專利名稱：大分子膠原蛋白提取工藝的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種膠原蛋白提取工藝，特別是一種大分子膠原蛋白提取工藝。
背景技術(shù)：
膠原蛋白是一類在醫(yī)用外科、美容充填、護(hù)膚品、食品、化工等行業(yè)廣 泛應(yīng)用的原材料。目前我國(guó)膠原蛋白生產(chǎn)主要以豬、牛等的皮、腱等為原料 經(jīng)過提取、純化得到?，F(xiàn)有技術(shù)中膠原蛋白的提取過程基本都是采用了低溫
長(zhǎng)時(shí)間浸泡提取的工藝， 一般以0.5M醋酸在4"C左右浸泡72-96小時(shí)，提取 時(shí)間長(zhǎng)而且得率底，能耗高。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種提取時(shí)間 短、得率高、可操作性強(qiáng)的大分子膠原蛋白提取工藝。
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是通過以下的技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn)的。本發(fā)明是
一種大分子膠原蛋白提取工藝，其特點(diǎn)是，其步驟如下
(1) 選取魚皮、豬皮、牛皮或切片筋腱為原料，并用清水對(duì)原料進(jìn)行清洗除 雜處理；
(2) 取清洗后的原料用濃度為0. 05-5. Omol/L的NaOH溶液在(TC —30。C條 件下浸泡l-30小時(shí)，在浸泡過程中，每隔l-5小時(shí)，更換浸泡用NaOH溶液l次；浸泡完畢后，濾過，清洗；清洗后向原料中加入有機(jī)溶劑對(duì) 原料進(jìn)行浸泡、洗滌，原料與有機(jī)溶劑的重量體積(g/ml)百分比為0. 1 —10%，洗滌后再用清水進(jìn)行清洗；
(3) 取步驟(2)所得原料，加入濃度為0. 05—10mol/L的酸性溶液在0°C — 3(TC的條件下進(jìn)行溶脹處理2-72小時(shí)，原料和酸性溶液的重量體積比
(g/ml，下同)為1: 2— 50;然后將溶脹處理后的原料在OX: — -40 。C條件下凍結(jié)1-12小時(shí)；凍結(jié)完畢后，向原料中加入適量的0.05— 1Omol/L的酸性溶液進(jìn)行打漿破碎至粒徑不大于5mm的顆粒料漿,打漿 時(shí)環(huán)境和料漿溫度為0。C —30°C;
(4) 向顆粒料漿中加入0.05—10mol/L的酸性溶液進(jìn)行提取，所加入的酸性 溶液與原料的體積重量比為5—50: 1，提取溫度(TC 一 3CTC，提取時(shí) 間為l-72小時(shí)；提取完畢后，以40—80目紗網(wǎng)過濾，得提取液；再向 濾渣中加酸性溶液，按上述操作重復(fù)提取1-2次，得提取液和濾渣，向 提取液中加入NaCl至濃度為1. 5 — 3. 5 mol/L進(jìn)行鹽析沉淀，冷凍干 燥制得大分子膠原蛋白；
所述的酸性溶液為醋酸、檸檬酸或鹽酸溶液；所述的有機(jī)溶劑為丙酮、 四氯化碳或己烷。
在以上所述的步驟(4)中還可以取濾渣并向其中加入0.05—1Omol/L 的酸性溶液，按步驟(4)所述方法重復(fù)操作提取1-2次，得提取液；合并提 取液，向其中加入NaCl至濃度為1.5 — 3.5 mol/L進(jìn)行鹽析沉淀，冷凍干 燥制得大分子膠原蛋白。
