蛋白質(zhì)在藥品、獸醫(yī)產(chǎn)品、化妝品和其他消費(fèi)品、食品、飼料、診斷、工業(yè)化學(xué)和去污領(lǐng)域中的廣泛應(yīng)用中使用。有時(shí)，這些用途被蛋白質(zhì)自身的固有約束所限制，或被它們所應(yīng)用的環(huán)境或介質(zhì)所迫。這些約束可能導(dǎo)致蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性差，性能變化或高成本。由于生物技術(shù)的出現(xiàn)，可以生產(chǎn)各種用于治療應(yīng)用的蛋白質(zhì)。蛋白質(zhì)藥物在它們被生產(chǎn)后通常在使用前被儲(chǔ)存。由于蛋白質(zhì)通常比“傳統(tǒng)”藥物更大更復(fù)雜這一事實(shí)，適合于儲(chǔ)存的蛋白質(zhì)藥物的配制和加工可能特別具有挑戰(zhàn)性。關(guān)于蛋白質(zhì)藥物制劑和加工設(shè)計(jì)的綜述，參見Carpenter等人(1997)，Pharm.Res.14:969-975；Wang(2000)，Int.J.Pharmaceutics203:1-60；以及Tang和Pikal(2004)，Pharm.Res.21:191-200。有幾個(gè)因素可在設(shè)計(jì)蛋白質(zhì)藥物生產(chǎn)的制劑和工藝中予以考慮。首要問(wèn)題是蛋白質(zhì)在經(jīng)過(guò)制造、運(yùn)輸和處理的任意或所有步驟的穩(wěn)定性，這可以包括所述組合物的制備、冷凍、凍干、干燥、儲(chǔ)存、運(yùn)輸、重構(gòu)、凍/融循環(huán)，以及最終用戶對(duì)其重構(gòu)后的存儲(chǔ)。其它潛在的考慮事項(xiàng)包括制造、處理和分配的簡(jiǎn)易性和經(jīng)濟(jì)性；用于患者施用的最終產(chǎn)品的組成；最終用戶使用的簡(jiǎn)易性，其包括凍干制劑在重構(gòu)時(shí)的溶解度。液體制劑可滿足特定目的。液體制劑的潛在優(yōu)勢(shì)包括制造的簡(jiǎn)易性和經(jīng)濟(jì)性，以及最終用戶的便利性。通常，當(dāng)長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存時(shí)，多肽在溶液中不穩(wěn)定(Manning等人(1989)，Pham.Res.6:903-918)。因此，已開發(fā)額外的加工步驟以允許較長(zhǎng)的保質(zhì)期，包括干燥例如凍干。凍干制劑還可提供某些優(yōu)勢(shì)。凍干的潛在益處包括蛋白質(zhì)穩(wěn)定性的改善以及運(yùn)輸和儲(chǔ)存的簡(jiǎn)易性和經(jīng)濟(jì)性的提高。然而，凍干藥物組合物可能對(duì)最終用戶不太便利。除了選擇組合物基本形式(如凍干的、液體的、冷凍的等)之外，對(duì)蛋白質(zhì)制劑的最優(yōu)化通常涉及改變制劑的組分及其各自的濃度以使蛋白質(zhì)穩(wěn)定性最大化。多種因素可能影響蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性，包括離子強(qiáng)度、pH、溫度、凍/融循環(huán)、剪切力、冷凍、凍干、干燥、攪拌以及重構(gòu)。蛋白質(zhì)的不穩(wěn)定性可能由物理降解(例如變性、聚集或沉淀)或化學(xué)降解(例如脫酰胺作用、氧化或水解)而引起。制劑組分和濃度的最優(yōu)化僅基于實(shí)證研究和/或克服不穩(wěn)定性來(lái)源的合理方法。有時(shí)，在含有多肽的藥物組合物(包括水性和凍干制劑)的長(zhǎng)期儲(chǔ)存中，活性多肽可能由于聚集和/或降解而丟失。因此，改善多肽穩(wěn)定性的典型做法可通過(guò)改變制劑中要素的濃度或通過(guò)加入輔料以改變制劑(美國(guó)專利號(hào)5,580,856和6,171,586和美國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)朥S2003/0202972，US2003/0180287)來(lái)解決。US5,580,856為公開了可在復(fù)水期間或之后添加以穩(wěn)定干燥蛋白質(zhì)的試劑的原型專利，所述試劑諸如天然聚合物、表面活性劑、硫酸多糖、蛋白質(zhì)和緩沖劑。然而，美國(guó)專利5,580,856除了給出許多選擇之外，并沒(méi)有教導(dǎo)應(yīng)當(dāng)為哪種蛋白質(zhì)添加哪種穩(wěn)定劑。因此，雖然本領(lǐng)域讀者知道這些選擇，他或她將必須在US5,580,856所描述的許多選項(xiàng)中找出用于他/她的蛋白質(zhì)的最佳條件。美國(guó)專利申請(qǐng)2003/0202972描述了一種抗Her2抗體的穩(wěn)定的凍干制劑，其中所述穩(wěn)定劑為糖、海藻糖或緩沖劑。然而，盡管這些穩(wěn)定劑對(duì)抗體可能有用，但它們不能類推至其它蛋白質(zhì)。美國(guó)專利申請(qǐng)2003/0180287類似于US2003/0202972，因?yàn)樗裁枋隽艘环N免疫球蛋白樣蛋白的穩(wěn)定溶液，即含有Fc結(jié)構(gòu)域的蛋白質(zhì)。所述穩(wěn)定劑可以是磷酸鈉、磷酸鉀、檸檬酸鈉或鉀、馬來(lái)酸、乙酸銨、Tris-緩沖劑、乙酸鹽、二乙醇胺、組氨酸、賴氨酸或半胱氨酸。在本領(lǐng)域讀者可以選擇的這些化學(xué)上不同的穩(wěn)定劑中，賴氨酸被證明是適合的。然而，如同US2003/0202972，特定穩(wěn)定劑僅僅適用于特定的蛋白質(zhì)，在這里是指含F(xiàn)c結(jié)構(gòu)域的蛋白質(zhì)，并且本身不能被類推到另一種蛋白質(zhì)。因此，添加劑的使用不能從特定蛋白質(zhì)類推到另一種不相關(guān)的蛋白質(zhì)。事實(shí)上，添加劑的使用—盡管改善了儲(chǔ)存—仍可導(dǎo)致無(wú)活性的多肽。此外，在凍干的情況下，復(fù)水步驟可引入通過(guò)例如聚集或變性導(dǎo)致多肽失活的條件(Hora等人(1992)，Pharm.Res.，9:33-36；Liu等人(1991)，Biotechnol.Bioeng.，37:177-184)。實(shí)際上，多肽的聚集是不希望的，因?yàn)樗赡芤鹈庖咴?Cleland等人(1993)，Crit.Rev.TherapeuticDrugCarrierSystems，10:307-377；以及Robbins等人(1987)，Diabetes，36:838-845)。在藥物產(chǎn)品的開發(fā)和制造過(guò)程中，生物活性的維持取決于大分子的固有穩(wěn)定性，以及所采用的穩(wěn)定技術(shù)。存在一系列的蛋白質(zhì)穩(wěn)定技術(shù)；包括向蛋白質(zhì)水溶液或懸浮液中添加化學(xué)“穩(wěn)定劑”。例如，美國(guó)專利4,297,344披露了通過(guò)添加選定的氨基酸使凝血因子II和VIII、抗凝血酶III、血纖維蛋白溶酶原對(duì)熱具有穩(wěn)定性。美國(guó)專利4,783,441披露了一種通過(guò)添加表面活性物質(zhì)來(lái)穩(wěn)定蛋白質(zhì)的方法。美國(guó)專利4,812,557披露了一種通過(guò)使用人血清白蛋白來(lái)穩(wěn)定白細(xì)胞介素-2的方法。將制備物與冷凍保護(hù)劑混合并于非常低的溫度下儲(chǔ)存的凍/融法是穩(wěn)定蛋白質(zhì)的另一種選擇。然而，并非所有的蛋白質(zhì)會(huì)在凍/融循環(huán)中存活。使用冷凍保護(hù)添加劑通常是甘油的冷藏室另一個(gè)選擇。還可以采用如美國(guó)專利5,098,893所描述的以玻璃形式儲(chǔ)存。這種情況下，蛋白質(zhì)溶解于無(wú)定型態(tài)或玻璃態(tài)的水溶性或水膨脹性物質(zhì)中。應(yīng)用最廣泛的穩(wěn)定蛋白質(zhì)的方法是冷凍干燥法或凍干法。每當(dāng)在水溶液中不能獲得足夠的蛋白質(zhì)穩(wěn)定性時(shí)，凍干提供了最可行的選擇。凍干法的一個(gè)缺點(diǎn)是它需要復(fù)雜的加工，耗時(shí)且昂貴。此外，如果冷凍干燥不能謹(jǐn)慎實(shí)施，大多數(shù)制備物通過(guò)該技術(shù)的冷凍和脫水步驟會(huì)至少部分變性。結(jié)果是蛋白質(zhì)分子的一部分經(jīng)常不可逆聚集，致使制劑對(duì)于腸胃外施用上不可接受的。通常而言，文獻(xiàn)中已經(jīng)詳細(xì)描述了蛋白質(zhì)降解，但是沒(méi)有描述中和粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(另稱為GM-CSF)的化合物，特別是多肽和抗GM-CSF抗體的儲(chǔ)存和可溶性。此外，盡管本領(lǐng)域已知蛋白質(zhì)穩(wěn)定劑以及允許高濃度蛋白質(zhì)同時(shí)保持穩(wěn)定的試劑有眾多選擇，但直至本發(fā)明，在本領(lǐng)域中沒(méi)有意識(shí)到包含以高濃度中和GM-CSF的化合物的制劑可能不穩(wěn)定而因此需要改善。在制備包含蛋白質(zhì)諸如抗體如單克隆抗體的藥物組合物中，目的在于開發(fā)高濃度的液體制劑，這是由于皮下施用具有能使患者更便利的潛力。然而，存在普遍共識(shí)，即開發(fā)高濃度抗體特別是單克隆抗體制劑對(duì)單克隆抗體的物理和化學(xué)穩(wěn)定性提出了嚴(yán)峻的挑戰(zhàn)，諸如可溶性以及不溶性聚集體或顆粒的形成的增加會(huì)提高免疫源應(yīng)答的概率并導(dǎo)致低生物活性。液體藥物組合物儲(chǔ)存期間多肽聚集體或顆粒的形成可能會(huì)對(duì)該多肽的生物活性產(chǎn)生不利影響，導(dǎo)致該藥物組合物治療功效的喪失。此外，聚集體或顆粒的形成可引起其它挑戰(zhàn)，諸如當(dāng)通過(guò)使用輸注系統(tǒng)來(lái)施用包含多肽的藥物組合物時(shí)造成導(dǎo)管、膜或泵的堵塞。此外，已報(bào)道高濃度抗體制劑會(huì)導(dǎo)致粘度增加由此給可制造性和注射性造成嚴(yán)峻挑戰(zhàn)。高粘度制劑難以制造、吸入注射器和注射。在操作粘性制劑中所使用的力導(dǎo)致過(guò)度起沫，這可引起單克隆抗體的變性和失活。因此，非常需要一種穩(wěn)定的高濃度蛋白質(zhì)藥物組合物，其包含中和GM-CSF的化合物例如抗體，并具有適合于皮下施用的、低的且可行的粘度，諸如在即用型裝置中。此外，從患者角度看，將非常需要室溫下穩(wěn)定的產(chǎn)品。目前，尤其是不可能有市售抗體制劑能在藥物產(chǎn)品的整個(gè)保質(zhì)期內(nèi)于室溫下儲(chǔ)存。典型地，增加的蛋白質(zhì)聚集的出現(xiàn)導(dǎo)致不可接受的高水平聚集體和蛋白質(zhì)相關(guān)的雜質(zhì)，這可能引起免疫源性反應(yīng)。最初被鑒定為造血生長(zhǎng)因子的粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)，最近已經(jīng)被證明是在炎癥和自身免疫中的重要細(xì)胞因子。在各種炎癥部位，包括在過(guò)敏和銀屑病患者、關(guān)節(jié)炎和哮喘患者中，測(cè)量到GM-CSFmRNA或蛋白質(zhì)的水平升高。許多體內(nèi)研究已經(jīng)表明，在過(guò)去幾年中，經(jīng)由中和抗體來(lái)阻斷GM-CSF，可以在多種炎癥模型中預(yù)防或甚至治愈促炎性疾病，包括關(guān)節(jié)炎實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦炎、銀屑病和肺部疾病的模型。因此，非常需要獲得一種含有GM-CSF中和化合物的制劑，即特別是穩(wěn)定的、包含高含量的GM-CSF中和化合物和/或可以通過(guò)皮下途徑施用的制劑。因此，本發(fā)明的技術(shù)挑戰(zhàn)符合上述需要。本發(fā)明滿足了這些需要，并且因此提供了關(guān)于制劑以及將這些制劑用于治療患病受試者(將得益于中和GM-CSF的化合物的施用)的方法和用途的實(shí)施方案，作為該技術(shù)挑戰(zhàn)的一種解決方案。這些實(shí)施方案在本文中進(jìn)行表征并描述，在實(shí)施例中闡述并反映在權(quán)利要求中。必須注意的是，除非上下文另有明確說(shuō)明，如本文所用的單數(shù)形式“一個(gè)”、“一種”以及“該”包括復(fù)數(shù)指代。因此，例如提及“一種抗體”包括此類不同抗體的一種或多種，提及“該方法”包括指代本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所公知的可以被修改或替換本文所描述方法的等同步驟和方法。除非另有說(shuō)明，一系列要素之前的術(shù)語(yǔ)“至少”應(yīng)被理解為是指該系列中的每一個(gè)要素。本領(lǐng)域技術(shù)人員僅使用常規(guī)實(shí)驗(yàn)，將認(rèn)識(shí)到或能夠確定本文所述發(fā)明的特定實(shí)施方案的許多等同方案。這些等同方案旨在被本發(fā)明所涵蓋。貫穿于本說(shuō)明書和所附權(quán)利要求書中，除非上下文另有要求，詞語(yǔ)“包含”及其變體諸如“包括”和“含有”將被理解為暗示包括所述整數(shù)或步驟、或整數(shù)或步驟的集合，但并不排除任何其它的整數(shù)或步驟、或整數(shù)或步驟的集合。當(dāng)在本文中使用時(shí)，術(shù)語(yǔ)“包含”可被術(shù)語(yǔ)“含有”替代，或有時(shí)在本文使用時(shí)會(huì)以術(shù)語(yǔ)“具有”替代，或甚至可能被“由…組成”所取代。當(dāng)在本文中使用時(shí)，“由…組成”排除了權(quán)利要求要素中未明確提出的任何要素、步驟或成分。當(dāng)在本文中使用時(shí)“基本上由…組成”并不排除實(shí)質(zhì)上不影響權(quán)利要求的基本特征和新穎性特征的材料或步驟。在本文的每一個(gè)實(shí)例中，術(shù)語(yǔ)“基本上由…組成”和“由…組成”可互相替換。如本文所使用的在多個(gè)所述要素之間的連接術(shù)語(yǔ)“和/或”被理解為既包含單獨(dú)選項(xiàng)也包含組合選項(xiàng)。例如，當(dāng)兩個(gè)要素通過(guò)“和/或”連接時(shí)，第一種選項(xiàng)是指不包含第二種要素的第一種元素的適用性。第二種選項(xiàng)是指不包含第一種要素的第二種要素的適用性。第三種選項(xiàng)是指第一種要素和第二種要素結(jié)合的適用性。這些選項(xiàng)中的任意一種都被理解為落入該含義內(nèi)，并因此滿足本文所使用術(shù)語(yǔ)“和/或”的要求。多于一種選項(xiàng)的并行適用性也被理解為落入該含義內(nèi)，因此滿足本文所使用的術(shù)語(yǔ)“和/或”的要求。本說(shuō)明書全文引用了多個(gè)文件。本文所引用的每一個(gè)文件(包括所有專利、專利申請(qǐng)、科學(xué)出版物、制造商說(shuō)明書、指導(dǎo)書等)，無(wú)論是上文還是下文，都通過(guò)引用整體并入本文。在通過(guò)引用并入的材料或與本說(shuō)明書矛盾或不一致的情況下，本說(shuō)明書將取代任何這樣的材料。本文中的任何內(nèi)容不應(yīng)被解釋為由于在先發(fā)明就承認(rèn)本發(fā)明沒(méi)有早于此種公開物的權(quán)利?？紤]到要以提供一種具有高濃度中和GM-CSF的化合物的制劑為目標(biāo)，本發(fā)明人認(rèn)識(shí)到中和GM-CSF的化合物在高濃度下可能不穩(wěn)定，在長(zhǎng)時(shí)間儲(chǔ)存中也可能不穩(wěn)定。實(shí)際上，存在很多中和GM-CSF的化合物如蛋白質(zhì)可能不穩(wěn)定的方式。例如，蛋白質(zhì)不穩(wěn)定性可能由蛋白質(zhì)聚集或降解造成，也可能由于脫氨基作用、脫酰胺基作用、氧化、二硫鍵斷裂和形成、水解作用、琥珀亞酰胺化、非二硫化物交聯(lián)、去糖基化或“酶促褐變”(美拉德反應(yīng))或這些現(xiàn)象的任意組合所導(dǎo)致的化學(xué)不穩(wěn)定性造成；參見例如Wang等人(1999)，Int.J.Pharm.185:129-188。此外，理化參數(shù)諸如溫度、pH值、表面吸附、鹽、金屬離子、螯合劑、物理力如剪切力、蛋白變性劑、非水溶劑、蛋白質(zhì)濃度、蛋白質(zhì)來(lái)源和純度、蛋白質(zhì)形態(tài)或壓力可影響蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性。但是，盡管很多因素可影響蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性，但也可采取很多措施來(lái)穩(wěn)定蛋白質(zhì)。例如，可以在內(nèi)部(通過(guò)改變氨基酸)或外部穩(wěn)定蛋白質(zhì)。外部穩(wěn)定可以通過(guò)添加螯合劑、金屬離子、還原劑、聚合物、聚乙二醇/多元醇、血清白蛋白、表面活性劑、糖和多元醇、脂肪酸和磷脂、氨基酸、緩沖劑等來(lái)實(shí)現(xiàn)；參見例如Wang，Y和HansonM(1988)，J.ParentalSci.&Technology，42，Supplement:4-26；Wang等人(1999)Int.J.Pharm.185:129-188?？傊瑸榱朔€(wěn)定制劑中的GM-CSF中和化合物諸如抗體，技術(shù)人員會(huì)獲得多種選擇。在本發(fā)明的情況下，本發(fā)明人觀察到中和GM-CSF的化合物可顯示出聚集和/或可能不以更高的濃度溶解。許多不同因素可引起制劑中蛋白質(zhì)的聚集。典型的純化和儲(chǔ)存過(guò)程可使蛋白質(zhì)制劑暴露于導(dǎo)致蛋白質(zhì)聚集成蛋白二聚體、三聚體或多聚體、較大的亞可見顆粒和可見顆粒的條件和組分中。例如，制劑中的蛋白質(zhì)可由于下述的一種或多種情況而聚集：儲(chǔ)存、暴露于升高的溫度、制劑的pH值、制劑的離子強(qiáng)度、某些表面活性劑和乳化劑的存在。類似地，當(dāng)暴露于剪切應(yīng)力如在溶液中重構(gòu)凍干蛋白質(zhì)餅、過(guò)濾純化蛋白質(zhì)樣品、凍融、振動(dòng)或經(jīng)由注射器轉(zhuǎn)移蛋白質(zhì)溶液時(shí)，蛋白質(zhì)可以聚集。聚集還可能由于溶液中和存儲(chǔ)瓶?jī)?nèi)液態(tài)-空氣界面處多肽分子間的相互作用而發(fā)生。構(gòu)象變化可在由于運(yùn)輸期間的攪動(dòng)所引起的界面壓縮或延伸的過(guò)程中被吸附到空氣-液體、固體-液體界面的多肽中發(fā)生。這種攪動(dòng)還可導(dǎo)致制劑的蛋白質(zhì)聚集并最終與其它被吸附的蛋白質(zhì)一起沉淀。亞可見粒子的增長(zhǎng)可表明可見粒子的形成趨勢(shì)。通常，不同類型聚集體和顆粒的形成可通過(guò)不同的測(cè)量系統(tǒng)根據(jù)聚集體或顆粒的尺寸來(lái)進(jìn)行分析。例如，SEC、DLS、AUC測(cè)量納米尺寸范圍內(nèi)的二聚體、三聚體、多聚體；不透光度、顯微鏡檢查、動(dòng)態(tài)影像、流式細(xì)胞術(shù)和庫(kù)爾特(Coulter)測(cè)量大于1μm的亞可見顆粒和小的可見顆粒。此外，將蛋白質(zhì)制劑暴露于光下可引起蛋白質(zhì)聚集。因此本發(fā)明提供了能實(shí)現(xiàn)高濃度的中和GM-CSF的化合物，并減少這些化合物聚集的制劑。在不受理論的束縛下，聚集的減少被認(rèn)為是通過(guò)控制一種或多種上述聚集機(jī)制來(lái)實(shí)現(xiàn)。這可以引起例如改進(jìn)的產(chǎn)品穩(wěn)定性，以及制造過(guò)程中和儲(chǔ)存條件下的更大的靈活性。本發(fā)明人旨在提供一種含有高濃度的中和GM-CSF的化合物的制劑，以便例如實(shí)現(xiàn)較低的注射體積而適于減少由于高注射量引起的副作用如疼痛，或允許以低體積進(jìn)行皮下施用。因?yàn)槿绱?，本發(fā)明人在他們研究期間已經(jīng)觀察到了中和GM-CSF的化合物的某種不穩(wěn)定性，并因此旨在改善這種不希望的觀察結(jié)果。因此，他們旨在濃縮中和GM-CSF的化合物，而同時(shí)將其保持在溶液中，即處于溶解狀態(tài)。在這樣做時(shí)，他們有很多種選擇和替代，然而沒(méi)有任何跡象顯示這些選擇和替代中的任何一個(gè)將適用于解決這個(gè)目標(biāo)問(wèn)題?！叭芙鉅顟B(tài)”意指中和GM-CSF的化合物是在溶液中，優(yōu)選濃度至少為約20mg/ml，也就是說(shuō)其直接溶解和/或分散在制劑的水溶液中(即在水相中)。優(yōu)選地，中和GM-CSF的化合物是均質(zhì)地溶解和/或分散的?！熬|(zhì)地”意指溶解和/或分散于水性制劑中的中和GM-CSF的化合物幾乎是均勻地，優(yōu)選均勻地分布于水性制劑中，這樣使得在該水溶液體積(“v”)下(或中)的中和GM-CSF的化合物的濃度(“c”)(在摩爾質(zhì)量的情況下為“n”或在質(zhì)量的情況下為“m”)是幾乎完全相同的，優(yōu)選完全相同的，即c＝n/v或c＝m/v分別是幾乎恒定的，優(yōu)選為恒定的。優(yōu)選地，所述制劑中不存在濃度梯度。因此，本發(fā)明所述包含中和GM-CSF的化合物的穩(wěn)定制劑可優(yōu)選地被認(rèn)為是一種水溶液，其中中和GM-CSF的化合物直接溶解和/或分散于該水溶液中?！叭芤骸笔莾煞N或多種物質(zhì)/組分的均質(zhì)混合物。在這樣的混合物中，一種溶質(zhì)(在本發(fā)明中是中和GM-CSF的化合物)溶解于(如上所述)另一種物質(zhì)(本在發(fā)明中優(yōu)選為水性制劑)中，也被稱為溶劑。鑒于以上所述，中和GM-CSF的化合物優(yōu)選非異質(zhì)地溶解和/或分散在水溶液中。術(shù)語(yǔ)“溶解狀態(tài)”還包括中和GM-CSF的化合物優(yōu)選為在水溶液中是基本上不乳化的，或更優(yōu)選為是完全不乳化的。此外，術(shù)語(yǔ)“溶解狀態(tài)”包括中和GM-CSF的化合物優(yōu)選為例如在脂質(zhì)體、多層脂質(zhì)體或諸如此類中是基本上不封裝和/或包埋的(優(yōu)選少于2％、1％或0.5％的中和GM-CSF的化合物可被封裝和/或包埋)，或更優(yōu)選為完全不封裝和/或包埋的。因此，本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案是含有中和GM-CSF的化合物的液體制劑，其在長(zhǎng)期儲(chǔ)存中是穩(wěn)定的并且沒(méi)有形成綴合物/聚集體/顆?；蚱?降解產(chǎn)品，適合于皮下施用。具體而言，在測(cè)試過(guò)多種不同穩(wěn)定劑后，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)如果將張力調(diào)節(jié)劑添加至待儲(chǔ)存的溶液中，可以穩(wěn)定中和GM-CSF的化合物。張力調(diào)節(jié)劑的實(shí)例包括但不限于糖和糖醇。簡(jiǎn)單的糖類被稱為單糖，包括葡萄糖、果糖、半乳糖、木糖、核糖、甘露糖、乳果糖、阿洛糖、阿卓糖、古洛糖、艾杜糖、塔羅糖、阿拉伯糖和來(lái)蘇糖。本發(fā)明更優(yōu)選二糖，其包括例如蔗糖、麥芽糖、乳糖、異麥芽糖、海藻糖和纖維二糖。糖醇包括山梨醇、甘露醇、甘油、赤蘚糖醇、麥芽糖醇、木糖醇、聚葡萄糖醇(polyglycitol)。在一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案中，所述糖是非還原糖諸如蔗糖或海藻糖。非還原糖的特征在于不存在開鏈結(jié)構(gòu)，因此它們不易受到氧化還原反應(yīng)的影響。因此，一種或多種非還原糖諸如蔗糖或海藻糖，或一種或多種糖醇諸如甘露醇或山梨醇，可以加入至包含中和GM-CSF的化合物的制劑中。非還原糖和糖醇的組合也可以加入至該溶液中，諸如蔗糖和甘露醇、蔗糖和山梨醇、海藻糖和甘露醇，或海藻糖和山梨醇。更優(yōu)選加入糖醇甘露醇和/或山梨醇，優(yōu)選其D-型，最優(yōu)選將山梨醇加入至該溶液。張力調(diào)節(jié)劑優(yōu)選山梨醇的濃度為約1％和約15％(w/v)之間，優(yōu)選為約2％和約10％(w/v)之間，更優(yōu)選為約3％至約7％(w/v)之間，優(yōu)選為4％和約6％(w/v)之間，最優(yōu)選為約5％(w/v)。另一種用來(lái)在長(zhǎng)期儲(chǔ)存時(shí)穩(wěn)定高濃度的中和GM-CSF的化合物的具體優(yōu)選物質(zhì)為緩沖體系，其pH為約4和約10之間，優(yōu)選為約4和約7之間，更優(yōu)選為約4和約6之間或約5和約7之間，甚至更優(yōu)選為約5.5和約6.5之間，最優(yōu)選pH為約5.8。緩沖液可優(yōu)選地選自組氨酸緩沖液、乙酸鹽緩沖液和檸檬酸鹽緩沖液。當(dāng)文本提及氨基酸時(shí)，其意為L(zhǎng)-氨基酸或D-氨基酸，其中優(yōu)選L-氨基酸。優(yōu)選組氨酸及其鹽用于緩沖體系。優(yōu)選地，所述鹽是氯化物、磷酸鹽、乙酸鹽或硫酸鹽，更優(yōu)選地，所述鹽是氯化物。組氨酸緩沖體系的pH為約5和約7之間，優(yōu)選為約5.5和約6.5之間，更優(yōu)選pH為約5.8或正好5.8?？梢酝ㄟ^(guò)使用常規(guī)使用的堿和酸來(lái)調(diào)節(jié)pH，優(yōu)選地，可以使用NaOH或組氨酸和組氨酸鹽的混合物，這樣劑不需要調(diào)節(jié)pH。緩沖體系優(yōu)選組氨酸緩沖體系的濃度為約10mM和約50mM之間，優(yōu)選為約20mM和約40mM之間，更優(yōu)選為約30mM。此外，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)，如果向待儲(chǔ)存的溶液中添加表面活性劑、氨基酸、抗氧化劑和/或螯合劑中的一種或多種，可以穩(wěn)定中和GM-CSF的化合物。根據(jù)優(yōu)選的實(shí)施方案，為了在長(zhǎng)期儲(chǔ)存和/或一個(gè)或多個(gè)凍/融循環(huán)中預(yù)防聚集并使該試劑足夠穩(wěn)定，將緩沖劑體系、張力調(diào)節(jié)劑、表面活性劑和/或泊洛沙姆的組合用于穩(wěn)定溶液中的中和GM-CSF的化合物，其中所述緩沖體系優(yōu)選組氨酸緩沖劑；所述張力調(diào)節(jié)劑優(yōu)選糖醇，更優(yōu)選甘露醇或甚至更優(yōu)選山梨醇；所述表面活性劑優(yōu)選聚山梨醇酯20(PS20；20)、聚山梨醇酯80(PS80；80)。已經(jīng)表明，就穩(wěn)定性而言，所述制劑中優(yōu)選具有約6％(w/v)和更高的糖醇，優(yōu)選山梨醇。然而，將所述制劑的滲透壓上限設(shè)定為約500mOsm/kg，其仍然是高滲的，但是類似于批準(zhǔn)產(chǎn)品(Synagis；Lm.administration)的滲透壓。正如本發(fā)明實(shí)施例所描述的，發(fā)現(xiàn)了中和GM-CSF的化合物的最佳穩(wěn)定性、張力和濃度之間的折中。因此，糖醇優(yōu)選山梨醇的優(yōu)選濃度在約3％和約7％(w/v)之間，更優(yōu)選在約4％和約6％(w/v)之間，最優(yōu)選約5％(w/v)。本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的包含中和GM-CSF的化合物的制劑或組合物不含或基本上不含氯化鈉?！盎旧喜缓币庵嘎然c的濃度為或非常接近0(零)mM，例如低于約50mM，優(yōu)選低于約20mM，更優(yōu)選低于約10mM，甚至更優(yōu)選為低于約5mM，最優(yōu)選低于約2mM，或甚至低于約1mM。在待儲(chǔ)存、冷凍/解凍和/或即可使用的液體制劑中，所使用的中和GM-CSF的各化合物的濃度為至少約20mg/ml，優(yōu)選至少約50mg/ml，更優(yōu)選為至少約60mg/ml。本發(fā)明所使用的濃度為約20mg/ml至約200mg/ml，優(yōu)選約40mg/ml至約200mg/ml，更優(yōu)選約50mg/ml至約180mg/ml，甚至更優(yōu)選約70mg/ml至約170mg/ml，甚至更優(yōu)選約75mg/ml至約165mg/ml，最優(yōu)選約80mg/ml或約150mg/ml。所生產(chǎn)的液體制劑的保質(zhì)期的優(yōu)選最低要求為2-8℃下24個(gè)月，優(yōu)選2-8℃下36個(gè)月，更優(yōu)選2-8℃下48個(gè)月，最優(yōu)選2-8℃下60個(gè)月，或室溫下(25℃±2℃)至少28天。本發(fā)明涉及穩(wěn)定的制劑，優(yōu)選穩(wěn)定的液體制劑，該制劑令人驚訝地允許中和GM-CSF的化合物的長(zhǎng)期儲(chǔ)存。該制劑部分是有用的，因?yàn)槠涓阌趯?duì)患者使用，該制劑的中和GM-CSF的化合物是高度濃縮的從而減少了由于高體積注射所引起的類似疼痛的副作用。因此，本發(fā)明的一個(gè)方面是基于發(fā)現(xiàn)包含以下項(xiàng)的制劑對(duì)于長(zhǎng)期儲(chǔ)存和/或凍/融循環(huán)和/或剪切應(yīng)力(振動(dòng)/攪拌穩(wěn)定性)具有足夠的穩(wěn)定性：-中和GM-CSF的化合物，-緩沖體系，其優(yōu)選自pH優(yōu)選為5和7之間的組氨酸緩沖液、乙酸鹽緩沖液和/或檸檬酸鹽緩沖液，-張力調(diào)節(jié)劑，其優(yōu)選自非還原糖諸如蔗糖或海藻糖，或糖醇諸如甘露醇或山梨醇，-以及表面活性劑、氨基酸、抗氧化劑和/或螯合劑中的一種或多種，優(yōu)選表面活性劑，所述表面活性劑優(yōu)選為聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯80或泊洛沙姆中的一種或多種。本發(fā)明的制劑相對(duì)于標(biāo)準(zhǔn)緩沖制劑具有許多優(yōu)點(diǎn)。一方面，該制劑顯示出經(jīng)長(zhǎng)期儲(chǔ)存后最小的聚集行為，并且沒(méi)有對(duì)高蛋白制劑所預(yù)期的有害作用。根據(jù)本發(fā)明，該制劑的其它優(yōu)點(diǎn)在于：所述中和GM-CSF的化合物的片段化最少；長(zhǎng)期儲(chǔ)存后所述中和GM-CSF的化合物的生物活性沒(méi)有顯著影響；所述組合物的粘度低。