本發(fā)明涉及植物組織培養(yǎng)領(lǐng)域，具體地指一種基于改良培養(yǎng)基的“阿希蕉”培育方法。
背景技術(shù)：
阿希蕉(musarubrawall.exkurz)是姜目芭蕉科芭蕉屬的草本植物，整株不超過1.5米?；ㄐ蛑绷ⅫS色，花苞色紅鮮艷；果序直立紫紅色，果實小巧飽滿，沖天長出，觀賞價值高。
目前，阿希蕉分布于緬甸、泰國和大陸云南等地，生長于海拔1,000米至1,270米的地區(qū)，多生長在陰濕溝谷底和半沼澤地，目前尚未由人工引種栽培。
目前，對阿希蕉的研究較少，基本上僅限于種質(zhì)資源的搜集、分類等方面，大多為野生狀態(tài)，無大規(guī)模繁育及種植，關(guān)于其育種及繁育等方面的研究尚無報道。采用傳統(tǒng)組培的配方培育過程中，由于在芽分化誘導(dǎo)階段的細(xì)胞分裂素過高，導(dǎo)致培養(yǎng)過程中呈現(xiàn)細(xì)胞增多但多為白色稀疏狀，漸趨玻璃化，難以分化出不定芽；從而使其繁殖效率非常低，苗株數(shù)量極少，無法滿足觀賞價值的市場需求和遺傳育種研究需要，
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明針對現(xiàn)有組培的配方培育無法使“阿希蕉”外植體形成芽分化和增殖的缺陷，提供了一種基于改良培養(yǎng)基的“阿希蕉”培育方法，該方法通過對普通芭蕉屬組培技術(shù)的改進(jìn)，進(jìn)行高效繁育，提高成活率和產(chǎn)量。
為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供的一種基于改良培養(yǎng)基的阿希蕉培育方法，包括以下步驟：
1)外植體消毒：
選取健康的阿希蕉花苞，剝除大的花苞片后進(jìn)行表面消毒，在無菌條件下將阿希蕉花苞剝至長度為1～3cm的花苞；
2)愈傷組織誘導(dǎo)：
將長度為1～3cm的花苞橫切成厚度均一的薄片，并將薄片置于愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)，得到愈傷組織；
3)芽分化培養(yǎng)：
將愈傷組織分成均一小塊，轉(zhuǎn)移至芽分化培養(yǎng)基上，進(jìn)行光暗交替培養(yǎng)，分化得到多芽體；其中，芽分化培養(yǎng)基為ms+1.0～5.0mg/l6-ba+0.1～0.4mg/lnaa；所述多芽體呈多芽體狀態(tài)，芽點多，芽分化率90％以上，而目前已知方法中，芽分化培養(yǎng)基的使用導(dǎo)致無法誘導(dǎo)出健康的芽體，表現(xiàn)在芽點少，芽體稀松，呈現(xiàn)玻璃化，無法進(jìn)行芽增殖培養(yǎng)，隨后逐步解體、枯死。
4)芽增殖培養(yǎng)
將多芽體切割成均一的小塊芽，并將小塊芽轉(zhuǎn)移至芽增殖培養(yǎng)基上進(jìn)行光暗交替培養(yǎng)得到不定芽，其中，芽增殖培養(yǎng)基為ms+1.0～3.0mg/l6-ba+0.1～0.3mg/lnaa；在芽增殖培養(yǎng)過程中，不定芽逐漸增多，生長健康，表現(xiàn)為變粗，伸長，芽增殖效率可達(dá)5～30株/愈傷組織塊。
5)待不定芽長至2～3cm后將其切下，轉(zhuǎn)移至生根培養(yǎng)基上培養(yǎng)，不定芽生根得到生根苗；其中，生根培養(yǎng)基配方為ms+1.0～3.0mg/liba+0.1～0.3mg/lnaa；在生根過程中，培養(yǎng)8～12d不定芽基部開始膨大，并逐漸長出凸起狀的根原基，隨著培養(yǎng)時間的推進(jìn)，繼而長出白色根并逐漸伸長，約40d左右可長出較長的根系，得到生根苗，生根誘導(dǎo)率100％；