在以上所述的大分子膠原蛋白提取工藝中1、 步驟(2)中，有機(jī)溶劑對(duì)原料進(jìn)行浸泡的時(shí)間優(yōu)選為2—IO小時(shí)。
2、 步驟(2)中，浸泡所用的Na0H溶液的濃度優(yōu)選為0.5-2.0mol/L，在 0°C —20。C條件下浸泡5-20小時(shí)；在浸泡過程中，優(yōu)選每隔2-3小時(shí)更換浸 泡用NaOH溶液1次；洗滌時(shí)原料與所加入的有機(jī)溶劑的重量體積百分比優(yōu)選 為0. 5—5%。
3、 步驟(3)中，溶脹處理時(shí)加入的酸性溶液的濃度優(yōu)選為0. 5— 5 mol/L， 溶脹處理在0" —20。C的條件下進(jìn)行，溶脹處理時(shí)間優(yōu)選為10-24小時(shí)，原 料和酸性溶液的重量體積比優(yōu)選為1: 5—40;打槳破碎時(shí)所加入的酸性溶液 的濃度優(yōu)選為0. 5—5mol/L，打漿時(shí)環(huán)境和料漿溫度優(yōu)選為0°C —2(TC。
4、 步驟(4)中，提取時(shí)向顆粒料漿中加入的酸性溶液的濃度優(yōu)選為0.5 —5 mol/L;原料與酸性溶液的重量體積比優(yōu)選為1: 10—40，提取溫度優(yōu)選 0°C _ 20°C，提取時(shí)間優(yōu)選為5-36小時(shí)。
5、 所述的魚皮可以為水產(chǎn)加工過程中產(chǎn)生的下腳料魚皮，如鯉魚皮、鰱 魚皮、鱈魚皮、魷魚皮等；步驟(1)中對(duì)原料進(jìn)行清洗除雜是為了除去原料 表面的血污、粘液、鱗片等雜質(zhì)。
與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明工藝具有以下優(yōu)點(diǎn)采用NaOH溶液浸泡可以有 效地去除雜蛋白；采用有機(jī)溶劑洗滌可以有效地去除脂肪；將原料溶脹，進(jìn) 行溶脹處理可以使原料的厚度增加，降低了原材料組織的韌性，結(jié)合控溫、 凍結(jié)增加了組織的脆性，進(jìn)一步降低原料的韌性；然后進(jìn)行破碎，將破碎后 的原料進(jìn)一步提取。本發(fā)明大分子膠原蛋白提取工藝將各處理、提取步驟有 機(jī)地結(jié)合起來，可以較大程度的提高蛋白的提取效率，減少提取的時(shí)間，降 低提取過程的能耗，提取得到的膠原蛋白分子量不小于10萬道爾頓。


圖1為本發(fā)明工藝提取的大分子膠原蛋白的SDS-PAGE電泳圖。 圖中
1:高分子量標(biāo)準(zhǔn)蛋白(Sigma Co, USA); 2:牛皮標(biāo)準(zhǔn)I型膠原蛋白(Sigma Co, USA); 3:本發(fā)明工藝提取的鯉魚皮膠原蛋白。
具體實(shí)施例方式
以下進(jìn)一步描述本發(fā)明的具體技術(shù)方案，以便于本領(lǐng)域的技術(shù)人員進(jìn)一 步地理解本發(fā)明，而不構(gòu)成對(duì)其權(quán)利的限制。
實(shí)施例1。 一種大分子膠原蛋白提取工藝，其步驟如下
(1) 選取鯉魚皮為原料，并用清水對(duì)原料進(jìn)行清洗除雜處理；
(2) 取清洗后的原料用濃度為0.05mol/L的NaOH溶液在0"C條件下浸泡1 小時(shí)；浸泡完畢后，濾過，清洗；清洗后向原料中加入有機(jī)溶劑對(duì)原料 進(jìn)行浸泡、洗滌，原料與有機(jī)溶劑的重量體積百分比為0.1%，洗滌后再 用清水進(jìn)行清洗；
