本發(fā)明屬于微生物發(fā)酵結(jié)合煙草薄片生產(chǎn)技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一株產(chǎn)纖維素酶和漆酶的芽孢桿菌，并進一步公開其改善煙草薄片原料品質(zhì)的用途。
背景技術(shù)：
造紙法煙草薄片(paper-processreconstitutedtobacco)，是一種煙草資源再生利用的產(chǎn)品，主要是利用煙草制造環(huán)節(jié)中的復(fù)烤和卷煙制造過程中的一些煙草廢棄料、邊角料，如煙梗、煙葉碎片、煙末等為原料，經(jīng)過浸提、濃縮、分離、打漿、磨漿、抄造、烘干、加香工藝過程，制成接近天然煙葉的煙葉薄片，用作卷煙填充物，并再用于卷煙生產(chǎn)的一種先進的煙草生產(chǎn)技術(shù)。
造紙法煙草薄片相比其他工藝生產(chǎn)的煙草薄片更有利于卷煙降焦減害并改善卷煙內(nèi)在品質(zhì)。利用造紙法煙草薄片生產(chǎn)卷煙，不僅在改善煙葉產(chǎn)品結(jié)構(gòu)強度、燃燒性能及降低卷煙的煙氣煙堿和焦油量等方面具有優(yōu)勢，同時還能降低煙葉單耗，節(jié)約生產(chǎn)成本，可以說是煙草工業(yè)近期最重要的成果之一。
與煙葉相比，由于煙梗、煙末等煙草薄片原料中含有較多的有害物質(zhì)前體，如纖維素、木質(zhì)素、果膠等大分子物質(zhì)，這些物質(zhì)如果存在過量會導(dǎo)致煙草薄片品質(zhì)低劣，致使卷煙雜氣重、刺激性強和木質(zhì)氣強，從而大大降低卷煙口感；而且由于纖維素和果膠交聯(lián)，在燃燒過程中會發(fā)生熱解，生成具有強烈刺激性、有致癌作用的甲醇、甲醛等物質(zhì)；另外，木質(zhì)素的存在不但嚴重影響薄片的色澤，而且其在燃燒過程中產(chǎn)生的酚類化合物，也會給口腔帶來辛辣感和灼熱感，使口感變差；再者，造紙法煙草薄片中糖類和氨基酸等物質(zhì)受熱裂解也會增加co和巴豆醛這兩種有害物質(zhì)的釋放。這些不利影響都限制了造紙法薄片技術(shù)的發(fā)展，影響其在卷煙產(chǎn)品中的使用效果。
為了改善上述主要由纖維素和木質(zhì)素存在引起的問題，現(xiàn)有技術(shù)公開了較多利用單一酶類提高造紙煙草薄片品質(zhì)的研究方法。其中多數(shù)采用添加外源酶進行性能改善。但是，使用外源酶處理煙草薄片具有成本高、反應(yīng)單一、酶活難以維持、反應(yīng)條件嚴格等技術(shù)缺陷。
在自然界中，纖維素酶和能降解木質(zhì)素的漆酶廣泛存在于植物、真菌和細菌中，利用真菌產(chǎn)纖維素酶和漆酶，是目前生產(chǎn)這兩種酶類的主要方式。而利用真菌發(fā)酵處理煙草薄片的研究屢見不鮮，但是真菌發(fā)酵具有發(fā)酵周期長，對薄片品質(zhì)破壞大，安全風(fēng)險大等缺點，其對造紙煙草薄片性能的改善也有限。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
造紙法煙草薄片中纖維素和木質(zhì)素含量高，含有較多有害前體物質(zhì)。此前技術(shù)大多用真菌發(fā)酵產(chǎn)纖維素酶和漆酶，該技術(shù)具有發(fā)酵周期長，對薄片品質(zhì)破壞大，安全風(fēng)險大等缺點，其對造紙煙草薄片性能的改善也有限。為此，本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題在于提供一種芽孢桿菌菌株，以解決現(xiàn)有技術(shù)中煙草薄片原料(主要為煙梗和煙末)中含有較多的有害物質(zhì)前體、進而影響造紙煙草薄片口感較差的問題。該菌株經(jīng)發(fā)酵能夠有效降解煙草薄片原料中的纖維素和木質(zhì)素，并且相較于真菌發(fā)酵具有菌株生長能力強，發(fā)酵周期短，對原料破壞小的優(yōu)勢，具有潛在的應(yīng)用價值和良好的開發(fā)前景。
