一種iv型膠原蛋白測(cè)試試劑盒及其測(cè)試方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種IV型膠原蛋白的測(cè)試試劑盒，該試劑盒由磁分離試劑，試劑R1，試劑R2，標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品，校準(zhǔn)品，清洗濃縮液、稀釋液及發(fā)光底物組成，本發(fā)明還公開(kāi)了該試劑盒的制備方法。本發(fā)明試劑盒將化學(xué)發(fā)光技術(shù)與免疫磁微粒相結(jié)合，提供了一種接近均相的反應(yīng)體系，與現(xiàn)有酶聯(lián)免疫的技術(shù)相比，本發(fā)明具有更高的特異性，靈敏度，獲得檢測(cè)結(jié)果的時(shí)間短，操作方式簡(jiǎn)便，檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠，大大降低了產(chǎn)品成本。
【專利說(shuō)明】
-種IV型膠原蛋白測(cè)試試劑盒及其測(cè)試方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明設(shè)及生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其設(shè)及測(cè)定血清中IV型膠原蛋白含量的試劑盒及其 測(cè)試方法。
【背景技術(shù)】
[0002] IV型膠原(Collagen Type IV，簡(jiǎn)寫為CIV)是由分子交聯(lián)形成的一種網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，它 有兩個(gè)末端，7s膠原組分為IV型膠原氨基末端的四聚體，NC1為IV型膠原簇基末端的二聚 體，均參與寡聚體的形成。IV型膠原是肝基底膜的主要成分，存在于肝口靜脈血管區(qū)，中央 靜脈周圍，沿著竇狀隙分布。
[0003] IV型膠原在合成代謝過(guò)程中不需去除端膚而沉積于細(xì)胞外基質(zhì)，故血中IV型膠原 的含量升高可能反映了肝血竇基底膜的更新率加快?；A(chǔ)和臨床研究均發(fā)現(xiàn)血清IV型膠原 水平和肝纖維化及口脈高壓程度密切相關(guān)，與肝臟炎癥活動(dòng)關(guān)系較小。正常肝臟的肝竇周 圍無(wú)完整的基底膜結(jié)構(gòu)。肝纖維化時(shí)，Disse氏腔內(nèi)形成基底膜。此時(shí)，肝組織及血清中IV型 膠原含量亦相應(yīng)增加，且IV型膠原含量與肝纖維化程度呈正相關(guān)。因此，測(cè)定血清中IV型膠 原含量是輔助診斷肝纖維化的一個(gè)重要指標(biāo)。
[0004] 除了對(duì)肝纖維化進(jìn)行輔助診斷，血清IV型膠原是判斷糖尿病早期腎損害或腎小球 纖維化程度的有用指標(biāo)；同時(shí)對(duì)探討肺結(jié)核發(fā)生肺纖維化的早期診斷、W及發(fā)病機(jī)理的研 究等也具有重要意義。
[0005] 臨床檢測(cè)IV型膠原一般采用放射免疫分析方法、固相酶聯(lián)免疫方法或時(shí)間分辨巧 光免疫分析方法。放射免疫分析法存在操作復(fù)雜、測(cè)定結(jié)果不穩(wěn)定、試劑保存時(shí)間短、放射 性污染、儀器昂貴等問(wèn)題;時(shí)間分辨巧光免疫分析方法需要用稀有金屬進(jìn)行標(biāo)記;化學(xué)發(fā)光 僅能一次發(fā)光且易受環(huán)境干擾;酶聯(lián)免疫方法特異性好和靈敏性高、操作簡(jiǎn)便、試劑穩(wěn)定、 對(duì)環(huán)境沒(méi)有污染威脅。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種特異性強(qiáng)，靈敏度高，獲得檢測(cè)結(jié)果的時(shí)間 短，操作方式簡(jiǎn)便，檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)備可靠的IV型膠原蛋白（IV-C0L)的測(cè)試試劑盒及其測(cè)試方 法。
[0007] 為達(dá)到上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：
[000引一種IV型膠原蛋白檢測(cè)試劑盒，包括:磁分離試劑、試劑Ri、試劑R2、清洗濃縮液和 發(fā)光底物，其中：
[0009] 所述磁分離試劑中含有標(biāo)記有小鼠抗人IV-C0L的單克隆抗體的納米磁性微球；
[0010] 所述試劑Ri中含有堿性憐酸酶標(biāo)記的IV-C0L抗體；
[OOW 所述試劑R2中含有牛丫球蛋白IgG;
[0012] 所述清洗濃縮液中含有Tween-20;
[0013] 所述稀釋液中含有BSA;
[0014] 所述發(fā)光底物中含有ΠΜΙΡ冊(cè)S530。
[0015] 在本發(fā)明中，磁分離試劑中標(biāo)記有小鼠抗人IV-〇)L的單克隆抗體的納米磁性微球 的濃度為100~200yg/mL。
[0016] 在實(shí)施例中，標(biāo)記有小鼠抗人IV-〇)L的單克隆抗體的納米磁性微球的濃度為132 ~167ug/mL〇
[0017] 在一些實(shí)施例中，標(biāo)記有小鼠抗人IV-〇)L的單克隆抗體的納米磁性微球的濃度為 13aig/mL。
[0018] 在此實(shí)施例中，磁分離試劑中包括:標(biāo)記有小鼠抗人IV-(X)L的單克隆抗體的納米 磁性微球 13化g/mL;BSA V 3g/LTRIS 4.58g/X;r^Cl 6.81g/LTween20 0.96g/L ProclinSOO 0.2mL/L〇
[0019] 在另一實(shí)施例中，標(biāo)記有小鼠抗人IV-〇)L的單克隆抗體的納米磁性微球的濃度為 167yg/mL。
