專利名稱：用于治療血管栓塞形成的微球的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明提供了，例如微球，其包含明膠或明膠替代物和N-三羥甲基甲基丙烯酰胺單體單元、二乙基氨基乙基丙烯酰胺單體單元和N，N-亞甲基-二丙烯酰胺單體單元的共聚物。本發(fā)明還提供了制備微球的方法，所述微球包含明膠或明膠替代物和N-三羥甲基甲基丙烯酰胺單體單元、二乙基氨基乙基丙烯酰胺單體單元和N，N-亞甲基-二丙烯酰胺單體單元的共聚物。例如，本發(fā)明進(jìn)一步提供了包含所述微球的組合物和使用所述微球和其組合物的方法。
背景技術(shù)：
使用治療性血管閉塞(即栓塞形成)原位預(yù)防或治療某些病理學(xué)病癥。其可以利用導(dǎo)管施用，這使得有可能在成像控制下，將微粒閉塞試劑(即，栓子)定位于循環(huán)系統(tǒng)中。 其有許多醫(yī)學(xué)應(yīng)用，例如治療腫瘤，包括例如子宮纖維瘤、血管畸形和出血病程。例如，血管閉塞可以抑制疼痛、限制外科手術(shù)介入的失血及隨后的栓塞形成，或者甚至引起腫瘤壞死， 及避免進(jìn)行手術(shù)。在血管畸形的情況下，血管閉塞能夠使正常組織供血正常化，在外科手術(shù)中有幫助，且限制出血危險。在出血病程中，血管閉塞可引起流量減少，其促進(jìn)動脈開口愈合。而且，根據(jù)待治療的病理學(xué)病癥，可以形成栓塞用于暫時性以及永久性目的。已經(jīng)使用不同類型的栓子進(jìn)行栓塞形成，例如液體試劑(例如，丙烯酸膠、凝膠或粘性懸浮液)以及微粒試劑(例如，混雜聚合物(miscellaneous polymers)、硬膜、海綿膠、 球、囊或螺旋物)，包括EmboSphere 三丙烯基明膠微球(BioSphere Medical, Rockland, ΜΑ)(參見，例如，美國專利號5，635，215和5，648，100)。在各種閉塞試劑中，已證實(shí)微球具有比其他固體栓子更好的栓子性質(zhì)。然而，微球的性質(zhì)和產(chǎn)率通常由于在生產(chǎn)方法中使用的材料和及其制備方法而變化。因此，仍然需要一種制備微球的方法，該方法具有例如較好的產(chǎn)率和較好的均勻性或純度。另外，還需要具有例如在生產(chǎn)批次之間具有較好或更好的一致性的微球，其能夠提供最佳的栓子效果。發(fā)明簡述本發(fā)明提供的方法一般性地涉及微球和包含該微球的組合物。本發(fā)明還提供了微球的制備方法和使用方法。在一個方面，本發(fā)明提供了微球，其包含(a)包含N-三羥甲基甲基丙烯酰胺單體單元、二乙基氨基乙基丙烯酰胺單體單元和N，N-亞甲基-二丙烯酰胺單體單元的共聚物， 和(b)交聯(lián)的明膠。在某些實(shí)施方案中，所述微球在1H NMR譜中顯示在約3. 5ppm至約4ppm 的第一個峰、約3ppm至約3. 5ppm的第二個峰和約Ippm至約1. 5ppm的第三個峰。在具體的實(shí)施方案中，(i)第二個峰與第一個峰的積分比為約0. 50至約0. 65，(ii)第三個峰與第一個峰的積分比為約0. 55至約0. 75 (例如約0. 61至約0. 75)，或(iii)⑴和(ii)的組合。 在某些實(shí)施方案中，所述N-三羥甲基甲基丙烯酰胺單體單元是超純的單體單元，所述二乙基氨基乙基丙烯酰胺單體是超純的單體單元，和/或所述N，N-亞甲基二 -丙烯酰胺單體單元是超純的單體。在另一個方面，本發(fā)明提供了微球，其包含(a)通過共聚N-三羥甲基甲基丙烯酰胺單體、二乙基氨基乙基丙烯酰胺單體和N，N-亞甲基-二丙烯酰胺單體制備的共聚物，和(b)交聯(lián)的明膠。在某些實(shí)施方案中，所述微球在屯NMR譜中顯示在約3.5ppm至約4ppm的第一個峰、約3ppm至約3. 5ppm的第二個峰和約Ippm至約1. 5ppm的第三個峰。 在具體的實(shí)施方案中，(i)第二個峰與第一個峰的積分比為約0. 50至約0. 65，(ii)第三個峰與第一個峰的積分比為約0. 55至約0. 75 (例如約0.61至約0. 75)，或(iii)⑴和(ii) 的組合。在某些實(shí)施方案中，所述N-三羥甲基甲基丙烯酰胺單體是超純的單體，所述二乙基氨基乙基丙烯酰胺單體是超純的單體，和/或所述N，N-亞甲基二 -丙烯酰胺單體是超純的單體。在另一個方面，本發(fā)明提供了一種制備微球的方法，其包含(a)制備下述水溶液，該水溶液包含(i)N-三羥甲基甲基丙烯酰胺單體，(ii) 二乙基氨基乙基丙烯酰胺單體， (iii)N，N-亞甲基二-丙烯酰胺單體，和(iv)明膠，其中所述N-三羥甲基甲基丙烯酰胺單體是超純的單體，所述二乙基氨基乙基丙烯酰胺單體是超純的單體和/或所述N，N-亞甲基二-丙烯酰胺單體是超純的單體；(b)在攪拌之前或攪拌同時，將該水溶液加入到具有低水混容性的液體有機(jī)相(例如油，例如礦物油，例如石蠟油)中；從而得到包含下述共聚物的微球，該共聚物含有N-三羥甲基甲基丙烯酰胺、二乙基氨基乙基丙烯酰胺和N，N-亞甲基二-丙烯酰胺單體單元；(c)交聯(lián)明膠。在一些實(shí)施方案中，所述方法進(jìn)一步包括在交聯(lián)明膠之前，對微球進(jìn)行超聲處理(例如超聲粉碎)。在一個實(shí)施方案中，經(jīng)由進(jìn)料環(huán)(feed ring)將該水溶液加入到液體有機(jī)相中。本發(fā)明還提供了通過這些方法制備的微球。在另一個方面，本發(fā)明提供了在個體中形成栓塞的方法，其包括向個體使用本發(fā)明提供的微球。在仍然另一個方面，本發(fā)明提供了控制或治療個體中血管生成依賴性疾病的方法，其包括向個體施用本發(fā)明提供的微球。術(shù)語除非另有定義，所有本文使用的技術(shù)術(shù)語和科技術(shù)語具有與如本領(lǐng)域普通技術(shù)人員通常理解的相同含義。將所有的專利、申請、公布的申請及其它出版物的全部內(nèi)容引入本文作為參考。如果對于本文的術(shù)語存在多個定義，除非另有說明，以本部分中的定義為準(zhǔn)。術(shù)語“約”或“近似”指在給定值或范圍的20%之內(nèi)，例如在15%之內(nèi)、在10%之內(nèi)、在9%之內(nèi)、在8%之內(nèi)、在7%之內(nèi)、在6%之內(nèi)、在5%之內(nèi)、在4%之內(nèi)、在3%之內(nèi)、在 2%之內(nèi)、在之內(nèi)、在0.5%之內(nèi)或更低。