專利名稱：異型雙功能全選擇素抑制劑的制作方法
異型雙功能全選擇素抑制劑
背景技術(shù)：
發(fā)明領(lǐng)域
本發(fā)明通常涉及用于調(diào)節(jié)由選擇素結(jié)合介導(dǎo)的過程的化合物、組 合物和方法，并且更特別地涉及選擇素調(diào)節(jié)劑及其用途，其中調(diào)節(jié)選 擇素介導(dǎo)的功能的所述選擇素調(diào)節(jié)劑包含特定的糖模擬物，所述糖模
擬物單獨(dú)存在或與被稱為BASAs (節(jié)氨基磺酸)的一類化合物中的成 員連接或與被稱為B AC As (千氨基羧酸)的 一 類化合物中的成員連接。
相關(guān)技術(shù)的描述
當(dāng)組織被感染或受損時(shí)，炎性過程將白細(xì)胞和其它免疫系統(tǒng)成分 引導(dǎo)至感染或損傷部位。在該過程中，白細(xì)胞在微生物的吞沒和消化 中起重要作用。因此，將白細(xì)胞征集至受感染的或受損的組織對(duì)于進(jìn) 行有效的免疫防御是關(guān)鍵的。
選擇素是一類結(jié)構(gòu)類似的細(xì)胞表面受體，其對(duì)于介導(dǎo)白細(xì)胞與內(nèi) 皮細(xì)胞結(jié)合是重要的。這些蛋白質(zhì)是l型膜蛋白，并由氨基末端凝集 素結(jié)構(gòu)域、表皮生長(zhǎng)因子(EGF)樣結(jié)構(gòu)域、不同數(shù)目的補(bǔ)體受體相關(guān)重 復(fù)、疏水性結(jié)構(gòu)域跨越區(qū)以及胞質(zhì)結(jié)構(gòu)域組成。結(jié)合相互作用看來是 由選擇素的凝集素結(jié)構(gòu)域與多種碳水化合物配體的接觸介導(dǎo)的。
存在三種已知的選擇素E-選擇素、P-選擇素和L-選擇素。E-選 擇素發(fā)現(xiàn)于成線狀排列于毛細(xì)血管內(nèi)壁的活化的內(nèi)皮細(xì)胞的表面上。 E-選擇素與碳水化合物sialyl-Lewisx (唾液酸化的LewisX)(SLeX)結(jié)合， SLeM乍為糖蛋白或糖脂存在于某些白細(xì)胞(單核細(xì)胞和嗜中性粒細(xì)胞) 的表面上，并幫助這些細(xì)胞在周圍組織被感染或被損傷的區(qū)域與毛細(xì) 血管壁粘附；并且E-選擇素還與sialyl-Lewisa(唾液酸化的Lewis3) (SLea) 結(jié)合，SLea在多種腫瘤細(xì)胞上表達(dá)。P-選擇素在發(fā)炎的內(nèi)皮和血小板 上表達(dá)，并且還識(shí)別SLeX和SLea,但P-選擇素還包含與硫酸化的酪氨酸相互作用的第二位點(diǎn)。通常當(dāng)毛細(xì)血管鄰近的組織被感染或被損
傷時(shí)，E-選擇素和P-選擇素的表達(dá)增加。L-選擇素在白細(xì)胞上表達(dá)。 選擇素介導(dǎo)的細(xì)胞間粘附是選擇素介導(dǎo)的功能的實(shí)例。
選擇素介導(dǎo)的功能的調(diào)節(jié)劑包括PSGL-1蛋白(及更小的肽片段)、 巖藻多糖、甘草甜素(和衍生物)、抗選擇素抗體、疏酸化乳糖衍生物 以及肝素。由于活性不夠、毒性、缺乏特異性、差的ADME特性和/ 或材料的可用性，上述調(diào)節(jié)劑均顯示不適用于藥物開發(fā)。
盡管選擇素介導(dǎo)的細(xì)胞粘附對(duì)于對(duì)抗感染和破壞外來物質(zhì)是必需 的，但是在某些情況下這樣的細(xì)胞粘附是不期望的或過度的，這導(dǎo)致 組織損傷，而不是修復(fù)。例如，很多病理學(xué)(如自身免疫病和炎性疾病、 休克和再灌注損傷)涉及異常的白細(xì)胞粘附。這種異常的細(xì)胞粘附也可 在移植和移植物排斥反應(yīng)中起作用。此外，某些循環(huán)癌細(xì)胞看來是利 用了炎性機(jī)制來結(jié)合活化的內(nèi)皮。在這種情況下，選擇素介導(dǎo)的細(xì)胞 間粘附的調(diào)節(jié)可以是期望的。
因此，現(xiàn)有技術(shù)中需要鑒別選擇素介導(dǎo)的功能的抑制劑，如選擇 素依賴的細(xì)胞粘附的抑制劑，并需要開發(fā)用這樣的化合物抑制與過度 的選擇素活性相關(guān)的疾病狀態(tài)的方法。本發(fā)明滿足了這些需要并進(jìn)一 步提供了其它相關(guān)的優(yōu)勢(shì)。
發(fā)明的簡(jiǎn)要描述
簡(jiǎn)而言之，本發(fā)明提供了用于調(diào)節(jié)由選擇素介導(dǎo)的過程的化合物、 組合物和方法。在本發(fā)明中，調(diào)節(jié)(如抑制或增強(qiáng))選擇素介導(dǎo)的功能 的化合物包含單獨(dú)存在的或與BASA或BACA連接的特定的糖才莫擬 物。這樣的化合物可與藥物可接受的載體或稀釋劑組合以形成藥物組 合物。所述化合物或組合物可用于調(diào)節(jié)(如抑制或增強(qiáng))選擇素介導(dǎo)的 功能的方法，如抑制選擇素介導(dǎo)的細(xì)胞間粘附的方法。
本發(fā)明的一方面提供具有下列通式的化合物<formula>formula see original document page 12</formula>
其中n-0-2，并且當(dāng)n = 2時(shí)R8獨(dú)立選擇；<formula>formula see original document page 12</formula>
R2 = H、 -C(=0)OX，其中X是C廣Cs烷基、d國(guó)Cs烯基、d-Cs炔 基 或 C廣C" 芳 基 、 -C(=0)NH(CH2)nNH2 、 -[C(=0)NH(CH2)nNHC(=0)]m(L)mZ，其中n-0-30， m-O-l， L是連接 物，并且Z是芐氨基磺酸、節(jié)氨基羧酸、聚乙二醇或具有上述通式的 第二化合物或其鹽以形成二聚體，其中所述第二化合物或其鹽的R2
具有m-O,不具有Z，并且是連接點(diǎn)；
<formula>formula see original document page 12</formula>
-0-C(=0)-X、 -NH2、 -NH-C(=0)-NHX或-NH國(guó)C(K))國(guó)X，其中n = 0-2
并且X獨(dú)立選自C廣Q烷基、CrCg烯基、d-Cs炔基、<formula>formula see original document page 12</formula><formula>formula see original document page 13</formula>
和
(CH2)n—COOH
，其中n = 0-10，
并且上述任一環(huán)化合物可被一至三個(gè)獨(dú)立選自下列取代基的取代基取 4戈Cl、 F、 C廣Cs坑l、 d-C8#|、 C廣Cs塊l、 C廣C!4芳l或OY， 其中Y是H、 d-Q烷基、C廣Cs烯基、CrCs炔基或C廣C"芳基；
HQ
r4 =
6'硫酸化的GlcNAc、 6'羧酸化的GlcNAc、 6'硫酸化的GalNAc、 6，疏
酸化的半乳糖、6'羧酸化的半乳糖或 ②OH<formula>formula see original document page 13</formula>
其中W是芳基、雜芳基、環(huán)己烷、叔丁烷、金剛烷或三唑，并且任一 W可被一至三個(gè)獨(dú)立選自下列取代基的取代基取代Cl、 F、 d-Cs烷 基、d誦Q烯基、C廣Cs炔基或OY，其中Y是H、 d國(guó)Cs烷基、C廣Q 烯基、C廣Cs炔基或C廣C"芳基；
r5-H,或r4與r5共同形成HOOC)<formula>formula see original document page 13</formula>
其中r"是芳基、雜芳基、
n<formula>formula see original document page 14</formula>其中n = 0-10,并且上述任一環(huán)化合物可被一至三個(gè)獨(dú)立選自下列取代 基的取代基取代Cl、 F、 d-Cs烷基、d-Q烯基、d-Cs炔基或OY， 其中Y是H、 C廣Q烷基、C廣Cs烯基或C廣Cs炔基；
R6 = H、巖藻糖、甘露糖、阿拉伯糖、半乳糖或多元醇；
R7 = H、 C廣Cg烷基、d-Cg烯基、d-C8炔基或R8, ;并且其中n = 0-3并且X獨(dú)立選自H、 OH、 Cl、 F、 N3、 NH2、 C廣Cs烷基、 C廣Cs烯基、C廣Q炔基、d-C14芳基、Od國(guó)Q烷基、OC廣Cs烯基、OC廣Q 炔基和OCrd4芳基，并且上述任一環(huán)化合物可被一至三個(gè)獨(dú)立選自 下列取代基的取代基取代Cl、 F、 d-Cs烷基、CrQ烯基、CrC8炔 基、C廣C!4芳基或OY，其中Y是H、 C廣Cs烷基、C廣Q烯基、C廣Q
炔基或C廣C!4芳基。
本發(fā)明的化合物包括其生理可接受的鹽。本發(fā)明的化合物與藥物 可接受的載體或稀釋劑聯(lián)合提供本發(fā)明的組合物。在本文的化學(xué)通式 中，從所描述的原子或碳延伸的線代表連接點(diǎn)(并且不代表甲基)，其 中該碳是通過其它兩條線相交而暗示的。
在本發(fā)明的實(shí)施方案中，W是巖藻糖
在實(shí)施方案中，W是H。 在實(shí)施方案中，R"是
<formula>formula see original document page 15</formula>
在實(shí)施方案中，R"是R9 ,其中RS如上文通式中所定義。 在實(shí)施方案中，W是環(huán)己烷。 在實(shí)施方案中，W是半乳糖。在實(shí)施方案中，118是 或/ 。<formula>formula see original document page 16</formula>
在實(shí)施方案中，R2是-[C(-0)NH(CH2)nNHC(K))]m(L)mZ，其中n、 m、 L和Z如上文通式中所定義。
在實(shí)施方案中，Z是爺氨基磺酸、千氨基羧酸或聚乙二醇。 在實(shí)施方案中，RS是-0-C(K))-X，其中X如上文通式中所定義。
在實(shí)施方案中，X是^一或 N^。 在實(shí)施方案中，RS是H。 在實(shí)施方案中，L是聚乙二醇或噻二唑。
在實(shí)施方案中，化合物包含本發(fā)明的化合物，還包含診斷劑或治 療劑。這樣的化合物可與藥物可接受的載體或稀釋劑組合以形成本發(fā) 明的組合物的一個(gè)實(shí)施方案。
本發(fā)明的另 一方面提供了使用本發(fā)明的化合物或組合物調(diào)節(jié)選擇 素介導(dǎo)的功能的方法。這樣的化合物或組合物能夠被用于例如抑制或 增強(qiáng)選擇素介導(dǎo)的功能，如選擇素介導(dǎo)的細(xì)胞間相互作用?；衔锘?組合物能夠用在與表達(dá)選擇素的細(xì)胞接觸的方法中，所述化合物或組 合物的量為有效調(diào)節(jié)選擇素的功能的量?；衔锘蚪M合物能夠用在對(duì) 患者給藥的方法中，所述患者需要所述化合物或組合物以抑制與過度 的選擇素介導(dǎo)的功能(如過度的選擇素介導(dǎo)的細(xì)胞間粘附)相關(guān)的疾病 狀態(tài)的發(fā)展，所述化合物或組合物的量為有效抑制這樣的疾病狀態(tài)發(fā) 展的量。這樣的疾病狀態(tài)的實(shí)例包括炎性疾病、自身免疫病、感染、 癌、休克、血栓形成、創(chuàng)傷、燒傷、再灌注損傷、血小板介導(dǎo)的疾病、 白細(xì)胞介導(dǎo)的肺損傷、脊髓損傷、消化道粘膜異常、骨質(zhì)疏松癥、關(guān) 節(jié)炎、哮喘和變態(tài)反應(yīng)?；衔锘蚪M合物能夠用在對(duì)接受移植組織的 患者給藥的方法中，所述化合物或組合物的量為有效抑制移植組織排 斥反應(yīng)的量。化合物或組合物能夠以有效量用在使試劑(如診斷劑或治療劑)靶向于表達(dá)選擇素的細(xì)胞的方法中，這是通過使這類細(xì)胞接觸與 所述化合物或組合物連接的試劑來實(shí)現(xiàn)的?；衔锘蚪M合物能夠用于 制備用于上述任何用途的藥物。
參考下列詳細(xì)說明和附圖，本發(fā)明的這些和其它方面會(huì)變得顯而 易見。從而將本文公開的所有參考文獻(xiàn)均全部引入作為參考，如同將 每一參考文獻(xiàn)均單獨(dú)并入。
附圖的簡(jiǎn)要說明


圖1A和1B是說明BASAs的合成的圖。
圖2是說明BACA的合成的圖。
圖3是說明糖模擬物(XIX)的合成的圖。
圖4是說明糖模擬物(xxvm)的合成的圖。
圖5是說明PEG化的糖模擬物(XXX)的合成的圖。
圖6是說明PEG化的糖模擬物(XXXI)的合成的圖。
圖7A、 7B和7C是說明PEG化的BASAs (XXXII和XXXIII)和 PEG化的BACAs (XXXVI和XXXVIa)的合成的圖。
圖8A、 8B和8C是說明糖模擬物-BASA (圖8A和8C)和糖模擬物 -BACA(圖8B)的合成的圖。
圖9A、9B和9C是說明糖模擬物-BASA (圖9A和9C)和糖模擬物 -BACA(圖9B)的合成的圖。
圖IO是說明糖模擬物的合成的圖。
圖11是說明糖模擬物的合成的圖。
圖12是說明糖模擬物的合成的圖。
圖13是說明糖模擬物-BASA的合成的圖。
圖14是說明糖模擬物-BASA的合成的圖。
圖15是說明糖模擬物-BASA的合成的圖。
圖16是說明糖模擬物的合成的圖。
圖17A和17B顯示在結(jié)合測(cè)定中糖模擬物抑制劑對(duì)E-選擇素(圖 17A)和P-選擇素(圖17B)的體外活性的比較。A和B是不同于本發(fā)明 的糖模擬物-BASAs。 C是圖8C的糖模擬物-BASA。圖18顯示圖8C的糖模擬物-BASA對(duì)嗜中性粒細(xì)胞遷移的作用。 A是僅包括載體并且E是陽性對(duì)照(混合抗體)。B、 C和D是劑量分別 為5 mg/kg、 10 mg/kg和20 mg/kg的圖8C的糖模擬物-BASA。
圖19顯示糖模擬物抑制劑在鼠氣嚢模型中對(duì)嗜中性粒細(xì)胞遷移 的作用的比較。A是IL-l/3+載體。B是IL-lj3+圖13的糖模擬物 -BASA。 C是IL-1/3+圖8C的糖模擬物-BASA。 D是IL-1/3+混合抗體 (陽性對(duì)照)。*P<0.05對(duì)A(載體組)。
發(fā)明的詳細(xì)i兌明