(3) 取步驟(2)所得原料，加入濃度為0.05mol/L的酸性溶液在(TC的條件 下進(jìn)行溶脹處理2小時(shí)，原料和酸性溶液的重量體積比為1: 2;然后將 溶脹處理后的原料在-4CTC條件下凍結(jié)1小時(shí)；凍結(jié)完畢后，向原料中 加入適量的0. 05mol/L的酸性溶液進(jìn)行打漿破碎至粒徑不大于5ram的顆 粒料漿，打漿時(shí)環(huán)境和料漿溫度為0°C;
(4) 向顆粒料漿中加入0.05mol/L的酸性溶液進(jìn)行提取，原料與所加入的酸 性溶液的重量體積比為l: 5，提取溫度(TC,提取時(shí)間為l小時(shí)；提取完畢后，以40目紗網(wǎng)過濾，得提取液；再向?yàn)V渣中加酸性溶液，按上述 操作重復(fù)提取l次，得提取液；
(5)合并提取液，向提取液中加入NaCl至濃度為1.5 mol/L進(jìn)行鹽析沉 淀，冷凍干燥制得大分子膠原蛋白。 所述的有機(jī)溶劑為丙酮；有機(jī)溶劑對(duì)原料進(jìn)行浸泡的時(shí)間為2小時(shí)；所 述的酸性溶液為醋酸溶液。
實(shí)施例2。 一種大分子膠原蛋白提取工藝，其步驟如下
(1) 選取豬皮為原料，并用清水對(duì)原料進(jìn)行清洗除雜處理；
(2) 取清洗后的原料用濃度為5. 0mol/L的NaOH溶液在30'C條件下浸泡30 小時(shí)，在浸泡過程中，每隔5小時(shí)，更換浸泡用NaOH溶液1次；浸泡 完畢后，濾過，清洗；清洗后向原料中加入有機(jī)溶劑對(duì)原料進(jìn)行浸泡、 洗滌，原料與有機(jī)溶劑的重量體積百分比為10%，洗滌后再用清水進(jìn)行 清洗；
(3) 取步驟(2)所得原料，加入濃度為10mol/L的酸性溶液在30'C的條件 下進(jìn)行溶脹處理72小時(shí)，原料和酸性溶液的重量體積比為1: 50;然后 將溶脹處理后的原料在0"C條件下凍結(jié)12小時(shí)；凍結(jié)完畢后，向原料中 加入適量的10mol/L的酸性溶液進(jìn)行打漿破碎至粒徑不大于4,的顆粒 料漿，打漿時(shí)環(huán)境和料漿溫度為30°C;
(4) 向顆粒料漿中加入10mol/L的酸性溶液進(jìn)行提取，原料與所加入的酸性 溶液的重量體積比為l: 50，提取溫度3(TC，提取時(shí)間為72小時(shí)；提 取完畢后，以80目紗網(wǎng)過濾，得提取液；再向?yàn)V渣中加酸性溶液，按上
述操作重復(fù)提取2次，得提取液；(5)合并提取液，向提取液中加入NaCl至濃度為3.5mol/L進(jìn)行鹽析沉淀， 冷凍干燥制得大分子膠原蛋白。 所述的有機(jī)溶劑為四氯化碳;有機(jī)溶劑對(duì)原料進(jìn)行浸泡的時(shí)間為10小時(shí)； 所述的酸性溶液為檸檬酸溶液。
實(shí)施例3。 一種大分子膠原蛋白提取工藝，其步驟如下
(1) 選取牛皮為原料，并用清水對(duì)原料進(jìn)行清洗除雜處理；
(2) 取清洗后的原料用濃度為0. 5mol/L的NaOH溶液在5"C條件下浸泡5小 時(shí)，在浸泡過程中，每隔2小時(shí)，更換浸泡用NaOH溶液1次；浸泡完 畢后，濾過，清洗；清洗后向原料中加入有機(jī)溶劑對(duì)原料進(jìn)行浸泡、洗 滌，原料與有機(jī)溶劑的重量體積百分比為0.5%，洗滌后再用清水進(jìn)行清 洗；
