一種用于農場現(xiàn)場發(fā)酵的解淀粉芽孢桿菌藥肥及其應用
【技術領域】
[0001] 本發(fā)明涉及微生物肥料與微生物農藥領域，特別是涉及一種應用于農場現(xiàn)場發(fā)酵 的解淀粉芽孢桿菌藥肥及其應用。
【背景技術】
[0002] 隨著現(xiàn)有農業(yè)政策的發(fā)展，農場規(guī)?；?，大型化的趨勢進一步加強，芽孢桿菌是目 前生物農藥，生物肥料中研究最多的一種微生物，它具有廣譜抗菌活性和極強的抗逆能力， 其營養(yǎng)細胞能在真菌性病原菌絲體表面繁衍定殖，有效抑制病菌生長，因此，在控制病害發(fā) 生、促進植株生長，提高作物產量等方面顯示出了廣闊的應用前景。
[0003] 解淀粉芽孢桿菌的抑菌譜較廣，代謝產物較豐富，能夠產生多種抑菌物質。解淀粉 芽孢桿菌具有抑制植物病害的能力，可制成生物制劑用于植物花部、葉、枝干、根部以及果 蔬釆后病害防治上;使用解淀粉芽孢桿菌的發(fā)酵液，對農作物進行噴施、拌種、灌根等，對植 物都產生促進生長的功效。
[0004] 在生物防治領域，解淀粉芽孢桿菌應用很多。尖孢鐮刀菌(Fusariumoxysporum) 引起的枯萎病可以被解淀粉芽孢桿菌Q12抑制(權春善等2006)，菌株JK-JS3對松樹線 蟲具有殺滅活性，其活性物質是一種非蛋白類氣體(朱麗梅等2009)。解淀粉LP-5菌株可 以顯著抑制梨黑斑病菌(Alternariaalternata)的生長，活性物質是一種20.3kD的蛋白 (張寶俊等2010)。早起噴施Ba33菌株可以有效抑制煙草發(fā)生花葉病(TMV)，枯斑數(shù)量明 顯減少（申莉莉等2010)。在抑制真菌方面，解淀粉芽孢桿菌對大多數(shù)常見的真菌病害都有 一定的抑制作用。如水稻惡苗?。ㄌ餄嵠嫉?010)、葡萄白腐病和小麥根腐病菌(葛平華等 2012)、香蕉枯萎病（盧娟等2013)等。此外，它還能抑制油菜核盤菌菌核的形成（陳士云等 2005)。本發(fā)明人分離的解淀粉芽孢桿菌可以防治多種土傳病害與葉部病害，能起來促生防 病作用。
[0005] 雖然以芽孢桿菌為主制備的微生物農藥產品不少，但總體說來，還存在包括研究 開發(fā)與生產脫節(jié)，制劑化困難，產品質量穩(wěn)定性差、生產工藝落后，產品一致性不高，生產企 業(yè)規(guī)模小，應用推廣難度大的問題，除些之外，目前芽孢桿菌以可濕性粉劑為主，這種劑型 雖然便于儲存和運輸，但在生產應用中存在很多制約因子。如施用的可濕性粉劑中大部份 以芽孢作為衡量產品中有效成分的惟一標準，若芽孢不能及時萌發(fā)，施用效果則不佳，如王 倩利用枯草芽孢桿菌TR21防治巴西蕉枯萎病時，前期試驗利用TR21菌株NB發(fā)酵液灌根和葉 腋接種都能有效防治枯萎病，但是利用芽孢制備可濕性粉劑的灌根與葉腋效果卻不理想， 顯示了去掉發(fā)酵液后的純芽孢可能因為萌發(fā)困難和缺少發(fā)酵液中有效成分而使防效下降。 此外，在生產實踐中，隨著作物的生長，需要定期不斷的補充生防菌才能獲得較好的防效， 但現(xiàn)有可濕性粉劑價格一般較高，而且可濕性粉劑的溶解需要使用大量的水，而隨著植物 病害的蔓延，潔凈水源也成為制約生防制劑使用的因子，與化學藥劑不同的是芽孢溶解到 水中并不能直接殺死水中的病原菌，因而如果使用已被病原菌污染的水體施用生防菌，還 會促進病害的蔓延。
