醫(yī)學用途
【專利摘要】本發(fā)明提供了抑制或者防止Src家族激酶和雄激素受體或者雌二醇受體之間的相互作用的分子，所述的分子用于預防或者治療其中AR和/或ER的活性是受試者中的影響因素的非癌病癥，或者用于預防或者治療其中AR和/或ER的活性是希望保持生育能力的受試者中的影響因素的癌性病癥，或者用于預防或者治療其中AR和/或ER的活性是受試者中的影響因素的婦科病癥。優(yōu)選地，所述的分子包括以下結構或者由以下的結構所組成：Bj-[(Pro)n-Xr-His-Pro-His-Ala-Arg-Ile-Lys]m-Rp，或者Bj-[lys-ile-arg-ala-his-pro-his-xr-(pro)n]m-Rp，或者其衍生物或者片段，其中B是第一化學部分，j是0或1，n是從1-10的整數(shù)，X是任意的氨基酸，r是從0到2的整數(shù)，m是從1到3的整數(shù)，R是第二化學部分，p是0或者1，并且[lys-ile-arg-ala-his-pro-his-xr-(pro)n]是[(Pro)n-Xr-His-Pro-His-Ala-Arg-Ile-Lys]的逆反(retro-inverso)肽。
【專利說明】醫(yī)學用途
[0001]本發(fā)明涉及分子的醫(yī)學用途，并且尤其涉及分子在治療病癥中的用途，在所述的病癥中，雄激素受體(AR)和/或雌二醇受體(ER)的活性是影響因素。
[0002]在本說明書中列舉或者討論了明顯在先出版的文件，這不應該必然地被當作是承認該文件是本領域現(xiàn)狀的一部分或者是公知常識。
[0003]子宮內(nèi)膜異位癥是育齡婦女的常見病，其中來自子宮內(nèi)膜的細胞出現(xiàn)在子宮腔夕卜，最常見地在卵巢上并旺盛生長。在治療之后有發(fā)生慢性和復發(fā)過程的傾向，這導致令人衰弱的慢性盆腔痛和不育癥。其是由于腹痛和不育癥入院的主要原因，并且認為在5-10%的婦女中發(fā)生。
[0004]目前用于治療子宮內(nèi)膜異位癥的方法有多個缺點。
[0005]非甾體抗炎藥(NSAID)如布洛芬和萘普生治療由子宮內(nèi)膜異位癥所導致的炎癥以及緩解疼痛和不適感；然而其可能導致惡心、嘔吐和腹瀉。長期使用還可能導致腸胃刺激、腎臟損傷和心臟病發(fā)作和中風的風險提高，并且其可能降低阿司匹林在減少不利的心血管事件中的功效。當NSAID與基于喹諾酮的抗生素一起服用時，其可能引起癲癇。
[0006]撲熱息痛和可待因(單獨的或者與撲熱息痛一起)可以通過處方用于子宮內(nèi)膜異位癥的患者，但是經(jīng)?？赡軐е卤忝兀@可能加重癥狀。
[0007]從二十世紀五十年代末期以來，子宮內(nèi)膜異位癥癥狀的主要控制方式是復合口服避孕藥丸。盡管不能治愈，但是此藥丸一般被較好地耐受并且確實通過抑制月經(jīng)周期緩解了主要的疼痛癥狀。治療方案是多樣的，從通常用于避孕的三周服藥/ 一周停藥的周期到嚴重疾病情況下的四個月服藥/一周停藥的周期。常見的副作用包括不規(guī)律的陰道出血、液體潴留、腹脹、體重增加、貪食、惡心、頭痛、乳房觸痛和抑郁癥。顯著的缺點是避孕效果，并且因此避孕藥丸不適合希望保持生育能力的婦女。
[0008]合成黃體酮(progesterone)(例如孕酮(progestin)/孕激素)阻礙排卵，并且自從二十世紀五十年代中期以來已經(jīng)成功地用于治療子宮內(nèi)膜異位癥，例如，作為子宮內(nèi)避孕器(例如Mirena IUD)。然而，在具有顯著的避孕效果的同時，其他的副作用包括情緒改變、胃氣脹、不規(guī)則出血和體重增加。
[0009]已經(jīng)使用抗孕激素如合成的睪酮衍生物(例如Danzol和孕三烯酮)來通過降低天然的雌激素和黃體酮水平誘導類似絕經(jīng)期的狀態(tài)；然而其可能誘導體重增加、痤瘡、毛發(fā)生長和嗓音低沉。
[0010]促性腺素釋放激素(GnRH)類似物(例如戈舍瑞林、那法瑞林、亮丙瑞林/柳普林(Ieupron)和曲普瑞林)也通過阻斷雌激素產(chǎn)生來誘導人工的絕經(jīng)狀態(tài)。然而，常見的副作用包括潮熱、陰道干燥和性欲低下。長期使用，例如長于六個月，與導致骨質(zhì)疏松癥的骨質(zhì)流失相關聯(lián)。
[0011]最近，已經(jīng)開發(fā)了阻斷睪酮向雌激素轉(zhuǎn)化的芳香化酶(aramatase)抑制劑(例如來曲唑和阿那曲唑)與GnRH拮抗劑的聯(lián)合用途，所述的GnRH拮抗劑是預防卵巢過度刺激和預防絕經(jīng)前婦女的卵巢囊腫的發(fā)展所必須的。然而，需要鈣、維生素D和磷酸氫鹽來緩解與延長的治療相關的骨質(zhì)流失。
[0012]可以采用三大類的外科手術來治療子宮內(nèi)膜異位癥。首先，可以使用微創(chuàng)腹腔鏡法，其中熱、激光或者電清除將損傷去除，這經(jīng)常在診斷過程中進行。腹腔鏡檢查的一般時間可以超過八年，并且由于損傷去除不完全和/或無法確定隱藏的損傷，癥狀頻繁地復發(fā)。其次，可以進行開腹手術來進入腹腔；然而這是一種具有關聯(lián)風險和長住院時間的大手術。第三也就是最終的選擇是子宮切除，但是即使如此這也無法治愈并且損傷可能復發(fā)，尤其是在如果留下卵巢的情況下。
[0013]Ng0等人(J Pathol2010 ；222:148-157)討論了在體外和體內(nèi)控制子宮內(nèi)膜異位癥的進展，并且將ERK途徑確定為治療子宮內(nèi)膜異位癥的新靶點的潛在可能。然而，該作者強調(diào)，需要進一步的臨床研究來評估在人類中的效果和耐受性，并且沒有提到保持生育能力有關的內(nèi)容。
[0014]因此，仍然需要按照保持生育能力的方式，優(yōu)選地比前文所述受更少的缺點影響的方式來治療其中AR和/或ER的活性作為影響因素的子宮內(nèi)膜異位癥和/或其他病癥。
[0015]意外地以及出人意料地，本發(fā)明人目前證明了降低酪氨酸激酶Src和AR或者ER之間的相互作用能夠使子宮內(nèi)膜異位癥患者癥狀減輕并且同時沒有避孕效果。
[0016]AR和ER兩者都已知和酪氨酸激酶Src以及可能的其他Src家族激酶相互作用。AR 受體結合到 Src 的 SH3 結構域(Migliacc1 等人(0ncogene2007, 26:6619))。SH3結構域有50-70個氨基酸長，并且經(jīng)常在真核細胞信號轉(zhuǎn)導和細胞骨架蛋白中起到重要作用。該結構域結合富含脯氨酸的肽，從而在激酶活性調(diào)節(jié)以及定位和底物識別中扮演主要的角色。ER受體結合到Src的SH2結構域(Migliacc1等人(CancerResearch2005, 65 (22): 10585-93))。SH2結構域一般是約100個氨基酸長，并且一般地結合到靶蛋白中的更長肽基序環(huán)境下的磷酸化的酪氨酸殘基。
[0017]不希望被任何理論所約束，本發(fā)明人相信通過降低Src家族激酶和AR或ER之間的相互作用，由留類激素進行的信號轉(zhuǎn)導的非基因組調(diào)節(jié)可以被選擇性的抑制(例如，Src家族激酶的信號轉(zhuǎn)導的活化、細胞周期蛋白Dl的表達和DNA的合成)，然而與此同時由甾類激素進行的信號轉(zhuǎn)導的基因組調(diào)節(jié)被保留。以這種方式，避免了與傳統(tǒng)留類激素的阻斷或者消除(其消除基因組和非基因組影響兩者)相關聯(lián)的許多副作用，并且治療可以更好地保持。此外，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，降低Src家族激酶和AR或者ER之間的相互作用出人意料地沒有避孕的效果。這和現(xiàn)有的治療有鮮明的對比。生育能力的保留代表了子宮內(nèi)膜異位癥治療中的顯著進步，這是由于現(xiàn)在必須暫停使用抗雄激素和/或抗雌激素的治療才使得能夠懷孕，而所述的暫?？梢詫е录膊〉膹桶l(fā)。因此，本發(fā)明人相信以此相互作用為靶向在對抗子宮內(nèi)膜異位癥和/或其他的病癥是有用的，在子宮內(nèi)膜異位癥和/或其他的病癥中AR和/或ER的活性起作用。
[0018]因此，本發(fā)明的第一方面提供了抑制或者防止Src家族激酶和AR或者ER之間的相互作用的分子，所述的分子用于預防或者治療其中AR和/或ER的活性是受試者中的影響因素的非癌病癥，或者用于預防或者治療其中AR和/或ER的活性是希望保持生育能力的受試者中的影響因素的癌性病癥，或者用于預防或者治療其中AR和/或ER的活性是受試者中的影響因素的婦科病癥。
[0019]類似地，本發(fā)明提供了抑制或者防止Src家族激酶和AR或者ER之間的相互作用的分子在制造藥物中的用途，所述的藥物用于預防或者治療其中AR和/或ER的活性是受試者中的影響因素的非癌病癥，或者用于預防或者治療其中AR和/或ER的活性是希望保持生育能力的受試者中的影響因素的癌性病癥，或者用于預防或者治療其中AR和/或ER的活性是受試者中的影響因素的婦科病癥。
[0020]類似地，本發(fā)明提供了方法，所述的方法用于預防或者治療其中AR和/或ER的活性是受試者中的影響因素的非癌病癥，或者用于預防或者治療其中AR和/或ER的活性是希望保持生育能力的受試者中的影響因素的癌性病癥，或者用于預防或者治療其中AR和/或ER的活性是受試者中的影響因素的婦科病癥；所述的方法包括向需要其的受試者給予有效量的抑制或者防止Src家族激酶和AR或者ER之間的相互作用的分子。
[0021]對于“預防或者治療”其中AR和/或ER的活性是影響因素的病癥，我們包括的意思是本發(fā)明可以用于緩解失調(diào)的癥狀(即緩和用途)或者治療失調(diào)(例如通過抑制或者消除致病物)，或者預防失調(diào)(即預防用途一預防癥狀惡化或者進展，或者減少失調(diào)的進展)。
[0022]優(yōu)選地，預防或者治療其中AR和/或ER的活性是哺乳動物受試者如人中的影響因素的病癥。供選擇地，所述的受試者可以是動物，例如為飼養(yǎng)的動物(例如狗或者貓)、實驗室動物(例如實驗室嚙齒動物、小鼠、大鼠或者兔子)或者在農(nóng)業(yè)中重要的動物(即家畜)，例如牛、綿羊、馬或者山羊。所述的受試者可以是雌性的或者雄性的。
[0023]我們認為Src家族激酶包括Src家族的任意激酶。例如，所述的激酶可以是選自以下的任意非酪氨酸激酶:Src、Yes、Fyn和Fgr (即SrcA亞家族的激酶)、Lck、Hck、Blk和Lyn (即 SrcB 亞家族的激酶)和 Frk (Amanchy 等人,Proteome Res2008, 7 (8): 3447)。最優(yōu)選地，所述的Src家族激酶是Src激酶。
[0024]我們認為Src家族激酶包括人Src家族激酶如人Src激酶的含義，我們認為雄激素受體(AR)包括人AR的含義，我們認為雌二醇受體(ER)包括人ER的含義，在以下的文獻中提供以上所有的序列:Migliacc1等人(CancerResearch2005, 65 (22): 10585-93), Migliacc1 等人(0ncogene2007, 26:6619)，Venter 等人(Science2001, 291(5507):1304-51)和 W02008/113770。應當理解的是，基因和 mRNA 序列有天然的可變性，并且該可變性包括在本文描述的各Src家族激酶(例如Src激酶)、AR和ER的含義中。
