裂果薯總皂苷在抗細(xì)胞微管作用中的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，設(shè)及裂果馨與裂果馨總皂巧在制備W細(xì)胞微管為祀點(diǎn)的藥 物中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 微管是一種具有極性的細(xì)胞骨架。微管是由a，P，丫等類型的微管蛋白亞基形 成的微管蛋白聚合體。微管在細(xì)胞中有著重要的功能：1、支架作用，細(xì)胞中的微管起到支撐 作用，在神經(jīng)細(xì)胞的軸突和樹突中，微管束沿長軸排列，起支撐作用，在胚胎發(fā)育階段微管 幫助軸突生長，突入W細(xì)胞核為中屯、向外放射狀排列的微管纖維；2、細(xì)胞內(nèi)運(yùn)輸，在周圍 組織與成熟的軸突中，微管起到物質(zhì)運(yùn)輸?shù)淖饔?，與微管結(jié)合的驅(qū)動(dòng)蛋白在消耗ATP的情 況下能在細(xì)胞內(nèi)運(yùn)輸小泡；3、形成紡鍵體，在分裂細(xì)胞中牽引染色體到達(dá)分裂極，而微管的 動(dòng)態(tài)聚合與解聚過程是細(xì)胞分裂中的重要環(huán)節(jié)，任何于擾運(yùn)一過程的藥物都可能影響腫瘤 細(xì)胞生長；4、細(xì)胞遷移與形變等運(yùn)動(dòng)。
[0003] 無限制的快速增殖是腫瘤細(xì)胞的重要特點(diǎn)，而微管的動(dòng)態(tài)聚合與解聚過程是細(xì) 胞分裂中的重要環(huán)節(jié)，任何于擾運(yùn)一過程的藥物都可能影響腫瘤細(xì)胞生長。多數(shù)抑制微管 活性的化合物都對腫瘤細(xì)胞生長有不同程度的抑制作用。此外，W微管為祀點(diǎn)的藥物在腫 瘤臨床治療中的成功應(yīng)用，說明微管是抗癌藥物的有效祀點(diǎn)。
[0004] 目前的研究表明，微管蛋白聚集抑制劑結(jié)合于秋水仙堿結(jié)合域或長春堿結(jié)合域， 抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞的生長，選擇性地阻斷已形成的血管、抑制血流，從而實(shí)現(xiàn)抗血管生成的 作用，在血管類藥物中有一定的應(yīng)用。
[0005] 神經(jīng)細(xì)胞軸突生長過程中，生長錐內(nèi)肌動(dòng)蛋白絲與微管相互作用，改變微管與肌 動(dòng)蛋白絲的動(dòng)態(tài)性，影響它們之間的相互作用，從而影響生長錐的行為。肌動(dòng)蛋白絲與微管 之間的動(dòng)態(tài)協(xié)調(diào)作用，在軸突延伸與轉(zhuǎn)向過程中具有重要意義，可W此為祀點(diǎn)來選擇藥物 調(diào)控神經(jīng)細(xì)胞的生長。
[0006] 微管作為重要的細(xì)胞調(diào)控與結(jié)構(gòu)部分，已成為藥物研發(fā)的熱點(diǎn)，目前已上市的針 對微管蛋白的藥物有紫杉醇，長春新堿等。裂果馨，百合綱，百合目，茹翦馨科，裂果馨屬植 物，拉下學(xué)名：SchizocapsaplantagineaHance，別名：屈頭雞、水狗仔、長須果、冬葉屯、黑 冬葉、箭根馨、客媽連、客媽屯、馬老頭、米荷瓦、曲頭雞、水橫柳、水雞仔、水蘿K水=屯、水 田屯、水郵公、田螺屯、±貝母、± =屯、小田螺屯。多生于水溝邊、田巧草地上。分布于江 西、湖南、廣東、廣西及貴州等省區(qū)。W塊莖入藥，主治咽喉腫痛，急性腸胃炎，泌尿道感染， 牙痛，慢性胃炎，胃、十二指腸潰瘍，風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，月經(jīng)不調(diào)，追疾，跌打損傷；外用治瘡瘍 腫毒，外傷出血。中國專利化201310072951公開了裂果馨總皂巧在治療癌癥方面的應(yīng)用， 并公開了其制備方法；但目前尚未有裂果馨皂巧作用于微管方面的報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明的目的是公開一種從廣西特色植物裂果馨的塊莖中提取出的總皂巧在制 備w細(xì)胞微管為祀點(diǎn)的藥物中的應(yīng)用。
[0008] 本發(fā)明提供了一種新的抗微管作用的物質(zhì)，該物質(zhì)為裂果馨(拉下學(xué)名： Schizocapsa plantaginea Hance)中提取的總皂巧成分和包含的各總皂巧單體化合物成 分在制備W細(xì)胞微管為祀點(diǎn)的藥物中的應(yīng)用。