本發(fā)明第一方面的優(yōu)選實(shí)施方案如下：根據(jù)本發(fā)明所述的制劑，其中所述中和GM-CSF的化合物是多肽、擬肽、核酸或小分子。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述中和GM-CSF的化合物(優(yōu)選為多肽，更優(yōu)選為抗體或其功能片段)與GM-CSF或GM-CSF受體結(jié)合或特異性結(jié)合。據(jù)設(shè)想，所述GM-CSF或GM-CSF受體是動(dòng)物的，包括但不限于哺乳動(dòng)物諸如實(shí)驗(yàn)動(dòng)物(嚙齒類諸如大鼠、豚鼠、倉(cāng)鼠或小鼠；非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物諸如食蟹猴(cynomolgusmonkey)或獼猴(macaquemonkey)、家養(yǎng)或?qū)櫸飫?dòng)物(例如狗和貓)、農(nóng)場(chǎng)或農(nóng)業(yè)動(dòng)物(例如牛、綿羊、山羊和豬的動(dòng)物)和/或人。優(yōu)選地，所述GM-CSF或GM-CSF受體分別為人GM-CSF(智人，Homosapiens)或人GM-CSF受體，或分別為非人靈長(zhǎng)類GM-CSF或非人靈長(zhǎng)類GM-CSF受體。非人靈長(zhǎng)類GM-CSF或非人靈長(zhǎng)類GM-CSF受體的特別優(yōu)選的變體(同源物)包括長(zhǎng)臂猿(Nomascusconcolor，也稱為西部黑冠長(zhǎng)臂猿)的變體、獼猴科的猴子例如恒河猴(Macacamulatta)和食蟹猴(Macacafascicularis)的變體。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)特別優(yōu)選的實(shí)施方案，與GM-CSF或GM-CSF受體結(jié)合的化合物(優(yōu)選抗體或其片段)表現(xiàn)出對(duì)人和至少一種上述猴種兩者的交叉反應(yīng)性。例如，抗體或其片段能夠結(jié)合(并且中和)人GM-CSF和食蟹猴(Macacafascicularis)兩者。這對(duì)于旨在用于人類受試者的治療性施用的抗體分子是特別有利的，因?yàn)檫@樣的抗體通常必須在獲得監(jiān)管批準(zhǔn)之前經(jīng)過(guò)大量試驗(yàn)，其中某些早期試驗(yàn)涉及非人動(dòng)物物種。在進(jìn)行這樣的試驗(yàn)中，通常期望使用與人具有高度遺傳相似性的物種作為非人物種(例如，非人靈長(zhǎng)類動(dòng)諸如食蟹猴)，因?yàn)槿绱双@得的結(jié)果通常將是對(duì)人施用相同分子時(shí)可預(yù)期的相應(yīng)結(jié)果的高度預(yù)測(cè)。然而，此種基于動(dòng)物試驗(yàn)的預(yù)測(cè)能力至少部分取決于分子的可比性，由于種間反應(yīng)性，當(dāng)同樣的治療分子可被施用于人和動(dòng)物模型時(shí)，該預(yù)測(cè)能力非常高。如在本發(fā)明這個(gè)實(shí)施方案中，當(dāng)抗體分子對(duì)人類和另一個(gè)緊密相關(guān)物種的同一種抗原具有交叉反應(yīng)性時(shí)，可使用人和所述另一個(gè)緊密相關(guān)物種(例如上述猴種中的一種)的同一種抗體分子進(jìn)行試驗(yàn)。這提高了試驗(yàn)本身的效率以及由這種關(guān)于人類(從治療的立場(chǎng)看最終感興趣的物種)中這種抗體行為的試驗(yàn)所提供的預(yù)測(cè)能力。優(yōu)選地，與GM-CSF或GM-CSF受體結(jié)合的抗體或其功能片段是單克隆抗體或其功能片段。這同樣適用于中和GM-CSF的化合物的替代實(shí)施方案，該化合物不是抗體或不是衍生自抗體。優(yōu)選地，該中和GM-CSF的化合物是人單克隆抗體或其功能片段。中和GM-CSF的化合物可以是與人和非人靈長(zhǎng)類GM-CSF的表位結(jié)合的抗體或其功能片段。所述表位優(yōu)選包含第23-27位氨基酸(RRLLN)和/或第65-77位氨基酸(GLR/QGSLTKLKGPL)。第65-77位氨基酸序列延伸中第67位上的變異性反應(yīng)了這部分GM-CSF在一方面是人和長(zhǎng)臂猿GM-CSF(其中第67位為R)和另一方面是獼猴科的猴諸如獼猴和恒河猴(其中第67位為Q)之間的異質(zhì)性。如果表位包含兩個(gè)非相鄰的氨基酸序列延伸，諸如第23-27位(RRLLN)和第35-77位(GLR/QGSLTKLKGPL)，那么該表位還可稱為“不連續(xù)”表位。所述GM-CSF表位或所述GM-CSF不連續(xù)表位可進(jìn)一步包含第28-31位氨基酸(LSRD)、第32-33位氨基酸(TA)和/或第21-22位氨基酸(EA)。所述人單克隆抗體或其功能片段優(yōu)選在其重鏈可變區(qū)包含含有選自如SEQIDNO:1-13和56所示氨基酸序列的CDR3；優(yōu)選地，所述重鏈可變區(qū)CDR3包含如SEQIDNO:2所示的氨基酸序列。任意的所述重鏈可變區(qū)CDR3序列可進(jìn)一步與包含如SEQIDNO:14所示氨基酸序列的重鏈可變區(qū)CDR1以及包含如SEQIDNO:15所示的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)CDR2一起存在于重鏈可變區(qū)。進(jìn)一步地，所述人單克隆抗體或其功能片段可在其輕鏈可變區(qū)包含含有如SEQIDNO:16所示氨基酸序列的CDR1、含有如SEQIDNO:17所示氨基酸序列的CDR2和含有如SEQIDNO:18所示氨基酸序列的CDR3。在本發(fā)明特別優(yōu)選的一個(gè)方面，所述人單克隆抗體或其功能片段在其輕鏈可變區(qū)包含含有如SEQIDNO:16所示氨基酸序列的CDR1、含有如SEQIDNO:17所示氨基酸序列的CDR2和含有如SEQIDNO:18所示氨基酸序列的CDR3；在其重鏈可變區(qū)包含含有如SEQIDNO:14所示氨基酸序列的CDR1、含有如SEQIDNO:15所示氨基酸序列的CDR2和含有選自如SEQIDNO:1-13和56所示、最優(yōu)選為如SEQIDNO:2所示氨基酸序列的CDR3。根據(jù)一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述人單克隆抗體或其功能片段在其輕鏈可變區(qū)包含選自如SEQIDNO:19、54和55所示的氨基酸序列。根據(jù)另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述人單克隆抗體或其功能片段在其重鏈可變區(qū)包含選自如SEQIDNO:20-33、52和53所示的氨基酸序列。在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述人單克隆抗體或其功能片段包含如SEQIDNO:34所示的輕鏈氨基酸序列，和/或如SEQIDNO:35-48任一項(xiàng)所示的、最優(yōu)選為如SEQIDNO:35所示的重鏈氨基酸序列。所述人單克隆抗體或其功能片段可包含一個(gè)或多個(gè)與如SEQIDNO:1-48和52-56的任一項(xiàng)所示的相應(yīng)氨基酸序列、優(yōu)選如SEQIDNO:1-18和56中的任一項(xiàng)所示的相應(yīng)氨基酸序列、和/或如SEQIDNO:19-48和52-55中的任一項(xiàng)所示的氨基酸序列中框架區(qū)(FR)氨基酸序列具有至少70％、80％、90％、95％、98％或99％同源性的氨基酸序列。因此，在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述人單克隆抗體或其功能片段可包含一個(gè)或多個(gè)與如SEQIDNO:1-18和56中的任一項(xiàng)所示的相應(yīng)氨基酸序列具有至少70％、80％、90％、95％、98％或99％同源性的氨基酸序列。可選擇地，在如SEQIDNO:1-18和56中任一項(xiàng)所示的CDR的任一氨基酸序列中，一個(gè)、兩個(gè)、三個(gè)、四個(gè)、五個(gè)、七個(gè)、八個(gè)、九個(gè)或十個(gè)氨基酸可被取代。優(yōu)選地，這種具有取代的CDR仍然能夠與本文所述GM-CSF結(jié)合?；蛘呋蛄硗?，優(yōu)選地，所述人單克隆抗體或其功能片段可包含一個(gè)或多個(gè)分別與如SEQIDNO:19-48和52-55中任一項(xiàng)所示的VH、VL、H或L區(qū)的相應(yīng)氨基酸序列具有至少70％、80％、90％、95％、98％或99％同源性的氨基酸序列。優(yōu)選地，所述同源性是相對(duì)于整個(gè)VH、VL、H或L氨基酸序列。更優(yōu)選地，所述同源性在前述CDR內(nèi)，或者所述同源性在如SEQIDNO:19-48和52-55中的任一項(xiàng)所示的VH、VL、H或L區(qū)的FR(或非CDR)內(nèi)。因此，在每一個(gè)FR中，1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20或25個(gè)氨基酸可被取代。這樣的FR取代型變體仍然能夠結(jié)合本文所述的GM-CSF。由于SEQIDNO:1-18和56示出了一個(gè)或多個(gè)如SEQIDNO:19-48和52-55所示的VH、VL、H或L序列中包含的CDR序列，因此技術(shù)人員可容易地確定SEQIDNO:19-48和52-55中的FR(或非CDR)。也就是說(shuō)，序列表在序列標(biāo)識(shí)符<223>中提供了每一個(gè)氨基酸序列的名稱。相同的名稱表明這些氨基酸序列是“屬于”一起的，意指CDR被包含在VH、VL、H或L區(qū)中，例如SEQIDNO:16、17、18是被包含在如SEQIDNO:19所示氨基酸序列中的CDR氨基酸序列(因?yàn)樗鼈兙环Q為(5-306))。作為進(jìn)一步的說(shuō)明，如果重鏈和/或輕鏈的一個(gè)或多個(gè)或所有CDR或FR中的氨基酸被替代，那么優(yōu)選隨后獲得的“取代”序列與“原始”CDR或FR序列有至少70％、更優(yōu)選80％、甚至更優(yōu)選90％、特別優(yōu)選95％、更特別優(yōu)選98％或99％的同一性。這意味著其與“取代”序列的同源性程度取決于CDR或FR的長(zhǎng)度。同源性通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)序列比對(duì)程序來(lái)確定，諸如VectorNTI(InforMaxTM，Maryland，USA)，或更優(yōu)選通過(guò)程序BLASTP來(lái)確定，優(yōu)選版本blastp2.2.5(2002年11月16日；參見Altschul，S.F.等人(1997)Nucl.AcidsRes.25，3389-3402)。同源性百分比基于對(duì)整個(gè)多肽序列的比對(duì)(矩陣：BLOSUM62；空位罰分：11.1；臨界值設(shè)為10-3)，使用CDR、VH、VL、H或L氨基酸序列中的任一個(gè)作為成對(duì)比較的參照。計(jì)算BLASTP程序輸出中表示為“正數(shù)”(同源氨基酸)的數(shù)量除以比對(duì)程序所選的氨基酸總數(shù)的百分比。當(dāng)在本文中使用時(shí)，氨基酸或核苷酸序列的同源性可以與術(shù)語(yǔ)“同一性”互換使用。本發(fā)明所使用的術(shù)語(yǔ)“同源性”意為成對(duì)相同殘基—在對(duì)本發(fā)明的氨基酸序列或核苷酸序列的序列與所討論的序列進(jìn)行同源性比對(duì)之后—相對(duì)于這兩個(gè)序列中較長(zhǎng)者的殘基數(shù)量的百分比。如上所述，用于確定同源性(或同一性)的程序?qū)υ谝粋€(gè)氨基酸接著一個(gè)氨基酸的基礎(chǔ)上比對(duì)的序列進(jìn)行比較，并且可被設(shè)置成不同的嚴(yán)格性水平用于比較(例如相同氨基酸、保守氨基酸取代等)。如本文所使用的術(shù)語(yǔ)，如果所討論的兩個(gè)氨基酸的每一個(gè)屬于相同的化學(xué)種類，即酸性、非極性/疏水性、不帶電的極性和堿性，它們就被視為是彼此“保守取代”。作為非限制性實(shí)例，屬于非極性氨基酸種類的兩個(gè)不同氨基酸會(huì)被視為彼此的“保守取代”，即使這兩個(gè)氨基酸不是同一種，然而，一方面的非極性氨基酸和另一方面的堿性氨基酸則不會(huì)被視為彼此的“保守取代”。Alberts，Johnson，Lewis，Raff，Roberts和Walter所著的“MolecularBiologyoftheCell”，第四版(2002)，第3.1面板中將氨基酸分成四個(gè)主要類型：酸性、非極性、不帶電的極性和堿性。本發(fā)明上下文中，這種分類可用于確定特定氨基酸是否是所討論的另一個(gè)氨基酸的保守取代的目的。上述的主要類型可進(jìn)一步被細(xì)分為例如小非極性和大非極性氨基酸、大芳香族氨基酸等。術(shù)語(yǔ)“保守氨基酸取代”還指給定氨基酸殘基的任意氨基酸取代，其中所述取代殘基在化學(xué)上非常類似于所給定的殘基，以致于并未導(dǎo)致多肽功能(例如結(jié)合)的實(shí)質(zhì)性降低。中和GM-CSF的化合物通常地被配制成用于向受試者腸胃外施用的藥物組合物，例如靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、皮下、肌肉內(nèi)、外用或皮內(nèi)施用，其中優(yōu)選皮下施用。在某些實(shí)施方案中，所述藥物組合物為液體組合物，優(yōu)選水性組合物。在一個(gè)實(shí)施方案中，在待儲(chǔ)存、凍/融和/或即可使用的液體制劑中，液體藥物組合中所述中和GM-CSF的化合物的濃度至少20mg/ml，優(yōu)選至少約50mg/ml，更優(yōu)選至少約60mg/ml。本發(fā)明所使用的濃度為約20mg/ml至約200mg/ml，優(yōu)選約40mg/ml至約200mg/ml，更優(yōu)選為約50mg/ml至約180mg/ml，甚至更優(yōu)選為約70mg/ml至約170mg/ml，甚至更優(yōu)選為約75mg/ml至約165mg/ml，最優(yōu)選約80mg/ml或約150mg/ml。在一些實(shí)施方案中，例如當(dāng)所述組合物旨在用于皮下遞送時(shí)，可以使用更高濃度的中和GM-CSF的化合物。如上所述，本發(fā)明所述組合物包含緩沖液。如本文使用的術(shù)語(yǔ)“緩沖液”是指添加的允許液體制劑抵抗pH變化的組合物。在某些實(shí)施方案中，所添加的緩沖液通過(guò)其酸堿共軛組分的作用允許液體制劑抵抗pH的變化。合適的緩沖液的實(shí)例包括但不限于：緩沖的組氨酸、乙酸鹽或檸檬酸鹽系統(tǒng)。如本文所使用的術(shù)語(yǔ)“特異性地結(jié)合”或相關(guān)表達(dá)諸如“特異性的結(jié)合”、“特異性結(jié)合”、“特異性結(jié)合劑”等是指所述GM-CSF-中和化合物，優(yōu)選(人)(單克隆)抗體或其功能片段對(duì)其標(biāo)靶(例如GM-CSF或GM-CSF受體)與任意其它不同于GM-CSF或GM-CSF受體的潛在抗原進(jìn)行區(qū)別到這種程度的能力，即從多種不同的抗原作為潛在的結(jié)合配偶體中，只有GM-CSF/GM-CSF受體被結(jié)合或被顯著結(jié)合。在本發(fā)明的含義內(nèi)，從等同可接近的作為潛在結(jié)合配偶體的多種不同抗原中，當(dāng)靶標(biāo)比任意其它不同于該靶標(biāo)的抗原頻繁(在動(dòng)力學(xué)意義上)至少10倍、優(yōu)選至少50倍、最優(yōu)選至少100倍或更頻繁地被結(jié)合時(shí)，靶標(biāo)是被“顯著”結(jié)合的?？梢酝ㄟ^(guò)例如使用SPR技術(shù)諸如Biacore儀器來(lái)進(jìn)行這種動(dòng)力學(xué)測(cè)量。如本文所使用的術(shù)語(yǔ)“與……(特異性)結(jié)合”或相關(guān)術(shù)語(yǔ)諸如“(特異性)識(shí)別”、“針對(duì)”、“(特異性地)相互作用”以及“(特異性地)與...…發(fā)生反應(yīng)”意指根據(jù)本發(fā)明，中和GM-CSF的化合物(例如抗體)表現(xiàn)出對(duì)其靶標(biāo)(例如GM-CSF或該GM-CSF受體)有可觀的親和力，而通常不表現(xiàn)出與除前述靶標(biāo)以外的蛋白質(zhì)或抗原有顯著反應(yīng)性?！翱捎^的親和力”包括以約10-6M(KD)或更強(qiáng)，諸如10-7M或更強(qiáng)的結(jié)合親和力結(jié)合。優(yōu)選地，當(dāng)結(jié)合親和力為約10-11至10-8M、優(yōu)選約10-11至10-9M、更優(yōu)選約10-11至10-10M時(shí)，認(rèn)為結(jié)合是特異性的。通過(guò)尤其是將所述化合物與其靶蛋白或抗原的反應(yīng)和所述化合物與除其標(biāo)靶之外的蛋白或抗原的反應(yīng)進(jìn)行比較，可很容易檢測(cè)出化合物(例如抗體)與其靶標(biāo)是否發(fā)生特異性反應(yīng)或結(jié)合。優(yōu)選地，根據(jù)本發(fā)明所述的化合物基本上不結(jié)合或不能夠結(jié)合除GM-CSF或GM-CSF受體之外的蛋白質(zhì)或抗原。術(shù)語(yǔ)“基本上不結(jié)合”或“不能夠結(jié)合”意指本發(fā)明的化合物顯示出與除GM-CSF或GM-CSF受體之外的蛋白質(zhì)或抗原的反應(yīng)性不多于30％，優(yōu)選不多于20％，更優(yōu)選不多于10％，特別優(yōu)選不多于9％、8％、7％、6％或5％。如本文所使用的，“中和作用”、“中和劑”、“中和”及其語(yǔ)法相關(guān)變形是指GM-CSF生物效應(yīng)的部分或完全衰減。GM-CSF生物學(xué)效應(yīng)的這種部分或完全衰減是由修飾、中斷和/或消除GM-CSF介導(dǎo)的過(guò)程造成的，諸如信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，例如在細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)、細(xì)胞增殖、可溶性物質(zhì)釋放、細(xì)胞內(nèi)基因激活的上調(diào)或下調(diào)所顯示的，這引起例如除GM-CSF之外的配體的表面受體表達(dá)。正如本領(lǐng)域技術(shù)人員所理解的，存在多種模式可確定化合物例如抗體或其功能片段是否會(huì)被歸類為中和劑。作為一個(gè)實(shí)例，這可以通過(guò)通常如下進(jìn)行的標(biāo)準(zhǔn)體外測(cè)試來(lái)實(shí)現(xiàn)：在第一次增殖實(shí)驗(yàn)中，將已知其增殖程度取決于GM-CSF活性的細(xì)胞系與不同濃度的GM-CSF的一系列樣品一起孵育，隨后測(cè)量其孵育后的細(xì)胞系增殖程度。從該測(cè)量中，確定允許細(xì)胞最大半數(shù)增殖的GM-CSF的濃度。然后進(jìn)行第二次增殖實(shí)驗(yàn)，該實(shí)驗(yàn)所使用的一系列樣品中的每一個(gè)使用與第一次增殖實(shí)驗(yàn)相同數(shù)量的細(xì)胞，使用上述確定的GM-CSF濃度，但這次試驗(yàn)中使用不同濃度的疑似為GM-CSF的中和劑的化合物。再次測(cè)量細(xì)胞增殖來(lái)確定所分析的化合物足以引起最大半數(shù)生長(zhǎng)抑制的濃度。如果所得到的相對(duì)于所分析的化合物濃度的生長(zhǎng)抑制圖是S形狀，導(dǎo)致細(xì)胞增殖隨著所分析的化合物濃度升高而減少，那么生長(zhǎng)抑制已在一定程度上受到了影響，即GM-CSF活性在一定程度上被中和。在這個(gè)情況下，所討論的化合物可被視為本發(fā)明意義上的“中和劑”。已知增殖程度取決于GM-CSF活性的細(xì)胞系的一個(gè)實(shí)例是TF-1細(xì)胞系，正如Kitamura,T.等人(1989).JCellPhysiol140，323-34中所描述。正如本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所理解的，細(xì)胞增殖的程度不是可確定GM-CSF中和能力的唯一參數(shù)。例如對(duì)信號(hào)分子水平(例如細(xì)胞因子)的測(cè)量、其分泌水平取決于GM-CSF，可被用于識(shí)別疑似的GM-CSF中和劑/GM-CSF抑制化合物。可用于確定所討論的化合物諸如抗體或其功能片段是否是GM-CSD活性中和劑的細(xì)胞系的其它實(shí)例包括AML-193(Lange,B.等人(1987).Blood70,192-9)、GF-D8(Rambaldi,A.等人(1993).Blood81,1376-83)、GM/SO(Oez，S.等人(1990),ExperimentalHematology18,1108-11)、MO7E(Avanzi,G.C.等人(1990).JournalofCellularPhysiology145,458-64)、TALL-103(Valtieri,M.等人(1987).JournalofImmunology138,4042-50)以及UT-7(Komatsu,N.等人(1991).CancerResearch51,341-8)。應(yīng)當(dāng)理解，根據(jù)本發(fā)明，GM-CSF的中和可在帶有GM-CSF受體的細(xì)胞外或者在所述細(xì)胞內(nèi)進(jìn)行。因此，化合物對(duì)GM-CSF的中和，可以是抑制或預(yù)防GM-CSF與其特異性受體的結(jié)合，或者抑制由細(xì)胞因子與其受體的結(jié)合所誘導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)。中和GM-CSF的化合物可以例如與GM-CSF直接結(jié)合或與GM-CSF受體結(jié)合，由此在兩種情況下干擾GM-CSF的生物學(xué)效應(yīng)。如上文所定義，GM-CSF的抑制劑可選自多肽、擬肽、核酸分子和小分子。本文使用的術(shù)語(yǔ)“多肽”描述了一組分子，其通常由至少30個(gè)經(jīng)共價(jià)肽鍵相互耦合的氨基酸組成。根據(jù)本發(fā)明，該組多肽包含由單一多肽或多于一個(gè)多肽所組成的“蛋白質(zhì)”。術(shù)語(yǔ)“多肽”還描述蛋白質(zhì)片段，只要這些片段是由至少30個(gè)氨基酸組成的。本領(lǐng)域眾所周知，多肽可形成多聚體諸如二聚體、三聚體和更高的低聚體，即由多于一個(gè)多肽分子組成的。這樣的多聚體也包括在術(shù)語(yǔ)“多肽”的定義中。形成這樣的二聚體、三聚體等的多肽分子可以相同或不同。這樣的多聚體的相應(yīng)更高級(jí)結(jié)構(gòu)因此被稱為同二聚體或異二聚體、同三聚體或異三聚體等。異多聚體的實(shí)例為抗體分子，其以天然存在的形式是由兩個(gè)相同的輕多肽鏈和兩個(gè)相同的重多肽鏈組成。術(shù)語(yǔ)“多肽”和“蛋白質(zhì)”也指天然或非天然修飾的多肽/蛋白質(zhì)，其中所述修飾的實(shí)現(xiàn)是例如通過(guò)翻譯后修飾如糖基化、乙?；?、磷酸化、二硫鍵形成諸如此類或通過(guò)化學(xué)修飾如聚乙二醇化。這樣的修飾是本領(lǐng)域熟知的。術(shù)語(yǔ)“核酸”或“多核苷酸”在本發(fā)明上下文中限定了由磷酸、糖、嘌呤和嘧啶堿基的多個(gè)重復(fù)單元組成的聚合大分子。這些分子的實(shí)施方案包括DNA、RNA和PNA。核酸可以是單鏈或雙鏈、線性或環(huán)狀的。本發(fā)明上下文中，核酸的特別優(yōu)選實(shí)施方案為適體。核酸適體是從基于其結(jié)合其它分子能力的隨機(jī)池中選擇的DNA或RNA分子。已經(jīng)選擇了結(jié)合核酸、蛋白質(zhì)、小的有機(jī)化合物和甚至整個(gè)生物體的適體。它們通常由短鏈寡核苷酸組成，通常為50個(gè)堿基或更少。術(shù)語(yǔ)“小分子”限定了一組具有分子量小于1000道爾頓、優(yōu)選高達(dá)800道爾頓、更優(yōu)選300-700道爾頓的有機(jī)藥物化合物。小分子的分子量上限允許快速擴(kuò)散穿過(guò)細(xì)胞膜的可能性，使得它們可以到達(dá)細(xì)胞內(nèi)作用位點(diǎn)。相應(yīng)的小分子可以源自至少是部分隨機(jī)化的肽文庫(kù)。根據(jù)本發(fā)明所述的合適的小分子文庫(kù)是本領(lǐng)域所熟知的，和/或可以從商業(yè)分銷商處購(gòu)買。術(shù)語(yǔ)“擬肽”描述了設(shè)計(jì)用于模擬肽的小蛋白樣鏈。這種類型的分子是通過(guò)修飾現(xiàn)有的肽以改變分子的性質(zhì)從而人工衍生的。例如，對(duì)親本存在的肽進(jìn)行修飾以改變分子的穩(wěn)定性或生物活性。這些修飾包括主鏈的改變和非天然氨基酸的摻入。術(shù)語(yǔ)“GM-CSF受體”是指GM-CSF的生理學(xué)細(xì)胞表面受體，其在本領(lǐng)域被描述為α鏈(CD116)和共同β(β-c)亞基的異聚體。中和多肽的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案是抗體或其功能片段，更優(yōu)選人抗體或其功能片段。用于抗體生產(chǎn)的技術(shù)是本領(lǐng)域熟知，并在例如Harlow和Lane的“Antibodies,ALaboratoryManual”,ColdSpringHarborLaboratoryPress,1988，Harlow和Lane“UsingAntibodies:ALaboratoryManual”ColdSpringHarborLaboratoryPress,1999中有所描述。術(shù)語(yǔ)“抗體”的定義包括諸如單克隆的、嵌合的、單鏈的、人源化的和人抗體的實(shí)施方案。除了全長(zhǎng)抗體之外，該定義還包括抗體衍生物和抗體抗體片段，例如尤其是Fab片段?？贵w片段或衍生物進(jìn)一步包括F(ab')2、Fv、scFv片段或單結(jié)構(gòu)域抗體，例如結(jié)構(gòu)域抗體、納米抗體、單可變結(jié)構(gòu)域抗體或免疫球蛋白單可變結(jié)構(gòu)域，所述單結(jié)構(gòu)域抗體包含僅一個(gè)可能是VHH、VH或VL的可變結(jié)構(gòu)域，其不依賴于其它V區(qū)或結(jié)構(gòu)域地與抗原或表位特異性結(jié)合；參見，例如如上文所述的Harlow和Lane(1988)和(1999)；Kontermann和Dübel，AntibodyEngineering，Springer，第二版，2010和Little，RecombinantAntibodiesforImmunotherapy,CambridgeUniversityPress2009。該術(shù)語(yǔ)也包括雙抗體(diabody)或雙親和性重新靶向(Dual-AffinityRe-Targeting,DART)抗體。進(jìn)一步設(shè)想，(雙特異性)單鏈雙特意抗體、串聯(lián)雙抗體(Tandab)，“微抗體”的例證為如下結(jié)構(gòu)：(VH-VL-CH3)2、(scFv-CH3)2或(scFv-CH3-scFv)2、“FcDART”和“IgGDART”，多抗體諸如三鏈抗體。免疫球蛋白單可變結(jié)構(gòu)域不僅包括分離抗體單可變結(jié)構(gòu)域多肽，還包括較大多肽，該大多肽包含抗體單可變結(jié)構(gòu)域多肽序列的一個(gè)或多個(gè)單體。此外，本文所使用的術(shù)語(yǔ)“抗體”還涉及本文所述抗體的衍生物或變體，其顯示出與所述抗體相同的特異性。“抗體變體”的實(shí)例包括非人抗體的人源化變體、“親和力成熟的”抗體(參見例如Hawkins等人J.Mol.Biol.254，889-896(1992)和Lowman等人，Biochemistry30，10832-10837(1991))和具有改變的效應(yīng)子功能的抗體突變體(參見例如美國(guó)專利5,648,260、如上文所述的Kontermann和Dübel(2010)以及如上文所述的Little(2009))。術(shù)語(yǔ)“抗體”還包括不同類的免疫球蛋白(Ig’s)(即IgA、IgG、IgM、IgD和IgE)和不同亞類的的免疫球蛋白(Ig’s)(諸如IgG1、IgG2等)?？贵w衍生物也屬于本發(fā)明含義中的術(shù)語(yǔ)抗體的定義，包括例如糖基化、乙?；?、磷酸化、二硫鍵形成、法尼基化、羥基化、甲基化或酯化的分子的修飾。抗體的功能片段包括F(ab’)2片段、Fab片段、scFv或含有單個(gè)免疫球蛋白可變域或單域抗體多肽構(gòu)建體的結(jié)構(gòu)域，例如單重鏈可變域或單輕鏈可變域結(jié)構(gòu)域以及如上文所述的其它抗體片段。F(ab')2或Fab可被工程化以最小化或完全去除CH1和CL結(jié)構(gòu)域之間發(fā)生的分子間二硫鍵相互作用。本文所使用的術(shù)語(yǔ)“人”抗體被理解為意指抗體或其功能片段包含人種系全套抗體庫(kù)所含的氨基酸序列。出于本文定義的目的，如果抗體或其片段由這樣的人種系氨基酸序列組成，即如果所討論的抗體或其功能片段的氨基酸序列與所表達(dá)的人種系氨基酸序列相同，那么該抗體或其功能片段可以由此被視為是人的。如果抗體或其功能片段是由與其最近的人種系序列偏離不超過(guò)由于體細(xì)胞超變印記而預(yù)期的序列所組成，那么該抗體或其功能片段也可被認(rèn)為是人的。此外，很多非人哺乳類的抗體(例如嚙齒類如小鼠和大鼠)包含VHCDR3氨基酸序列，其也可預(yù)期存在于所表達(dá)的人全套抗體庫(kù)中。出于本發(fā)明的目的，可預(yù)期存在于所表達(dá)的人源庫(kù)中的任何這樣的人或非人源序列也可被認(rèn)為是“人”的。因此術(shù)語(yǔ)“人抗體”包括具有基本上與本領(lǐng)域公知的人種系免疫球蛋白序列相對(duì)應(yīng)的可變區(qū)和恒定區(qū)的抗體，其包括例如那些如Kabat等人(參見如上文所述的Kabat等人(1991))所描述的抗體。本發(fā)明的人抗體例如在CDR中特別是CDR3中可包括不是由人種系免疫球蛋白序列編碼的氨基酸殘基(例如通過(guò)體外隨機(jī)或位點(diǎn)特異性誘變或體內(nèi)體細(xì)胞突變引入的突變)。所述人抗體可具有至少一個(gè)、兩個(gè)、三個(gè)、四個(gè)、五個(gè)或更多個(gè)位點(diǎn)被替換成不是由人種系免疫球蛋白序列編碼的氨基酸殘基。所述非人和人抗體或其功能片段優(yōu)選是單克隆的。制備單克隆的人抗體特別困難。與鼠B細(xì)胞和無(wú)限增殖化細(xì)胞的融合相反，人B細(xì)胞和無(wú)限增殖化細(xì)胞的融合是不可行的。因此，人單克隆抗體是克服了通常公認(rèn)為存在于抗體