[0006]為了能夠利于生產，運輸，我們生產產品中的芽孢菌主要是以孢子的狀態(tài)存在，但 其應用于作物，土壤，水體中，都需要的主要是營養(yǎng)態(tài)細胞，如在水產上使用芽孢桿菌制劑， 在使用前會經過活化，即使芽孢狀態(tài)的芽孢桿菌轉化為營養(yǎng)態(tài)細胞，但傳統(tǒng)上的活化主要 是加入一些紅糖，或葡萄糖，培養(yǎng)基之類的營養(yǎng)物質誘導其生長繁殖，如芽孢桿菌制劑:紅 糖:水以1:1:10的比例進行"活化"，但傳統(tǒng)上的"活化"存在以下幾個方面的問題： 一是高營養(yǎng)培養(yǎng)基加水后易使空氣與水中的酵母菌，乳酸菌繁殖迅速，消耗培養(yǎng)基中 營養(yǎng)，迅速降低培養(yǎng)液中PH，抑制芽孢的萌發(fā)與生長； 二是芽孢萌發(fā)前期需要時間長，一般需要4小時，芽孢才會開始萌發(fā)，而此時，由于"活 化"液中酵母菌與乳酸菌的大量繁殖導致PH下降迅速，已經可以抑制芽孢的萌發(fā)與繁殖，從 而大大影響芽孢萌發(fā)； 三是高營養(yǎng)培養(yǎng)基中也易感染大腸桿菌，原著的植物病害菌等有害雜菌，導致施用后 效果差仍致有反作用； 四是芽孢菌用量大，效果不穩(wěn)定。
[0007]然而到目前為止還沒有公開過有關一種應用于農場現(xiàn)場發(fā)酵擴繁的能夠較好控 制雜菌與促進芽孢快速萌發(fā)的解淀粉芽孢桿菌藥肥及其應用的相關技術。

【發(fā)明內容】

[0008] 為了克服現(xiàn)有技術的缺點，本發(fā)明提供一種應用于農場現(xiàn)場發(fā)酵擴繁的能夠較好 控制雜菌與促進芽孢快速萌發(fā)的解淀粉芽孢桿菌藥肥及其應用，具體說是提供一種可應用 于農場現(xiàn)場發(fā)酵擴繁，利用納他霉素與多粘菌素抑制病原真菌，酵母菌等真菌與大腸桿菌， 沙門氏菌等革蘭氏陰性菌的生長，利用丙氨酸，果糖，天冬酰胺等芽孢萌發(fā)劑，能快速促進 芽孢的萌發(fā)，提高芽孢萌發(fā)效率，減少芽孢萌發(fā)時間，從而快速使解淀粉芽孢桿菌繁殖而 占據(jù)優(yōu)勢菌種，而更好的抑制其他的雜菌與有害菌。
[0009] 為了實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明所采用的技術方案是：一種用于農場現(xiàn)場發(fā)酵的解淀 粉芽孢桿菌藥肥，制備該解淀粉芽孢桿菌藥肥的原料為:解淀粉芽孢桿菌菌粉50-200份，硫 酸粘桿菌素10-50份，納他霉素1-2份，L-丙氨酸3-40份，天冬酰胺5-40份，酵母浸粉50-200 份，蛋白胨50-200份，磷酸氫二鈉1-10份，氯化鈉1-10份，葡萄糖20-200份，果糖20-50份，紅 糖 20-200份。
[0010] 為了達到上述目的，用于農場現(xiàn)場發(fā)酵的解淀芽孢桿菌藥肥的制備方法包含以下 步驟： 先將硫酸粘桿菌素10-50份，納他霉素1-2份，L-丙氨酸3-40份，天冬酰胺5-40份，酵母 浸粉50-200份，蛋白胨50-200份，磷酸氫二鈉1-10份，氯化鈉1-10份，葡萄糖20-200份，果糖 20-50份，紅糖20-200份，放置密封攪拌罐中攪拌20-30分鐘，混合均勻，再將解淀粉芽孢桿 菌菌粉50-200份加入攪拌罐中攪拌均勻后，分裝，抽真空包裝，即得到用于現(xiàn)場發(fā)酵的解淀 粉芽孢桿菌藥肥。