[0009] 本發(fā)明中，將裂果馨總皂巧用于對SMMC-7721細(xì)胞遷移能力的影響實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯 示裂果馨總皂巧對細(xì)胞的遷移有抑制作用，該效應(yīng)通過作用于微管蛋白實(shí)現(xiàn)。
[0010] 本發(fā)明中，將裂果馨總皂巧用于對細(xì)胞克隆增殖的抑制作用的實(shí)驗(yàn)。細(xì)胞的增殖 與集落形成能力與微管相關(guān)，微管蛋白調(diào)控劑可通過調(diào)節(jié)微管功能降低細(xì)胞的增殖與集落 形成能力；實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：裂果馨總皂巧加藥組細(xì)胞克隆數(shù)顯著低于空白對照組，且呈劑 量依賴性。說明裂果馨總皂巧能夠抑制腫瘤細(xì)胞的增殖與分裂，該效應(yīng)通過作用于微管微 管蛋白實(shí)現(xiàn)。
[0011] 本發(fā)明中，進(jìn)行了免疫巧光觀察裂果馨總皂巧對微管形態(tài)的影響的實(shí)驗(yàn)，結(jié)果顯 示：與空白對照組相比，裂果馨總皂巧作用后的SMMC-7721細(xì)胞微管皺縮于細(xì)胞核周圍，細(xì) 胞呈圓形或梭形，正常細(xì)胞的微管W細(xì)胞核為中屯、向外伸展平鋪；可見裂果馨總皂巧可W 調(diào)控微管蛋白的功能。
[0012] 本發(fā)明中，進(jìn)行了微管聚合實(shí)驗(yàn)觀察裂果馨總皂巧對微管蛋白聚合的影響；結(jié)果 顯示：裂果馨總皂巧具有干擾微管聚合與抗微管解聚的作用，裂果馨總皂巧對微管蛋白具 有調(diào)控作用。
[0013] 裂果馨總皂巧對細(xì)胞的遷移有抑制作用，能夠抑制腫瘤細(xì)胞的增殖與分裂，裂果 馨總皂巧具有干擾微管聚合與抗微管解聚的作用，對微管蛋白具有調(diào)控作用。裂果馨總皂 巧的作用在腫瘤與血管、神經(jīng)藥物中有廣泛的應(yīng)用，是一種非常有價(jià)值的藥物祀點(diǎn)；而且裂 果馨總皂巧的植物來源為廣西本地特有的植物品種，有較大的開發(fā)利用價(jià)值，有一定種植 規(guī)模，廉價(jià)易得。
【附圖說明】
[0014] 圖1為裂果馨總皂巧對細(xì)胞劃痕恢復(fù)的影響，圖1中可見裂果馨總皂巧高劑量組 相比空白對照組，劃痕無法愈合且相比24h前更寬；說明裂果馨總皂巧對細(xì)胞的遷移有抑 制作用，該效應(yīng)通過作用于微管蛋白實(shí)現(xiàn)。
[0015] 圖2為裂果馨總皂巧對細(xì)胞集落形成能力的影響，由圖2可見，裂果馨總皂巧加藥 組細(xì)胞克隆數(shù)顯著低于空白對照組，且呈劑量依賴性；說明裂果馨總皂巧能夠抑制腫瘤細(xì) 胞的增殖與分裂，該效應(yīng)通過作用于微管微管蛋白實(shí)現(xiàn)。
[0016] 圖3為免疫巧光觀察裂果馨總皂巧對微管蛋白的作用，由圖3可見與空白對照組 相比，裂果馨總皂巧作用后的SMMC-7721細(xì)胞微管皺縮于細(xì)胞核周圍，細(xì)胞呈圓形或梭形， 正常細(xì)胞的微管W細(xì)胞核為中屯、向外伸展平鋪；可見裂果馨總皂巧可W調(diào)控微管蛋白的功 能。
[0017] 圖4為微管聚合實(shí)驗(yàn)觀察裂果馨總皂巧對微管蛋白聚合與解聚的影響；由圖4可 見，微管蛋白的吸光度-時(shí)間曲線在37°C上升直到穩(wěn)定，冰浴后又降低到0點(diǎn)。作用于微管 蛋白的藥物可破壞運(yùn)一過程，圖4中紫杉醇的曲線可見冰浴后0D值下降很慢，是因?yàn)樽仙?醇具有抗微管蛋白解聚的作用，因此在冰浴中微管蛋白仍保持聚合狀態(tài)。相比空白組與紫 杉醇，裂果馨總皂巧在開始解育時(shí)曲線上升較慢，冰浴后出現(xiàn)與紫杉醇類似的效應(yīng)，說明裂 果馨總皂巧具有干擾微管聚合與抗微管解聚的作用，證明裂果馨總皂巧對微管蛋白具有調(diào) 控作用。
【具體實(shí)施方式】
[001引 1.裂果馨總皂巧對SMMC-7721細(xì)胞遷移能力的影響 1. 1實(shí)驗(yàn)方法 將人肝癌細(xì)胞SMMC-7721培養(yǎng)于含15%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基中，置于C02培養(yǎng)箱 (37°C，5%C02,飽和濕度)中培養(yǎng)。待細(xì)胞為對數(shù)生長期時(shí)W0. 25%膜蛋白酶將細(xì)胞消化，W 5*106個(gè)/孔濃度接種于6孔板中，置C02培養(yǎng)箱（37°C，5%C02,飽和濕度）繼續(xù)培養(yǎng)12小 時(shí)讓細(xì)胞完全貼壁。用10微升滅菌移液槍槍頭在細(xì)