技術(shù)領(lǐng)域：
的重大技術(shù)障礙的結(jié)果?？贵w的單克隆性質(zhì)使得它們非常適合用作治療劑，因?yàn)檫@樣的抗體將會(huì)以可以被充分表征并且可重復(fù)地制備和純化的單一同質(zhì)分子種類存在。這些因素導(dǎo)致產(chǎn)品的生物活性可以以高精度水平預(yù)測(cè)，如果這樣的分子獲得用于人的治療性施用的監(jiān)管批準(zhǔn)，那么這將是非常重要的。本文使用的術(shù)語(yǔ)“單克隆抗體”是指從基本同質(zhì)的抗體群中獲得的抗體，即構(gòu)成該群的單個(gè)抗體是完全相同的，除了可少量存在的可能自然發(fā)生的突變和/或翻譯后修飾(例如異構(gòu)化、酰胺化)。單克隆抗體是針對(duì)單個(gè)抗原位點(diǎn)的高度特異性抗體。此外，與包括通常針對(duì)不同決定簇(表位)的不同抗體的常規(guī)(多克隆)抗體制劑相反，每種單克隆抗體是針對(duì)抗原上的單一決定簇。除了它們的特異性之外，單克隆抗體的優(yōu)點(diǎn)在于它們是通過(guò)雜交瘤培養(yǎng)物合成的，不被其它免疫球蛋白污染。修飾語(yǔ)“單克隆的”表明抗體的特征在于其是從基本同質(zhì)的抗體群中獲得的，其不應(yīng)被解釋為需要通過(guò)任何特定方法產(chǎn)生抗體。例如，根據(jù)本發(fā)明所使用的單克隆抗體可通過(guò)首先由Kohler等人,Nature,256:495(1975)描述的雜交瘤方法制備，或者可通過(guò)重組DNA方法(參見例如美國(guó)專利號(hào)4,816,567)制備。所述“單克隆抗體”也可通過(guò)使用在例如Clackson等人，Nature,352:624-628(1991)和Marks等人，J.Mol.Biol.,222:581-597(1991)中所描述的技術(shù)從噬菌體抗體庫(kù)中分離出來(lái)。特別優(yōu)選地，單克隆抗體或相應(yīng)的功能片段是人抗體或相應(yīng)的功能片段。在考慮旨在用于治療性施用于對(duì)人的抗體試劑時(shí)，非常有利的是，所述抗體是人源的。在向人患者施用后，人抗體或其抗體片段將很有可能不會(huì)引起患者免疫系統(tǒng)的強(qiáng)烈的免疫源應(yīng)答，即其將不被認(rèn)為是非人蛋白質(zhì)的外來(lái)物。這意味著不會(huì)產(chǎn)生針對(duì)治療性抗體的宿主即患者抗體，否則這將阻斷治療性抗體的活性和/或加速治療性抗體從患者體內(nèi)的消除，從而阻止其發(fā)揮所期望的治療效果。根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案，用于藥物用途的人單克隆抗體或其功能片段表現(xiàn)出對(duì)人和至少一個(gè)猴物種之間的反應(yīng)性。對(duì)于所有其它非抗體或非抗體衍生的GM-CSF中和/抑制化合物，相同的種間反應(yīng)性也是優(yōu)選的。根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案，抗體可以是IgG抗體。IgG同種型不僅包含負(fù)責(zé)高度辨別性抗原識(shí)別和結(jié)合的重鏈和輕鏈的可變抗體區(qū)，還包含重抗體多肽鏈和輕抗體多肽鏈的恒定區(qū)，其通常存在于“自然”產(chǎn)生的抗體中，甚至在某些情況下在一個(gè)或多個(gè)位點(diǎn)經(jīng)糖修飾。這種糖基化通常是IgG形式的標(biāo)志且位于恒定區(qū)，該恒定區(qū)包含所謂已知在體內(nèi)引起各種效應(yīng)子功能的完整抗體的Fc區(qū)。此外，F(xiàn)c區(qū)介導(dǎo)IgG與Fc受體的結(jié)合，以及促進(jìn)IgG歸巢到Fc受體存在增多的位置—例如，發(fā)炎的組織。有利的是，所述IgG抗體是IgG1抗體或IgG4抗體，這是優(yōu)選的形式，因?yàn)槠潴w內(nèi)作用機(jī)制是特別好理解并表征的。對(duì)于IgG1抗體尤其如此。根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案，抗體的功能片段可優(yōu)選為scFV、單域抗體、Fv、VHH抗體、雙抗體、串聯(lián)雙抗體、Fab、Fab'或F(ab)2。這些形式通?？梢苑譃閮蓚€(gè)亞類，即那些由單個(gè)多肽鏈組成的，以及那些包含至少兩個(gè)多肽鏈的。前一亞類的成員包括scFv(包含一個(gè)VH區(qū)和一個(gè)VL區(qū)通過(guò)多肽接頭連接成單個(gè)多肽鏈)、單域抗體(包含單個(gè)抗體可變區(qū))諸如VHH抗體(包含單個(gè)VH區(qū))。后一亞類的成員包括Fv(包含作為單獨(dú)多肽鏈的一個(gè)VH區(qū)和一個(gè)VL區(qū)，其彼此非共價(jià)相連)、雙抗體(包含兩個(gè)非共價(jià)相連的多肽鏈，其中每個(gè)多肽鏈包含兩個(gè)抗體可變區(qū)—通常是每個(gè)多肽鏈包含一個(gè)VH和一個(gè)VL—這兩個(gè)多肽鏈以頭-尾構(gòu)象排列，結(jié)果得到二價(jià)抗體分子)、串聯(lián)雙抗體(雙特異性單鏈Fv抗體，其包含共價(jià)連接的四個(gè)具有兩種不同特異性的免疫球蛋白可變區(qū)—VH區(qū)和VL區(qū)，這形成為上述雙抗體的兩倍大的同源二聚體)、Fab(包含其本身含有VL區(qū)和整個(gè)輕鏈恒定區(qū)的完整抗體輕鏈作為一個(gè)多肽鏈，以及含有完整VH區(qū)和部分重鏈恒定區(qū)的抗體重鏈的一部分作為另一個(gè)多肽，所述兩條多肽鏈通過(guò)鏈間二硫鍵而分子間連接)、Fab'(如上所述的Fab，除了包含在抗體重鏈上的額外的還原二硫鍵)和F(ab)2(包含兩個(gè)Fab'分子，每個(gè)Fab'分子通過(guò)鏈間二硫鍵與相應(yīng)的另一個(gè)Fab'分子連接)。一般而言，本文以上所描述類型的功能抗體片段允許在調(diào)整例如即將發(fā)生的特別緊急情況下治療性施用中所需的抗體的藥代動(dòng)力學(xué)性質(zhì)方面具有很大的靈活性。例如，可能希望減小所施用的抗體尺寸，以便在治療已知是血管化較差的組織(例如關(guān)節(jié))時(shí)增加組織穿透的程度。在某些情況下，還可能需要增加從體內(nèi)消除治療性抗體的速率，所述速率通常可通過(guò)減小所施用抗體的尺寸來(lái)加速。在本發(fā)明的上下文中，抗體片段被限定為功能性抗體片段，只要該片段保持對(duì)親本抗體的表位/靶標(biāo)的特異性結(jié)合特征，即只要其特異性結(jié)合GM-CSF或GM-CSF受體。根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案，所述抗體或其功能片段可以以下形式存在：?jiǎn)蝺r(jià)單特異性；多價(jià)單特異性，特別是二價(jià)單特異性；或多價(jià)多特異性的，特別是二價(jià)雙特異性。一般而言，多價(jià)單特異性的，特別是二價(jià)單特異性的抗體，諸如上文所述的完整人IgG，可給其帶來(lái)治療優(yōu)勢(shì)，即由這種抗體實(shí)現(xiàn)的中和作用通過(guò)親合效應(yīng)加強(qiáng)，即通過(guò)相同抗體結(jié)合多個(gè)相同抗原分子，在此是GM-CSF或GM-CSF受體。上文已描述了抗體片段的幾種單價(jià)單特異性形式(例如scFv、Fv、VHH或單域抗體)?？贵w的多價(jià)多特異性形式，特別是二價(jià)雙特異性形式可包括完整的IgG，其中一個(gè)結(jié)合臂與靈長(zhǎng)類動(dòng)物的GM-CSF/GM-CSF受體結(jié)合，而另一個(gè)結(jié)合臂與另一種不同于GM-CSF/GM-CSF受體的抗原結(jié)合。另一種多價(jià)多特異性形式，特別是二價(jià)雙特異性形式可以有利地是人單鏈雙特異性抗體，即包含兩個(gè)如上所述的scFv實(shí)體的重組人抗體構(gòu)建體，其通過(guò)本領(lǐng)域公知的短插入多肽間隔區(qū)而連接成一個(gè)連續(xù)多肽鏈(參見例如針對(duì)抗CD19x抗CD3雙特異性單鏈抗體的WO99/54440)。在此，包含于雙特異性單鏈抗體內(nèi)的雙特異性單鏈抗體的一個(gè)scFv部分將如上所述地與GM-CSF/GM-CSF受體特異性結(jié)合，而該雙特異性單鏈抗體的相應(yīng)其它scFv部分將與被確定為具有治療益處的另一抗原結(jié)合。根據(jù)另一個(gè)的實(shí)施方案，抗體或其功能片段可以例如用有機(jī)聚合物衍生化，例如用一個(gè)或多個(gè)聚乙二醇(“PEG”)和/或聚乙烯吡咯烷酮(“PVP”)分子。如本領(lǐng)域已知的，這種衍生化可有利于調(diào)節(jié)抗體或其功能片段的藥效學(xué)特性。特別優(yōu)選的是PEG分子衍生化為PEG-馬來(lái)酰亞胺，這使得能夠通過(guò)半胱氨酸的巰基基團(tuán)以位點(diǎn)特異性方式與抗體或其功能片段綴合。其中，特別優(yōu)選的是支鏈或者直鏈形式的20kD和/或40kD的PEG-馬來(lái)酰亞胺。通過(guò)使后者與一個(gè)或多個(gè)PEG分子特別是PEG-馬來(lái)酰亞胺偶聯(lián)來(lái)增加較小的人抗GM-CSF抗體片段(諸如scFV片段)的有效分子量，可能是特別有利的。本發(fā)明的抗體還包括“嵌合”抗體(免疫球蛋白類)，其中一部分重鏈和/或輕鏈與衍生自特定物種的或?qū)儆谔囟贵w類或亞類的抗體中的相應(yīng)序列相同或同源，上述鏈的其余部分與下列抗體中的相應(yīng)序列相同或同源：衍生自另一物種的抗體，或者屬于另一抗體類或亞類的抗體，以及此類抗體的片段，只要它們顯示出所期望的生物活性(美國(guó)專利號(hào)4,816,567；Morrison等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，81：6851-6855(1984))。本文感興趣的嵌合抗體包括“靈長(zhǎng)源化的”抗體，其包含衍生自非人靈長(zhǎng)類動(dòng)物(例如舊大陸猴、猿等)的可變結(jié)構(gòu)域抗原結(jié)合序列和人恒定區(qū)序列。非人(例如鼠)抗體的“人源化”形式是主要是人序列的嵌合免疫球蛋白、免疫球蛋白鏈或其片段(諸如Fv、Fab、Fab′、F(ab′)2或抗體的其它抗原結(jié)合子序列)，其包含衍生自非人免疫球蛋白的最小序列。在大多數(shù)情況下，人源化抗體是人類免疫球蛋白(受體抗體)，其中來(lái)自受者高變區(qū)(也是CDR)的殘基被來(lái)自具有所需特異性、親和力和能力的非人物種(諸如小鼠、大鼠或兔)高變區(qū)(供體抗體)的殘基替換。在某些情況下，人免疫球蛋白的Fv框架區(qū)(FR)殘基被相應(yīng)的非人殘基替換。此外，本文所使用的“人源化抗體”還可以包含受體抗體和供體抗體中均未發(fā)現(xiàn)的殘基。進(jìn)行這些修飾以進(jìn)一步改進(jìn)和優(yōu)化抗體性能。最佳地，所述人源化抗體還將包含至少一部分免疫球蛋白恒定區(qū)(Fc)，通常是人免疫球蛋白的恒定區(qū)。更多細(xì)節(jié)參見Jones等人，Nature，321：522-525(1986)；Reichmann等人，Nature，332：323-329(1988)；以及Presta，Curr.Op.Struct.Biol.，2：593-596(1992)。如本文所用，人和非人靈長(zhǎng)類GM-CSF的氨基酸殘基或位點(diǎn)的編號(hào)是指成熟GM-CSF的編號(hào)，即沒(méi)有其17個(gè)氨基酸信號(hào)序列的GM-CSF的編號(hào)(上述人和非人靈長(zhǎng)類物種中成熟GM-CSF的總長(zhǎng)度是127個(gè)氨基酸)。人GM-CSF和長(zhǎng)臂猿GM-CSF的序列如下：SEQIDNO：49APARSPSPSTQPWEHVNAIQEARRLLNLSRDTAAEMNETVEVISEMFDLQEPTCLQTRLELYKQGLRGSLTKLKGPLTMMASHYKQHCPPTPETSCATQIITFESFKENLKDFLLVIPFDCWEPVQE獼猴科的某些成員例如恒河猴和食蟹猴中GM-CSF的序列如下：SEQIDNO：50APARSPSPGTQPWEHVNAIQEARRLLNLSRDTAAEMNKTVEVVSEMFDLQEPSCLQTRLELYKQGLQGSLTKLKGPLTMMASHYKQHCPPTPETSCATQIITFQSFKENLKDFLLVIPFDCWEPVQE人GM-CSF的序列也在SEQIDNO：57中示出。長(zhǎng)臂猿GM-CSF的序列也在SEQIDNO：58中示出：(SEQIDNO：57和58)獼猴科的某些成員例如恒河猴(SEQIDNO：59)和食蟹猴(SEQIDNO：60)中GM-CSF的序列也如下：(SEQIDNO：59和60)與抗體結(jié)合的最小表位，有利地是如本文所述的不連續(xù)表位，優(yōu)選人單克隆抗體(或其功能片段)在上述GM-CSF序列以粗體示出。根據(jù)一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，所述中和GM-CSF的化合物是與GM-CSF結(jié)合的抗體(優(yōu)選人單克隆抗體)或其功能片段。更優(yōu)選地，它與優(yōu)選包含第23-27位氨基酸(RRLLN)和/或第65-77位氨基酸(GLR/QGSLTKLKGPL)的GM-CSF的表位結(jié)合。這些氨基酸序列延伸在上述GM-CSF序列中以粗體顯示。術(shù)語(yǔ)“表位”是指抗原或靶標(biāo)(例如GM-CSF)上與化合物例如抗體或其功能片段特異性結(jié)合的位點(diǎn)。所述結(jié)合/相互作用也被理解為定義了“特異性識(shí)別”?！氨砦弧笨梢杂蛇B續(xù)的氨基酸形成，或由蛋白質(zhì)三級(jí)折疊并置的不連續(xù)氨基酸形成?！熬€性表位”是其中氨基酸一級(jí)序列包含所識(shí)別表位的表位。線性表位在獨(dú)特的序列中通常包括至少3個(gè)或至少4個(gè)、更通常為至少5個(gè)或至少6個(gè)和或至少7個(gè)氨基酸，例如約8個(gè)至約10個(gè)或更多個(gè)氨基酸。在本發(fā)明的上下文中，優(yōu)選GM-CSF表位是不連續(xù)表位。在抗體與第23-27位和第65-77位兩個(gè)序列延伸結(jié)合的情況下，所述表位可被稱為“不連續(xù)的”。在人GM-CSF的二級(jí)結(jié)構(gòu)中，第15-35位氨基酸位于螺旋A中，而于第65-77位相對(duì)應(yīng)的殘基是位于螺旋C和D之間的環(huán)狀結(jié)構(gòu)的一部分。分子折疊的三維模型顯示這些位點(diǎn)相對(duì)于彼此緊密空間接近(也參見WO2006/111353)。如本文所用的術(shù)語(yǔ)“不連續(xù)表位”應(yīng)理解為給定多肽鏈內(nèi)的至少兩個(gè)非相鄰氨基酸序列延伸，這里是指成熟的人和非人靈長(zhǎng)類GM-CSF，其同時(shí)與抗體特異性結(jié)合。根據(jù)該定義，這種同時(shí)特異性結(jié)合可能是線性形式的GM-CSF多肽。在這里，可以想象成熟的GM-CSF多肽形成延伸的環(huán)，在其一個(gè)區(qū)域中，上述粗體顯示的兩個(gè)序列例如或多或少地平行且彼此接近地排列在一起。在這種狀態(tài)下，它們特異性地并同時(shí)與抗體片段結(jié)合。根據(jù)該定義，如上所示成熟GM-CSF的兩個(gè)序列延伸的同時(shí)特異性結(jié)合也可采取抗體與構(gòu)象表位結(jié)合的形式。在這里，成熟的GM-CSF已經(jīng)形成了其通常存在于體內(nèi)的三級(jí)構(gòu)象。在這種三級(jí)構(gòu)象中，成熟GM-CSF的多肽鏈以這樣的方式折疊，即，使得如上所示的兩個(gè)序列延在空間上接近，例如在成熟的折疊GM-CSF的特定區(qū)域的外表面上，其中它們?nèi)缓髴{借其在周圍多肽序列環(huán)境中的三維構(gòu)象而被識(shí)別。在一個(gè)進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，GM-CSF的上述表位或上述不連續(xù)表位進(jìn)一步包括：●第28-31位氨基酸(LSRD)，如上述人和非人靈長(zhǎng)類GM-CSF的序列中斜體所示；●第32-33位氨基酸(TA)，如上述人和非人靈長(zhǎng)類GM-CSF的序列中下劃線所示；和/或●第21-22位氨基酸(EA)，如上述人和非人靈長(zhǎng)類GM-CSF的序列中下劃線所示。優(yōu)選的人單克隆抗GM-CSF抗體或其功能片段是如WO2006/111353中所具體公開的那些，引用了SEQIDNO:1至48和52至56，其示出了重鏈和輕鏈互補(bǔ)決定區(qū)(complementarydeterminingregions,CDRs)1-3、以及重鏈和輕鏈的可變區(qū)和全長(zhǎng)重鏈和輕鏈的氨基酸序列。特別優(yōu)選的是包含以下項(xiàng)的抗GM-CSF抗體或其功能片段：如包含SEQIDNO:14所示的重鏈可變區(qū)CDR1序列、如SEQIDNO:15所示的重鏈可變區(qū)CDR2序列和如SEQIDNO:1所示的重鏈可變區(qū)CDR3序列；或包含如SEQIDNO:14所示的重鏈可變區(qū)CDR1序列、如SEQIDNO:15所示的重鏈可變區(qū)CDR2序列和如SEQIDNO:2所示的重鏈可變區(qū)CDR3序列；或包含如SEQIDNO:14所示的重鏈可變區(qū)CDR1序列、如SEQIDNO:15所示的重鏈可變區(qū)CDR2序列和如SEQIDNO:3中所示的重鏈可變區(qū)CDR3序列；或包含如SEQIDNO:14所示的重鏈可變區(qū)CDR1序列、如SEQIDNO:15所示的重鏈可變區(qū)CDR2序列和如SEQIDNO:4所示的重鏈可變區(qū)CDR3序列；或包含如SEQIDNO:14所示的重鏈可變區(qū)CDR1序列、如SEQIDNO:15所示的重鏈可變區(qū)CDR2序列和如SEQIDNO:5所示的重鏈可變區(qū)CDR3序列；或包含如SEQIDNO:14所示的重鏈可變區(qū)CDR1序列、如SEQIDNO:15所示的重鏈可變區(qū)CDR2序列和如SEQIDNO:6所示的重鏈可變區(qū)CDR3序列；或包含如SEQIDNO:14所示的重鏈可變區(qū)CDR1序列、如SEQIDNO:15所示的重鏈可變區(qū)CDR2序列和如SEQIDNO:7所示的重鏈可變區(qū)CDR3序列；或包含如SEQIDNO:14所示的重鏈可變區(qū)CDR1序列、如SEQIDNO:15所示的重鏈可變區(qū)CDR2序列和如SEQIDNO:8所示的重鏈可變區(qū)CDR3序列；或包含如SEQIDNO:14所示的重鏈可變區(qū)CDR1序列、如SEQIDNO:15所示的重鏈可變區(qū)CDR2序列和如SEQIDNO:9所示的重鏈可變區(qū)CDR3序列；或包含如SEQIDNO:14所示的重鏈可變區(qū)CDR1序列、如SEQIDNO:15所示的重鏈可變區(qū)CDR2序列和如SEQIDNO:10所示的重鏈可變區(qū)CDR3序列；或包含如SEQIDNO:14所示的重鏈可變區(qū)CDR1序列、如SEQIDNO:15所示的重鏈可變區(qū)CDR2序列和如SEQIDNO:11所示的重鏈可變區(qū)CDR3序列；或包含如SEQIDNO:14所示的重鏈可變區(qū)CDR1序列、如SEQIDNO:15所示的重鏈可變區(qū)CDR2序列和如SEQIDNO:12所示的重鏈可變區(qū)CDR3序列；或包含如SEQIDNO:14所示的重鏈可變區(qū)CDR1序列、如SEQIDNO:15所示的重鏈可變區(qū)CDR2序列和如SEQIDNO:13所示的重鏈可變區(qū)CDR3序列；或包含如SEQIDNO:14所示的重鏈可變區(qū)CDR1序列，如SEQIDNO:15所示的重鏈可變區(qū)CDR2序列和如SEQIDNO:56所示的重鏈可變區(qū)CDR3序列。更加優(yōu)選地，重鏈CDR1、CDR2和CDR3序列的上述14種組合中的任一種存在于其輕鏈可變區(qū)中進(jìn)一步下列項(xiàng)的抗體或其功能片段中：包含如SEQIDNO:16所示氨基酸序列的CDR1、包含如SEQIDNO:17所示氨基酸序列的CDR2和包含如SEQIDNO:18所示氨基酸序列的CDR3。特別優(yōu)選的抗GM-CSF抗體或其功能片段包含如SEQIDNO:14所示的重鏈可變區(qū)CDR1序列、如SEQIDNO:15所示的重鏈可變區(qū)CDR2序列和如SEQIDNO:2所示的重鏈可變區(qū)CDR3序列，并且在其輕鏈可變區(qū)中還進(jìn)一步包含包含如SEQIDNO:16所示氨基酸序列的CDR1、包含如SEQIDNO:17所示氨基酸序列的CDR2和包含如SEQIDNO:18所示氨基酸序列的CDR3。該抗GM-CSF抗體是用于中和GM-CSF的最優(yōu)選化合物，而且也在WO2006/111353有所描述。根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，抗GM-CSF抗體或其片段在其輕鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO.19所示的氨基酸序列。優(yōu)選的是抗體或其片段，其輕鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO.19所示的氨基酸序列，且重鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO:20所示的氨基酸序列；或抗體或其功能片段，其輕鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO.19所示的氨基酸序列，且重鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO:21所示的氨基酸序列；或抗體或其功能片段，其輕鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO.19所示的氨基酸序列，且重鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO:22所示的氨基酸序列；或抗體或其功能片段，其輕鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO.19所示的氨基酸序列，且重鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO:23所示的氨基酸序列；或抗體或其功能片段，其輕鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO.19所示的氨基酸序列，且重鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO:24所示的氨基酸序列；或抗體或其功能片段，其輕鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO.19所示的氨基酸序列，且重鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO:25所示的氨基酸序列；或抗體或其功能片段，其輕鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO.19所示的氨基酸序列，且重鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO:26所示的氨基酸序列；或抗體或其功能片段，其輕鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO.19所示的氨基酸序列，且重鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO:27所示的氨基酸序列；或抗體或其功能片段，其輕鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO.19所示的氨基酸序列，且重鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO:28所示的氨基酸序列；或抗體或其功能片段，其輕鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO.19所示的氨基酸序列，且重鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO:29所示的氨基酸序列；或抗體或其功能片段，其輕鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO.19所示的氨基酸序列，且重鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO:30所示的氨基酸序列；或抗體或其功能片段，其輕鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO.19所示的氨基酸序列，且重鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO:31所示的氨基酸序列；或抗體或其功能片段，其輕鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO.19所示的氨基酸序列，且重鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO:32所示的氨基酸序列；或抗體或其功能片段，其輕鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO.19所示的氨基酸序列，且重鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO:33所示的氨基酸序列；或抗體或其功能片段，其輕鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO.19所示的氨基酸序列，且重鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO:52所示的氨基酸序列；或抗體或其功能片段，其輕鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO.19所示的氨基酸序列，且重鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO:53所示的氨基酸序列。根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，所述抗GM-CSF抗體或其功能片段在其輕鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO.54所示的氨基酸序列。優(yōu)選的是抗體或其功能片段，其輕鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO.54所示的氨基酸序列，且重鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO:20所示的氨基酸序列；或抗體或其功能片段，其輕鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO.54所示的氨基酸序列，且重鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO:21所示氨基酸序列；或抗體或其功能片段，其輕鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO.54所示的氨基酸序列，且重鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO:22所示的氨基酸序列；或抗體或其功能片段，其輕鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO.54所示的氨基酸序列，且重鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO:23所示的氨基酸序列；或抗體或其功能片段，其輕鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO.54所示的氨基酸序列，且重鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO:24所示的氨基酸序列；或抗體或其功能片段，其輕鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO.54所示的氨基酸序列，且重鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO:25所示的氨基酸序列；或抗體或其功能片段，其輕鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO.54所示的氨基酸序列，且重鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO:26所示的氨基酸序列；或抗體或其功能片段，其輕鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO.54所示的氨基酸序列，且重鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO:27所示的氨基酸序列；或抗體或其功能片段，其輕鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO.54所示的氨基酸序列，且重鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO:28所示的氨基酸序列；或抗體或其功能片段，其輕鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO.54所示的氨基酸序列，且重鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO:29所示的氨基酸序列；或抗體或其功能片段，其輕鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO.54所示的氨基酸序列，且重鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO:30所示的氨基酸序列；或抗體或其功能片段，其輕鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO.54所示的氨基酸序列，且重鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO:31所示的氨基酸序列；或抗體或其功能片段，其輕鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO.54所示的氨基酸序列，且重鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO:32所示的氨基酸序列；或抗體或其功能片段，其輕鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO.54所示的氨基酸序列，且重鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO:33所示的氨基酸序列；或抗體或其功能片段，其輕鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO.54所示的氨基酸序列，且重鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO:52所示的氨基酸序列；或抗體或其功能片段，其輕鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO.54所示的氨基酸序列，且重鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO:53所示的氨基酸序列。