為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明所述的一種芽孢桿菌菌株，其分類命名為bacillussp.gyc30，該菌株已于2016年7月14日保藏于武漢大學(xué)中國典型培養(yǎng)物保藏中心，其簡稱為cctcc，保藏編號為cctccno：m2016395。保藏地址：湖北省武漢市武昌珞珈山，郵政編碼430072。
本發(fā)明還提供了一種培養(yǎng)所述芽孢桿菌菌株的方法，即包括將所述芽孢桿菌在適宜于纖維素酶、漆酶及果膠酶表達的培養(yǎng)條件下進行培養(yǎng)的步驟。
所述的培養(yǎng)方法即包括在含有如下含量組分的培養(yǎng)基中的培養(yǎng)步驟：碳源2-4g/l、氮源4-6g/l、nacl4-6g/l、煙葉浸提液1-5g/l、其余為水，調(diào)節(jié)ph6.5-7.5。
所述煙葉浸提液按照如下方法制得：取醇化煙葉和去離子水，二者按照質(zhì)量體積比(w:v)為1：50-100的比例混勻，控制溫度180-200℃磁力攪拌1-1.5h，用紗布過濾并滅菌得所述煙葉浸提液。
所述碳源包括葡萄糖和/或果糖。
本發(fā)明還公開了由所述芽孢桿菌菌株編碼的酶，所述酶包括纖維素酶、漆酶及果膠酶。
本發(fā)明還公開了所述的酶在煙草薄片加工領(lǐng)域中的應(yīng)用。
本發(fā)明還公開了所述芽孢桿菌菌株在煙草薄片加工領(lǐng)域中的應(yīng)用。
本發(fā)明還公開了一種改善煙草薄片加工原料性狀的方法，包括如下步驟：
(1)取煙草廢棄料加水混勻，于50-60℃進行浸提，將所得浸提物抽濾、并洗滌至洗滌液無色，烘干至恒重，備用；
(2)取所述芽孢桿菌菌株進行擴大培養(yǎng)；
(3)取步驟(1)中處理后的所述煙草廢棄料加入步驟(2)中培養(yǎng)液中，35-40℃進行發(fā)酵；
(4)發(fā)酵結(jié)束后，取發(fā)酵液抽濾得固形物，并以蒸餾水洗滌、烘干，即得所需改善后的煙草廢棄料。
所述煙草廢棄料包括煙末和/或煙梗。
本發(fā)明還公開了一種加工煙草薄片的方法，包括按照所述方法進行煙草薄片加工原料性狀改善的步驟。
本發(fā)明篩選得到的所述芽孢桿菌菌株由醇化煙葉中篩選而得，在煙草薄片原料中定殖狀況良好，避免了從其它原料獲得的菌株在煙草薄片上定殖能力差的問題；同時菌株的生存能力強，且活化率高，所以該菌株易于保藏，具有環(huán)境耐受力強、生長速度快、易于培養(yǎng)等優(yōu)勢。
本發(fā)明所述芽孢桿菌可同時產(chǎn)纖維素酶和漆酶，并將其作用于煙草薄片，目前鮮有報道。本發(fā)明所述方案不同于傳統(tǒng)外源酶處理煙草薄片的方法，利用自行篩選的具有優(yōu)異性能的芽孢桿菌自身分泌多種酶的特點，結(jié)合煙草薄片生產(chǎn)工藝對煙梗煙末進行發(fā)酵處理改善其性狀。相較于真菌發(fā)酵，整個反應(yīng)具有條件溫和、成本低、酶活穩(wěn)定等優(yōu)勢；同時，本發(fā)明所篩選芽孢桿菌菌株具有發(fā)酵周期短、降解效果好，對原料品質(zhì)破壞小等優(yōu)勢，并可以有效保證菌種存活率，大大縮短發(fā)酵時間；同時，芽孢桿菌對煙草薄片的感官品質(zhì)影響小于真菌；對提高煙草薄片品質(zhì)具有積極意義和廣闊的應(yīng)用前景。