[0025]人Src家族激酶(例如Src激酶)、AR和/或ER的變體也包括在內(nèi)，只要其具有親本Src家族激酶(例如Src激酶)、AR或ER的一種或多種活性。換言之，所述的變體是功能性變體。例如，所述的變體可以與對應的人的序列具有至少60%的序列同源性，例如至少65 %、70 %、75 %、80 %和85 %的序列同源性和更優(yōu)選地90 %、95 %或者99 %的序列同源性。變體包括插入、刪除和取代，其可以是保守的或者非保守的。“保守取代”意圖表示組合如 Gly、Ala ;Val、lie、Leu ;Asp、Glu ;Asn、Gln ;Ser、Thr ；Lys> Arg ;和 Phe、Tyr。
[0026]我們還認為Src家族激酶(例如Src激酶)、AR和ER各自還包括人Src家族激酶(例如Src激酶)、AR和ER的直系同源物。Src家族激酶、AR和ER的適合的同源物的例子包括來自小鼠和大鼠的那些。其他的直系同源物包括來自圖3所列出的物種的那些。應當理解的是，編碼各個人Src家族激酶、AR和ER的直系同源物的基因和mRNA序列有天然的可變性，并且該可變性包括在本文定義的同源Src家族激酶、AR和ER的含義中。
[0027]在一個實施方案中，所述的分子是抑制或者防止Src家族激酶(如Src激酶)的SH3結構域和雄激素受體之間的相互作用的分子。Migliacc1等人(0ncogene2007, 26:6619)中提供了此相互作用的細節(jié)。
[0028]我們認為Src家族激酶的“SH3結構域”包括了 Src家族激酶(如Src激酶)的N末端Src同源物-3結構域。SH3結構域一般為50-70個氨基酸長并且結合富含脯氨酸的肽。Migliacc1等人(EMBO J2000, 19:5406-5417)的工作證實了 Src激酶的SH3結構域在Src激酶與AR之間的相互作用中的重要性。
[0029]在另一個實施方案中，所述的分子是抑制或者防止Src家族激酶(例如Src激酶)的SH2結構域和雌二醇受體之間的相互作用的分子。在Migliacc1等人(CancerResearch2005, 65 (22): 10585-93)中提供了此相互作用的細節(jié)。
[0030]我們認為Src家族激酶的“SH2結構域”包括了 Src家族激酶(例如Src激酶)的Src同源物-2結構域的含義。SH2結構域一般地為約100個氨基酸長，并且一般地結合到磷酸化的酪氨酸殘基。
[0031]關于所治療的哺乳動物受試者，應當理解的是所述的分子是能夠抑制或者防止該哺乳動物物種的Src家族激酶(例如Src激酶)和雄激素或者雌二醇受體之間的相互作用的分子。例如，當所述的哺乳動物受試者是人類時，所述的分子能夠抑制或者防止人Src家族激酶(例如Src激酶)和人AR或者人ER之間的相互作用，等等。
[0032]我們認為防止或者抑制Src家族激酶和AR或者ER之間的相互作用的分子首先包括阻止相互作用的形成，以及當相互作用已經(jīng)形成后使其減少的含義。優(yōu)選地，所述的分子阻止相互作用或者將其減少到不可檢測的水平。
[0033]在優(yōu)選的實施方案中，所述的分子選擇性地防止或者抑制Src家族激酶(例如Src激酶)和AR或ER之間的相互作用。例如，優(yōu)選地，所述的分子對Src家族激酶和AR或ER之間的相互作用的防止或者抑制與對Src家族激酶和任意其他分子之間的相互作用的防止相比達到更大的程度(例如至少5倍、10倍、20倍、50倍、100倍或者1000倍)。類似地，優(yōu)選地，所述的分子對AR或ER和Src家族激酶之間的相互作用的防止或者抑制與對AR或ER和任意其他分子之間的相互作用的防止相比達到更大的程度(例如至少5倍、10倍、20倍、50倍、100倍或者1000倍)。
[0034]在具體的分子的存在或者不存在下，通過評價Src家族激酶和AR或者ER之間的相互作用來方便地確定所述的分子是否防止或者抑制Src家族激酶和AR或ER之間的相互作用。如前文所提到的，相信Src激酶的SH3結構域介導Src激酶和AR之間的相互作用，因此Src家族激酶(例如Src激酶)的SH3結構域和AR之間的相互作用可以在具體分子的存在或者不存在下進行評價。類似地，相信Src激酶的SH2結構域介導Src激酶和ER之間的相互作用，因此Src家族激酶(例如Src激酶)的SH2結構域和ER之間的相互作用可以在具體分子的存在或者不存在下進行評價。用于評估兩種蛋白質(zhì)之間的相互作用的方法在本領域是熟知的，并且任意的適合方法都可以使用。實例包括酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)，表面等離子體共振分析、競爭分析、基于芯片的分析、免疫細胞熒光染色、酵母雙雜交技術和噬菌體展示，其全部都是在本領域中常用的操作，并且描述在，例如Plant等人(1995) AnalytB1chem, 226(2)，342-348 和 Sambrook 等人(2001)Molecular Cloning A LaboratoryManual.Third Edit1n.Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NewYork中。評估蛋白質(zhì)相互作用的其他方法包括具有離子噴霧質(zhì)譜/HPLC方法的超濾或者其他的物理和分析方法?？梢允褂脽晒夤舱衲芰哭D(zhuǎn)移(FRET)方法，例如，對于本領域技術人員是熟知的，其中可以通過測量熒光標記彼此接近時的相互作用來測量兩個熒光標記的實體的結合。在尤其優(yōu)選的實施方案中，使用了免疫沉淀檢測如描述在Migliacc1等人(0ncogene2007, 26:6619)中的來評估Src家族激酶(例如Src激酶)的SH3結構域和AR之間的相互作用和/或Src家族激酶(例如Src激酶)的SH2結構域和ER之間的相互作用。
[0035]在優(yōu)選的實施方案中，所述的分子是包括以下結構或者由以下結構所組成的分子:Bj- [ (Pro) n-Xr-Hi s-Pro-Hi s-Al a-Arg-1 I e-Lys] m-Rp,或者 Bj-[lys-1le-arg-ala-his-pro-his-xr- (pro) n] m-Rp,或者其衍生物或者片段，
[0036]其中B是第一化學部分，j是O或1，η是從1_10的整數(shù)，X是任意的氨基酸，r是從O到2的整數(shù)，m是從I到3的整數(shù)，R是第二化學部分，P是O或者1，并且[lys-1le-arg-ala-hi s-pro-hi s-xr-(pro) n]是[(Pro) n-Xr-Hi s-Pro-Hi s-Al a-Arg-1 I e-Lys]的逆反月太(retro-1nverso peptide)。
[0037]應當理解的是,包括結構B」-[(Pro)n-Xr-His-Pro-His-Ala-Arg-1le-Lys]m-Rp或者Bj-[lys-1le-arg-ala-his-pro-his-xr- (pro) Jm-Rp,或者由所述的結構所組成的分子一般具有妝部分[(Pro)n-Xr-His-Pro-His-Ala-Arg-1le-Lys]m 或者[lys-1le-arg-ala-his-pr0-his-\-(pix))n]m，并且任選地在一個或者兩個末端(即1和&)具有另外的化學部分。換言之，j = O并且P = O ;或者j = I并且P = O ;或者j = O并且P = I ;或者j = I并且P = 1在一個實施方案中，j = O并且P = O,使得所述的分子是具有結構[(Pro)n-X1^-His-Pro-His-Ala-Arg-1le-Lyslm 或者[lys-1Ie-arg-ala-his-pro-his-xr- (pro)n]m 的月太。
[0038]B和R可以獨立地是任意的化學部分，例如脂質(zhì)(例如糖脂、磷脂、鞘脂)、脂肪酸、甘油三酸酯、甘油、異戊二烯基或者異平基部分(例如法呢基或者香葉基香葉基部分)、碳水化合物(例如單糖或者多糖)、氨基酸、肽、多肽或者核酸、或者其組合中的任一種。因此，所述的部分可以是糖肽或者脂肽。所述的部分可以是低分子量或者高分子量的聚乙二醇，如具有200-70000的分子量。技術人員可以確定任何的其他適合的部分。
[0039]在一個實施方案中，B是H，或者乙?；鶊F，或者具有游離的或者乙?；苌腘H2基團的一個氨基酸或者氨基酸序列中的任一個。
[0040]在另外的實施方案中，R是OH基團，或者NH2基團，或者具有C-末端的羧基-酰胺基基團的一個氨基酸或者氨基酸序列中的任一個。
[0041]化學部分B和R可以任選地連接到分子的肽部分，使得當所述的分子給予到受試者時其可以從所述的肽部分切除。例如，部分B和R中任一個可以包括切割位點，所述切割位點當分子被給予到身體時可以被切割。一般地，所述切割位點是蛋白酶切割位點，其可以被受試者中存在的蛋白酶切割。
[0042]化學部分B和/或R可以按照本領域已知的任何適合方法連接到肽部分。例如，部分B和/或R可以按照任意的交聯(lián)多肽的傳統(tǒng)方式來連接到肽部分，例如一般地描述于O’ Sullivan等人Anal.B1chem.(1979) 100, 100-108中的那些。例如，第一部分可以富含巰基基團并且第二部分與能與那些巰基基團反應的雙官能試劑反應，所述的雙官能試劑例如為碘乙酸的N-羥基琥珀酰亞胺酯(NHIA)或者N-琥珀酰亞胺基-3-(2-吡啶基二硫)丙酸酯(STOP)，其是在共軛部分之間插入二硫鍵橋的異源雙功能交聯(lián)試劑。酰胺鍵和硫醚鍵，例如從間-馬來酰亞胺苯甲酰-N-羥基琥珀酰亞胺酯形成的，在體內(nèi)一般地比二硫鍵更為穩(wěn)定。
[0043]其他有用的交聯(lián)試劑包括S-乙?；鶐€基乙酸N-羥基琥珀酰亞胺酯(SATA)、辛二亞氨酸二甲酯二鹽酸鹽和N，N’-鄰亞苯基二馬來酰亞胺，所述的S-乙?；鶐€基乙酸N-羥基琥珀酰亞胺酯(SATA)是用于伯胺的巰基化試劑，能夠在溫和的條件下使巰基脫保護(Julian 等人(1983) Anal.B1chem.132, 68)。
[0044]將化學部分B和/或R連接到肽部分的另外方法包括化學連接方案，使用點擊化學偶聯(lián)的方案，或者通過使用Staudinger連接偶聯(lián)的方案，這是本領域內(nèi)所熟知的。其他適用的方法可以由本領域技術人員來確定。
[0045]當化學部分B和/或R是肽或者多肽時，認識到的是，所述的分子的肽部分和化學部分B和/或R可以是融合多肽的部分，所述的融合多肽可以由核酸分子編碼。例如，可以使用本領域內(nèi)成熟的基因工程技術對化學部分B和/或R進行基因工程改造來包含所述分子的肽部分。