根據(jù)另一個(gè)實(shí)施方案，抗GM-CSF抗體或其功能片段在其輕鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO.55所示的氨基酸序列。優(yōu)選的是抗體或其功能片段，其輕鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO.55所示的氨基酸序列，且重鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO:20所示的氨基酸序列；或抗體或其功能片段，其輕鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO.55所示的氨基酸序列，且重鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO:21所示的氨基酸序列；或抗體或其功能片段，其輕鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO.55所示的氨基酸序列，且重鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO:22所示的氨基酸序列；或抗體或其功能片段，其輕鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO.55所示的氨基酸序列，且重鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO:23所示的氨基酸序列；或抗體或其功能片段，其輕鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO.55所示的氨基酸序列，且重鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO:24所示的氨基酸序列；或抗體或其功能片段，其輕鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO.55所示的氨基酸序列，且重鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO:25所示的氨基酸序列；或抗體或其功能片段，其輕鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO.55所示的氨基酸序列，且重鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO:26所示的氨基酸序列；或抗體或其功能片段，其輕鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO.55所示的氨基酸序列，且重鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO:27所示的氨基酸序列；或抗體或其功能片段，其輕鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO.55所示的氨基酸序列，且重鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO:28所示的氨基酸序列；或抗體或其功能片段，其輕鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO.55所示的氨基酸序列，且重鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO:29所示的氨基酸序列；或抗體或其功能片段，其輕鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO.55所示的氨基酸序列，且重鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO:30所示的氨基酸序列；或抗體或其功能片段，其輕鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO.55所示的氨基酸序列，且重鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO:31所示的氨基酸序列；或抗體或其功能片段，其輕鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO.55所示的氨基酸序列，且重鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO:32所示的氨基酸序列；或抗體或其功能片段，其輕鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO.55所示的氨基酸序列，且重鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO:33所示的氨基酸序列；或抗體或其功能片段，其輕鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO.55所示的氨基酸序列，且重鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO:52所示的氨基酸序列；或抗體或其功能片段，其輕鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO.55所示的氨基酸序列，且重鏈可變區(qū)包含如SEQIDNO:53所示的氨基酸序列。優(yōu)選的抗GM-CSF抗體或其功能片段在其輕鏈可變區(qū)含有包含如SEQIDNO.16所示氨基酸序列的CDR1、包含如SEQIDNO.17所示氨基酸序列的CDR2和包含如SEQIDNO.18所示氨基酸序列的CDR3，并且在其重鏈可變區(qū)含有包含如SEQIDNO.14所示的氨基酸序列的CDR1、包含如SEQIDNO.15所示氨基酸序列的CDR2和包含如SEQIDNO.1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13或56中任一所示的氨基酸序列的CDR3。在進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述抗體在其輕鏈包含如SEQIDNO:34所示的氨基酸序列，并且在其重鏈包含如SEQIDNO:35所示的氨基酸序列；或在其輕鏈包含如SEQIDNO:34所示的氨基酸序列，并且在其重鏈包含如SEQIDNO:36所示的氨基酸序列；或在其輕鏈包含如SEQIDNO:34所示的氨基酸序列，并且在其重鏈包含如SEQIDNO:37所示的氨基酸序列；或在其輕鏈包含如SEQIDNO:34所示的氨基酸序列，并且在其重鏈包含如SEQIDNO:38所示的氨基酸序列；或在其輕鏈包含如SEQIDNO:34所示的氨基酸序列，并且在其重鏈包含如SEQIDNO:39所示的氨基酸序列；或在其輕鏈包含如SEQIDNO:34所示的氨基酸序列，并且在其重鏈包含如SEQIDNO:40所示的氨基酸序列；或在其輕鏈包含如SEQIDNO:34所示的氨基酸序列，并且在其重鏈包含如SEQIDNO:41所示的氨基酸序列；或在其輕鏈包含如SEQIDNO:34所示的氨基酸序列，并且在其重鏈包含如SEQIDNO:42所示的氨基酸序列；或在其輕鏈包含如SEQIDNO:34所示的氨基酸序列，并且在其重鏈包含如SEQIDNO:43所示的氨基酸序列；或在其輕鏈包含如SEQIDNO:34所示的氨基酸序列，并且在其重鏈包含如SEQIDNO:44所示的氨基酸序列；或在其輕鏈包含如SEQIDNO:34所示的氨基酸序列，并且在其重鏈包含如SEQIDNO:45所示的氨基酸序列；或在其輕鏈包含如SEQIDNO:34所示的氨基酸序列，并且在其重鏈包含如SEQIDNO:46所示的氨基酸序列；或在其輕鏈包含如SEQIDNO:34所示的氨基酸序列，并且在其重鏈包含如SEQIDNO:47所示的氨基酸序列；或在其輕鏈包含如SEQIDNO:34所示的氨基酸序列，并且在其重鏈包含如SEQIDNO:48所示的氨基酸序列。在其輕鏈包含如SEQIDNO:34所示氨基酸序列、并且在其重鏈包含如SEQIDNO:35所示氨基酸序列的抗GM-CSF抗體是用于中和GM-CSF的最優(yōu)選化合物，其在WO2006/111353中也有所描述。上述優(yōu)選的實(shí)施方案提供了抗體分子和/或其功能片段，優(yōu)選人單克隆抗體分子和/或其功能片段，其作為靈長(zhǎng)類和人GM-CSF的活性的中和劑是特別有利的。根據(jù)這些特別優(yōu)選的實(shí)施方案的抗體或其功能片段出于幾個(gè)原因是非常有利的。首先，它們以高特異性識(shí)別靈長(zhǎng)類和人GM-CSF。也就是說(shuō)，從靈長(zhǎng)類GM-CSF和其他靈長(zhǎng)類集落刺激因子(例如靈長(zhǎng)類動(dòng)物G-CSF和M-CSF)的混合物中，根據(jù)這些特別優(yōu)選的實(shí)施方案所述的結(jié)合分子對(duì)于靈長(zhǎng)類GM-CSF是高度識(shí)別的，而在相同環(huán)境中其它集落刺激因子不被識(shí)別。這同樣適用于人GM-CSF。這意味著根據(jù)這些實(shí)施方案所述的抗體或其功能片段，當(dāng)施用于人時(shí)，將預(yù)期其僅特異性結(jié)合并中和所期望的靶標(biāo)，而其它不期望的靶標(biāo)既不被結(jié)合也不被中和。最終，這導(dǎo)致關(guān)于體內(nèi)治療作用方式具有高度可預(yù)測(cè)性。其次，根據(jù)這些特別優(yōu)選的實(shí)施方案所述的結(jié)合物以可觀的親和力與靈長(zhǎng)類和人GM-CSF結(jié)合?！翱捎^的親和力”包括以約10-6M(KD)或更強(qiáng)的親和力的結(jié)合。優(yōu)選地，當(dāng)結(jié)合親和力為約10-12至10-8M、10-12至10-9M、10-12至10-10M、10-11至10-8M，優(yōu)選約10-11至10-9M時(shí)，其被視為是可觀的(或高的或特異性的)。因此，本發(fā)明的結(jié)合物優(yōu)選具有在上述范圍內(nèi)的KD。鑒于已經(jīng)觀察到本發(fā)明所述的抗體分子的KD值為約4×10-9M至低至約0.04×10-9M的事實(shí)，后者對(duì)應(yīng)于約40pM，本發(fā)明的抗體分子優(yōu)選具有該范圍內(nèi)的KD。然而，本發(fā)明的抗體分子還優(yōu)選具有如上文所述的KD。由于這樣的分子在水性介質(zhì)中的動(dòng)力學(xué)結(jié)合速率主要是受擴(kuò)散控制，因此不能高過(guò)生理?xiàng)l件下局部擴(kuò)散條件所允許的，所以低KD的升高主要是動(dòng)力學(xué)解離速率(即koff)的結(jié)果，對(duì)于最高親和力的抗體結(jié)合物而言，其為約10-5s-1。這意味著，一旦形成一方面是根據(jù)這些實(shí)施方案中任一個(gè)所述的人單克隆抗體或其功能片段與另一方面是GM-CSF之間的復(fù)合物，其不容易或至少不快速分離。對(duì)于旨在作為生物活性中和劑的結(jié)合分子而言，這些特性是非常有利的，這是由于通常只有當(dāng)待中和生物活性的分子(此處為靈長(zhǎng)類和人GM-CSF)與中和結(jié)合分子保持結(jié)合時(shí)所期望的中和效應(yīng)才能持續(xù)。因此，長(zhǎng)時(shí)間保持與其預(yù)定靶標(biāo)結(jié)合的中和分子將繼續(xù)中和相應(yīng)長(zhǎng)的時(shí)間?？贵w或其功能片段對(duì)靈長(zhǎng)類和人GM-CSF的高結(jié)合親和力具有另外的優(yōu)點(diǎn)。通常，抗體或其功能片段將以尺度依賴性方式從患者的血流中消除，較小分子在較大分子之前被排出和消除。由于所述兩個(gè)多肽(抗體或抗體片段和所結(jié)合的GM-CSF)的復(fù)合物明顯大于單獨(dú)的抗體，因此上述低koff具有這樣的效果，即治療中和劑從患者體內(nèi)排出和消除的速率比其不與GM-CSF結(jié)合的情況更慢。因此，不僅中和活性的大小增加了，而且其在體內(nèi)的持續(xù)時(shí)間也增加了。根據(jù)上述實(shí)施方案所述的結(jié)合物，其經(jīng)確定的中和活性驚人地高。如下文更詳細(xì)描述的，GM-CSF中和活性在體外用TF-1生長(zhǎng)抑制試驗(yàn)進(jìn)行測(cè)量(Kitamura，T.等人(1989).J.CellPhysiol.140，323-34)。作為中和潛能的指征，測(cè)量了IC50值，IC50表示根據(jù)這些實(shí)施方案中任一個(gè)所述的抗體或其功能片段引起TF-1細(xì)胞增殖所需的最大半數(shù)抑制的濃度。對(duì)于上文詳述的人單克隆抗GM-CSF抗體或其功能片段，測(cè)定其IC50值為大約3×10-10M或約0.3nM。因此，所述結(jié)合分子是靈長(zhǎng)類和人GM-CSF活性的高度有效的中和劑。中和抗GM-CSF抗體的其它實(shí)例是如Li等人,(2006)PNAS103(10):3557-3562中所描述的人E10抗體和人G9抗體。E10和G9是IgG類抗體。E10對(duì)GM-CSF具有870pM的結(jié)合親和力，G9對(duì)GM-CSF具有14pM的親和力。兩種抗體對(duì)于結(jié)合人GM-CSF是特異性的，并且顯示出了很強(qiáng)的中和活性，正如用TF-1細(xì)胞增殖試驗(yàn)所評(píng)估的。其它實(shí)例是如WO2006/122797中所公開的人抗GM-CSF抗體。作為抗GM-CSF受體抗體的GM-CSF拮抗劑或中和劑也可以用于本發(fā)明。這樣的GM-CSF拮抗劑包括對(duì)GM-CSF受體α鏈或β鏈的抗體。用于本發(fā)明的抗GM-CSF受體抗體可以是如上說(shuō)明的任何抗體形式，例如完整的、嵌合的、單克隆的、多克隆的、抗體片段或衍生物、單鏈、人源化的、人造的，諸如此類。適用于本發(fā)明的抗GM-CSF受體抗體的實(shí)例，例如中和高親和力抗體是本領(lǐng)域已知的(參見例如，美國(guó)專利5,747,032和Nicola等人，Blood82:151724,1993)。在申請(qǐng)中提供了合適抗體的另外的序列，其通過(guò)引用整體并入本文。WO2006/122797、WO2007/049472、WO2007/092939、WO2009/134805、WO2009/064399、WO2009/038760中提供了抗GM-CSF抗體。WO2007/110631中提供了針對(duì)GM-CSF受體的抗體?？傊笹M-CSF抗體或其功能片段顯示出其對(duì)所期望抗原的高度識(shí)別力，其極其緊密并長(zhǎng)時(shí)間地與該抗原結(jié)合，并在其保持結(jié)合的長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)表現(xiàn)出高度有效的中和活性。同時(shí)，結(jié)合物-抗原復(fù)合物的長(zhǎng)持久性使該結(jié)合物從體內(nèi)消除減緩，由此延長(zhǎng)了所期望的體內(nèi)治療效果的持續(xù)時(shí)間。如上所述，所述相同的特征優(yōu)選也適用于識(shí)別GM-CSF受體的抗體。根據(jù)本發(fā)明所述的組合物優(yōu)選為藥物組合物。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施方案，術(shù)語(yǔ)“藥物組合物”涉及向患者施用的組合物，優(yōu)選人患者。藥物組合物或制劑通常是這樣的允許活性成分的生物活性起作用的形式，因此可以出于如本文所述的治療用途向受試者施用。通常藥物組合物包含載體、穩(wěn)定劑和/或賦形劑的合適(即藥學(xué)上可接受的)制劑。在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，藥物組合物是用于腸胃外、經(jīng)皮、腔內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)、鞘內(nèi)和/或鼻內(nèi)施用或直接注射到組織中的組合物。特別設(shè)想的是，所述組合物通過(guò)輸注或注射向患者施用。合適的組合物的施用可以通過(guò)不同的方式實(shí)現(xiàn)，例如通過(guò)靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、皮下、肌肉內(nèi)、外用或皮內(nèi)施用。本發(fā)明的組合物可進(jìn)一步包含藥學(xué)上可接受的載體。合適的藥物載體的實(shí)例是本領(lǐng)域眾所周知的，其包括緩沖鹽溶液、水、乳液如油/水乳液、各種類型的濕潤(rùn)劑、無(wú)菌溶液、脂質(zhì)體等。包含這種載體的組合物可以通過(guò)公知的常規(guī)方法配制。根據(jù)本發(fā)明的實(shí)施方案，術(shù)語(yǔ)“有效量”是指用于有效治療與GM-CSF相關(guān)的疾病(如炎性和自身免疫性疾病)的中和GM-CSF的化合物的量。優(yōu)選的劑量和優(yōu)選的施用方法為使得施用后中和GM-CSF的化合物以有效劑量存在于血液中。施用方案可以通過(guò)觀察疾病狀況并在實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)中分析中和GM-CSF的化合物的血清水平來(lái)進(jìn)行調(diào)整，隨后或者是延長(zhǎng)使用間隔如從每周兩次或每周一次延長(zhǎng)至每?jī)芍芤淮?、每三周一次、每四周一次等，或者是相?yīng)地縮短施用間隔。藥物組合物可以以合適的劑量向受試者施用。該劑量方案將由主治醫(yī)師和臨床因素確定。如醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中眾所周知的，對(duì)任何一名患者的劑量取決于許多因素，包括患者的體型、體表面積、年齡、待施用的具體化合物、性別、施用時(shí)間和途徑、一般健康狀況以及同時(shí)施用的其它藥物。用于腸胃外施用的制劑包括無(wú)菌水性或非水性溶液、懸浮液和乳液。非水溶劑的實(shí)例是丙二醇、聚乙二醇、植物油如橄欖油以及可注射的有機(jī)酯類如油酸乙酯。水性載體包括水、醇/水溶液、乳液或懸浮液，包括鹽水和緩沖介質(zhì)。腸胃外載體包括氯化鈉溶液、林格氏葡萄糖、葡萄糖和氯化鈉、乳酸林格氏液或不揮發(fā)油。靜脈內(nèi)載體包括流體和營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑、電解質(zhì)補(bǔ)充劑(諸如那些基于林格氏葡萄糖的)諸如此類。還可以存在防腐劑和其它添加劑，諸如抗菌劑、抗氧化劑、螯合試劑、惰性氣體等。此外，根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物可包含蛋白質(zhì)載體，例如血清白蛋白或免疫球蛋白，優(yōu)選人源的。設(shè)想根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物除了上述化合物之外還可進(jìn)一步包含另外的生物活性劑，這取決于該藥物組合物的預(yù)期用途。這些試劑可以是作用于胃腸系統(tǒng)的藥物、作為細(xì)胞抑制劑的藥物、預(yù)防高尿酸血癥的藥物、抑制免疫反應(yīng)的藥物(例如皮質(zhì)類固醇)、調(diào)節(jié)調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)的藥物、作用于循環(huán)系統(tǒng)的藥物和/或本領(lǐng)域已知的例如細(xì)胞因子的試劑。為了分析GM-CSF中和化合物對(duì)例如類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)的作用，結(jié)果度量可選自例如藥代動(dòng)力學(xué)、免疫原性、經(jīng)DAS28、ACR20/50/70和/或EULAR反應(yīng)標(biāo)準(zhǔn)所測(cè)量的改善RA臨床體征和癥狀的潛力、滑膜炎和骨水腫的MRI成像以及患者報(bào)告的結(jié)果。ACR是一種度量，其匯總了軟弱和腫脹關(guān)節(jié)數(shù)量的改善、疼痛等級(jí)、患者和醫(yī)生對(duì)改善的評(píng)估以及某些實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)指標(biāo)。ACR20描述了在臨床體征和癥狀方面有20％改善的研究參與者的百分比，例如，軟弱和腫脹關(guān)節(jié)數(shù)改善了20％以及其他三個(gè)疾病相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)改善了20％。在開發(fā)諸如根據(jù)本發(fā)明藥物組合物的藥物中的另一個(gè)主要挑戰(zhàn)是藥代動(dòng)力學(xué)特性的可預(yù)測(cè)調(diào)節(jié)。為此，建立了候選藥物的藥代動(dòng)力學(xué)譜，即影響特定藥物治療給定病狀的能力的藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)譜。影響藥物治療某種疾病實(shí)體的能力的藥物藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)包括但不限于：半衰期、分布體積、肝首過(guò)代謝和血清結(jié)合程度。給定的藥物試劑的功效可以受到上述每一個(gè)參數(shù)的影響?！鞍胨テ凇币庵?0％的所施用藥物通過(guò)生物過(guò)程例如新陳代謝、排泄等而被消除的時(shí)間。“肝首過(guò)代謝”意指藥物首次與肝接觸即在其首次通過(guò)肝臟期間被代謝的傾向。“分布體積”是指藥物在整個(gè)身體各個(gè)區(qū)室(例如細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞外空間、組織和器官等)中的保留程度以及藥物在這些區(qū)室內(nèi)的分布?！把褰Y(jié)合程度”意指藥物與血清蛋白(例如白蛋白)相互作用并結(jié)合的傾向，這導(dǎo)致藥物生物活性的降低或喪失。藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)還包括給定量的所施用藥物的生物利用度、滯后時(shí)間(Tlag)、Tmax、吸收速率和/或Cmax?！吧锢枚取币庵秆簠^(qū)室中的藥物量?！皽髸r(shí)間”意指藥物施用和其在血液或血漿中的檢測(cè)和可測(cè)量性之間的時(shí)間延遲?！癟max”是達(dá)到藥物的最大血液濃度之后的時(shí)間，“吸收”被定義為藥物從施用位點(diǎn)移動(dòng)到體循環(huán)中，“Cmax”是使用給定藥物所獲得的最大血液濃度。達(dá)到其生物學(xué)效應(yīng)所需的藥物血液或組織濃度(藥物的)的時(shí)間受所有參數(shù)的影響。本文所用的術(shù)語(yǔ)“毒性”是指在不良事件或嚴(yán)重不良事件中表現(xiàn)出的藥物的毒性作用。這些負(fù)面事件可能是指在施用后藥物一般缺乏耐受性和/或缺乏局部耐受性。毒性還可包括由藥物引起的致畸或致癌作用。本文所用的術(shù)語(yǔ)“安全性”、“體內(nèi)安全性”或“耐受性”定義了這樣的藥物施用，即并沒(méi)有直接在施用后(局部耐受性)以及藥物應(yīng)用的較長(zhǎng)時(shí)期內(nèi)引起嚴(yán)重不良事件?！鞍踩浴薄ⅰ绑w內(nèi)安全性”或“耐受性”可在例如治療和隨訪期間定期進(jìn)行評(píng)價(jià)。測(cè)量包括臨床評(píng)價(jià)，例如器官表現(xiàn)以及實(shí)驗(yàn)室異常情況篩查?？蛇M(jìn)行臨床評(píng)價(jià)，其可能偏離于根據(jù)NCI-CTC和/或MedDRA標(biāo)準(zhǔn)所記錄/編碼的常規(guī)發(fā)現(xiàn)。器官臨床表現(xiàn)可包括例如過(guò)敏/免疫、血液/骨髓、心律失常、凝血等的標(biāo)準(zhǔn)，如在不良事件通用術(shù)語(yǔ)標(biāo)準(zhǔn)(CommonTerminologyCriteriaforadverseevents,CTCAE)v3.0中所述?？蓹z測(cè)的實(shí)驗(yàn)室參數(shù)包括例如血液學(xué)、臨床化學(xué)、凝血分布和尿液分析以及其它體液如血清、血漿、淋巴液或脊髓液、液體等的檢查。因此可通過(guò)例如體格檢查、成像技術(shù)(即超聲、x射線、CT掃描、磁共振成像(MRI))、采用技術(shù)裝置的其它測(cè)量(即心電圖)、生命體征，通過(guò)測(cè)量實(shí)驗(yàn)室參數(shù)和記錄不良事件來(lái)評(píng)估安全性。本文所用的術(shù)語(yǔ)“有效且無(wú)毒的劑量”是指中和GM-CSF的化合物(優(yōu)選如本文所定義的抗體)的可耐受劑量，其足夠高以治愈或穩(wěn)定感興趣的疾病而沒(méi)有或基本上沒(méi)有主要的毒性作用。這種有效且無(wú)毒的劑量可以通過(guò)例如本領(lǐng)域描述的劑量遞增研究來(lái)確定，并且應(yīng)當(dāng)?shù)陀谝饑?yán)重不良負(fù)面事件的劑量(劑量限制性毒性，DLT)。本發(fā)明的制劑(本文中有時(shí)也稱為“物質(zhì)組合物”或“組合物”或“溶液”)可優(yōu)選處于各種物理狀態(tài)，諸如液體、冷凍、凍干、冷凍干燥、噴霧干燥和重構(gòu)制劑，其中優(yōu)選液體和冷凍制劑。本文所使用的“液體制劑”是指為被發(fā)現(xiàn)為液體的物質(zhì)組合物，其特征在于室溫下所述構(gòu)成分子自身之間的自由移動(dòng)但沒(méi)有分離傾向。液體制劑包括水性和非水性的液體，優(yōu)選水性制劑。水性制劑是一種其溶劑或主要溶劑是水優(yōu)選是注射用水(WFI)的制劑。中和GM-CSF的化合物在制劑中的溶解可以是均質(zhì)的或異質(zhì)的，如上所述優(yōu)選是均質(zhì)的?？梢允褂萌魏魏线m的非水性液體，只要其為本發(fā)明的制劑提供穩(wěn)定性即可。優(yōu)選地，非水性液體是親水性液體。合適的非水液體的示例性實(shí)例包括：甘油；二甲亞砜(DMSO)；聚二甲基硅氧烷(PMS)；乙二醇類，諸如乙二醇、二乙二醇、三乙二醇、聚乙二醇(“PEG”)200、PEG300和PEG400；丙二醇，諸如二丙二醇、三丙二醇、聚丙二醇(“PPG”)425和PPG725。本文所用的“混合的水性/非水性液體制劑”是指含有水(優(yōu)選WFI)和另外液體組合物的混合物的液體制劑。當(dāng)在本文中使用時(shí)，“制劑”或“組合物”是中和GM-CSF的化合物(即，活性藥物/物質(zhì))與優(yōu)選為液體狀的藥物產(chǎn)品所需的其它化學(xué)物質(zhì)和/或添加劑的混合物。本發(fā)明的制劑包括藥物制劑。所述制劑的制備包括將不同的化學(xué)物質(zhì)包括活性藥物進(jìn)行組合以產(chǎn)生最終藥用產(chǎn)品例如藥物組合物的過(guò)程。本發(fā)明制劑的活性藥物是中和GM-CSF的化合物。在某些實(shí)施方案中，待配制的中和GM-CSF的化合物基本上是純的和/或基本上是均質(zhì)的(即基本上不含污染物質(zhì)如蛋白質(zhì)等，該污染物質(zhì)可以是產(chǎn)品相關(guān)的和/或過(guò)程相關(guān)的雜質(zhì))。術(shù)語(yǔ)“基本上是純的”意指組合物包含至少約80％、優(yōu)選約90％重量的化合物，優(yōu)選至少約95％重量的化合物，更優(yōu)選至少約97％重量的化合物，或最優(yōu)選至少約98％重量的化合物，優(yōu)選單體狀態(tài)的化合物。術(shù)語(yǔ)“基本上均質(zhì)的”意為組合物包含至少約99％重量的化合物，優(yōu)選單體狀態(tài)的化合物，其中排除溶液中各種穩(wěn)定劑和水的質(zhì)量。