本發(fā)明所述改善煙草薄片制備原料性狀的方法，可同時降低煙末及煙梗煙末混合物的纖維素和木質(zhì)素的含量，不同于真菌發(fā)酵通常需要8d至10d，本發(fā)明所述菌株，經(jīng)發(fā)酵5d后，棕纖維素降解率均大于18％，木質(zhì)素降解率均大于20％；發(fā)酵4d后發(fā)酵液還原糖含量可提高30％以上，說明本發(fā)明涉及菌株能顯著降解煙草薄片原料的纖維素和木質(zhì)素，同時能提高煙末提取液的品質(zhì)。
具體實施方式
菌株的篩選
本發(fā)明所述能夠產(chǎn)纖維素酶、漆酶和果膠酶的芽孢桿菌是從醇化煙葉中篩選獲得，具體包括如下步驟：
(1)用粉碎機將醇化煙葉進行粉碎，過篩，并冷卻至室溫，備用；
(2)稱取步驟(1)中粉碎后的醇化煙葉粉末，加入0.9％無菌生理鹽水，在30℃下于恒溫水浴搖床震蕩1h以上，得到醇化煙葉提取液；
(3)用相同的無菌生理鹽水將步驟(2)中提取液稀釋成10-1～10-8的濃度梯度，用平板涂布法在na(牛肉膏蛋白胨)培養(yǎng)基上均勻涂布，于37℃的恒溫恒濕培養(yǎng)箱培養(yǎng)15-24h；
所述篩選培養(yǎng)基-na(牛肉膏蛋白胨)培養(yǎng)基，是本技術(shù)領(lǐng)域熟知的細菌篩選培養(yǎng)基，即含有牛肉膏3g/l、蛋白胨10g/l、氯化鈉5g/l、瓊脂15g/l，ph7.3，培養(yǎng)基為淡黃棕色。
(4)將步驟(3)中培養(yǎng)完成的平板取出，挑選形態(tài)差異較大的菌落分別劃線純化，直至出現(xiàn)單菌落，將所述菌株用30％甘油保藏于-20℃條件下，待用；
(5)分別將挑選的單菌落經(jīng)培養(yǎng)72h后，接種至纖維素酶、漆酶和果膠酶定性培養(yǎng)基中進行定性測定，證明其可產(chǎn)纖維素酶、漆酶和果膠酶的能力，各定性培養(yǎng)基配方如下：
纖維素酶定性培養(yǎng)基：剛果紅0.2g，kcl0.5g，nano33.0g，kh2po41.0g，cmc·na15.0g，mgso4·7h2o0.5g，feso4·7h2o0.01g，瓊脂20.0g，水1000ml，ph7.0，115℃滅菌30min；
漆酶定性培養(yǎng)基：愈創(chuàng)木酚2.5g，酵母膏10.0g，葡萄糖20.0g，瓊脂20.0g，水1000ml，ph7.0，115℃滅菌30min；
果膠酶定性培養(yǎng)基：桔皮粉4.0g，蛋白胨10.0g，牛肉膏3.0g，nacl5.0g，kh2po41.0g，k2hpo40.3g，瓊脂20.0g，水1000ml，ph7.0，115℃滅菌30min。
經(jīng)篩選獲得一株產(chǎn)纖維素酶、漆酶和果膠酶性能較好的菌株，經(jīng)鑒定為芽孢桿菌bacillussp.gyc30，并將該菌種保藏于武漢大學(xué)中國典型培養(yǎng)物保藏中心(簡稱cctcc)，保藏編號為cctccm2016395。
將所選菌株進行上述纖維素酶、漆酶和果膠酶的定性測定，并記錄各定性培養(yǎng)基中透明圈情況(hc＝透明圈直徑/菌落直徑)，單位mm，記錄于下表1。
表1菌株培養(yǎng)72h后菌落直徑與產(chǎn)酶透明圈情況(單位：mm)
可見，本發(fā)明所述菌株是從醇化煙葉中篩選獲得的優(yōu)勢菌株，該菌株可產(chǎn)纖維素酶、漆酶及果膠酶等多種酶類。
