CXCL-10抑制劑在制備治療和/或預(yù)防肺損傷的藥物中的用途技術(shù)領(lǐng)域本發(fā)明涉及CXCL-10抑制劑在制備治療和/或預(yù)防哺乳動(dòng)物包括人肺損傷的藥物中的用途。

背景技術(shù)：
CXCL-10（C–X-Cmotifchemokine10，CXC趨化因子10，GeneID:3627;Nucleotide:NM_001565.2;Protein:NP_001556.2）是一種重要的細(xì)胞趨化因子，又名干擾素γ誘導(dǎo)的蛋白10kDa（Interferonγ-inducedprotein10kDa，縮寫(xiě)為IP10）（術(shù)語(yǔ)CXCL-10和IP10在本發(fā)明中無(wú)差別的使用），微生物(如SARS冠狀病毒、流感病毒等)均可誘導(dǎo)肺泡巨噬細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和支氣管上皮細(xì)胞等表達(dá)CXCL-10。微生物同時(shí)還可以誘導(dǎo)NK細(xì)胞、中性粒細(xì)胞和單核巨噬細(xì)胞表面的CXCR3的表達(dá)量上調(diào)，而CXCL-10與其受體CXCR3的結(jié)合會(huì)產(chǎn)生強(qiáng)烈的趨化性，將這些細(xì)胞招募到肺部感染部位，殺傷被感染的細(xì)胞，防止病毒擴(kuò)散，同時(shí)合成和釋放IFN-γ、TNF-α、GM-CSF等，活化和募集更多的炎癥細(xì)胞，產(chǎn)生更多的促炎因子和炎性介質(zhì)，介導(dǎo)肺部的炎癥反應(yīng)。所以，微生物誘導(dǎo)的CXCL-10的長(zhǎng)期表達(dá)是感染誘導(dǎo)病理免疫的重要介質(zhì)。FabioMarra等人證明PI3K-Akt-p38信號(hào)通路在CXCL-10誘導(dǎo)的星形細(xì)胞的趨化作用中發(fā)揮重要作用。SARS冠狀病毒感染患者的血漿CXCL-10濃度在病人開(kāi)始出現(xiàn)發(fā)熱癥狀后的一個(gè)星期內(nèi)會(huì)明顯升高，而CXCL-10濃度的升高也與病人不良的預(yù)后密切相關(guān)；在哮喘的小鼠模型中，在其肺部過(guò)表達(dá)CXCL-10會(huì)導(dǎo)致呼吸道中嗜酸性粒細(xì)胞數(shù)目的增加，IL-4的含量升高，CD8+T細(xì)胞的招募增多，炎癥加重；CXCR3在哮喘病人呼吸道平滑肌當(dāng)中的肺肥大細(xì)胞表面是表達(dá)最豐富的趨化因子受體，而這些病人的支氣管平滑肌細(xì)胞中CXCL-10的表達(dá)量也明顯上調(diào)，從而招募肥大細(xì)胞到達(dá)肺部。急性肺損傷(acutelunginjury，ALI)是各種直接和間接致傷因素導(dǎo)致的肺泡上皮細(xì)胞及毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷，造成彌漫性肺間質(zhì)及肺泡水腫，導(dǎo)致急性低氧性呼吸功能不全。急性肺損傷以肺容積減少、肺順應(yīng)性降低、通氣/血流比例失調(diào)為病理生理特征，臨床上表現(xiàn)為進(jìn)行性低氧血癥和呼吸窘迫，肺部影像學(xué)上表現(xiàn)為非均一性的滲出性病變，其發(fā)展至嚴(yán)重階段（氧合指數(shù)<200）被稱(chēng)為急性呼吸窘迫綜合征。常見(jiàn)的導(dǎo)致急性肺損傷的因素分直接和間接肺損傷因素，直接肺損傷因素包括例如病毒、細(xì)菌和真菌導(dǎo)致的嚴(yán)重的肺部感染、胃內(nèi)容物誤吸、肺挫傷、氧中毒等；間接肺損傷因素包括例如膿毒癥、休克、大量輸血、體外循環(huán)及彌漫性血管內(nèi)凝血等。肺損傷在臨床上的表現(xiàn)為：（1）急性起病，在直接或間接肺損傷后12---48小時(shí)內(nèi)發(fā)?。唬?）常規(guī)吸氧后低氧血癥難以糾正；（3）肺部體征無(wú)特異性，急性期雙肺可聞及濕羅音或呼吸音減低；（4）早期病變以間質(zhì)性為主，X線(xiàn)胸片常無(wú)明顯改變，病情進(jìn)展后可出肺內(nèi)實(shí)變，表現(xiàn)為雙肺野普遍密度增高，透亮度減低，肺紋理增多+增粗，可見(jiàn)散在斑片狀密度增高陰影；（5）彌漫性肺浸潤(rùn)影，無(wú)心功能不全證據(jù)。肺損傷的臨床診斷標(biāo)準(zhǔn)為：（1）急性起??