6)煉苗和移栽
將生根苗放置于溫室煉苗，然后將其用水清洗去掉根系上所粘附的培養(yǎng)基，栽入的基質(zhì)中，用保鮮膜覆蓋，每天定期噴水保濕，1周后去掉保鮮膜進(jìn)行正常栽培管理。
進(jìn)一步地，所述步驟2)中，愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基ms+0.2mg/ltdz+0.2mg/lzt+1.0mg/l的生物素+100mg/l谷氨酰胺+40g/l糖。
再進(jìn)一步地，所述步驟2)中，繼代培養(yǎng)的條件為：在溫度為23～28℃條件下黑暗培養(yǎng)28～32d。
再進(jìn)一步地，所述步驟3)中，光暗交替培養(yǎng)的條件為：在溫度為23～28℃條件下光暗交替培養(yǎng)35～45d。
再進(jìn)一步地，芽分化培養(yǎng)基為ms+3.0mg/l6-ba+0.2mg/lnaa。
再進(jìn)一步地，所述步驟4)中，光暗交替培養(yǎng)的條件為：在溫度為23～28℃條件下光暗交替培養(yǎng)35～45d。
再進(jìn)一步地，所述步驟4)中，芽增殖培養(yǎng)基為ms+2.0mg/l6-ba+0.1mg/l的naa。
再進(jìn)一步地，所述光暗交替培養(yǎng)中，光培養(yǎng)時間：16h/d，暗培養(yǎng)時間：8h/d。
再進(jìn)一步地，所述步驟6)中，基質(zhì)是由椰糠和蛭石組成，椰糠和蛭石重量比為＝1：1～3。
本發(fā)明的有益效果在于：
本發(fā)明實現(xiàn)了“阿希蕉”組培方法的成功繁育，較好的保持母本性狀，并且能夠提高成活率，從而提高產(chǎn)量，移栽成活率可達(dá)95％。本發(fā)明篩選獲得芽誘導(dǎo)和分化的最佳配方，分別是ms+3.0mg/l6-ba+0.2mg/lnaa和ms+2.0mg/l6-ba+0.1mg/lnaa，誘導(dǎo)效率較現(xiàn)有組培配方的使用增加了10％～36.7％，芽分化效率較現(xiàn)有組培配方提高了0.5～5倍。
具體實施方式
為了更好地解釋本發(fā)明，以下結(jié)合具體實施例進(jìn)一步闡明本發(fā)明的主要內(nèi)容，但本發(fā)明的內(nèi)容不僅僅局限于以下實施例。
實施例1：
基于改良培養(yǎng)基的阿希蕉培育方法，該方法包括以下步驟：
(1)外植體消毒
將大的花苞片逐個剝除至剩余花苞長度為9～10cm時，在超凈工作臺前用70％酒精進(jìn)行表面消毒后，轉(zhuǎn)入超凈工作臺，用尖嘴鑷子繼續(xù)剝除花苞片，每剝除一層花苞用70％酒精噴灑表面，剝至長度約為1～3cm的花苞；
(2)愈傷組織誘導(dǎo)
將長度約為1～3cm的花苞橫切成厚度均一的薄片(厚度為1～2mm)，用手術(shù)刀輕輕將薄片轉(zhuǎn)移至含愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，在溫度為26℃條件下黑暗條件培養(yǎng)28～32d，每兩周繼代一次得到愈傷組織(薄片在愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，約一周左右開始膨大，30d左右長出愈傷組織，誘導(dǎo)率90％)；其中，愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基ms+0.2mg/ltdz+0.2mg/lzt+1.0mg/l生物素+100mg/l谷氨酰胺+40g/l糖；
(3)芽分化培養(yǎng)