如上文指出的，本發(fā)明提供了用于調(diào)節(jié)選擇素-介導(dǎo)的功能的選擇 素調(diào)節(jié)劑、其組合物和方法。這樣的調(diào)節(jié)劑可在體外或體內(nèi)，如下文 進(jìn)一步詳細(xì)討論的多種環(huán)境中用于調(diào)節(jié)(如抑制或增強(qiáng))選擇素介導(dǎo)的 功能。選擇素介導(dǎo)的功能的實(shí)例包括細(xì)胞間粘附以及血管生成過程中 新的毛細(xì)血管的形成。
選擇素調(diào)節(jié)劑
本文所用的術(shù)語"選擇素調(diào)節(jié)劑"是指調(diào)節(jié)(如抑制或增強(qiáng))選擇 素介導(dǎo)的功能，如調(diào)節(jié)選擇素介導(dǎo)的細(xì)胞間相互作用的分子。選擇素 調(diào)節(jié)劑可完全由本發(fā)明的糖模擬物化合物組成，或者可由與BASA (芐 氨基磺酸)或BACA(千氨基羧酸)連接的這樣的糖模擬物組成，或者可 在上述任一組成中包含一種或多種另外的分子組分。
本發(fā)明的不帶有BASA或BACA的選擇素調(diào)節(jié)劑優(yōu)選用于抑制 E-選擇素介導(dǎo)的功能。向本發(fā)明的糖模擬物中加成BASA或BACA時(shí)， 選擇素調(diào)節(jié)劑也增加了調(diào)節(jié)P-和L-選擇素介導(dǎo)的功能的能力。
的處<formula>formula see original document page 19</formula>
其中<formula>formula see original document page 19</formula>
其中n-0-2，并且當(dāng)n-2時(shí)R8獨(dú)立選擇；
R2 = H、 -C(=0)OX，其中X是d-Q烷基、d國(guó)Q烯基、d國(guó)Cs炔 基 或 d-C" 芳 基 、 -C(=0)NH(CH2)nNH2 、 -[C(=0)NH(CH2)nNHC(=0)]m(L)mZ，其中n-0國(guó)30， m=0-l, L是連接 物，并且Z是千氨基磺酸、千氨基羧酸、聚乙二醇或具有上述通式的 第二化合物或其鹽以形成二聚體，其中所述第二化合物或其鹽的R2 具有m-0，不具有Z,并且是連接點(diǎn)；
<formula>formula see original document page 19</formula>
R3=-OH，-O-C(=O)-X，-NH2, -NH-C(=O)-NHX 或 -NH-C(=O)-X， 其中 n=0-2 并且X獨(dú)立選自C1-C8烷基，C1-C8烯基，C1-C8炔基
<formula>formula see original document page 19</formula><formula>formula see original document page 20</formula>
，其中n=0-10，
并且上述任一環(huán)化合物可被一至三個(gè)獨(dú)立選自下列取代基的取代基取 代Cl、 F、 C廣Cg烷基、C廣Cs烯基、C廣Cs炔基、C廣d4芳基或OY, 其中Y是H、 C廣Cs烷基、d-Cg烯基、C廣C8炔基或C廣d4芳基；
<formula>formula see original document page 20</formula>
6'斬b酸化的GlcNAc、 6'羧酸化的GlcNAc、 6'硫酸化的GalNAc、 6，硫
酸化的半乳糖、6，羧酸化的半乳糖或 <formula>formula see original document page 20</formula>其中W是芳基、雜芳基、環(huán)己烷、叔丁烷、金剛烷或三唑，并且任一 W可被一至三個(gè)獨(dú)立選自下列取代基的取代基取代Cl、 F、 d-Cs烷 基、C廣Cs烯基、C廣Cs炔基或OY，其中Y是H、 C廣Cg烷基、d畫Q 烯基、C廣Q炔基或C廣C,4芳基；
<formula>formula see original document page 20</formula>
r5 = h，或114與r5共同形成HOCK5
其中r1q是芳基、雜芳基、<formula>formula see original document page 20</formula><formula>formula see original document page 21</formula>
其中n = 0-10，并且上述任一環(huán)化合物可被一至三個(gè)獨(dú)立選自下列取代 基的取代基取代Cl、 F、 d-Q烷基、d-Cs烯基、CrCs炔基或OY, 其中Y是H、 C廠Cs烷基、C1－C8烯基或C1－C8炔基；
R6 = H、巖藻糖、甘露糖、阿拉伯糖、半乳糖或多元醇；
R7 = H、 d國(guó)Cs烷基、d-Q烯基、d陽Cs炔基或R8Z <formula>formula see original document page 21</formula>;并且
R8 = H、 d-C8烷基、d國(guó)Q烯基、d-C8炔基、、
<formula>formula see original document page 21</formula>其中n = 0-3并且X獨(dú)立選自H、 OH、 Cl、 F、 N3、 NH2、 C廣Cs烷基、 C廠Cg烯基、d-C8炔基、C廣C"芳基、Od-C8烷基、OC廣Cs烯基、OC廣Cs 炔基和OCrd4芳基，并且上述任一環(huán)化合物可被一至三個(gè)獨(dú)立選自 下列取代基的取代基取代Cl、 F、 d-Cg烷基、d-Cs烯基、C廣Cs炔 基、C廣d4芳基或OY,其中Y是H、 C廣Cs烷基、C廣Cs烯基、d-C8
炔基或C廣Cm芳基。
本文所用的"CrQ烷基"是指具有1至8個(gè)碳原子并且可為直鏈 或支鏈的烷烴取代基。實(shí)例為曱基、乙基、丙基、異丙基、丁基和叔 丁基。"CVQ烯基"是指具有l(wèi)至8個(gè)碳原子、至少一個(gè)碳-碳雙鍵、 并且可為直鏈或支鏈的烯烴取代基。除了具有至少 一個(gè)碳-碳雙鍵外， "C廣C8烯基，，的實(shí)例與"C廣Cs烷基"的實(shí)例類似。"C廣C8炔基"是 指具有1至8個(gè)碳原子、至少一個(gè)碳-碳叁鍵、并且可為直鏈或支鏈 的炔烴取代基。除了具有至少一個(gè)碳-碳叁鍵外，"CrCs炔基"的實(shí) 例與"Q-C8烷基"的實(shí)例類似。"芳基"是指在一個(gè)或多個(gè)被鍵分開 的或稠合的環(huán)中具有1至14個(gè)碳原子的芳香取代基。除了芳香取代基 具有至少一個(gè)代替環(huán)碳的雜原子(如N、 O或S)之外，"雜芳基"與"芳 基，，類似。芳基和雜芳基的實(shí)例包括苯基、萘基、吡啶基、嘧啶基、 三唑并、呋喃基、噪唑基、苯硫基、喹啉基和聯(lián)苯基。本文所用的術(shù) 語"獨(dú)立選擇"是指選擇相同的或不同的取代基。
本文所用的聚乙二醇("PEG")是指多個(gè)乙二醇單元，以及那些具 有一個(gè)或多個(gè)取代基的多個(gè)乙二醇單元(如二羧基化的PEG)。具有或 不具有取代基的PEG對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員是公知的。在本發(fā)明中，PEG 能夠用做選擇素調(diào)節(jié)劑上的取代基，或用作將其它基團(tuán)或化合物與選 擇素調(diào)節(jié)劑連接的連接物，或者選擇素調(diào)節(jié)劑可帶有超過一個(gè)PEG。
當(dāng)?shù)诙x擇素調(diào)節(jié)劑與第 一選擇素調(diào)節(jié)劑連接時(shí)，形成選擇素調(diào)200680037714.3
節(jié)劑的二聚體(即二價(jià)分子)。多種連接物可用于結(jié)合這兩個(gè)選擇素調(diào)
節(jié)劑。例如，PEG可用作連接物以制備二聚體。本文所用的"二聚體" 能夠是同型二聚體或異型二聚體。同型二聚體是指其中結(jié)合在一起的 兩個(gè)選擇素調(diào)節(jié)劑相同(獨(dú)立于用于互相連接的取代基)的二聚體。異 型二聚體是指其中兩個(gè)選擇素調(diào)節(jié)劑(獨(dú)立于連接取代基)不相同的二聚體。
本發(fā)明的選擇素調(diào)節(jié)劑可在上述通式的W處帶有如上文所述的 唾液酸或唾液酸模擬物。例如，唾液酸的己糖環(huán)可被環(huán)己烷代替。選 擇素調(diào)節(jié)劑中唾液酸的存在增強(qiáng)P-選擇素結(jié)合。當(dāng)僅期望E-選擇素結(jié) 合(并且無E-和P-選擇素結(jié)合)時(shí)，在選擇素調(diào)節(jié)劑中唾液酸模擬物代 替唾液酸。
除了用唾液酸代替唾液酸模擬物之外(或者與這種代替聯(lián)合)，可 通過加入BASA或BACA而增強(qiáng)P-選擇素結(jié)合。如上文所^^開的，本 發(fā)明的選擇素調(diào)節(jié)劑化合物可在W處具有"Z"，并且Z可以是BASA 或BACA。向本發(fā)明的缺乏唾液酸的選擇素調(diào)節(jié)劑化合物中加入 BASA或BACA能夠?qū)⑦x擇素調(diào)節(jié)劑由選擇性結(jié)合E-選擇素的化合物 轉(zhuǎn)變?yōu)榻Y(jié)合E-和P-選擇素的化合物。在化合物保留調(diào)節(jié)選擇素介導(dǎo)的 功能的能力的條件下，BASA或BACA包括BASA或BACA的一部分 或類似物，或二者中任一種的一部分的一部分或類似物。可將PEG加 入至含有或不含有BASA (或BACA)的選擇素調(diào)節(jié)劑中。PEG還可用 于將BASA或BACA與選擇素調(diào)節(jié)劑連接。
在本發(fā)明中，BASA是低分子量的硫酸化化合物，其具有與選擇 素相互作用的能力。所述相互作用調(diào)節(jié)或有助于調(diào)節(jié)(如抑制或增強(qiáng)) 選擇素介導(dǎo)的功能(如細(xì)胞間相互作用)。它們或者以其質(zhì)子化的酸形
式存在，或者以鈉鹽的形式存在，盡管鈉可用鉀或任何其它藥物可接 受的相反離子代替。代表性的BASA具有下列結(jié)構(gòu)保留與選擇素相互作用能力(如本文所述，該相互作用調(diào)節(jié)或有助
于調(diào)節(jié)選擇素介導(dǎo)的功能)的BASA的部分也是本發(fā)明的選擇素調(diào)節(jié) 劑的BASA成分。這樣的部分通常包含存在于BASA結(jié)構(gòu)中的至少一 個(gè)芳香環(huán)。在某些實(shí)施方案中，部分可包含單一的芳香環(huán)、多個(gè)這樣 的環(huán)或?qū)ΨQ的BASA分子的一半。
如上所述，BASA及其部分的類似物(二者均具有如上所述的生物 特性)也^皮包含在本發(fā)明中，如通過選擇素調(diào)節(jié)劑的BASA成分。本文 所用的"類似物，，是由于化學(xué)部分的一次或多次添加、刪除和/或取代 而不同于BASA或其部分的化合物，所述添加、刪除和/或取代使得所 述類似物抑制選擇素介導(dǎo)的相互作用的能力沒有減少。例如，類似物 可包含S至P的取代(如用磷酸鹽基團(tuán)代替硫酸鹽基團(tuán))。其它可能的 修飾包括(a)環(huán)大小的修飾(如任何環(huán)可包含4至7個(gè)碳原子)；(b)稠 合的環(huán)的數(shù)目的變化(如單一的環(huán)可被含有多至3個(gè)稠合環(huán)的多環(huán)部分 代替，多環(huán)部分可被單一的未稠合的環(huán)代替，或者多環(huán)部分中稠合環(huán) 的數(shù)目可以變化)；(c)環(huán)取代，其中與芳香環(huán)中的碳原子共價(jià)結(jié)合的氫 原子或其它部分可凈皮多種部分中的任一種取代，所述部分例如F、 Cl、 Br、 I、 OH、 0國(guó)烷基(C1國(guó)8)、 SH、 N02、 CN、 NH2、 NH-烷基(Cl-8)、 N-(烷基)2、 S03M(其中M-H+、 Na+、 K+或其它藥物可接受的相反離 子)、C02M、 P04M2、 S02NH2、烷基(Cl-8)、芳基(C6-10)、 COr烷基 (Cl-8)、 -CF2X (其中X能夠是H、 F、烷基、芳基或?；鶊F(tuán))和碳水 化合物；以及(d)對(duì)連接部分(即位于BASA分子中的環(huán)之間的部分)的 修飾，其中諸如烷基、酯、酰胺、酐和氨基曱酸酯基團(tuán)的基團(tuán)可互相 取代。
某些BASA部分和類似物包含下列一般結(jié)構(gòu)之一在該結(jié)構(gòu)中，n可為0或1， Xi可為-P02M、 -8021^或《？2-(其中M 是藥物可接受的相反離子，如氫、鈉或鉀)，W可為-OH、孑或-<:02114 (其中R4可為-H或-(CH2)nrCH3并且m是0至3的數(shù)字)，R2可為-H、 -P03M2、 -S03M2、 -CH2-P03M2、 -CH2-S03M2、 -CF3或誦(CH2)m-C(R6)H-R5 或R9-N(R10)-, R3可為-H、 -(CH2)m-C(R6)H-R5或R9-N(R10)-(其中R5
和W可獨(dú)立選自-h、 -(:02-117和"^11-118， 117和rs可獨(dú)立逸自氫和包 含一個(gè)或多個(gè)烷基基團(tuán)、芳香部分、氨基基團(tuán)或羧基基團(tuán)的部分，并
且r9和R"可獨(dú)立選自-H、 -(CH2)m-CH3、 -CH2-Ar、 -CO-Ar，其中m 是0至3的數(shù)字并且Ar是芳香部分(即任何含有至少一個(gè)取代的或未 取代的芳香環(huán)的部分，其中所述環(huán)直接與上述的-CH2-或-CO-基團(tuán)鍵 接》。
BASA的其它部分和類似物包含下列一般結(jié)構(gòu)
S03M y-Rj
在該結(jié)構(gòu)中，Rt和R2可獨(dú)立選自(i)氫，(ii)包含一個(gè)或多個(gè)烷基基團(tuán)、 芳香部分、氨基基團(tuán)或羧基基團(tuán)的部分，以及(iii) -CO-R3 (其中R3包含如上所述的烷基或芳香部分)并且M是藥物可接受的相反離子。