；（2）氧合指數(shù)（PaO2/FiO2）≤200mmHg（（1mmHg=0.133kPa，不管呼氣末正壓（PEEP）水平）；（3）正位X線(xiàn)胸片顯示雙肺均有斑片狀陰影；（4）肺動(dòng)脈嵌頓壓≤18mmHg，或無(wú)左心房壓力增高的臨床證據(jù)，如（PaO2/FiO2≤300mmHg且滿(mǎn)足上述其他標(biāo)準(zhǔn)，可診斷急性肺損傷。流感是一種影響人群極其廣泛的常見(jiàn)病、多發(fā)病，目前流感病毒跨物種感染形勢(shì)嚴(yán)峻，甲型H1N1流感病毒感染所導(dǎo)致的臨床癥狀，多數(shù)患者較輕，表現(xiàn)為典型的流感樣癥狀，可自然恢復(fù)。最常見(jiàn)癥狀包括咳嗽、發(fā)熱、咽喉痛、頭痛及其他不適感。嚴(yán)重肺炎患者x線(xiàn)胸片可見(jiàn)多發(fā)性病灶浸潤(rùn)，可快速進(jìn)展為ARDS、腎或多器官功能衰竭。甲型流感合并ARDS的發(fā)生率是普通流感的100倍，肺部損壞主要來(lái)源于失控的全身免疫反應(yīng)。與繼發(fā)于病毒性肺炎的ARDS一致，包括彌漫性肺泡損傷、細(xì)支氣管和血管周?chē)馨图?xì)胞浸潤(rùn)、增生的氣道改變和梗阻性細(xì)支氣管炎。臨床和病理學(xué)檢查均提示重癥患者病變主要在呼吸系統(tǒng)。病理學(xué)檢查可見(jiàn)重癥患者的肺部出現(xiàn)實(shí)變，常伴有出血、滲出、膿腫等病理改變。肺泡腔內(nèi)可見(jiàn)漿液性或纖維素性滲出，伴有不同程度的透明膜形成，提示有彌漫性的肺組織損傷。目前認(rèn)為，甲型H1N1流感病毒所致肺組織損傷基本病變和其他類(lèi)型的流感、SARS和人禽流感重癥病例的肺基本病變相似，均為輕重不等的彌漫性肺組織損傷。脂多糖（lipopolysaccharide，LPS）是一種水溶性的糖基化的脂質(zhì)復(fù)合物，是革蘭氏陰性菌外膜中的重要成分，由脂質(zhì)A、核心多糖和O抗原三部分組成。其中，革蘭氏陰性菌包括但不限于螺菌屬、彎菌屬、螺桿菌屬，假單胞菌屬、軍團(tuán)菌屬、奈瑟菌屬、莫拉菌屬產(chǎn)堿桿菌屬、布魯斯菌屬、羅卡利馬體屬、鮑特菌屬、弗郎西斯菌屬，埃希菌屬、志賀菌屬、沙門(mén)菌屬、克雷伯菌屬變形桿菌屬、普羅威登斯菌屬、耶爾森菌屬、弧菌屬、巴氏桿菌屬、嗜血桿菌屬，類(lèi)桿菌屬、梭桿菌屬，韋榮球菌屬，立克次體屬、考克斯體屬、衣原體屬，密螺旋體屬、疏螺旋體屬、鉤端螺旋體屬等革蘭氏陰性細(xì)菌。脂多糖分子量大于10000道爾頓，結(jié)構(gòu)復(fù)雜，脂質(zhì)A（LipidA）為構(gòu)成內(nèi)毒素活性的糖脂，以共價(jià)鍵連接到雜多糖鏈。人體對(duì)細(xì)菌內(nèi)毒素極為敏感，極微量（1-5納克/公斤體重）內(nèi)毒素就能引起體溫上升，發(fā)熱反應(yīng)持續(xù)約4小時(shí)后逐漸消退。自然感染時(shí)，因革蘭氏陰性菌不斷生長(zhǎng)繁殖，同時(shí)伴有陸續(xù)死亡、釋出內(nèi)毒素，故發(fā)熱反應(yīng)將持續(xù)至體內(nèi)病原菌完全消滅為止。內(nèi)毒素引起發(fā)熱反應(yīng)的原因是內(nèi)毒素作用于體內(nèi)的巨噬細(xì)胞等，使之產(chǎn)生白細(xì)胞介素1、白細(xì)胞介素6和腫瘤壞死因子α等細(xì)胞因子，這些細(xì)胞因子作用于宿主下丘腦的體溫調(diào)節(jié)中樞，促使體溫升高發(fā)熱。內(nèi)毒素血癥臨床癥狀主要取決于宿主對(duì)內(nèi)毒素的抵抗力，癥狀和體征有：發(fā)熱、白細(xì)胞數(shù)變化、出血傾向、心力衰竭、腎功能減退、肝臟損傷、神經(jīng)系統(tǒng)癥狀以及休克等。內(nèi)毒素可引起組胺、5-羥色胺、前列腺素、激肽等的釋放，導(dǎo)致微循環(huán)擴(kuò)張，靜脈回流血量減少，血壓下降，組織灌流不足，缺氧及酸中毒等。真菌也同樣可以感染肺組織并導(dǎo)致肺損傷，其主要表現(xiàn)為肺和支氣管的真菌性炎癥或相關(guān)病變，也可包括胸膜甚至縱膈。致病性真菌屬原發(fā)性病原菌，常導(dǎo)致免疫功能正常者的原發(fā)性外源性感染，主要有組織胞漿菌、球孢子菌、副球孢子菌、孢子絲菌等。條件致病性真菌或稱(chēng)機(jī)會(huì)性真菌，其病原性弱，多在易感宿主引起深部真菌感染，如念珠菌屬、曲霉屬、隱球菌屬、毛霉和青霉屬、根霉屬、鐮刀霉屬及肺孢子菌等。酵母多糖（zymosan）是從酵母細(xì)胞壁提取的大分子多糖復(fù)合物，由蛋白質(zhì)和碳水化合物組成。