(3) 取步驟(2)所得原料，加入濃度為0.5mol/L的酸性溶液在5"C的條件 下進(jìn)行溶脹處理12小時(shí)，原料和酸性溶液的重量體積比為1: 10;然后 將溶脹處理后的原料在-18t:條件下凍結(jié)2小時(shí)；凍結(jié)完畢后，向原料 中加入適量的0. 5mol/L的酸性溶液進(jìn)行打漿破碎至粒徑不大于3mm的 顆粒料漿，打漿時(shí)環(huán)境和料漿溫度為io°c;
(4) 向顆粒料漿中加入0.5mol/L的酸性溶液進(jìn)行提取，原料與所加入的酸 性溶液的重量體積比為1: 10，提取溫度5'C，提取時(shí)間為5小時(shí)；提 取完畢后，以50目紗網(wǎng)過濾，得提取液；再向?yàn)V渣中加酸性溶液，按上 述操作重復(fù)提取2次，得提取液；
(5) 合并提取液，向提取液中加入NaCl至濃度為2mol/L進(jìn)行鹽析沉淀，冷 凍干燥制得大分子膠原蛋白。所述的有機(jī)溶劑為己烷；有機(jī)溶劑對(duì)原料進(jìn)行浸泡的時(shí)間為5小時(shí)；所 述的酸性溶液為鹽酸溶液。
實(shí)施例4。 一種大分子膠原蛋白提取工藝，其步驟如下-
(1) 選取厚度2-3mm為切片筋腱為原料，并用清水對(duì)原料進(jìn)行清洗除雜處理;
(2) 取清洗后的原料用濃度為1. 0mol/L的NaOH溶液在15。C條件下浸泡20 小時(shí)，在浸泡過程中，每隔3小時(shí)，更換浸泡用NaOH溶液1次；浸泡 完畢后，濾過，清洗；清洗后向原料中加入有機(jī)溶劑對(duì)原料進(jìn)行浸泡、 洗滌，原料與有機(jī)溶劑的重量體積百分比為2%，洗滌后再用清水進(jìn)行清 洗；
(3) 取步驟(2)所得原料，加入濃度為lmol/L的酸性溶液在15。C的條件下 進(jìn)行溶脹處理26小時(shí)，原料和酸性溶液的重量體積比為l: 20;然后將 溶脹處理后的原料在-28'C條件下凍結(jié)3小時(shí)；凍結(jié)完畢后，向原料中 加入適量的2mol/L的酸性溶液進(jìn)行打漿破碎至粒徑不大于5mm的顆粒 料漿，打漿時(shí)環(huán)境和料漿溫度為15°C;
(4) 向顆粒料漿中加入2mol/L的酸性溶液進(jìn)行提取，原料與所加入的酸性 溶液的重量體積比為l: 30，提取溫度6"C，提取時(shí)間為18小時(shí)；提取 完畢后，以60目紗網(wǎng)過濾，得提取液；再向?yàn)V渣中加酸性溶液，按上述 操作重復(fù)提取l次，得提取液；
(5) 合并提取液，向提取液中加入NaCl至濃度為2.5mol/L進(jìn)行鹽析沉淀，
冷凍干燥制得大分子膠原蛋白。 所述的有機(jī)溶劑為四氯化碳；有機(jī)溶劑對(duì)原料進(jìn)行浸泡的時(shí)間為12小 時(shí)；所述的酸性溶液為醋酸溶液。實(shí)施例5。
一種大分子膠原蛋白提取工藝，其步驟如下
(1) 選取鰱魚皮為原料，并用清水對(duì)原料進(jìn)行清洗除雜處理；
(2) 取清洗后的原料用濃度為2. 0mol/L的NaOH溶液在2(TC條件下浸泡20小時(shí)，在浸泡過程中，每隔3小時(shí)，更換浸泡用NaOH溶液1次；浸泡完畢后，濾過，清洗；清洗后向原料中加入有機(jī)溶劑對(duì)原料進(jìn)行浸泡、洗滌，原料與有機(jī)溶劑的重量體積百分比為5%，洗滌后再用清水進(jìn)行清洗；
