菌的蔗糖水將花粉從花序上涮下來(lái)，并離心收集，并將收集到的花粉用無(wú)菌蔗糖水涮洗3遍以上。
[0011]優(yōu)選的，黑暗培養(yǎng)時(shí)在30-38°C的搖床中振蕩下培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速150-180轉(zhuǎn)/分鐘，濕度保持在85%以上，培養(yǎng)33-38小時(shí)。
[0012]進(jìn)一步優(yōu)選的，黑暗培養(yǎng)時(shí)，將花粉液體培養(yǎng)基分裝于1mL離心管中。
[0013]優(yōu)選的，培養(yǎng)時(shí)溫度為34°C。
[0014]優(yōu)選的，轉(zhuǎn)速160轉(zhuǎn)/分鐘。
[0015]優(yōu)選的，黑暗培養(yǎng)36小時(shí)。
[0016]優(yōu)選的，所述板栗花粉為板栗成熟花粉或低溫冷藏的板栗花粉。
[0017]本發(fā)明的有益效果:
本發(fā)明提供的培養(yǎng)基提高了板栗花粉離體萌發(fā)率，增加了花粉管長(zhǎng)度，收集方便，可以廣泛的應(yīng)用于進(jìn)一步相關(guān)科研試驗(yàn)中。
【具體實(shí)施方式】
[0018]以下對(duì)本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例進(jìn)行說(shuō)明，應(yīng)當(dāng)理解，此處所描述的優(yōu)選實(shí)施例僅用于說(shuō)明和解釋本發(fā)明，并不用于限定本發(fā)明。
[0019]實(shí)施例1:
一種適合板栗培養(yǎng)的液體培養(yǎng)基及具體培養(yǎng)方法為:花粉培養(yǎng)基，以雙蒸水為溶劑，包括的組分為15%的蔗糖和0.005%硼酸和0.04%氯化鈣，培養(yǎng)基pH值為6.0 ;收集板栗成熟花粉或低溫冷藏的花粉，于花粉離體萌發(fā)液體培養(yǎng)基中，在34°C搖床中振蕩培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速160轉(zhuǎn)/分鐘，濕度保持在85%以上，進(jìn)行黑暗培養(yǎng)36小時(shí)。
[0020]實(shí)施例2:
一種適合板栗培養(yǎng)的液體培養(yǎng)基及具體培養(yǎng)方法為:花粉培養(yǎng)基，以雙蒸水為溶劑，包括的組分為13%的蔗糖和0.006%硼酸和0.02%氯化鈣，培養(yǎng)基pH值為6.2 ;收集板栗成熟花粉或低溫冷藏的花粉，于花粉離體萌發(fā)液體培養(yǎng)基中，在38°C搖床中振蕩培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速150轉(zhuǎn)/分鐘，濕度保持在85%以上，進(jìn)行黑暗培養(yǎng)33小時(shí)。
[0021]實(shí)施例3:
一種適合板栗培養(yǎng)的液體培養(yǎng)基及具體培養(yǎng)方法為:花粉培養(yǎng)基，以雙蒸水為溶劑，包括的組分為18%的蔗糖和0.01%硼酸和0.06%氯化鈣，培養(yǎng)基pH值為5.6 ;收集板栗成熟花粉或低溫冷藏的花粉，于花粉離體萌發(fā)液體培養(yǎng)基中，在30°C搖床中振蕩培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速180轉(zhuǎn)/分鐘，濕度保持在85%以上，進(jìn)行黑暗培養(yǎng)38小時(shí)。
[0022]實(shí)施例4:
一種適合板栗培養(yǎng)的液體培養(yǎng)基及具體培養(yǎng)方法為:花粉培養(yǎng)基，以雙蒸水為溶劑，包括的組分為15%的蔗糖和0.01%硼酸和0.03%氯化鈣，培養(yǎng)基pH值為5.6 ;收集板栗成熟花粉或低溫冷藏的花粉，于花粉離體萌發(fā)液體培養(yǎng)基中，在30°C搖床中振蕩培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速180轉(zhuǎn)/分鐘，濕度保持在85%以上，進(jìn)行黑暗培養(yǎng)38小時(shí)。
[0023]實(shí)施例5:
一種適合板栗培養(yǎng)的液體培養(yǎng)基及具體培養(yǎng)方法為:花粉培養(yǎng)基，以雙蒸水為溶劑，包括的組分為16%的蔗糖和0.007%硼酸和0.05%氯化鈣，培養(yǎng)基pH值為5.6 ;收集板栗成熟花粉或低溫冷藏的花粉，于花粉離體萌發(fā)液體培養(yǎng)基中，在30°C搖床中振蕩培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速180轉(zhuǎn)/分鐘，濕度保持在85%以上，進(jìn)行黑暗培養(yǎng)38小時(shí)。