將上述得到的菌株bacillussp.gyc30進行遺傳穩(wěn)定性考察：將每個菌株連續(xù)轉(zhuǎn)接10代，每代均接入所述發(fā)酵培養(yǎng)基進行培養(yǎng)發(fā)酵(接種量2％)，發(fā)酵培養(yǎng)基為na培養(yǎng)基，三角瓶用八層紗布包裹，瓶中培養(yǎng)基體積應(yīng)小于瓶容積的1/5，培養(yǎng)條件為發(fā)酵溫度37℃，攪拌轉(zhuǎn)速200rpm，于旋轉(zhuǎn)式搖床恒溫搖瓶發(fā)酵72小時，菌株顯示了穩(wěn)定的發(fā)酵性能?？梢姡摼甑倪z傳性能較佳。
以下實施例中關(guān)于煙草薄片原料形狀改善的測定參數(shù)按照如下方法進行。
煙草薄片原料(煙末組和煙梗煙末組)中總纖維素的測定：樣品按gb/t2677.1《造紙原料分析試樣的采取》規(guī)定方法取樣，即選取粉碎機中能全部通過40目篩但不能通過60目篩的細末，烘干至恒重，按gb/t2677.1《造紙原料總纖維素含量的測定》測定總纖維素含量。
煙草薄片原料(煙末組和煙梗煙末組)中木質(zhì)素的測定：樣品按gb/t2677.1《造紙原料分析試樣的采取》規(guī)定方法取樣，即選取粉碎機中能全部通過40目篩但不能通過60目篩的細末，烘干至恒重，按gb/t2677.8《造紙原料酸不溶木素含量測定》和gb/t10337《造紙原料和紙漿酸溶木素的測定》分別測定發(fā)酵后薄片原料木質(zhì)素含量，加和得原料總木質(zhì)素百分比。
發(fā)酵液中菌液濃度的測定：將試管編號，每管加入9mlpbs后滅菌，取1ml發(fā)酵液加入其中一管，混合均勻，再取此管液體加入下一管，將菌液依次稀釋成10-1～10-8，從10-6～10-8的試管中分別取100μl菌液，均勻涂布于含有擴培培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿上，37℃培養(yǎng)24h后取出，統(tǒng)計該菌落數(shù)量，計算菌液濃度(單位：cfu/ml)。
測定發(fā)酵液中還原糖含量的方法：取1ml發(fā)酵液，5000rpm下離心3min，取上清液0.4ml，依次加入0.6ml蒸餾水和1mldns，在沸水中煮2min，置于冰水中冷卻，再加入8ml蒸餾水，混合均勻，在560nm測定溶液吸光度，用葡萄糖標準曲線計算液體中還原糖含量，從而折算出發(fā)酵液中的還原糖含量。
經(jīng)測定，本發(fā)明下述實施例中使用的煙末原料總纖維素含量為27.68％、木質(zhì)素含量為3.07％，煙梗和煙末混物原料總纖維素含量為35.02％、木質(zhì)素含量為3.61％。
以下實施例1-4和比較例1-2中，菌株活化所采用的液體活化培養(yǎng)基為na培養(yǎng)基(無需添加煙葉浸提液)，其組分包括：蛋白胨5g/l、牛肉粉1.5g/l、氯化鈉5g/l、ph7.3。
實施例1：
準確稱取6.0g煙末，按1:10(w/v)加水混勻，于50℃攪拌浸提2h，將所得浸提物抽濾、并洗滌至洗滌液無色，烘干至恒重，備用；
配制含有葡萄糖的液體發(fā)酵培養(yǎng)基，配方如下：葡萄糖組培養(yǎng)基：葡萄糖3g/l、蛋白胨5g/l、煙葉浸提液3g/l、nacl5g/l，ph7.0；
所述液體發(fā)酵培養(yǎng)基中添加的煙葉浸提液按照如下方法制得：取醇化煙葉和去離子水，二者按照質(zhì)量體積比(w:v)為1：80的比例混勻，控制溫度180-200℃磁力攪拌1-1.5h，用紗布過濾并滅菌得所述煙葉浸提液；
將所述菌株按2％的接種量接種于含有所述液體活化培養(yǎng)基的試管中，活化15h后按2％接種量接種于含有100ml上述葡萄糖組液體發(fā)酵培養(yǎng)基的三角瓶中，同時加入上述浸提后的煙末，用八層紗布包裹，于37℃，200rpm下恒溫搖瓶發(fā)酵。
每隔24h取出適量發(fā)酵液測定菌濃度及還原糖含量，取出適量煙末烘干至恒重，測定總纖維素和木質(zhì)素含量，結(jié)果如下表2所示。