當(dāng)在本文中使用時(shí)，術(shù)語(yǔ)“約”應(yīng)理解為意指可以在各自的值或范圍(例如pH、濃度、百分比、摩爾濃度、氨基酸數(shù)、時(shí)間等)內(nèi)存在變化，其可以比給定數(shù)值的高至5％、高至10％、高至15％或高至且包括20％。例如，如果制劑包含約5mg/ml的化合物，那么這被理解為意指制劑可具有在4mg/ml和6mg/ml之間的化合物，優(yōu)選在4.25mg/ml和5.75mg/ml之間，更優(yōu)選在4.5mg/ml和5.5mg之間/ml之間，甚至更優(yōu)選在4.75mg/ml和5.25mg/ml之間，最優(yōu)選為5mg/ml。如本文所使用的，定義為“(從)X到Y(jié)”的間隔等同于定義為“X和Y之間”的間隔。這兩個(gè)間隔具體包括上限以及下限。這意味著例如“5mg/ml至10mg/ml”或“5mg/ml和10mg/ml之間”的間隔包括5、6、7、8、9和10mg/ml的濃度以及任意給定的中間值?！胺€(wěn)定的”制劑是一種制劑，其中的中和GM-CSF的化合物在儲(chǔ)存時(shí)基本保持其物理穩(wěn)定性和/或化學(xué)穩(wěn)定性和/或生物活性，和/或與對(duì)照樣品相比未顯先出聚集、沉淀、破碎、降解和/或變性的顯著跡象，優(yōu)選通過(guò)肉眼檢查顏色和/或透明度，或者通過(guò)UV光散射或通過(guò)尺寸排阻色譜法測(cè)量。用于測(cè)量蛋白質(zhì)穩(wěn)定性的各種其他分析技術(shù)是本領(lǐng)域中可獲得的，并且在PeptideandProteinDrugDelivery,247-301,VincentLeeEd.,MarcelDekker,Inc.,NewYork,N.Y.,Pubs.(1991)和Jones,A.Adv.DrugDeliveryRev.10:29-90(1993)中進(jìn)行了綜述。本文所用的“儲(chǔ)存期間”意指制備卻不立即使用的制劑；而是在制備之后將包裝儲(chǔ)存，或是以冷凍狀態(tài)的液體形式，或是以用于以后重構(gòu)成液體形式或其它形式的干燥形式。設(shè)想中和GM-CSF的化合物優(yōu)選是穩(wěn)定的，因?yàn)槠湓趦?chǔ)存期間、和/或在凍/融期間或之后、和/或在剪切應(yīng)力(例如來(lái)自振蕩或來(lái)自過(guò)濾步驟)期間或之后基本不形成聚集體或亞可見/可見顆?；蚱?降解產(chǎn)物(例如，由于一種或多種上述原因)。因此，優(yōu)選設(shè)想，相對(duì)于在儲(chǔ)存開始時(shí)或在進(jìn)行一個(gè)或多個(gè)凍/融循環(huán)之前或在進(jìn)行振蕩研究之前的所述中和GM-CSF化合物的量，不超過(guò)10％的中和GM-CSF的化合物，更優(yōu)選不超過(guò)8％、甚至更優(yōu)選不超過(guò)5％、特別優(yōu)選不超過(guò)2％的中和GM-CSF的化合物形成聚集體、顆粒和/或片段。該穩(wěn)定性優(yōu)選適用于至少1個(gè)月的時(shí)間范圍、至少2個(gè)月或至少3個(gè)月；優(yōu)選至少4個(gè)月、至少5個(gè)月或至少6個(gè)月；更優(yōu)選至少9個(gè)月或至少12個(gè)月；甚至更優(yōu)選至少18個(gè)月或至少24個(gè)月；最優(yōu)選至少30個(gè)月或至少36個(gè)月或至少48個(gè)月或至少54個(gè)月或至少60個(gè)月。優(yōu)選的儲(chǔ)存溫度條件為高達(dá)室溫(約20℃至約25℃)，更優(yōu)選約2-8℃，最優(yōu)選的時(shí)間范圍為至少3年或甚至至少4年。在一些實(shí)施方案中，中和GM-CSF的化合物在溫暖氣候中的室溫(例如約30℃)下是穩(wěn)定的。凍/融循環(huán)期間所述化合物根據(jù)上述參數(shù)優(yōu)選是穩(wěn)定的，這樣的凍/融循環(huán)的次數(shù)為至少一個(gè)循環(huán)，優(yōu)選至少2、3或4個(gè)循環(huán)，更優(yōu)選至少5、6或7個(gè)循環(huán)，最優(yōu)選至少8、9或10個(gè)循環(huán)中。振蕩(例如在運(yùn)輸中和GM-CSF的化合物期間的振蕩)期間所述化合物根據(jù)上述參數(shù)(例如在+5℃±3℃的溫度下，也參見實(shí)施例12d)優(yōu)選是穩(wěn)定的，這樣的振蕩的天數(shù)為至少1天，優(yōu)選至少2、3或4天，更優(yōu)選至少5、6或7天，甚至更優(yōu)選至少8、9、10或11天，最優(yōu)選至少12、13或14天。在替代方案中，設(shè)想中和GM-CSF的化合物優(yōu)選在其不形成二聚體、寡聚物或片段的情況下是穩(wěn)定的。換句話說(shuō)，中和GM-CSF的化合物的穩(wěn)定性可根據(jù)溶液中單體蛋白質(zhì)的百分比確定，其中降解的(例如，片段化的)、顆粒的(例如，具有可見和/或亞可見顆粒)和/或聚集的蛋白質(zhì)的百分比低。例如，包含GM-CSF中和化合物例如抗體的本發(fā)明制劑可包含至少90％、更優(yōu)選至少92％、甚至更優(yōu)選至少95％、特別優(yōu)選至少98％、最優(yōu)選至少99％的中和GM-CSF的化合物的單體?！熬奂w”意指蛋白質(zhì)分子之間的物理相互作用，其導(dǎo)致形成可能保持可溶性的共價(jià)或非共價(jià)二聚體或寡聚物(即高分子量實(shí)體，諸如三聚體或多聚體)?！熬奂w”還包括降解的和/或片段化的蛋白質(zhì)。聚集體例如可溶性聚集體的尺寸一般小于1μm。“亞可見顆?！币庵傅鞍踪|(zhì)分子(包括降解的或片段化的蛋白質(zhì))的物理相互作用，其形成導(dǎo)致尺寸大于1μm并且尺寸高達(dá)大約100μm的可逆或不可逆蛋白顆粒?？扇苄跃奂w和/或蛋白質(zhì)分子(包括降解的或片段化的蛋白質(zhì))可接合在一起形成亞可見顆粒?！翱梢婎w?！痹诔叽缟贤ǔ４笥?00μm，并且可以是例如由較小亞可見顆粒、聚集體或蛋白質(zhì)分子(包括降解的或片段化的蛋白質(zhì))形成的內(nèi)在蛋白質(zhì)可見顆粒，又或者是例如包含如來(lái)自儲(chǔ)存容器或運(yùn)輸裝置的外來(lái)物質(zhì)的外來(lái)可見顆粒。一些源自組合產(chǎn)品(例如硅膠滴)的外來(lái)或內(nèi)在顆粒是液體而不是顆粒，但在一些試驗(yàn)中可能被檢測(cè)為顆粒。如上文所述，許多不同的分析方法能夠用于檢測(cè)包含中和GM-CSF的化合物的制劑中聚集體的存在及其水平。這些包括但不限于，例如天然聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)、十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)、基質(zhì)輔助激光解吸電離飛行時(shí)間質(zhì)譜(MALDI-TOFMS)、毛細(xì)管凝膠電泳(CGE)、尺寸排阻色譜(SEC)、分析超速離心(AUC)、場(chǎng)流分級(jí)(FFF)、沉降速度、UV光譜、差示掃描量熱法、比濁法、濁度法、尺寸排阻-高效液相色譜法(SE-HPLC)、反相高效液相色譜(RP-HPLC)、電噴霧離子化串聯(lián)質(zhì)譜(ESI-MS)和串聯(lián)RP-HPLC/ESI-MS、流場(chǎng)流分離技術(shù)(flowfield-flowfractionationtechnique)和靜態(tài)和/或動(dòng)態(tài)光散射。這些方法可以單獨(dú)使用，也可以組合使用。優(yōu)選地，檢測(cè)包含中和GM-CSF的化合物的制劑中的聚集體和/或片段的存在和水平的分析方法是諸如SE-HPLC的尺寸排阻色譜法、分析超速離心法和不對(duì)稱場(chǎng)流分級(jí)法。測(cè)定中和GM-CSF化合物生物活性的方法是例如對(duì)結(jié)合(固定的)GM-CSF(或GM-CSF受體)的程度的測(cè)量，其是所謂的表面等離子體共振(SPR)。包含蛋白質(zhì)的制劑的常見挑戰(zhàn)是聚集體隨時(shí)間、熱量或剪切應(yīng)力的不可逆積累。通常，當(dāng)聚集體沉淀時(shí)，它們形成容易檢測(cè)的大顆粒。然而，較小的非共價(jià)可溶性聚集體，其通常是沉淀形成大顆粒的前體，更難以檢測(cè)和量化。因此，對(duì)蛋白制劑中蛋白質(zhì)的聚集進(jìn)行檢測(cè)和量化的方法需要基于所評(píng)估的聚集體的種類。在上述方法中，確定蛋白制劑中可溶性共價(jià)聚集體的存在和/或其量的建議方法是：SEC/光散射、SDS-PAGE、CGE、RP-HPLC/ESI-MS、FFF和AUC。確定蛋白制劑中可溶性非共價(jià)聚集體的存在和/或其量的建議方法是：SEC、PAGE、SDS-PAGE、CGE、FFF、AUC和動(dòng)態(tài)光散射。確定蛋白制劑中不溶性非共價(jià)聚集體的存在和/或其量的建議方法是：UV光譜、比濁法、濁度法、顯微鏡法、AUC、不對(duì)稱場(chǎng)流分級(jí)和動(dòng)態(tài)光散射。亞可見顆粒也可以由降解的蛋白質(zhì)、聚集體或更小的亞可見顆粒形成。確定亞可見顆粒的存在和/或其量的建議方法是：光散射例如靜態(tài)的(例如通過(guò)多角度激光散射)或動(dòng)態(tài)的(例如通過(guò)光子相關(guān)光譜法)、納米顆粒跟蹤分析(NTA例如來(lái)自MalvernInstruments,Malvern,UK)、不透光度或其它液體粒子計(jì)數(shù)系統(tǒng)例如顯微鏡、動(dòng)態(tài)影像(微流成像，例如Brightwell(CellBiosciences,Ottawa,CA)或FluidImagingTechnologies(Yarmouth，ME)的Image顆粒分析儀等)、流式細(xì)胞術(shù)和電子阻抗(Coulter)計(jì)數(shù)。此外，本發(fā)明的制劑優(yōu)選提供改進(jìn)長(zhǎng)期儲(chǔ)存，這樣使得以液體形式或以冷凍形式、優(yōu)選液體形式存在的中和GM-CSF的化合物在儲(chǔ)存過(guò)程中是穩(wěn)定的。本文所使用的短語(yǔ)“長(zhǎng)期”儲(chǔ)存應(yīng)理解為意指制劑可儲(chǔ)存至少一個(gè)月、兩個(gè)月或三個(gè)月或更多、六個(gè)月或更多，優(yōu)選一年和更多，或甚至2年、3年或4年或5年及更多。長(zhǎng)期儲(chǔ)存也被理解為意指藥物組合物或在2-8℃或在環(huán)境溫度下、優(yōu)選在2-8℃下儲(chǔ)存，由此該制劑優(yōu)選不失去其生物活性至如本文所述的程度，和/或不形成聚集體如本文所述的程度，和/或包含單體至本文所述的程度。這些特性的檢測(cè)在本文其他地方進(jìn)行描述。在本發(fā)明的一方面，制劑中的中和GM-CSF的化合物以液體形式穩(wěn)定至少1個(gè)月、2個(gè)月、3個(gè)月；至少4個(gè)月、至少5個(gè)月；至少6個(gè)月；至少12個(gè)月；至少24個(gè)月；至少36個(gè)月；至少48個(gè)月、至少60個(gè)月。上述時(shí)間段之間的范圍也意在是本發(fā)明的一部分，例如9個(gè)月，諸如此類。另外，也意在包括使用任一上述值的組合作為上限和/或下限的數(shù)值范圍。優(yōu)選地，制劑在室溫(約20℃至25℃)下穩(wěn)定至少1個(gè)月，和/或在約2-8℃下穩(wěn)定至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11或12個(gè)月，或更優(yōu)選在約2-8℃下穩(wěn)定至少2年、至少3年、至少4年或甚至至少5年。穩(wěn)定性的另一個(gè)重要方面是根據(jù)本發(fā)明所述的組合物內(nèi)的中和GM-CSF的化合物在儲(chǔ)存期間和儲(chǔ)存條件內(nèi)(特別是溫度和可能的溫度變化)保持其生物活性或效力?；钚曰蛐Яτ衫缁衔镏泻湍芰Ρ旧?其可在如上文所述基于細(xì)胞的試驗(yàn)中進(jìn)行測(cè)量)反映，或由GM-CSF中和化合物與GM-CSF或GM-CSF受體結(jié)合的能力反映。結(jié)合親和力可以通過(guò)SPR或本領(lǐng)域熟知的其它方法來(lái)評(píng)估，例如Biacore或Scatchard測(cè)定。通過(guò)將本文所述的中和GM-CSF的化合物添加到例如水溶液、緩沖液、張力調(diào)節(jié)劑，以及表面活性劑、氨基酸、抗氧化劑和/或螯合劑中的一種或多種、其中優(yōu)選表面活性劑中來(lái)制備本發(fā)明的制劑。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員會(huì)理解將各種組分的組合包括到制劑中可以以任何適當(dāng)?shù)捻樞蜻M(jìn)行。例如，緩沖液可最先、在中間或最后加入，張力調(diào)節(jié)劑可最先、在中間或最后加入，表面活性劑、氨基酸、抗氧化劑和/或螯合劑中的一種或多種可最先、在中間或最后加入。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員還應(yīng)當(dāng)理解，這些化學(xué)物質(zhì)中的某一些可能在某些組合中是不相容的，于是容易用具有相似特性但在相關(guān)混合物中相容的不同化學(xué)物質(zhì)所替代。在本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選方面，所述制劑包含緩沖液。本文所用的術(shù)語(yǔ)“緩沖液”或“緩沖劑”，包括那些將pH保持在所需范圍內(nèi)的試劑。緩沖液是由弱酸及其共軛堿、或弱堿及其共軛酸的混合物組成的水溶液。它具有這種特性，即當(dāng)加入少量強(qiáng)酸或強(qiáng)堿時(shí)溶液的pH變化非常小。在各種化學(xué)應(yīng)用中，緩沖溶液被用作將pH保持接近恒定值的手段。一般而言，當(dāng)在本發(fā)明的制劑中應(yīng)用時(shí)緩沖液優(yōu)選穩(wěn)定中和GM-CSF的化合物。當(dāng)在本文中使用時(shí)，“氨基酸緩沖劑”包括例如氨基酸堿基，例如組氨酸及其共軛鹽。氨基酸緩沖劑的一個(gè)實(shí)例是組氨酸/組氨酸氯化物。此實(shí)例優(yōu)選應(yīng)用于本發(fā)明。本文所述制劑的優(yōu)選pH可選自以下范圍：約4至約10，優(yōu)選約4至約6或約5至約7，更優(yōu)選約5.5至約6.5。最優(yōu)選地，pH約為5.8或正好5.8。因此，優(yōu)選使用可將溶液保持在pH5-7的緩沖液。當(dāng)在上下文的pH值/范圍使用時(shí)，術(shù)語(yǔ)“約”優(yōu)選意指具有所述值上下±20％范圍的數(shù)值。當(dāng)藥物組合物的pH設(shè)定為或接近生理水平時(shí)，施用時(shí)患者的舒適度最大。應(yīng)當(dāng)理解，可以根據(jù)需要調(diào)節(jié)pH以使特定制劑中的中和GM-CSF的化合物的穩(wěn)定性和溶解度最大化，因此，在生理范圍之外的、但優(yōu)選患者可耐受的pH在本發(fā)明的范圍內(nèi)?？稍诒疚乃鲋苿┲惺褂玫木彌_劑的非限制性實(shí)例包括：組氨酸、琥珀酸鹽、葡糖酸鹽、檸檬酸鹽、精氨酸、賴氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、Tris(氨基丁三醇)、Bis-Tris、MOPS、ACES、TES、HEPES、EPPS、乙二胺、磷酸、馬來(lái)酸/磷酸鹽、2-嗎啉乙磺酸(MES)、磷酸鹽、乙酸鹽和二乙醇胺。優(yōu)選的緩沖液為組氨酸、乙酸鹽和檸檬酸鹽緩沖液。更優(yōu)選地，在本發(fā)明的制劑中應(yīng)用組氨酸緩沖液，優(yōu)選pH在5和7之間，更優(yōu)選pH在5.5和6.5之間，甚至更優(yōu)選pH為5.8。在本發(fā)明中應(yīng)用的緩沖液是本領(lǐng)域所熟知的，并且通過(guò)已知方法制造且可從商業(yè)供應(yīng)商處獲得。在一些實(shí)施方案中，在沒(méi)有氫氧化鈉(0mMNaOH)的情況下制備緩沖液的pH。在一個(gè)實(shí)施方案中，緩沖液是氨基酸及其鹽的混合物，例如組氨酸及組氨酸鹽的混合物，其可按比例預(yù)先測(cè)量，這樣在制備緩沖液期間不需要使用單獨(dú)的酸或堿來(lái)調(diào)節(jié)pH。在一些實(shí)施方案中，所述制劑進(jìn)一步包含氫氧化鈉(NaOH)。在特定的實(shí)施方案中，所述制劑包含1-200mM，或少于50mM、少于40mM、少于35mM、少于30mM、少于25mM、少于20mM，或少于15mM，例如10mM的NaOH或更低，例如5mM或1mM的氫氧化鈉。除了中和GM-CSF的化合物和緩沖液之外，根據(jù)本發(fā)明所述的制劑還可包含其它物質(zhì)，包括但不限于穩(wěn)定試劑(穩(wěn)定劑)。因此，在一個(gè)優(yōu)選的方面，所述制劑包含也可用作張力調(diào)節(jié)劑的穩(wěn)定劑。術(shù)語(yǔ)“穩(wěn)定劑”是指改善或以其它方式增強(qiáng)制劑穩(wěn)定性、特別是中和GM-CSF的化合物的穩(wěn)定性的試劑。作為張力調(diào)節(jié)劑的穩(wěn)定劑可以是非還原糖、糖醇或其組合。本發(fā)明所述液體組合物中的張力調(diào)節(jié)劑確保溶液的張力(即滲透壓)與正常生理流體基本相同，從而防止組合物施用后由于組合物與生理流體之間的離子濃度差異而引起的腫脹或快速吸收。通常，本文所述制劑的性質(zhì)是這樣的，即所述制劑的滲透壓為約240至約500mOsmol/kg，更優(yōu)選為約300至約450mOsmol/kg，甚至更優(yōu)選為約350至約450mOsmol/kg，最優(yōu)選為約400mOsmol/kg。優(yōu)選地，穩(wěn)定劑/張力調(diào)節(jié)劑可以是一種或多種非還原糖，諸如蔗糖或海藻糖；或一種或多種糖醇，諸如甘露醇或山梨醇，此外，還優(yōu)選非還原糖和糖醇的組合。在某些實(shí)施方案中，組合物中的穩(wěn)定劑/張力調(diào)節(jié)劑的濃度選自以下范圍：1-15％(w/v)、2-10％(w/v)、3-8％(w/v)、4-6.5％(w/w)、4.5-6％(w/v)。在特定的實(shí)施方案中，濃度為約5-6％(w/v)。在本發(fā)明制劑中應(yīng)用的優(yōu)選穩(wěn)定劑/張力調(diào)節(jié)劑為山梨醇，優(yōu)選其濃度5％(w/v)。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，本文所述制劑包含一種或多種額外的輔料。優(yōu)選地，所述輔料選自表面活性劑、氨基酸、抗氧化劑、螯合劑及其組合可在本發(fā)明所述制劑中添加輔料，也稱為化學(xué)添加劑、共溶質(zhì)或共溶劑，其優(yōu)選使溶液(還以干燥或冷凍形式)中的中和GM-CSF的化合物穩(wěn)定。優(yōu)選地，輔料有助于穩(wěn)定中和GM-CSF的化合物，但是應(yīng)當(dāng)理解，輔料可以另外有助于所述制劑的物理、化學(xué)和生物學(xué)特性。輔料是本領(lǐng)域所熟知的，并且其通過(guò)已知方法制備并可從商業(yè)供應(yīng)商處獲得。優(yōu)選的輔料是表面活性劑。術(shù)語(yǔ)“表面活性劑”一般包括那些屏蔽中和GM-CSF的化合物免受空氣/溶液界面誘導(dǎo)應(yīng)力和溶液/表面誘導(dǎo)應(yīng)力的試劑。這些界面應(yīng)力可誘使蛋白質(zhì)聚集和顆粒形成，導(dǎo)致不可接受的產(chǎn)品質(zhì)量。界面應(yīng)力的實(shí)例可以是蛋白質(zhì)與以下項(xiàng)的接觸：i)空氣；ii)容器封閉材料，如橡膠柱塞、活塞、玻璃、載藥注射器；iii)生產(chǎn)相關(guān)材料，如鋼罐、管和泵；iv)冰，在凍/融期間等。向制劑中添加表面活性劑將減少蛋白質(zhì)與疏水界面的相互作用，包括液體/空氣界面和冰/液體界面，以及蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)的相互作用。表面活性劑將減少在諸如冷凍、混合、過(guò)濾和泵送的操作期間所產(chǎn)生的亞可見和可見顆粒的量。表面活性劑的實(shí)例包括但不限于：非離子表面活性劑，諸如聚山梨醇酯(例如聚山梨醇酯80(PS80)或聚山梨醇酯20(PS20)(聚山梨醇酯通常也已知為商品名吐溫ICIAmericas)；泊洛沙姆(例如泊洛沙姆188)；Triton、十二烷基硫酸鈉(SDS)；月桂基硫酸鈉(sodiumlaurelsulfate)；鈉辛基糖苷(sodiumoctylglycoside)；月桂基-磺基甜菜堿(sulfobetaine)、肉豆蔻基-磺基甜菜堿、亞油基(linoleyl)-磺基甜菜堿、硬脂基-磺基甜菜堿；月桂基-肌氨酸、肉豆蔻基-肌氨酸、亞油基-肌氨酸、硬脂基-肌氨酸；亞油基-甜菜堿、肉豆蔻基-甜菜堿、十六烷基-甜菜堿、月桂酰胺丙基-甜菜堿、椰油酰胺丙基-甜菜堿、亞油酰氨丙基-甜菜堿、肉豆蔻酰胺丙基-甜菜堿、棕櫚酰胺丙基(palmidopropyl)-甜菜堿、異硬脂酰胺丙基-甜菜堿(例如月桂酰氨丙基)；肉豆蔻酰胺丙基-、棕櫚酰胺丙基-或異硬脂酰胺丙基二甲胺；甲基椰油酰基?；撬徕c或甲基油烯基?；撬岫c(disodiummethylofeyl-taurate)；Monaquat系列(MonaIndustries，Inc.，Paterson，NJ)、聚乙二醇、聚丙二醇和乙烯與丙二醇的共聚物(例如，普朗尼克(pluronics)，PF68)。優(yōu)選地，本文所述制劑中所用的表面活性劑選自以聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯20、泊洛沙姆及其組合中的一種或多種。所添加的表面活性劑的量使得蛋白質(zhì)的聚集保持在可接受的水平(正如使用例如SEC-HPLC所測(cè)定的)，同時(shí)還減少了在儲(chǔ)存、制造、冷凍/解凍、運(yùn)輸?shù)绕陂g形成的亞可見或可見顆粒的量(正如通過(guò)光遮蔽、顯微鏡和基于動(dòng)態(tài)成像的粒子計(jì)數(shù)系統(tǒng)如微流成像或FlowCAM所測(cè)量的)。在一些實(shí)施方案中，基于臨界聚集濃度(CAC)來(lái)確定制劑中表面活性劑的量。CAC是表面活性劑開始與蛋白質(zhì)相互作用的濃度。表面張力測(cè)量值，例如來(lái)自張力計(jì)的測(cè)量值，可繪制在圖上以獲得與圖7類似的曲線。在第一不連續(xù)點(diǎn)處的表面活性劑濃度是CAC。在一些實(shí)施方案中，制劑中表面活性劑的量是高于CAC的量。在一些實(shí)施方案中，表面活性劑的量高于CAC但小于臨界膠束濃度(CMC)。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，對(duì)于高達(dá)200mg/mL的蛋白質(zhì)濃度而言，本發(fā)明所述制劑包含濃度為約0.001％(w/v)至約1％(w/v)的、選自聚山梨醇酯80、聚山梨醇酯20、泊洛沙姆及其組合的一種或多種表面活性劑。在一個(gè)更優(yōu)選的實(shí)施方案中，聚山梨醇酯20與蛋白質(zhì)的比例為約0.01:1至約3:1，優(yōu)選約0.05:1至約2:1，更優(yōu)選約0.1:1和約1.5:1之間，甚至更優(yōu)選約0.1:1至約0.8:1，最優(yōu)選約0.1:1至約0.2:1。對(duì)于80mg/mL的蛋白質(zhì)濃度，聚山梨醇酯20的濃度為約0.001％(w/v)和約0.2％(w/v)之間，優(yōu)選約0.005％和約0.15％(w/v)之間，更優(yōu)選約0.007％(w/v)和約0.1％(w/v)之間，甚至更優(yōu)選約0.007％(w/v)和約0.06％(w/v)之間，最優(yōu)選約0.01％(w/v)。對(duì)于150mg/mL的蛋白質(zhì)濃度，聚山梨醇酯20的濃度為約0.001％(w/v)和約0.4％(w/v)之間，優(yōu)選約0.006％和約0.25％(w/v)之間，更優(yōu)選約0.01％(w/v)和約0.18％(w/v)之間，甚至更優(yōu)選約0.01％(w/v)和約0.1％(w/v)之間，最優(yōu)選約0.02％(w/v)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，聚山梨醇酯20與蛋白質(zhì)的比例為約0.3:1至約3:1，優(yōu)選約0.5:1至約2.0:1，更優(yōu)選約0.5:1和約1.5:1之間，甚至更優(yōu)選在約0.8:1至約1.2:1之間，最優(yōu)選約1:1。對(duì)于80mg/mL的蛋白質(zhì)濃度，聚山梨醇酯20的濃度為約0.02％(w/v)和約0.2％(w/v)之間，優(yōu)選約0.03％(w/v)和約0.13％(w/v)之間，更優(yōu)選約0.05％(w/v)和約0.08％(w/v)之間，最優(yōu)選約0.07％(w/v)。對(duì)于150mg/mL的蛋白質(zhì)濃度，聚山梨醇酯20的濃度為約0.04％(w/v)和約0.4％(w/v)之間，優(yōu)選約0.06％(w/v)和約0.25％(w/v)之間，更優(yōu)選約0.1％(w/v)和約0.15％(w/v)之間，最優(yōu)選約0.13％(w/v)。在另一個(gè)更優(yōu)選的實(shí)施方案中，聚山梨醇酯80與蛋白質(zhì)的比例為約0.01:1至約3:1，優(yōu)選約0.05:1至約2:1，更優(yōu)選約0.1:1和約1.5:1之間，甚至更優(yōu)選在約0.1:1至約0.6:1之間，最優(yōu)選約0.3:1至約0.6:1。對(duì)于80mg/mL的蛋白質(zhì)濃度，聚山梨醇酯80的濃度在約0.001％(w/v)和約0.2％(w/v)之間，優(yōu)選在約0.004％(w/v)和約0.14％(w/v)之間，更優(yōu)選約0.007％(w/v)和約0.1％(w/v)之間，甚至更優(yōu)選約0.007％(w/v)至約0.05％(w/v)之間，最優(yōu)選約0.04％(w/v)。對(duì)于150mg/mL的蛋白質(zhì)濃度，聚山梨醇酯80的濃度為約0.001％(w/v)和約0.4％(w/v)之間，優(yōu)選約0.007％(w/v)和約0.26％(w/v)之間，更優(yōu)選約0.01％(w/v)和約0.2％(w/v)之間，甚至更優(yōu)選約0.01％(w/v)和約0.08％(w/v)之間，最優(yōu)選約0.04％(w/v)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，聚山梨醇酯80與蛋白質(zhì)的比例為約0.3:1至約3:1，優(yōu)選約0.5:1至約2.0:1，更優(yōu)選約0.5:1和約1.5:1之間，甚至更優(yōu)選在約0.8:1至約1.2:1之間，最優(yōu)選約1:1。對(duì)于80mg/mL的蛋白質(zhì)濃度，聚山梨醇酯80的濃度為約0.02％(w/v)和約0.2％(w/v)之間，優(yōu)選約0.04％(w/v)和約0.14％(w/v)之間，更優(yōu)選約0.06％(w/v)和約0.09％(w/v)之間，最優(yōu)選約0.07％(w/v)。對(duì)于150mg/mL的蛋白質(zhì)濃度，聚山梨醇酯80的濃度為約0.04％(w/v)和約0.4％(w/v)之間，優(yōu)選約0.06％(w/v)和約0.27％(w/v)之間，更優(yōu)選約0.1％(w/v)和約0.16％(w/v)之間，最優(yōu)選約0.13％(w/v)。其它優(yōu)選的輔料可以是抗氧化劑或螯合劑。如本文所用，“抗氧化劑”是一種能夠減緩或防止其它分子氧化的分子。氧化是將電子從物質(zhì)轉(zhuǎn)移到氧化劑的化學(xué)反應(yīng)?？寡趸瘎┗蝌蟿┛捎糜跍p少由添加表面活性劑引入的氧化效應(yīng)，該表面活性劑諸如聚山梨醇酯80或聚山梨醇酯20，其可在溶液中形成過(guò)氧化物?？稍谥苿┲刑砑涌寡趸瘎┖?或螯合劑諸如抗壞血酸(維生素C)、硫辛酸、褪黑激素、尿酸、胡蘿卜素、視黃醇、生育酚和生育三烯酚(例如α-生育酚(維生素E))、泛醌(輔酶Q)甲硫氨酸、半胱氨酸、檸檬酸、EDTA或DTPA。更優(yōu)選地，以約3:1至約156:1的抗氧化劑:表面活性劑的摩爾比或以約1:1至約150:1的抗氧化劑:蛋白質(zhì)的摩爾比添加甲硫氨酸、半胱氨酸或檸檬酸。更優(yōu)選地，抗氧化劑:蛋白質(zhì)的比例為約2:1至約100:1，甚至更優(yōu)選約3:1至約20:1，最優(yōu)選約3:1至約8:1。另一種可添加以穩(wěn)定制劑中蛋白質(zhì)的輔料為氨基酸。例如，本發(fā)明組合物所使用的氨基酸選自蘇氨酸、絲氨酸、脯氨酸、丙氨酸、纈氨酸、谷氨酰胺、甲硫氨酸、半胱氨酸、異亮氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、精氨酸、甘氨酸、組氨酸、賴氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸、天冬酰胺、色氨酸、酪氨酸及其組合。更優(yōu)選地，氨基酸選自精氨酸、蘇氨酸、絲氨酸、丙氨酸、谷氨酰胺、甲硫氨酸、甘氨酸及其組合。本發(fā)明所述組合物中所使用的氨基酸的濃度范圍優(yōu)選為約10mM至約100mM，更優(yōu)選約50mM至約100mM。其他輔料的實(shí)例包括但不限于糖/多元醇，諸如蔗糖、乳糖、甘油、木糖醇、山梨醇、甘露醇、麥芽糖、肌醇、海藻糖、葡萄糖；聚合物，諸如血清白蛋白(牛血清白蛋白(BSA)、人SA或重組HA)、葡聚糖、PVA、羥丙基甲基纖維素(HPMC)、聚乙烯亞胺、明膠、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、羥乙基纖維素(HEC)、羥乙基淀粉(HES)；非水溶劑，諸如多元醇(例如PEG、乙二醇和甘油)、二甲亞砜(DMSO)和二甲基甲酰胺(DMF)；以及各種輔料如磷酸鉀、乙酸鈉、硫酸銨、硫酸鎂、硫酸鈉、三甲胺N-氧化物、甜菜堿、金屬離子(例如鋅、銅、鈣、錳和鎂)、CHAPS、單月桂酸酯、2-O-β-甘露糖酸甘油酯(mannoglycerate)或上述的任意組合。“冷凍保護(hù)劑”包括在生產(chǎn)、冷凍、儲(chǔ)存、處理、分配、重構(gòu)或使用期間為冷凍蛋白質(zhì)提供穩(wěn)定性的物質(zhì)。在一個(gè)特定的方面，“冷凍保護(hù)劑”包括保護(hù)蛋白質(zhì)免受冷凍過(guò)程所誘發(fā)的應(yīng)力的物質(zhì)。冷凍保護(hù)劑可具有凍干保護(hù)作用。