(3) 取步驟(2)所得原料，加入濃度為5mol/L的酸性溶液在2(TC的條件下進(jìn)行溶脹處理10小時(shí)，原料和酸性溶液的重量體積比為h 5;然后將溶脹處理后的原料在-5t:條件下凍結(jié)8小時(shí)；凍結(jié)完畢后，向原料中加入適量的5mol/L的酸性溶液進(jìn)行打漿破碎至粒徑不大于lmm的顆粒料漿，打漿時(shí)環(huán)境和料漿溫度為20°C;
(4) 向顆粒料漿中加入5mol/L的酸性溶液進(jìn)行提取，原料與所加入的酸性溶液的重量體積比為l: 10,提取溫度2(TC，提取時(shí)間為5小時(shí)；提取完畢后，以70目紗網(wǎng)過濾，得提取液；再向?yàn)V渣中加酸性溶液，按上述
操作重復(fù)提取l次，得提取液；
(5) 合并提取液，向提取液中加入NaCl至濃度為1.8mol/L進(jìn)行鹽析沉淀，
冷凍干燥制得大分子膠原蛋白。有機(jī)溶劑對(duì)原料進(jìn)行浸泡的時(shí)間為8小時(shí)。實(shí)施例6。 一種大分子膠原蛋白提取工藝，其步驟如下
(1) 選取鱈魚皮為原料，并用清水對(duì)原料進(jìn)行清洗除雜處理；
(2) 取清洗后的原料用濃度為3. 0mol/L的Na0H溶液在12"條件下浸泡10小時(shí)，在浸泡過程中，每隔2小時(shí)，更換浸泡用NaOH溶液1次；浸泡完畢后，濾過，清洗；清洗后向原料中加入有機(jī)溶劑對(duì)原料進(jìn)行浸泡、洗滌，原料與有機(jī)溶劑的重量體積百分比為2.5%，洗漆后再用清水進(jìn)行清洗；
(3) 取步驟(2)所得原料，加入濃度為2. 5mol/L的酸性溶液在l(TC的條件下進(jìn)行溶脹處理15小時(shí)，原料和酸性溶液的重量體積比為1: 25;然后將溶脹處理后的原料在-12'C條件下凍結(jié)3小時(shí)；凍結(jié)完畢后，向原料中加入適量的2. 5q1/L的酸性溶液進(jìn)行打漿破碎至粒徑不大于2mm的顆粒料漿，打漿時(shí)環(huán)境和料漿溫度為10°C;
(4) 向顆粒料漿中加入2. 5mol/L的酸性溶液進(jìn)行提取，原料與所加入的酸性溶液的重量體積比為l: 35，提取溫度10(TC，提取時(shí)間為36小時(shí)；提取完畢后，以50目紗網(wǎng)過濾，得提取液；再向?yàn)V渣中加酸性溶液，按
上述操作重復(fù)提取2次，得提取液；
(5) 合并提取液，向提取液中加入NaCl至濃度為2.8mol/L進(jìn)行鹽析沉淀，冷凍干燥制得大分子膠原蛋白。
有機(jī)溶劑對(duì)原料進(jìn)行浸泡的時(shí)間為18小時(shí)。
實(shí)施例7。 一種大分子膠原蛋白提取工藝，其步驟如下-
(1) 選取魚皮為原料，并用清水對(duì)原料進(jìn)行清洗除雜處理；
(2) 取清洗后的原料用濃度為7. Omol/L的NaOH溶液在18。C條件下浸泡18小時(shí)，在浸泡過程中，每隔4小時(shí)，更換浸泡用NaOH溶液1次；浸泡完畢后，濾過，清洗；清洗后向原料中加入有機(jī)溶劑對(duì)原料進(jìn)行浸泡、洗滌，原料與有機(jī)溶劑的重量體積百分比為7%，洗滌后再用清水進(jìn)行清洗；
(3) 取步驟(2)所得原料，加入濃度為7mol/L的酸性溶液在18。C的條件下
進(jìn)行溶脹處理60小時(shí)，原料和酸性溶液的重量體積比為1: 45;然后將