由本文所述的結(jié)構(gòu)和取代基的各種組合得到的單獨(dú)化合物，或化 合物組被本申請(qǐng)公開至如同每一化合物或每一組化合物均被單獨(dú)提出 的程度。因此，具體結(jié)構(gòu)和/或具體取代基的選擇在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
代表性的BASA部分和類似物包括在圖1A-1B所示的化合物中。 對(duì)本領(lǐng)域普通技術(shù)人員顯而易見的是，可對(duì)這些圖中所示的化合物進(jìn) 行修飾，而不對(duì)其作為選擇素調(diào)節(jié)劑起作用的能力有相反的影響。這 樣的4務(wù)飾包括如上所述的刪除、添加和取代。
BACA除了具有羧酸基團(tuán)代替磺酸基團(tuán)之外，該化合物類似于 BASA。例如，上述BASA化合物的磺酸基團(tuán)可被羧酸基團(tuán)代替。因 此，對(duì)BASA的上述公開通過參考的方式#1并入到BACA的描述中。
BACA的實(shí)例包括
<formula>formula see original document page 26</formula>
其中X是F或C1; Y是H、 -C(=0)(0-CH2CH2)n或-c^0)(CH2)n,其中 n = 0-8;并且Z是H、 C廣Q烷基、C廣Cg烯基或C廣Q炔基。
如上所述，BASA或BACA可通過連接物("L")在W處與本發(fā) 明化合物結(jié)合。通常連接物首先與糖模擬物或BASA/BACA之一連接， 然后與另 一個(gè)反應(yīng)。能夠以多種途徑實(shí)現(xiàn)BASA或BACA與特定糖模 擬物的連"t妻以形成選擇素調(diào)節(jié)劑。BASA或BACA或糖^f莫擬物帶有的
(或向其中加入的)連接物可包括間隔基團(tuán)，如-(CH2)n-或-0(CH2)n-,其中n通常為1至20(包括該范圍內(nèi)任何整數(shù)范圍)。連接物的實(shí)例為糖 模擬物上的-NH2，如當(dāng)其包括短間隔基團(tuán)時(shí)的-CH2-NH2。在實(shí)施方案 中，-(:112-;^112在R1處與糖模擬物連接，其然后可用于與BASA或 BACA連接。最筒單的連接方法是將BASA或BACA還原胺化至含有 還原末端(端基異構(gòu)的羥基/醛)的糖模擬物。這是通過簡(jiǎn)單地將BASA 或BACA反應(yīng)至還原末端，隨后將形成的亞胺還原(如用在pH 4.0用 NaCNBH3)而實(shí)現(xiàn)的。最通常的方法需要簡(jiǎn)單地將活化的連接物通過在 端基異構(gòu)位置的O、 S或N雜原子(或C原子)與糖模擬物連接。對(duì)于 碳水化合物已廣泛研究了這類連接的方法學(xué)，并且通過適當(dāng)選擇方法 學(xué)和/或保護(hù)基團(tuán)很容易實(shí)現(xiàn)端基異構(gòu)選擇性?？赡艿奶擒蘸铣煞椒ǖ?實(shí)例包括Lewis酸催化的與鹵素或全乙?；?Koenigs Knorr反應(yīng))的 鍵形成、三氯乙酰亞胺酯鍵形成、硫代糖苷活化和偶聯(lián)、己烯糖活化 和偶聯(lián)、正戊烯基偶聯(lián)、膦酸酯同系化(Homer-Wadsworth-Emmons反 應(yīng))等等?；蛘?，可將連接物連接在除端基異構(gòu)部分以外的部分上的位 置。最易接近的連接位置是在糖模擬物的6羥基(6-0H)位置(伯醇)。 連接物在6-OH處的連接能夠很容易通過多種方式實(shí)現(xiàn)。實(shí)例包括氧 陰離子(通過用堿進(jìn)行脫質(zhì)子化作用形成的醇陰離子)與適當(dāng)?shù)挠H電試 劑如烷基/?；濉⑼榛??；然蛲榛?酰基磺酸酯的反應(yīng)，通過與磺
酸酯氯化物或POCl3反應(yīng)進(jìn)行醇的活化并隨后用親核試劑取代，將醇
氧化成用于偶聯(lián)的醛或羧酸，或者甚至使用Mitsunobu反應(yīng)引入不同 的官能團(tuán)。連接物一旦連接，然后其被官能化以用于與BASA或BACA 上適當(dāng)?shù)挠H核試劑反應(yīng)(或反之亦然)。這通常是通過使用硫代光氣和 胺制備硫脲連接的異型雙功能配體，方酸二乙酯連接(同樣用胺進(jìn)行) 和/或筒單的烷基/?；磻?yīng)而實(shí)現(xiàn)的。另外能夠使用的方法包括傳統(tǒng)
使用糖基/巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶和/或寡糖基轉(zhuǎn)移酶(OST)的化學(xué)-酶合成 技術(shù)。
連接物的實(shí)施方案包括<formula>formula see original document page 28</formula>二噢二唑氧化物
一剛OC
CONH
通過p塞吩的?；?br> <formula>formula see original document page 28</formula>
N-戊烯?；瓦€原胺化 通過雙功能NHS試劑的偶聯(lián)
其它連接物(如PEG)是本領(lǐng)域技術(shù)人員熟悉的或者存在于本公開中 本發(fā)明的化合物或其生理可接受的鹽具有通式
<formula>formula see original document page 28</formula>
其中R^I^如上文所定義,
在優(yōu)選實(shí)施方案中，W是巖藻糖: 在優(yōu)選實(shí)施方案中，R7;lH。
<formula>formula see original document page 28</formula><formula>formula see original document page 29</formula>
在優(yōu)選實(shí)施方案中
R4是
<formula>formula see original document page 29</formula>
在優(yōu)選實(shí)施方案中 在優(yōu)選實(shí)施方案中 在優(yōu)選實(shí)施方案中
R"是 R9 ,其中W如上文所定義,
w是環(huán)己烷。
W是半乳糖。
在優(yōu)選實(shí)施方案中 在優(yōu)選實(shí)施方案中
r8是 <formula>formula see original document page 29</formul> 或/ 。
R2是國(guó)<formula>formula see original document page 29</formula>，其
中n、 m、 L和Z如上文所定義。
在優(yōu)選實(shí)施方案中，Z是千氨基磺酸、節(jié)氨基羧酸或聚乙二醇。
在優(yōu)選實(shí)施方案中，rs是-o-c(-o)-x，其中x如上文所定義。
n
在優(yōu)選實(shí)施方案中，x是<formula>formula see original document page 29</formula>或<formula>formula see original document page 29</formula>
在優(yōu)選實(shí)施方案中，rs是h。
在優(yōu)選實(shí)施方案中，L是聚乙二醇或噢二唑。
盡管本文所述的選擇素調(diào)節(jié)劑可在體內(nèi)充分靶向所期望的部位， 但是對(duì)于某些應(yīng)用，包括另外的靶向部分以有助于靶向一種或多種特 定組織可以是有益的。本文所用的"靶向部分"可以是任何物質(zhì)(如化 合物或細(xì)胞)，當(dāng)其與調(diào)節(jié)劑連接時(shí)增強(qiáng)調(diào)節(jié)劑向靶組織的傳送，因此 增加調(diào)節(jié)劑的局部濃度。靶向部分包括與耙組織的細(xì)胞結(jié)合或在靶組織附近結(jié)合的抗體或其片段、受體、配體和其它分子。連接通常是共 價(jià)的并可通過例如直接縮合或其它反應(yīng)實(shí)現(xiàn)，或通過雙功能或多功能 連接物實(shí)現(xiàn)。
對(duì)于某些實(shí)施方案，在選擇素調(diào)節(jié)劑上再連接有或者可選擇地連 接有藥物可以是有益的。本文所用的術(shù)語"藥物，，是指旨在對(duì)哺乳動(dòng) 物給藥以預(yù)防或治療疾病或其它不期望的疾病狀態(tài)的任何生物活性試 劑。藥物包括激素、生長(zhǎng)因子、蛋白、肽和其它化合物?？赡艿乃幬?br> 的實(shí)例包括抗腫瘤劑(如5-氟尿嘧啶和偏端霉素)、整合蛋白激動(dòng)劑/拮 抗劑(如環(huán)RGD肽)、細(xì)胞因子激動(dòng)劑/拮抗劑、組胺激動(dòng)劑/拮抗劑(如 苯海拉明和氯苯那敏)、抗生素(如氨基糖芬和頭孢菌素)以及氧化還原 活性生物試劑(如谷胱甘肽和硫氧還蛋白)。在其它實(shí)施方案中，診斷 的或治療的放射性核素可與選擇素調(diào)節(jié)劑連接。在很多實(shí)施方案中， 試劑可直接或間接與選擇素調(diào)節(jié)劑連接。
本文所述的調(diào)節(jié)劑可存在于藥物組合物中。藥物組合物包含與一 種或多種藥物或生理可接受的載體、稀釋劑或賦形劑組合的一種或多 種調(diào)節(jié)劑。這樣的組合物可包含緩沖劑(如中性緩沖鹽水或磷酸鹽緩沖 鹽水)、碳水化合物(如葡萄糖、甘露糖、蔗糖或葡聚糖)、甘露醇、蛋 白、多肽或氨基酸如甘氨酸、抗氧化劑、螯合劑如EDTA或谷胱甘肽、 佐劑(如氫氧化鋁)和/或防腐劑。在其它實(shí)施方案中，本發(fā)明的組合物 可被配制為凍干產(chǎn)物。本發(fā)明的組合物可被配制為用于任何適當(dāng)?shù)慕o 藥方式，包括例如局部、口、鼻、靜脈內(nèi)、顱內(nèi)、腹膜內(nèi)、皮下或肌 內(nèi)給藥。
藥物組合物還可再含有或者可選擇地含有一種或多種活性試劑， 如藥物(如上文所述的那些藥物)，其可以與調(diào)節(jié)劑連接或者可游離在 組合物中。
本文所述的組合物可以作為緩釋制劑(即在給藥后實(shí)現(xiàn)調(diào)節(jié)劑的 緩慢釋放的諸如膠嚢或海綿的制劑)的一部分給藥。這樣的制劑通?？?使用7>知技術(shù)制備并通過例如口 、直腸或皮下植入或通過在期望的耙 位植入進(jìn)行給藥。這樣的制劑中使用的載體是生物相容的，并且還可 以是可生物降解的；所述制劑優(yōu)選提供相對(duì)恒定水平的調(diào)節(jié)劑釋放。緩釋制劑中含有的調(diào)節(jié)劑的量取決于植入部位、釋放速率和期望的持 續(xù)時(shí)間以及待治療或待預(yù)防的疾病狀態(tài)的性質(zhì)。
選擇素調(diào)節(jié)劑通常以治療有效量存在于藥物組合物中。治療有效
量是這樣的量，其導(dǎo)致可辨別的患者益處，如增加如下文所述的與過 度的選擇素介導(dǎo)的功能(如細(xì)胞間粘附)相關(guān)的疾病狀態(tài)的康復(fù)。
通常，本文所述的調(diào)節(jié)劑和組合物可用于增強(qiáng)或抑制選擇素介導(dǎo) 的功能。在將表達(dá)選擇素的細(xì)胞最終與足以增強(qiáng)或抑制選擇素介導(dǎo)的 功能的量的調(diào)節(jié)劑接觸足以增強(qiáng)或抑制選擇素介導(dǎo)的功能的時(shí)間的情 況下，可在溫血?jiǎng)游铮瑑?yōu)選諸如人的哺乳動(dòng)物的體外和/或體內(nèi)實(shí)現(xiàn)這 樣的增強(qiáng)或抑制。
在某些方面中，本發(fā)明提供了抑制與選擇素介導(dǎo)的功能，如細(xì)胞 間粘附有關(guān)的疾病狀態(tài)的發(fā)展的方法。通常，這樣的方法可用于預(yù)防、 延緩或治療這樣的疾病狀態(tài)。換言之，本文提供的治療方法可用于治 療疾病，或可在不患有疾病或患有與選擇素介導(dǎo)的功能無關(guān)的疾病的 患者中用于預(yù)防或延緩這樣的疾病的發(fā)作。例如，治療方法具有可包
括下列用途在內(nèi)的用途細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制、細(xì)胞的殺死、細(xì)胞或細(xì)胞 生長(zhǎng)的防止、細(xì)胞或細(xì)胞生長(zhǎng)發(fā)作的延緩或生物體存活的延長(zhǎng)。
多種疾病狀態(tài)與選擇素介導(dǎo)的功能相關(guān)。這樣的疾病狀態(tài)包括例 如組織移植排斥反應(yīng)、血小板介導(dǎo)的疾病(如動(dòng)脈粥樣硬化和凝固)、 活動(dòng)過度的冠脈循環(huán)、急性白細(xì)胞介導(dǎo)的肺損傷(如成人呼吸窘迫綜合 征(ARDS))、克隆病、炎性疾病(如炎癥性腸病)、自身免疫病(MS,重 癥肌無力)、感染、癌(以及轉(zhuǎn)移)、血栓形成、創(chuàng)傷(以及創(chuàng)傷相關(guān)的膿 毒病)、燒傷、脊髓損傷、消化道粘膜異常(胃炎、潰瘍)、骨質(zhì)疏松癥、 類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、骨關(guān)節(jié)炎、哮喘、變態(tài)反應(yīng)、銀屑病、敗血癥性休 克、外傷性休克、卒中、腎炎、特應(yīng)性皮炎、凍瘡損傷、成人呼吸困 難綜合征、潰瘍性大腸炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、糖尿病和缺血發(fā)作后的 再灌注損傷。選擇素調(diào)節(jié)劑還可在心臟手術(shù)之前給予患者以促進(jìn)恢復(fù)。 其它用途包括疼痛治療、與血管支架相關(guān)的再狹窄的預(yù)防，以及用于 不期望的血管生成，如與癌相關(guān)的血管生成。 t明的選擇素ij 方式給藥。適當(dāng)?shù)膭┝恳约斑m當(dāng)?shù)慕o藥持續(xù)時(shí)間和頻率可取決于諸如 患者的狀態(tài)、患者疾病的類型和嚴(yán)重性以及給藥方法等因素。通常， 適當(dāng)?shù)膭┝亢椭委煼桨敢宰阋蕴峁┲委熀?或預(yù)防益處的量提供調(diào)節(jié)