[0046]便利地，所述的分子的肽部分[(PrcOn-X^His-Pro-His-Ala-Arg-1le-Lysilm或者[lys-1le-arg-ala-his-pro-his-xr-(pro) Jm的長度少于57個氨基酸殘基,例如長度少于55、50、45、40、35、30、25、20或者15個氨基酸。因此，所述的肽部分可以具有8到60個氨基酸殘基的長度，或者10到15個氨基酸殘基的長度，或者15到20個氨基酸殘基的長度，或者20到25個氨基酸殘基的長度，或者25到30個氨基酸殘基的長度，或者30到35個氨基酸殘基的長度，或者35到40個氨基酸殘基的長度，或者40到45個氨基酸殘基的長度，或者45到50個氨基酸殘基的長度，或者50到55個氨基酸殘基的長度。優(yōu)選地，所述的肽部分的長度為 8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24 或者 25 個氨基酸，以及最優(yōu)選地，長度為10個氨基酸。
[0047]理解的是,包括結構Β」-[ (Pro) n-Xr_Hi s-Pro-Hi s-Ala-Arg-1 I e-Lys] m_Rp 或者 Bj-[lys-1 I e-arg-ala-hi s-pro-hi s-xr- (pro) Jm-Rp 或者由結構 Bj-[ (Pro)n-Xr-His-Pro-His-AIa-Arg-1le-Lys]m-Rp 或者 Bj-[lys-1le-arg-ala-his-pro-his-xr-(pro) Jm-Rp 所組成的分子片段可以使用，只要其能夠防止或者抑制Src家族激酶(例如Src激酶)與AR和/或ER之間的相互作用。因此，可能的是，所述的分子可以包含少于8個前文所述的氨基酸。一般地，所述的片段是分子的肽部分[(Pro)n-X廠His-Pro-His-Ala-Arg-1le-Lys]m或者[lys_ile-arg-ala-his-pro-his-xr- (pro) Jm的片段,并且其一般的長度是至少3個氨基酸,例如長度為至少4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14或者15個氨基酸。因此，所述的分子可以包括月太[(Pro) n-Xr-Hi s-Pro-Hi s-Al a-Arg-1 I e-Lys] m 5--- [lys-1 I e-arg-ala-hi s-pro-hi s-xr-(Pro)Jm 的片段或者由肽[(Pro)n-Xr-His-Pro-His-Ala-Arg-1le-Lys]m或者[lys-1le-arg-ala-his-pro-his-Xr_(pro)n]m的片段所組成,只要其能夠防止或者抑制Src家族激酶(例如Src激酶)與AR和/或ER之間的相互作用。
[0048]可以使用下文進一步描述的片段的衍生物或者鹽。例如，可以在片段的一個或者兩個末端添加封端部分來提高穩(wěn)定性。
[0049]適合的片段的實例可以選自:HPHARIK、HPHAR、PHPHAR、HPH、PHPH、PPHPH、PPPHPH、PHP、PPHP、PPPHP、PPPH、PPH和PPP。所述的片段的具體衍生物或者鹽可以選自:Ac-HPHARIK-NH2、Ac_HPHAR-NH2、Ac_PHPHAR-NH2、Ac-HPH_NH2、Ac-PHPH_NH2、Ac-PPHPH-NH2、Ac-PPPHPH-NH2、Ac-PHP—NH2、Ac-PPHP-NH2、Ac-PPPHP-NH2P、Ac-PPPH_NH2、Ac-PPH-NH2 和 Ac-PPP-NH2。
[0050]認識到的是，當部分B和/或R是肽時，整個的分子可以是肽，并且該肽的長度可以多于57個氨基酸。然而，如果整個的分子是肽，優(yōu)選地，其長度少于150個氨基酸，例如長度少于 140、130、120、110、100、90、80、70 或者 60 個氨基酸。
[0051]一般地說，所述的分子的分子量少于50kDa，例如少于40、30、20、10或者5kDa。一般地，所述的分子的分子量在1000到5000Da。因此，所述的分子的分子量可以是約4500、4000,3500,3000 或者 2500Da，或者分子量為 1000 到 2500Da。
[0052]在一個實施方案中，η是1、2、3、4、5、6、7、8、9或者10中任一個，并且最優(yōu)選地，η
=3。在另一個實施方案中是1、2或者3中任一個，以及最優(yōu)選地，m = I。因此,在尤其優(yōu)選的實施方案中，η是3以及m是I。
[0053]&代表了 I或2個氨基酸殘基的一段(stretch)，所述的氨基酸殘基可以獨立地是或者兩者都是任意的氨基酸殘基。因此，I所代表的氨基酸殘基可以是任意的由DNA編碼的天然存在的氨基酸殘基，其選自丙氨酸(Ala，A)、精氨酸(Arg，R)、天冬酰胺(Asn，N)、天冬氨酸(Asp，D)、半胱氨酸(Cys，C)、谷氨酰胺(Gln，Q)、谷氨酸(Glu，E)、甘氨酸(Gly，G)、組氨酸(His, H)、異亮氨酸(He, I)、亮氨酸(Leu, L)、賴氨酸(Lys, K)、甲硫氨酸(Met, Μ)、苯丙氨酸(Phe, F)、脯氨酸(Pro, P)、絲氨酸(Ser, S)、蘇氨酸(Thr, T)、色氨酸(Trp, W)、酪氨酸(Tyr，Y)和纈氨酸(Val，V)。然而，與肽部分由多核苷酸表達來形成不同，\所代表的氨基酸殘基可以包括一個或多個不由DNA編碼的氨基酸殘基，包括下文中所描述的那些。在一個實施方案中，r是O并且在供選擇的實施方案中r是I并且X是蘇氨酸殘基。
[0054]為了避免疑義,所述的分子不是AR或者ER。
[0055]不愿意受到任何理論的約束，本發(fā)明人相信肽PPPHPHARIK是人AR的部分，其介導與Src家族激酶的SH3結構域的相互作用。因此，在尤其優(yōu)選的實施方案中，所述的分子的月太部分[(Pro) n-Xr-Hi s-Pro-Hi s-Al a-Arg-1 I e-Lys] m 或者[lys-1le-arg-ala-his-pro-his-xr- (pro) n] m 是 PPPHPHARIK,或者其逆反肽 kirahphppp。
[0056]肽PPPHPHARIK與人AR的氨基酸殘基377-386等價，并且不愿意受到任何理論的約束，本發(fā)明人相信其他物種的AR的相應部分具有同樣的活性。我們認為“相應部分”包括了另一種AR的氨基酸殘基序列的含義，當將人的AR和其他的AR進行比較時，例如使用比對工具如MacVector或者CLUSTALW進行比較時，所述的氨基酸殘基序列與給定的人AR的氨基酸序列一致。因此，在另一個優(yōu)選的實施方案中，肽部分是對應于人AR的位置377-386的氨基酸序列(PPPHPHARIK)的肽。例如，在小鼠和大鼠AR中的對應肽是PPTHPHARIK，因此所述的肽部分可以是PPTHPHARIK或者其逆反肽kirahphtpp。在圖3中提供了一系列其他物種的對應肽，因此所述的肽部分可以是圖3中列出的任意肽或者其逆反肽。優(yōu)選地，將肽PPPHPHARIK給予到人類受試者，并且將肽PPTHPHARIK給予小鼠或者大鼠受試者，等等。
[0057]可以使用Clustal W程序(Thompson等人，1994)來比對兩種蛋白質(zhì)。所使用的參數(shù)可以是如下的:快速雙序列比對參數(shù):K-元組(字符)大?。?，窗口大小；5，空位罰分；3，頂部對角線的數(shù)量；5.得分方法:Χ百分比。多比對參數(shù):空位開放罰分；10，空位拓展罰分；0.05。得分矩陣=BLOSUM0
[0058]在尤其優(yōu)選的實施方案中，所述的分子包括肽PPPHPHARIK或者PPTHPHARIK，或者由所述肽組成。
[0059]前文中定義的分子的肽部分[(Pro)n-X廠His-Pro-His-Ala-Arg-1le-Lys]m或者[lys-1le-arg-ala-his-pro-his-xr- (pro) Jm或者其片段一般地使用蛋白質(zhì)化學技術來進行制備，例如使用部分蛋白水解(外切水解或者內(nèi)切水解)或者通過從頭合成。供選擇地，肽可以通過重組DNA技術來制備。用于克隆、操作、修飾和表達核酸和純化所表達的蛋白的技術在本領域中是熟知的，并且例如描述在:Sambrook等人(2001) “Molecular Cloning, aLaboratory Manual，，, 3rd edit1n, Sambrook等人(eds)，Cold Spring Harbor LaboratoryPress, Cold Spring Harbor, NY, USA。
[0060]前文中所定義的分子的肽部分[(Pro)n-X廠His-Pro-His-Ala-Arg-1le_Lys]m或者[lys-1le-arg-ala-his-pro-his-xr-(pro)n]m或者其片段也可以是化學合成的,例如通過Merrifield等人(1964)的固相肽合成。供選擇地，所述的肽部分可以使用標準溶液方法(參見，例如，Bodanszky, 1984和Dugas等人，1981)來合成。新合成的肽可以進行純化,例如通過高效液相色譜(HPLC)進行純化，以及可以例如使用質(zhì)譜或者氨基酸序列分析來進行表征。
[0061]應當意識到的是，其他的適合的分子可以包括任意的抗體，所述的抗體是針對Src家族激酶(例如Src激酶)或者AR和ER的，所述抗體能夠防止或者抑制Src家族激酶(例如Src激酶)和AR或者ER之間的相互作用。如前文所提到的，本發(fā)明人相信Src激酶的SH3結構域和AR的377-386氨基酸殘基介導了 Src激酶和AR之間的相互作用。因此，將理解的是抑制或者防止Src家族激酶(例如Src激酶)和AR或者ER之間的相互作用的適合的分子包括了針對Src家族激酶(例如Src激酶)的SH3結構域的抗體，或者在對應于人AR的377-386氨基酸的位置結合到AR的抗體(例如針對具有結構(Pro)n-Xr-Hi s-Pro-Hi s-Al a-Arg-1 I e-Lys的肽的抗體,其中η是I到10的整數(shù)，X是任意的氨基酸以及r是O到2的整數(shù)，例如針對PPPHPHARIK或者PPTHPHARIK的抗體)。類似地，相信Src激酶的SH2結構域介導Src激酶和ER之間的相互作用。因此，將理解的是抑制或防止Src家族激酶(例如Src激酶)和AR或者ER之間的相互作用的適合的分子包括了針對Src家族激酶(例如Src激酶)的SH2結構域的抗體。優(yōu)選地，所述的抗體如前文所討論地防止或者抑制Src家族激酶(例如Src激酶)和AR或者ER之間的相互作用。
[0062]如本文所使用的，術語“抗體”包括但不限于多克隆、單克隆、嵌合、單鏈、Fab片段和由Fab表達文庫所產(chǎn)生的片段。該片段可以包括保持了其對靶物質(zhì)的結合活性的完整抗體的片段、Fv、F(ab’)和F(ab’)2片段，以及單鏈抗體(ScFV)、融合蛋白和包含了抗體的抗原結合位點的其他合成蛋白。還包括的是結構域抗體(dAb)、雙抗體、駱駝抗體和改造的駱駝抗體。除此之外，為了給予到人類，所述的抗體或者其片段可以是人源化的抗體，其現(xiàn)在在本領域是熟知的(Janeway 等人(2001) Immunob1logy., 5th ed., Garland Publishing)。