將愈傷組織分成均一小塊，轉(zhuǎn)移至芽分化培養(yǎng)基上，在溫度為26℃條件下進(jìn)行光暗交替培養(yǎng)35～45d，每兩周繼代一次，約30d左右分化出不定芽，形成多芽體，芽點多，芽分化率90％；其中，芽分化培養(yǎng)基為ms+3.0mg/l6-ba+0.2mg/lnaa；光暗交替培養(yǎng)中，光培養(yǎng)時間：16h/d，暗培養(yǎng)時間：8h/d；
(4)芽增殖培養(yǎng)
將多芽體切割成均一小塊，并將小塊芽接至芽增殖培養(yǎng)基上，在溫度為23～28℃條件下光暗交替培養(yǎng)35～45d，芽體逐漸增多，變粗，伸長，得到不定芽；芽增殖效率達(dá)25～30株/愈傷組織塊；其中，芽增殖培養(yǎng)基為ms+2.0mg/l6-ba+0.1mg/lnaa；
(5)生根誘導(dǎo)培養(yǎng)
待不定芽長至2～3cm后將其切下，轉(zhuǎn)移至生根培養(yǎng)基上培養(yǎng)，不定芽生根得到生根苗；其中，生根培養(yǎng)基配方為ms+3.0mg/liba+0.3mg/lnaa；在生根過程中，培養(yǎng)8～12d不定芽基部開始膨大，并逐漸長出凸起狀的根原基，隨著培養(yǎng)時間的推進(jìn)，繼而長出白色根并逐漸伸長，約40d左右可長出較長的根系，得到生根苗，生根誘導(dǎo)率100％；
(6)煉苗和移栽將培養(yǎng)瓶打開瓶蓋，將生根苗放置于溫室煉苗，放置于溫室煉苗1周左右，將組培苗取出用自來水清洗去掉根系上所粘附的培養(yǎng)基，栽入椰糠：蛭石重量比＝1：1的基質(zhì)中，用保鮮膜覆蓋，每天定期噴水保濕，約1周后去掉保鮮膜進(jìn)行正常栽培管理。
實施例2
基于改良培養(yǎng)基的阿希蕉培育方法，該方法包括以下步驟：
(1)外植體消毒
將大的花苞片逐個剝除至剩余花苞長度為9～10cm時，在超凈工作臺前用70％酒精進(jìn)行表面消毒后，轉(zhuǎn)入超凈工作臺，用尖嘴鑷子繼續(xù)剝除花苞片，每剝除一層花苞用70％酒精噴灑表面，剝至長度約為1～3cm的花苞；
(2)愈傷組織誘導(dǎo)
將長度約為1～3cm的花苞橫切成厚度均一的薄片(厚度為1～2mm)，用手術(shù)刀輕輕將薄片轉(zhuǎn)移至含愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，在溫度為26℃條件下黑暗條件培養(yǎng)28～32d，每兩周繼代一次得到愈傷組織(薄片在愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，約一周左右開始膨大，30d左右長出愈傷組織，誘導(dǎo)率90％)；其中，愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基ms+0.2mg/ltdz+0.2mg/lzt+1.0mg/l生物素+100mg/l谷氨酰胺+40g/l糖；
(3)芽分化培養(yǎng)
將愈傷組織分成均一小塊，轉(zhuǎn)移至芽分化培養(yǎng)基上，在溫度為26℃條件下進(jìn)行光暗交替培養(yǎng)35～45d，每兩周繼代一次，約40d左右分化出不定芽，形成多芽體，芽點多，芽分化率60％；其中，芽分化培養(yǎng)基為ms+1.0mg/l6-ba+0.1mg/lnaa；光暗交替培養(yǎng)中，光培養(yǎng)時間：16h/d，暗培養(yǎng)時間：8h/d；
(4)芽增殖培養(yǎng)
將多芽體切割成均一小塊，并將小塊芽接至芽增殖培養(yǎng)基上，在溫度為26℃條件下光暗交替培養(yǎng)35～45d，芽體逐漸增多，變粗，伸長，得到不定芽；芽增殖效率達(dá)15株/愈傷組織塊；其中，芽增殖培養(yǎng)基為ms+1.0mg/l6-ba+0.1mg/lnaa；