[0020] 在此實(shí)施例中，磁分離試劑中包括:標(biāo)記有小鼠抗人IV-(X)L的單克隆抗體的納米 磁性微球 16化g/mL;BSA V 3g/LTRIS 4.58g/X;r^Cl 6.81g/LTween20 0.96g/L ProclinSOO 0.2mL/L〇
[0021 ] 磁分離試劑的抑值為8.0 ± 0.05。
[0022] 磁分離試劑中標(biāo)記有小鼠抗人IV-(X)L的單克隆抗體的納米磁性微球的制備方法 為：
[0023] (1)將DSS(辛二酸二班巧酷亞胺)溶于DMS0中至濃度為20mg/血，記為溶液1;將IV- C0L抗體溶于pH值為9.5的0.1mol/L PB緩沖液中至濃度為2mg/ml，記為溶液2;
[0024] (2)溶液1與溶液2混合，置室溫90min，記為溶液3;
[00巧](3)將溶液3加入到Centricon-10濃縮管中，3000g離屯、30min至體積為0.5ml，記為 抗體溶液；
[0026] (4)取0.5mL磁珠經(jīng)磁鐵吸附2分鐘后吸取上清；W抑值為9.5的0.1mol/L PB緩沖 液清洗3次；
[0027] (5)抗體溶液與磁珠混合，室溫反應(yīng)4小時(shí)，保持混勻狀態(tài)；
[0028] (6)加入Imol/L的Tris溶液37°C解育15分鐘，獲得標(biāo)記的磁珠;其中Tris的加樣量 為Img抗體加0.15ml Tris;
[0029] (7似抑7.2 O.lmol/L PB清洗標(biāo)記的磁珠3次，獲得標(biāo)記有小鼠抗人IV-〇)L的單 克隆抗體的納米磁性微球。
[0030] 本發(fā)明采用的IV-〇)L抗體為IV-〇)L的單克隆抗體，本發(fā)明對(duì)其來(lái)源不做限定，其 可為自制也可于市場(chǎng)購(gòu)得，其實(shí)施皆在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。本發(fā)明采用的IV-(X)L單克 隆抗體來(lái)自北京菲斯特生物科技有限公司。
[0031 ] 本發(fā)明采用的磁珠為四氧化Ξ鐵微球，其直徑為0.01~5. Own。
[0032] 在本發(fā)明中，試劑R1中堿性憐酸酶標(biāo)記的IV-C0L抗體的濃度為0.5~化g/mL。
[0033] 在實(shí)施例中，堿性憐酸酶標(biāo)記的IV-C0L抗體的濃度為0.6~化g/mL。
[0034] 在一些實(shí)施例中，堿性憐酸酶標(biāo)記的IV-C0L抗體的濃度為0.化g/mL。
[00巧]在此實(shí)施例中，試劑R1中包括：堿性憐酸酶標(biāo)記的IV-(X)L抗體0.化g/mLBSA V 3g/L;TRIS 6.06g/l;NaCl 13.0g/l;Proclin300 0.2mL/l;MgCl2 0.05g/l;Zncl2 0.05g/L。
[0036] 在另一實(shí)施例中，堿性憐酸酶標(biāo)記的IV-COL抗體的濃度為化g/mL。
[0037] 在此實(shí)施例中，試劑R1中包括:堿性憐酸酶標(biāo)記的IV-(X)L抗體化g/mL;BSA V 3g/ L;TRIS 6.06g/l;NaCl 13.0g/l;Proclin300 0.2mL/l;MgCl2 0.05g/l;Zncl2 0.05g/L。
[003引試劑R1的抑值為7.4 ±0.05。
[0039] 堿性憐酸酶標(biāo)記的IV-COL抗體的制備方法為：
[0040] (1)將ALP溶解于生理鹽水，至濃度為2mg/mL，加入到Centricon-10濃縮管中， 300化pm離屯、大約20分鐘，獲得ALP溶液；
[0041 ] (2)每毫升ALP溶液加入0.2ml的0.1M化1〇4溶液，室溫下避光攬拌20分鐘后，裝入 透析袋中，用ImM pH值為4.4的醋酸鋼緩沖液透析，4°C過(guò)夜，獲得醒化ALP;
[0042] (3)每毫升加20μ1 0.2M pH值為9.5的碳酸鹽緩沖液，使抑值為9.0~9.5,加入IV- C0L的IgG抗體至抗體濃度為2.5mg/mL，在0.01M碳酸鹽緩沖液中，室溫避光輕輕攬拌2小時(shí)；
[0043] (4)每毫升加0.1ml 4mg/ml化肌4溶液，4°C放置2小時(shí);然后W0.15M抑7.4PBS透 析，4°C過(guò)夜；
[0044] (5)在攬拌下逐滴加入等體積飽和硫酸錠，4°C放置1小時(shí)后，300化pm離屯、半小時(shí)， 棄上清；沉淀物用半飽和硫酸錠洗二次，最后沉淀物溶于0.15M pH值為7.4的PBS中，W 0.15M PH7.4的PB緩沖鹽水透析約5個(gè)小時(shí)；
[0045] (6) 1000化pm離屯、30分鐘去除沉淀，制得堿性憐酸酶標(biāo)記的IV-C0L抗體。
[0046] 在本發(fā)明中，試劑R2中包括:牛丫球蛋白IgG 0.5~化g/mMTRIS 1~2g/l;rfeCl 4 ~5g/l;防腐劑0.1 ~0.5mL/L。
[0047] 一些實(shí)施例中，牛丫 球蛋白 IgG 0.9yg/mLTRIS 1.56g/l;rfeCl 4.23g/l;防腐劑 0.2mL/L〇
[004引一些實(shí)施例中，防腐劑為Proclin300。
[0049] -些實(shí)施例中，試劑R2的抑值為7.4±0.05。
[00加]在本發(fā)明中，所述清洗濃縮液中包括:TRIS 12.54g/X;rfeCl 325.6g/l;Tween20 5g/L；Proclin300 0.2mL/L〇
[0化1 ]清洗濃縮液的pH值為7.4 ± 0.05。
[0化2] 在本發(fā)明中，所述稀釋液中包括:BSA V 60g/l;rfeCl 9g/l;Proclin-300 0.5mL/ L。
[0053]在本發(fā)明中，發(fā)光底物中包括：LUMIPH0S530 250mL/LTRIS 2.35gA;rfeCl 6.41g/X;Na2S〇3 0.002g/X;P;roclin-300 0.2血/L。
[0054] 發(fā)光底物的抑值為8.0 ±0.05。