在用于本文時，“施用/給藥”指通過注射或以其它手段將存在于體外的物質(zhì)(例如本發(fā)明提供的微?；蛭⑶?物理遞送至患者體內(nèi)的行為，例如但不限于通過肺(例如吸入)、粘膜(例如鼻內(nèi))、真皮內(nèi)、靜脈內(nèi)、動脈內(nèi)、膽道內(nèi)、眼內(nèi)、骨內(nèi)、肌內(nèi)遞送和/或本文描述的或本領(lǐng)域已知的任何其它物理遞送方法遞送。在具體的實(shí)施方案中，使用注射器和/ 或?qū)Ч苓f送所述微球。當(dāng)治療或以其它方式控制疾病或其癥狀時，所述物質(zhì)的給藥典型地發(fā)生在疾病或其癥狀發(fā)病之后。當(dāng)預(yù)防疾病或其疾病時，所述物質(zhì)的給藥典型地發(fā)生在疾病或其癥狀發(fā)病之前。在某些實(shí)施方案中，這樣的給藥使遞送的微粒(例如，本發(fā)明提供的微球)接觸靶區(qū)域(例如，血管、組織或器官)。術(shù)語“血管造影”指在身體各個部分(例如，肝、前列腺、子宮)進(jìn)行血管成像，以便確定所述血管患病、狹窄、擴(kuò)大或完全阻塞的一種X射線檢查。在某些實(shí)施方案中，將導(dǎo)管穿入通向感興趣身體區(qū)域的動脈之后，通過注射對照物質(zhì)增亮該血管，拍攝血管造影照片(例如，X射線)?！俺x擇性血管造影”指使用較小導(dǎo)管的血管造影，該較小導(dǎo)管可以穿過較大導(dǎo)管進(jìn)入供應(yīng)小的組織或腫瘤區(qū)域的支鏈動脈。術(shù)語“動靜脈畸形”、“AVM”、“血管畸形”指在動脈和靜脈之間出現(xiàn)至少一個(最典型地，許多)異常交流，導(dǎo)致主要由血管構(gòu)成的局部腫瘤樣物質(zhì)的一組疾病。這樣的疾病可以是先天性的或獲得性的。術(shù)語“良性前列腺肥大”指例如中年和老年男性的前列腺增大。如本文使用的“交聯(lián)”、“交聯(lián)的”、“交聯(lián)性，，通常指通過一個或多個橋連接兩種或多種增穩(wěn)物(包括脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、聚合物、糖類、表面活性劑增穩(wěn)物)、生物活性治療因子和/ 或生物活性劑。所述橋可以由一個或多個元素、基團(tuán)或化合物組成，通常使來自第一種增穩(wěn)物分子的原子結(jié)合來自第二種增穩(wěn)物分子的原子。交聯(lián)橋可涉及共價連接和(或)非共價連接。多種元素、基團(tuán)和(或)化合物中的任何一種都可以形成交聯(lián)物中的橋，增穩(wěn)物可以是天然交聯(lián)的或經(jīng)由合成方法交聯(lián)的。例如，交聯(lián)可以天然存在于由肽鏈構(gòu)成的物質(zhì)中，所述肽鏈由胱氨酸殘基上的二硫鍵相連接，二硫鍵例如存在于角蛋白、胰島素和其它蛋白質(zhì)中?？蛇x地，交聯(lián)可受到合適的化學(xué)修飾的影響，所述化學(xué)修飾例如，可通過暴露于熱、高能輻射等引起化合物例如增穩(wěn)物與可充當(dāng)交聯(lián)劑的化學(xué)物質(zhì)相結(jié)合。實(shí)例包括，通過硫形成二硫鍵的交聯(lián)、使用有機(jī)過氧化物的交聯(lián)、利用高能輻射的不飽和物質(zhì)交聯(lián)、與二羥甲基甲氨酸酯交聯(lián)等。在本發(fā)明提供的微球的某些實(shí)施方案中，明膠是交聯(lián)的。如本文使用的術(shù)語“細(xì)胞粘附促進(jìn)劑”指由于其存在于微球中或與微球結(jié)合而促進(jìn)或增強(qiáng)微球粘附到細(xì)胞表面的任何物質(zhì)。這些物質(zhì)通常經(jīng)由蛋白質(zhì)和聚合物的共價鍵結(jié)合所述微球的蛋白質(zhì)。如本文使用的“化學(xué)修飾”指在微球制備過程期間、或通過混合微球與多種試劑或組織、或使微球接觸多種試劑或組織時，微球的化學(xué)性質(zhì)和特征的變化，使得一旦注射到體內(nèi)，所述微球具有除了栓塞形成之外，進(jìn)行例如其它功能的能力。如本文使用的術(shù)語“有效量”指足夠部分地或完全地閉塞血管(例如動脈或靜脈) 的治療劑(例如，本發(fā)明提供的微球或組合物)的量。這樣的閉塞可以是暫時性的或永久性的。在某些實(shí)施方案中，有效量將進(jìn)一步改善給定疾病和/或其相關(guān)癥狀的嚴(yán)重性和/ 或持續(xù)時間。在本發(fā)明提供的方法的某些實(shí)施方案中，將有效量的微球施用給患者。如本文使用的術(shù)語“形成栓塞”或“形成治療性栓塞”指部分或全部閉塞充滿了血液的血管，例如通過將栓子有意引入血管中來選擇性閉塞血管。例如，形成栓塞使動脈或靜脈閉塞，以矯正功能障礙(例如動靜脈畸形)或堵塞或減緩血流(例如，流向?qū)嶓w瘤/癌癥生長)。在某些實(shí)施方案中，栓塞形成是一種被動行為，在此意義上，沒有活性分子被運(yùn)送和 /或遞送到栓子物質(zhì)沉積的位點(diǎn)。在施用其它治療劑的上下文中，如本文使用的術(shù)語“組合”指使用超過一種治療劑。術(shù)語“組合”的使用并不限制向個體施用治療劑的順序。第一治療劑可以在向個體施用第二治療劑之前(例如1分鐘、15分鐘、30分鐘、45分鐘、1小時、2小時、4小時、6小時、12 小時、M小時、48小時、72小時、96小時、1周、2周、3周、4周、5周、6周、8周或12周)、同時或之后(例如1分鐘、15分鐘、30分鐘、45分鐘、1小時、2小時、4小時、6小時、12小時、24小時、48小時、72小時、96小時、1周、2周、3周、4周、5周、6周、8周或12周之后)給藥，所