(5)生根誘導(dǎo)培養(yǎng)
待不定芽長至2～3cm后將其切下，轉(zhuǎn)移至生根培養(yǎng)基上培養(yǎng)，不定芽生根得到生根苗；其中，生根培養(yǎng)基配方為ms+1.0mg/liba+0.1mg/lnaa；在生根過程中，培養(yǎng)8～12d不定芽基部開始膨大，并逐漸長出凸起狀的根原基，隨著培養(yǎng)時間的推進(jìn)，繼而長出白色根并逐漸伸長，約40d左右可長出較長的根系，得到生根苗，生根誘導(dǎo)率100％；
(6)煉苗和移栽將培養(yǎng)瓶打開瓶蓋，將生根苗放置于溫室煉苗，放置于溫室煉苗1周左右，將組培苗取出用自來水清洗去掉根系上所粘附的培養(yǎng)基，栽入椰糠：蛭石重量比＝1：1的基質(zhì)中，用保鮮膜覆蓋，每天定期噴水保濕，約1周后去掉保鮮膜進(jìn)行正常栽培管理。
實施例3
基于改良培養(yǎng)基的阿希蕉培育方法，該方法包括以下步驟：
(1)外植體消毒
將大的花苞片逐個剝除至剩余花苞長度為9～10cm時，在超凈工作臺前用70％酒精進(jìn)行表面消毒后，轉(zhuǎn)入超凈工作臺，用尖嘴鑷子繼續(xù)剝除花苞片，每剝除一層花苞用70％酒精噴灑表面，剝至長度約為1～3cm的花苞；
(2)愈傷組織誘導(dǎo)
將長度約為1～3cm的花苞橫切成厚度均一的薄片(厚度為1～2mm)，用手術(shù)刀輕輕將薄片轉(zhuǎn)移至含愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，在溫度為26℃條件下黑暗條件培養(yǎng)28～32d，每兩周繼代一次得到愈傷組織(薄片在愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，約一周左右開始膨大，30d左右長出愈傷組織，誘導(dǎo)率90％)；其中，愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基ms+0.2mg/ltdz+0.2mg/lzt+1.0mg/l生物素+100mg/l谷氨酰胺+40g/l糖；
(3)芽分化培養(yǎng)
將愈傷組織分成均一小塊，轉(zhuǎn)移至芽分化培養(yǎng)基上，在溫度為26℃條件下進(jìn)行光暗交替培養(yǎng)35～45d，每兩周繼代一次，約35d左右分化出不定芽，形成多芽體，芽點多，芽分化率80％；其中，芽分化培養(yǎng)基為ms+2.0mg/l6-ba+0.2mg/lnaa；光暗交替培養(yǎng)中，光培養(yǎng)時間：16h/d，暗培養(yǎng)時間：8h/d；
(4)芽增殖培養(yǎng)
將多芽體切割成均一小塊，并將小塊芽接至芽增殖培養(yǎng)基上，在溫度為26℃條件下光暗交替培養(yǎng)35～45d，芽體逐漸增多，變粗，伸長，得到不定芽；芽增殖效率達(dá)5株/愈傷組織塊；其中，芽增殖培養(yǎng)基為ms+3.0mg/l6-ba+0.1mg/lnaa；
(5)生根誘導(dǎo)培養(yǎng)
待不定芽長至2～3cm后將其切下，轉(zhuǎn)移至生根培養(yǎng)基上培養(yǎng)，不定芽生根得到生根苗；其中，生根培養(yǎng)基配方為ms+1.0mg/liba+0.1mg/lnaa；在生根過程中，培養(yǎng)8～12d不定芽基部開始膨大，并逐漸長出凸起狀的根原基，隨著培養(yǎng)時間的推進(jìn)，繼而長出白色根并逐漸伸長，約40d左右可長出較長的根系，得到生根苗，生根誘導(dǎo)率100％；