表2煙末組樣品在葡萄糖組培養(yǎng)基中發(fā)酵各成分變化情況
可見，本發(fā)明所述芽孢桿菌菌株可有效降低煙草粉末廢棄料中的纖維素、木質(zhì)素含量。
實施例2：
準確稱取6.0g煙末，按1:10(w/v)加水混勻，于50℃攪拌2h浸提，將所得浸提物抽濾、并洗滌至洗滌液無色，烘干至恒重，備用；
配制含有果糖的液體發(fā)酵培養(yǎng)基，配方如下：果糖組培養(yǎng)基：果糖3g/l、蛋白胨5g/l、煙葉浸提液3g/l、nacl5g/l，ph7.2；
所述液體發(fā)酵培養(yǎng)基中添加的煙葉浸提液按照如下方法制得：取醇化煙葉和去離子水，二者按照質(zhì)量體積比(w:v)為1：50的比例混勻，控制溫度180-200℃磁力攪拌1-1.5h，用紗布過濾并滅菌得所述煙葉浸提液；
將所述芽孢桿菌菌株按2％接種量接種于含有所述液體活化培養(yǎng)基的試管中，活化15h后按2％接種量接種于含有100ml上述果糖組液體發(fā)酵培養(yǎng)基的三角瓶中，同時加入所述浸提后的煙末，用八層紗布包裹，于37℃，200rpm下恒溫搖瓶發(fā)酵。
每隔24h取出適量發(fā)酵液測定菌濃度及還原糖含量，取出適量煙末烘干至恒重，測定總纖維素和木質(zhì)素含量，結(jié)果如下表3所示。
表3煙末組樣品在果糖組培養(yǎng)基中發(fā)酵各成分變化情況
可見，本發(fā)明所述芽孢桿菌菌株可有效降低煙草粉末廢棄料中的纖維素、木質(zhì)素含量。
實施例3：
準確稱取3.0g煙末和3.0g煙梗，混合均勻，按1:10(w/v)加水混勻，于50℃攪拌2h浸提，將所得浸提物抽濾、并洗滌至洗滌液無色，烘干至恒重，備用；
配制含有葡萄糖的液體發(fā)酵培養(yǎng)基，配方如下：葡萄糖組培養(yǎng)基：葡萄糖3g/l、蛋白胨5g/l、煙葉浸提液3g/l、nacl5g/l，ph7.5；
所述液體發(fā)酵培養(yǎng)基中添加的煙葉浸提液按照如下方法制得：取醇化煙葉和去離子水，二者按照質(zhì)量體積比(w:v)為1：100的比例混勻，控制溫度180-200℃磁力攪拌1-1.5h，用紗布過濾并滅菌得所述煙葉浸提液；
將菌株按2％接種量接種于含有所述液體活化培養(yǎng)基的試管中，活化15h后按2％接種量接種于含有100ml上述葡萄糖組液體發(fā)酵培養(yǎng)基的三角瓶中，同時加入浸提后的煙末，用八層紗布包裹，于37℃，200rpm下恒溫搖瓶發(fā)酵。
每隔24h取出適量發(fā)酵液測定菌濃度及還原糖含量，取出適量煙末烘干至恒重，測定總纖維素和木質(zhì)素含量，結(jié)果如下表4所示。
表4煙梗煙末混合組樣品在葡萄糖組培養(yǎng)基中發(fā)酵各成分變化情況
可見，本發(fā)明所述芽孢桿菌菌株可有效降低煙草和煙梗粉末廢棄料中的纖維素、木質(zhì)素含量。
實施例4：
準確稱取3.0g煙末和3.0g煙梗，混合均勻，按1:10(w/v)加水混勻，于50℃攪拌2h浸提，將所得浸提物抽濾、并洗滌至洗滌液無色，烘干至恒重，備用；
配制含有果糖的液體培養(yǎng)基，配方如下：果糖組培養(yǎng)基：果糖3g/l、蛋白胨5g/l、煙葉浸提液3g/l、nacl5g/l，ph7.0；
將菌株按2％接種量接種于含有所述液體活化培養(yǎng)基的試管中，活化15h后按2％接種量接種于含有100ml所述果糖組液體發(fā)酵培養(yǎng)基的三角瓶中，同時加入浸提后的煙末，用八層紗布包裹，于37℃，200rpm下恒溫搖瓶發(fā)酵。
每隔24h取出適量發(fā)酵液測定菌濃度及還原糖含量，取出適量煙末烘干至恒重，測定總纖維素和木質(zhì)素含量，結(jié)果如下表所示(表5)：