[0063]前文所描述的結合到Src家族激酶(例如Src激酶)或AR和ER的特定區(qū)域的適合的抗體可以使用本領域內(nèi)長期以來建立的技術由本領域技術人員進行制備。制備單克隆抗體和抗體片段的方法在本領域是熟知的，并且包括雜交瘤技術(K0hler&MilStein(1975)“Continuous cultures of fused cells secreting antibody of predefined specificity.Nature256:495 - 497);抗體卩遼菌體展不(Winter 等人(1994) “Making antibodies byphage display technology.^Annu.Rev.Tmmunol.12:433 - 455);核糖體展不(Schaffitzel等人(1999) “Ribosome display:an in vitro method for select1n and evolut1nof antibodies from libraries.，，J.1mmunol.Methods231:119 - 135)和重復菌落過濾篩選(Iterative Colony Filter Screening) (G1vannoni 等人(2001) “Isolat1n ofanti—ang1genesis antibodies from a large combinatorial repertoire by colonyfilter screening.”Nucleic Acids Res.29:E27)。除此之外，適合用于本發(fā)明的抗體和抗體片段描述在例如以下的出版物中:“Monoclonal Hybridoma Antibodies:Techniquesand Applicat1n，，，Hurrell(CRC Press, 1982) ;“Monoclonal Antibodies: A Manual ofTechniques”，H.Zola, CRC Press, 1987, ISBN:0-84936-476-0 ;“Antibodies:A LaboratoryManual，，1st Edit1n, Harlow&Lane, Eds, Cold Spring Harbor Laboratory Press, NewYork, 1988.1SBN0-87969-314-2 ;“Using Antibodies: A Laboratory Manual2ndEdit1n, Harlow&Lane, Eds, Cold Spring Harbor Laboratory Press, New York,1999.1SBN0-87969-543-9 和“Handbook of Therapeutic Antibodies” Stefan Diibel, Ed., IstEdit1n, -ffiley-VCH, ffeinheim, 2007.1SBN:3-527-31453-9。
[0064]認識到的是，本發(fā)明的分子可以包括促進進入細胞的細胞滲透肽的序列(也稱作蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)導結構域)。如本領域所公知的，細胞滲透肽一般地是最多30個殘基的短肽，所述的細胞滲透肽具有凈正電荷并且按照不依賴于受體和不依賴于能量的方式起作用(Lindgren 等人，2000 ；Deshayes 等人，2005a and2005b ；Takeuchi 等人，2006,其與細胞滲透肽相關的全部公開內(nèi)容結合于本文作為參考)。因此，前文所提到的化學部分B和R可以是細胞滲透肽。如果是這樣的話，所述的細胞滲透肽優(yōu)選地是可以從負責抑制或者防止Src家族激酶(例如Src激酶)和AR或者ER之間的相互作用的分子部分切割的。例如，其可以是在細胞內(nèi)可切割的。
[0065]所述的分子還可以進行修飾，從而它可以更容易地被檢測，所述的修飾例如通過將其生物素化或者通過摻入任意的本領域已知的可檢測標記，例如放射性標記、熒光標記或者酶標記。
[0066]這里所述的分子的氨基酸殘基可以是“L”的異構形式。然而，“D”異構形式的殘基可以取代任意的L-氨基酸殘基，只要該分子仍然能夠抑制或者防止Src家族激酶(例如Src激酶)和AR或者ER之間的相互作用。除非另有具體指示，該定義包括化學修飾的氨基酸，包括氨基酸類似物(如青霉胺、3-巰基-D-纈氨酸)，天然存在的非成蛋白氨基酸(non-proteogenic amino acids)(例如正亮氨酸)和具有本領域內(nèi)已知的特性從而具有氨基酸的特征的化學合成的化合物。術語“成蛋白”表明該氨基酸可以通過熟知的代謝途徑摻入到細胞中的蛋白質(zhì)中。
[0067]因此，在一個實施方案中，前文所述的分子的肽部分是肽[(Pro)n-X^His-Pro-His-Ala-Arg-1le-LyS]m或者其片段(其優(yōu)選包括前文所定義的那些)的逆反肽。我們認為逆反肽(也稱作全D-逆或者逆對映肽)包括肽中所有的L-氨基酸都被D-氨基酸所替代并且肽鍵被反轉(zhuǎn)的肽的含義。因此，所述的肽由按照母體肽L-序列相反的順序組裝的D-氨基酸所組成。[(Pro) n-Xr-Hi s-Pro-Hi s-Al a-Arg-1 I e-Lys] m 的逆反妝是[lys-1le-arg-ala-his-pro-his-xrbro)n]m(其中小寫的字母表明是相對應的D-氨基酸)?？梢酝ㄟ^本領域內(nèi)已知的方法來合成逆反肽，所述的方法例如為Meziere等人(1997) J.1mmunol.1593230-3237中所描述的那些。該方法涉及到制備包含涉及骨架而非側(cè)鏈的取向的變化的假肽，所述假肽保持與母體肽非常相似。逆反肽對蛋白質(zhì)水解更具抗性。
[0068]為了避免出現(xiàn)疑問，前文中所標明的所有對\的優(yōu)選對其對應的D-氨基酸&也適用。
[0069]前文所描述的分子的肽部分可以是肽“模擬物”，即模擬肽，其模擬了包含前文所描述的氨基酸序列或者由前文所描述的氨基酸序列所組成的肽的結構特征。
[0070]可以通過標準的有機化學方法來設計和合成在本質(zhì)上不是肽的模擬肽。本質(zhì)上不是肽的模擬肽甚至可以是在治療用途中、在對降解的抗性中，在滲透性中和在可能的口服給藥中更有優(yōu)勢的。
[0071]模擬肽是可以通過模擬肽和蛋白質(zhì)的某些結構特征而結合到蛋白質(zhì)的小分子。其在科學和醫(yī)藥中被廣泛地用作細胞和其他受體的蛋白質(zhì)和肽配體的激動劑和拮抗劑，以及用作酶的底物和底物類似物。一些實例是嗎啡生物堿(天然存在的內(nèi)啡肽類似物)、盤尼西林(半合成的)和HIV蛋白酶抑制劑(合成的)。該化合物具有模擬肽或者蛋白質(zhì)的結構特征，并且因此被其他的蛋白質(zhì)所識別和結合。與模擬肽結合會誘導結合的蛋白發(fā)揮由該結合所引起的正常功能(激動劑)或者擾亂該功能(拮抗劑，抑制劑)。
[0072]設計肽模擬物的主要目標在于減少模擬物易被肽酶所切割或者滅活的性質(zhì)。在一個方法中，例如由Sherman等人(1990)所公開的，將一個或多個的酰胺鍵按照基本上等排的方式替代為多種化學官能團。這一按步驟的方法在獲得活性類似物方面取得了一些成功。在一些情況下，這些類似物顯示出比其天然存在的對應物具有更長的生物半衰期。在另一種方法中，已經(jīng)使用了多種非編碼的或者修飾的氨基酸如D-氨基酸和N-甲基氨基酸來修飾哺乳動物肽。供選擇地，已用共價修飾來穩(wěn)定假定具有生物活性的構型，例如環(huán)化或者通過摻入Y -內(nèi)酰胺或者其他類型的橋聯(lián)(Veber等人，1978)和(Thorsett等人，1983)。由Rich(1986)公開的另一種方法是通過使用酶抑制劑設計中的過渡態(tài)類似物原理來設計肽模擬物。例如，已知的是抑胃酶氨酸的仲醇模擬了胃蛋白酶底物的固著酰胺鍵(sessileamide bond)的四面體過渡態(tài)。
[0073]在US5552534中，公開了非肽化合物，所述的非肽化合物模擬或者抑制多種肽的化學和/或生物活性?？梢酝ㄟ^在某些核物質(zhì)上添加化學官能基團來產(chǎn)生該化合物，所述的核物質(zhì)例如為四氫吡喃環(huán)，所述的化學官能基團使得化合物至少部分地與肽交叉反應。用于制備模擬肽的其他技術公開在US5550251和US5288707中。
[0074]可以使用市售軟件包來設計小肽和/或模擬肽，優(yōu)選地不可水解的類似物，如特異性的拮抗劑/抑制劑。適用的市售的用于分析晶體結構、設計和優(yōu)化小肽和模擬肽的軟件包括但不限于:Macromolecular X-ray Crystallography QUANTA Environment (MolecularSimulat1ns, Inc.) ;TeXsan、B1teX 和 SQUASH(Molecular Structure Corporat1n);和Crystallographica(Oxford Cryostsystems)。
[0075]認識到的是，本文所描述的分子的鹽或者衍生物可以用于預防或者治療其中AR和/或ER是影響因素的病癥，只要所述的鹽或者衍生物能夠防止或者抑制Src家族激酶(例如Src激酶)和AR或者ER之間的相互作用。我們認為“衍生物”包括了具有一個或多個通過官能側(cè)基團的反應來化學衍生的殘基的肽(如肽部分[(Pr0)n-XfHis-Pr0-His-Ala-Arg-1le-Lys]m 是前文中的分子[lys_ile-arg-ala-his-pro-his_xr_ (pro)n]m)的含義。該衍生化的分子包括，例如，其中游離的氨基基團已被衍生化來形成胺鹽酸鹽、對甲苯磺酸基基團、芐氧羰基基團、叔丁氧羰基基團、氯乙酰基基團或甲?；鶊F的那些分子。可以將游離的羧基衍生化來形成鹽、甲酯和乙酯或者其他類型的酯或者酰肼?？梢詫⒂坞x的羥基衍生化，來形成O-?；蛘逴-烷基衍生物。還包括的衍生物是包含了一個或多個天然存在的二十個標準氨基酸的氨基酸衍生物的肽部分。例如，可以將脯氨酸取代成4-羥基脯氨酸；將賴氨酸取代成5-羥基賴氨酸；將組氨酸取代成3-甲基組氨酸；將絲氨酸取代成高絲氨酸；將賴氨酸取代成鳥氨酸。衍生不包括官能團中的變化，所述的變化將一個氨基酸變化成另一個。
[0076]一些有用的修飾被設計用于通過在血液中阻斷蛋白水解活性來提高穩(wěn)定性從而提高溶液中的分子(例如肽)的半衰期，所述的溶液具體地為生物流體，例如血、血漿或者血清。因此，肽可以在一個或兩個末端具有穩(wěn)定化基團。一般的穩(wěn)定化基團包括酰胺基、乙?；⑵S基、苯基、甲苯磺?；?、烷氧基羰基、烷基羰基、芐氧羰基等等末端基團修飾。另外的修飾包括在末端使用“D”氨基酸來代替“L”氨基酸，以及使用酰胺而不用氨基或者羧基末端，從而抑制外肽酶活性。因此，認識到的是，肽部分[(Pro)n-Xr-His-Pro-His-Ala-Arg-1le-Lys] m 是前文限定的分子[lys-1 le-arg-ala-hi s-pro-hi s-xr- (pro) n] m,其可以在一個或兩個末端具有封端部分，所述的部分優(yōu)選地是分子量小于200Da的部分。另外的封端部分包括萘基(naftyl)基團或者聚乙二醇基團。認識到的是，逆反肽已經(jīng)是相對穩(wěn)定的，并且因此可以不需要另外的封端部分。
[0077]因此，在尤其優(yōu)選的實施方案中，所述的分子包括以下的結構或者由以下的結構所組成=Ac-Pro-Pro-Pro-Hi s-Pro-Hi s-Al a-Arg-1 I e-Lys-NH2 或者 Ac-Pro-Pro-Thr-Hi s_Pro-His-Ala-Arg-1le-Lys_NH2,其中 Ac 是乙酸基基團。