酵母屬于真菌，本發(fā)明中所述真菌包括但不限于子囊菌、擔(dān)子菌、壺菌、球囊菌、結(jié)核菌等。酵母多糖在實(shí)驗(yàn)中可用來(lái)誘導(dǎo)炎癥發(fā)生，其誘導(dǎo)的反應(yīng)主要包括炎癥細(xì)胞因子的表達(dá)，花生四烯酸的上調(diào)，部分蛋白的磷酸化和肌醇磷脂的形成。同時(shí)，酵母多糖還可以上調(diào)細(xì)胞周期蛋白D2的表達(dá)量，表明其在巨噬細(xì)胞活化和增殖的過(guò)程中也起到了作用。脂多糖和酵母多糖聯(lián)合感染可以模擬體內(nèi)由于敗血癥引起的急性肺損傷。敗血癥（septicemia）系指致病菌或條件致病菌侵入血循環(huán)，并在血中生長(zhǎng)繁殖，產(chǎn)生毒素而發(fā)生的急性全身性感染。敗血癥為急性肺損傷的易發(fā)因素之一，敗血癥性肺損傷的一個(gè)特征就是多形核中性粒細(xì)胞(PMN)在肺微血管內(nèi)的聚集和激活，引起一系列炎癥反應(yīng)過(guò)程和血管損傷。在這一過(guò)程中細(xì)菌感染，尤其是革蘭氏陰性菌感染可能是最初炎癥反應(yīng)的關(guān)鍵因素。革蘭氏陰性菌和脂多糖(LPS)進(jìn)入循環(huán)后產(chǎn)生脂多糖結(jié)合蛋白(LBP)，LBP與LPS的磷脂-A一部分結(jié)合，血漿中LPS-LBP復(fù)合物與單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和主要的中性粒細(xì)胞上的CD14受體結(jié)合，促使特定的炎性因子(如TNF-a、IL-1、IL-6）的編碼基因翻譯。細(xì)胞因子分泌到循環(huán)中是導(dǎo)致敗血癥和肺損傷的一系列炎癥反應(yīng)過(guò)程中重要的生化特征，如IL-1、IL-6、IL-8、IL-10、IL-12等，這些細(xì)胞因子引起一系列的級(jí)聯(lián)反應(yīng)，參與肺損傷的過(guò)程。因此，使用脂多糖和酵母多糖聯(lián)合感染可以模擬敗血癥性肺損傷。1975年Kohler和Milstein首先報(bào)道，用細(xì)胞雜交技術(shù)，使經(jīng)綿羊紅細(xì)胞(SRBC)免疫的小鼠的脾細(xì)胞與小鼠的骨髓瘤細(xì)胞融合，并由此創(chuàng)建了第一個(gè)B細(xì)胞雜交瘤細(xì)胞株，獲得了抗SRBC的單克隆抗體。單克隆抗體的特點(diǎn)在于理化性狀高度均一、生物活性單一、與抗原結(jié)合的特異性強(qiáng)、便于人為處理和質(zhì)量控制，并且來(lái)源容易。這些優(yōu)點(diǎn)使它一問(wèn)世就受到高度重視，并廣泛應(yīng)用于生物學(xué)和醫(yī)學(xué)研究領(lǐng)域。可將藥物等與單克隆抗體直接交聯(lián)，利用其導(dǎo)向作用，使藥物等定位于特異治療靶位，這不僅提高了療效，還可降低對(duì)正常細(xì)胞的毒性反應(yīng)。RNAi(RNAinterference)即RNA干涉，是近年來(lái)發(fā)現(xiàn)的在生物體內(nèi)普遍存在的一種古老的生物學(xué)現(xiàn)象，是由雙鏈RNA（dsRNA）介導(dǎo)的、由特定酶參與的特異性基因沉默現(xiàn)象，它在轉(zhuǎn)錄水平、轉(zhuǎn)錄后水平和翻譯水平上阻斷基因的表達(dá)。SmallinterferingRNA(siRNA，小干擾RNA)是一種小RNA分子（~21-25核苷酸），由Dicer（RNAaseⅢ家族中對(duì)雙鏈RNA具有特異性的酶）加工而成。siRNA是siRISC的主要成員，激發(fā)與之互補(bǔ)的目標(biāo)mRNA的沉默。RNA干涉（RNAi）在實(shí)驗(yàn)室中是一種強(qiáng)大的實(shí)驗(yàn)工具，利用具有同源性的雙鏈RNA（dsRNA）誘導(dǎo)序列特異的目標(biāo)基因的沉寂，迅速阻斷基因活性。siRNA在RNA沉寂通道中起中心作用，是對(duì)特定信使RNA（mRNA）進(jìn)行降解的指導(dǎo)要素。siRNA是RNAi途徑中的中間產(chǎn)物，是RNAi發(fā)揮效應(yīng)所必需的因子。RNAi最大以及最終的效果是細(xì)胞的代謝過(guò)程、生理生化系數(shù)等表型參數(shù)發(fā)生明顯的變化。近來(lái)RNAi成功用于構(gòu)建轉(zhuǎn)基因動(dòng)物模型的報(bào)道也日益增多，標(biāo)志著RNAi將成為研究基因功能不可或缺的工具。不僅如此，RNAi技術(shù)還將可能成為研究細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)通路與基因治療的新途徑。雖然截至目前已經(jīng)具有肺損傷特別是流感導(dǎo)致的肺損傷的治療藥物，但仍然存在對(duì)新類(lèi)型的肺損傷特別是流感導(dǎo)致的肺損傷的治療藥物的需求。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