[0055] 在本發(fā)明中，本發(fā)明提供的試劑盒中還包括標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和/或標(biāo)準(zhǔn)品；
[0056] 所述標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和標(biāo)準(zhǔn)品中含有IV-C0L抗原和BSA V。
[0057] 所述標(biāo)準(zhǔn)品為不同濃度的IV-C0L抗原溶液，其中含有BSA V。
[005引標(biāo)準(zhǔn)品中，IV-C0L抗原的濃度分別為0ng/mL、50ng/mL、100ng/mL、250ng/mL、 500ng/mL、lOOOng/mL。
[0化9] 各標(biāo)準(zhǔn)品中，BSA的濃度為6%。
[0060]所述質(zhì)控品為不同濃度的IV-C0L抗原溶液，其中含有BSA V。
[0061 ] 質(zhì)控品中，IV-C0L抗原的濃度分別為75ng/mL、500ng/mL。
[0062] 各質(zhì)控品中，BSA的濃度為6%。
[0063] 所述校準(zhǔn)品為不同濃度的IV-C0L抗原溶液，其中含有BSA V。
[0064] 校準(zhǔn)品中，IV-C0L抗原的濃度分別為100ng/mL、500ng/mL。
[00化]各校準(zhǔn)品中，BSA的濃度為6%。
[0066] 本發(fā)明提供的試劑盒適用于全自動(dòng)儀器檢測(cè)或半自動(dòng)儀器檢測(cè)，采用全自動(dòng)檢測(cè) 的實(shí)際和中，包括校準(zhǔn)品。
[0067] 本發(fā)明提供的試劑盒中還包括ID卡。
[0068] 本發(fā)明提供試劑和中各試劑的比例W體積份數(shù)計(jì)為:磁分離試劑4~6份，試劑Ri 4~6份，試劑R2 4~6份，校準(zhǔn)品4~6份，質(zhì)控品1~3份，校準(zhǔn)品1~3份，清洗濃縮液20~30 份，稀釋液10~20份，發(fā)光底物25~40份。
[0069] 本發(fā)明提供的試劑盒采用本發(fā)明提供的組合物，其適用于IV-〇)L的化學(xué)發(fā)光法檢 巧。，其檢測(cè)靈敏度高，精密性，線性范圍較廣。其能夠檢測(cè)的物質(zhì)為IV-〇)L的標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品 或校準(zhǔn)品，血清或全血。其可用于疾病的診斷或治療，也可僅用于科研目的的檢測(cè)。
[0070] 本發(fā)明提供的試劑盒用于非疾病診斷或治療目的IV-(X)L的磁微?；瘜W(xué)發(fā)光法檢 測(cè)。
[0071] 本發(fā)明提供的試劑盒的使用方法，包括：
[0072] 步驟1:將待測(cè)樣品與試劑R1、試劑R2、磁分離試劑混合，37 °C解育30min;
[0073] 步驟2:磁分離沉淀Imin后，棄上清液、W經(jīng)稀釋的清洗濃縮液清洗后，與發(fā)光底物 混合，測(cè)定發(fā)光值，根據(jù)發(fā)光值，W標(biāo)準(zhǔn)曲線法確定IV-C0L濃度。
[0074] 標(biāo)準(zhǔn)曲線采用標(biāo)準(zhǔn)品繪制，W標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，W發(fā)光值為縱坐標(biāo)，擬合曲 線，獲得公式。
[00巧]步驟1中試劑R1、試劑R2、磁分離試劑的體積比為1:1:1。
[0076] 步驟2中稀釋采用純化水，稀釋的比例為7倍。
[0077] 遇到高值冊(cè)0K樣本，W稀釋液對(duì)待測(cè)樣品稀釋后進(jìn)行檢測(cè)。
[0078] 本發(fā)明的有益效果在于：
[0079] (1)本發(fā)明試劑盒將化學(xué)發(fā)光技術(shù)與免疫磁微粒相結(jié)合，提供了一種接近均相的 反應(yīng)體系，與現(xiàn)有技術(shù)相比，在出結(jié)果時(shí)間上較傳統(tǒng)酶聯(lián)免疫法少10-20分鐘，同時(shí)抗體的 用量降低了20% W上，在提高產(chǎn)品性能的同時(shí)，大大降低了產(chǎn)品成本。
[0080] (2)本發(fā)明試劑盒中試劑R2,用于IV-〇)L的磁微粒化學(xué)發(fā)光法，使得反應(yīng)過(guò)程更加 穩(wěn)定可靠，具有更高的檢測(cè)靈敏度和特異性，并達(dá)到了較佳的性能參數(shù)。
[0081] (3)試劑盒中各組分的配比均是反應(yīng)體系下的最優(yōu)配方，給該試劑盒的使用有效 期及檢測(cè)性能提供了有力保障。
[0082] (4)本發(fā)明試劑盒的精確度、靈敏度W及穩(wěn)定性均優(yōu)于市場(chǎng)同類產(chǎn)品，并且成本低 廉，操作簡(jiǎn)單，應(yīng)用前景廣闊。
[0083] 試驗(yàn)表明，W本發(fā)明提供的組合物對(duì)IV-C化進(jìn)行檢測(cè)，最低檢測(cè)限可達(dá)lOng/mL， 靈敏度高。批內(nèi)變異CV%封0.0 % ;批間變異CV%到5.0% ;精密性良好。標(biāo)準(zhǔn)曲線，線性系 數(shù):r > 0.9900;線性范圍：40-140ng/ml。
【具體實(shí)施方式】
[0084] 本發(fā)明公開(kāi)了一種IV型膠原蛋白測(cè)試試劑盒及其測(cè)試方法，本領(lǐng)域技術(shù)人員可W 借鑒本文內(nèi)容，適當(dāng)改進(jìn)工藝參數(shù)實(shí)現(xiàn)。特別需要指出的是，所有類似的替換和改動(dòng)對(duì)本領(lǐng) 域技術(shù)人員來(lái)說(shuō)是顯而易見(jiàn)的，它們都被視為包括在本發(fā)明。本發(fā)明的產(chǎn)品、方法已經(jīng)通過(guò) 較佳實(shí)施例進(jìn)行了描述，相關(guān)人員明顯能在不脫離本