[0078]本發(fā)明的分子不降低或者阻礙受試者的生育能力。如實例中所描述的，本發(fā)明人證明了將妝 Ac-Pro-Pro-Pro-His-Pro-His-Ala-Arg-1le-Lys-NH2 給予到小鼠不影響其生育能力，并且預期其他的防止或者抑制Src家族激酶(例如Src激酶)和AR或者ER之間的相互作用的分子具有相同的活性。用于評估受試者生育能力的方法在本領域內(nèi)是公知的，并且包括了檢測，例如實例中描述的那些。
[0079]在一個實施方案中，所述的分子作為疫苗給予從而產(chǎn)生抗體。例如，具有前文限定的結構的分子可以用于制備特異性結合到AR的抗體，并且可以制備為疫苗。
[0080]可以希望將所述的分子連接到載體分子，如促免疫原(pro-1mmunogenic)分子。適合的實例包括牛血清白蛋白(BSA)或者鑰孔戚血藍蛋白(KLH)。另外地或者供選擇地，所述的分子可以包含在脂質(zhì)組合物中，所述的脂質(zhì)組合物例如為脂質(zhì)顆粒、納米囊、脂質(zhì)體或者脂質(zhì)囊泡。如下文所進一步描述的，所述的分子還可以摻入到包衣膠囊中用于緩釋。
[0081]我們認為其中AR和/或ER的活性是影響因素的病癥包括了任意的生物或者醫(yī)學病癥或者障礙，其中病理的至少部分是由AR和/或ER的活性所介導的。所述的病理可以是源于AR和/或ER的活性升高或者降低。所述的病癥可以是由AR和/或ER的活性所引起或者可以是簡單地以AR和/或ER的活性為特征。AR和/或ER的活性可以直接影響病癥，或者可以間接影響病癥。一般來說，其中AR和/或ER的活性是影響因素的病癥是發(fā)病涉及通過AR和/或ER的異常信號傳導的病癥(例如，細胞的增殖被AR和/或ER調(diào)控的病癥)。例如，所述的病癥可以涉及通過Src家族激酶途徑進行的異常信號傳導。該病癥可以使用本領域內(nèi)可得的傳統(tǒng)方法容易地進行診斷。
[0082]所述的病癥可以是非癌的(包括非癌的增殖紊亂)或者其可以是癌的(例如良性的或者惡性的癌癥)。所述的病癥可以是生殖病癥，我們認為這包括了影響生殖系統(tǒng)的一些或者全部器官或者組織的病癥的含義。生殖病癥可以是婦科病癥，即影響雌性生殖系統(tǒng)的病癥。
[0083]在第一個優(yōu)選的實施方案中，所述的病癥是非癌的病癥，所述的病癥包括了其中AR和/或ER是影響因素的任意的增殖紊亂。實例包括子宮內(nèi)膜異位癥、卵巢囊腫、子宮肌瘤息肉增生、瘤形成、無排卵的出血、子宮內(nèi)膜在陰囊、膀胱或前列腺生長和乳腺組織中的非癌性增殖性病癥。優(yōu)選地，所述的病癥是子宮內(nèi)膜異位癥。
[0084]在第二個優(yōu)選的實施方案中，所述的病癥是癌癥病癥并且所述的受試者是希望保持生育能力的受試者。我們認為“希望保持生育能力”包括了受試者不希望生育能力降低的含義。例如，受試者可以希望懷孕。該受試者因此代表了一個亞類的癌癥患者，他們在患有癌癥的同時還另外地希望保持生育能力。該癌病癥的實例包括了子宮肌瘤、子宮肌瘤息肉增生、卵巢癌、膀胱癌、宮頸癌、子宮癌、睪丸癌和前列腺癌。
[0085]在第三個優(yōu)選的實施方案中，所述的病癥(例如非癌的或者癌的)是婦科病癥。優(yōu)選地，所述的病癥是子宮內(nèi)膜異位癥。
[0086]將理解的是，在第一和第三優(yōu)選的實施方案中，尤其希望在希望保持生育能力的受試者中使用該分子。因此，在這些實施方案中同樣地優(yōu)選的是受試者希望保持生育能力。最優(yōu)選地，所述的病癥是子宮內(nèi)膜異位癥并且所述的受試者希望保持生育能力。
[0087]認識到的是，在本文中描述的分子或者其衍生物或者片段可以與藥學上可接受的賦形劑、溶劑、稀釋劑或者載體(包括其組合)進行配制。所述的載體、稀釋劑、溶劑或者賦形劑必須是在與分子或者衍生物相容以及對接受者無毒的意義上“可接受”的。一般地說，所述的載體是無菌的和無熱原的水或者鹽水(例如生理鹽水)。適用的賦形劑包括甘露醇和葡萄糖。用于治療用途的可接受的載體、溶劑、稀釋劑和賦形劑在制藥領域中是公知的，并且描述在，例如 Remington’ s Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing C0.(A.R.Gennaro ed.1985)中。藥學上的載體、溶劑、賦形劑和稀釋劑的選擇可以根據(jù)預期的給藥途徑和標準的藥學實踐進行選擇。藥物組合物可以包括或者額外包括載體、賦形劑、溶劑或者稀釋劑、任意適用的粘合劑、潤滑劑、助懸劑、包衣劑或者助溶劑?？梢栽谠撍幬锝M合物中加入防腐劑、穩(wěn)定劑、染料以及甚至香味劑。
[0088]制劑可以便利地以單位劑型的形式存在，并且可以按照藥學領域中熟知的任意方法進行制備。該方法包括將分子和載體進行結合的步驟，所述的載體包含一種或多種的助齊U。一般地說，所述的制劑是通過均勻和緊密地將活性成分和液體載體或者研細的固體載體或者兩者結合來進行制備，并且如果有必要的話將產(chǎn)品成型。
[0089]適用于口服給藥的根據(jù)本發(fā)明的制劑可以作為離散的單位如膠囊、扁囊劑或者片劑來提供，其各自包含預定量的活性成分；作為粉末或者顆粒提供；作為溶液，或水性液體或非水性液體中的混懸劑提供；或者作為水包油的液體乳劑或者油包水的液體乳劑提供。所述的活性成分還可以作為大丸劑、沖劑或糊劑來提供。
[0090]片劑可以通過壓制或者模制來制備，任選地與一種或多種的助劑一同制備。壓制片可以通過將自由流動的形式的活性成分在適合的機器中壓制來制備，所述的自由流動的形式例如為粉末或者顆粒，所述的活性成分任選地與粘合劑(例如聚維酮、明膠、羥丙基甲基纖維素)、潤滑劑、惰性稀釋劑、防腐劑、崩解劑(例如羥基乙酸淀粉鈉、交聯(lián)聚維酮、交聯(lián)羧甲基纖維素鈉)、表面活性劑或者分散劑混合。模制片可以通過將使用惰性液體稀釋劑潤濕的粉狀化合物的混合物在適合的機器中模制來進行制備。所述的片劑可以任選地進行包衣或者刻痕，并且可以使用例如多種比例的羥丙基甲基纖維素配制從而實現(xiàn)其中的活性成分的緩釋或控釋，以提供希望的釋放特征。
[0091]適用于口腔中局部給予的制劑包括錠劑，所述的錠劑在調(diào)味的基料中包括活性成分，所述的調(diào)味的基料通常是蔗糖和阿拉伯樹膠或者黃蓍膠；在惰性基料中包含活性成分的糖果錠劑，所述的惰性基料例如為明膠和甘油，或者蔗糖和阿拉伯樹膠；以及包含在適合的液體載體中的活性成分的漱口水。
[0092]適合用于腸胃外給藥的制劑包括了水性和非水性無菌注射液，其可以包含抗氧化齊U、緩沖劑、抑菌劑和使得制劑與預定接受者的血液處于等滲的溶質(zhì)；和水性以及非水性無菌混懸劑，所述的混懸劑可以包括助懸劑和增稠劑。所述的制劑可以存在于單位劑量或者多劑量容器中，例如密封的安瓿瓶和小瓶，并且可以在冷凍干燥(凍干)條件下儲存，在即將使用之前只需要加入無菌液體載體例如注射用水。臨時制成的注射液和混懸劑可以從前文所述類型的無菌粉末、顆粒和片劑進行制備。
[0093]除了前文中具體提到的組分之外，所述的制劑還可以包括與所討論的制劑類型有關的本領域內(nèi)常規(guī)的其他試劑，例如適合用于口服給予的制劑可以包括調(diào)味劑。
[0094]可以通過任意的傳統(tǒng)方法給予分子或者其衍生物或片段或者其制劑，所述的方法包括經(jīng)口服、經(jīng)鼻內(nèi)和經(jīng)腸胃外(例如經(jīng)皮下或者經(jīng)肌肉內(nèi))注射。優(yōu)選的途徑包括了經(jīng)口服、經(jīng)靜脈內(nèi)或者經(jīng)皮下注射。治療可以由單次給藥或者一段時間內(nèi)多次給藥組成。分子或者其衍生物可以配制到緩釋制劑中，從而在延長的時間內(nèi)提供緩釋，所述的延長的時間例如為至少2或4或6或8周。優(yōu)選地，在至少4周時間內(nèi)提供緩釋。
[0095]在具體的實施方案中，分子或者其衍生物或者其片段的制劑形式使得能夠直接給予到生殖系統(tǒng)。因此，分子或者其衍生物或者其片段可以配制成陰道或者直腸栓劑、陰道內(nèi)衛(wèi)生棉條、陰道內(nèi)環(huán)、陰道內(nèi)子宮帽、陰道內(nèi)海綿或者含藥的子宮內(nèi)避孕器(IUD)。
[0096]應理解的是，本發(fā)明包括抑制或者防止Src家族激酶(例如Src激酶)和雄激素或者雌二醇受體之間的相互作用的分子，例如包括前文限定的結構Bf[ (Pro)n-X^His-Pro-His-Ala-Arg-1le-Lyslm-Rp 或者 Bj-[lys-1le-arg-ala-his-pro-his_xr-(pro) Jm-Rp 的分子，或者由前文限定的結構 Β」-[ (Pro)n-Xr-His-Pro-His-Ala-Arg-1le-Lys]m-Rp 或者 Β」-[1ys-1le-arg-ala-his-pro-his-xr- (pro) Jm-Rp所組成的分子,所述的分子的制劑形式使得能夠直接給予到生殖系統(tǒng)或者緩釋。因此，本發(fā)明包括了抑制或者防止Src家族激酶(例如Src激酶)和雄激素或者雌二醇受體之間的相互作用的分子’例如包括結構^^⑴^^^Xr-Hi s-Pro-Hi s-Ala-Arg-1 le-Ly s]m-Rp 或者 Bj-[lys-1le-arg-ala-his-pro-his_xr- (pro)Jm-Rp或其衍生物或片段的分子，或者由結構Β」-[ (Pr0)n-Xr-His-Pr0-His-Ala-Arg-1le-LysIm-Rp 或者 Bj-[lys-1le-arg-ala-his-pro-his-xr-(pro) Jm-Rp 或其衍生物或片段所組成的分子，其配制成陰道或者直腸栓劑、陰道內(nèi)衛(wèi)生棉條、陰道內(nèi)環(huán)、陰道內(nèi)子宮帽、陰道內(nèi)海綿或者含藥的子宮內(nèi)避孕器(IUD)或者緩釋制劑中任意一種。換言之，本發(fā)明提供了藥物組合物，所述的藥物組合物包含抑制或者防止Src家族激酶(例如Src激酶)和雄激素或者雌二醇受體之間的相互作用的分子，并且所述的分子適合于配制成陰道或者直腸栓劑、陰道內(nèi)衛(wèi)生棉條、陰道內(nèi)環(huán)、陰道內(nèi)子宮帽、陰道內(nèi)海綿或者含藥的子宮內(nèi)避孕器(IUD)或者緩釋制劑中任意一種，并且所述的組合物任選地包括藥學上可接受的賦形劑、載體或者稀釋劑。
[0097]給予受試者的分子或者其衍生物或者其片段的量是有效地對抗特定受試者的病癥的量。所述的量可以由醫(yī)師來決定。