因此，本發(fā)明的技術(shù)目的在于探究CXCL-10在肺損傷發(fā)生發(fā)展中的作用并探究CXCL-10的抑制劑在制備預(yù)防和/或治療肺損傷的藥物中的用途。因此，本發(fā)明的第一方面提供一種CXCL-10的抑制劑在制備治療和/或預(yù)防哺乳動(dòng)物包括人肺損傷的藥物中的用途，其中CXCL-10為CXCL-10蛋白或其核苷酸編碼序列，優(yōu)選地，所述哺乳動(dòng)物包括人肺損傷由流感病毒感染、細(xì)菌感染和/或真菌感染、敗血癥導(dǎo)致，優(yōu)選地，所述哺乳動(dòng)物包括人肺損傷包括、肺水腫、急性肺損傷和嚴(yán)重呼吸系統(tǒng)窘迫綜合癥。優(yōu)選地，所述流感病毒為甲型流感病毒；所述細(xì)菌為革蘭氏陰性菌；所述真菌選自酵母菌。優(yōu)選地，所述流感病毒為甲型H1、H3、H5、H7或H9亞型毒株。更優(yōu)選地，所述流感病毒為甲型H1亞型毒株。更優(yōu)選地，所述流感病毒為甲型H1N1流感病毒。最優(yōu)選地，所述流感病毒為甲型H1N1流感病毒BJ501株或PR8株。優(yōu)選地，所述細(xì)菌選自螺菌屬、彎菌屬、螺桿菌屬，假單胞菌屬、軍團(tuán)菌屬、奈瑟菌屬、莫拉菌屬產(chǎn)堿桿菌屬、布魯斯菌屬、羅卡利馬體屬、鮑特菌屬、弗郎西斯菌屬，埃希菌屬、志賀菌屬、沙門(mén)菌屬、克雷伯菌屬變形桿菌屬、普羅威登斯菌屬、耶爾森菌屬、弧菌屬、巴氏桿菌屬、嗜血桿菌屬，類(lèi)桿菌屬、梭桿菌屬，韋榮球菌屬，立克次體屬、考克斯體屬、衣原體屬，密螺旋體屬、疏螺旋體屬、鉤端螺旋體屬等革蘭氏陰性細(xì)菌的一種或多種。更優(yōu)選地，所述細(xì)菌選自大腸埃希氏菌。最優(yōu)選地，所述細(xì)菌選自大腸桿菌O111：B4。優(yōu)選地，所述真菌為釀酒酵母。優(yōu)選地，所述CXCL-10來(lái)源于哺乳動(dòng)物包括人。更優(yōu)選地，所述CXCL-10的GeneBank編號(hào)為GeneID:3627，核苷酸編碼序列如NM_001565.2所示，蛋白質(zhì)編碼序列如NP_001556.2所示。優(yōu)選地，所述CXCL-10的抑制劑選自特異性抗CXCL-10的抗體、siRNA或特異性抑制哺乳動(dòng)物包括人CXCL-10表達(dá)的化學(xué)生物物質(zhì)。優(yōu)選地，所述特異性抗CXCL-10的抗體選自特異性抗CXCL-10的多克隆抗體、單克隆抗體、嵌合抗體、表面重塑抗體、重構(gòu)抗體、全人源抗體或其抗原結(jié)合部分。更優(yōu)選地，所述特異性抗CXCL-10的抗體為特異性抗CXCL-10的單克隆抗體。優(yōu)選地，所述CXCL-10的抑制劑選自siRNA。更優(yōu)選地，所述siRNA的正義序列如SEQ.ID.NO.1:gauggccuucgauucuggaUU所示，反義序列如SEQ.ID.NO.2:UUguccagaaucgaaggccauc所示。優(yōu)選地，所述藥物的劑型為注射劑、噴霧劑、滴鼻劑、吸入劑、口服劑。本發(fā)明的第二方面涉及一種CXCL-10的抑制劑，其用做治療和/或預(yù)防哺乳動(dòng)物包括人肺損傷的藥物，其中CXCL-10為CXCL-10蛋白或其核苷酸編碼序列。優(yōu)選地，所述哺乳動(dòng)物包括人肺損傷由流感病毒感染、細(xì)菌感染和/或真菌感染、敗血癥導(dǎo)致。優(yōu)選地，所述流感病毒、細(xì)菌、真菌、所述CXCL-10或所述CXCL-10的抑制劑如本發(fā)明第一方面所述。本發(fā)明的第三方面涉及一種含有治療有效量的CXCL-10的抑制劑的組合物在制備治療和/或預(yù)防哺乳動(dòng)物包括人肺損傷的藥物中的用途，其中CXCL-10的抑制劑是所述組合物的活性成分，其中CXCL-10為CXCL-10蛋白或其核苷酸編碼序列。