述個體例如患有或易患給定的疾病。任一種另外的治療劑可以與其它另外的治療劑以任何順序施用。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供的微?？梢耘c一種或多種治療劑(例如，目前用于預(yù)防、治療、控制和/或改善給定疾病或其相關(guān)癥狀所施用的非微球治療劑)組合給藥。 可以與本發(fā)明提供的微粒組合給藥的治療劑的非限制性實(shí)例包括止痛劑、麻醉劑、抗生素或免疫調(diào)節(jié)劑或在 U- S. Pharmacopoeia-National Formulary (2009) U. S. Pharmacopoeia, 甸,括{|條訂版，禾口 / 或 hysiciaN’ s Desk Reference (2009) 63rd ed.，Thomson Reuters 中列出的任何其它試劑。如本文使用的，術(shù)語“雜質(zhì)”指以材料或化合物(例如單體或單體單元)的限制量存在的物質(zhì)，其與所述物質(zhì)或化合物的化學(xué)組成不同。雜質(zhì)可以是天然存在的，或者在合成物質(zhì)或化合物期間增加的或由合成物質(zhì)或化合物引起的。如本文使用的“可注射的”指能夠經(jīng)由注射器、導(dǎo)管、針或其它方式注射或灌注液體介質(zhì)中的微球的給藥、遞送或運(yùn)送到體內(nèi)。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供的微粒微粒是可注射的微粒。如本文使用的具有“低水混容性”的液體或溶液指在25°C下，具有約50%或更低、 約40%或更低、約35%或更低、約30%或更低、約25%或更低、約20%或更低、約15%或更低、約10%或更低、約5%或更低、約4%或更低、約3%或更低、約2%或更低、約或更低、約0.5%、約0. 或更低、或約0%水混容性的液體或溶液。在具體的實(shí)施方案中，所述液體或溶液在25°C下具有約5%或更低的水混容性。在另一個具體的實(shí)施方案中，所述液體或溶液在25°C下具有約或更低的水混容性。在某些實(shí)施方案中，所述液體或溶液是不可混溶性的。如本文使用的術(shù)語“控制”指個體從不能引起治愈疾病的治療劑(例如，本發(fā)明提供的微球)得到的有益效果。在本發(fā)明提供的方法的某些實(shí)施方案中，向個體施用一種或多種治療劑以“控制”給定的疾病或其一種或多種相關(guān)癥狀，從而防止所述疾病的進(jìn)展或惡化。如本文使用的術(shù)語“微球”指能夠制成多個不同尺寸的小體的聚合物或一種或多種聚合物的組合。如本文使用的微球可以是任何形狀。在某些實(shí)施方案中，所述微球是基本上球形的。所述微球的這些結(jié)構(gòu)通?？梢允乔蛐位蚯驙铙w形，或者受限于想象的球形或球狀體形。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供的微球的表面在放大至多1000倍，例如至多100 倍、至多10倍、0倍或它們的范圍內(nèi)似乎是光滑的?？梢酝ㄟ^本領(lǐng)域已知的任何方法對所述微球滅菌，所述方法例如照射，例如Y照射或β照射。本發(fā)明提供的微球可以包括如本文描述和定義的其它物質(zhì)。然而，應(yīng)當(dāng)理解術(shù)語“微球”代表為了便于解釋本發(fā)明提供的組合物和方法而進(jìn)行的描述，在某些實(shí)施方案中，本文描述的示例性的微球并不必須限于精確的球形(例如，其為微粒)。術(shù)語“單體”指可以化學(xué)鍵合其它單體以形成聚合物或共聚物的小分子。在本文中，單體的某些性質(zhì)或特征也可以應(yīng)用于相應(yīng)單體單元，反之亦然。術(shù)語“單體單元”指在聚合物或共聚物中的單體。如本文使用的術(shù)語“藥學(xué)可接受的”指聯(lián)邦政府或州政府的管理機(jī)構(gòu)批準(zhǔn)的，或在美國藥典、歐洲藥典或用于動物、更特別地用于人類的其它通常公認(rèn)的藥典中列出的。
如本文使用的術(shù)語“預(yù)防”、“防止”指全部或部分抑制個體中給定的疾??；全部或部分抑制個體中給定疾病或其相關(guān)癥狀的發(fā)展或疾病進(jìn)程的發(fā)病。如本文使用的術(shù)語“副作用”涵蓋治療劑的不需要的作用和不良作用。不需要的作用并不一定是不良的。來自治療劑的副作用可以是有害的或不舒服的或危險的。副作用的實(shí)例包括，但不限于鼻炎、腹瀉、咳嗽、腸胃炎、喘氣、惡心、嘔吐、食欲缺乏、腹絞痛、發(fā)熱、疼痛、體重減輕、脫水、脫發(fā)、消化不良、失眠、頭暈、粘膜炎、神經(jīng)和肌肉作用、疲勞、口干燥和食欲不振、給藥部位的皮疹或腫脹、流行性感冒樣癥狀例如發(fā)熱、發(fā)冷疲勞、消化道問題和過敏性反應(yīng)。患者經(jīng)受的另外不想要的作用很多，其都是本領(lǐng)域已知的。許多描述在 PhysiciaN’ s Desk Reference ( H 58 ^, 2004)中。術(shù)語“超聲處理”指施用聲能(例如超聲粉碎)攪拌樣品(例如微球)中微粒的作用。如本文使用的“增穩(wěn)物”或“增穩(wěn)化合物”指能夠提高本文描述的組合物、靶配體和/或其它生物活性治療因子的穩(wěn)定性的任何物質(zhì)，其包括，例如混合物、懸浮液、乳劑、分散劑、囊泡等。術(shù)語“干細(xì)胞”指具有自我更新和產(chǎn)生分化后代的能力的細(xì)胞。在某些實(shí)施方案中，干細(xì)胞是間充質(zhì)干細(xì)胞。術(shù)語“粘著”或“聚集”指其中一種物體或制品(例如微球)緊密地物理接觸一種或多種物體或制品，且在沒有外部力量下不能與其它物體或制品分離的狀態(tài)(例如聚集成塊或整體)。在某些實(shí)施方案中，粘著或聚集的微球指例如由于明膠或明膠替代品引起緊密地物理接觸一種或多種微球的微球。術(shù)語“未粘著”、“沒有粘著”、“未聚集”或“沒有聚集” 指沒有緊密地物理接觸或粘附的狀態(tài)。在某些實(shí)施方案中，未粘著、沒有粘著、未聚集、沒有聚集的微球指基本上沒有或完全沒有與其它微球緊密地物理接觸的微球?？梢岳缤ㄟ^在顯微鏡下觀察粘著微球在總數(shù)中的百分?jǐn)?shù)。如本文使用的術(shù)語“個體”和“患者”可互換地使用。如本文使用的個體是包括施用如本發(fā)明提供的微粒的哺乳動物，例如非靈長類(例如母牛、豬、馬、貓、狗、大鼠、兔子等)或靈長類(例如猴子和人類)。在某些實(shí)施方案中，所述患者需要治療或控制疾病或其癥狀。在具體的實(shí)施方案中，個體是人類。