劑。在本發(fā)明特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，選擇素調(diào)節(jié)劑可以0.001 mg/kg 體重至1000 mg/kg體重(更通常0.01 mg/kg體重至1000 mg/kg體重) 的劑量，按照每日單次給藥或多次給藥的方案給藥。通?？墒褂脤?shí)驗(yàn) 模型和/或臨床試驗(yàn)確定適當(dāng)?shù)膭┝俊Ｍǔ?，?yōu)選使用足以提供有效治 療的最小劑量。通常可使用對(duì)被治療或被預(yù)防的疾病狀態(tài)適當(dāng)?shù)臏y(cè)定 來監(jiān)控患者的治療有效性，這是本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟悉的。
選擇素調(diào)節(jié)劑還可用于將物質(zhì)靶向表達(dá)選擇素的細(xì)胞。這樣的物
質(zhì)包括治療劑和診斷劑。治療劑可以是分子、病毒、病毒成分、細(xì)胞、 細(xì)胞成分或任何其它物質(zhì)，這些物質(zhì)被證明能夠改變靶細(xì)胞的性質(zhì)從 而提供治療或預(yù)防疾病或者調(diào)節(jié)患者的生理學(xué)的益處。治療劑還可以 是在體內(nèi)產(chǎn)生具有生物活性的試劑的前藥。可以是治療劑的分子可以 是例如多肽、氨基酸、核酸、多核苷酸、類固醇、多糖或無機(jī)化合物。 這樣的分子可以多種方式中任意方式起作用，包括作為酶、酶抑制劑、 激素、受體、反義寡核苷酸、催化的多核苷酸、抗病毒劑、抗腫瘤劑、 抗菌劑、免疫調(diào)節(jié)劑和細(xì)胞毒素劑(如放射性核素，例如碘、溴、鉛、 鈀或銅)。診斷劑包括諸如金屬和放射性試劑(如含鎵、锝、銦、鍶、 碘、鋇、溴和含磷化合物)的顯像劑、造影劑、染料(如熒光染料和生 色團(tuán))以及催化比色反應(yīng)或熒光測(cè)定反應(yīng)的酶。通常，可使用如上所述 的多種技術(shù)將治療劑和診斷劑與選擇素調(diào)節(jié)劑連接。為了靶向的目的， 可如本文所述將選擇素調(diào)節(jié)劑對(duì)患者給藥。由于選擇素在血管生成過 程中新毛細(xì)血管形成中所涉及的內(nèi)皮細(xì)胞上表達(dá)，可使用選擇素調(diào)節(jié) 劑靶向治療劑以殺滅腫瘤脈管系統(tǒng)。選擇素調(diào)節(jié)劑也可用于基因?qū)颉?選捧素調(diào)節(jié)劑還可體外使用，如在多種公知的細(xì)胞培養(yǎng)和細(xì)胞分
離方法中使用。例如，可將調(diào)節(jié)劑與組織培養(yǎng)板或其它細(xì)胞培養(yǎng)載體 的內(nèi)表面連接，以用于固定表達(dá)選擇素的細(xì)胞以便在培養(yǎng)物中進(jìn)行篩 選、測(cè)定和生長(zhǎng)。這樣的連接可通過諸如上述方法的任何適當(dāng)?shù)募夹g(shù) 以及其它標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)來進(jìn)行。調(diào)節(jié)劑還可用于例如促進(jìn)體外的細(xì)胞鑒定和分選、允許對(duì)表達(dá)選擇素(或不同選擇素水平)的細(xì)胞進(jìn)行選擇。優(yōu) 選地，用于這樣的方法的調(diào)節(jié)劑與可檢測(cè)的標(biāo)記物連接。適當(dāng)?shù)臉?biāo)記 物是本領(lǐng)域公知的并且包括放射性核素、發(fā)光基團(tuán)、熒光基團(tuán)、酶、 染料、恒定的免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域和生物素。在一優(yōu)選實(shí)施方案中，將 與諸如熒光素的熒光標(biāo)記物連接的調(diào)節(jié)劑與細(xì)胞接觸，然后該細(xì)胞通
過熒光激活細(xì)胞分選術(shù)(FACS)進(jìn)行分析。
上述調(diào)節(jié)劑能夠例如抑制選擇素介導(dǎo)的細(xì)胞粘附。通常該能力可 使用多種體外測(cè)定中的任一種測(cè)定來評(píng)價(jià)，這些體外測(cè)定被設(shè)計(jì)為測(cè) 量對(duì)表達(dá)選擇素的細(xì)胞之間的粘附(如白細(xì)胞或腫瘤細(xì)胞與血小板或 內(nèi)皮細(xì)胞之間的粘附)的影響。例如，可將這樣的細(xì)胞在不存在調(diào)節(jié)劑 的標(biāo)準(zhǔn)條件下進(jìn)行平板接種以允許細(xì)胞粘附。通常，若測(cè)試細(xì)胞與調(diào) 節(jié)劑的接觸導(dǎo)致對(duì)細(xì)胞粘附的可辨別的抑制，則調(diào)節(jié)劑是選擇素介導(dǎo) 的細(xì)胞粘附的抑制劑。例如，在調(diào)節(jié)劑的存在下(如/iM水平)，可在約 數(shù)分鐘內(nèi)通過觀察細(xì)胞彼此相互作用的降低，視覺確定白細(xì)胞或腫瘤 細(xì)胞與血小板或內(nèi)皮細(xì)胞之間粘附的破壞。
所有本發(fā)明的化合物或?qū)Ρ景l(fā)明有用的化合物包括其生理可接受 的鹽。
通過示例性說明而不是限制的方式提供下列實(shí)施例。
實(shí)施例 實(shí)施例1 BASA的合成(圖1A) 化合物4的合成根據(jù)所述的方法，對(duì)可商購(gòu)的2 (1 g)進(jìn)行硝化(對(duì) 于文獻(xiàn)條件，參見美國(guó)專利第4534卯5號(hào)；Allison, F. et al. /7e/v. C/ 'm. 勿a 4:2139 (1952))。
將粗產(chǎn)物3溶于水(40 mL)并加入10% Pd/C (0.3 g)。將混合物在 室溫下氫化(約45 psi) 48小時(shí)。通過Celite過濾催化劑并用水洗滌過 濾床。將濾液真空濃縮，得到粉紅色固體。除去催化劑后，將濾液濃 縮至15mL并加入等體積的乙醇。通過過濾收集沉淀物，得到具有4艮 少雜質(zhì)的化合物4?；衔?a的合成:將5 (5 g)和8 (4,45 g， 24,7 mmol)以及K2C03 (2 M水溶液，24.7 mL, 49.4 mmol)的10:1曱苯/乙醇(70 mL)溶液用 Pd(PPh3)4(1.43g， 1.24mmol)處理，并將混合物回流20小時(shí)。后處理 后，將粗產(chǎn)物在EtOH中重結(jié)晶并將重結(jié)晶濾液進(jìn)行色譜純化得到化 合物9 (2.9 g， 46%， 〉90% HPLC)和2.2 g回收的5。產(chǎn)物通過^ NMR 表征。
將9 (2.9 g， 11.3 mmol)和LiOH'H20 (1.43 g, 34.1 mmol)在1:1 THF/H20 (250 mL)中的混合物于室溫?cái)嚢?1小時(shí)。后處理后反應(yīng)得到 7 (2.58 g， 94%, >90%HPLC)。產(chǎn)物通過！HNMR表征。
向7(500mg， 1.94mmol)、 S0C12 (0.23 mL， 3.10 mmol)和曱苯(3 mL)的懸浮液中加入DMF (20 /Al)，然后加熱至80。C。 20小時(shí)后處理 反應(yīng)得到酰氯(640 mg)。產(chǎn)物7a通過IR和& NMR表征。
4匕合物10的合成:向胺4 (268 mg， 0.641 mmol)的H2。 (2 mL)和 二噪烷(18 mL)溶液中滴加7a (273 mg, 0.99 mmol)的二噪烷(16 mL)溶 液30分鐘。加入過程中用0.25 M NaOH將反應(yīng)混合物的pH調(diào)節(jié)至 8.5。加完后將反應(yīng)在室溫下攪拌2.5小時(shí)。通過柱色i普純化(曱醇/曱 苯1:1)，然后通過制備TLC純化(曱醇/曱苯l:l)得到50 mg的化合物 10，通過1HNMR和MS對(duì)其進(jìn)行表征。
化合物IO的氫化:將10 (30 mg, 0.049 mmol)和10% Pd/C (50 mg) 的H20 (20 mL)懸浮液在室溫下氫化(55 psi) 4小時(shí)得到圖1A的 BASA。
實(shí)施例2 BASA的合成(圖1B) 化合物4的合成:在室溫和攪拌下將3-硝基爺基碘(1) (48.3 g)加 入到可商購(gòu)的8-氨基萘-1，3，5-三磺酸(2) (29.5 g)的水溶液(pH 11)中。將 溶液的pH調(diào)節(jié)至1并且在蒸發(fā)溶劑后將產(chǎn)物3(6.4 g)由乙醇中沉淀。 化合物3的鉑催化氫化得到化合物4 (圖1B的BASA),收率96%。
實(shí)施例3BACA的合成(圖2)
將1 (8.9 g)、多聚曱醛(8.9 g)和H2S04 (125 mL)的懸浮液加熱至 90°C并繼續(xù)反應(yīng)14小時(shí)，并在后處理后得到粗品2 (7.8 g)。通過HPLC 測(cè)得粗產(chǎn)物的純度為77%,并通過力NMR進(jìn)行表征。
向2(1.0 g)的丙酮(30mL)溶液中加入K2CO3 (3.1 g)和硫酸二曱酯 (1.4 mL)并將反應(yīng)加熱回流24小時(shí)。將反應(yīng)與下一批合并用于后處理 和純化。
向2 (7,5 g)的丙酮(225 mL)溶液中加入K2C03 (23.2 g)和石克酸二曱 酯(10.8mL)并將反應(yīng)加熱回流16小時(shí)。將反應(yīng)與上一批合并，進(jìn)行后 處理和柱色譜純化(乙酸乙酯/庚烷l:9)后得到3 (7.3 g, 74%)。通過 HPLC測(cè)得產(chǎn)物純度為80%,并通過NMR進(jìn)行表征。
在3°C下，向3 (7.16 g)的乙酸酐(175 mL)懸浮液中加入鉻酐(6.94 g)，然后在室溫下攪拌15小時(shí)。反應(yīng)在后處理和柱純化(100%二氯曱 烷)后得到4 (5.89 g)。通過HPLC測(cè)得產(chǎn)物純度為90%,并通過NMR 進(jìn)行表征。
在室溫下，向4 (5.89 g)的THF/H20 (300 mL， l:l)懸浮液中加入 LiOH.H20(1.74g)并將得到的混合物攪拌14小時(shí)。酸/堿處理之后，得 到白色固體產(chǎn)物。將產(chǎn)物在高真空下干燥并通過NMR和質(zhì)譜表征。
實(shí)施例4 糖模擬物的合成(圖3)
中間體II的合成:在室溫下，將(-)-莽草酸(20 g)在MeOH (200 ml) 和硫酸(2 ml， 98%)中攪拌50小時(shí)。將反應(yīng)混合物在冷卻下用2N NaOH 水溶液中和。蒸發(fā)至干后，將殘余物通過硅膠色譜純化得到II (19.2 g)。
中間體ail)的合成:將莽草酸曱酯(II， 10 g)、 2，2-二曱氧基丙烷(10 ml)和p-TsOH (0.8 g)溶于乙腈(125 ml)中并在室溫下攪拌1小時(shí)。然后 用三乙胺(2ml)中和反應(yīng)混合物，并蒸發(fā)至干。將殘余物在硅膠上進(jìn)行 色譜分離以得到III (11 g)。
中間體IV的合成:在室溫和劇烈攪拌下，對(duì)莽草酸衍生物III(IO g)和Pt02/C (10%, 250mg)在MeOH(40ml)中進(jìn)行氬化。16小時(shí)后，將反應(yīng)混合物通過celite過濾并蒸發(fā)至干。將殘余物在硅膠上進(jìn)行色 謙分離以得到IV。
中間體V的合成:在0°C下，向IV (8 g)的DCM (100 ml)溶液中 加入吡，定(12ml)、乙酸酐(7ml)和DMAP(25mg)。將反應(yīng)混合物在室 溫下攪拌1小時(shí)，并用EtOAc (250 ml)稀釋。用0.5 M HC1水溶液(3 x 50 ml)、飽和KHC03溶液(3 x 50 ml)和鹽水(3 x 50 ml)洗滌后，將合 并的有機(jī)層干燥(Na2S04)并蒸發(fā)至干。將殘余物在硅膠上進(jìn)行色i普分 離得到V(6.8g)。
中間體VI的合成:在80。C下，將V (6.0 g)的乙酸(30 ml, 80%) 溶液攪拌1小時(shí)。蒸除溶劑并將殘余物在硅膠上進(jìn)行色譜純化 (DCM/MeOH 14:1)得到VI (3.6 g)。
中間體(VII)的合成:將VI (3 g)和p-TsCl (3.5 g)的吡啶(30 ml)溶液 在室溫下攪拌6小時(shí)。加入MeOH (5 ml)并減壓蒸發(fā)溶劑，將殘余物 溶于EtOAc (3 x 150 ml)并將有機(jī)層用0.5 M HC1水溶液(0。C)、水(冷) 和鹽水(冷)洗滌。將合并的有機(jī)層干燥(Na2S04)，在Celite上過濾并蒸 發(fā)至干。將殘余物在硅膠上進(jìn)行色譜純化(曱苯/EtOAc 4:1)得到VII (3.7 g)。
化合物VIII的合成:將VII (3 g)和NaN3 (2.5 g)的DMF (20 ml)溶 液在80°C下攪拌。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫并用EtOAc (200 ml)和水 (50 ml)稀釋。將有機(jī)層另外用水洗滌兩次(2 x 50 ml)并用鹽水洗滌一次 (50 ml)。所有的水層用EtOAc萃取兩次(2x50 ml)。將合并的有機(jī)層 用Na2S04干燥，過濾并蒸除溶劑。將殘余物在硅膠上進(jìn)行色i普純化(石 油醚/EtOAc 5:2)以得到VIII (2.2 g)。
化合物X的合成:在0。C和氬氣下，向乙基2,3，4-三-0-千基-a-L-硫代吡喃巖藻糖苷 IX (1.5 g)的DCM (3 ml)溶液中加入溴(150 /xl)。 5 分鐘后移除冷卻浴并將反應(yīng)混合物在室溫下繼續(xù)攪拌25分鐘。加入環(huán) 己烷(200 jLtl)并將反應(yīng)混合物加入到VIII (400 mg)、 (Et)4NBr (750 mg) 和粉末狀4A分子篩的DCM (10 ml)和DMF (5 ml)溶液中。16小時(shí)后， 加入三乙胺(1.5 ml)并繼續(xù)攪拌10分鐘，用EtOAc (50 ml)稀釋并用飽 和NaHC03水溶液、水和鹽水洗滌。將水層用EtOAc萃取兩次(2x50ml)。將合并的有機(jī)層干燥(Na2S04)，過濾并蒸發(fā)至干。將殘余物在硅 膠上進(jìn)行色譜純化(曱苯/EtOAc 9:1)以得到X (700 mg)。