優(yōu)選地，所述哺乳動(dòng)物包括人肺損傷由流感病毒感染、細(xì)菌感染和/或真菌感染、敗血癥導(dǎo)致。優(yōu)選地，所述流感病毒、細(xì)菌、真菌、所述CXCL-10或所述CXCL-10的抑制劑如本發(fā)明第一方面所述。本發(fā)明的第四方面涉及一種治療和/或預(yù)防哺乳動(dòng)物包括人肺損傷的方法，其包括給予哺乳動(dòng)物包括人治療有效量的CXCL-10的抑制劑，其中CXCL-10為CXCL-10蛋白或其核苷酸編碼序列。優(yōu)選地，所述哺乳動(dòng)物包括人肺損傷由流感病毒感染、細(xì)菌感染和/或真菌感染、敗血癥導(dǎo)致。優(yōu)選地，所述流感病毒、細(xì)菌、真菌、所述CXCL-10或所述CXCL-10的抑制劑如本發(fā)明第一方面所述。換言之，本發(fā)明利用CXCL-10基因敲除小鼠和CXCL-10下游的PI3K基因敲除小鼠模型以及利用甲型H1N1流感病毒感染小鼠證明CXCL-10在甲型H1N1流感病毒BJ501株或PR8株感染導(dǎo)致的小鼠急性肺組織病理?yè)p傷、死亡的過(guò)程中發(fā)揮重要作用，針對(duì)CXCL-10分子的干預(yù)在治療肺損傷，特別是甲型H1N1流感病毒PR8株感染所導(dǎo)致的損傷中，有可能發(fā)揮重要作用。本發(fā)明利用特異性抗CXCL-10的單克隆抗體免疫野生型小鼠后再用甲型H1N1流感病毒感染所述小鼠，結(jié)果表明，抗CXCL-10抗體對(duì)小鼠在感染甲型H1N1流感病毒PR8株導(dǎo)致的急性肺組織病理?yè)p傷中發(fā)揮了重要保護(hù)作用。因此，本發(fā)明第一次證明了CXCL-10在甲型流感病理過(guò)程中發(fā)揮重要作用且特異性抑制CXCL-10的治療可以阻止或減緩甲型流感病毒感染所造成的嚴(yán)重后果。本發(fā)明還利用革蘭氏陰性菌的脂多糖和來(lái)自酵母菌的酵母多糖A聯(lián)合感染小鼠，發(fā)現(xiàn)針對(duì)CXCL-10分子的干預(yù)在治療來(lái)自革蘭氏陰性菌的脂多糖和來(lái)自釀酒酵母的酵母多糖A聯(lián)合感染所導(dǎo)致的損傷中有可能發(fā)揮重要作用。本發(fā)明利用特異性抗CXCL-10的單克隆抗體免疫野生型小鼠后再用來(lái)自大腸桿菌O111：B4的脂多糖和來(lái)自釀酒酵母的酵母多糖A聯(lián)合感染所述小鼠，結(jié)果表明，抗CXCL-10抗體對(duì)小鼠在感染來(lái)自大腸桿菌O111：B4的脂多糖和來(lái)自釀酒酵母的酵母多糖A的組合物導(dǎo)致的急性肺組織病理?yè)p傷中發(fā)揮了重要保護(hù)作用。因此，本發(fā)明第一次證明了特異性抑制CXCL-10的治療可以阻止或減緩由來(lái)自大腸桿菌O111：B4的脂多糖和來(lái)自釀酒酵母的酵母多糖A聯(lián)合感染所造成的嚴(yán)重后果。同時(shí)，本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知，當(dāng)證實(shí)CXCL-10在流感病毒感染導(dǎo)致的病理?yè)p傷、死亡等過(guò)程中發(fā)揮重要的促進(jìn)作用時(shí)，尤其是在用特異性抗CXCL-10的抗體中和掉受試者體內(nèi)的CXCL-10能保護(hù)受治者時(shí)，針對(duì)CXCL-10以消除或降低其影響的其他技術(shù)手段也能起到相同或類(lèi)似的作用。本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知，這樣的技術(shù)手段包括其他的特異性中和CXCL-10的抗體、特異性沉默CXCL-10表達(dá)的RNAi技術(shù)和本領(lǐng)域已知的其他能降低或消除CXCL-10表達(dá)的化學(xué)和/或生物物質(zhì)。特異性中和CXCL-10的抗體可以是利用CXCL-10免疫哺乳動(dòng)物后獲得的多克隆抗體、利用雜交瘤技術(shù)獲得的單克隆抗體、嵌合抗體、表面重塑抗體、重構(gòu)抗體、全人源抗體或其抗原結(jié)合部分，只要這樣的抗體或其部分保留了抗原結(jié)合能力并能中和所述抗原的活性。針對(duì)特定靶基因的siRNA的設(shè)計(jì)是本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的操作，這樣的序列可能在長(zhǎng)度和針對(duì)的靶序列的位置上各不相同，但必然能沉默掉CXCL-10基因的表達(dá)，這樣的siRNA的一個(gè)范例是正義序列如SEQ.ID.NO.1:gauggccuucgauucuggaUU所示，反義序列如SEQ.ID.NO.2:UUguccagaaucgaaggccauc所示的siRNA。