如本文使用的術(shù)語“基本上球形”或“通常為球形”指接近理想球形的形狀，其由呈現(xiàn)的最低外表面區(qū)域的體積定義。特別地，如本文使用的“基本上球形”指當(dāng)查看所述微粒的任一個橫截面(例如在顯微鏡下)時，平均大直徑和平均小直徑之間的差異為小于20%、 小于15%、小于10%、小于5%或小于1%。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供的微球的表面在放大至多1000倍，例如至多100倍、至多10倍、0倍或其范圍下似乎是光滑的。術(shù)語“治療劑”或“治療藥物”可以在本文中可互換地使用，其指遞送到生物體內(nèi)導(dǎo)管以產(chǎn)生期望的、通常是有益的作用的任何治療活性物質(zhì)。如本文使用的術(shù)語“治療”指可以在控制、治療和/或改善給定疾病或其相關(guān)癥狀中使用的任何方案、方法和/或試劑。在某些實(shí)施方案中，術(shù)語“治療”指生物學(xué)療法、支持療法和/或本領(lǐng)域技術(shù)人員例如醫(yī)務(wù)人員已知用于控制或治療給定的疾病或其相關(guān)癥狀的其它治療。如本文使用的術(shù)語“治療”指減少或改善疾病或其癥狀的發(fā)展、嚴(yán)重性和/或持續(xù)時間。如本文使用的術(shù)語“超純的”指與沒有用外來化合物或物質(zhì)稀釋或混合的化合物或物質(zhì)(例如，單體或單體單元)相比，含有非常低水平雜質(zhì)的化合物或物質(zhì)(例如，單體或單體單元)的狀態(tài)。在某些實(shí)施方案中，所述雜質(zhì)是鹽。在某些實(shí)施方案中，存在于化合物或物質(zhì)中的雜質(zhì)水平可以表示為(％)；例如，超純的單體或超純的單體單元可以含有小于1%、小于2%、小于3%、小于4%、小于5%、小于6%、小于7%、小于8%、小于9%、小于 10%、小于15%、小于20%、小于25%的雜質(zhì)或其任何范圍。在某些實(shí)施方案中，通過溴化試驗(yàn)(參見，例如實(shí)施例3和6)測定雜質(zhì)的水平。在其它的實(shí)施方案中，通過HPLC(參見例如實(shí)施例2和5)測定雜質(zhì)的水平。術(shù)語“子宮纖維瘤”或“平滑肌瘤”指由某些類型的子宮肌纖維和纖維結(jié)締組織組成的非癌性腫瘤。附圖簡述

圖1A-1B顯示單體純度的比較。圖IA顯示對于從BioS印ra獲得的給定批次DEAE 單體(T209，U088和U089)，使用溴化反應(yīng)(右柱，如制造商BioSepra提供的)和HPLC (左柱)觀察到的純度靈敏性差異。圖IB顯示對于兩種不同批次的三丙烯醛(從BioSepra獲得的R似6和R402)，使用溴化反應(yīng)(右柱)或HPLC (左柱)觀察到的純度靈敏性差異，數(shù)據(jù)以假定獲得的重結(jié)晶三丙烯醛(TA-R)的純度為100%表示，并且將其與重結(jié)晶(TA)之前來自SAFC的三丙烯單體比較。圖2A-2C顯示超聲粉碎減少粘著性微球。圖像分析顯示超聲粉碎顯著減少粘著性微球。用方法沒有觀察到微球破碎。圖2A顯示未交聯(lián)的微球，超聲粉碎開始時的微球(左圖)和超聲粉碎15分鐘后的微球(右圖)。超聲粉碎使粘著性微球的百分?jǐn)?shù)從約7%降低至約0.2%。圖2B顯示交聯(lián)后的微球，在交聯(lián)之前沒有用超聲粉碎的微球(左圖)，或在交聯(lián)之前用超聲粉碎的微球(右圖)。在超聲粉碎步驟之后，進(jìn)行過篩。超聲粉碎使粘著性微球的百分?jǐn)?shù)從約3%降低至接近約0%。圖2C顯示交聯(lián)之前的微球，超聲粉碎開始時的微球(左圖)和超聲粉碎2X 15min.之后的微球(右圖)。超聲粉碎使粘著性微球的百分?jǐn)?shù)從約9. 2%降低至約1.6%。圖3A-3C顯示在明膠交聯(lián)之前(圖3A)和之后(圖3B)接受超聲粉碎的粘著性微球的百分?jǐn)?shù)。在超聲粉碎步驟之后進(jìn)行過篩，將篩上的體積量的百分?jǐn)?shù)顯示在圖3C中。圖4A-4G顯示起始原料和微球的高分辨魔角自旋(HR-MAS) —維(1 譜。圖 4A-D顯示三丙烯醛GA)、明膠GB) ,MBA (4C)和DEAE丙烯酰胺0D)的HR-MAS —維1H譜。 圖4E-4G顯示三丙烯醛GE)、MBA (4F)和DEAE丙烯酰胺0G)的1H核的屬性。圖5A-5J顯示由不同來源的物質(zhì)制備的微球的一維1H NMR譜。圖5A-5D顯示樣品SAFC FMP 128和PALL FMP 130的NMR譜。圖5A是NMR譜的疊加，顯示由該圖譜鑒定的相應(yīng)主峰(標(biāo)記為A、B和C)之間的類似性。圖5B顯示在9-5ppm區(qū)域的NMR譜。圖5C顯示在5-0ppm區(qū)域的NMR譜。圖OT顯示在3. 4_1. 2ppm區(qū)域的NMR譜。圖5E-5J顯示樣品 SAFC FMP 128、PALL FMP 130、FM0903031-M1675 和 FM0903021-M1654 的匪R 譜。圖 5E 顯示NMR譜的比較。圖5F顯示2. 6-1.5ppm的NMR譜。圖5G顯示在3. 4_1. 2ppm區(qū)域的譜圖。 圖5H顯示在9-5ppm區(qū)域的NMR譜。圖51顯示所述譜圖的疊加(圖51)。圖5J顯示拆解重疊峰后的NMR譜。
圖6顯示示例性進(jìn)料環(huán)處理的示意圖。圖7顯示用于匪R分析的HR-MAS轉(zhuǎn)子。詳細(xì)說明在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供的微球是對器官、組織和細(xì)胞無毒的，生物相容的，且利用其促進(jìn)的細(xì)胞生長而粘附到植入部位的各種細(xì)胞和組織。另外，在某些實(shí)施方案中，這些微球是非吸收的和非生物降解的，因此，其是穩(wěn)定的、持久性的，并且一旦植入期望的部位，將保持其一般形狀和位置。在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，所述微球在懸浮液中也是穩(wěn)定的，其允許微球或其它固體基質(zhì)配制和貯存在懸浮液中，和用不同的液體注射。A.