[0011] 其中，所述的一種用于農場現(xiàn)場發(fā)酵的解淀粉芽孢桿菌藥肥的應用，包括以下步 驟：Φ此解淀粉芽孢桿菌藥肥在農場現(xiàn)場進行發(fā)酵的方法為:先將制備的解淀粉芽孢桿菌 藥肥加入其3-5倍重量的水潤濕調勻，30分鐘后再補足水，以達到解淀粉芽孢桿菌藥肥與水 的比例為1:10至1:30的比例，調PH至8-8.2后，開始培養(yǎng)，前12小時每分鐘通氣量液氣比為 1:0.6，12小時后通氣量為1:1，培養(yǎng)溫度為20-35°C，培養(yǎng)16-24小時后，即可得到現(xiàn)場發(fā)酵 的解淀粉芽孢桿菌藥肥的發(fā)酵液； 通用于農場現(xiàn)場發(fā)酵的解淀粉芽孢桿菌藥肥的應用是現(xiàn)場發(fā)酵的解淀粉芽孢桿菌藥 肥的發(fā)酵液在作物栽培中對土傳病害，葉部病害的應用； 馨用于農場現(xiàn)場發(fā)酵的解淀粉芽孢桿菌藥肥的應用是現(xiàn)場發(fā)酵的解淀粉芽孢桿菌藥 肥的發(fā)酵液在作物栽培中作為底肥、追肥和葉面肥以及穴施和拌種的應用； 其中，對于土傳病害如煙草青枯病，黑脛病，西瓜枯萎病，黃瓜枯萎病等，將步驟Φ制備 的發(fā)酵液稀釋500-800倍后采用灌根的方法進行防治，在移栽時和發(fā)病初期用藥，每次用發(fā) 酵液量為0.5-1公斤/畝； 其中，對于葉部病害如水稻稻瘟病，水稻紋枯病，草莓白粉病等，將步驟?制備的發(fā)酵 液稀釋200-500倍采用噴霧的方法進行防治，在發(fā)病初期開始用藥，每隔7天使用一次，共3-5次； 其中，作為底肥時，將步驟?制備的發(fā)酵液與其他有機肥與化肥配合使用，每次用發(fā)酵 液量為5-20公斤/畝； 其中，作為追肥時，將步驟您制備的發(fā)酵液稀釋500-1000倍灌根，每次用發(fā)酵液量為 0.1-0.3公斤/畝； 其中，作為葉面肥，將步驟Φ制備的發(fā)酵液稀釋300-800倍葉面噴施，正反葉面全部噴 濕為止，每次用發(fā)酵液量為0.3-0.8公斤/畝； 其中，用于拌種時，將步驟Φ制備的發(fā)酵液稀釋200-500倍，拌種2-10小時。
[0012] 其中，所述的解淀粉芽孢桿菌菌粉的芽孢含量不低于100億cfu/g。
[0013] 其中，所述的一種用于農場現(xiàn)場發(fā)酵的芽孢藥肥的各組份原料的水份含量低于 5%〇
[0014] 其中，所述的解淀粉芽孢桿菌菌粉可采用現(xiàn)有技術，比如可濕性粉劑，普通菌粉， 水分分散劑都可，本發(fā)明提供以下方法： 取出解淀粉芽孢桿菌菌種保藏管，用LB固體培養(yǎng)基劃平板進行復蘇，37°C培養(yǎng)48小時。 在平板下挑取單個菌落接種50毫升LB培養(yǎng)基中，在培養(yǎng)箱中37°C震蕩培養(yǎng)24小時。種子采 用5%的接種量，接種至5L大三角瓶中，裝液量為2L的LB培養(yǎng)基，37°C震蕩培養(yǎng)20-28小時，檢 測其菌液濃度，活菌含量超過40億/毫升，即可作為芽孢桿