溶脹處理后的原料在-35'C條件下凍結(jié)2小時(shí)；凍結(jié)完畢后，向原料中加入適量的7mol/L的酸性溶液進(jìn)行打漿破碎至粒徑不大于3ran的顆粒料漿，打漿時(shí)環(huán)境和料漿溫度為18°C;
(4) 向顆粒料漿中加入7mol/L的酸性溶液進(jìn)行提取，原料與所加入的酸性溶液的重量體積比為1: 45，提取溫度18°C，提取時(shí)間為50小時(shí)；提取完畢后，以40目紗網(wǎng)過濾，得提取液；再向?yàn)V渣中加酸性溶液，按上述操作重復(fù)提取2次，得提取液；
(5) 合并提取液，向提取液中加入NaCl至濃度為2 mol/L進(jìn)行鹽析沉淀，冷凍干燥制得大分子膠原蛋白。
所述的有機(jī)溶劑為四氯化碳；有機(jī)溶劑對(duì)原料進(jìn)行浸泡的時(shí)間為6小時(shí)；所述的酸性溶液為醋酸溶液。
實(shí)施例8。 一種大分子膠原蛋白提取工藝，其步驟如下
(1) 選取魷魚皮為原料，并用清水對(duì)原料進(jìn)行清洗除雜處理；
(2) 取清洗后的原料用濃度為0.05mol/L的NaOH溶液在0t:條件下浸泡1小時(shí)；浸泡完畢后，濾過，清洗；清洗后向原料中加入有機(jī)溶劑對(duì)原料進(jìn)行浸泡、洗滌，原料與有機(jī)溶劑的重量體積百分比為0.1%，洗滌后再用清水進(jìn)行清洗；
(3) 取步驟(2)所得原料，加入濃度為0. 05mol/L的酸性溶液在(TC的條件下進(jìn)行溶脹處理2小時(shí)，原料和酸性溶液的重量體積比為l: 2;然后將溶脹處理后的原料在-4(TC條件下凍結(jié)1小時(shí)；凍結(jié)完畢后，向原料中
加入適量的0. 05mol/L的酸性溶液進(jìn)行打漿破碎至粒徑不大于5mm的顆粒料漿，打漿時(shí)環(huán)境和料漿溫度為0°C;(4)向顆粒料漿中加入0.05mol/L的酸性溶液進(jìn)行提取，原料與所加入的酸性溶液的重量體積比為l: 5，提取溫度0。C，提取時(shí)間為l小時(shí)；提取完畢后，以40目紗網(wǎng)過濾，得提取液，向提取液中加入NaCl至濃度為1.5 mol/L進(jìn)行鹽析沉淀，冷凍干燥制得大分子膠原蛋白。
所述的有機(jī)溶劑為丙酮；有機(jī)溶劑對(duì)原料進(jìn)行浸泡的時(shí)間為2小時(shí)；所述的酸性溶液為醋酸溶液。
實(shí)施例9。參照?qǐng)Dl。鯉魚魚皮膠原蛋白的提取工藝。
其步驟如下
(1) 原料處理取新鮮鯉魚魚皮或冷凍鯉魚魚皮，鯉魚魚皮的厚度為1-2mm，大小基本一致，原料無腐爛、霉變的現(xiàn)象；將凍結(jié)原料首先用自來水流水解凍，解凍后的原料用自來水清洗，除去原料表面的血污、粘液、鱗片等雜質(zhì)，洗滌水溫度為4°C;洗后稱重并計(jì)算得原料干重為172.95克；
(2) 除雜蛋白雜蛋白的去除采用Na0H溶液浸泡，Na0H溶液的濃度為0. 5mol/L，浸泡時(shí)間20小時(shí)，浸泡溫度4"C，在浸泡過程中，不斷攪拌，每隔5小時(shí)，更換Na0H溶液l次；
(3) 除脂肪采用有機(jī)溶劑四氯化碳4'C浸泡10小時(shí)，脫除脂肪；