[0098]在實施方案中，所述分子，例如包括前文限定的結構Bj- [ (Pro) n-Xr-Hi s-Pro-Hi s_Ala-Arg-1le-Lys]m-Rp 或者 Bj-[lys-1le-arg-ala-his-pro-his_xr-(pro) Jm-Rp 的分子或者由前文限定的結構 B」-[(Pro) n-Xr-His-Pro-His-Ala-Arg-1 Ie-Lys] m-Rp 或者 Bj- [Iys_i Ie-arg-ala-his-pro-his-Xr-(pro) Jm-Rp所組成的分子使用1-lOOOng之間的每日劑量,例如l_900ng、l_800ng、l_700ng、l_600ng、l_500ng、l_400ng、l_300ng、l_200ng 或者 1-lOOng 的每日劑量給予受試者。因此，所述的分子，例如包含前文限定的結構h-[(Pix))n-X「HiS-Pix)-His-Ala-Arg-1le-Lyslm-Rp 或者 Bj-[lys-1le-arg-ala-his-pro-his_xr-(pro) Jm-Rp 的分子或者由前文限定的結構 B」-[ (Pro)n-Xr-His-Pro-His-Ala-Arg-1le-Lys]m-Rp 或者 B」-[lys-1le-arg-ala-his-pro-his-xr-(pro) Jm-Rp 所組成的分子可以使用至少 lng、10ng、20ng、30ng、40ng、50ng、60ng、70ng、80ng、90ng 或 lOOng、或至少 150ng 或 200ng 的每日劑量來給予到受試者。
[0099]在另一個實施方案中，所述的分子，例如包括前文限定的結構Bj- [ (Pro) n-Xr-Hi s-Pro-His-Ala-Arg-1Ie_Lys]m-Rp 或者 Bj-[lys-1le-arg-ala-his-pro-his-xr- (pro) Jm-Rp的分子或者由前文限定的結構B」-[(Pro) n-Xr-Hi s-Pro-Hi s-Ala-Arg-1 I e-Lys] m-Rp或者Bj-[lys-1le-arg-ala-his-pro-his-xr- (pro) Jm-Rp 所組成的分子在至少 5、10、15、20、25、30、35、40、45、50、55或者60天的療程內(nèi)，或者甚至在至少3、4、5、6、7、8、9、10、11、12或者18個月的療程內(nèi)，或者在至少2、3、4或者5年的療程按照間隔(例如每天、兩天或者每周)給予。如果分子或者衍生物按照間隔給予，將理解的是可以希望在不同的間隔下使用不同的給予途徑。例如，所述的分子或者衍生物可以首先通過注射進行給予，以及隨后的給藥通過皮下植入來給予。最佳的給予間隔和治療的持續(xù)時間一般地取決于病癥的嚴重程度。
[0100]在一個實施方案中，給予所述的受試者除了本文所描述的分子或者衍生物之外的治療劑。例如，當給予所述的分子或者其衍生物來預防或者治療特定的病癥時，可以給予已知對于預防或者治療該病癥有用的另外的治療劑。因此，當預防或者治療子宮內(nèi)膜異位癥時，所述的另外的治療劑可以是已知預防或者治療子宮內(nèi)膜異位癥的藥劑，當預防或治療子宮肌瘤時，所述的另外的治療劑可以是已知預防或者治療子宮肌瘤的藥劑，等等。
[0101]一般地，其中AR和/或ER的活性是影響因素的病癥是增生性紊亂，并且因此所述的另外的治療劑可以是任意的減少增殖的藥劑，例如任意的細胞生長抑制劑或者殺細胞劑或者抗癌劑。
[0102]認識到的是，所述的另外的治療劑可以與本文所描述的分子或者其衍生物同時給予(即同時給予，任選地以復合制劑給予)或者在與本文中所述分子或者其衍生物不同的時間給予(即貫序給予，其中所述的另外的治療劑在給予所述的分子或者其衍生物之前或者之后進行給予)。所述的另外的治療劑可以按照與本文描述的本發(fā)明的分子相同的方式進行給予，或者可以使用所述另外的治療劑通常的給予途徑進行給予。
[0103]本發(fā)明的第二個方面提供了組合物，所述的組合物包括(i)抑制或者防止Src家族激酶(例如Src激酶)和雄激素受體(AR)或者雌二醇受體(ER)之間的相互作用的分子，和(ii)適用于預防或者治療其中AR和/或ER的活性是影響因素的非癌病癥的治療劑，以及藥學上可接受的賦形劑、載體或者稀釋劑。所述的組合物可以是藥物組合物，其還含有藥學上可接受的賦形劑、載體或者稀釋劑。
[0104]所述的分子、衍生物、另外的治療劑、病癥以及所治療的受試者的優(yōu)選包括了前文中針對本發(fā)明第一方面所提到的那些。例如，所述的分子可以包括結構B」-[(P1)n-X^His-Pro-Hi s-Ala-Arg-1 Ie_Lys]m-Rp 或者 Bj-[lys-1le-arg-ala-his-pro-his-xr- (pro) Jm-Rp或者其衍生物或者片段，或者由結構Bj-[ (Pro) n-X「Hi s-Pro-Hi s-Ala-Arg-1 le-Lys] m-Rp或者 Bj-[lys-1le-arg-ala-his-pro-his-xr-(pro) Jm-Rp 或者其衍生物或者片段組成,其中 B是第一化學部分，j是O或l，n是從1-10的整數(shù)，m是從I到3的整數(shù)，R是第二化學部分，P 是 O 或者 I,并且[lys-1le-arg-ala-his-pro-his-xr-(pro) J 是[(Pro)n-Xr-His-Pro-His-Ala-Arg-1 le-Lys]的逆反肽。最優(yōu)選地，所述的分子具有結構Ac-Pro-Pro-Pro-His-Pro-His-Ala-Arg-1le-Lys-NH2 或者 Ac-Pro-Pro-Thr-His-Pro-His-Ala-Arg-1Ie-LyS-NH2,其中Ac是乙?；鶊F。優(yōu)選地，所述的受試者是人。優(yōu)選地，所述的另外的治療劑是適合用于預防或者治療子宮內(nèi)膜異位癥的治療劑。
[0105]因此,本發(fā)明包括組合物,所述的組合物包括(i)抑制或者防止Src家族激酶(例如Src激酶)和雄激素受體或者雌二醇受體之間的相互作用的分子，和(ii)適用于預防或者治療其中AR和/或ER的活性是影響因素的非癌病癥的治療劑，以及藥學上可接受的賦形劑、載體或者稀釋劑，所述的組合物用于預防或治療其中AR和/或ER的活性是影響因素的非癌病癥。所述的組合物可以是藥物組合物，其還含有藥學上可接受的賦形劑、載體或者稀釋劑。
[0106]類似地，本發(fā)明包括組合物在制備用于預防或者治療其中AR和/或ER的活性是影響因素的非癌病癥的藥物中的用途，所述的組合物包括(i)抑制或者防止Src家族激酶(例如Src激酶)和雄激素受體或者雌二醇受體之間的相互作用的分子，和(ii)適用于預防或者治療其中AR和/或ER的活性是影響因素的非癌病癥的治療劑，以及藥學上可接受的賦形劑、載體或者稀釋劑。所述的組合物可以是藥物組合物，其還含有藥學上可接受的賦形劑、載體或者稀釋劑。
[0107]將認識到的是，本發(fā)明包括抑制或者防止Src家族激酶(例如Src激酶)和雄激素受體或者雌二醇受體之間的相互作用的分子，其用于預防或者治療其中AR和/或ER的活性是受試者中的影響因素的非癌病癥，或者用于預防或者治療其中AR和/或ER的活性是希望保持生育能力的受試者中的影響因素的癌性病癥，或者用于預防或者治療其中AR和/或ER的活性是受試者中的影響因素的婦科病癥，其中還給予所述的受試者適用于預防或者治療所述病癥的治療劑。
[0108]類似地，將理解的是，本發(fā)明包括抑制或者防止Src家族激酶(例如Src激酶)和雄激素或者雌二醇受體之間的相互作用的分子在制造藥物中的用途，所述的藥物用于預防或者治療其中AR和/或ER的活性是受試者中的影響因素的非癌病癥，或者用于預防或者治療其中AR和/或ER的活性是希望保持生育能力的受試者中的影響因素的癌性病癥，或者用于預防或者治療其中AR和/或ER的活性是受試者中的影響因素的婦科病癥，其中還給予所述的受試者適用于預防或者治療其中AR和/或ER的活性是影響因素的非癌病癥的治療劑。
[0109]優(yōu)選地,所述的分子可以包括結構Β」-[ (Pro)n-Xr-His-Pro-His-Ala-Arg-1le-LysIm-Rp 或者 Bj-[lys-1le-arg-ala-his-pro-his-xr-(pro) Jm-Rp 或者其衍生物或者片段,或者由 Bj.-[ (Pro) n-Xr_Hi s—Pro—Hi s-Ala-Arg-1 Ie_Lys]m-Rp 或者 Bj-[lys-1le-arg-ala-his-pro-his-xr-(pro)n]ffl-Rp或者其衍生物或者片段所組成，其中B是第一化學部分，j是O或1，η是從1-10的整數(shù)，m是從I到3的整數(shù)，R是第二化學部分，P是O或者1，并且[lys-1le-arg-ala-his-pro-his-xr-(pro)n]是[(Pro)n-Xr-His-Pro-His-Ala-Arg-1le-Lys]的逆反妝。最優(yōu)選地，所述的分子具有 Ac-Pro-Pro-Pro-His-Pro-His-Ala-Arg-1le-Lys_NH2 或者Ac-Pro-Pro-Thr-His-Pro-His-Ala-Arg-1Ie-LyS-NH2 的結構，其中 Ac 是乙酸基團。
[0110]本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)了抑制或者防止Src家族激酶和AR和/或ER之間的相互作用的分子可以用于預防或者治療其中AR和/或ER的活性是受試者中的影響因素的非癌病癥。因此，認識到的是，通過評估試驗試劑對此相互作用的效力，可以確定預防或者治療非癌病癥的試劑。
[0111]因此，本發(fā)明另外的方面提供了選擇試劑來預防或者治療其中AR和/或ER的活性是影響因素的非癌病癥的方法，所述的方法包括確定試驗試劑是否降低以下物質(zhì)之間的相互作用:(a) AR或者ER或者其部分，所述的部分能夠結合到Src家族激酶和(b) Src家族激酶或者其部分，所述的部分能夠結合到AR或者ER。
[0112]AR、ER和Src家族激酶，以及非癌病癥的優(yōu)選包括了前文所限定的針對本發(fā)明第一方面的那些。
[0113]將理解的是，出于篩選方法的目的提供完整的AR或者ER，或者Src家族激酶并不是必須的?？梢允褂媚軌蚪Y合到Src家族激酶(例如Src激酶)的AR或者ER的部分，以及可以使用能夠結合到AR或者ER的Src家族激酶(例如Src激酶)的部分。例如，如前文所描述的，相信Src家族激酶(例如Src激酶)的SH3和SH2結構域分別地介導Src家族激酶和AR與ER中每一個的相互作用。因此，可以使用對應于能夠結合至AR的SH3結構域或者其部分的Src家族激酶(例如Src激酶)部分，或?qū)谀軌蚪Y合至AR的SH2結構域或者其部分的Src家族激酶(例如Src激酶)部分。類似地，可以使用對應于AR的377-386氨基酸殘基的AR部分，據(jù)相信其介導AR和Src家族激酶(例如Src激酶)的SH3結構域之間的相互作用。其他適合的部分可以由本領域技術人員來確定，并且描述在例如Migliacc1等人(0ncogene2007, 26:6619)和 Migliacc1 等人(Cancer Research2005, 65 (22): 10585-93)中。
[0114]試驗試劑可以是任意適合的包括了多肽、抗體、小分子、天然產(chǎn)物、模擬肽或者核酸的試驗試劑。認識到的是，可以將試驗試劑的文庫作為高通量篩選的部分來進行篩選。
[0115]可以使用多種技術來測定試驗試劑對AR或ER和Src家族激酶(例如Src激酶)或者其部分之間的相互作用，例如在前文所描述的那樣，并且所述的技術在本領域是熟知的(例如來自 Migliacc1 等人(0ncogene2007, 26:6619)和 Migliacc1 等人(CancerResearch2005, 65(22):10585-93)。