化合物XI的合成:向X (1.5 g)的MeOH (20 ml)溶液中加入新鮮 制備的NaOMe (80 mg)并在80。C下于壓力管中將反應(yīng)混合物攪拌20 小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫并用乙酸中和。蒸發(fā)溶劑至干并將殘 余物溶于醚中。加入新鮮制備的重氮曱烷并將過量的重氮甲烷用乙酸 中和。蒸除溶劑得到XI (1.25 g)。
結(jié)構(gòu)單元XV的合成:嚴(yán)格按照與先前所述方式相同的方式進(jìn)行 該合成(i/e/ve"oz C/iem/cfl 83:2893-2907 (2000))。
化合物XVI的合成:在室溫和氬氣下，將XI(1.6g)、 XV(3g)和 活化的粉末狀分子篩4A (1 g)在DCM (17 ml)中的混合物攪拌2小時(shí)。 然后在1.5小時(shí)的時(shí)間內(nèi)以4等份加入DMTST (2 g)。 24小時(shí)后將反 應(yīng)混合物在Celite上過濾并將濾液用DCM (100 ml)稀釋。將有機(jī)層用 飽和NaHC03水溶液和鹽水洗滌，并將水層用DCM萃取兩次。將合 并的有機(jī)層干燥(Na2S04)，過濾并蒸發(fā)至干。將殘余物在硅膠上進(jìn)行 色語純化(曱苯/EtOAc 8:1)以得到XVI (1.5 g)。
化合物XVII的合成:在10分鐘內(nèi)向XVI (500 mg)和乳清酰氯(500 mg)的二氯曱烷(10 ml)溶液中滴加三苯基膦溶液(500 mg在5 ml二氯 曱烷中的溶液)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌25小時(shí)并將溶劑蒸除。 將殘余物純化(硅膠上色i瞽分離DCM/MeOH 19:1)以得到XVII (250 mg)。
化合物XVIII的合成:向XVII (200 mg)的二噪烷-水(5:l， 12 ml) 溶液中加入10% Pd-C (100 mg)并將反應(yīng)混合物在氫氣(55psi)下劇烈攪 拌24小時(shí)。通過celite床濾除催化劑并將溶劑蒸除。將殘余物通過硅 膠色譜純化以得到化合物XVIII (150 mg)。
XIX的合成:向化合物XVIII (145 mg)的MeOH (5 ml)溶液中加入 NaOMe的MeOH溶液(25%， 0.025 ml)并將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌4 小時(shí)，用乙酸中和并蒸除溶劑。將殘余物溶于水并通過Dowex50wX-8 (Na形式)樹脂床。蒸除水洗滌液以得到化合物XIX (100 mg)。
EDA-XIX的合成:在70。C下，將XIX (80 mg)與乙二胺(EDA) (1ml)加熱攪拌5小時(shí)。蒸除溶劑并通過sephadex G-25柱純化得到 EDA誦XIX (82 mg)。
實(shí)施例5 糖模擬物的合成(圖4) 化合物XXI的合成:向化合物XX (1.5g，根據(jù)先前在Carbohydrate Chemistry and Biochemistry, 2000, vol. 1 ， page 345-365中公開的方法 合成)的吡啶(60ml)溶液中加入苯曱酸酐(0.73g)和二甲基氨基吡啶 (0.02g)。將反應(yīng)化合物在室溫下攪拌20小時(shí)。蒸除溶劑并將殘余物溶 于二氯曱烷。將溶液依次用冷的1NHC1和水洗滌。將溶液干燥(石克酸 鎂)并濃縮至干。將殘余物通過柱色i普(硅膠)純化以得到化合物XXI (1g)。
化合物XXII的合成:在0°C下，向化合物XXI的二氯曱烷(20 ml) 溶液中加入三氟乙酸(20 ml)并將反應(yīng)混合物在同一溫度下攪拌1小 時(shí)。蒸除溶劑并將殘余物通過柱色i普(硅膠)純化以得到化合物XXII (0.6 g)。
化合物XXIII的合成:在0。C下，向化合物XXII(l g)的二氯曱烷 (40 ml)溶液中加入DBU (0.05 ml)和三氯乙腈(0.4g)。將溶液在相同的 溫度下攪拌1.5小時(shí)。蒸除溶劑，并通過柱色i普(硅膠)純化以得到化合 物XXIII (0.6 g)。
化合物XXIV的合成:在0。C和攪拌下，向化合物XI (0.7 g)、化 合物XXIII (0.5 g)在二氯曱烷(40 ml)和分子篩(4A, 5 g)的混合物中滴 加TMSOTf的溶液(0.15 ml在二氯曱烷(5 ml)中的溶液)。在相同溫度 下繼續(xù)攪拌2小時(shí)。加入三乙胺(0.2 ml)并將反應(yīng)混合物通過celite床 過濾。將反應(yīng)混合物用冷的飽和碳酸氫納溶液和水洗滌。干燥(硫酸鈉) 并濃縮至干。將殘余物通過柱色語(硅膠)純化以得到化合物XXIV (0.7g)。
化合物XXV的合成:向化合物XXIV(0.6g)的DMF(30ml)溶液 中加入DBU(30滴)和dl-二硫蘇糖醇(DTT, 0.28 g)。將反應(yīng)混合物在 室溫下攪拌1小時(shí)。蒸除溶劑，將殘余物溶于二氯曱烷中并用水洗滌。將有機(jī)層千燥(石克酸鈉)并濃縮至干。將殘余物通過柱色語(硅膠)純化以
得到化合物XXV (0.45 g)。
化合物XXVI的合成:向化合物XXV(0.4g)的DMF(10ml)溶液 中加入乳清酸(0.14g)、 EEDQ(0.19g)、 4-曱基嗎啉(0.09 g)并將反應(yīng)混 合物在70。C下攪拌20小時(shí)。蒸除溶劑并將殘余物溶于二氯曱烷。將 溶液用冷的飽和^灰酸氫納溶液和水洗涂。將有機(jī)層干燥(硫酸鈉)并濃 縮至干。將殘余物通過柱色鐠(硅膠)純化以得到化合物XXVI (0.2 g)。
化合物XXVII的合成:嚴(yán)格在與所述條件相同的條件下對(duì)化合物
XXVII (0.2 g)進(jìn)行氫化，并如所述，使用NaOMe的MeOH溶液將中 間體進(jìn)行部分脫苯曱?；栽谏V純化后得到化合物XXVII (0.050 g)。
化合物XXVIII的合成:如所述，將化合物XXVII用乙二胺處理 并通過柱色i普純化(硅膠和凝膠過濾sephadex G-25)以得到化合物
XXVIII (25 mg)。
實(shí)施例6 PEG化的BASA的合成(圖7B) 向3,6-二氧雜辛二酸(PEG, 200 mg，可商購(gòu))的DMF (1 ml)溶液中 加入Hunig堿(0.4 ml)，然后在5分鐘后加入HATU (0.35 g)。將溶液 在室溫下攪拌10分4中，然后加入實(shí)施例2的BASA (50 mg)的DMF (0.1 ml)溶液。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌4小時(shí)并將溶劑蒸除。將殘余物 通過HPLC(反相C18柱)純化以得到XXXIII (40 mg)。
實(shí)施例7 PEG化的BASA的合成(圖7A) 該合成以與實(shí)施例6所述方式相同的方式進(jìn)行，除了使用實(shí)施例 1的BASA以得到XXXII (50 mg)。
實(shí)施例8 PEG化的BACA的合成(圖7C)中間體XXXIV的合成(方法1):將實(shí)施例3的BACA (0.5 g)懸浮 于曱醇-水(lml, 9:1)中，并通過加入Cs2C03的水溶液將pH調(diào)節(jié)至 8.2。除去溶劑然后用曱苯共蒸發(fā)。將殘余物溶于DMF (1 ml)。加入千 基溴(0.5 ml)并在室溫下攪拌20小時(shí)。加入二氯曱烷(15 ml),用冷水 洗滌。將有機(jī)層干燥(無水硫酸鈉)并蒸除溶劑。將殘余物通過柱色i普(硅 膠)純化，得到XXXIV (0.48 g)。
中間體XXXIV的合成(方法2):向?qū)嵤├?的BACA (1 g)的DMF 溶液中加入N，N-二異丙基乙胺(1.5 g)和千基溴(1.5 g)。將反應(yīng)混合物 在50°C下攪拌20小時(shí)。蒸除溶劑并將殘余物通過柱色譜(硅膠)純化 以得到XXXIV。
中間體XXXV的合成:在0°C下，向XXXIV (0.2 g)的MeOH (10 ml)溶液中加入硼氫化鈉(0.070 g)，并將反應(yīng)混合物在0。C下攪拌1小 時(shí)。通過加入乙酸將反應(yīng)淬滅并濃縮至干。將殘余物通過柱色譜(硅膠) 純化以得到XXXV (0.16 g)。
中間體XXXVb的合成:向XXXV (0.36 g)的二氯曱烷溶液中加入 三乙胺(0.6 ml)和MeS02Cl (0.!29 ml)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌21 小時(shí)。將反應(yīng)混合物用二氯曱烷稀釋，用水、1MHC1和鹽水洗滌。 將有機(jī)層干燥(Na2S04)并濃縮至干得到粗XXXVa。向粗XXXVa的 DMF (5 ml)溶液中加入NaN3 (0.18 g)。將反應(yīng)混合物在100。C攪拌4 小時(shí)并蒸除溶劑。將殘余物溶于CH2Cl2并用冷的鹽水、冷的1 MHC1、 冷的NaHC03溶液和冷水洗滌。將有機(jī)層干燥(Na2S04)并濃縮至干。 將殘余物通過柱色傳(硅膠)純化以得到XXXVb (0.14 g)。
中間體XXXVc的合成:向XXXVc(0.08g)的DMF(3ml)溶液中 加入DTT (0.04 g)和DBU (0.02 ml)并在室溫下攪拌1小時(shí)。蒸除溶劑 并將殘余物溶于EtOAc，用水洗滌并將有機(jī)層濃縮至干。將殘余物通 過柱色譜(硅膠)純化以得到中間體XXXVc (0.061 g)。
中間體XXXVd的合成:在攪拌下向單保護(hù)的PEG-二羧酸(0.6 g) 的DMF (3 ml)溶液中加入二異丙基乙胺(0.24 ml)和HATU (0.513 g)。 向上述溶液中加入中間體XXXVc (0.185 g)的DMF (3 ml)溶液。將反 應(yīng)混合物在室溫下攪拌1小時(shí)。蒸除溶劑并將殘余物溶于EtOAc。將EtOAc層用水洗滌并通過柱色譜純化以得到中間體XXXVd。
XXXVI的合成:向XXXVd (0.185 g)的冰AcOH (3 ml)溶液中加入 Zn粉(O.l g),并將反應(yīng)在40°C下攪拌30分鐘。將反應(yīng)混合物通過celite 床過濾并用MeOH洗滌Zn濾餅。將濾液濃縮至干并通過sep-pak C18 柱純化以得到XXXVI (0.050 g)。
中間體XXXIVa的合成:在75°C、攪拌和惰性氣氛下，將TiCI4-四氫呋喃配合物(0.705 g)和Zn粉(0.28 g)在THF (25 ml)中的懸浮液回 流2小時(shí)。向該混合物中加入實(shí)施例3的BACA(0.3 g)和N-藥基曱氧 基羰基國(guó)3國(guó)氨基丙醇(0.312 g,如文獻(xiàn)Casimiro-Garcia et al， Bioorg. Med. Chem.， 1979 (2001) 2827中所述制備)的溶液。將反應(yīng)混合物在75°C和 惰性氣氛下攪拌2.5小時(shí)(McMurray偶聯(lián))。將反應(yīng)冷卻至室溫并加入 H20 (30 ml),通過celite床過濾并將濾液用EtOAc洗滌三次(每次30 ml)。將有機(jī)層收集在一起并干燥(Na2S04),過濾并濃縮至干。將殘余 物通過柱色譜純化以得到XXXIVa。
中間體XXXIVb的合成:向XXXIVa (0.444 g)的無水THF (21 ml) 溶液中加入哌啶(6.25 ml)，并將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌3小時(shí)。將 溶劑蒸除并將殘余物通過柱色譜(硅膠)純化以得到中間體XXXIVb (0.26 g)。
中間體XXXIVc的固相合成:在注射器式反應(yīng)器中將PS-碳二亞 胺樹脂(0.200 g)、 HOBt (0.030 g)和單保護(hù)的PEG-COOH (0.080 g)在 CH2C12 (3 ml)中的混合物在室溫下攪拌5分鐘。向上述混合物中加入 中間體XXXIVb (0.080 g)的CH2C12 (3 ml)溶液并將反應(yīng)混合物在室溫 下攪拌3小時(shí)。加入MP-碳酸酯樹脂(0.216 g)并在室溫下攪拌2小時(shí)。 將樹脂濾除然后用CH2Cl2洗滌樹脂5次。將濾液合并并濃縮至干以得 到中間體XXXIVc。
中間體XXXVIa的合成:嚴(yán)格按照與所述的合成中間體XXXVI 的方法相同的方法，將XXXIVc (0.12 g)用Zn/AcOH處理得到中間體 XXXVIa (0.104 g)。
實(shí)施例9PEG化的BACA的合成(圖7C)
中間體XXXIVa的合成:在75°C、攪拌和惰性氣體下將TiCI4-四氫呋喃配合物(0.705 g)和Zn粉(0.28 g)在THF (25 ml)中的懸浮液回 流2小時(shí)。向該混合物中加入實(shí)施例3的BACA (0.3 g)和N-藥基曱氧 基羰基-3-氨基丙醇(0.312 g，如文獻(xiàn)Casimiro-Garcia et al， Bioorg. Med. Chem.， 1979 (2001) 2827中所述制備)的溶液。將反應(yīng)混合物在75°C和 惰性氣氛下攪拌2.5小時(shí)(McMurray偶聯(lián))。將反應(yīng)冷卻至室溫并加入 H20 (30 ml),通過celite床過濾并將濾液用EtOAc洗滌三次(每次30 ml)。將有機(jī)層收集在一起并干燥(Na2S04)，過濾并濃縮至干。將殘余 物通過柱色i普純化以得到XXXIVa。
中間體XXXIVb的合成:向XXXIVa (0.444 g)的無水THF (21 ml) 溶液中加入哌啶(6.25 ml)并將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌3小時(shí)。將溶
g)。