【發(fā)明內(nèi)容】
、精神和范圍內(nèi)對(duì)本文所述 的方法和應(yīng)用進(jìn)行改動(dòng)或適當(dāng)變更與組合，來(lái)實(shí)現(xiàn)和應(yīng)用本發(fā)明技術(shù)。
[0085] 下面結(jié)合實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明：
[00化]實(shí)施例1
[0087] W配制1L為例：
[008引 （1)稱取Tr i S (Ξ徑甲基氨基甲燒，分子式：化0CH2) 3CNH2) 1.56g和化C1 4.23g于 1L燒杯中；用移液器將Proclin-300量取0.2ml于少量純化水的燒杯中完全溶解后，倒入上 述1L容器中；
[0089] (2)用量筒量取800ml純化水于燒杯中，充分?jǐn)埌?，直至完全溶解；?M Η化或4M NaOH調(diào)ΡΗ，測(cè)量其范圍在7.35-7.45之間；
[0090] (3)稱取牛丫球蛋白IgG 0.9g于800ml純化水的燒杯中；
[0091 ] (4)最后定容1000ml，完全溶解后，測(cè)PH值，范圍在7.35-7.45之間即符合要求，用 0.2皿濾器過(guò)濾;過(guò)濾完后，貼好標(biāo)簽于2-8 °C冷庫(kù)膽存；
[0092] 試劑R2的配制(表1)
[0093]
[0094] 實(shí)施例2:
[00M] 本發(fā)明的一種IV型膠原蛋白（IV-C0L)測(cè)試試劑盒，該試劑盒由磁分離試劑，試劑 Ri，試劑R2，標(biāo)準(zhǔn)品，質(zhì)控品，校準(zhǔn)品，清洗濃縮液，稀釋液及發(fā)光底物組成，其中：磁分離試 劑:標(biāo)記有小鼠抗人IV-〇)L的單克隆抗體的納米磁性微球，所述標(biāo)記有小鼠抗人IV-(X)L的 單克隆抗體的納米磁性微球的濃度為16化g/ml;試劑Ri:含有堿性憐酸酶標(biāo)記的IV-〇)L抗 體，所述堿性憐酸酶標(biāo)記的IV-(X)L抗體濃度為化g/ml;試劑R2 :含有牛丫球蛋白質(zhì)組分的緩 沖液;標(biāo)準(zhǔn)品，質(zhì)控品和校準(zhǔn)品：含有一定量IV-〇)L抗原的牛血清白蛋白組分五(BSA V)溶 液，所述標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為0 (SO)、30(S1)、90(S2)、180 (S3)、450(S4)、900(S5)ng/ml，所述質(zhì) 控品的濃度為60，450ng/ml，所述校準(zhǔn)品的濃度為90，450ng/ml;清洗濃縮液:含有Tween-20 和Proclin-300的緩沖液;稀釋液:含有牛血清白蛋白組分五(BSA V)的溶液;發(fā)光底物:金 剛燒的衍生物IUMIP冊(cè)S530,所述金剛燒的衍生物IUMIP冊(cè)S530的濃度為10μg/ml;
[0096] 本實(shí)施例的一種IV型膠原蛋白（IV-C0L)測(cè)試試劑盒，由下述體積比組成的：磁分 離試劑4%，試劑化4,試劑R2 4,校準(zhǔn)品4,質(zhì)控品1，校準(zhǔn)品1，清洗濃縮液20,稀釋液10,發(fā)光 底物25;
[0097] 本發(fā)明上述IV型膠原蛋白（IV-C0L)測(cè)定試劑盒的制備方法，其具體步驟如下：
[0098] 第一步:磁分離試劑的制備過(guò)程
[0099] -、磁珠緩沖液配制操作規(guī)程:配方見(jiàn)表2, W配制1L為例：
[0100] (1)稱取Tris 4.58g和化C1 6.81g于 1L容器中，稱取0.96g Tween-20于20ml容器 中加適量水使其完全溶解后，倒入上述容器中；
[0101] (2)用移液器將Proclin-300量取0.2ml于10ml純化水的燒杯中完全溶解后，倒入 上述1L容器中；然后在1L容器中加入800ml純化水，充分?jǐn)埌?，使試劑完全溶解?br>[0102] (3)調(diào)節(jié)PH計(jì)測(cè)量其PH值；用4MHCl或4M化0H調(diào)PH，測(cè)量其PH在7.95-8.05之間 即符合要求；
[0103] (4)稱取BSA W牛血清白蛋白）：3g倒入上述1L容器中；
[0104] (5)最后定容至1000ml，測(cè)PH值，范圍在7.95-8.05之間即符合要求，用0.2um濾器 過(guò)濾即得;過(guò)濾完后貼好標(biāo)簽于2-8 °C冷庫(kù)膽存；
[0105] 磁珠緩沖液(表2)
[0106]
[0107]二、磁分離試劑的配制
[010引 （1)將l.Omg DSS(辛二酸二班巧酷亞胺)溶于50ul DMS0中，即濃度為20111邑/1^;取 2mg IV-C0L抗體溶于PH 9.5的O.lmol/L PB緩沖液中至總體積為1ml;
[0109] (2)計(jì)算DSS的投入量，按照W下公式計(jì)算：（抗體質(zhì)量/16000)X10X368/Cdss)，其 中Cdss指代DSS的物質(zhì)的量濃度mol/L;
[0110] (3)用移液槍吸取相應(yīng)體積的DS巧日入到步驟1的抗體溶液中，置室溫90min;
[0111] (4)將步驟3抗體溶液加入到Centricon-10濃縮管中，然后放入到sigma2-l化高速 冷凍離屯、機(jī)中在3000g的離屯、力下濃縮約30min至體積為0.5ml;
[0112] (5)取0.5ml磁珠，所述的磁珠直徑在0.01-5.0皿之間，加入5ml反應(yīng)杯中，放入專 用試管架，經(jīng)磁鐵吸附2分鐘后吸取上清；
[0113] (6)每次加入1.5ml P朋.5 O.lmol/L PB，混勻30秒，上架，去上清，重復(fù)操作3次； 將步驟4獲得的抗體溶液加入到磁珠中，混勻后室溫反應(yīng)4小時(shí)，保持混勻狀態(tài)；
[0114] (7)加入0.3ml Imol/L的Tris溶液37Γ15分鐘，其中Tris的加樣量為Img抗體加 0.15ml Tris；