[0116]在一個實施方案中，該方法包括分離試驗試劑的步驟，所述的試驗試劑減少以下兩者之間的相互作用:(a)AR或者ER或者其部分，所述的部分能夠結合到Src家族激酶和(b) Src家族激酶或者其部分,所述的部分能夠結合到AR或者ER。
[0117]優(yōu)選地，所選擇的試驗試劑是使下述兩者之間相互作用降低的試驗試劑:(a)AR或者ER或者其部分，所述的部分能夠結合到Src家族激酶和(b) Src家族激酶或者其部分，所述的部分能夠結合到AR或者ER，所述的降低系數(shù)為沒有試驗試劑時原始的結合的至少10%、20%、30%、40%或者50%，以及更優(yōu)選地，所述的降低系數(shù)為至少60%、70%、80%、90%或者 95%。
[0118]在一個實施方案中，所述的方法還包括確定試驗試劑作為預防或者治療其中AR和/或ER的活性是影響因素的非癌病癥的試劑。例如，所述的方法可以另外地包括在適合的檢測中針對具體的討論中的病癥(例如病癥的動物模型)來評估試驗試劑的效力。例如，所述的方法可以用于選擇試劑來預防或者治療子宮內(nèi)膜異位癥，以使其涉及到評估子宮內(nèi)膜異位癥模型中的試劑效果。該病癥的適合模型在本領域內(nèi)是熟知的。
[0119]將認識到的是，所選擇的試驗試劑是本發(fā)明的第一方面的含義中的抑制或者防止Src家族激酶和AR或者ER之間的相互作用的試劑，因此可以如此的使用。
[0120]認識到的是，在本文所描述的方法中，所述的方法可以是藥物篩選方法，所述藥物篩選方法對于本領域技術人員是熟知的術語，試驗試劑可以是類藥化合物或者用于開發(fā)類藥化合物的先導化合物。
[0121 ] 術語“類藥化合物”對于本領域技術人員是熟知的，并且可以包括具有以下特性的化合物的含義，所述特性是指可以使其適用于藥物的化合物，例如用作藥物中的活性成分。因此，例如，類藥化合物可以是能通過有機化學技術合成的分子，較不優(yōu)選地可以是能通過分子生物學或者生物化學合成的分子，并且優(yōu)選地是小分子，所述的小分子可以低于5000道爾頓并且可以是水溶性的。類藥化合物可以另外地顯示出與特定的蛋白質(zhì)或者多個蛋白質(zhì)的選擇性相互作用的特征并且可生物利用和/或能夠滲透靶細胞膜或者血腦屏障，但是將認識到的是這些特征不是必需的。
[0122]類似地，術語“先導化合物”對本領域技術人員而言是熟知的，并且可以包括這樣的化合物的含義，該化合物盡管自身不適于用作藥物(例如由于其針對預期的靶標的效力弱，在其作用中是非選擇性的，不穩(wěn)定，難溶，難以合成或者生物利用度低)，但可以提供用于設計具有更多想要的特性的其他化合物的起點。
[0123]在一個實施方案中，所述的方法在體外實施。對于體外我們包括了無細胞的檢測和基于細胞的檢測。例如，所述的方法可以在分離的人細胞系中實施或者在實驗室內(nèi)容易地操作的細胞系中實施(例如大腸桿菌(Escherichia coli)或者釀酒酵母(Saccharomyces cerevisiae))。
[0124]在供選擇的實施方案中，所述的方法在體內(nèi)實施，例如在具有特定病癥(如子宮內(nèi)膜異位癥)的動物模型中實施。
[0125]本發(fā)明提供了大體上如本文所述的任意分子、用途、方法或者組合物。
[0126]現(xiàn)在將借助以下的附圖和實施例來描述本發(fā)明。
[0127]圖1:劑量范圍研究中的小鼠體重(g)。
[0128]圖2:在劑量范圍研究中治療之后的損傷生長(mm2)
[0129]圖3:—系列物種中PPPHPHARIK的同系物。
[0130]實施例1:狀AC-PPPHPHARIK-NH2顯示,屮,針對子宮內(nèi)臘異位癥的療效而不影響牛育能力
[0131]概要
[0132]已經(jīng)進行了兩個研究，其證實了肽Ac-PPPHPHARIK_NH2(也在表1_4中定義為ValiRxl)針對子宮內(nèi)膜異位癥的療效，其不降低生育能力。
[0133]結果
[0134]在第一個研究中，以新型子宮內(nèi)膜異位癥體內(nèi)模型(ResearchHorizons, University of Cambridge, 2009Issue8, GB0715635.9)產(chǎn)生了總共4只治療動物和5只對照動物。將K-rasV12/Ah-Cre轉(zhuǎn)基因小鼠與Rosa26R小鼠雜交產(chǎn)生KrasV12+/-/Ah-Cre+/-/R0SA26R-LacZ+/-轉(zhuǎn)基因小鼠。Fl 后代同系交配產(chǎn)生 F2K_rasV12+/_/Ah-Cre+/+/R0SA26R-LacZ+/+轉(zhuǎn)基因小鼠。轉(zhuǎn)基因的存在由使用針對K_ras、Cre和Rosa26R-LacZ的基因特異性引物的PCR來確定。從此前使用荷爾蒙等進行治療的供體動物收集組織，并且基于注射了藥物或者溶媒21天的野生型動物對其進行劃分。
[0135]在總共四只治療的動物中，三個在使用一種非應答劑治療后顯示出完全沒有損傷。在對照組中的總共五只動物中，一只未產(chǎn)生損傷。
[0136]第二個研究被設計用于評估肽對健康小鼠的繁殖的影響，以及對由相同動物的一個再植入的子宮產(chǎn)生的自體移植損傷的效力(Becker等人，AM J Pathol 178 (4): 1782-91)
[0137]發(fā)情周期
[0138]使8-10周齡的雌性未育C57BL6小鼠適應I周。將一組的10只動物在試驗之前3天皮下注射1ng的肽治療，并且有10只作為對照組只給予溶媒。每天進行陰道涂片，為期10天。在所有的試驗例中都得到了正常的涂片。
[0139]奪配(雌件治療鉬)
[0140]使8-10周齡的雌性未育C57BL6小鼠適應I周。將一組的10只動物在試驗之前3天皮下注射給予1ng的肽，并且有10只動物作為對照組只以溶媒處理。
[0141]引入5只雄性C57BL6動物，并且對雌性每日進行黏液栓的檢查(上午9點之前)。記錄黏液栓的時候，評估雌性的:
[0142]a)可能的懷孕時長(天)
[0143]b)后代數(shù)量
[0144]c)后代的異常現(xiàn)象
[0145]所有的動物都產(chǎn)下正常幼崽(除了給藥的組中的一只之外)。
[0146]奪配(雄件治療鉬)
[0147]使8-10周齡的未育C57BL6小鼠適應I周。將一組的5只雄性動物在試驗之前3天皮下注射給予1ng的肽，并且有5只動物作為對照組只給予溶媒(1ng每天SC)。
[0148]向各個組中引入10只未經(jīng)治療的雌性C57BL6動物，并且每天檢查雌性的黏液栓(上午9點之前)。記錄黏液栓的時候，評估雌性的:
[0149]a)可能的懷孕時長(天)
[0150]b)后代數(shù)量
[0151]c)后代的異?，F(xiàn)象
[0152]所有的動物都產(chǎn)下正常幼崽。
[0153]交配(來自治療的雌性的第2代)
[0154]將來自給藥的雌性的后代交配并且檢查生育能力，來確定可能的可遺傳的效果。在填塞后按照前文所述評估動物并且沒有注意到異常。
[0155]劑暈范圍預防研究
[0156]在一周的適應之后，將每只8-10周齡的雌性未育C57BL6小鼠移植了 6個來自供體動物的子宮組織植入體(plug)。三組的5只動物立即開始每天給予lng、1ng或者10ng的肽，與ARP肽一起皮下注射，并且對照組的5只動物僅使用溶媒進行處理。與對照組相比，在給藥組中治療后的損傷生長明顯地減少(參見圖2)。
[0157]該模型得到了優(yōu)良的損傷建立(97.67%-100%，表4)。損傷負擔(6.02mm2、
5.53mm2 和 4.52mm2 對比 7.18mm2，表 2)和生長(6.23mm2,5.72mm2 和 4.52 對比 7.18mm2，表3)減少。
[0158]針對劑量，可選擇通過在外科手術前2-3天單次注射雌激素來同步發(fā)情周期。
[0159]得自前文的試驗的數(shù)據(jù)在圖1和2及表1-4中示出。
[0160]
【權利要求】
1.一種抑制或者防止Src家族激酶和雄激素受體(AR)或者雌二醇受體(ER)之間的相互作用的分子，所述的分子用于預防或者治療其中AR和/或ER的活性是受試者中的影響因素的非癌病癥，或者用于預防或者治療其中AR和/或ER的活性是希望保持生育能力的受試者中的影響因素的癌性病癥，或者用于預防或者治療其中AR和/或ER的活性是受試者中的影響因素的婦科病癥。
2.抑制或者防止Src家族激酶和雄激素受體(AR)或者雌二醇受體(ER)之間的相互作用的分子在制造藥物中的用途，所述的藥物用于預防或者治療其中AR和/或ER的活性是受試者中的影響因素的非癌病癥，或者用于預防或者治療其中AR和/或ER的活性是希望保持生育能力的受試者中的影響因素的癌性病癥，或者用于預防或者治療其中AR和/或ER的活性是受試者中的影響因素的婦科病癥。
3.一種方法，所述的方法用于預防或者治療其中雄激素受體(AR)和/或雌二醇受體(ER)的活性是受試者中的影響因素的非癌病癥，或者用于預防或者治療其中AR和/或ER的活性是希望保持生育能力的受試者中的影響因素的癌性病癥，或者用于預防或者治療其中AR和/或ER的活性是受試者中的影響因素的婦科病癥；所述的方法包括向需要其的受試者給予有效量的抑制或者防止Src家族激酶和AR或者ER之間的相互作用的分子。
4.根據(jù)權利要求1所述的分子、根據(jù)權利要求2所述的用途或者根據(jù)權利要求3所述的方法，其中所述的Src家族激酶是Src、Yes、Fyn、Fgr> Lck、Hck、Blk、Lyn和Frk中的任一種。
5.根據(jù)權利要求1或4所述的分子、根據(jù)權利要求2或4所述的用途、或者根據(jù)權利要求3或4所述的方法，其中所述的分子包括結構:
Bj-[ (Pro) n-Xr_His-Pro-His-Ala-Arg-1 Ie_Lys]m-Rp,或者 Bj-[lys-1le-arg-ala-his-pro-his-xr- (pro) n] m-Rp,或者其衍生物或者片段， 其中B是第一化學部分，j是O或1，η是從1-10的整數(shù)，X是任意的氨基酸，r是從O到2的整數(shù)，m是從I到3的整數(shù)，R是第二化學部分，P是O或者1，并且[lys-1le-arg-ala-his-pro-his_xr-(pro)n]是[(Pro)n-Xr-His-Pro-His-Ala-Arg-1le-Lys]的逆反月太。
6.根據(jù)權利要求1或4所述的分子、根據(jù)權利要求2或4所述的用途、或者根據(jù)權利要求3或4所述的方法，其中所述的分子是針對Src家族激酶的SH3或者SH2結構域的抗體或者其中所述的分子是針對肽(Pro)n-X11-His-Pro-His-Ala-Arg-1le-Lys的抗體,其中η是從1-10的整數(shù)，X是任意氨基酸并且r是從O到2的整數(shù)。
7.根據(jù)權利要求1和4-6中任一項所述的分子、根據(jù)權利要求2和4-6中任一項所述的用途、或者根據(jù)權利要求3-6中任一項所述的方法，其中所述的分子不減少或妨礙受試者的生育能力。
8.根據(jù)權利要求5或者7所述的分子、用途或者方法，其中η是3并且m是I。
9.根據(jù)權利要求1和4-8中任一項所述的分子、根據(jù)權利要求2和4-8中任一項所述的用途、或者根據(jù)權利要求3-8中任一項所述的方法，其中所述的分子是肽。