用于栓塞形成的微球在一個方面，本發(fā)明提供了微球，其包含(a)包含N-三羥甲基甲基丙烯酰胺單體單元、二乙基氨基乙基丙烯酰胺單體單元和N，N-亞甲基-二丙烯酰胺單體單元的共聚物， 和(b)交聯(lián)的明膠或明膠替代物。在另一個方面，本發(fā)明提供了微球，其包含(a)通過共聚 N-三羥甲基甲基丙烯酰胺單體、二乙基氨基乙基丙烯酰胺單體和N，N-亞甲基-二丙烯酰胺單體制備的共聚物，和(b)交聯(lián)的明膠或明膠替代物。在具體的實(shí)施方案中，所述N-三羥甲基甲基丙烯酰胺、二乙基氨基乙基丙烯酰胺和N，N-亞甲基二丙烯酰胺單體(或單體單元)中的一個、兩個或所有三個都是超純的單體(或單體單元)。在某些實(shí)施方案中，所述微球在1H NMR譜中顯示出第一個峰(例如，約3. 5ppm至約4ppm)、第二個峰(例如，約3ppm 至約3. 5ppm)和第三個峰(例如，約Ippm至約1. 5ppm)。在具體的實(shí)施方案中，第二個峰與第一個峰的積分比為約0. 50至約0. 65，和/或第三個峰與第一個峰的積分比為約0. 55至約0. 75 (例如，約0. 61至約0. 75)。在一個實(shí)施方案中，所述微球包含(a)包含N-三羥甲基甲基丙烯酰胺單體單元、 二乙基氨基乙基丙烯酰胺單體單元和N，N-亞甲基-二丙烯酰胺單體單元的共聚物，和(b) 交聯(lián)的明膠，其中所述微球在屮NMR譜中顯示出約3. 5ppm至約4ppm的第一個峰、約3ppm 至約3. 5ppm的第二個峰和約Ippm至約1. 5ppm的第三個峰；并且其中(i)第二個峰與第一個峰的積分比為約0. 50至約0. 65，(ii)第三個峰與第一個峰的積分比為約0. 55至約 0.75(例如，約0.61至約0.75)，或(iii) (i)和(ii)的組合。在另一個實(shí)施方案中，所述微球包含(a)通過共聚N-三羥甲基甲基丙烯酰胺單體、二乙基氨基乙基丙烯酰胺單體和 N，N-亞甲基-二丙烯酰胺單體制備的共聚物，和(b)交聯(lián)的明膠；其中所述微球在屮NMR 譜中顯示出約3. 5ppm至約4ppm的第一個峰、約3ppm至約3. 5ppm的第二個峰和約Ippm至約1. 5ppm的第三個峰；并且其中(i)第二個峰與第一個峰的積分比為約0. 50至約0. 65， (ii)第三個峰與第一個峰的積分比為約0. 55至約0. 75 (例如，約0. 61至約0. 75)，或(iii) (i)和(ii)的組合。在某些實(shí)施方案中，第一個峰在約3.77ppm，第二個峰在約3.2ppm，第三個峰在約1.3ppm，或其組合。在其它的實(shí)施方案中，第二個峰與第一個峰的積分比為約 0. 574，或者其中第三個峰與第一個峰的積分比為約0. 625。在某些實(shí)施方案中，當(dāng)記錄1H NMR譜(例如，在400MHz)時，所述微球在25°C下和/或在氘代溶劑中。在一些實(shí)施方案中，一個或多個所述單體(或單體單元)是超純的單體(或單體單元)。在某些實(shí)施方案中，所述N-三羥甲基甲基丙烯酰胺單體、二乙基氨基乙基丙烯酰胺單體和/或N，N-亞甲基二 -丙烯酰胺單體各自是超純的單體。在具體的實(shí)施方案中，所述N-三羥甲基甲基丙烯酰胺單體包含少于9%的雜質(zhì)，和/或所述二乙基氨基乙基丙烯酰胺單體包含少于2%的雜質(zhì)(例如，如通過HPLC(參見，例如實(shí)施例2和5)或溴化試驗(yàn)(參見，例如實(shí)施例3和6)測定)。在某些實(shí)施方案中，所述N-三羥甲基甲基丙烯酰胺單體、二乙基氨基乙基丙烯酰胺單體和N，N-亞甲基二-丙烯酰胺單體各自是超純的單體。在一個實(shí)施方案中所述N-三羥甲基甲基丙烯酰胺單體是超純的單體，而所述二乙基氨基乙基丙烯酰胺單體和N，N-亞甲基二-丙烯酰胺單體不是超純的單體。在另一個實(shí)施方案中，所述 N-三羥甲基甲基丙烯酰胺單體和所述二乙基氨基乙基丙烯酰胺單體各自是超純的單體，而所述N，N-亞甲基二-丙烯酰胺單體不是超純的單體。在某些實(shí)施方案中，所述N-三羥甲基甲基丙烯酰胺單體和所述N，N-亞甲基二-丙烯酰胺單體各自是超純的單體，而所述二乙基氨基乙基丙烯酰胺單體不是超純的單體。在一個實(shí)施方案中，所述二乙基氨基乙基丙烯酰胺單體是超純的單體，而所述N-三羥甲基甲基丙烯酰胺單體和所述N，N-亞甲基二丙烯酰胺單體不是超純的單體。在另一個實(shí)施方案中，所述二乙基氨基乙基丙烯酰胺單體和所述 N，N-亞甲基二-丙烯酰胺單體各自是超純的單體，而所述N-三羥甲基甲基丙烯酰胺不是超純的單體。在一個實(shí)施方案中，所述N，N-亞甲基二-丙烯酰胺單體是超純的單體，而所述 N-三羥甲基甲基丙烯酰胺單體和所述二乙基氨基乙基丙烯酰胺單體不是超純的單體。在另一個實(shí)施方案中，所述二乙基氨基乙基丙烯酰胺單體是超純的單體，當(dāng)所述N-三羥甲基甲基丙烯酰胺單體不是。在仍然另一個實(shí)施方案中，所述N-三羥甲基甲基丙烯酰胺和二乙基氨基乙基丙烯酰胺單體都是超純的單體。在進(jìn)一步的實(shí)施方案中，當(dāng)認(rèn)為必需時，可以通過引入例如但不限于烴鏈和/或親水性電離化學(xué)基團(tuán)改變這些單體的疏水性或離子特性，所述化學(xué)基團(tuán)可以例如用于促進(jìn)微球的藥物-負(fù)載特性(例如，共聚物和藥物之間的離子相互作用)。例如，在某些實(shí)施方案中，修飾所述單體或聚合物以增加酸性官能團(tuán)(例如，向單體混合物加成丙烯酸鈉或乙烯磺酸鈉)，其可以例如與給定藥物(例如，多柔比星或其它蒽環(huán)類)的胺官能團(tuán)相互作用。在一個具體的實(shí)施方案中，所述單體是用磺酸酯基團(tuán)修飾的。 在某些實(shí)施方案中，所述單體的含水量為約5%至約0%，例如小于等于約5%、小于等于約 4%、小于等于約3%、小于等于約2%或小于等于約1%。含水量可以使用本領(lǐng)域已知的方法例如NMR分析來測定。在一些實(shí)施方案中，所述明膠是交聯(lián)的，例如交聯(lián)到所述微球的共聚物或在其之內(nèi)。在其它的實(shí)施方案中，所述明膠不是交聯(lián)的。如本文使用的明膠可以來自任何來源。示例性的來源包括，但不限于從牛、豬和馬的骨、結(jié)締組織、器官和一些腸提取的膠原。在一個具體的實(shí)施方案中，所述明膠是豬明膠。