[0115] (8)每次加入1.5ml PH 7.2 O.lmol/L PB清洗已經(jīng)標(biāo)記的磁珠，混勻30秒，上架， 去上清，重復(fù)操作3次；
[0116] (9)用100ml磁珠保存液將磁珠轉(zhuǎn)入125ml玻璃瓶，即為0.05 %的IV-(X)L磁分離試 劑；
[0117] (10)將步驟9獲得的磁分離試劑用磁珠緩沖液按照1:1的比例混勻，即得本發(fā)明試 劑盒中分離試劑。
[011引第二步:試劑化的制備過(guò)程
[0119] 一、試劑化稀釋液配制操作規(guī)程:配方見(jiàn)表3, W配制1L為例：
[0120] (1)取Tris 6.06邑、化C1 13.0g、Zncl2 0.05g、Proclin-300 0.2ml和MgCl2 0.05邑 于燒瓶中；然后在燒瓶中加入800ml純化水，充分?jǐn)埌瑁乖噭┩耆芙猓?br>[0121] (2)用4M肥l或4MNa0H調(diào)PH，測(cè)量使PH在7.35-7.45范圍內(nèi)；
[0122] (3)稱取BSA V 3g倒入上述燒瓶中；
[0123] (4)最后定容至1000ml，測(cè)PH值，范圍在7.35-7.45之間即符合要求，用0.化m濾器 過(guò)濾;過(guò)濾完后，貼好標(biāo)簽于2-8 °C冷庫(kù)膽存；
[0124] 試劑化稀釋液表3
[0125]
[0127]二、試劑Ri的配制(堿性憐酸酶(ALP)標(biāo)記的小鼠抗人IV-C0L單克隆抗體）
[01巧](1)取lOmgALP加入5ml生理鹽水中，加入到Centricon-lO濃縮管中，3000rpm離屯、 大約20分鐘，濃縮至1毫升。
[01巧](2)于上液中加入0.2ml新配的0.1M NaI〇4溶液，室溫下避光攬拌20分鐘。
[0130] (3)將上述溶液裝入透析袋中，用ImM PH4.4的醋酸鋼緩沖液透析，4°C過(guò)夜。
[0131] (4)加20μl0.2MP朋.5碳酸鹽緩沖液，使W上醒化ALP的PH升高到9.0~9.5，然后 立即加入2.5mg IgG抗體，在1ml 0.01M碳酸鹽緩沖液中，室溫避光輕輕攬拌2小時(shí)。
[0132] (5)加0.1ml新配的4mg/ml NaB也液，混勻，再置4°C2小時(shí)。
[0133] (6)將上述液裝入透析袋中，對(duì)0.15M PH7.4 PBS透析，4°C過(guò)夜。
[0134] (7)在攬拌下逐滴加入等體積飽和硫酸錠，置4°C1小時(shí)。
[0135] (8)30(K)rpm離屯、半小時(shí)，棄上清。沉淀物用半飽和硫酸錠洗二次，最后沉淀物溶于 少量0.15M PH7.4的PBS中。
[0136] (9)將上述溶液裝入透析袋中，對(duì)0.15M PH7.4的PB緩沖鹽水透析約5個(gè)小時(shí)，去除 錠離子后，lOOOOrpm離屯、30分鐘去除沉淀，上清液即為酶結(jié)合物，加入體積1/100的1M Mgcb溶液4°C保存。收集到的堿性憐酸酶(ALP)與IV-(X)L單克隆抗體的偶聯(lián)物用上述酶反 應(yīng)物稀釋液Wl:600的體積比混合均勻，即得本發(fā)明試劑盒中試劑Ri。
[0137] 第Ξ步:試劑R2的制備
[013引試劑R2配制操作規(guī)程:配方見(jiàn)(表4)，W配制1L為例：
[0139] (1)稱取TriS(Ξ徑甲基氨基甲燒，分子式：化0CH2)3CNH2) 1.56g和化C1 4.23g于 1L燒杯中；用移液器將Proclin-300量取0.2ml于少量純化水的燒杯中完全溶解后，倒入上 述1L容器中；
[0140] (2)用量筒量取800ml純化水于燒杯中，充分?jǐn)埌瑁敝镣耆芙?；?M Η化或4M NaOH調(diào)ΡΗ，測(cè)量其范圍在7.35-7.45之間；
[0141] (3)稱取牛丫球蛋白IgG 0.9g于800ml純化水的燒杯中；
[0142] (4)最后定容1000ml，完全溶解后，測(cè)PH值，范圍在7.35-7.45之間即符合要求，用 0.2皿濾器過(guò)濾;過(guò)濾完后，貼好標(biāo)簽于2-8 °C冷庫(kù)膽存；
[0143] 試劑R2的配制(表4)
[0144]
[0146] 第四步:標(biāo)準(zhǔn)品和質(zhì)控品的配制：
[0147] (1)最高點(diǎn)：最高濃度點(diǎn)為X，目標(biāo)點(diǎn)濃度為A，B，C，D，E，F(xiàn)，配制V體積的溶液時(shí)，需 加入原料的體積為分別為:表5
[014 引
[0149] (2)IV型膠原蛋白（IV-C0L)定量測(cè)定試劑盒IV-〇)L標(biāo)準(zhǔn)品原料配制成濃度點(diǎn)為0， 0.1，1，5,50, lOOng/ml;質(zhì)控品配制的濃度點(diǎn)為0.6，50ng/ml。校準(zhǔn)品配制的濃度點(diǎn)為1， 50ng/ml
[0150] (3)完全溶解后，貼好標(biāo)簽于2-8 °C冷庫(kù)膽存；
[0151] 第五步:清洗濃縮液配制操作規(guī)程:配方見(jiàn)(表6)，W配制1L為例：
[0152] (1)稱取Tris 12.54g和NaCl 325.6g于 1L容器中；
[0153] (2)稱取5g Tween-20于100ml容器中加20ml水使其完全溶解后，倒入上述容器中；
[0154] (3)用移液器將Proclin-300量取0.2ml于盛有10ml純化水的燒杯中完全溶解后， 倒入上述1L容器中；
[0K5] (4)用量筒量取800ml純化水于上述1L容器中，充分?jǐn)埌?，直至完全溶解?br>[0156] (5)用4M肥L或4MNaOH調(diào)PH，測(cè)量其范圍在7.35-7.45之間；
[0157] (6)最后定容1000ml，測(cè)PH值，范圍在7.35-7.45之間即符合要求，完全溶解后用 0.2皿濾器過(guò)濾即得;過(guò)濾完后，貼好標(biāo)簽于2-8 °C冷庫(kù)膽存；