10.根據(jù)權利要求9所述的分子、用途或者方法，其中所述的肽的長度為3至57個氨基酸。
11.根據(jù)權利要求5和7-10中任一項所述的分子、用途或者方法，其中B是H、或者乙酰基基團、或者具有游離的或者乙?；苌腘H2基團的一個氨基酸或者氨基酸序列中的任一種。
12.根據(jù)權利要求5和7-11中任一項所述的分子、用途或者方法，其中R是OH基團、或者NH2基團、或者具有C-末端的羧基-酰胺基基團的一個氨基酸或者氨基酸序列中的任一種。
13.根據(jù)權利要求5和7-12中任一項所述的分子、用途或者方法，其中所述的第一和第二化學部分B和R獨立地包括或者二者都包括脂質(zhì)、脂肪酸、聚乙二醇、甘油三酸酯、甘油、異戊二烯基或者異平基部分、碳水化合物、氨基酸、肽、多肽或者核酸、或者其組合中的任一種。
14.根據(jù)權利要求5-13中任一項所述的分子、用途或者方法，其中！■是O。
15.根據(jù)權利要求5和7-13中任一項所述的分子、用途或者方法，其中所述的分子包括結構 Pro-Pro-Pro-His-Pro-His-Ala-Arg-1le-Lys 或者 Ac-Pro-Pro-Pro-His-Pro-His-Ala-Arg-1Ie-Lys-NH2，其中Ac是乙酰基基團。
16.根據(jù)權利要求5和7-13中任一項所述的分子、用途或者方法，其中X是蘇氨酸并且r是I。
17.根據(jù)權利要求16所述的分子、用途或者方法，其中所述的分子包括結構Pro-P1-Thr-Hi s-Pro-Hi s-AI a-Arg-1 I e-Lys,或者 Ac-Pro-Pro-Thr-Hi s-Pro-Hi s-A I a-Arg-1 I e-Lys-NH2,其中Ac是乙?；鶊F。
18.根據(jù)權利要求5和7-13中任一項所述的分子、用途或者方法，其中所述的分子包括選自以下的結構:HPHARIK、HPHAR、PHPHAR、HPH、PHPH、PPHPH、PPPHPH、PHP、PPHP, PPPHP,PPPH、PPH和PPP，例如為包括了選自以下的結構的分子:Ac-HPHARIK-NH2、Ac_HPHAR-NH2、Ac-PHPHAR-NH2、Ac-HPH_NH2、Ac-PHPH_NH2、Ac-PPHPH_NH2、Ac-PPPHPH_NH2、Ac-PHP—NH2、Ac-PPHP-NH2、Ac-PPPHP-NH2P、Ac-PPPH-NH2、Ac-PPH-NH2 和 Ac-PPP_NH2，其中 Ac 是乙?；鶊F。
19.根據(jù)權利要求1和4-18中任一項所述的分子、或者根據(jù)權利要求2和4-18中任一項所述的用途、或者根據(jù)權利要求3-18中任一項所述的方法，其中所述的分子作為疫苗給予，從而產(chǎn)生抗體。
20.根據(jù)權利要求1和4-19中任一項所述的分子、或者根據(jù)權利要求2和4-19中任一項所述的用途，或者根據(jù)權利要求3-19中任一項所述的方法，其中所述的分子連接到載體分子，所述的載體分子例如牛血清白蛋白(BSA)或者鑰孔戚血藍蛋白(KLH)。
21.根據(jù)權利要求1和4-20中任一項所述的分子、或者根據(jù)權利要求2和4-20中任一項所述的用途、或者根據(jù)權利要求3-20中任一項所述的方法，其中所述的分子包含在脂質(zhì)組合物中，所述的脂質(zhì)組合物如脂質(zhì)顆粒、納米囊、脂質(zhì)體或者脂質(zhì)囊泡。
22.根據(jù)權利要求1和4-21中任一項所述的分子、或者根據(jù)權利要求2和4-21中任一項所述的用途、或者根據(jù)權利要求3-21中任一項所述的方法，其中所述的非癌病癥是生殖病癥，如婦科病癥。
23.根據(jù)權利要求1和4-22中任一項所述的分子、或者根據(jù)權利要求2和4-22中任一項所述的用途、或者根據(jù)權利要求3-22中任一項所述的方法，其中所述的非癌病癥是子宮內(nèi)膜異位癥、卵巢囊腫、子宮肌瘤息肉增生、瘤形成、無排卵性出血和陰囊、膀胱或者前列腺中的子宮內(nèi)膜生長中的任一種。
24.根據(jù)權利要求1和4-21中任一項所述的分子、或者根據(jù)權利要求2和4-21中任一項所述的用途、或者根據(jù)權利要求3-21中任一項所述的方法，其中所述的癌性病癥是生殖病癥，如婦科病癥。
25.根據(jù)權利要求1、4-21和24中任一項所述的分子、或者根據(jù)權利要求2、4_21和24中任一項所述的用途、或者根據(jù)權利要求3-21和24中任一項所述的方法，其中所述的癌性病癥是子宮平滑肌瘤、子宮肌瘤息肉增生、卵巢癌、膀胱癌、宮頸癌、子宮癌、睪丸癌和前列腺癌中的任一種。
26.根據(jù)權利要求1和4-25中任一項所述的分子、或者根據(jù)權利要求2和4-25中任一項所述的用途、或者根據(jù)權利要求3-25中任一項所述的方法，其中所述的受試者還被給予另外的治療劑。
27.一種組合物，其包含(i)抑制或者防止Src家族激酶和雄激素受體(AR)或者雌二醇受體(ER)之間的相互作用的分子，和(ii)適用于預防或者治療其中AR和/或ER的活性是影響因素的非癌病癥的治療劑。
28.一種藥物組合物，其包含(i)抑制或者防止Src家族激酶和雄激素受體(AR)或者雌二醇受體(ER)之間的相互作用的分子，和(ii)適用于預防或者治療其中AR和/或ER的活性是影響因素的非癌病癥的治療劑，以及藥學上可接受的賦形劑、載體或者稀釋劑。
29.根據(jù)權利要求27或者28所述的組合物，其中所述的分子包括結構:
Bj-[ (Pro) n-Xr_His-Pro-His-Ala-Arg-1 Ie_Lys]m-Rp,或者 Bj-[lys-1le-arg-ala-his-pro-his-xr- (pro) n] m-Rp,或者其衍生物或者片段， 其中B是第一化學部分，j是O或者1，η是從1-10的整數(shù)，m是從I到3的整數(shù)，R是第二化學部分，P 是 O 或者 I,并且[lys-1le-arg-ala-his-pro-his-xr-(pro)n]是[(Pro)n-Xr-H i s-Pro-Hi s-Al a-Ar g-1le-Lys]的逆反妝。
30.根據(jù)權利要求27或者28所述的組合物，其中所述的分子是如權利要求1-18中的任一項所限定的。
31.根據(jù)權利要求27-30中任一項所述的組合物，其用于預防或者治療其中AR和/或ER的活性是受試者中的影響因素的非癌病癥。
32.根據(jù)權利要求27-30中任一項所述的藥物組合物在制備藥物中的用途，所述的藥物用于預防或者治療其中AR和/或ER的活性是受試者中的影響因素的非癌病癥。
33.一種抑制或者防止Src家族激酶和雄激素受體或者雌二醇受體之間的相互作用的分子，所述的分子用于預防或者治療其中AR和/或ER的活性是受試者中的影響因素的非癌病癥，或者用于預防或者治療其中AR和/或ER的活性是希望保持生育能力的受試者中的影響因素的癌性病癥，或者用于預防或者治療其中AR和/或ER的活性是受試者中的影響因素的婦科病癥，其中還給予所述的受試者適用于預防或者治療所述病癥的治療劑。
34.抑制或者防止Src家族激酶和雄激素受體或者雌二醇受體之間的相互作用的分子在制造藥物中的用途，所述的藥物用于預防或者治療其中AR和/或ER的活性是受試者中的影響因素的非癌病癥，或者用于預防或者治療其中AR和/或ER的活性是希望保持生育能力的受試者中的影響因素的癌性病癥，或者用于預防或者治療其中AR和/或ER的活性是受試者中的影響因素的婦科病癥，其中還給予所述的受試者適用于預防或者治療所述病癥的治療劑。
35.根據(jù)權利要求33所述的分子或者根據(jù)權利要求34所述的用途，其中所述的分子包括結構:
Bj-[ (Pro) n-Xr_His-Pro-His-Ala-Arg-1 Ie_Lys]m-Rp,或者 Bj-[lys-1le-arg-ala-his-pro-his-xr- (pro) n] m-Rp,或者其衍生物或者片段， 其中B是第一化學部分，j是O或者1，η是從1-10的整數(shù)，X是任意的氨基酸，r是從O到2的整數(shù)，m是從I到3的整數(shù)，R是第二化學部分，P是O或者1，并且[lys-1le-arg-ala-his-pro-hi s-xr- (pro)n]是[(Pro) n-Xr-Hi s-Pro-Hi s-Al a-Arg-1 I e-Lys]的逆反月太。
36.根據(jù)權利要求33所述的分子、或者根據(jù)權利要求34所述的用途，其中所述的分子是如權利要求1-18中任一項所限定的。
37.根據(jù)權利要求26、33、35和36中任一項所述的分子、根據(jù)權利要求26和34-36中任一項所述的用途、或者根據(jù)權利要求26所述的方法，其中所述的另外的治療劑是抗增殖齊U，例如細胞生長抑制劑、殺細胞劑(cytosidal agent)或者抗癌劑中的任一種。
38.根據(jù)前述權利要求中任一項所述的分子、用途、方法或者組合物，其中所述的受試者是人。
39.抑制或者防止Src家族激酶和雄激素受體或者雌二醇受體之間的相互作用的分子，所述的分子被配制成陰道或者直腸栓劑、陰道內(nèi)衛(wèi)生棉條、陰道內(nèi)環(huán)、陰道內(nèi)子宮帽、陰道內(nèi)海綿、含藥的子宮內(nèi)避孕器(IUD)或者緩釋制劑中的任一種。
40.根據(jù)權利要求39所述的分子，其中所述的分子具有結構:
B」-[(Pro) n-Xr_His-Pro-His-Ala-Arg-1 Ie_Lys]m-Rp,或者 Bj-[lys-1le-arg-ala-his-pro-his-xr- (pro) n] m-Rp,或者其衍生物或者片段， 其中B是第一化學部分，j是O或者1，η是從1-10的整數(shù)，X是任意的氨基酸，r是從O到2的整數(shù)，m是從I到3的整數(shù)，R是第二化學部分，P是O或者1，并且[lys-1le-arg-ala-his-pro-hi s-xr- (pro)n]是[(Pro) n-Xr-Hi s-Pro-Hi s-Al a-Arg-1 I e-Lys]的逆反月太。
41.根據(jù)權利要求39所述的分子，其中所述的分子是如權利要求1-18中任一項所限定的。
42.選擇試劑來預防或者治療其中AR和/或ER的活性是影響因素的非癌病癥的方法，所述的方法包括確定試驗試劑是否降低以下物質(zhì)之間的相互作用:(a) AR或者ER或者其部分，所述的部分能夠結合到Src家族激酶，和(b) Src家族激酶或者其部分，所述的部分能夠結合到AR或者ER。
43.根據(jù)權利要求42所述的方法，其中所述的試驗試劑是多肽、抗體、小分子、天然產(chǎn)物、模擬肽或者核酸中的任一種。
44.根據(jù)權利要求42或者43所述的方法，其還包括將試驗試劑確定為能夠預防或者治療其中AR和/或ER的活性是影響因素的非癌病癥的試劑。
45.實質(zhì)上如本文中描述的任意分子、用途、方法或者組合物。
【文檔編號】C07K5/117GK104136082SQ201280065758
【公開日】2014年11月5日 申請日期:2012年11月1日 優(yōu)先權日:2011年11月1日
【發(fā)明者】M·?？巳R斯頓, S·瓦伊尼卡, G·S·莫里斯 申請人:瓦力雷克斯有限公司