同時(shí)，本領(lǐng)域技術(shù)人員也能利用本領(lǐng)域已知的能降低或沉默CXCL-10表達(dá)的其他化學(xué)物質(zhì)或利用本領(lǐng)域已知的技術(shù)篩選到的能降低或沉默CXCL-10表達(dá)的其他化學(xué)物質(zhì)來(lái)降低或沉默CXCL-10的表達(dá)，從而實(shí)現(xiàn)治療肺損傷，特別是甲流，更特別是甲型H1N1流感的目的。同樣地，包含治療有效量的本發(fā)明所述的CXCL-10抑制劑的組合物也能用于治療甲流，特別是甲型H1N1流感。所述組合物的活性成分是CXCL-10抑制劑，同時(shí)也可以包括其他的可以與所述的CXCL-10抑制劑起協(xié)同作用的活性成分。本發(fā)明的組合物還可以包括防腐劑、穩(wěn)定劑、緩沖劑等藥用物質(zhì)。附圖說(shuō)明圖1：C57BL/6小鼠分別感染病毒滴度為105.5TCID50的甲型H1N1流感病毒BJ501株和相同劑量的雞胚尿囊液后的CXCL-10蛋白在肺組織中的表達(dá)量。圖2：野生型C57BL/6小鼠（A圖）和CXCL-10基因敲除小鼠（B圖）感染TCID50為105.5的甲型H1N1流感病毒BJ501株后小鼠肺組織的組織病理檢測(cè)結(jié)果。圖3：野生型C57BL/6小鼠和CXCL-10基因敲除小鼠感染TCID50為105.5的甲型H1N1流感病毒BJ501株后小鼠肺組織的濕干比檢測(cè)結(jié)果。圖4：野生型C57BL/6小鼠和CXCL-10基因敲除小鼠感染TCID50為1.33×104的甲型H1N1流感病毒PR8株后小鼠的死亡率曲線(xiàn)。圖5：野生型C57BL/6小鼠和CXCL-10基因敲除小鼠感染TCID50為1.33×104的甲型H1N1流感病毒PR8株后小鼠的體重變化曲線(xiàn)。圖6：野生型C57BL/6小鼠（A圖）和CXCL-10基因敲除小鼠（B圖）感染TCID50為1.33×104的甲型H1N1流感病毒PR8株后小鼠肺組織的組織病理檢測(cè)結(jié)果。圖7：野生型C57BL/6小鼠和CXCL-10基因敲除小鼠感染TCID50為1.33×104的甲型H1N1流感病毒PR8株后小鼠肺組織的濕干比檢測(cè)結(jié)果。圖8：野生型C57BL/6小鼠和PI3K基因敲除小鼠感染TCID50為1.33×104的甲型H1N1流感病毒PR8株后小鼠的死亡率曲線(xiàn)。圖9：野生型C57BL/6小鼠和PI3K基因敲除小鼠感染TCID50為1.33×104的甲型H1N1流感病毒PR8株后小鼠的體重變化曲線(xiàn)。圖10：野生型C57BL/6小鼠和PI3K基因敲除小鼠感染TCID50為1.33×104的甲型H1N1流感病毒PR8株后小鼠肺組織的濕干比檢測(cè)結(jié)果。圖11：野生型C57BL/6小鼠經(jīng)靜脈注射PBS、抗體對(duì)照或抗CXCL-10單克隆抗體后，感染病毒滴度為1.33×104TCID50的甲型H1N1流感病毒PR8株后的死亡率曲線(xiàn)。圖12：野生型C57BL/6小鼠在靜脈注射了雞胚尿囊液、PBS、抗體對(duì)照、抗CXCL-10單克隆抗體后，感染甲型H1N1流感病毒PR8株后小鼠肺組織的濕干比測(cè)定結(jié)果。圖13A-D：野生型C57BL/6小鼠感染滴度為1.33×104TCID50的甲型H1N1流感病毒PR8株后，靜脈注射雞胚尿囊液、PBS、抗體對(duì)照和抗CXCL-10單克隆抗體后小鼠的肺組織病理檢測(cè)結(jié)果。圖14A-E：野生型C57BL/6小鼠感染來(lái)自大腸桿菌O111：B4的脂多糖并于1小時(shí)后再次感染來(lái)自釀酒酵母的酵母多糖A或相同時(shí)間點(diǎn)給予溶劑對(duì)照后，分別在感染前12小時(shí)，感染前1小時(shí)，感染后8小時(shí)靜脈給予抗CXCL-10抗體或?qū)φ湛贵w。在感染第24小時(shí)后，取小鼠肺組織進(jìn)行肺組織病理檢測(cè)。每組4只小鼠。具體實(shí)施方式下面將通過(guò)下述非限制性實(shí)施例進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，本領(lǐng)域技術(shù)人員公知，在不背離本發(fā)明精神的情況下，可以對(duì)本發(fā)明做出許多修改，這樣的修改也落入本發(fā)明的范圍。