[0158] 清洗濃縮液的配制(表6)
[0159]
[0160] 第六步:稀釋液配方見(jiàn)(表7)，w配制IL為例：
[0161] (1)稱取NaC19.0g和BSA V 60g于 1L的容器中；
[0162] (2)用移液器將Proclin-300量取0.5ml加10ml純化水溶解，倒入上述1L的容器中；
[0163] (3)最后定容1000ml，完全溶解后，用0.2皿濾器過(guò)濾，貼好標(biāo)簽于2-8°C冷庫(kù)膽存；
[0164] 稀釋液的配制(表7)
[01 化]
[0166] 第屯步:發(fā)光底物配制操作規(guī)程:配方見(jiàn)(表8)，W配制1L為例：
[0167] (1)稱取Tris 2.35g、化C1 6.41g、化2S〇3 0.002g和Proclin-300 0.2ml于 1L燒杯 中；
[016引（2)用量筒量取800ml純化水于燒杯中，充分?jǐn)埌?，直至完全溶解；?M HC1或4M NaOH調(diào)PH，測(cè)量其范圍在7.95-8.05之間；
[0169] (3)最后定容至1000ml，測(cè)PH值，范圍在7.95-8.05之間即符合要求，用0.化m濾器 過(guò)濾;過(guò)濾完后，加入250ml IUMIP冊(cè)S530，混勻后，貼好標(biāo)簽于2-8°C冷庫(kù)膽存；
[0170] 發(fā)光底物的配制(表8)
[0171]
[0173] 本發(fā)明一種IV型膠原蛋白（IV-COL)的測(cè)試方法，包括下列步驟：
[0174] (1)使用前，需使用試劑盒內(nèi)校準(zhǔn)品（選)進(jìn)行曲線校正，并用質(zhì)控品進(jìn)行質(zhì)量控 審IJ。測(cè)試結(jié)果在質(zhì)控范圍內(nèi)方可進(jìn)行樣本的檢測(cè)。
[0175] (2)加4份IV-C0L標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品、待測(cè)標(biāo)本至對(duì)應(yīng)試管底部；
[0176] (3)加4份試劑Ri至每一試管中；
[0177] (4)加4份試劑R2至每一試管中；
[0178] (5)加4份磁分離試劑至每一試管中；
[0179] (6)用塑料薄膜覆蓋試管，多管混勻器輕輕振蕩試管架30s后，置37°C水浴30分鐘；
[0180] (7)試管連架放至磁分離器上，確保每支試管都與分離器表面接觸，沉淀2分鐘。緩 慢的倒轉(zhuǎn)分離器倒出上清液，把倒轉(zhuǎn)的試管連同分離器一起放在濾紙上，用力拍擊分離器 底部W除去粘在管壁上的所有液滴；
[0181] (8)清洗濃縮液用純化水稀釋7倍后，加26.7份稀釋后的清洗液至每一試管中，置 多管混勻器上輕輕振蕩混勻30s。加樣時(shí)應(yīng)避免加樣力度過(guò)大而導(dǎo)致磁珠瓣出。混勻要徹 底；
[0182] (9)重復(fù)步驟6、7、6-遍；
[0183] (10)加25份底物溶液至試管中混勻3秒，迅速用準(zhǔn)備好的發(fā)光檢測(cè)儀進(jìn)行檢測(cè)。
[0184] (11)如遇到高值冊(cè)0K樣本，建議臨床醫(yī)師根據(jù)其余測(cè)試指標(biāo)選擇合適的稀釋倍數(shù) 用稀釋液對(duì)樣品進(jìn)行稀釋。
[0185] 實(shí)施例3:
[0186] 本發(fā)明的一種IV型膠原蛋白（IV-COL)測(cè)試試劑盒，該試劑盒由磁分離試劑，試劑 Ri，試劑R2，標(biāo)準(zhǔn)品，質(zhì)控品，校準(zhǔn)品，清洗濃縮液，稀釋液及發(fā)光底物組成，其中：磁分離試 劑:標(biāo)記有小鼠抗人IV-〇)L的單克隆抗體的納米磁性微球，所述標(biāo)記有小鼠抗人IV-(X)L的 單克隆抗體的納米磁性微球的濃度為13化g/ml;試劑R1:含有堿性憐酸酶標(biāo)記的IV-(X)L抗 體，所述堿性憐酸酶標(biāo)記的IV-〇)L抗體濃度為0.化g/ml;試劑R2:含有牛丫球蛋白質(zhì)組分的 緩沖液;標(biāo)準(zhǔn)品，質(zhì)控品和校準(zhǔn)品：含有一定量IV-〇)L抗原的牛血清白蛋白組分五(BSA V) 溶液，所述標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為 0(50)、50(51)、100(52)、250(53)、500(54)、1000(55)11邑/1111，所 述質(zhì)控品的濃度為75，500ng/ml，所述校準(zhǔn)品的濃度為100，500ng/ml;清洗濃縮液:含有 Tween-20和Pro cl in-300的緩沖液;稀釋液:含有牛血清白蛋白組分五(BSA V)的溶液;發(fā)光 底物:金剛燒的衍生物IUMIP冊(cè)S530，所述金剛燒的衍生物IUMIP冊(cè)S530的濃度為10μg/ml;
[0187] 本實(shí)施例一種IV型膠原蛋白（IV-C0L)測(cè)試試劑盒，由下述體積比組成的：磁分離 試劑5.1，試劑化5.1，試劑R2 5.1，校準(zhǔn)品5.1，質(zhì)控品1.7，校準(zhǔn)品1.7，清洗濃縮液25，稀釋 液17,發(fā)光底物34;
[0188] 本實(shí)施例的測(cè)試方法，包括下列步驟：
[0189] (1)使用前，需使用試劑盒內(nèi)校準(zhǔn)品（選)進(jìn)行曲線校正，并用質(zhì)控品進(jìn)行質(zhì)量控 審IJ。測(cè)試結(jié)果在質(zhì)控范圍內(nèi)方可進(jìn)行樣本的檢測(cè)。
[0190] (2)加5.1份IV-C0L標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品、待測(cè)標(biāo)本至對(duì)應(yīng)試管底部；
[0191] (3)加5.1份試劑化至每一試管中；
[0192] (4)加5.1份試劑R2至每一試管中；