[0024]以上所述僅為本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例而已，并不用于限制本發(fā)明，盡管參照前述實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)的說(shuō)明，對(duì)于本領(lǐng)域的技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，其依然可以對(duì)前述各實(shí)施例所記載的技術(shù)方案進(jìn)行修改，或者對(duì)其中部分技術(shù)特征進(jìn)行等同替換。凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種適合板栗花粉培養(yǎng)的液體培養(yǎng)基，其特征在于:以雙蒸水為溶劑，每10g溶劑中含有13-18g的蔗糖、0.005-0.0lg硼酸、0.02-0.06g氯化鈣。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的適合板栗花粉培養(yǎng)的液體培養(yǎng)基，其特征在于??每10g溶劑中含有15g的蔗糖、0.005g硼酸、0.04g氯化鈣。3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的適合板栗花粉培養(yǎng)的液體培養(yǎng)基，其特征在于:所述培養(yǎng)基PH值為5.6-6.2 ο4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的適合板栗花粉培養(yǎng)的液體培養(yǎng)基，其特征在于:所述培養(yǎng)基pH值為6。5.一種板栗花粉培養(yǎng)方法，其特征在于:將收集板栗花粉置于權(quán)利要求1-4任一項(xiàng)所述的花粉液體培養(yǎng)基中振蕩黑暗培養(yǎng)，即可。6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的板栗花粉培養(yǎng)方法，其特征在于:收集板栗花粉時(shí)，用15%滅過(guò)菌的蔗糖水將花粉從花序上涮下來(lái)，并離心收集，并將收集到的花粉用無(wú)菌蔗糖水涮洗3遍以上。7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的板栗花粉培養(yǎng)方法，其特征在于:黑暗培養(yǎng)時(shí)在30-38°C的搖床中振蕩下培養(yǎng)，轉(zhuǎn)速150-180轉(zhuǎn)/分鐘，濕度保持在85%以上，培養(yǎng)33-38小時(shí)。8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的板栗花粉培養(yǎng)方法，其特征在于:黑暗培養(yǎng)時(shí)，將花粉液體培養(yǎng)基分裝于1mL離心管中。9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的板栗花粉培養(yǎng)方法，其特征在于:培養(yǎng)時(shí)溫度為34°C;轉(zhuǎn)速160轉(zhuǎn)/分鐘;黑暗培養(yǎng)36小時(shí)。10.根據(jù)權(quán)利要求5-9任一項(xiàng)所述的板栗花粉培養(yǎng)方法，其特征在于:所述板栗花粉為板栗成熟花粉或低溫冷藏的板栗花粉。
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種適合板栗花粉培養(yǎng)的液體培養(yǎng)基，以雙蒸水為溶劑，每100g溶劑中含有13-18g的蔗糖、0.005-0.01g硼酸、0.02-0.06g氯化鈣。本發(fā)明提供的培養(yǎng)基提高了板栗花粉離體萌發(fā)率，增加了花粉管長(zhǎng)度，收集方便，可以廣泛的應(yīng)用于進(jìn)一步相關(guān)科研試驗(yàn)中。
【IPC分類】C12N5/04
【公開(kāi)號(hào)】CN105154385
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510614412
【發(fā)明人】房克鳳, 張偉偉, 秦嶺, 謝彭雪, 張卿, 楊柳, 曹慶芹
【申請(qǐng)人】北京農(nóng)學(xué)院
【公開(kāi)日】2015年12月16日
【申請(qǐng)日】2015年9月24日