(4) 去除部分脂肪的原料皮按照l: 30的比例加入醋酸溶液進(jìn)行溶脹，醋酸溶液的濃度為0. 5mol/L，溶脹溫度為4。C，溶脹時(shí)間為24小時(shí)，溶脹后的原料皮厚度增加，柔韌性明顯降低；(5) 溶脹后的原料初步凍結(jié)，凍結(jié)溫度為-2(TC，凍結(jié)時(shí)間為4小時(shí)，凍結(jié)的目的是增加原料的脆性，降低原料的韌性，不需要深度凍結(jié)，凍結(jié)程度可以依據(jù)原料的厚度和溶脹的程度決定；凍結(jié)后原料加入適量濃度為0. 5mol/L的醋酸溶液，4"C下進(jìn)行打漿破碎0.5分鐘，打漿后顆粒大小在2mm以內(nèi)，打漿及環(huán)境溫度為4°C;然后向其中加入0. 5mol/L的醋酸溶液進(jìn)行一次提取48小時(shí)，原料與醋酸溶液的重量體積比為1: 20，提取完畢后，以40目紗網(wǎng)過濾，得提取液和濾渣；
(6) 向提取液中加入NaCl至濃度為2.5 mol/L進(jìn)行鹽析沉淀，冷凍干燥制得大分子膠原蛋白，稱重73.60g;
(7) 向?yàn)V渣中加入醋酸溶液進(jìn)行二次提取，提取方同一次提取，得提取液，向提取液中加入NaCl至濃度為2.5 mol/L進(jìn)行鹽析沉淀，冷凍干燥制得大分子膠原蛋白，稱重36.59g;
采用SDS-PAGE電泳檢測(cè)方法對(duì)制得大分子膠原蛋白進(jìn)行檢測(cè)，具體過禾呈參考文獻(xiàn)Laemmli,U.K.(1970).Cleavage of structural proteins duringassembly head ofbacteriophageT4.M^/M， 277,680- 685，結(jié)果參見圖1，說明它是一種大分子膠原蛋白。
本實(shí)施例大分子膠原蛋白的提取率參見下表
原料干重質(zhì)量(g)一次提取質(zhì)量(g)
得率(％)二次提取質(zhì)量(g)
得率(％)總質(zhì)量(g)干重總得率(％)
注原料干重質(zhì)量=新鮮原料質(zhì)量* [卜水分含量％(48.5%)]
權(quán)利要求
1、一種大分子膠原蛋白提取工藝，其特征在于，其步驟如下(1)選取魚皮、豬皮、牛皮或切片筋腱為原料，并用清水對(duì)原料進(jìn)行清洗除雜處理；(2)取清洗后的原料用濃度為0.05-5.0mol/L的NaOH溶液在0℃-30℃條件下浸泡1-30小時(shí)，在浸泡過程中，每隔1-5小時(shí)，更換浸泡用NaOH溶液1次；浸泡完畢后，濾過，清洗；清洗后向原料中加入有機(jī)溶劑對(duì)原料進(jìn)行浸泡、洗滌，原料與有機(jī)溶劑的重量體積百分比為0.1-10％，洗滌后再用清水進(jìn)行清洗；(3)取步驟(2)所得原料，加入濃度為0.05-10mol/L的酸性溶液在0℃-30℃的條件下進(jìn)行溶脹處理2-72小時(shí)，原料和酸性溶液的重量體積比為1∶2-50；然后將溶脹處理后的原料在0℃--40℃條件下凍結(jié)1-12小時(shí)；凍結(jié)完畢后，向原料中加入適量的0.05-10mol/L的酸性溶液進(jìn)行打漿破碎至粒徑不大于5mm的顆粒料漿，打漿時(shí)環(huán)境和料漿溫度為0℃-30℃；(4)向顆粒料漿中加入0.05-10mol/L的酸性溶液進(jìn)行提取，原料與所加入的酸性溶液的重量體積比為1∶5-50，提取溫度0℃-30℃，提取時(shí)間為1-2小時(shí)；提取完畢后，以40-80目紗網(wǎng)過濾，得提取液和濾渣，向提取液中加入NaCl至濃度為1.5-3.5mol/L進(jìn)行鹽析沉淀，冷凍干燥制得大分子膠原蛋白；所述的酸性溶液為醋酸、檸檬酸或鹽酸溶液；所述的有機(jī)溶劑為丙酮、四氯化碳或己烷。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的大分子膠原蛋白提取工藝，其特征在于，步驟(4)中取濾渣并向其中加入0.05—10mol/L的酸性溶液，按步驟(4)所 述方法重復(fù)操作提取1-2次，得提取液；合并提取液，向其中加入NaCl 至濃度為1.5 — 3.5 mol/L進(jìn)行鹽析沉淀，冷凍干燥制得大分子膠原 蛋白。