冷凍保護(hù)劑的非限制性實(shí)例包括糖，諸如蔗糖、葡萄糖、海藻糖、甘露醇、山梨醇、甘露糖和乳糖；聚合物，諸如葡聚糖、羥乙基淀粉、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)和聚乙二醇；表面活性劑，諸如聚山梨醇酯(例如PS-20或PS-80)；以及氨基酸，諸如甘氨酸、精氨酸、亮氨酸和絲氨酸。一般使用在生物系統(tǒng)中顯示低毒性的冷凍保護(hù)劑。如本文所述的二糖可以用作凍干保護(hù)劑或冷凍保護(hù)劑?！皟龈杀Ｗo(hù)劑”包括在凍干和隨后儲(chǔ)存期間防止或減少蛋白質(zhì)化學(xué)或物理不穩(wěn)定性的物質(zhì)。一方面，由于干燥過(guò)程中水從組合物中被去除，凍干保護(hù)劑防止或減少蛋白質(zhì)中的化學(xué)或物理不穩(wěn)定性。在另一方面，凍干保護(hù)劑通過(guò)氫鍵結(jié)合幫助維持蛋白質(zhì)的適當(dāng)構(gòu)象來(lái)穩(wěn)定該蛋白質(zhì)。因此，一方面，本文所述的二糖可用于在冷凍期間穩(wěn)定中和GM-CSF的化合物。由于在冷凍期間的保護(hù)作用可能取決于二糖的絕對(duì)濃度(Carpenter等人，Pharm.Res.(1997),14:969-975)，因此可能需要大于5％的濃度以最大化穩(wěn)定性。在一個(gè)實(shí)施方案中，將凍干保護(hù)劑加入至本文所述的制劑中。本文使用的術(shù)語(yǔ)“凍干保護(hù)劑”包括在冷凍干燥或脫水過(guò)程(初級(jí)和次級(jí)冷凍-干燥循環(huán))期間為蛋白質(zhì)提供穩(wěn)定性的試劑，其通過(guò)提供無(wú)定形玻璃狀基質(zhì)并通過(guò)經(jīng)氫鍵與蛋白質(zhì)的結(jié)合，替代在干燥過(guò)程中除去的水分子。這有助于保持蛋白質(zhì)構(gòu)象，使凍干循環(huán)期間的蛋白質(zhì)降解最小化，并提高產(chǎn)品的長(zhǎng)期穩(wěn)定性。將凍干保護(hù)劑以“凍干保護(hù)的量”添加到預(yù)凍干制劑中，這意味著在凍干保護(hù)量的凍干保護(hù)劑存在下凍干中和GM-CSF的化合物后，該化合物在凍干和儲(chǔ)存時(shí)基本上保持了其物理和化學(xué)的穩(wěn)定性和完整性。凍干保護(hù)劑的非限制性實(shí)例包括糖，如蔗糖或海藻糖；氨基酸，如谷氨酸單鈉、甘氨酸或組氨酸；甲胺，如甜菜堿；溶致鹽，如硫酸鎂；多元醇，如三元或更高級(jí)糖醇，例如阿糖醇、木糖醇、山梨醇和甘露醇；聚乙二醇；普朗尼克(pluronics)；以及上述的組合。優(yōu)選地，凍干保護(hù)劑如上所述用于穩(wěn)定劑。添加到制劑中的凍干保護(hù)劑的量，一般是當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)制劑凍干時(shí)不會(huì)導(dǎo)致不可接受的蛋白質(zhì)降解/聚集程度的量。另一優(yōu)選的輔料可以是填充劑。本文所用的術(shù)語(yǔ)“填充劑”包括提供凍干產(chǎn)品的結(jié)構(gòu)而不直接與藥物產(chǎn)品相互作用的試劑。除了提供藥學(xué)上優(yōu)質(zhì)的餅狀物之外，填充劑還可以賦予長(zhǎng)期儲(chǔ)存時(shí)在改變崩解溫度、提供凍融保護(hù)和增強(qiáng)蛋白質(zhì)穩(wěn)定性方面有用的性質(zhì)。填充劑的非限制性實(shí)例包括甘露醇、甘氨酸、乳糖和蔗糖。填充劑可以是結(jié)晶的(諸如甘氨酸、甘露醇或氯化鈉)或無(wú)定形的(諸如葡聚糖、羥乙基淀粉)，并且通常以0.5％至10％的量用于蛋白質(zhì)制劑中。優(yōu)選地，本發(fā)明所述制劑中應(yīng)用的填充劑促進(jìn)了在美學(xué)上可接受的、均勻的或機(jī)械強(qiáng)度好的餅狀物的形成。填充劑還優(yōu)選促進(jìn)開孔結(jié)構(gòu)的形成和提高重構(gòu)的便捷性和速度。填充劑還優(yōu)選減少或防止餅狀物崩解、共晶熔化或殘留水分的滯留。在另一方面，填充劑優(yōu)選有助于保護(hù)中和GM-CSF的化合物抵抗應(yīng)力(例如，物理和化學(xué)應(yīng)力)并有助于維持蛋白質(zhì)的活性。在一些實(shí)施方案中，制劑可任選地含有防腐劑。“防腐劑”是一種可以添加到本文所述制劑中以降低細(xì)菌活性的化合物。添加防腐劑可以例如促進(jìn)多次使用(多劑量)制劑的生產(chǎn)。潛在防腐劑的實(shí)例包括十八烷基二甲基芐基氯化銨、氯化六烴季銨(hexamethoniumchloride)、苯扎氯銨(烷基芐基二甲基氯化銨的混合物，其中烷基為長(zhǎng)鏈化合物)和芐索氯銨。其它類型的防腐劑包括芳香醇，諸如苯酚、丁醇和芐醇；尼泊金烷基酯，諸如尼泊金甲酯或尼泊金丙酯、鄰苯二酚、間苯二酚、環(huán)己醇、3-戊醇和間甲酚。本文最優(yōu)選的防腐劑是芐醇。因此，在更優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的制劑是用于長(zhǎng)期儲(chǔ)存的液體制劑，優(yōu)選水性制劑，其包含約50mg/ml和約200mg/ml之間的中和GM-CSF的化合物，以及選自組氨酸、乙酸鹽和檸檬酸鹽的緩沖液，pH為約5至約7，所述制劑可另外包含蔗糖、海藻糖、甘露醇和/或山梨醇中的一種或多種作為穩(wěn)定劑/張力調(diào)節(jié)劑，以及一種或多種選自聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯80和泊洛沙姆的表面活性劑。在特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，本發(fā)明的制劑是用于長(zhǎng)期儲(chǔ)存的液體制劑，優(yōu)選水性制劑，其包含約50mg/ml和約200mg/ml之間的中和GM-CSF的化合物，更優(yōu)選約80mg/ml或約150mg/ml；以及濃度為約20mM至約40mM、優(yōu)選約30mM的組氨酸緩沖液，pH為約5.5至約6.5，更優(yōu)選pH5.8；并且所述制劑可另外包含約4％至約6％、更優(yōu)選約5％(w/v)的山梨醇以及聚山梨醇酯，例如聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80，其濃度為約0.005％(w/v)至約0.5％(w/v)，優(yōu)選約0.01％(w/v)至約0.04％(w/v)。如果在上述優(yōu)選制劑中使用聚山梨醇酯20和約80mg/mL的蛋白質(zhì)濃度，那么聚山梨醇酯20的濃度為約0.001％(w/v)和約0.2％(w/v)之間，優(yōu)選約0.007％(w/v)和約0.11％(w/v)之間，更優(yōu)選約0.007％(w/v)和約0.06％(w/v)之間，最優(yōu)選約0.01％(w/v)。如果所用的蛋白質(zhì)濃度為約150mg/mL，那么聚山梨醇酯20的濃度為約0.001％(w/v)至約0.4％(w/v)之間，優(yōu)選約0.006％(w/v)和約0.25％(w/v)之間，更優(yōu)選約0.01％(w/v)和約0.18％(w/v)之間，甚至更優(yōu)選約0.01％(w/v)至約0.1％(w/v)，最優(yōu)選約0.02％(w/v)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，如果在上述優(yōu)選制劑中使用聚山梨醇酯20和約80mg/mL的蛋白質(zhì)濃度，那么聚山梨醇酯20的濃度為約0.02％(w/v)和約0.2％(w/v)之間，優(yōu)選約0.03％(w/v)和約0.13％(w/v)之間，更優(yōu)選約0.05％(w/v)和約0.08％(w/v)之間，最優(yōu)選約0.07％(w/v)。如果所用的蛋白質(zhì)濃度為約150mg/mL，那么聚山梨醇酯20的濃度為約0.04％(w/v)和約0.4％(w/v)之間，優(yōu)選約0.06％(w/v)和約0.25％(w/v)之間，更優(yōu)選約0.1％(w/v)和約0.15％(w/v)之間，最優(yōu)選約0.13％(w/v)。如果在上述優(yōu)選制劑中使用聚山梨醇酯80和約80mg/mL的蛋白質(zhì)濃度，那么聚山梨醇酯80的濃度為約0.001％(w/v)和約0.2％(w/v)之間，優(yōu)選約0.004％(w/v)和約0.14％(w/v)之間，更優(yōu)選約0.007％(w/v)和約0.1％(w/v)之間，甚至更優(yōu)選約0.007％(w/v)和約0.05％(w/v)之間，最優(yōu)選約0.04％(w/v)。如果所用的蛋白質(zhì)濃度為約150mg/mL，那么聚山梨醇酯80的濃度為約0.001％(w/v)和約0.4％(w/v)之間，優(yōu)選約0.007％(w/v)和約0.26％(w/v)之間，更優(yōu)選約0.01％(w/v)和約0.2％(w/v)之間，甚至更優(yōu)選約0.01％(w/v)和約0.08％(w/v)之間，最優(yōu)選約0.04％(w/v)。在另一個(gè)實(shí)施方案中，如果在上述優(yōu)選制劑中使用聚山梨醇酯80和約80mg/mL的蛋白質(zhì)濃度，那么聚山梨醇酯80的濃度為約0.02％(w/v)和約0.2％(w/v)之間，優(yōu)選約0.04％(w/v)和約0.14％(w/v)之間，更優(yōu)選約0.06％(w/v)和約0.09％(w/v)之間，最優(yōu)選約0.07％(w/v)。如果所使用的蛋白質(zhì)濃度為約150mg/mL，那么聚山梨醇酯80的濃度為約0.04％(w/v)和約0.4％(w/v)之間，優(yōu)選約0.06％(w/v)和約0.27％(w/v)之間，更優(yōu)選約0.1％(w/v)和約0.16％(w/v)之間，最優(yōu)選約0.13％(w/v)。此外，在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明所述的中和抗GM-CSF抗體或其功能片段的制劑包含中和抗體約80mg/ml至約150mg/ml、山梨醇約5％(w/v)、L-組氨酸約30mM、聚山梨醇酯80約0.02％(w/v)至約0.04％(w/v)，pH為約5.8。此外，在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明所述的中和抗GM-CSF抗體或其功能片段的制劑包含中和抗體約80mg/ml，山梨醇約5％(w/v)，L-組氨酸約30mM，聚山梨醇酯80約0.04％(w/v)，pH為約5.8。此外，在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明所述的中和抗GM-CSF抗體或其功能片段的制劑包含中和抗體約150mg/ml，山梨醇約5％(w/v)，L-組氨酸約30mM，聚山梨醇酯80約0.04％(w/v)，pH為約5.8。應(yīng)當(dāng)理解，所述組合物的某些組分可以與本領(lǐng)域已知的替代物互換。然而，本領(lǐng)域技術(shù)人員還將理解，包含某些組分將排除其它組分、濃度或該制劑制備方法的使用，原因包括但不限于化學(xué)相容性、pH、張力和穩(wěn)定性。有益的是，本發(fā)明的液體制劑具有低且可行的粘度，其適合于皮下施用，諸如在即用型裝置中。由此，在約50和約1000[1/sec]之間的的剪切速率和約20℃的溫度下，根據(jù)本發(fā)明所述的制劑的粘度優(yōu)選低于20mPa*s，更優(yōu)選地在上述條件下低于15mPa*s。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的液體制劑的粘度和/或穩(wěn)定性隨時(shí)間保持低注射力。例如載藥注射器中制劑的力的測(cè)量在機(jī)器上進(jìn)行，例如通用壓縮測(cè)試系統(tǒng)(Norwood，MA)，其具有適于測(cè)試機(jī)構(gòu)以保持注射器的附件。本文所述的制劑提供了既可通過(guò)手動(dòng)裝置也可通過(guò)自動(dòng)(例如，機(jī)械輔助)裝置進(jìn)行皮下施用的可能性。在一個(gè)實(shí)施方案中，注射力是滑動(dòng)力。在一些實(shí)施方案中，滑動(dòng)力小于25N。在其它實(shí)施方案中，滑動(dòng)力為0-20N、2-15N或4-11N。所述制劑在裝入注射器后可保持低注射力的時(shí)間為至少3個(gè)月、至少6個(gè)月、至少12個(gè)月、3個(gè)月、6個(gè)月、9個(gè)月、12個(gè)月、15個(gè)月、18個(gè)月、24個(gè)月、3-6個(gè)月、3-9個(gè)月、6-9個(gè)月、6-12個(gè)月、9-15個(gè)月、12-18個(gè)月、18-30個(gè)月或24-36個(gè)月。所述制劑可以儲(chǔ)存在冰箱中，例如2-8℃或5℃，或在室溫下，例如18-25℃或25℃。如本文所述，本申請(qǐng)大體涉及一個(gè)發(fā)現(xiàn)，即向包含中和GM-CSF的化合物的制劑中添加幾種物質(zhì)可以減少制劑中這些化合物的聚集和/或降解/片段化。無(wú)論什么原因?qū)е轮苿┲兄泻虶M-CSF的化合物聚集或被降解，添加如本文所述的物質(zhì)減少了制劑中中和GM-CSF的化合物的聚集/片段化。在某些實(shí)施方案中，添加所述物質(zhì)減少了例如由儲(chǔ)存、暴露于升高的溫度、暴露于光、暴露于剪切應(yīng)力、pH和離子條件及其任意組合而引起的制劑中的聚集/降解。本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)的措施可用于減少中和GM-CSF的化合物、特別是配制成液體和冷凍形式的該化合物的聚集和/或降解/斷裂。因此，所減少的聚集/斷裂優(yōu)選在液體制劑中觀察到。假定當(dāng)直接以液體形式儲(chǔ)存并用于以后使用時(shí)，以冷凍狀態(tài)儲(chǔ)存并在使用前融化時(shí)，或者以干燥形式(諸如凍干、風(fēng)干或噴霧干燥形式)制備并用于以后在使用前重構(gòu)成液體形式或其它形式時(shí)，也可以觀察到聚集/降解的減少。因此，設(shè)想本文所述制劑可以通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的任何方法儲(chǔ)存。非限制性的實(shí)例包括對(duì)制劑進(jìn)行冷卻、冷凍、凍干和噴霧干燥，其中優(yōu)選通過(guò)冷卻儲(chǔ)存。在一些情況下，將蛋白質(zhì)制劑冷凍儲(chǔ)存。因此，期望所述制劑在這樣的條件包括在凍融循環(huán)下是相對(duì)穩(wěn)定的。確定制劑的這種適應(yīng)性的一種方法是使制劑樣品經(jīng)歷至少一個(gè)，例如一個(gè)、三個(gè)、五個(gè)、七個(gè)和多達(dá)十個(gè)的凍融循環(huán)(例如通過(guò)在約-80℃±10℃下冷凍過(guò)夜，并在室溫下快速解凍，或在冰上緩慢解凍例如6小時(shí))，測(cè)定在凍融循環(huán)后積聚的低分子量/剪切(LMW)種類和/或高分子量/聚集(HMW)種類的量，并將其與凍融步驟之前樣品中存在的LMW種類或HMW種類的量進(jìn)行比較。LMW或HMW種類的增加表明作為制劑一部分儲(chǔ)存的蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性降低。尺寸排阻高效液相色譜(SE-HPLC)能用于確定LMW和HMW種類的存在。優(yōu)選地，蛋白質(zhì)制劑可以作為液體儲(chǔ)存。因此，如本文所述，期望液體制劑在這樣的條件下包括在各種溫度下是穩(wěn)定的。例如，確定制劑適用性的一種方法是在若干溫度(例如2-8℃、15℃、20℃、25℃、30℃、35℃、40℃和50℃)下儲(chǔ)存樣品制劑，并監(jiān)測(cè)隨時(shí)間所積聚的HMW和/或LMW種類的量。隨時(shí)間所積聚的HMW和/或LMW種類的量越小，所述儲(chǔ)存條件對(duì)制劑越好。此外，蛋白質(zhì)的電荷分布可以通過(guò)陽(yáng)離子交換高效液相色譜(CEX-HPLC)來(lái)監(jiān)測(cè)?；蛘撸苿┛梢栽趦龈珊髢?chǔ)存。進(jìn)一步期望制劑在剪切應(yīng)力的條件下是穩(wěn)定的。確定制劑適用性的一種方法是在所期望的溫度(例如2-8℃、15℃、20℃、25℃、30℃、35℃、40℃和50℃，優(yōu)選+5℃±3℃)下，在振蕩器例如垂直振蕩器上輕晃容器中制劑。該容器(例如小瓶)在振蕩器上存儲(chǔ)一段期望的時(shí)間段，例如多達(dá)14天或更長(zhǎng)時(shí)間，與在相同溫度下但未振蕩儲(chǔ)存的對(duì)照進(jìn)行比較。數(shù)據(jù)點(diǎn)收集可在例如0、1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、14和14天后進(jìn)行。振蕩儲(chǔ)存后積聚的低分子量(LMW)種類和/或高分子量(HMW)種類的量可以確定，并與未振蕩樣品中存在的LMW種類或HMW種類的量進(jìn)行比較。LMW或HMW種類的增加表明作為制劑一部分儲(chǔ)存的蛋白質(zhì)的穩(wěn)定性降低。尺寸排阻高效液相色譜(SE-HPLC)可用于確定LMW和HMW種類的存在。在一些情況下，將制劑噴霧干燥，然后儲(chǔ)存。對(duì)于噴霧干燥，在干燥氣流的存在下將液體制劑霧化。水從制劑液滴中被除去到氣流中，得到藥物制劑的干燥顆粒。輔料可被包括在所述制劑中以(i)在噴霧干燥脫水期間保護(hù)蛋白質(zhì)，(ii)在噴霧干燥后的儲(chǔ)存期間保護(hù)蛋白質(zhì)，和/或(iii)賦予該溶液適于霧化特性。該方法與上述用于冷凍的方法類似，除了該樣品制劑是噴霧干燥而不是冷凍，在稀釋劑中重構(gòu)，并且檢測(cè)重構(gòu)的制劑中LMW種類和/或HMW種類的存在之外。與未凍干的相應(yīng)樣品制劑相比，噴霧干燥樣品中LMW或HMW種類的增加表明噴霧干燥樣品的穩(wěn)定性降低。術(shù)語(yǔ)“凍干的”或“冷凍干燥的”包括已經(jīng)經(jīng)歷干燥步驟如凍干的物質(zhì)狀態(tài)，其中至少90％、優(yōu)選95％、最優(yōu)選98％的水分已被去除。因此，本文使用的術(shù)語(yǔ)“凍干”是指這樣的過(guò)程，通過(guò)該過(guò)程首先冷凍待干燥的材料，然后通過(guò)在真空環(huán)境中升華作用去除冰或冷凍的溶劑。輔料(例如凍干保護(hù)劑)可以包括在待凍干的制劑中，以便增強(qiáng)凍干產(chǎn)品在儲(chǔ)存時(shí)的穩(wěn)定性。本文使用的術(shù)語(yǔ)“重構(gòu)制劑”是指通過(guò)將凍干的蛋白制劑在稀釋劑中溶解以使中和GM-CSF的化合物分散在稀釋劑中而制備的制劑。本文使用的術(shù)語(yǔ)“稀釋劑”是藥學(xué)上可接受的(對(duì)人施用是安全和無(wú)毒的)物質(zhì)，并且可用于制備液體制劑，例如在凍干后重構(gòu)的制劑。稀釋劑的非限制性實(shí)例包括無(wú)菌水、注射用抑菌水(BWFI)、pH緩沖溶液(例如磷酸鹽緩沖鹽水)、無(wú)菌鹽水溶液、林格氏溶液、葡萄糖溶液或鹽和/或緩沖劑的水溶液。在本發(fā)明的另一方面，設(shè)想所述制劑用于治療。因此，本發(fā)明設(shè)想的藥物組合物(或藥物)包含本文所述制劑。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種治療受試者的方法，其包括施用治療有效量的本文所述制劑，其中所述受試者患有可以用中和GM-CSF的化合物進(jìn)行有益治療的疾病或病癥。優(yōu)選地，本文所述制劑用于預(yù)防和/或治療可以使用中和GM-CSF的化合物進(jìn)行預(yù)防和/或治療和/或改善的疾病。術(shù)語(yǔ)“受試者”意在包括活的生物體。受試者的實(shí)例包括哺乳動(dòng)物，例如人、狗、牛、馬、豬、綿羊、山羊、貓、小鼠、兔、大鼠和轉(zhuǎn)基因非人動(dòng)物。在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方案中，受試者是人。術(shù)語(yǔ)“有效劑量(dose)”或“有效用量(dosage)”被定義為足以實(shí)現(xiàn)或至少部分實(shí)現(xiàn)所期望效果的量。術(shù)語(yǔ)“治療有效劑量”被定義為足以治愈或至少部分阻止已經(jīng)患有疾病的患者的疾病及其并發(fā)癥的量。該用途的有效量將取決于醫(yī)學(xué)病狀的嚴(yán)重性和受試者自身免疫系統(tǒng)的總體狀態(tài)。術(shù)語(yǔ)“患者”包括接受預(yù)防性或治療性治療的人和其他哺乳動(dòng)物受試者。制劑的適當(dāng)劑量或治療有效量將取決于待治療的病狀、治療前病狀的嚴(yán)重性以及患者的臨床病史和對(duì)治療劑的反應(yīng)?？筛鶕?jù)主治醫(yī)師的判斷來(lái)調(diào)整適當(dāng)?shù)膭┝?，以使得其可以一次或一系列施用于患者。所述藥物組合物可以作為單獨(dú)的治療劑施用或根據(jù)需要與其它治療方法組合施用。本發(fā)明的藥物組合物特別用于腸胃外施用，即皮下、肌內(nèi)、靜脈內(nèi)、關(guān)節(jié)內(nèi)和/或滑膜內(nèi)，其中優(yōu)選皮下施用。腸胃外施用可以通過(guò)團(tuán)注或連續(xù)輸注進(jìn)行。用于注射的藥物組合物可以以添加有防腐劑的單位劑型存在，例如在安瓿或多劑量容器中。此外，已經(jīng)開發(fā)了許多新的藥物遞送方法，本發(fā)明的藥物組合物適用于使用這些新方法進(jìn)行施用，例如Inject-ease、Genject、注射筆諸如Genen，以及無(wú)針裝置諸如MediJector和BioJector。本發(fā)明藥物組合物也可以調(diào)整以適用于尚待發(fā)現(xiàn)的施用方法。參見Langer,1990,Science,249:1527-1533。凍干藥物組合物可優(yōu)選存在于含有活性成分的小瓶中。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述藥物組合物另外包含用于重構(gòu)的溶液。所述藥物組合物可以進(jìn)一步包含額外的藥學(xué)上可接受的組分。其它藥學(xué)上可接受的載體、賦形劑或穩(wěn)定劑，諸如在Osol,A.所編著的第16版Remington'sPharmaceuticalSciences(1980)中所描述的那些，也可被包括在本文所述的蛋白質(zhì)制劑中，條件是它們不會(huì)對(duì)制劑的預(yù)期特性造成不利影響。如本文所用的“藥學(xué)上可接受的載體”意指與藥物施用相容的任何和所有溶劑、分散介質(zhì)、包衣、抗細(xì)菌劑和抗真菌劑、等滲劑和吸收延遲劑。這樣的用于藥物活性物質(zhì)的介質(zhì)和試劑的用途是本領(lǐng)域所熟知的。可接受的載體、賦形劑或穩(wěn)定劑在所用劑量和濃度下對(duì)接受者是無(wú)毒的，其包括：張力調(diào)節(jié)劑；額外的緩沖試劑；防腐劑；共溶劑；抗氧化劑，包括抗壞血酸和甲硫氨酸；螯合劑如EDTA；金屬絡(luò)合物(例如Zn-蛋白絡(luò)合物)；可生物降解的聚合物，諸如聚酯；成鹽抗衡離子，諸如鈉、多元糖醇；氨基酸，諸如丙氨酸、甘氨酸、天冬酰胺、2-苯丙氨酸和蘇氨酸；糖或糖醇，諸如乳糖醇、水蘇糖、甘露糖、山梨糖、木糖、核糖、核糖醇、肌糖(myoinisitose)、肌醇(myoinisitol)、半乳糖、半乳糖醇、甘油、環(huán)醇(例如肌醇)、聚乙二醇；含硫還原劑，諸如谷胱甘肽、硫辛酸、巰基乙酸鈉、硫代甘油、α-單硫代甘油和硫代硫酸鈉；低分子量蛋白質(zhì)，諸如人血清白蛋白、牛血清白蛋白、明膠或其它免疫球蛋白；以及親水性聚合物，諸如聚乙烯吡咯烷酮。本文所述的制劑可用作治療和/或預(yù)防和/或改善有需要的患者的疾病或病癥的藥物組合物。術(shù)語(yǔ)“治療”是指治療性的治療和預(yù)防，或預(yù)防性措施。治療包括向患有疾病/病癥、具有疾病/病癥的癥狀或?qū)膊?病癥具有易感性的患者的身體、分離的組織或細(xì)胞應(yīng)用或施用所述制劑，其目的是治療、治愈、減輕、解除、改變、補(bǔ)救、緩解、改善或影響疾病、疾病癥狀或?qū)膊∫赘行?。那些“需要治療的”包括那些已?jīng)患有該病癥的，以及那些其中需要預(yù)防該病癥的。術(shù)語(yǔ)“病癥”是任何受益于使用本文所述蛋白質(zhì)制劑進(jìn)行治療的狀況。這包括慢性和急性的病癥或疾病，其包括那些使哺乳動(dòng)物易患所述病癥的病理狀況。本文待治療的病癥的非限制性實(shí)例包括炎性和自身免疫性疾病，優(yōu)選包括過(guò)敏性和銀屑病性疾病，以及關(guān)節(jié)炎性和哮喘性疾病，例如關(guān)節(jié)炎、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)、自身免疫性腦炎、銀屑病、多發(fā)性硬化、肺病如哮喘、慢性阻塞性肺病(COPD)和急性呼吸窘迫綜合征(ARDS)；克羅恩病、特發(fā)性肺纖維化(IPF)、炎性腸病(IBD)、葡萄膜炎、黃斑變性、結(jié)腸炎、華勒變性、抗磷脂綜合征(APS)、急性冠狀動(dòng)脈綜合征、再狹窄、動(dòng)脈粥樣硬化、復(fù)發(fā)性多軟骨炎(RP)、急性或慢性肝炎、失效骨科植入物、腎小球腎炎、狼瘡、特應(yīng)性皮炎和炎癥、關(guān)節(jié)炎和骨關(guān)節(jié)炎疼痛。過(guò)敏性病癥是由過(guò)敏或過(guò)敏反應(yīng)引起的任意病癥。過(guò)敏是免疫系統(tǒng)的超敏性病癥。過(guò)敏在人免疫系統(tǒng)對(duì)通常無(wú)害的外來(lái)物質(zhì)(過(guò)敏原)如食物、花粉、霉菌、室塵、動(dòng)物皮屑、塵螨等產(chǎn)生反應(yīng)或過(guò)度反應(yīng)時(shí)發(fā)生。銀屑病是主要影響皮膚的自身免疫性疾病。皮膚細(xì)胞的生長(zhǎng)周期由于免疫系統(tǒng)發(fā)出的錯(cuò)誤信號(hào)而加速。存在五種類型的銀屑?。喊邏K狀、滴狀、皮褶、膿皰性和紅皮性。最常見的形式，即斑塊狀銀屑病，通常被看作是出現(xiàn)在表皮(皮膚)的頂部最上層上的紅色和白色色調(diào)的鱗片狀斑塊。然而，一些患者沒(méi)有皮膚病征兆或癥狀。該病癥是一種慢性復(fù)發(fā)性病狀，其嚴(yán)重程度不同，從輕微的局部斑塊到全身覆蓋。手指甲和腳趾甲經(jīng)常受到影響(銀屑病性甲營(yíng)養(yǎng)不良)，可以看作是一個(gè)孤立的跡象。銀屑病還可導(dǎo)致被稱為銀屑病關(guān)節(jié)炎的關(guān)節(jié)炎癥。關(guān)節(jié)炎是涉及一個(gè)或多個(gè)關(guān)節(jié)的炎癥的關(guān)節(jié)病癥形式。存在超過(guò)100種不同形式的關(guān)節(jié)炎。最常見的形式，即骨關(guān)節(jié)炎(退行性關(guān)節(jié)病)是關(guān)節(jié)創(chuàng)傷、關(guān)節(jié)感染或衰老的結(jié)果。其它關(guān)節(jié)炎形式是類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、銀屑病關(guān)節(jié)炎和其它相關(guān)的自身免疫性疾病。膿毒性關(guān)節(jié)炎是由關(guān)節(jié)感染引起的。哮喘是常見氣道慢性炎性病癥，其中許多細(xì)胞和細(xì)胞元件起作用。哮喘與氣道高反應(yīng)性相關(guān)，導(dǎo)致反復(fù)發(fā)作的喘息、咳嗽、胸悶和呼吸短促。這些發(fā)作通常與肺內(nèi)分布廣泛?jiǎn)为?dú)但可變的氣流阻塞相關(guān)聯(lián)，所述氣流阻塞通常是自發(fā)性可逆的或通過(guò)治療可逆的。哮喘可以根據(jù)癥狀的頻率、一秒內(nèi)強(qiáng)制呼氣量和呼氣峰流速來(lái)分類。哮喘還可以分類為特應(yīng)性(外源性)或非特應(yīng)性(內(nèi)源性)。除中和GM-CSF的化合物之外，本發(fā)明的藥物組合物可包含另外的治療劑或生物活性劑。例如，可以存在用于治療特定適應(yīng)癥諸如骨關(guān)節(jié)炎的治療因子(例如參與破壞關(guān)節(jié)軟骨或滑液組分的一種或多種抑制劑，選自但不限于抗金屬蛋白酶、環(huán)化素化合物、細(xì)胞因子拮抗劑、皮質(zhì)類固醇、TNF抑制劑、IL-抑制劑、抗血管生成物質(zhì)、聚蛋白多糖酶(aggrecanase)抑制劑、p38激酶抑制劑、細(xì)胞凋亡抑制劑、透明質(zhì)酸酶抑制劑和蛋白水解酶抑制劑)?？刂蒲装Y的因子包括英夫利昔單抗、依那西普(etanercerpt)、阿達(dá)木單抗(adalimulab)、nerelimonmab、lenercerpt等或其組合也可以是所述組合物的一部分。還設(shè)想所述藥物組合物可包括細(xì)胞外基質(zhì)組分，例如透明質(zhì)酸或其衍生物，包括其鹽、酯、內(nèi)酯和硫酸鹽衍生物，優(yōu)選透明質(zhì)酸的偏酯。在另一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及包含本發(fā)明制劑的試劑盒(或制品)或容器。所述制劑可優(yōu)選已經(jīng)處于液體狀態(tài)。然而，可替代的，其可優(yōu)選處于凍干狀態(tài)。其也可以是冷凍、凍干、冷凍干燥或噴霧干燥的狀態(tài)。因此，如果所述制劑處于除液體之外的狀態(tài)，其可由醫(yī)生制備成(液體)水性藥物組合物。例如，所述制劑可以是凍干的，然后必須重構(gòu)。因此，所述試劑盒可以進(jìn)一步包括用于重構(gòu)冷凍、凍干、冷凍干燥或噴霧干燥的制劑的工具和/或用于稀釋制劑的工具和/或用于分別施用制劑或藥物組合物的工具，例如注射器、泵、浸漬器、針等。所述試劑盒可以包含一個(gè)或多個(gè)含有本發(fā)明制劑的小瓶。所述試劑盒還可附帶使用說(shuō)明。因此，提供了一種含有本文所述制劑的制品，并優(yōu)選提供其使用說(shuō)明書。所述制品包括適于容納制劑的容器。合適的容器包括但不限于瓶、小瓶(例如雙室小瓶)、注射器(例如單室或雙室注射器)、試管、霧化器、吸入器(例如定量吸入器或干粉吸入器)或儲(chǔ)藏器。所述容器可由各種材料形成，諸如玻璃、金屬或塑料(例如，聚碳酸酯、聚苯乙烯、聚丙烯、聚烯烴)。