在具體的實(shí)施方案中，所述明膠是藥物和/或食品級明膠，其可以從市售供應(yīng)商例如PB Leiner (Vilvoorde, Belgium)獲得。在第二個方面，本發(fā)明提供了微球，其是通過包括如下步驟的方法制備的(a)制備包含(i)N-三羥甲基甲基丙烯酰胺單體，(ii) 二乙基氨基乙基丙烯酰胺單體，(iii)N， N-亞甲基二-丙烯酰胺單體，和(iv)明膠的水溶液，其中所述N-三羥甲基甲基丙烯酰胺單體、二乙基氨基乙基丙烯酰胺單體和/或N，N-亞甲基二-丙烯酰胺單體是超純的單體；(b) 將該水溶液加入到具有低水混容性的液體有機(jī)相(例如油，例如礦物油，例如石蠟油)中； 從而得到包含下述共聚物的微球，該共聚物含有N-三羥甲基甲基丙烯酰胺、二乙基氨基乙基丙烯酰胺和N，N-亞甲基二 -丙烯酰胺單體單元；(c)任選地超聲處理該微球(例如，超聲粉碎)；和(d)交聯(lián)明膠。該方法的實(shí)施方案描述在下述部分C中。本發(fā)明提供的微球可以具有任何形狀。在具體的實(shí)施方案中，這些微球的形狀是基本上球形的。在某些實(shí)施方案中，所述微球是均勻的形狀。在某些實(shí)施方案中，將提供的微球調(diào)整至某一大小范圍。這樣的調(diào)整可以使用本領(lǐng)域已知的方法獲得，所述方法例如使用合適大小篩孔的進(jìn)行一輪或多輪過篩。在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供的微球的直徑為約1 μ m至2000 μ m，例如約10 μ m 至 1000 μ m、約 40 μ m 至約 120 μ m、約 100 μ m 至約 300 μ m、約 300 μ m 至約 500 μ m、約 500 μ m 至約700 μ m、約700 μ m至約900 μ m或約900 μ m至約1200微米。這些直徑可以使得通過多種途徑經(jīng)由導(dǎo)管、針(例如18標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格或更小的針)、管等將所述微球遞送到靶血管、組織或器官，所述途徑包括血管、導(dǎo)管內(nèi)、經(jīng)食道、表皮下、皮下、粘膜下、經(jīng)支氣管或間質(zhì)。在某些實(shí)施方案中，所述微球可以經(jīng)由巨噬細(xì)胞或免疫系統(tǒng)或淋巴系統(tǒng)的其它成分消除。在某些實(shí)施方案中，所述微球具有均勻的大小。在某些實(shí)施方案中，所述微球具有均勻的大小，其中個體微球之間的直徑差異為約O μ m至約100 μ m、約0 μ m至約50 μ m、或約0 μ m至約25 μ m,例如100 μ m以下、約50 μ m以下、約25mm以下、約IOmm以下、或約5 μ m 以下。在某些實(shí)施方案中，所述微球以如下群體存在，其中超過68%具有的直徑為平均直徑的士20%、平均直徑的士 10%、平均直徑的士 15%、平均直徑的士 10%、平均直徑的士9%、平均直徑的士8%、平均直徑的士7%、平均直徑的士6%、平均直徑的士5%、平均直徑的士4%、平均直徑的士 3%、平均直徑的士 2%或平均直徑的士 1%、或其任何范圍。 在一個實(shí)施方案中，所述微球以如下群體存在，其中超過70%具有的直徑為平均直徑的士20%、平均直徑的士 10%、平均直徑的士 15%、平均直徑的士 10%、平均直徑的士9%、 平均直徑的士8%、平均直徑的士7%、平均直徑的士6%、平均直徑的士5%、平均直徑的士4%、平均直徑的士 3%、平均直徑的士 2%或平均直徑的士 1%、或其任何范圍。在一個實(shí)施方案中，所述微球以如下群體存在，其中超過75%具有的直徑為平均直徑的士20%、 平均直徑的士 10%、平均直徑的士 15%、平均直徑的士 10%、平均直徑的士9%、平均直徑的士8%、平均直徑的士7%、平均直徑的士6%、平均直徑的士5%、平均直徑的士4%、平均直徑的士3%、平均直徑的士2%或平均直徑的士 1%、或其任何范圍。在一個實(shí)施方案中，所述微球以如下群體存在，其中超過80%具有的直徑為平均直徑的士20%、平均直徑的士 10%、平均直徑的士 15%、平均直徑的士 10%、平均直徑的士9%、平均直徑的士8%、 平均直徑的士 、平均直徑的士6%、平均直徑的士 5%、平均直徑的士4%、平均直徑的士3%、平均直徑的士2%或平均直徑的士 1%、或其任何范圍。在一個實(shí)施方案中，所述微球以如下群體存在，其中超過85%具有的直徑為平均直徑的士20%、平均直徑的士 10%、 平均直徑的士 15%、平均直徑的士 10%、平均直徑的士9%、平均直徑的士8%、平均直徑的士7%、平均直徑的士6%、平均直徑的士5%、平均直徑的士4%、平均直徑的士3%、平均直徑的士2%或平均直徑的士 1%、或其任何范圍。在一個實(shí)施方案中，所述微球以如下群體存在，其中超過90%具有的直徑為平均直徑的士20%、平均直徑的士 10%、平均直徑的士 15%、平均直徑的士 10%、平均直徑的士9%、平均直徑的士8%、平均直徑的士7%、平均直徑的士6%、平均直徑的士5%、平均直徑的士4%、平均直徑的士3%、平均直徑的士2% 或平均直徑的士 1 %、或其任何范圍。在一個實(shí)施方案中，所述微球以如下群體存在，其中超過95%具有的直徑為平均直徑的士20%、平均直徑的士 10%、平均直徑的士 15%、平均直徑的士 10%、平均直徑的士9%、平均直徑的士8%、平均直徑的士7%、平均直徑的士6%、平均直徑的士 5%、平均直徑的士 4%、平均直徑的士 3%、平均直徑的士 2%或平均直徑的士 1%、或其任何范圍。在一些實(shí)施方案中，小于1%、小于0.9%、小于0.8%、小于0.7%、小于0.6%、小于0.5%、小于0.4%、小于0.3%或少于0.2%、小于0. 或0% (或其范圍)的微球群體在所述微球給定的擴(kuò)展范圍(例如，士50μπκ 士 100 μ m、士 150 μ m、士200 μ m、士250 μ m 或士300 μ m)之外。作為一個示例性的實(shí)例，如果調(diào)整后的微球群體的直徑為500 μ m至 700 μ m (范圍)，則擴(kuò)展范圍可以為例如士 100 μ m,例如其中99 %的微球具有的大小范圍為400 μ m到800 ym,l%的微球的大小范圍在擴(kuò)展范圍之外。