中間體XXXIVc的固相合成:在注射器式反應(yīng)器中將PS-碳二亞 胺樹脂(0.200 g)、 HOBt (0.030 g)和單保護(hù)的PEG-COOH (0,080 g)在 CH2C12 (3 ml)中的混合物在室溫下攪拌5分鐘。向上述混合物中加入 中間體XXXIVb (0.080 g)的CH2C12 (3 ml)溶液并將反應(yīng)混合物在室溫 下攪拌3小時(shí)。加入MP-石友酸酯樹脂(0.216 g)并在室溫下攪拌2小時(shí)。 將樹脂濾除然后將樹脂用CH2Cl2洗滌5次。將濾液合并并濃縮至干以 得到中間體XXXIVc。
XXXVIa的合成:嚴(yán)格按照與所述的合成中間體XXXVI的方法相 同的方法，將XXXIVc (0.12 g)用Zn/AcOH處理得到中間體XXXVIa (0,104 g)。
實(shí)施例10 糖模擬物-BASA的合成(圖8A) 向?qū)嵤├?的XXXII (0.015 g)的DMF (0.1 ml)溶液中加入Hunig 堿(0.015 ml)然后加入HATU (0.007 g)。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌10 分鐘。加入實(shí)施例4的EDA-XIX溶液(O.OIO g在DMF ml中的溶液)然后將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌8小時(shí)。蒸除溶劑并將殘余物通過 sephadex G-25色譜法進(jìn)行純化以得到圖8A的糖模擬物-BASA (0.008g)。
實(shí)施例11 糖模擬物-BACA的合成(圖8B)
EDA畫XIX和XXXVI之間的偶聯(lián):向?qū)嵤├?的XXXVI的DMF 溶液中加入二異丙基乙胺，然后加入HATU。將溶液在室溫下攪拌3 分鐘。然后在攪拌下將上述溶液加入到在圓錐形小瓶中的EDA-XIX 中。將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌2小時(shí)。蒸除溶劑以得到粗的中間體 XXXVIb,并將其用于下一步而不經(jīng)過進(jìn)一步純化。
將粗XXXVIb用NaOMe-MeOH-H20處理2小時(shí)，然后通過凝膠 過濾進(jìn)行純化以得到糖模擬物-BACA。
EDA-XIX和實(shí)施例9的XXXVIa之間的偶聯(lián)嚴(yán)格按照與所述的 XXXVIb的合成相同的方式進(jìn)行該偶聯(lián)反應(yīng)，以得到粗產(chǎn)品XXXVIc。
嚴(yán)格按照所述的相同的方式將XXXVIc用NaOMe-MeOH-H20處 理以得到糖模擬物-BACA。
實(shí)施例12 糖模擬物-BASA的合成(圖8C) 嚴(yán)格按照與實(shí)施例10所述方式相同的方式進(jìn)行該合成，使用實(shí)施 例6的XXXIII和實(shí)施例4的EDA-XIX得到圖8C的糖模擬物-BASA。 或者，可以用實(shí)施例18的XLV代替XXXIII來與EDA-XIX反應(yīng)。
實(shí)施例13 糖模擬物-BASA的合成(圖9A) 嚴(yán)格按照與實(shí)施例10所述方式相同的方式進(jìn)行該合成，使用實(shí)施 例7的XXXII和實(shí)施例5的EDA-XXVIII得到圖9A的糖才莫擬物 國(guó)BASA。實(shí)施例14 糖模擬物-BACA的合成(圖9B)
EDA國(guó)XXVIII和XXXVI之間的偶聯(lián):嚴(yán)格按照與所述的XXXVIb 的合成相同的方式進(jìn)行該偶聯(lián)反應(yīng)，以得到粗產(chǎn)品XXXVId。
嚴(yán)格按照所述的相同的方式將XXXVId用NaOMe-MeOH-H20處 理以得到糖模擬物-BACA。
EDA-XXVIII和XXXVIa之間的偶聯(lián):嚴(yán)格按照與所述的XXXVIb 的合成相同的方式進(jìn)行該偶聯(lián)反應(yīng)，以得到粗產(chǎn)品XXXVIe。
嚴(yán)格按照所述的相同的方式將XXXVIe用NaOMe-MeOH-H20處 理以得到糖模擬物-BACA。
實(shí)施例15 糖模擬物-BASA的合成(圖9C) 嚴(yán)格按照與實(shí)施例10所述方式相同的方式進(jìn)行該合成，使用實(shí)施 例6的XXXin和實(shí)施例5的EDA-XXVIII以得到圖9C的糖才莫擬物 誦BASA?；蛘?，可以用實(shí)施例18的XLV代替XXXIII來與EDA-XXVIII 反應(yīng)。
實(shí)施例16 糖模擬物的合成(圖12)
中間體XXXVII的合成:按照與實(shí)施例5中所述的合成中間體 XXV的方式相同的方式，將實(shí)施例5的中間體XXIV(O.l g)的吡吱溶 液用煙酰氯(0.08 ml)的吡啶和二曱氨基吡啶(0.04 g)溶液處理，以得到 中間體XXXVII (0.075 g)。
中間體XXXVIII的合成:以與實(shí)施例4中所述的合成化合物XVII 方式相同的方式，將中間體XXXVII (0.07 g)用三苯基膦和乳清酰氯處 理以得到XXXVIII (0.048 g)。
中間體XXXIX的合成:如所述，對(duì)中間體XXXVIII (0.04 g)用Pd/C 進(jìn)行氫化以得到化合物XXXIX (0.02 g)。
化合物XL的合成:在60。C下，將中間體XXXIX (0.015 g)用0.5NNaOH處理10分鐘，通過sephadex G-25凝l交過濾純化后得到化合物 XL (0.010 g)。
實(shí)施例17 糖模擬物的合成(圖13)
XLI的合成:向化合物XVI(O.l g)的t-BuOH-水(4ml， l:l)懸浮液 中加入1-乙炔基-3-氟苯(0.9 g)、 1% CuS04 (0.1 ml)以及Na小抗壞血酸 鹽(4mg)。將混合物加熱(70。C)攪拌20小時(shí)。蒸除溶劑并將殘余物溶 于二氯曱烷。將有機(jī)層用水洗滌，干燥(無水硫酸鈉)并濃縮至千。將 殘余物通過柱色語(硅膠)純化以得到化合物XLI (0.08 g)。
XLII的合成:將化合物XLI(0.25g)溶于二噪烷-水(4:l， 7.5 ml)。 加入10% Pd-C (0.25 g)，然后加入AcOH (7滴)。將混合物在40 psi下 氫化15小時(shí)。將反應(yīng)混合物通過celite床過濾并濃縮至干以得到化合 物XLII (0.2 g)。
XLHI的合成:向化合物XLII (0.2 g)的MeOH (5 ml)溶液中加入 NaOMe的MeOH (0.05 ml)溶液并將反應(yīng)混合物在室溫下攪拌2小時(shí)。 將反應(yīng)混合物用數(shù)滴乙酸中和并濃縮至干。將殘余物通過柱色i普(硅膠) 純化以得到化合物XLIII (0.15 g)。
XLIV的合成:將化合物XLIII (0.15 g)溶于乙二胺(7 ml)并將反應(yīng) 混合物在70。C下攪拌9小時(shí)。蒸除溶劑，并將殘余物首先通過柱色語 (硅膠)純化，然后通過反相C18純化以得到化合物XLIV (0.11 g)。
糖模擬物-BASA的合成(化合物XLV):按照與實(shí)施例10中所述 方式相同的方式進(jìn)行該合成，4吏用實(shí)施例6的XXXIII和XLIV以得到 化合物XLV。
實(shí)施例18 糖模擬物-BASA的合成(圖14) 化合物XLV的合成:向3,6-二氧雜辛二酸(PEG, 200mg,可商購(gòu)) 的DMF (1 ml)溶液中加入Hunig堿(0.4 ml),然后在5分鐘后加入 HATU (0.35 g)。將溶液在室溫下攪拌10分鐘，然后加入8-氨基萘-1，3，6-三磺酸(5011^，可商購(gòu))的DMF溶液。將反應(yīng)混合物在室溫下攪 拌4小時(shí)并蒸除溶劑。將殘余物通過HPLC純化(反相C18柱)以得到 XLV (25 mg)。
化合物XLVI的合成:按照與實(shí)施例10中所述方式相同的方式進(jìn) 行該合成，使用XLV和實(shí)施例4的EDA-XIX以得到化合物XLVI (4 mg)。
實(shí)施例19 糖模擬物-BASA的合成(圖15)
XLVII的合成:由化合物XXIV開始，按照與所述的XLI的合成 相同的方式進(jìn)行該合成以得到化合物XLVI。
XLVIII的合成:由化合物XLVII開始，按照與所述的化合物XLIII (由XLI)的合成相同的方式進(jìn)行該合成以得到化合物XLVIII。
XLIX的合成:由化合物XLVIII開始，按照與所述的XLIV的合 成相同的方式進(jìn)行該合成以得到化合物XLIX。
糖模擬物-BASA (化合物L(fēng))的合成:按照與實(shí)施例IO所述方式相 同的方式進(jìn)行該合成，使用實(shí)施例6的XXXIII和XLIX以得到化合物 L?；蛘?，可以用實(shí)施例18的XLV代替XXXIII來與XLIX反應(yīng)。
實(shí)施例20 糖模擬物的合成(圖16)
化合物I的合成:如文獻(xiàn)所述[丄Og. CAem. 54， 3738-3740 (1989); 丄/e6/gs Jwwa/ew CAe/wz'e 575， 1 (1952)]。
中間體II的合成:在室溫("r.t，，)下，將l(2.8g， 15.04 mmol)、 吡咬(4.8ml， 60.15 mmol)、苯曱酰氯(3.5ml， 30.07 mmol)和催化量的 二曱氨基吡啶在二氯曱烷(6ml)中攪拌。2小時(shí)后，TLC監(jiān)控顯示反應(yīng) 完全。然后將反應(yīng)混合物用乙酸乙酯(200ml)稀釋并用水、1NHC1水 溶液(冰冷卻的)、飽和NaHC03水溶液和鹽水洗滌(每次50 ml)。將水 層用乙酸乙酯洗滌兩次(2x 150 ml)，合并并用Na2S04干燥。過濾并蒸 除溶劑后，將殘余物通過硅膠色譜純化(PE/EtOAc4:l)以得到化合物II(3.78 g， 86%)。
中間體IH的合成:在0°C下，將II (3.78 g， 13.02 mmol)和NaBH4 在曱醇(35ml)中攪拌。30分鐘后，將反應(yīng)混合物用水(15ml)淬滅并用 1 NAcOH水溶液中和。再加入水(10ml)并將混合物用二氯曱烷萃取3 次(3xl50ml)。將合并的有機(jī)層用Na2S04干燥，過濾并蒸發(fā)。殘余物 的硅膠色譜純化(PE/EtOAc 3.2)得到化合物III (3.7g， 97%)。 [a]D + 79.78。 (c = 0.940， CH2C12);
中間體IV的合成在室溫和氬氣下，用注射器向III (3.4 mg, 11.64 mmol)的CHC13 (50 ml，用堿性氧化鋁過濾)溶液中加入l-氯-iV,Ar，2-三 曱基丙烯基胺(4.94ml， 34.93 mmol)。將反應(yīng)混合物回流攪拌直到TLC 監(jiān)控顯示反應(yīng)完全(30分鐘)為止。冷卻至室溫后，將反應(yīng)混合物用三 乙胺(6ml)淬滅，并蒸發(fā)(浴溫30。C)至干。將殘余物通過硅膠色i普純化 (PE/EtOAc 9:1)以得到化合物IV (3.3 g， 92%)。
中間體V的合成:在氬氣下，向IV (3.25 g， 10.47 mmol)的干燥 曱苯(40 ml)溶液中加入新鮮蒸餾的Bu3SnH (30.58 ml, 115.14 mmol) 和AIBN(1.7g， 10.47 mmol)。使反應(yīng)回流。75分鐘后，當(dāng)TLC顯示 反應(yīng)完全時(shí)，將反應(yīng)混合物冷卻至室溫然后用乙腈(50 ml)稀釋。將溶 液用己烷(50 ml)洗滌，并將己烷層再次用乙腈(50ml)萃取。將合并的 乙腈層蒸發(fā)。將殘余物進(jìn)行硅膠色語純化(曱苯/EtOAc 14:1),得到化 合物V(2.66g， 92%)。 [a]D畫l 17.79。 (c= 1.810， CH2C12)。
中間體VI的合成:將V (2.63 g， 9.54 mmol)在80% AcOH水溶液 中的溶液在80。C下攪拌。當(dāng)TLC監(jiān)控顯示反應(yīng)完全時(shí)(30 min.)，將 反應(yīng)混合物冷卻至室溫。用NaOH水溶液中和后，將混合物用二氯曱 烷萃取3次(3 x 200 ml)。將合并的有機(jī)層用Na2S04干燥，過濾并蒸發(fā) 至干。將殘余物用硅膠色譜純化(PE/EtOAc 3:2)以得到化合物VI (2.01 g， 89%)。 [a]D-54.860 (c= 1.420, CH2C12)。
中間體VII的合成:將VI(1.98g, 8.39mmol)、新鮮重結(jié)晶的甲 苯畫4-碌酰氯(1.9 g， 10.07 mmol)、 Bu2SnO (2.09 g， 8.39mmol)和三乙 胺(1.8 ml， 16.78 mmol)的干燥二氯曱烷(40 ml)溶液在室溫和氬氣下攪 拌。20小時(shí)后，TLC監(jiān)控顯示反應(yīng)完全。然后將反應(yīng)混合物用曱醇(15ml)淬滅，然后蒸發(fā)至干。對(duì)殘余物進(jìn)行硅膠色語純化(曱苯/EtOAc8:l) 以得到化合物VII (2.65 g， 85%)。 [a]D-68.08。 (c = 0.448， CH2C12)。
中間體VIII的合成:將VII (640 mg, 1.71 mmol)和NaN3 (555 mg， 8.55 mmol)在DMF (30 ml)中的混合物在氬氣和80。C下攪拌。當(dāng)TLC 監(jiān)控顯示反應(yīng)完成時(shí)(l小時(shí)后)，將反應(yīng)混合物冷卻至室溫，用二氯曱 烷(50 ml)稀釋并用水(50 ml)洗滌。然后將水層用二氯曱烷萃取2次(2 x50ml)并將合并的有機(jī)層用Na2S04干燥，過濾并蒸發(fā)。將殘余物用 硅膠色i普純化(曱苯/EtOAc 6:1)以得到化合物VIII (391 mg， 87%)。 [a]D -69.39。 (c = 2.330, CH2C12)。