3、 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的大分子膠原蛋白提取工藝，其特征在于，步 驟(2)中，有機(jī)溶劑對(duì)原料進(jìn)行浸泡的時(shí)間為2—IO小時(shí)。
4、 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的大分子膠原蛋白提取工藝，其特征在于，步 驟(2)中，浸泡所用的NaOH溶液的濃度為0.5-2.0mol/L，在0°C — 20'C條件下浸泡5-20小時(shí)；在浸泡過程中，每隔2-3小時(shí)更換浸泡用 Na0H溶液1次；洗滌時(shí)原料與所加入的有機(jī)溶劑的重量體積百分比為 0, 5—5%。
5、 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的大分子膠原蛋白提取工藝，其特征在于，步 驟(3)中，溶脹處理時(shí)加入的酸性溶液的濃度為0. 5— 5mol/L，溶脹 處理在0。C —2(TC的條件下進(jìn)行，溶脹處理時(shí)間為10-24小時(shí)，原料和 酸性溶液的重量體積比為1: 5—40;打漿破碎時(shí)所加入的酸性溶液的濃 度為0. 5—5mol/L，打槳時(shí)環(huán)境和料漿溫度為(TC 一20。C。
6、 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的大分子膠原蛋白提取工藝，其特征在于，步 驟(4)中，提取時(shí)向顆粒料漿中加入的酸性溶液的濃度為0. 5—5 mol/L; 原料與酸性溶液的重量體積比為1: 10—40，提取溫度0°C — 20°C， 提取時(shí)間為5-36小時(shí)。
全文摘要
一種大分子膠原蛋白提取工藝，其特征在于，選取魚皮、豬皮、牛皮或切片筋腱為原料，并用清水對(duì)原料進(jìn)行清洗除雜處理；取清洗后的原料用NaOH溶液浸泡，浸泡完畢后，濾過，清洗；清洗后向原料中加入有機(jī)溶劑對(duì)原料進(jìn)行浸泡、洗滌，向原料中加入酸性溶液溶脹處理，然后將溶脹處理后的原料凍結(jié)；凍結(jié)完畢后，向原料中加入酸性溶液進(jìn)行打漿破碎，最后向顆粒料漿中酸性溶液進(jìn)行提取，向提取液中加入NaCl進(jìn)行鹽析沉淀，冷凍干燥制得大分子膠原蛋白。本發(fā)明大分子膠原蛋白提取工藝將各處理、提取步驟有機(jī)地結(jié)合起來，可以較大程度的提高蛋白的提取效率，減少提取的時(shí)間，降低提取過程的能耗，提取得到的膠原蛋白分子量不小于10萬道爾頓。
文檔編號(hào)C07K14/435GK101628938SQ20091018448
公開日2010年1月20日 申請(qǐng)日期2009年8月12日 優(yōu)先權(quán)日2009年8月12日
發(fā)明者張偉杰, 張俊杰, 蕊 段, 松 秦, 衣悅濤 申請(qǐng)人:江蘇省海洋資源開發(fā)研究院;煙臺(tái)海岸帶可持續(xù)發(fā)展研究所