在另一個示例性的實(shí)施方案中，所述范圍為500μπι至700μπι，標(biāo)準(zhǔn)范圍為600 μ m，其中80 %的群體具有標(biāo)準(zhǔn)范圍的士 100 μ m( SP，擴(kuò)展范圍500μπι至700μπι)、99%的群體具有標(biāo)準(zhǔn)范圍的士200 μ m(艮口， 擴(kuò)展范圍400 μ m至800 μ m)，0. 5 %至1 %的群體大于800 μ m,其余0 %至0. 5 %具有小于 400 μ m的群體(總共100% )。在某些實(shí)施方案中，所述標(biāo)準(zhǔn)范圍為約50μπι至2000μπι， 例如 80 μ m、100 μ m、200 μ m、300 μ m、400 μ m、500 μ m、600 μ m、700 μ m、800 μ m、900 μ m、 1000 μ m、1100 μ m、1150 μ m、1200 μ m、1300 μ m、1400 μm、1500 μm、1600 μm、1700 μm、 1800 μ m、1900 μ m、2000 μ m 或其任何范圍。所述微球在懸浮液中是穩(wěn)定的，其允許微球或其它固體基質(zhì)配制和貯存在懸浮液中，用不同的液體注射。更特別地，所述微球的親水性性質(zhì)允許將其置于懸浮液中，特別地， 其為無菌非致熱或無熱原可注射溶液的形式，而避免形成聚集體或粘附到貯存容器和植入裝置例如導(dǎo)管、注射器、針等的壁。本發(fā)明提供的微球可以被例如通過注射植入到身體的各個部位。用于本發(fā)明提供的組合物和方法的聚合材料對組織和細(xì)胞無毒，并且是生物相容的，即通常不會引起炎癥。 當(dāng)植入期望的部位時，所述微球可以保持其一般形狀和位置。本發(fā)明提供的微球是可壓縮的，在具體的實(shí)施方案中，其可以經(jīng)由18標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格或更小的針注射。在某些實(shí)施方案中，所述微球是經(jīng)由18標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格或更小的針可注射的，且不能被免疫系統(tǒng)或淋巴系統(tǒng)清除，或減少被消除。在某些實(shí)施方案中，用促進(jìn)細(xì)胞粘附的試劑涂布所述聚合物。在某些實(shí)施方案中，所述微球除了包含明膠或明膠替代物之外，還包含細(xì)胞粘附促進(jìn)劑?？梢允褂帽绢I(lǐng)域熟知的各種類型的細(xì)胞粘附促進(jìn)劑。在某些實(shí)施方案中，所述細(xì)胞粘附促進(jìn)劑選自膠原、明膠、羧甲基(CM)葡聚糖、DEAE葡聚糖、葡糖胺聚糖、纖連蛋白、 凝集素、聚陽離子(例如聚賴氨酸、殼聚糖)、任何其它天然的或合成的生物學(xué)細(xì)胞粘附試劑或其任意組合。在某些實(shí)施方案中，通過使粘合劑成網(wǎng)狀增加微球的穩(wěn)定性。在明膠的情況下，例如，幫助形成網(wǎng)狀的試劑可以選自在明膠胺上反應(yīng)的雙官能團(tuán)化學(xué)試劑(例如， 戊二醛、甲醛、乙二醛等)。在某些實(shí)施方案中，所述細(xì)胞粘附促進(jìn)劑在微球或其它固體基材中的存在量為沉降的微球的約0. lg/ml至lg/ml。在某些實(shí)施方案中，由于例如進(jìn)一步包含標(biāo)記試劑，所述微球在光下和在體內(nèi)是可見的。在某些實(shí)施方案中，所述微球可以在其合成之后進(jìn)行標(biāo)記。這可以通過例如接枝熒光標(biāo)記物衍生物(包括，例如異硫氰酸熒光素(FITC)、若丹明異硫氰酸鹽(RITC)等)來進(jìn)行。在某些實(shí)施方案中，可以通過用標(biāo)記物化學(xué)偶合所述單體獲得可檢測的單體，所述標(biāo)記物可以為使得所述微球能夠直接顯色的化學(xué)染料，例如Cikicron Blue或ftOcion Red HE-3B，磁共振成像試劑(鉺、釓或磁鐵礦)；造影劑，例如鋇或碘鹽，包括例如(丙烯酰氨基-3-丙酰胺基)-3-三碘-2，4，6-苯甲酸。在鋇或磁鐵礦鹽的情況下，其可以直接以粉末形式引入初始單體溶液中。在一些實(shí)施方案中，造影劑是不透射線的造影劑，例如非離子造影劑。在某些實(shí)施方案中，在注射到患者之前、期間和/或之后，將造影劑與所述微球混合。 在一個具體的實(shí)施方案中，向患者施用造影劑(例如，非離子造影劑)和本發(fā)明提供的微球的組合物?？梢酝ㄟ^親和層析中熟知的化學(xué)偶合方法將細(xì)胞粘附促進(jìn)劑或標(biāo)記試劑引入到微球上。該引入也可以通過擴(kuò)散到構(gòu)成微球的凝膠網(wǎng)絡(luò)之內(nèi)，然后通過沉淀或化學(xué)交聯(lián)將擴(kuò)散的分子俘獲在合適的位置來實(shí)現(xiàn)。在某些實(shí)施方案中，活細(xì)胞(例如干細(xì)胞)連接所述微球，在其中或其上與周圍組織連接形成細(xì)胞層，其可以增強(qiáng)珠粒的長期穩(wěn)定性。1. N-三羥甲基甲基丙烯酰胺單體N-三羥甲基甲基丙烯酰胺也可以被稱為三丙烯醛，N- [1,3- 二羥基-2-(羥甲基) 丙-2-基]丙-2-烯酰胺；TRIS-丙烯酰胺；N-[三(羥甲基)甲基]丙烯酰胺；N-丙烯醛基三(羥甲基)氨基甲烷；或N-丙烯?；?三(羥甲基)氨基甲烷。在某些實(shí)施方案中， N-三羥甲基甲基丙烯酰胺定義為具有CAS登記號13880-05-2，分子式C7H13NO4,分子量約 175. 2克/摩爾，結(jié)構(gòu)
權(quán)利要求
1.微球，其包含(a)共聚物，其包含N-三羥甲基甲基丙烯酰胺單體單元、二乙基氨基乙基丙烯酰胺單體單元和N，N-亞甲基-二丙烯酰胺單體單元，和(b)交聯(lián)的明膠，其中所述微球在1H NMR譜中顯示在約3. 5ppm至約4ppm的第一個峰、約3ppm至約 3. 5ppm的第二個峰和約Ippm至約1. 5ppm的第三個峰；并且其中(i)所述第二個峰與所述第一個峰的積分比為約0.50至約0. 65，(ii)所述第三個峰與所述第一個峰的積分比為約0.61至約0. 75，或(iii)⑴和( )的組合。