中間體IX的合成:在0。C和Ar氣氛下，向乙基2，3，4-三-0-節(jié)基 隱a國(guó)L-疏代吡喃巖藻糖苷(223 mg， 0.47 mmol)的干燥二氯曱烷(l ml)攪 拌溶液中加入溴(48/x， 0.54mmo1)。 5分鐘后，除去冷卻浴并將反應(yīng)混 合物在室溫下再攪拌40分鐘。為了除去過量的溴，加入環(huán)己烷(50 /d)， 導(dǎo)致反應(yīng)混合物脫色。然后將反應(yīng)混合物加入到預(yù)先攪拌(l小時(shí)，室 溫)的VIII (61 mg, 0.23 mmol)、 (Et)4NBr (98 mg, 0.47腿ol)和粉末狀 4A分子篩(100mg)的二氯甲烷(1.6ml)和DMF (1 ml)溶液中。18小時(shí) 后，將反應(yīng)用吡啶(2 ml)淬滅并繼續(xù)攪拌15分鐘，然后用EtOAc (50 ml) 稀釋并用飽和KHC03水溶液、水和鹽水洗滌(每次50 ml)。將水層用 EtOAc萃取2次(2 x 50 ml)。將合并的有機(jī)層用Na2S04干燥，過濾并 蒸發(fā)至干。將殘余物通過硅膠色譜純化(曱苯/EtOAc 9:1)以得到IX (116 mg， 73%)。 [a]D-95.96。 (c= 1.040, CH2C12)。
中間體X的合成:將IX (530 mg， 0.78 mmol)的MeOH (10 ml)溶 液和催化量的新鮮制備的NaOMe在室溫和Ar下攪拌48小時(shí)。將反 應(yīng)混合物用粉末狀A(yù)mberlyst-15中和并通過Celite過濾。將濾液蒸發(fā) 至干并通過硅膠色語純化(曱苯/EtOAc 9:1)以得到化合物X (380 mg, 85%)。 [a]D-76.425o(c = 4.00， CH2C12)。
中間體XI的合成:將X (184 mg， 0.32 mmol)、半乳糖結(jié)構(gòu)單元 [375mg, 0.4811 mmol，如文獻(xiàn)所述合成，Z/e/v. C/ /w. 83: 2893-2907 (2000)]和活化的粉末狀分子篩4A (200 mg)在二氯曱烷(3 ml)中的混合 物在室溫和氬氣下攪拌4小時(shí)。然后在1.5小時(shí)內(nèi)將DMTST[B](165mg， 0.64mmol)以4等份加入預(yù)先攪拌(4小時(shí)，室溫)的活化的粉末狀 分子篩4A (100 mg)在二氯曱烷(3 ml)中的混合物中。92小時(shí)后，當(dāng)TLC 監(jiān)控顯示反應(yīng)完全時(shí)，將反應(yīng)混合物通過Celite過濾并將濾液用二氯 曱烷(50 ml)稀釋。將有機(jī)層用飽和NaHC03水溶液和鹽水洗滌(每次20 ml)并將水層用二氯甲烷萃取2次(2x50 ml)。將合并的有機(jī)層用 Na2S04干燥，過濾并蒸發(fā)至干。將殘余物通過硅膠色鐠純化(曱苯 /EtOAc 9:1)以得到化合物XI (310 mg， 75%)。 [a]D -36.98° (c = 2.32， CH2C12)。
通用方法A
中間體XII的合成:向攪拌的Xl(100mg, 0.077 mol)的干燥二氯 曱烷(3 ml)溶液中加入乙酰氯(27 jd， 0.387 mmol)。 5分鐘后加入PPh3 (101 mg， 0.387 mmol)并將溶液在室溫下攪拌。當(dāng)22小時(shí)后TLC顯示 反應(yīng)完全時(shí)，除去溶劑并將殘余物進(jìn)行硅膠色i普純化(曱苯/EtOAc 2:1) 以得到化合物XII(43mg， 43%)。 [a]D-55.33。 (c = 2.185， CH2C12)。
中間體XIII的合成:才艮據(jù)方法A: XI (80 mg， 0.062 mol)與乳清 酰氯(59 mg， 0.310 mmol)和PPh3 (81 mg， 0.310 mmol)， 4小時(shí)，(二 氯曱烷/MeOH 25:1)得到化合物XIII (35 mg， 40%)。 [a]D -26.08。 (c = 1.48， CH2C12)。
中間體XIV的合成:根據(jù)方法A: XI (70 mg， 0.054 mmol)與聯(lián)苯 基國(guó)4隱羧酰氯(58 mg， 0.271 mmol)和PPh3 (71 mg, 0.271 mmol)， 4小時(shí)， (甲苯/EtOAc 6:1)得到XIV (22 mg， 28%)。 [a]D -32.11。 (c= 1.065， CH2C12)。
中間體XV的合成:根據(jù)方法A: XI (45 mg, 0.035 mmol)與聯(lián)苯 基國(guó)2國(guó)羧酰氯(125 mg， 0.577 mmol)和PPh3 (151 mg， 0.577 mmol)， 5 小時(shí)，(曱苯/EtOAc6:l)，得到化合物XV(22mg， 44%)。 [a]D-19.54。 (c=1.10， CH2C12)。
通用方法B
中間體XVI的合成:將XI(120mg， 0.093 mmol)和PPh3 (30 mg，0.116 mmol)在CH2C12 (2 ml)和水(100 pd)中的混合物在室溫下攪拌44 小時(shí)。然后除去溶劑并將殘余物溶于CH2C12 (2 ml)中并加入DIC (11.8 mg， 0.094 mmol)和香草酸(24mg， 0.139 mmol)。將混合物在室溫下繼 續(xù)攪拌62小時(shí)后，除去溶劑并將粗產(chǎn)物通過硅膠色鐠純化(曱苯 /EtOAc2.5:l)以得到化合物XVI(62mg， 47%)。 [a]D-29.58。 (c = 2.86, CH2C12)。
通用方法C
中間體XVII的合成:在Parr振動(dòng)器中將XII (40 mg， 0.0306 mmol)、 Pd(OH)2 (30 mg)、 二噪、烷(2 ml)和水(0.4 ml)的混合物在5 bar 和室溫下進(jìn)行氫化。20小時(shí)后TLC監(jiān)控顯示反應(yīng)完全。將反應(yīng)混合 物通過Celite過濾并蒸發(fā)至干。粗產(chǎn)物通過色鐠純化(CH2Cl2/MeOH 9:1) 以得到XVII(20mg， 69%)。 [a]D-43.50。 (c = 1.00， MeOH)。
中間體XVIII的合成:根據(jù)方法C: XlV(26mg, 0.018腿ol), Pd(OH)2 (11 mg)， 二噪烷(1.2 ml),水(0.25 ml)， 50小時(shí)，(CH2Cl2/MeOH 2:1)得到XVIII (10mg， 50%)。
中間體XIX的合成:根據(jù)方法C: XV (22 mg,0.015 mmol)，Pd(OH)2 (20 mg)， 二嚼烷(l ml),水(0.25 ml), 22小時(shí)，(CH2Cl2/MeOH 15:1) 得到化合物XIX(13mg, 82%)。 [a]D-9.50。 (c-1.21, MeOH)。
中間體XXI的合成:根據(jù)方法C: XIII (21 mg， 0.015腿ol)， Pd(OH)2(20mg), 二噪烷(lml)，水(0.25 ml), 22小時(shí)，(CH2Cl2/MeOH 15:l)得到化合物XXI(13mg， 86%)。
中間體XX的合成:將XVI (20 mg， 0.0141腿ol)、 10% Pd/C (20 mg)、 MeOH(2ml)和AcOH(50/il)的混合物在氫氣氛下攪拌。當(dāng)TLC 監(jiān)控顯示反應(yīng)完全(22小時(shí)后)時(shí)，將混合物通過celite過濾并蒸發(fā)至 干。將殘余物進(jìn)行硅膠色譜純化(CH2Cl2/MeOH 2:1)得到XX (15 mg, 定量)。[a]D-29,32。 (c= 1.105， MeOH)。
通用方法D
產(chǎn)物XXII的合成:將XVII (27 mg， 0.0278 mmol)的干燥MeOH (1ml)溶液和催化量的新鮮制備的NaOMe在室溫和氬氣下攪拌。1小時(shí) 后，TLC監(jiān)控顯示反應(yīng)完全。將反應(yīng)混合物用粉末狀amberlyst-15中 和，通過Celite過濾并將濾液蒸發(fā)至干。將殘余物溶于MeOH (20 ml) 并通過離子交換Dowex Na 過濾。將濾液蒸發(fā)至干并將粗產(chǎn)品進(jìn)行色 i昝純化(CH2Cl2/MeOH/水10:4:0.8)得到XXII (12 mg, 56%)。 [a]D -97.49。 (c = 0.546， MeOH)。
產(chǎn)物XXIII的合成:根據(jù)方法D: XVIII (9.0 mg, 0.0083 mmol), 2小時(shí)，(CH2Cl2/MeOH々K 10:3:0.5)得到化合物XXIII (7.5 mg,定量)。 [a]D-79.50。 (c = 0.400， MeOH)。
產(chǎn)物XXIV的合成:根據(jù)方法D: XIX (23 mg, 0.0212 mmol)， MeOH (2 ml), 2.5小時(shí)，(CH2Cl2/MeOH〃K 10:3:0.5)得到化合物XXIV (7.0 mg， 39%)。 [a〗D-54.54。 (c = 0.586， MeOH)。
產(chǎn)物XXV的合成:才艮據(jù)方法D: XX (19 mg, 0.0180 mmol)， MeOH (2 ml), 4小時(shí)，(CH2Cl2/MeOH〃K 10:3:0.5)得到化合物XXV (10.5 mg， 70%)。 [a]D-69.96。 (c = 0.793, MeOH)。
產(chǎn)物XXVI的合成 一艮據(jù)方法D: XXI (19 mg， 0.0180腿ol)，MeOH (2ml)， 4小時(shí)，(CH2Cl2/MeOH々K 10:3:0.5)得到化合物XXVI (10 mg, 65%)。
實(shí)施例21 E-選擇素拮抗劑活性的測(cè)定(圖17A) 通過在37°C下孵育2小時(shí)，用E-選擇素/hlg嵌合體(GlycoTech Corp., Rockville, MD)涂覆微量滴定板(板l)的孔。在將板用50 mM TrisHCl、 150mMNaCl、 2mM CaCl2、 pH 7.4 (Tris-Ca)洗滌5次后，向 每一孔中加入100 jiil的含1% BSA的Tris-Ca/Stabilcoat (SurModics, Eden Prairie, MN) (1:1， v/v)溶液以封閉非特異性結(jié)合。在第二低結(jié)合 的圓底板(板2)中將測(cè)試化合物用Tris-Ca進(jìn)行連續(xù)稀釋(60 pl/孔)。向 板2的每孔中加入與鏈霉親和素-HRP (Sigma, St. Louis, MO)混合的、 預(yù)先形成的SLea-PAA-生物素(GlycoTech Corp., Rockville, MD)的結(jié)合 物(l /ig/ml， 60 jtil/孔)。將板1用Tris-Ca洗涂數(shù)次，并將100 pl/孔由板2轉(zhuǎn)移至板1。在室溫下孵育精確的2小時(shí)后將板洗滌并向每孔中 加入100 /il/孔的TMB試劑(KPL labs, Gaithersburg, MD)。在室溫下孵 育3分鐘后，通過加入100 /il/孔的1 M H3P04終止反應(yīng)，并用微量滴 定板讀數(shù)器在450 nm測(cè)定吸光度。
實(shí)施例22 P-選擇素拮抗劑活性的測(cè)定(圖17B) 將擬糖蛋白、唾液酸Lea-HSA (Isosep AB， Sweden)涂覆在微量滴 定板(板l)的孔上，然后通過加入稀釋于Dulbecco磷酸鹽緩沖鹽水 (DPBS)中的2。/。牛血清白蛋白(BSA)對(duì)孔進(jìn)行封閉。在第二微量滴定板 (板2)中，用含1% BSA的DPBS對(duì)測(cè)試拮抗劑進(jìn)行連續(xù)稀釋。封閉后， 洗滌板1并將板2的內(nèi)容物轉(zhuǎn)移至板1。然后向板1的每孔中加入P 選擇素/hlg重組嵌合蛋白(GlycoTech Corp., Rockville， MD)，并將結(jié)合 過程在室溫下孵育2小時(shí)。然后用DPBS洗滌板1并向每孔加入1 pg/ml 的過氧化物酶標(biāo)記的山羊抗-人lg(7) (KPL Labs， Gaithersburg， MD)。在 室溫下孵育1小時(shí)后，用DBPS洗滌板，然后向每孔加入TMB底物(KPL Labs)。 5分鐘后，通過加入1 MHsP04終止反應(yīng)。然后使用微量滴定 板讀數(shù)器在450 nm測(cè)定吸光度。
實(shí)施例23
抗炎小鼠模型。測(cè)試化合物在體內(nèi)對(duì)IL-lj8誘導(dǎo)的嗜中性粒細(xì)胞向氣
嚢遷移的影響(圖19)動(dòng)物.
雄性雜交繁殖的瑞士白化小鼠(15 g至18 g體重)購(gòu)自Bantin和 Kingman (T.O. strain; Hull, Humberside),并將其維持標(biāo)準(zhǔn)的不限制^: 用自來水的飼料小球(chowpellet)飲食以及12:00小時(shí)的光/暗循環(huán)。在 實(shí)驗(yàn)之前將所有動(dòng)物飼養(yǎng)7天以便在實(shí)驗(yàn)日(第6天；見下)使其體重 達(dá)到約25 g。
實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì).通過在第0天和第3天進(jìn)行空氣注射(2.5 ml s. c.)而在小鼠背部形 成氣嚢(Perretti & Flower, 1993)。以0.5% w/v在PBS中制備羧曱基纖 維素(CMC)的均一混懸液，并以20 ng/ml的濃度向其中加入鼠重組 IL國(guó)lj3。
就在給予IL-ljS之前的時(shí)間0給予測(cè)試化合物。還加入額外的組， 其中一組小鼠僅接受CMC (無IL-ljS)以提供基礎(chǔ)的陰性對(duì)照。
在所有情況下，給予IL-lj8之后將氣嚢用2 ml含有3 mM EDTA 的PBS洗滌4小時(shí)，并通過取等份(100 /d)的灌洗液及在特克溶液 (0.01 %結(jié)晶紫在3°/0乙酸中的溶液)中以1:10進(jìn)行稀釋來測(cè)定遷移的白 細(xì)胞數(shù)目(30%多形核白細(xì)胞，PMN)。然后將樣品渦流處理并將10/il 染色的細(xì)胞溶液置于牛鮑氏血細(xì)胞計(jì)數(shù)器中，并使用光學(xué)顯微鏡 (Olympus B061)對(duì)嗜中性粒細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)。
化合物給藥.