[0193] (5)加5.1份磁分離試劑至每一試管中；
[0194] (6)用塑料薄膜覆蓋試管，多管混勻器輕輕振蕩試管架30s后，置37°C水浴30分鐘；
[01M] (7)試管連架放至磁分離器上，確保每支試管都與分離器表面接觸，沉淀2分鐘。緩 慢的倒轉(zhuǎn)分離器倒出上清液，把倒轉(zhuǎn)的試管連同分離器一起放在濾紙上，用力拍擊分離器 底部W除去粘在管壁上的所有液滴；
[0196] (8)清洗濃縮液用純化水稀釋7倍后，加26.7份稀釋后的清洗液至每一試管中，置 多管混勻器上輕輕振蕩混勻30s。加樣時(shí)應(yīng)避免加樣力度過(guò)大而導(dǎo)致磁珠瓣出。混勻要徹 底；
[0197] (9)重復(fù)步驟 6、7、6-遍；
[0198] (10)加34份底物溶液至試管中混勻3秒，迅速用準(zhǔn)備好的發(fā)光檢測(cè)儀進(jìn)行檢測(cè)。
[0199] (11)如遇到高值冊(cè)0K樣本，建議臨床醫(yī)師根據(jù)其余測(cè)試指標(biāo)選擇合適的稀釋倍數(shù) 用稀釋液對(duì)樣品進(jìn)行稀釋。
[0200] 本實(shí)施例采用所述的試劑盒各組分的配制方法與實(shí)施例1相同。
[0201] 實(shí)施例4:
[0202] 本發(fā)明的一種IV型膠原蛋白（IV-C0L)測(cè)試試劑盒，該試劑盒由磁分離試劑，試劑 Ri，試劑R2，標(biāo)準(zhǔn)品，質(zhì)控品，校準(zhǔn)品，清洗濃縮液，稀釋液及發(fā)光底物組成，其中：磁分離試 劑:標(biāo)記有小鼠抗人IV-〇)L的單克隆抗體的納米磁性微球，所述標(biāo)記有小鼠抗人IV-(X)L的 單克隆抗體的納米磁性微球的濃度為16化g/ml;試劑Ri:含有堿性憐酸酶標(biāo)記的IV-〇)L抗 體，所述堿性憐酸酶標(biāo)記的IV-(X)L抗體濃度為化g/ml;試劑R2:含有牛丫球蛋白質(zhì)組分的緩 沖液;標(biāo)準(zhǔn)品，質(zhì)控品和校準(zhǔn)品：含有一定量IV-〇)L抗原的牛血清白蛋白組分五(BSA V)溶 液，所述標(biāo)準(zhǔn)品的濃度為 0(50)、50(51)、100(52)、250(53)、500(54)、1000(55)11邑/1111，所述 質(zhì)控品的濃度為75，500ng/ml，所述校準(zhǔn)品的濃度為100，500ng/ml;清洗濃縮液：含有 Tween-20和Pro cl in-300的緩沖液;稀釋液:含有牛血清白蛋白組分五(BSA V)的溶液;發(fā)光 底物:金剛燒的衍生物IUMIP冊(cè)S530，所述金剛燒的衍生物IUMIP冊(cè)S530的濃度為10μg/ml;
[0203] 本實(shí)施例一種IV型膠原蛋白（IV-C0L)測(cè)試試劑盒，由下述體積比組成的：磁分離 試劑6，試劑化6，試劑R2 6，校準(zhǔn)品6，質(zhì)控品3，校準(zhǔn)品3，清洗濃縮液30，稀釋液20，發(fā)光底物 40；
[0204] 本實(shí)施例的測(cè)試方法，包括下列步驟：
[0205] (1)使用前，需使用試劑盒內(nèi)校準(zhǔn)品（選)進(jìn)行曲線校正，并用質(zhì)控品進(jìn)行質(zhì)量控 審IJ。測(cè)試結(jié)果在質(zhì)控范圍內(nèi)方可進(jìn)行樣本的檢測(cè)。
[0206] (2)加6份IV-C0L標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品、待測(cè)標(biāo)本至對(duì)應(yīng)試管底部；
[0207] (3)加6份試劑化至每一試管中；
[0208] (4)加6份試劑R2至每一試管中；
[0209] (5)加6份磁分離試劑至每一試管中；
[0210] (6)用塑料薄膜覆蓋試管，多管混勻器輕輕振蕩試管架30s后，置37°C水浴30分鐘；
[0211] (7)試管連架放至磁分離器上，確保每支試管都與分離器表面接觸，沉淀2分鐘。緩 慢的倒轉(zhuǎn)分離器倒出上清液，把倒轉(zhuǎn)的試管連同分離器一起放在濾紙上，用力拍擊分離器 底部W除去粘在管壁上的所有液滴；
[0212] (8)清洗濃縮液用純化水稀釋7倍后，加26.7份稀釋后的清洗液至每一試管中，置 多管混勻器上輕輕振蕩混勻30s。加樣時(shí)應(yīng)避免加樣力度過(guò)大而導(dǎo)致磁珠瓣出?；靹蛞獜?底；
[0213] (9)重復(fù)步驟6、7、6-遍；
[0214] (10)加40份底物溶液至試管中混勻3秒，迅速用準(zhǔn)備好的發(fā)光檢測(cè)儀進(jìn)行檢測(cè)。
[0215] (11)如遇到高值冊(cè)0K樣本，建議臨床醫(yī)師根據(jù)其余測(cè)試指標(biāo)選擇合適的稀釋倍數(shù) 用稀釋液對(duì)樣品進(jìn)行稀釋。
[0216] 本實(shí)施例采用所述的試劑盒各組分的配制方法與實(shí)施例1相同。
[0217] 實(shí)施例5:臨床試驗(yàn)：
[0218] 1、檢測(cè)數(shù)據(jù)
[0219] 標(biāo)本采自120例正常體檢、供血者。樣本體檢結(jié)果均無(wú)肝、腦、腎、消化道疾病，半年 內(nèi)無(wú)輸血和大手術(shù)史，婦女不在妊娠期和哺乳期。分離血清進(jìn)行檢測(cè)，將測(cè)值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分 析，得出正常血清參考范圍：40~13化g/ml。本數(shù)據(jù)僅供參考，不同地區(qū)、不同個(gè)體W及采用 不同方法進(jìn)行檢測(cè)，所測(cè)得的IV-(X)L水平也會(huì)有所不同，建議各實(shí)驗(yàn)室建立自己的正常值 范圍。不可僅憑本方法得出的IV-〇)L值作出診斷，僅作為中間數(shù)據(jù)參考作用，應(yīng)結(jié)合臨床其 他資料分析結(jié)果，包括病人的具體情況和治療狀況。通過(guò)其他方法得到的樣品中的IV-(X)L 濃度值與本試劑盒測(cè)定結(jié)果不具有直接的可比性。超出試劑盒測(cè)定范圍的樣本，系統(tǒng)將無(wú) 法給出確切的數(shù)值。如欲測(cè)定其確切的結(jié)果，建議稀釋后再進(jìn)行測(cè)定。本試劑盒的檢測(cè)結(jié)果 僅供臨床參考，不能單獨(dú)作為確診或排除病例的依據(jù)，為達(dá)到診斷目的，此檢測(cè)結(jié)果要與臨 床檢查、病史和其它的檢查結(jié)合使用。本品可用于血清樣本的測(cè)定，用于其他體液樣本中 IV-C0L濃度測(cè)定的可靠性未得到充分確認(rèn)。