(6)煉苗和移栽將培養(yǎng)瓶打開瓶蓋，將生根苗放置于溫室煉苗，放置于溫室煉苗1周左右，將組培苗取出用自來水清洗去掉根系上所粘附的培養(yǎng)基，栽入椰糠：蛭石重量比＝1：1的基質(zhì)中，用保鮮膜覆蓋，每天定期噴水保濕，約1周后去掉保鮮膜進(jìn)行正常栽培管理。
實施例4
基于改良培養(yǎng)基的阿希蕉培育方法，該方法包括以下步驟：
(1)外植體消毒
將大的花苞片逐個剝除至剩余花苞長度為9～10cm時，在超凈工作臺前用70％酒精進(jìn)行表面消毒后，轉(zhuǎn)入超凈工作臺，用尖嘴鑷子繼續(xù)剝除花苞片，每剝除一層花苞用70％酒精噴灑表面，剝至長度約為1～3cm的花苞；
(2)愈傷組織誘導(dǎo)
將長度約為1～3cm的花苞橫切成厚度均一的薄片(厚度為1～2mm)，用手術(shù)刀輕輕將薄片轉(zhuǎn)移至含愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，在溫度為26℃條件下黑暗條件培養(yǎng)28～32d，每兩周繼代一次得到愈傷組織(薄片在愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，約一周左右開始膨大，30d左右長出愈傷組織，誘導(dǎo)率90％)；其中，愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基ms+0.2mg/ltdz+0.2mg/lzt+1.0mg/l生物素+100mg/l谷氨酰胺+40g/l糖；
(3)芽分化培養(yǎng)
將愈傷組織分成均一小塊，轉(zhuǎn)移至芽分化培養(yǎng)基上，在溫度為26℃條件下進(jìn)行光暗交替培養(yǎng)35～45d，每兩周繼代一次，約40d左右分化出不定芽，形成多芽體，芽點多，芽分化率53.3％；其中，芽分化培養(yǎng)基為ms+4.0mg/l6-ba+0.2mg/lnaa；光暗交替培養(yǎng)中，光培養(yǎng)時間：16h/d，暗培養(yǎng)時間：8h/d；
(4)芽增殖培養(yǎng)
將多芽體切割成均一小塊，并將小塊芽接至芽增殖培養(yǎng)基上，在溫度為26℃條件下光暗交替培養(yǎng)35～45d，芽體逐漸增多，變粗，伸長，得到不定芽；芽增殖效率達(dá)20株/愈傷組織塊；其中，芽增殖培養(yǎng)基為ms+3.0mg/l6-ba+0.2mg/lnaa；
(5)生根誘導(dǎo)培養(yǎng)
待不定芽長至2～3cm后將其切下，轉(zhuǎn)移至生根培養(yǎng)基上培養(yǎng)，不定芽生根得到生根苗；其中，生根培養(yǎng)基配方為ms+1.0mg/liba+0.1mg/lnaa；在生根過程中，培養(yǎng)8～12d不定芽基部開始膨大，并逐漸長出凸起狀的根原基，隨著培養(yǎng)時間的推進(jìn)，繼而長出白色根并逐漸伸長，約40d左右可長出較長的根系，得到生根苗，生根誘導(dǎo)率100％；
(6)煉苗和移栽將培養(yǎng)瓶打開瓶蓋，將生根苗放置于溫室煉苗，放置于溫室煉苗1周左右，將組培苗取出用自來水清洗去掉根系上所粘附的培養(yǎng)基，栽入椰糠：蛭石重量比＝1：1的基質(zhì)中，用保鮮膜覆蓋，每天定期噴水保濕，約1周后去掉保鮮膜進(jìn)行正常栽培管理。
其它未詳細(xì)說明的部分均為現(xiàn)有技術(shù)。盡管上述實施例對本發(fā)明做出了詳盡的描述，但它僅僅是本發(fā)明一部分實施例，而不是全部實施例，人們還可以根據(jù)本實施例在不經(jīng)創(chuàng)造性前提下獲得其他實施例，這些實施例都屬于本發(fā)明保護(hù)范圍。