2.權(quán)利要求1的微球，其中所述第一個峰在約3.77ppm、所述第二個峰在約3. 2ppm、所述第三個峰在約1. 3ppm，或其組合。
3.權(quán)利要求1或2的微球，其中所述第二個峰與所述第一個峰的積分比為約0.574，或者其中所述第三個峰與所述第一個峰的積分比為約0. 625。
4.權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)的微球，其中當(dāng)記錄1HNMR譜時，所述微球在25°C下和/ 或在氘代溶劑中。
5.權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)的微球，其中在400MHz記錄1H匪R譜。
6.權(quán)利要求1至5中任一項(xiàng)的微球，其中所述N-三羥甲基甲基丙烯酰胺單體、二乙基氨基乙基丙烯酰胺單體和N，N-亞甲基二 -丙烯酰胺單體中的一種、兩種或三種是超純的單體單元。
7.權(quán)利要求1至6中任一項(xiàng)的微球，其中所述N-三羥甲基甲基丙烯酰胺單體單元包含小于9%的雜質(zhì)，和/或所述二乙基氨基乙基丙烯酰胺單體單元包含小于2%的雜質(zhì)。
8.權(quán)利要求1至7中任一項(xiàng)的微球，其中所述微球的直徑為約1μ m至約2000 μ m、約 40 μ m 120 μ m、@ 100 μ m 300 μ m、^ 300 μ m 500 μ m、^ 500 μ m 700 μ m、 ^ 700 μ m 900 μ m、g^J 900 μ m 1200 μ m。
9.一種制備微球的方法，其包括(a)制備包含下述成分的水溶液(i)N-三羥甲基甲基丙烯酰胺單體，( ) 二乙基氨基乙基丙烯酰胺單體，(iii)N，N-亞甲基二-丙烯酰胺單體，和(iv)明膠，其中所述N-三羥甲基甲基丙烯酰胺單體和/或所述二乙基氨基乙基丙烯酰胺單體是超純的單體；(b)在攪拌之前或攪拌同時，將所述水溶液加入到具有低水混容性的液體有機(jī)相中； 從而得到包含下述共聚物的微球，該共聚物含有N-三羥甲基甲基丙烯酰胺、二乙基氨基乙基丙烯酰胺和N，N-亞甲基二 -丙烯酰胺單體單元；(c)任選地對該微球進(jìn)行超聲粉碎；和(d)交聯(lián)明膠。
10.權(quán)利要求9的方法，其中經(jīng)由進(jìn)料環(huán)將所述水溶液加入到所述液體有機(jī)相中。
11.權(quán)利要求9或10的方法，其中所述N-三羥甲基甲基丙烯酰胺單體單元包含小于9%的雜質(zhì)，和/或所述二乙基氨基乙基丙烯酰胺單體單元包含小于2%的雜質(zhì)。
12.權(quán)利要求9至11中任一項(xiàng)的方法，其中所述微球是超純的微球。
13.權(quán)利要求12的方法，其中(i)所述超純的微球包小于等于約10%、小于等于約 9 %、小于等于約8 %、小于等于約7 %、小于等于約6 %、小于等于約5 %、小于等于約4%、小于等于約3%、小于等于約2%或小于等于約的雜質(zhì)，(ii)所述超純的微球包含大于等于90%、大于等于91%、大于等于92%、大于等于93%、大于等于94%、大于等于95%、大于等于96%、大于等于97%、大于等于98%或大于等于99%重量的N-三羥甲基甲基丙烯酰胺、二乙基氨基乙基丙烯酰胺、N，N-亞甲基二-丙烯酰胺和明膠，或(iii) (i)和(ii)的組合。
14.權(quán)利要求9至13中任一項(xiàng)的方法，其中所述超聲粉碎是在超聲波浴中進(jìn)行的。
15.權(quán)利要求9至14中任一項(xiàng)的方法，其中所述方法不包括過篩所述微球。
16.通過權(quán)利要求9至15中任一項(xiàng)的方法制備的微球。
17.權(quán)利要求16的微球，其中所述微球在1HNMR譜中顯示在約3. 5ppm至約4ppm的第一個峰、約3ppm至約3. 5ppm的第二個峰和約Ippm至約1. 5ppm的第三個峰；和其中(i.)所述第二個峰與所述第一個峰的積分比為約0. 50至約0. 65，(ii.)所述第三個峰與所述第一個峰的積分比為約0. 61至約0. 75，或(iii.)其組合。
18.權(quán)利要求16或17的方法，其中所述微球是大小均勻的。
19.權(quán)利要求16至18中任一項(xiàng)的微球，其中所述微球的直徑為約1μ m至約2000 μ m、 約 40 μ m 至約 120 μ m、約 100 μ m 至約 300 μ m、約 300 μ m 至約 500 μ m、約 500 μ m 至約 700 μ m、^J 700 μ m 900 μ m ^^ 900 μ m 1200 μ m。
20.權(quán)利要求16至19中任一項(xiàng)的微球，其中小于的微球是聚集的微球。
21.一種在個體中形成栓塞的方法，其包括向所述個體施用權(quán)利要求1至8或16至20 中任一項(xiàng)的微球。
22.—種控制或治療個體中血管生成依賴性疾病的方法，其包括向該個體施用權(quán)利要求1至8或16至20中任一項(xiàng)的微球。
23.權(quán)利要求22的方法，其中所述血管生成依賴性疾病是動靜脈畸形、子宮纖維瘤或良性前列腺肥大。
24.權(quán)利要求23的方法，其中所述血管生成依賴性疾病是癌癥或腫瘤。
25.權(quán)利要求M的方法，其中所述癌癥或腫瘤是肝癌或前列腺癌或腫瘤。
全文摘要
本發(fā)明提供了，例如微球，其包含明膠或明膠替代物和N-三羥甲基甲基丙烯酰胺單體單元、二乙基氨基乙基丙烯酰胺單體單元和N，N-亞甲基-二丙烯酰胺單體單元的共聚物。本發(fā)明還提供了制備微球的方法，所述微球包含明膠或明膠替代物和N-三羥甲基甲基丙烯酰胺單體單元、二乙基氨基乙基丙烯酰胺單體單元和N，N-亞甲基-二丙烯酰胺單體單元的共聚物。例如，本發(fā)明進(jìn)一步提供了包含所述微球的組合物及所述微球和組合物的使用方法。
文檔編號C08L33/24GK102232098SQ201180000296
公開日2011年11月2日 申請日期2011年1月26日 優(yōu)先權(quán)日2010年1月27日
發(fā)明者皮埃爾·馬里恩, 芭芭拉·德·吉奧阿尼斯, 菲力浦·雷博, 詹姆斯·克羅姆 申請人:生物領(lǐng)域醫(yī)療公司