在實(shí)驗(yàn)日，在補(bǔ)充有1 mM CaCl2和MgCl2的PBS Dulbecco緩沖 液中制備測(cè)試化合物的新鮮溶液?？剐∈驪-或E-選擇素的單克隆抗體 (mAb)購(gòu)自BD Pharmingen，而抗L-選擇素mAb來自Serotec:
大鼠抗小鼠L-選擇素(克隆MEL-14): 1 mg
大鼠抗小鼠P-選擇素(克隆RB40.34》0.5mg/ml
大鼠抗小鼠E-選擇素(克隆10E9.6): 0.5 mg/ml
圖19.
在時(shí)間0用IL-lj8 (10 ng)使小鼠6天的氣嚢發(fā)炎；在時(shí)間0和4 小時(shí)靜脈注射給予實(shí)施例17的糖模擬物-BASA(圖13)和實(shí)施例12的 糖模擬物-BASA (圖8C);并在時(shí)間0靜脈注射給予抗選擇素mAb混 合物。
在8小時(shí)時(shí)間點(diǎn)洗滌氣嚢并通過染色和光學(xué)顯微鏡測(cè)定遷移的 PMN的數(shù)目。
圖19中組A、 B、 C和D中n值分別為每組9、 8、 7和8只小鼠。本說明書中所參考的和/或申請(qǐng)數(shù)據(jù)表中列出的上述所有美國(guó)專 利、美國(guó)專利申請(qǐng)公開、美國(guó)專利申請(qǐng)、外國(guó)專利、外國(guó)專利申請(qǐng)以 及非專利出版物在此均以其全文并入作為參考。
由上文所述，應(yīng)該理解，盡管為了示例性說明的目的對(duì)本發(fā)明的 具體實(shí)施方案進(jìn)行了描述，可進(jìn)行各種改變而不背離本發(fā)明的精神和 范圍。
權(quán)利要求
1.化合物或其生理可接受的鹽，其具有下列通式id="icf0001" file="S2006800377143C00011.gif" wi="77" he="36" top= "50" left = "66" img-content="drawing" img-format="tif" orientation="portrait" inline="no"/>其中id="icf0002" file="S2006800377143C00012.gif" wi="143" he="26" top= "114" left = "38" img-content="drawing" img-format="tif" orientation="portrait" inline="no"/>其中n＝0-2，并且當(dāng)n＝2時(shí)R8獨(dú)立選擇；R2＝H、-C(＝O)OX，其中X是C1-C8烷基、C1-C8烯基、C1-C8炔基或C1-C14芳基、-C(＝O)NH(CH2)nNH2、-[C(＝O)NH(CH2)nNHC(＝O)]m(L)mZ，其中n＝0-30，m＝0-1，L是連接物，并且Z是芐氨基磺酸、芐氨基羧酸、聚乙二醇或具有上述通式的第二化合物或所述第二化合物的鹽以形成二聚體，其中所述第二化合物或所述第二化合物的鹽的R2具有m＝0，不具有Z，并且是連接點(diǎn)；id="icf0003" file="S2006800377143C00013.gif" wi="144" he="21" top= "200" left = "38" img-content="drawing" img-format="tif" orientation="portrait" inline="no"/>-O-C(＝O)-X、-NH2、-NH-C(＝O)-NHX或-NH-C(＝O)-X，其中n＝0-2并且X獨(dú)立選自C1-C8烷基、C1-C8烯基、C1-C8炔基、id="icf0004" file="S2006800377143C00014.gif" wi="154" he="21" top= "240" left = "28" img-content="drawing" img-format="tif" orientation="portrait" inline="no"/>id="icf0005" file="S2006800377143C00021.gif" wi="153" he="57" top= "24" left = "28" img-content="drawing" img-format="tif" orientation="portrait" inline="no"/>id="icf0006" file="S2006800377143C00022.gif" wi="98" he="16" top= "84" left = "28" img-content="drawing" img-format="tif" orientation="portrait" inline="no"/>其中n＝0-10，并且上述任一環(huán)化合物可被一至三個(gè)獨(dú)立選自下列取代基的取代基取代Cl、F、C1-C8烷基、C1-C8烯基、C1-C8炔基、C1-C14芳基或OY，其中Y是H、C1-C8烷基、C1-C8烯基、C1-C8炔基或C1-C14芳基；id="icf0007" file="S2006800377143C00023.gif" wi="127" he="44" top= "128" left = "38" img-content="drawing" img-format="tif" orientation="portrait" inline="no"/>6’硫酸化的GlcNAc、6’羧酸化的GlcNAc、6’硫酸化的GalNAc、6’硫酸化的半乳糖、6’羧酸化的半乳糖或id="icf0008" file="S2006800377143C00024.gif" wi="24" he="24" top= "191" left = "29" img-content="drawing" img-format="tif" orientation="portrait" inline="no"/>其中R9是芳基、雜芳基、環(huán)己烷、叔丁烷、金剛烷或三唑，并且任一R9可以被一至三個(gè)獨(dú)立選自下列取代基的取代基取代C1、F、C1-C8烷基、C1-C8烯基、C1-C8炔基或OY，其中Y是H、C1-C8烷基、C1-C8烯基、C1-C8炔基或C1-C14芳基；R5＝H，或R4與R5共同形成id="icf0009" file="S2006800377143C00025.gif" wi="46" he="22" top= "250" left = "104" img-content="drawing" img-format="tif" orientation="portrait" inline="no"/>其中R10是芳基、雜芳基、id="icf0010" file="S2006800377143C00031.gif" wi="80" he="20" top= "25" left = "99" img-content="drawing" img-format="tif" orientation="portrait" inline="no"/>id="icf0011" file="S2006800377143C00032.gif" wi="151" he="76" top= "47" left = "28" img-content="drawing" img-format="tif" orientation="portrait" inline="no"/>其中n＝0-10，并且上述任一環(huán)化合物可被一至三個(gè)獨(dú)立選自下列取代基的取代基取代Cl、F、C1-C8烷基、C1-C8烯基、C1-C8炔基或OY，其中Y是H、C1-C8烷基、C1-C8烯基或C1-C8炔基；R6＝H、巖藻糖、甘露糖、阿拉伯糖、半乳糖或多元醇；R7＝H、C1-C8烷基、C1-C8烯基、C1-C8炔基或id="icf0012" file="S2006800377143C00033.gif" wi="20" he="14" top= "157" left = "143" img-content="drawing" img-format="tif" orientation="portrait" inline="no"/>并且R8＝H、C1-C8烷基、C1-C8烯基、C1-C8炔基、id="icf0013" file="S2006800377143C00034.gif" wi="49" he="17" top= "173" left = "133" img-content="drawing" img-format="tif" orientation="portrait" inline="no"/>id="icf0014" file="S2006800377143C00035.gif" wi="154" he="55" top= "192" left = "28" img-content="drawing" img-format="tif" orientation="portrait" inline="no"/>id="icf0015" file="S2006800377143C00041.gif" wi="151" he="68" top= "25" left = "28" img-content="drawing" img-format="tif" orientation="portrait" inline="no"/>其中n＝0-3并且X獨(dú)立選自H、OH、C1、F、N3、NH2、C1-C8烷基、C1-C8烯基、C1-C8炔基、C1-C14芳基、OC1-C8烷基、OC1-C8烯基、OC1-C8炔基和OC1-C14芳基，并且上述任一環(huán)化合物可被一至三個(gè)獨(dú)立選自下列取代基的取代基取代C1、F、C1-C8烷基、C1-C8烯基、C1-C8炔基、C1-C14芳基或OY，其中Y是H、C1-C8烷基、C1-C8烯基、C1-C8炔基或C1-C14芳基。
2.如權(quán)利要求1所述的化合物或其鹽，其中W是
3. 如權(quán)利要求1所述的化合物或其鹽，其中W是H。
4. 如權(quán)利要求1所述的化合物或其鹽，其中R"是COOH
5. 如權(quán)利要求1所述的化合物或其鹽，其中114是 Rw 其中W如權(quán)利要求1所定義。
6. 如權(quán)利要求5所述的化合物或其鹽，其中R"是環(huán)己烷。
7. 如權(quán)利要求1所述的化合物或其鹽，其中W是半乳糖。
8. 如權(quán)利要求1所述的化合物或其鹽，其中118是OH 。
9. 如權(quán)利要求1所述的化合物或其鹽，其中R2是 -[C(=0)NH(CH2)nNHC(=0)]m(L)mZ，其中n、 m、 L和Z如權(quán)利要求1 所定義。
10. 如權(quán)利要求9所述的化合物或其鹽，其中Z是辛氨基磺酸、 爺氨基羧酸或聚乙二醇。
11. 如權(quán)利要求1所述的化合物或其鹽，其中rs是-o-c(-o)-x或 -NH-C(=0)-X,其中X如4又利要求1所定義。
12.如權(quán)利要求11所述的化合物或其鹽，其中x是<formula>formula see original document page 7</formula>
13.如權(quán)利要求1所述的化合物或其鹽，其中rS是H。
14.如權(quán)利要求1至13中任一權(quán)利要求所述的化合物或其鹽，其 中l(wèi)是聚乙二醇或噻二唑。
15. 組合物，其包含與藥物可接受的載體或稀釋劑組合的權(quán)利要 求1至14中任一權(quán)利要求所述的化合物或其鹽。
16. 化合物或其生理可接受的鹽，包含權(quán)利要求1至14中任一權(quán) 利要求所述的化合物或其鹽，還包含診斷劑或治療劑。
17. 組合物，其包含與藥物可接受的載體或稀釋劑組合的權(quán)利要 求16所述的化合物或其鹽。
18. 調(diào)節(jié)選擇素介導(dǎo)的功能的方法，其包括使表達(dá)選擇素的細(xì)胞 與權(quán)利要求1至14中任一權(quán)利要求所述的化合物或其鹽接觸，所述化 合物或其鹽的量為有效調(diào)節(jié)所述選擇素的功能的量。
19.調(diào)節(jié)選擇素介導(dǎo)的功能的方法，其包括使表達(dá)選擇素的細(xì)胞 與權(quán)利要求15所述的組合物接觸，所述組合物的量為有效調(diào)節(jié)所述選 擇素的功能的量。
20.治療患者的方法，包括向所述患者給予權(quán)利要求1至14中任 一權(quán)利要求所述的化合物或其鹽，所述患者需要抑制與過度的選擇素介導(dǎo)的功能相關(guān)的疾病狀態(tài)的發(fā)展，所述化合物或其鹽的量為有效抑 制所述疾病狀態(tài)的發(fā)展的量。
21. 治療患者的方法，其包括向所述患者給予權(quán)利要求15所述的 組合物，所述患者需要抑制與過度的選擇素介導(dǎo)的功能相關(guān)的疾病狀 態(tài)的發(fā)展，所述組合物的量為有效抑制所述疾病狀態(tài)的發(fā)展的量。
22. 抑制移植組織排斥反應(yīng)的方法，包括向接受移植組織的所述 患者給予權(quán)利要求1至14中任一權(quán)利要求所述的化合物或其鹽，所述 化合物或其鹽的量為有效抑制所述移植組織排斥反應(yīng)的量。
23. 抑制移植組織排斥反應(yīng)的方法，其包括向接受移植組織的所 述患者給予權(quán)利要求15所述的組合物，所述組合物的量為有效抑制所 述移植組織排斥反應(yīng)的量。
24. 將試劑靶向于表達(dá)選擇素的細(xì)胞的方法，包括使表達(dá)選擇素 的細(xì)胞與權(quán)利要求16所述的化合物或其鹽接觸，所述化合物或其鹽的 量為有效地將診斷劑或治療劑靶向于所述細(xì)胞的量。
25. 將試劑靶向于表達(dá)選擇素的細(xì)胞的方法，其包括使表達(dá)選擇 素的細(xì)胞與權(quán)利要求17所述的組合物接觸，所述組合物的量為有效地 將診斷劑或治療劑靶向于所述細(xì)胞的量。
26. 用于調(diào)節(jié)選擇素介導(dǎo)的功能的方法中的權(quán)利要求1至14中任 一權(quán)利要求所述的化合物或其鹽。
27. 用于治療患者的方法中的權(quán)利要求1至14中任一權(quán)利要求所 述的化合物或其鹽，所述患者需要抑制與過度的選擇素介導(dǎo)的功能相 關(guān)的疾病狀態(tài)的發(fā)展。
28. 用于抑制移植組織排斥反應(yīng)的方法中的權(quán)利要求1至14中任 一權(quán)利要求所述的化合物或其鹽。
29. 用于將診斷劑或治療劑靶向于細(xì)胞的方法中的權(quán)利要求1至 14中任一權(quán)利要求所述的化合物或其鹽。
30. 權(quán)利要求1至14中任一權(quán)利要求所述的化合物或其鹽在制備 用于調(diào)節(jié)選擇素介導(dǎo)的功能的藥物中的用途。
31. 權(quán)利要求1至14中任一權(quán)利要求所述的化合物或其鹽在制備 用于抑制與過度的選擇素介導(dǎo)的功能相關(guān)的疾病狀態(tài)的發(fā)展的藥物中 的用途。
32. 權(quán)利要求1至14中任一權(quán)利要求所述的化合物或其鹽在制備 用于抑制移植組織排斥反應(yīng)的藥物中的用途。
33. 權(quán)利要求1至14中任一權(quán)利要求所述的化合物或其鹽在制備 將診斷劑或治療劑靶向于細(xì)胞的藥物中的用途。
全文摘要
提供了用于調(diào)節(jié)由選擇素結(jié)合介導(dǎo)的體內(nèi)和體外過程的化合物和方法。更具體地，描述了選擇素調(diào)節(jié)劑及其用途，其中調(diào)節(jié)(如抑制或增強(qiáng))選擇素介導(dǎo)的功能的所述選擇素調(diào)節(jié)劑包含特定的糖模擬物，所述糖模擬物單獨(dú)存在或與被稱為BASA(芐氨基磺酸)的一類化合物中的成員連接或與被稱為BACA(芐氨基羧酸)的一類化合物中的成員連接。
文檔編號(hào)C07H15/22GK101287741SQ200680037714
公開日2008年10月15日 申請(qǐng)日期2006年9月1日 優(yōu)先權(quán)日2005年9月2日
發(fā)明者小約翰·T·巴頓, 布特·恩斯特, 約翰·L·麥格納尼, 謝爾蓋·A·斯瓦洛夫斯基, 阿朗·K·薩卡 申請(qǐng)人:糖模擬物有限公司