所述容器容納制劑，容器上的標(biāo)簽或與容器相聯(lián)的標(biāo)簽可以標(biāo)明對(duì)重構(gòu)和/或使用的指示。該標(biāo)簽還可以標(biāo)明所述制劑用于或旨在用于皮下施用。所述容納制劑的容器可以是多次使用的小瓶，其允許重復(fù)施用(例如，2-6次施用)所述制劑。所述制品還可以包括含有合適稀釋劑(例如WFI、0.9％NaCl、BWFI、磷酸鹽緩沖鹽水)的第二容器。當(dāng)所述制品包含凍干形式的中和GM-CSF化合物制劑時(shí)，稀釋劑與凍干制劑的混合將在重構(gòu)制劑中提供所期望的最終蛋白質(zhì)濃度。所述制品可以進(jìn)一步包括從商業(yè)和用戶角度來(lái)說(shuō)所需的其它材料，包括其它緩沖液、稀釋劑、過(guò)濾器、針、注射器和具有使用說(shuō)明的包裝說(shuō)明書。本發(fā)明還包括可以用于遞送本發(fā)明制劑的裝置。這樣的裝置的實(shí)例包括但不限于注射器例如載藥注射器、筆、植入物、無(wú)針注射裝置、吸入裝置和貼片。本發(fā)明的組合物對(duì)于多方面是穩(wěn)定的，包括由于它們?cè)诶绮Ａлd藥注射器和藥筒中使用而產(chǎn)生的界面應(yīng)力。已經(jīng)確定橡膠配方、硅酮、鎢和固化劑與蛋白質(zhì)溶液此消彼長(zhǎng)地相互作用以形成聚集體、亞可見顆粒和可見顆粒。本發(fā)明的蛋白質(zhì)制劑與載藥注射器/藥筒系統(tǒng)(包括封閉系統(tǒng))中的組分相容。本發(fā)明通過(guò)附圖和實(shí)施例進(jìn)行進(jìn)一步說(shuō)明，所述附圖和實(shí)施例僅僅是說(shuō)明性的，而不構(gòu)成對(duì)本發(fā)明范圍的限制。附圖說(shuō)明圖1：儲(chǔ)存時(shí)間、儲(chǔ)存溫度和蛋白質(zhì)濃度對(duì)抗GM-CSF抗體的單體水平的影響；圖2：以滲透壓[mOsmol/kg]為變量的標(biāo)準(zhǔn)化效果的帕累托圖；圖3：含80mg/mL抗GM-CSF抗體、5％山梨醇、30mM組氨酸和不同量的吐溫20的制劑中2-10μm顆粒的形成；圖4：含80mg/mL抗GM-CSF抗體、5％山梨醇、30mM組氨酸和不同量的吐溫80的制劑中2-10μm顆粒的形成；圖5：含150mg/mL抗GM-CSF抗體、5％山梨醇、30mM組氨酸和不同量的吐溫20的制劑中2-10μm顆粒的形成；圖6：含150mg/mL抗GM-CSF抗體、5％山梨醇、30mM的組氨酸和不同量的吐溫80的制劑中2-10μm顆粒的形成；圖7：抗GM-CSF抗體與表面活性劑的代表性表面張力曲線；圖8：在含有不同濃度的吐溫20或吐溫80的30mM組氨酸、5％山梨醇中80mg/mL抗GM-CSF抗體的≥10μm顆粒濃度隨凍/融循環(huán)次數(shù)的增加；圖9：在含有不同濃度的吐溫20或吐溫80的30mM組氨酸、5％山梨醇中150mg/mL抗GM-CSF抗體的≥10μm顆粒濃度隨凍/融循環(huán)次數(shù)的增加。下列項(xiàng)目也表征了本發(fā)明：1.一種組合物，其包含濃度為至少約20mg/ml的中和GM-CSF的化合物、張力調(diào)節(jié)劑、緩沖劑，并且包含表面活性劑、氨基酸、抗氧化劑和/或螯合劑中的一種或多種，其中所述組合物是穩(wěn)定的。2.根據(jù)項(xiàng)目1所述的組合物，其包含中和GM-CSF的化合物、張力調(diào)節(jié)劑、緩沖劑和表面活性劑。3.根據(jù)項(xiàng)目1或2所述的組合物，其中所述中和GM-CSF的化合物以至少約50mg/ml的濃度存在，所述張力調(diào)節(jié)劑以約1％至約15％(w/v)的濃度存在，所述緩沖劑以約10mM至約50mM的濃度存在。4.根據(jù)項(xiàng)目1至3中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述張力調(diào)節(jié)劑選自甘露醇、山梨醇、蔗糖和/或海藻糖。5.根據(jù)項(xiàng)目1至4中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述緩沖劑選自組氨酸、乙酸鹽和/或檸檬酸鹽緩沖劑。6.根據(jù)項(xiàng)目1至5中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述表面活性劑選自聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯80、泊洛沙姆以及組合中的一種或多種。7.根據(jù)項(xiàng)目1至6中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述中和GM-CSF的化合物以至少約50mg/ml且小于約200mg/ml的濃度存在，所述張力調(diào)節(jié)劑以約3％至約7％(w/v)的濃度存在，所述緩沖劑以約20mM至約40mM的濃度存在，并且所述表面活性劑以約0.001％至約1％(w/v)的濃度存在。8.根據(jù)項(xiàng)目1至7中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述pH為約5和約7之間。9.根據(jù)項(xiàng)目1至8中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述張力調(diào)節(jié)劑為山梨醇，并且所述緩沖劑為組氨酸緩沖劑。10.根據(jù)項(xiàng)目2至9中任一項(xiàng)所述的組合物，其進(jìn)一步包含抗氧化劑。11.根據(jù)項(xiàng)目1至10中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述中和GM-CSF的化合物選自多肽、擬肽、核酸和小分子。12.根據(jù)項(xiàng)目11所述的組合物，其中所述多肽是與GM-CSF或GM-CSF受體結(jié)合的抗體或其功能片段。13.根據(jù)項(xiàng)目12所述的組合物，其中所述抗體或其功能片段是人單克隆抗體或其功能片段。14.根據(jù)項(xiàng)目12或13所述的組合物，其中所述抗體是IgG、IgG1或IgG4抗體。15.根據(jù)項(xiàng)目12至14中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述抗體或其功能片段與GM-CSF的表位結(jié)合，所述表位優(yōu)選包含第23-27位氨基酸(RRLLN)和/或第65-77位氨基酸(GLR/QGSLTKLKGPL)。16.根據(jù)項(xiàng)目15所述的組合物，其中所述表位進(jìn)一步包含:(i)第28-31位氨基酸(LSRD)；(ii)第32-33位氨基酸(TA)和/或(iii)第21-22位氨基酸(EA)。17.根據(jù)項(xiàng)目15或16所述的組合物，其中所述表位是不連續(xù)的表位。18.根據(jù)項(xiàng)目12至17中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述抗體或其功能片段在其重鏈可變區(qū)中含有包含選自如SEQIDNO:1-13和56中任一項(xiàng)所示氨基酸序列的CDR3。19.根據(jù)項(xiàng)目18所述的組合物，其中所述重鏈可變區(qū)CDR3序列中的任一項(xiàng)和包含如SEQIDNO:14所示氨基酸序列的重鏈可變區(qū)CDR1以及包含如SEQIDNO:15所示氨基酸序列的重鏈可變區(qū)CDR2一起存在于重鏈可變區(qū)中。20.根據(jù)項(xiàng)目12至19中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述抗體或其功能片段在其輕鏈可變區(qū)中含有包含如SEQIDNO:16所示氨基酸序列的CDR1、包含如SEQIDNO:17所示氨基酸序列的CDR2和包含如SEQIDNO:18所示氨基酸序列的CDR3。21.根據(jù)項(xiàng)目12至20中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述抗體或其功能片段在其輕鏈可變區(qū)中包含如SEQIDNO:19、54和55中任一項(xiàng)所示的氨基酸序列。22.根據(jù)項(xiàng)目12至21中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述抗體或其功能片段在其重鏈可變區(qū)中包含如SEQIDNO:20-33、52和53中任一項(xiàng)所示的氨基酸序列。23.根據(jù)項(xiàng)目12至22中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述抗體或其功能片段在其輕鏈可變區(qū)中含有包含如SEQIDNO:16所示氨基酸序列的CDR1、包含如SEQIDNO:17所示氨基酸序列的CDR2和包含如SEQIDNO:18中所示氨基酸序列的CDR3；并且在其重鏈可變區(qū)中含有包含如SEQIDNO:14所示氨基酸序列的CDR1、包含如SEQIDNO:15所示氨基酸序列的CDR2和包含如SEQIDNO:1-13和56中任一項(xiàng)所示氨基酸序列的CDR3。24.根據(jù)項(xiàng)目12至23中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述抗體或其功能片段在其輕鏈可變區(qū)中含有包含如SEQIDNO:16所示氨基酸序列的CDR1、包含如SEQIDNO:17所示氨基酸序列的CDR2和包含如SEQIDNO:18中所示氨基酸序列的CDR3；并且在其重鏈可變區(qū)中含有包含如SEQIDNO:14所示氨基酸序列的CDR1、包含如SEQIDNO:15所示氨基酸序列的CDR2和包含如SEQIDNO:2所示氨基酸序列的CDR3。25.根據(jù)項(xiàng)目12至24中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述抗體或其功能片段包含如SEQIDNO:34所示的輕鏈氨基酸序列，以及選自如SEQIDNO:35-48中任一項(xiàng)所示的那些的重鏈氨基酸序列。26.根據(jù)項(xiàng)目12至25中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述抗體或其功能片段包含如SEQIDNO:34所示的輕鏈氨基酸序列以及如SEQIDNO:35所示的重鏈氨基酸序列。27.根據(jù)項(xiàng)目12至26中任一項(xiàng)所述的組合物，其中所述抗體或其功能片段包含與如SEQIDNO:1-48和52-56中任一項(xiàng)所示的相應(yīng)氨基酸序列具有至少70％同源性的氨基酸序列，優(yōu)選包含與如SEQIDNO:1-18和56中任一項(xiàng)所示的相應(yīng)氨基酸序列、和/或與如SEQIDNO:19-48和52-55中任一項(xiàng)所示氨基酸序列中的框架區(qū)氨基酸序列具有至少70％同源性的氨基酸序列。28.根據(jù)前述項(xiàng)目中任一項(xiàng)所述的組合物，其包含：i)約50mg/ml至約180mg/ml的中和GM-CSF的化合物，ii)約5％(w/v)山梨醇，iii)約30mML-組氨酸，iv)約0.001％至約1％(w/v)表面活性劑，以及v)pH為約5.8。29.根據(jù)項(xiàng)目28所述的組合物，其包含約80mg/ml或約150mg/ml的中和GM-CSF的化合物。30.根據(jù)前述項(xiàng)目中任一項(xiàng)所述的組合物，其為液體，優(yōu)選為水性組合物。31.根據(jù)前述項(xiàng)目中任一項(xiàng)所述的組合物，其在約2-8℃下穩(wěn)定至少24個(gè)月，或在室溫下穩(wěn)定至少28天。32.根據(jù)前述項(xiàng)目中任一項(xiàng)所述的組合物，其用于治療。33.根據(jù)前述項(xiàng)目中任一項(xiàng)所述的組合物，其用于靜脈內(nèi)和/或皮下施用。34.根據(jù)前述項(xiàng)目中任一項(xiàng)所述的組合物，其用于治療炎性和自身免疫性疾病，優(yōu)選包括過(guò)敏性和銀屑病性疾病，以及關(guān)節(jié)炎性和哮喘性疾病。35.一種試劑盒，其包含前述項(xiàng)目中任一項(xiàng)所述的組合物。36.根據(jù)權(quán)利要求35所述的試劑盒，其包括載藥注射器、藥筒或自動(dòng)注射器。應(yīng)當(dāng)理解，本文所公開的發(fā)明不限于特定的方法、方案或試劑，因而它們是可以變化的。本文所提供的討論和實(shí)施例僅出于描述特定實(shí)施方案的目的而給出，其不旨在限制本發(fā)明的范圍，本發(fā)明的范圍僅由權(quán)利要求書限定。以下實(shí)施例將闡述本發(fā)明。實(shí)施例1：材料以下實(shí)施例用人單克隆IgG1抗體(下文中以“抗體”表示)進(jìn)行，該抗體與高親和力的特異性人GM-CSF結(jié)合并中和，其在WO2006/111353中有描述。它的產(chǎn)生在WO2006/111353的實(shí)施例2中有描述。更具體地，該抗體包含如SEQIDNO:16、17、18、14、15和2中所示的輕鏈和重鏈CDR序列。這些CDR序列分別包含在重鏈和輕鏈可變結(jié)構(gòu)域中，并分別在SEQIDNO:34和35中示出。GM-CSF在多種促炎癥和自身免疫性人類疾病中異常地過(guò)度產(chǎn)生，并且發(fā)現(xiàn)添加重組的GM-CSF會(huì)加重這些疾病。用GM-CSF中和抗體治療的可能的疾病適應(yīng)癥包括類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)、哮喘和其它形式的肺部炎癥、多發(fā)性硬化(MS)和銀屑病。使用無(wú)血清和無(wú)蛋白質(zhì)的培養(yǎng)基在生物反應(yīng)器中產(chǎn)生抗體。由單個(gè)小瓶的抗體產(chǎn)生克隆制備生產(chǎn)發(fā)酵罐的接種物。在發(fā)酵過(guò)程完成后，通過(guò)過(guò)濾來(lái)對(duì)含有分泌抗體的收獲物進(jìn)行處理，以將細(xì)胞和碎片從上清液中分離?；诔Ｒ姷纳V方法對(duì)收獲物進(jìn)行純化，以減少HCP、DNA和潛在的病毒。整體病毒滅活步驟是下游過(guò)程的另一附加部分。對(duì)于制劑，進(jìn)行濃縮和緩沖液的更換步驟。實(shí)施例2：檢測(cè)方法建立尺寸排阻高效液相色譜法(SE-HPLC)以確定抗體的聚集程度(HPLC：Agilent1100Chemstation；柱：TosohBiosepTSKgelG4000SWXL)。通過(guò)進(jìn)行九點(diǎn)范圍檢測(cè)來(lái)驗(yàn)證SE-HPLC方法，從中確定并測(cè)試精度(六次重復(fù)注射)和線性度(三標(biāo)準(zhǔn)曲線)。所有試驗(yàn)都使用100mMKH2PO4、200mMNa2SO4，pH6.6作為運(yùn)行緩沖液進(jìn)行。建立表面等離子體共振(SPR)方法以確定抗體與固定的GM-CSF的結(jié)合活性的程度(Biacore3000/CM5傳感器芯片/HBS-EP運(yùn)行緩沖液)。通過(guò)進(jìn)行九點(diǎn)范圍檢測(cè)來(lái)驗(yàn)證SPR方法，從中確定并測(cè)試精度(六次重復(fù)注射)和線性度(三標(biāo)準(zhǔn)曲線)。進(jìn)行還原和非還原SDS-PAGE以檢測(cè)抗體的降解產(chǎn)物(片段)和聚集體。對(duì)溶液中尺寸為約2-100μm的顆粒進(jìn)行微流成像(MFI，Brightwell，Ottawa，CA)以量化內(nèi)在和外部亞可見顆粒的量。使用WCX-10柱和TRIS/咪唑/哌嗪運(yùn)行緩沖液中的pH梯度進(jìn)行陽(yáng)離子交換層析(CEX)以評(píng)估帶電荷的異構(gòu)體。酸性異構(gòu)體在主要異構(gòu)體之前洗脫，堿性異構(gòu)體在主要異構(gòu)體之后洗脫。使用配有用于保持注射器的轉(zhuǎn)接器的通用壓縮測(cè)試系統(tǒng)來(lái)測(cè)試注射器滑動(dòng)力。實(shí)施例3：pH和溫度應(yīng)激的影響進(jìn)行研究以評(píng)估抗體在pH值從3到10范圍內(nèi)的低離子強(qiáng)度篩選緩沖液(LISSB：2mM甘氨酸、2mM檸檬酸、2mMHEPES、2mMMES和2mMTris)中的穩(wěn)定性。將抗體樣品在各自的溶液中在55℃下儲(chǔ)存14天的時(shí)間。在T0、T7和T14(天)時(shí)分析樣品。SPR分析表明所述抗體在pH4-7下最穩(wěn)定。當(dāng)通過(guò)SE-HPLC分析時(shí)，發(fā)現(xiàn)所述抗體單體在pH4-6(T14)下最穩(wěn)定。T14樣品的非還原和還原SDS-PAGE僅在pH4-6下顯示出最小的降解產(chǎn)物和聚集體的形成。實(shí)施例4：離子強(qiáng)度和溫度應(yīng)激的影響進(jìn)行研究以評(píng)估所述抗體在0、10、100和500mMNaCl存在下在低離子強(qiáng)度篩選緩沖液(LISSB)中的穩(wěn)定性。將抗體樣品透析至含有額外NaCl的LISSB溶液(pH4.5和pH7.5)中，達(dá)到約1mg/ml的濃度，并在55℃下儲(chǔ)存14天的時(shí)間。在T0、T7和T14(天)時(shí)，通過(guò)SE-HPLC和SPR分析樣品。HPLC和SPR研究表明，添加鹽會(huì)使所述抗體的穩(wěn)定性變差，并且此影響在pH4.5下比在pH7.5下更加顯著。此外，SE-HPLC數(shù)據(jù)顯示，在pH4.5下具有升高的鹽濃度(≥100mM)的抗體不穩(wěn)定性主要導(dǎo)致所述抗體聚集體的積聚。在pH7.5下具有升高的鹽濃度(500mM)的抗體不穩(wěn)定性主要導(dǎo)致抗體降解產(chǎn)物的積聚。在LISSBpH4.5、500mMNaCl中，抗體的沉淀水平(T7和T14)非常高。實(shí)施例5：緩沖液的影響進(jìn)行研究以評(píng)估所述抗體在各種pH5-7的緩沖液中的穩(wěn)定性。將抗體樣品透析至pH5、6和7的20mM檸檬酸鹽緩沖液；pH6和pH7的20mM磷酸鹽緩沖液；pH6和pH7的20mM琥珀酸鹽緩沖液；pH6和pH7的20mM組氨酸緩沖液；以及pH5和pH6的20mM乙酸鹽緩沖液中，達(dá)到約1mg/ml的濃度，并在55℃下儲(chǔ)存14天的時(shí)間。在T0、T7和T14(天)時(shí)，通過(guò)SE-HPLC、SPR以及還原和非還原SDS-PAGE分析樣品。SPR研究、HPLC單體和聚集體數(shù)據(jù)以及還原和非還原的SDS-PAGE表明，所述抗體在pH5的乙酸鹽緩沖液、pH6的組氨酸緩沖液和pH5、6和7的檸檬酸鹽緩沖液中最穩(wěn)定(T14的數(shù)據(jù))。實(shí)施例6：氨基酸的影響進(jìn)行研究以評(píng)估所述抗體在添加有不同氨基酸的低離子強(qiáng)度篩選緩沖液(LISSB)中的穩(wěn)定性。將抗體樣品在pH6的、含有250mM相應(yīng)氨基酸的溶液中在55℃下儲(chǔ)存14天的時(shí)間。在T0、T7和T14(天)時(shí)分析樣品。SPR研究表明特別是谷氨酸、蘇氨酸、賴氨酸和纈氨酸(T14)的輕微穩(wěn)定作用。HPLC數(shù)據(jù)表明，與沒(méi)有添加任何氨基酸的參照相比，谷氨酸、蘇氨酸和丙氨酸的穩(wěn)定化和顯著效果分別導(dǎo)致增多了約2-3％的完整單體和減少了約30％、31％和20％的聚集體。實(shí)施例7：糖和表面活性劑的影響進(jìn)行研究以評(píng)估所述抗體在添加有各種糖或表面活性劑的低離子強(qiáng)度篩選緩沖液(LISSB)中的穩(wěn)定性。將抗體樣品用額外的6％(w/v)的糖(D-甘露醇、D-山梨醇、蔗糖，D-甘露糖、D-麥芽糖、D-海藻糖、D-葡萄糖)、0.05％(v/v)吐溫20或0.02％(v/v)吐溫80透析到pH6.0的LISSB溶液中，達(dá)到約1mg/ml的濃度，并在55℃下儲(chǔ)存14天的時(shí)間。在T0、T7和T14(天)時(shí)，通過(guò)SE-HPLC、SPR和還原和非還原SDS-PAGE分析樣品。SPR和HPLC研究表明D-山梨醇和D-甘露醇使所述抗體的穩(wěn)定性分別提高約20％/3％(SPR/HPLC數(shù)據(jù)，T14)和14％/4％(SPR/HPLC數(shù)據(jù)，T14)。海藻糖和蔗糖均具有分別為7％/0.7％(SPR/HPLC數(shù)據(jù)，T14)和6％/2％(SPR/HPLC數(shù)據(jù)，T14)的降低作用。此外，HPLC數(shù)據(jù)表明，D-山梨醇和D-甘露醇使所述抗體聚集體的形成分別減少了43％和50％，這也得到了SDS-PAGE所得了數(shù)據(jù)的支持。如通過(guò)SE-HPLC、SPR和SDS-PAGE所測(cè)，0.05％(v/v)吐溫20和0.02％(v/v)吐溫80都不影響穩(wěn)定性。實(shí)施例8：緩沖液、氨基酸和糖的組合的影響基于先前的研究，進(jìn)行研究以評(píng)估在緩沖液、氨基酸和糖的組合中配制的1mg/ml抗體的穩(wěn)定性。先前的研究表明了pH5的20mM乙酸鹽；pH6的20mM組氨酸；250mM的谷氨酸；250mM的蘇氨酸，6％(w/v)山梨醇和6％(w/v)的甘露醇的穩(wěn)定作用。將所述抗體以5.4mg/ml的濃度配制成如表1所示的20mM的緩沖液、250mM的氨基酸和6％(v/v)的糖類的組合的溶液，并在55℃下儲(chǔ)存14天的時(shí)間。將1×PBS中的抗體作為對(duì)照。在T0、T7和T14(天)時(shí)，通過(guò)SE-HPLC和SPR分析樣品。此外，檢測(cè)包含1×PBS中的所述抗體(5.4mg/ml)的T0樣品對(duì)凍融易感性。將存儲(chǔ)小瓶在冷凍器中-20℃下緩慢冷凍。冷凍完成后，將樣品在室溫下融化。重復(fù)該過(guò)程直到完成五個(gè)凍融循環(huán)。在兩個(gè)和五個(gè)循環(huán)后檢查每一個(gè)樣品的SPR和SE-HPLC回收。表1：緩沖液、糖和氨基酸的組合(Ac＝乙酸鹽緩沖液；His＝組氨酸緩沖液；M＝甘露醇；S＝山梨醇)SPR數(shù)據(jù)顯示，相對(duì)于T0，在T14/55℃下樣品5-16中的結(jié)合活性>93％。對(duì)于1×PBS(樣品17)和樣品1-4(全部不含甘露醇或山梨醇)中的抗體，數(shù)值分別為62％、19％、26％、91％和85％。因此，SPR數(shù)據(jù)表明，添加甘露醇或山梨醇改善了結(jié)合活性的穩(wěn)定性。此外，樣品1-4在T7和T14處呈黃色，這表明氧化。SE-HPLC數(shù)據(jù)顯示，在樣品5-8、11-12和15-16中發(fā)現(xiàn)最低水平的聚集體(3.5％-5.6％)和降解產(chǎn)物(4.2％-5.4％)(T14/55℃數(shù)據(jù))，這支持甘露醇和山梨醇對(duì)抗體單體的穩(wěn)定作用，并表明添加250mM蘇氨酸的影響可能較小。然而，通過(guò)樣品5-8、11-12和15-16中發(fā)現(xiàn)的單體水平(分別為91.2％、89.8％、91.5％、90.8％、89.8％、89.0％、91.4％和90.9％)——對(duì)于樣品17(PBS)，數(shù)值為80.3％(T14/55℃數(shù)據(jù))——來(lái)判斷蘇氨酸的影響至少是最小的。250mM谷氨酸和山梨醇或甘露醇一起對(duì)抗體單體的穩(wěn)定性有負(fù)面影響，特別是在乙酸鹽緩沖液中?？傊?，所述抗體單體似乎在pH5的20mM乙酸鹽緩沖液或pH6的20mM組氨酸緩沖液和6％(w/v)山梨醇或6％(w/v)甘露醇的組合中是最穩(wěn)定的。來(lái)自凍/融實(shí)驗(yàn)的SE-HPLC數(shù)據(jù)表明，在穩(wěn)定抗體單體方面山梨醇的作用稍優(yōu)于甘露醇。在5輪凍/融后，與樣品5和7中的單體含量為96.9％和96.0％相比，樣品6和8中單體的含量分別為98.6％和98.4％。實(shí)施例9：組氨酸或乙酸鹽緩沖液、山梨醇或甘露醇和吐溫20或吐溫80的組合的影響基于來(lái)自先前研究的穩(wěn)定性數(shù)據(jù)(顯示穩(wěn)定作用的，特別是pH5的20mM乙酸鹽、pH6的20mM的組氨酸、6％(w/v)山梨醇和6％(w/v)甘露醇的穩(wěn)定作用)，進(jìn)行了新的研究以評(píng)估在組氨酸或乙酸鹽緩沖液、山梨醇或甘露醇、吐溫20或吐溫80的組合中配制的10mg/ml抗體的穩(wěn)定性。由于抗體濃度為10mg/ml，還通過(guò)SE-HPLC檢測(cè)了添加0.02％(w/v)吐溫20和0.02％(w/v)吐溫80對(duì)聚集的影響。將所述抗體以10mg/ml的濃度配制到pH5.0的20mM乙酸鹽緩沖液或pH6.0的2mM組氨基酸緩沖液、并含如表2所示添加劑的溶液中，在55℃下儲(chǔ)存14天的時(shí)間。在T0、T7和T14(天)時(shí)，通過(guò)SE-HPLC和SPR分析樣品。另外，檢測(cè)抗體樣品對(duì)凍融的易感性。所述抗體以10mg/ml的濃度在-20℃下在冰箱中緩慢冷凍。冷凍完成后，將樣品在室溫下融化。重復(fù)該過(guò)程直到完成三個(gè)和/或五個(gè)凍融循環(huán)。在三個(gè)和/或五個(gè)凍融循環(huán)后，檢測(cè)每個(gè)樣品的SPR和SE-HPLC回收。表2：緩沖液、糖和洗滌劑的組合(Ac＝乙酸鹽緩沖液；His＝組氨酸緩沖液；M＝甘露醇；S＝山梨醇；T20＝吐溫20；T80＝吐溫80)HPLC數(shù)據(jù)顯示，盡管乙酸鹽和組氨酸之間存在微小差異，但組氨酸似乎至少與乙酸鹽一樣好。1周后，與不含表面活性劑的相應(yīng)制劑相比，含有乙酸鹽、山梨醇和吐溫80，以及含有組氨酸、山梨醇和吐溫20的制劑具有相似的降解。凍融實(shí)驗(yàn)表明，在五輪凍融后，洗滌劑對(duì)抗體單體的水平至少?zèng)]有影響。然而，與6％(w/v)甘露醇相比，當(dāng)向所述試劑中添加6％(w/v)山梨醇時(shí)，所述抗體單體更穩(wěn)定。加入甘露醇后，所述抗體單體在5輪凍融后聚集到更高程度。來(lái)自凍融實(shí)驗(yàn)的HPLC數(shù)據(jù)顯示，使用乙酸鹽和組氨酸之間沒(méi)有差異。總之，通過(guò)HPLC測(cè)定，含有pH6.0的20mM組氨酸和6％(w/v)山梨醇的預(yù)制劑對(duì)于抗體單體的穩(wěn)定性似乎是最佳的。實(shí)施例10：20mM組氨酸、6％(w/v)D-山梨醇的預(yù)制劑的短期穩(wěn)定性評(píng)估在確定pH6.0的20mM組氨酸和6％(w/v)山梨醇作為最佳預(yù)制劑的基礎(chǔ)上，進(jìn)行短期穩(wěn)定性試驗(yàn)以評(píng)價(jià)較高抗體濃度的預(yù)制劑。將所述抗體以約22、36、42、83和118mg/ml的濃度配制到上述溶液中。將配制的抗體在5℃和25℃下儲(chǔ)存長(zhǎng)達(dá)4周的時(shí)間。在T0、T14和T28(天)時(shí)，通過(guò)SE-HPLC分析樣品。SE-HPLC數(shù)據(jù)清楚地顯示所述抗體在pH6.0的20mM組氨酸、6％(w/v)山梨醇中是穩(wěn)定的。在5℃或25℃下儲(chǔ)存28天后，檢測(cè)到的抗體單體濃度總是高于97％，除了在25℃下測(cè)試的最高抗體濃度(118mg/ml)，其中抗體單體濃度為約96.5％。結(jié)果在圖1中示出。實(shí)施例11：最終輔料的微調(diào)基于先前實(shí)驗(yàn)中產(chǎn)生的數(shù)據(jù)，已經(jīng)選擇山梨醇和組氨酸用于穩(wěn)定抗體。在下一步中，使用“實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)”(DesignofExperiment，DOE)，針對(duì)10-100mg/ml的抗體濃度，對(duì)輔料的量以及pH值進(jìn)行微調(diào)，這包括3個(gè)中心點(diǎn)，得到30個(gè)單獨(dú)運(yùn)行。隨機(jī)實(shí)驗(yàn)計(jì)劃使用以下參數(shù)進(jìn)行：抗體：10-55-100mg/ml，pH：5-6-7，組氨酸：10-30-50mM，山梨醇：2-6-10％(w/v)。為允許短期評(píng)價(jià)，將樣品在50℃的加速條件下應(yīng)激14天。此外，進(jìn)行三個(gè)凍融循環(huán)(-20℃)以模擬抗體儲(chǔ)存。結(jié)果：確定滲透壓以確保制劑的生理?xiàng)l件。對(duì)于所述抗體的靜脈或皮下應(yīng)用，在250和450mOsmol/kg之間的滲透壓是可接受的范圍。如圖2所示，滲透壓主要由制劑中山梨醇的量控制。低濃度(10-50mM)下的組氨酸和所述抗體本身均對(duì)滲透壓具有最小的影響。滲透壓對(duì)山梨醇和組氨酸的濃度的依賴性可在等高線中描述。該等高線顯示，為將滲透壓維持在生理區(qū)間中，山梨醇的濃度在3％和7％(w/v)之間是必需的。所產(chǎn)生的數(shù)據(jù)表明山梨醇的最佳濃度為約6％，這導(dǎo)致相當(dāng)高的滲透壓值。由于山梨醇一定程度的減少不影響所述抗體的穩(wěn)定性，因此山梨醇濃度可以降低至5％以達(dá)到約400mOsmol/kg的滲透壓，由此增加患者的方便性?；谒a(chǎn)生的數(shù)據(jù)，將組氨酸的最佳濃度設(shè)定為30mM。通過(guò)SE-HPLC測(cè)量，在組氨酸濃度范圍在10mM和50mM之間時(shí)，沒(méi)有檢測(cè)到其對(duì)聚集或片段化有影響。所述抗體的聚集主要取決于濃度?？贵w濃度的增加導(dǎo)致在凍/融期間和加速的溫度應(yīng)激條件下聚集水平較高和澄清度值增加。此外，pH值影響抗體的單體含量。鑒于pH<6下的加速應(yīng)激導(dǎo)致抗體片段化增多，在凍/融期間的穩(wěn)定性不受影響，相反觀察到了稍好的穩(wěn)定性。在pH>6的pH值下，針對(duì)加速溫度和凍/融處理兩者，可以使用SE-HPLC和澄清度分析來(lái)測(cè)量單體含量的減少。為了抵消相反的效果，pH5.8似乎最適合于所述抗體制劑。得到具有以下參數(shù)的制劑：此組合物的條件或參數(shù)也可以適用于具有更高抗體濃度的組合物，如以下實(shí)施例所示。實(shí)施例12：穩(wěn)定性研究長(zhǎng)期研究此研究被設(shè)計(jì)用于長(zhǎng)達(dá)60個(gè)月的測(cè)試期。