下述實(shí)驗(yàn)方法如無(wú)特別說(shuō)明，均為常規(guī)方法，所使用的實(shí)驗(yàn)材料如無(wú)特別說(shuō)明，均可容易地從商業(yè)公司獲取。實(shí)施例實(shí)施例1甲型H1N1流感病毒BJ501株感染引起小鼠肺組織CXCL-10蛋白表達(dá)升高實(shí)驗(yàn)材料：1)主要實(shí)驗(yàn)儀器：三級(jí)生物安全實(shí)驗(yàn)室、三級(jí)生物安全柜、動(dòng)物飼養(yǎng)柜、小鼠飼養(yǎng)籠、小動(dòng)物手術(shù)器械、無(wú)菌注射器、移液器、移液管、Bio-PlexMouseCytokine23-PlexArray試劑盒等。2)主要實(shí)驗(yàn)試劑：1%（W/V）戊巴比妥鈉溶液、病毒稀釋液、消毒劑（2.5%碘酒和75%酒精）等。3)病毒：甲型H1N1流感病毒BJ501株http://www.ncbi.nlm.nih.gov/Taxonomy/Browser/wwwtax.cgi?mode=Info&id=648856&lvl=3&keep=1&srchmode=1&unlock&lin=s。4)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：SPF級(jí)野生型(WT)C57BL/6小鼠（4周齡）：購(gòu)于軍科院動(dòng)物所，CXCL-10基因敲除小鼠（B6背景，購(gòu)自美國(guó)JacksonLaboratory，貨號(hào)是006087）。實(shí)驗(yàn)方法：1)分組：雞胚尿囊液對(duì)照組、BJ501病毒實(shí)驗(yàn)組；2)安全固定小鼠，用1mL無(wú)菌注射器腹腔注射1%（W/V）戊巴比妥鈉溶液麻醉；3)保持麻醉小鼠頭部向上向后傾斜姿勢(shì)，使其鼻腔向上，便于病毒穩(wěn)定進(jìn)入呼吸道。用移液管每側(cè)鼻孔各滴入10μL甲型H1N1流感病毒BJ501株病毒液（滴度為105TCID50）感染，感染病毒滴度為105.5TCID50/只，每組感染4只小鼠；4)保持小鼠此體位15秒，使病毒進(jìn)入呼吸道。將小鼠置于鼠籠內(nèi)，待其恢復(fù)清醒后，給予水及食物；5)肺灌洗液炎癥因子測(cè)定實(shí)驗(yàn)于染病毒后24小時(shí)后進(jìn)行，用腹腔注射過(guò)量麻醉劑的方法使小鼠死亡；6)將小鼠固定于小動(dòng)物手術(shù)臺(tái)，移除胸部皮膚及骨骼，將氣管剪一小口，利用1毫升移液槍從開(kāi)口處向小鼠注射800微升PBS緩沖液，反復(fù)吸取三次后將肺灌洗液吸出；7)利用Bio-PlexMouseCytokine23-Plex試劑盒對(duì)肺灌洗液進(jìn)行CXCL-10蛋白表達(dá)量的測(cè)定；8)利用GraphPadPrism5軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析處理。實(shí)驗(yàn)結(jié)果：如圖1所示，感染滴度為105.5TCID50/只的BJ501株甲型H1N1流感病毒的小鼠肺組織CXCL-10蛋白的表達(dá)量顯著高于對(duì)照組。*P<0.05。此結(jié)果說(shuō)明，CXCL-10在甲型H1N1流感病毒BJ501株感染導(dǎo)致小鼠死亡的過(guò)程中發(fā)揮重要作用，針對(duì)CXCL-10分子的干預(yù)在治療甲型H1N1流感病毒BJ501株感染所導(dǎo)致的損傷中，有可能發(fā)揮重要作用。實(shí)施例2CXCL-10-缺陷小鼠中甲型H1N1流感病毒BJ501株感染引起的急性肺損傷得以減輕實(shí)驗(yàn)材料：1)主要實(shí)驗(yàn)儀器：三級(jí)生物安全實(shí)驗(yàn)室、三級(jí)生物安全柜、動(dòng)物飼養(yǎng)柜、小鼠飼養(yǎng)籠、小動(dòng)物手術(shù)器械、無(wú)菌注射器、移液器、移液管等。2)主要實(shí)驗(yàn)試劑：1%（W/V）戊巴比妥鈉溶液、病毒稀釋液、消毒劑（2.5%碘酒和75%酒精）等。3)病毒：甲型H1N1流感病毒BJ501株http://www.ncbi.nlm.nih.gov/Taxonomy/Browser/wwwtax.cgi?mode=Info&id=648856&lvl=3&keep=1&srchmode=1&unlock&lin=s。