[0220] 2、本發(fā)明試劑盒性能指標(biāo)
[0221 ]分析靈敏度定義為:對(duì)20次零標(biāo)準(zhǔn)品的測(cè)定，取其2倍的平均偏差，其在標(biāo)準(zhǔn)曲線 上所對(duì)應(yīng)的濃度即為分析靈敏度;分析靈敏度:最低檢測(cè)限為lOng/ml;精密性:用不同濃度 的兩個(gè)樣本進(jìn)行檢測(cè)，各重復(fù)檢測(cè)10次，其變異系數(shù)CV% ^ 10.0 % ;用Ξ個(gè)批號(hào)試劑盒檢測(cè) 同一份樣本，則Ξ批試劑盒之間的批間變異系數(shù)CV% ^ 15.0% ;線性系數(shù):r > 0.9900;線性 范圍：40-140ng/ml:
[0222] 與主要類似物的交叉反應(yīng)情況(表9):
[0223]
[0224] 結(jié)果顯示，本發(fā)明試劑盒具有良好的靈敏性、精密型、線性范圍廣，且具有良好的 抗干擾能力。
[0225] 最后說(shuō)明的是，W上優(yōu)選實(shí)施例僅用W說(shuō)明本發(fā)明的技術(shù)方案而非限制，盡管通 過(guò)上述優(yōu)選實(shí)施例已經(jīng)對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)的描述，但本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可W在 形式上和細(xì)節(jié)上對(duì)其作出各種各樣的改變，而不偏離本發(fā)明權(quán)利要求書所限定的范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種IV型膠原蛋白檢測(cè)試劑盒，包括:磁分離試劑、試劑Ri、試劑R2、清洗濃縮液、稀釋 液和發(fā)光底物，其中： 所述磁分離試劑中含有標(biāo)記有小鼠抗人IV-COL的單克隆抗體的納米磁性微球； 所述試劑辦中含有堿性磷酸酶標(biāo)記的IV-COL抗體； 所述試劑R2中含有牛γ球蛋白IgG; 所述清洗濃縮液中含有Tween-20; 所述稀釋液中含有BSA; 所述發(fā)光底物中含有IUMIPH0S530。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述磁分離試劑中標(biāo)記有小鼠抗人IV-COL的單克隆抗體的納米磁性微球的濃度為100~200yg/mL。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑R1中堿性磷酸酶標(biāo)記的IV-COL 抗體的濃度為〇. 5~2yg/mL。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑R2中牛γ球蛋白IgG 0.9yg/ mL；TRIS 1.56g/L；NaCl 4.23g/L；Proclin 0.2mL/L〇5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述清洗濃縮液中包括:TRIS 12.54g/ L；NaCl 325.6g/L；Tween20 5g/L；Proclin300 0.2mL/L〇6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述稀釋液中包括:BSA V 60g/L;NaCl 9g/L； Prod in-300 0.5mL/L〇7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述發(fā)光底物中包括：IUMIPH0S530 250mL/L;TRIS 2.35g/L;NaCl 6.41g/L;Na2S〇3 0.002g/L;Proclin-300 0.2mL/L。8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的試劑盒，其特征在于，其中還包括標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和/或標(biāo)準(zhǔn) 品； 所述標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和標(biāo)準(zhǔn)品中含有IV-COL抗原和BSA V。9. 權(quán)利要求1~8任一項(xiàng)所述的試劑盒用于非疾病診斷或治療目的IV-COL的磁微?；?學(xué)發(fā)光法檢測(cè)。10. 權(quán)利要求1~8任一項(xiàng)所述的試劑盒的使用方法，其特征在于，包括： 步驟1:將待測(cè)樣品與試劑R1、試劑R2、磁分離試劑混合，37 °C孵育30min; 步驟2:磁分離沉淀lmin后，棄上清液、以經(jīng)稀釋的清洗濃縮液清洗后，與發(fā)光底物混 合，測(cè)定發(fā)光值，根據(jù)發(fā)光值，以標(biāo)準(zhǔn)曲線法確定IV-COL濃度。
【文檔編號(hào)】G01N33/68GK105823893SQ201610325782
【公開(kāi)日】2016年8月3日
【申請(qǐng)日】2016年5月17日
【發(fā)明人】朱馳
【申請(qǐng)人】北京豪邁生物工程有限公司