在此期間，抗體樣品在5℃±3℃下儲(chǔ)存在DINR2玻璃小瓶中。此外，25℃±2℃下的加速研究和40℃±2℃下的應(yīng)激研究在DINR2玻璃小瓶中進(jìn)行分別長(zhǎng)達(dá)12個(gè)月和6個(gè)月。使用濃度為106mg/ml和145mg/ml的抗體，在含30mM組氨酸單鹽酸鹽和5％(w/v)山梨醇的制劑中在pH5.8下進(jìn)行測(cè)試。測(cè)量以下參數(shù)：pH，滲透壓，濃度(OD280)，單體、聚集體和片段的百分比(通過(guò)SE-HPLC)，效力(基于細(xì)胞分析)。結(jié)果在以下表3-8中示出。表3：+5℃±3℃下的穩(wěn)定性測(cè)試(106mg/ml抗體)表4：+5℃±3℃下的穩(wěn)定性測(cè)試(145mg/ml抗體)表5：+25℃±2℃下的穩(wěn)定性測(cè)試(106mg/ml抗體)表6：+25℃±2℃下的穩(wěn)定性測(cè)試(145mg/ml抗體)表7：+40℃±2℃下的穩(wěn)定性測(cè)試(106mg/ml抗體)表8：+40℃±2℃下的穩(wěn)定性測(cè)試(145mg/ml抗體)加速/應(yīng)激研究為了證明藥物物質(zhì)的可比性，因此，抗體增長(zhǎng)后，使用兩批在30mM組氨酸、5％山梨醇、pH5.8的溶液中配制的抗體濃度為165mg/ml和171mg/ml的藥物物質(zhì)，在加速(25℃)和應(yīng)激(40℃)條件下進(jìn)行穩(wěn)定性研究。測(cè)量了以下參數(shù)：pH，滲透壓，濃度(OD280)，單體、聚集體和片段的百分比(通過(guò)SE-HPLC)，效力(基于細(xì)胞分析)?？贵w濃度為171mg/ml的結(jié)果在以下表9和10中示出。表9：+25℃±2℃下的穩(wěn)定性測(cè)試(171mg/ml抗體)表10：+40℃±2℃下的穩(wěn)定性測(cè)試(171mg/ml抗體)凍/融研究測(cè)試在30mM組氨酸(pH5.8)、5％山梨醇的溶液中配制的濃度為106mg/ml和145mg/ml的抗體的凍/融穩(wěn)定性。所述抗體在-80℃±10℃下冷凍至少過(guò)夜。在室溫下進(jìn)行融化≥6小時(shí)。進(jìn)行0、1、3、5、7和10個(gè)凍/融循環(huán)。測(cè)量了以下參數(shù)：pH，滲透壓，濃度(OD280)，單體、聚集體和片段的百分比(通過(guò)SE-HPLC)，效力(基于細(xì)胞分析)。結(jié)果在以下表11和12中示出。表11：-80℃±10℃下的凍/融穩(wěn)定性測(cè)試(106mg/ml抗體)表12：-80℃±10℃下的凍/融穩(wěn)定性測(cè)試(145mg/ml抗體)結(jié)果和結(jié)論針對(duì)30mM組氨酸、5％山梨醇(pH5.8)的制劑中為約106mg/ml和約145mg/ml的抗體濃度，進(jìn)行了長(zhǎng)達(dá)60個(gè)月的長(zhǎng)期穩(wěn)定性研究，包括在加速和應(yīng)激條件下。在加速和應(yīng)激條件下，針對(duì)在30mM組氨酸、5％山梨醇(pH5.8)中高達(dá)約171mg/ml的抗體濃度進(jìn)行另外的穩(wěn)定性研究。在60個(gè)月期間，在+5℃±3℃下儲(chǔ)存的兩種濃度的樣品顯示出小于2％的聚集，并且與參照相比具有相同的效力。在加速條件(+25℃±2℃)下儲(chǔ)存12個(gè)月后，兩種濃度(106mg/ml和145mg/ml)均顯示出小于2％的聚集，并且與參照相比具有相同的效力。在應(yīng)激條件(+40℃±2℃)下儲(chǔ)存6個(gè)月后，兩種濃度均顯示出小于5％的聚集，并且與參照相比具有大致相同的效力。另外的加速/應(yīng)激研究的數(shù)據(jù)顯示在25℃和40℃下分別有3個(gè)月和1個(gè)月的穩(wěn)定性。這表明，可以預(yù)期2-8℃下的穩(wěn)定性與如上所述106mg/ml和145mg/ml的抗體濃度所獲得的穩(wěn)定性相當(dāng)。此外，30mM組氨酸、5％山梨醇、pH5.8中的抗體在兩個(gè)測(cè)試抗體濃度約106mg/ml和約145mg/ml下，在至少10個(gè)-80℃±10℃的凍/融循環(huán)期間是穩(wěn)定的。實(shí)施例13：粘度評(píng)價(jià)使用流變儀測(cè)定在30mM組氨酸(pH5.8)和5％山梨醇溶液中所配制的濃度為150mg/ml的抗體的粘度。流變儀用于不能通過(guò)單一粘度值定義而因此需要比粘度計(jì)設(shè)置并測(cè)量更多參數(shù)的那些流體。對(duì)于一些流體而言，粘度在剪切速率很寬的范圍內(nèi)是恒定的(牛頓流體)。不具有恒定粘度的流體(非牛頓流體)不能由單一數(shù)值描述。非牛頓流體顯現(xiàn)出剪切應(yīng)力和剪切速率之間各種不同的相關(guān)性。因此，對(duì)于非牛頓流體，粘度取決于溫度以及剪切速率。在給定溫度和給定剪切速率[1/sec]下，粘度以毫帕斯卡*秒(mPas*s)表示。在20℃的溫度和約50和約1000[1/sec]之間的剪切速率下，含約150mg/ml抗體的制劑的粘度低于12mPas*s。在5℃的溫度和約50和約1000[1/sec]之間的剪切速率下，含約150mg/ml抗體的制劑的粘度低于20mPas*s。實(shí)施例14：攪拌/剪切應(yīng)力下的穩(wěn)定性用0、0.01、0.05、0.1％的吐溫20制備含5％山梨醇、30mM組氨酸、pH5.8的抗體濃度為80mg/mL的制劑，并用0、0.01、0.05、0.1和0.15％的吐溫20(20)(PS20)制備含5％山梨醇、30mM組氨酸(pH5.8)的蛋白質(zhì)濃度為150mg/mL的制劑。這些制劑在剪切室或混合器中攪拌長(zhǎng)達(dá)24小時(shí)，并在0、4、8和24小時(shí)時(shí)通過(guò)MFI測(cè)量亞可見顆粒。與不含吐溫的制劑相比，添加至少0.01％的20降低了亞可見顆粒形成的速率。用0、0.01、0.05、0.1％的80(PS80)制備含5％山梨醇、30mM組氨酸(pH5.8)的抗體濃度為150mg/mL的制劑，并用0、0.01、0.05、0.1和0.15％的80制備含5％山梨醇、30mM組氨酸(pH5.8)的蛋白質(zhì)濃度為150mg/mL的制劑。將這些制劑在剪切室或混合器中攪拌長(zhǎng)達(dá)8小時(shí)，并在0、4、6和8小時(shí)時(shí)通過(guò)MFI測(cè)量亞可見顆粒。與不含的制劑相比，添加至少0.01％的80降低了亞可見顆粒形成的速率。圖3-6示出了(作為每ml顆粒數(shù)乘以稀釋系數(shù))針對(duì)在添加了20或80(％w/v)的30mM組氨酸、5％山梨醇、pH5.8中的80mg/mL和150mg/mL蛋白質(zhì)(抗體)進(jìn)行的附加測(cè)試的初步結(jié)果。對(duì)這些制劑進(jìn)行剪切/攪拌以檢查其在溶液中形成亞可見顆粒的傾向，發(fā)現(xiàn)表面活性劑減少了亞可見顆粒的形成。因此，在制造和儲(chǔ)存期間需要表面活性劑來(lái)防止亞可見顆粒的形成，或減少亞可見顆粒的形成。實(shí)施例15：表面活性劑相互作用的評(píng)價(jià)進(jìn)行表面張力測(cè)量以表征20和80與在5％山梨醇、30mM組氨酸、pH5.8中的80mg/mL和150mg/mL蛋白質(zhì)的相互作用。得到類似于圖7的表面張力曲線。測(cè)定了臨界聚集濃度(CAC)，其是表面活性劑開始與蛋白質(zhì)相互作用的濃度。此外，還測(cè)定了臨界膠束濃度——表面活性劑膠束形成的濃度，其表明與蛋白質(zhì)的相互作用處于平衡。表13總結(jié)了這些結(jié)果。對(duì)于兩種濃度，20和80以相似的CAC表面活性劑:蛋白質(zhì)摩爾比與蛋白質(zhì)發(fā)生相似相互作用。CMC在較高的蛋白質(zhì)濃度下較高，但對(duì)于表面活性劑:蛋白質(zhì)摩爾比，其在兩種蛋白質(zhì)濃度下相似。20的CMC表面活性劑:蛋白質(zhì)摩爾比80低。從表面張力測(cè)量看，表面活性劑與蛋白質(zhì)相互作用的范圍是從CAC直至CMC。對(duì)于20，所述摩爾比范圍為大約0.004至2.6，而對(duì)于80，所述摩爾比范圍為大約0.003至3.3。蛋白質(zhì)制劑中表面活性劑的最佳水平高于CAC。表13.表面張力曲線數(shù)據(jù)的總結(jié)CAC＝臨界聚集濃度CMC＝臨界膠束濃度實(shí)施例16：凍融穩(wěn)定性在20(PS20)和80(PS80)濃度為0％、0.01％和0.1％的30mM組氨酸、5％山梨醇、pH5.8中的80mg/mL抗GM-CSF抗體制劑經(jīng)過(guò)10個(gè)凍融循環(huán)后通過(guò)MFI來(lái)表征。如圖8所示，對(duì)于不含表面活性劑的制劑而言，≥10μm的顆粒隨凍融循環(huán)次數(shù)而明顯增加。從0.01％直至0.1％的20或80，顆粒沒(méi)有明顯增加。在20和80濃度為0％、0.05％和0.15％的30mM組氨酸、5％山梨醇、pH5.8中的150mg/mL抗GM-CSF抗體制劑經(jīng)過(guò)10個(gè)凍融循環(huán)后通過(guò)MFI來(lái)表征。如圖9所示，對(duì)于不含表面活性劑的制劑中的一種，尺寸≥10μm的顆粒明顯增加。從0.05％直至0.15％的20或80，顆粒沒(méi)有明顯增加。實(shí)施例17：加速穩(wěn)定性在20(PS20)和80(PS80)濃度為0％、0.05％和0.1％的30mM組氨酸、5％山梨醇、pH5.8中的80mg/mL抗GM-CSF抗體制劑，在40℃下加速穩(wěn)定1周。所述樣品通過(guò)MFI(表14)和SE-HPLC(表15)進(jìn)行表征。如MFI所測(cè)量，≥10μm的顆粒濃度在40℃下1周沒(méi)有增長(zhǎng)。然而，如SE-HPLC所測(cè)量，多聚集體(HMW)增加。7天后，對(duì)于含有表面活性劑的制劑而言，HMW種類的量略高，但不顯著高于不含表面活性劑的制劑。此外，HMW濃度的增長(zhǎng)不依賴于表面活性劑的量或表面活性劑的兩種不同類型。表14：80mg/mL抗GM-CSF抗體、30mM組氨酸、5％山梨醇、pH5.8在40℃下經(jīng)過(guò)7天后顆粒濃度的增長(zhǎng)NA＝無(wú)法獲得表15：80mg/mL抗GM-CSF抗體、30mM組氨酸、5％山梨醇、pH5.8在40℃下經(jīng)過(guò)7天的SE-HPLC結(jié)果20(PS20)和80(PS80)濃度為0％、0.1％和0.15％的30mM組氨酸、5％山梨醇、pH5.8中的150mg/mL抗GM-CSF抗體的制劑，在40℃下加速穩(wěn)定1周。所述樣品通過(guò)MFI和SE-HPLC進(jìn)行表征。如MFI所測(cè)量，≥10μm的顆粒濃度在40℃下1周沒(méi)有增長(zhǎng)(表16)。然而，如SE-HPLC所測(cè)量(表17)，可溶性聚集體(HMW)增加。HMW種類的增加速率在150mg/mL抗體時(shí)高于80mg/mL的抗體，但其不受制劑中表面活性劑的量或表面活性劑的類型影響。與不含表面活性劑的制劑相比，通過(guò)添加表面活性劑，7天后HMW種類的量略有增加，但沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)上的顯著性。表16：150mg/mL抗GM-CSF抗體、30mM組氨酸、5％山梨醇、pH5.8在40℃下經(jīng)過(guò)7天的顆粒增長(zhǎng)表17：150mg/mL抗GM-CSF抗體、30mM組氨酸、5％山梨醇、pH5.8在40℃下經(jīng)過(guò)7天的SE-HPLC結(jié)果實(shí)施例18：載藥注射器中的穩(wěn)定性用來(lái)自3個(gè)不同制造商的具有不同的硅酮量、橡膠組分等的載藥注射器研究各種制劑的穩(wěn)定性。此外，研究了安慰劑制劑。將制劑置于2-8℃和25℃下長(zhǎng)達(dá)12個(gè)月。含有蛋白質(zhì)、抗體(Ab)的制劑通過(guò)視覺(jué)外觀、SE-HPLC、陽(yáng)離子交換層析和MFI進(jìn)行表征，而安慰劑制劑通過(guò)視覺(jué)外觀和MFI進(jìn)行表征。所研究的制劑在表18中示出。表18：用于穩(wěn)定性分析的載藥注射器的情況制劑#組合物注射器制造商1150mg/mLAb、30mM組氨酸、5％山梨醇、0.04％PS80A2150mg/mLAb、30mM組氨酸、5％山梨醇、0.04％PS80B3150mg/mLAb、30mM組氨酸、5％山梨醇、0.04％PS80C480mg/mLAb、30mM組氨酸、5％山梨醇、0.04％PS80A580mg/mLAb、30mM組氨酸、5％山梨醇、0.04％PS80B680mg/mLAb、30mM組氨酸、5％山梨醇、0.04％PS80C780mg/mLAb、30mM組氨酸、5％山梨醇、0.02％PS80A8150mg/mLAb、30mM組氨酸、5％山梨醇、0.02％PS80A930mM組氨酸、5％山梨醇、0.02％PS80A1030mM組氨酸、5％山梨醇、0.04％PS80A實(shí)施例19：載藥注射器中的穩(wěn)定性用來(lái)自3個(gè)不同制造商的、具有不同硅酮油量和橡膠配方用于針罩的載藥注射器，其均是用于皮下施用的典型注射器，來(lái)對(duì)含有不同抗體濃度和聚山梨醇酯量的各種制劑的穩(wěn)定性進(jìn)行研究。這3個(gè)注射器制造商均使用相同的塞/柱塞配方。所選擇的聚山梨醇酯的量高于CAC，并且處于表面張力曲線中相當(dāng)平坦的部分。此外，研究了安慰劑制劑。將制劑置于2-8℃和25℃下用于長(zhǎng)期取樣。含有蛋白質(zhì)的制劑通過(guò)視覺(jué)外觀、SE-HPLC、陽(yáng)離子交換層析和MFI進(jìn)行表征，而安慰劑制劑通過(guò)視覺(jué)外觀和MFI進(jìn)行表征。所研究的制劑在表19示出，結(jié)果在表20-26中示出。對(duì)于80mg/mL的抗體制劑，對(duì)所有制劑和注射器類型而言，視覺(jué)外觀是無(wú)色，無(wú)可見顆粒，并且不隨時(shí)間改變。對(duì)于150mg/mL的抗體制劑，對(duì)所有制劑和注射器類型而言，視覺(jué)外觀是淡黃色，無(wú)可見顆粒，并且不隨時(shí)間改變。150mg/mL制劑的通過(guò)SE-HPLC所得的聚集體增加速率高于80mg/mL，表面活性劑的量并不影響聚集的速率。所檢測(cè)的所有制劑和注射器類型的電荷分布隨時(shí)間的變化是相同的。表19：用于穩(wěn)定性分析的載藥注射器的情況表20：+5℃±3℃下儲(chǔ)存的載藥注射器制劑的SE-HPLC結(jié)果表21：+25℃/60％RH下儲(chǔ)存的載藥注射器制劑的SE-HPLC結(jié)果表22：+5℃±3℃下儲(chǔ)存的載藥注射器制劑的CEX結(jié)果表23：+25℃/60％RH下儲(chǔ)存的載藥注射器制劑的CEX結(jié)果表24：+5℃±3℃下儲(chǔ)存的載藥注射器制劑的注射力結(jié)果表25：+25℃/60％RH下儲(chǔ)存的載藥注射器制劑的注射力結(jié)果注射力結(jié)果顯示，對(duì)于所檢測(cè)的每種制劑和每個(gè)注射器，平均滑動(dòng)力為約4-11N。該力的范圍給出了提供本文所描述的制劑中的抗GM-CSF抗體用于手工使用和自動(dòng)注射器使用的可能性。表26：+5℃±3℃下儲(chǔ)存的載藥注射器制劑的MFI結(jié)果(顆粒/mL)NV—結(jié)果無(wú)效，因?yàn)榱鲃?dòng)池中存在氣泡，且無(wú)其他樣品可用。表27：+25℃/60％RH下儲(chǔ)存的載藥注射器制劑的MFI結(jié)果(顆粒/mL)NV—結(jié)果無(wú)效，因?yàn)榱鲃?dòng)池中存在氣泡，且無(wú)其他樣品可用。序列表<110>武田有限公司<120>包含GM-CSF中和化合物的液體制劑<130>1749<160>60<170>PatentInversion3.5<210>1<211>10<212>PRT<213>人工序列<220><223>CDR-H37A-701<400>1SerGlyLeuIleAlaAsnHisMetThrPro1510<210>2<211>10<212>PRT<213>人工序列<220><223>CDR-H37B1-502<400>2ThrThrLeuIleSerValTyrPheAspTyr1510<210>3<211>10<212>PRT<213>人工序列<220><223>CDR-H3L38-A1<400>3SerGlyLeuIlePheAspTyrTrpLeuAsp1510<210>4<211>10<212>PRT<213>人工序列<220><223>CDR-H3L38-A12<400>4SerGlyLeuIleIleAspAlaLeuSerPro1510<210>5<211>10<212>PRT<213>人工序列<220><223>CDR-H3L38-G7<400>5ThrSerLeuMetSerIleTyrPheAspTyr1510<210>6<211>10<212>PRT<213>人工序列<220><223>CDR-H3L39-D11<400>6SerGlyLeuLeuPheLeuTyrPheAspTyr1510<210>7<211>10<212>PRT<213>人工序列<220><223>CDR-H3E1-37-E7<400>7SerGlyLeuIleAsnLeuGlyMetHisPro1510<210>8<211>10<212>PRT<213>人工序列<220><223>CDR-H3M1_3-82<400>8SerGlyLeuIlePheAspAlaLeuArgAsp1510<210>9<211>10<212>PRT<213>人工序列<220><223>CDR-H3Ln4p-23<400>9SerGlyLeuIlePheAspLysLeuThrSer1510<210>10<211>10<212>PRT<213>人工序列<220><223>CDR-H3Ln4p-28<400>10SerGlyLeuIleAsnLeuHisPheAspThr1510<210>11<211>10<212>PRT<213>人工序列<220><223>CDR-H3Ln4p-50<400>11SerThrHisPheSerAlaTyrPheAspTyr1510<210>12<211>10<212>PRT<213>人工序列<220><223>CDR-H3Ln4p-65<400>12SerGlyLeuIleMetAspLysLeuAspAsn1510<210>13<211>10<212>PRT<213>人工序列<220><223>CDR-H3Ln4p-90<400>13SerGlyLeuIleIleAspAsnLeuAsnPro1510<210>14<211>5<212>PRT<213>人工序列<220><223>CDR-H17B1-502<400>14AspTyrLeuLeuHis15<210>15<211>17<212>PRT<213>人工序列<220><223>CDR-H27B1-502<400>15TrpLeuAsnProTyrSerGlyAspThrAsnTyrAlaGlnLysPheGln151015Gly<210>16<211>11<212>PRT<213>人工序列<220><223>CDR-L15-306<400>16ArgAlaSerGlnAsnIleArgAsnIleLeuAsn1510<210>17<211>7<212>PRT<213>人工序列<220><223>CDR-L25-306<400>17AlaAlaSerAsnLeuGlnSer15<210>18<211>9<212>PRT<213>人工序列<220><223>CDR-L35-306<400>18GlnGlnSerTyrSerMetProArgThr15<210>19<211>107<212>PRT<213>人工序列<220><223>VL5-306*L-version<400>19AspIleGlnMetThrGlnSerProSerSerValSerAlaSerValGly151015AspArgValThrIleAlaCysArgAlaSerGlnAsnIleArgAsnIle202530LeuAsnTrpTyrGlnGlnArgProGlyLysAlaProGlnLeuLeuIle354045TyrAlaAlaSerAsnLeuGlnSerGlyValProSerArgPheSerGly505560SerGlySerGlyThrAspPheThrLeuThrIleAsnSerLeuGlnPro65707580GluAspPheAlaThrTyrTyrCysGlnGlnSerTyrSerMetProArg859095ThrPheGlyGlyGlyThrLysLeuGluIleLys100105<210>20<211>119<212>PRT<213>人工序列<220><223>具有CDR-H3的VH=7A-701<400>20GluValGlnLeuLeuGluSerGlyAlaGluValLysLysProGlyAla151015SerValLysValSerCysLysAlaPheGlyTyrProPheThrAspTyr202530LeuLeuHisTrpValArgGlnAlaProGlyGlnGlyLeuGluTrpVal354045GlyTrpLeuAsnProTyrSerGlyAspThrAsnTyrAlaGlnLysPhe505560GlnGlyArgValThrMetThrArgAspThrSerIleSerThrAlaTyr65707580MetGluLeuSerArgLeuArgSerAspAspThrAlaValTyrTyrCys859095ThrArgSerGlyLeuIleAlaAsnHisMetThrProTrpGlyGlnGly100105110ThrMetValThrValSerSer115<210>21<211>119<212>PRT<213>人工序列<220><223>具有CDR-H3的VH=7B1-502*<400>21GlnValGlnLeuValGlnSerGlyAlaGluValLysLysProGlyAla151015SerValLysValSerCysLysAlaPheGlyTyrProPheThrAspTyr202530LeuLeuHisTrpValArgGlnAlaProGlyGlnGlyLeuGluTrpVal354045GlyTrpLeuAsnProTyrSerGlyAspThrAsnTyrAlaGlnLysPhe505560GlnGlyArgValThrMetThrArgAspThrSerIleSerThrAlaTyr65707580MetGluLeuSerArgLeuArgSerAspAspThrAlaValTyrTyrCys859095ThrArgThrThrLeuIleSerValTyrPheAspTyrTrpGlyGlnGly100105110ThrMetValThrValSerSer115<210>22<211>119<212>PRT<213>人工序列<220><223>具有CDR-H3的VH=3077*<400>22GlnValGlnLeuValGlnSerGlyAlaGluValLysLysProGlyAla151015SerValLysValSerCysLysAlaPheGlyTyrProPheThrAspTyr202530LeuLeuHisTrpValArgGlnAlaProGlyGlnGlyLeuGluTrpVal354045GlyTrpLeuAsnProTyrSerGlyAspThrAsnTyrAlaGlnLysPhe505560GlnGlyArgValThrMetThrArgAspThrSerIleSerThrAlaTyr65707580MetGluLeuSerArgLeuArgSerAspAspThrAlaValTyrTyrCys859095ThrArgSerGlyLeuIleAlaValTyrPheAspTyrTrpGlyGlnGly100105110ThrMetValThrValSerSer115<210>23<211>119<212>PRT<213>人工序列<220><223>具有CDR-H3的VH=L38-A1<400>23GluValGlnLeuLeuGluSerGlyAlaGluValLysLysProGlyAla151015SerValLysValSerCysLysAlaPheGlyTyrProPheThrAspTyr202530LeuLeuHisTrpValArgGlnAlaProGlyGlnGlyLeuGluTrpVal354045GlyTrpLeuAsnProTyrSerGlyAspThrAsnTyrAlaGlnLysPhe505560GlnGlyArgValThrMetThrArgAspThrSerIleSerThrAlaTyr65707580MetGluLeuSerArgLeuArgSerAspAspThrAlaValTyrTyrCys859095AlaArgSerGlyLeuIlePheAspTyrTrpLeuAspTrpGlyGlnGly100105110ThrMetValThrValSerSer115<210>24<211>119<212>PRT<213>人工序列<220><223>具有CDR-H3的VH=L38-A12<400>24GluValGlnLeuLeuGluSerGlyAlaGluValLysLysProGlyAla151015SerValLysValSerCysLysAlaPheGlyTyrProPheThrAspTyr202530LeuLeuHisTrpValArgGlnAlaProGlyGlnGlyLeuGluTrpVal354045GlyTrpLeuAsnProTyrSerGlyAspThrAsnTyrAlaGlnLysPhe505560GlnGlyArgValThrMetThrArgAspThrSerIleSerThrAlaTyr65707580MetGluLeuSerArgLeuArgSerAspAspThrAlaValTyrTyrCys859095AlaArgSerGlyLeuIleIleAspAlaLeuSerProTrpGlyGlnGly100105110ThrMetValThrValSerSer115<210>25<211>119<212>PRT<213>人工序列<220><223>具有CDR-H3的VH=L38-G7<400>25GluValGlnLeuLeuGluSerGlyAlaGluValLysLysProGlyAla151015SerValLysValSerCysLysAlaPheGlyTyrProPheThrAspTyr202530LeuLeuHisTrpValArgGlnAlaProGlyGlnGlyLeuGluTrpVal354045GlyTrpLeuAsnProTyrSerGlyAspThrAsnTyrAlaGlnLysPhe505560GlnGlyArgValThrMetThrArgAspThrSerIleSerThrAlaTyr65707580MetGluLeuSerArgLeuArgSerAspAspThrAlaValTyrTyrCys859095ThrArgThrSerLeuMetSerIleTyrPheAspTyrTrpGlyGlnGly100105110ThrMetValThrValSerSer115<210>26<211>119<212>PRT<213>人工序列<220><223>具有CDR-H3的VH=L39-D11<400>26GluValGlnLeuLeuGluSerGlyAlaGluValLysLysProGlyAla151015SerValLysValSerCysLysAlaPheGlyTyrProPheThrAspTyr202530LeuLeuHisTrpValArgGlnAlaProGlyGlnGlyLeuGluTrpVal354045GlyTrpLeuAsnProTyrSerGlyAspThrAsnTyrAlaGlnLysPhe505560GlnGlyArgValThrMetThrArgAspThrSerIleSerThrAlaTyr65707580MetGluLeuSerArgLeuArgSerAspAspThrAlaValTyrTyrCys859095ThrArgSerGlyLeuLeuPheLeuTyrPheAspTyrTrpGlyGlnGly100105110ThrMetValThrValSerSer115<210>27<211>119<212>PRT<213>人工序列<220><223>具有CDR-H3的VH=E1-37-E7<400>27GluValGlnLeuLeuGluSerGlyAlaGluValLysLysProGlyAla151015SerValLysValSerCysLysAlaPheGlyTyrProPheThrAspTyr202530LeuLeuHisTrpValArgGlnAlaProGlyGlnGlyLeuGluTrpVal354045GlyTrpLeuAsnProTyrSerGlyAspThrAsnTyrAlaGlnLysPhe505560GlnGlyArgValThrMetThrArgAspThrSerIleSerThrAlaTyr65707580MetGluLeuSerArgLeuArgSerAspAspThrAlaValTyrTyrCys859095AlaArgSerGlyLeuIleAsnLeuGlyMetHisProTrpGlyGlnGly100105110ThrMetValThrValSerSer115<210>28<211>119<212>PRT<213>人工序列<220><223>具有CDR-H3的VH=M1_3-82<400>28GluValGlnLeuLeuGluSerGlyAlaGluValLysLysProGlyAla151015SerValLysValSerCysLysAlaPheGlyTyrProPheThrAspTyr202530LeuLeuHisTrpValArgGlnAlaProGlyGlnGlyLeuGluTrpVal354045GlyTrpLeuAsnProTyrSerGlyAspThrAsnTyrAlaGlnLysPhe505560GlnGlyArgValThrMetThrArgAspThrSerIleSerThrAlaTyr65707580MetGluLeuSerArgLeuArgSerAspAspThrAlaValTyrTyrCys859095AlaArgSerGlyLeuIlePheAspAlaLeuArgAspTrpGlyGlnGly100105110ThrMetValThrValSerSer115<210>29<211>119<212>PRT<213>人工序列<220><223>具有CDR-H3的VH=Ln4p-23<400>29GluValGlnLeuLeuGluSerGlyAlaGluV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