表5煙梗煙末混合組樣品在果糖組培養(yǎng)基中發(fā)酵各成分變化情況
比較例1：
準確稱取6.0g煙末，按1:10(w/v)加水于50℃攪拌2h浸提，將所得浸提物抽濾、并洗滌至洗滌液無色，烘干至恒重，備用；
配制空白組液體培養(yǎng)基，即0.9％生理鹽水；
將菌株按2％接種量接種于含有所述液體活化培養(yǎng)基的試管中，活化15h后按2％接種量接種于含有100ml空白組培養(yǎng)基的三角瓶中，同時加入浸提后的煙末，用八層紗布包裹，于37℃，200rpm下恒溫搖瓶發(fā)酵。
每隔24h取出適量發(fā)酵液測定菌濃度及還原糖含量，取出適量煙末烘干至恒重，測定總纖維素和木質(zhì)素含量，結(jié)果匯總?cè)缦卤?所示。
表6比較例1樣品發(fā)酵各成分變化情況
比較例2：
準確稱取3.0g煙末和3.0g煙梗，混合均勻，按1:10(w/v)加水于50℃攪拌2h浸提，將所得浸提物抽濾、并洗滌至洗滌液無色，烘干至恒重，備用；
配制空白組液體培養(yǎng)基，即0.9％生理鹽水；
將菌株按2％接種量接種于含有所述液體活化培養(yǎng)基的試管中，活化15h后按2％接種量接種于含有100ml空白組培養(yǎng)基的三角瓶中，同時加入浸提后的煙末，用八層紗布包裹，于37℃，200rpm下恒溫搖瓶發(fā)酵。
每隔24h取出適量發(fā)酵液測定菌濃度及還原糖含量，取出適量煙末烘干至恒重，測定總纖維素和木質(zhì)素含量，結(jié)果匯總?cè)缦卤?所示。
表7比較例2樣品發(fā)酵各成分變化情況
由表6中數(shù)據(jù)可以看出，三組不同培養(yǎng)基中發(fā)酵下的煙末加入本發(fā)明所述菌株發(fā)酵后，總纖維素和木質(zhì)素均被降解，總纖維素降解率均高于18％，其中葡萄糖為碳源組的總纖維降解效果最好，可達19.33％；木質(zhì)素的降解率均高于20％，其中以果糖為碳源組的降解效果最好，達到31.60％；三組樣品中的菌濃度在第三天均達到峰值，由于培養(yǎng)基中含有可直接利用的碳源，前48h葡萄糖組和果糖組菌濃度明顯大于空白組；葡萄糖組和果糖組中的還原糖作為碳源在發(fā)酵中被被菌株消耗從而逐漸降低，空白組由于煙末本身含有少量還原糖，在發(fā)酵前期被菌株利用而降低，菌株在穩(wěn)定期產(chǎn)酶量增加，纖維素和木質(zhì)素分解效率提高，發(fā)酵液中還原糖含量呈上升趨勢，4d到達峰值，5d時，處于衰退期的菌株產(chǎn)酶量降低，同時還要繼續(xù)利用發(fā)酵液中的還原糖，故還原糖含量開始下降。
由表7數(shù)據(jù)可以看出，三組不同培養(yǎng)基中的煙梗和煙末混合物加入本發(fā)明所述菌株發(fā)酵后，總纖維素和木質(zhì)素均被降解，總纖維素降解率均高于18％，其中以果糖為碳源組的總纖維降解效果最好，可達27.61％；木質(zhì)素的降解率均高于20％，其中葡萄糖組的降解效果最好，達到32.69％；三組樣品中的菌濃度在第三天均達到峰值，與表6中數(shù)據(jù)相似，前48h葡萄糖組和果糖組菌濃度明顯大于空白組；葡萄糖組和果糖組中的還原糖逐漸降低，空白組的還原糖含量呈現(xiàn)先降低后增加再降低的趨勢。
顯然，上述實施例僅僅是為清楚地說明所作的舉例，而并非對實施方式的限定。對于所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在上述說明的基礎(chǔ)上還可以做出其它不同形式的變化或變動。這里無需也無法對所有的實施方式予以窮舉。而由此所引伸出的顯而易見的變化或變動仍處于本發(fā)明創(chuàng)造的保護范圍之中。