4)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：SPF級(jí)野生型(WT)C57BL/6小鼠（4周齡）：購(gòu)于軍科院動(dòng)物所，CXCL-10基因敲除小鼠（B6背景，購(gòu)自美國(guó)JacksonLaboratory，貨號(hào)是006087）。實(shí)驗(yàn)方法：1)分組：野生型對(duì)照組、CXCL-10基因敲出小鼠實(shí)驗(yàn)組；2)安全固定小鼠，用1mL無(wú)菌注射器腹腔注射1%（W/V）戊巴比妥鈉溶液麻醉；3)保持麻醉小鼠頭部向上向后傾斜姿勢(shì)，使其鼻腔向上，便于病毒穩(wěn)定進(jìn)入呼吸道。用移液管每側(cè)鼻孔各滴入10μL甲型H1N1流感病毒BJ501株病毒液（滴度為105TCID50）感染，感染病毒滴度為105.5TCID50/只，每組感染10只小鼠；4)保持小鼠此體位15秒，使病毒進(jìn)入呼吸道。將小鼠置于鼠籠內(nèi)，待其恢復(fù)清醒后，給予水及食物；5)肺組織病理切片實(shí)驗(yàn)于感染病毒后第5d進(jìn)行，用腹腔注射過(guò)量麻醉劑的方法使小鼠死亡；6)將小鼠固定于小動(dòng)物手術(shù)臺(tái)，移除胸部皮膚及骨骼，暴露胸腔，將小鼠肺臟連同心臟同時(shí)取出，用無(wú)菌PBS洗去表面血液，置于多聚甲醛固定液中室溫固定48h；7)固定后的樣品由病理實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行包埋、切片、HE染色等處理；8)病理切片置于顯微鏡下觀(guān)察，并記錄；9)肺組織濕干比實(shí)驗(yàn)于感染病毒后第5d進(jìn)行，用腹腔注射過(guò)量麻醉劑的方法使小鼠死亡；10)將小鼠固定于小動(dòng)物手術(shù)臺(tái)，移除胸部皮膚及骨骼，暴露胸腔，將小鼠完整肺臟取出，去除表面血液及多余結(jié)締組織，稱(chēng)量并記錄肺臟濕重；11)肺臟置于55℃高溫組織干燥器中干烤，24h后取出，待溫度降至室溫進(jìn)行肺臟干重的稱(chēng)量并記錄；12)計(jì)算小鼠肺臟濕重/干重比值(Wet/dryratio)，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。實(shí)驗(yàn)結(jié)果：圖2中（×200倍，HE染色）病理照片顯示：感染滴度為105.5TCID50的甲型H1N1流感病毒BJ501株后，野生型C57BL/6小鼠肺組織中出現(xiàn)嚴(yán)重的病理?yè)p傷（圖2的A圖）。肺組織正常結(jié)構(gòu)被破壞，肺組織紋理紊亂，伴隨出血、炎性滲出及大量紅細(xì)胞、炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)等病理?yè)p傷。但是，感染相同滴度病毒的CXCL-10基因敲除小鼠肺組織未見(jiàn)顯著病理?yè)p傷，無(wú)顯著的出血、滲出或者炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)等病理變化，肺組織紋理清晰，結(jié)構(gòu)完整（圖2的B圖）。上述結(jié)果說(shuō)明，CXCL-10對(duì)小鼠在感染甲型H1N1流感病毒BJ501株導(dǎo)致的急性肺組織病理?yè)p傷中發(fā)揮了重要作用。檢測(cè)小鼠肺臟濕干比可以反映小鼠發(fā)生急性肺水腫的程度。從圖3中也可見(jiàn)，4周齡野生型小鼠在感染甲型H1N1流感病毒BJ501后，其肺臟濕干比相比CXCL-10基因敲除小鼠顯著降低，說(shuō)明CXCL-10的敲除可以顯著緩解甲型H1N1流感病毒BJ501株感染后小鼠的肺臟水腫。*P<0.05。此結(jié)果進(jìn)一步說(shuō)明，CXCL-10分子在甲型H1N1流感病毒BJ501株感染導(dǎo)致小鼠發(fā)生急性肺組織損傷的病理過(guò)程中發(fā)揮了重要作用。實(shí)施例3CXCL-10-缺陷小鼠中甲型H1N1流感病毒PR8株感染引起的急性肺損傷得以減輕本實(shí)施例實(shí)驗(yàn)材料和實(shí)驗(yàn)方法等同實(shí)施例2基本相同，實(shí)驗(yàn)材料區(qū)別在于含有甲型H1N1流感病毒PR8株，不含有甲型H1N1流感病毒BJ501株，實(shí)驗(yàn)方法區(qū)別在于使用甲型H1N1流感病毒PR8株代替甲型H1N1流感病毒BJ501株進(jìn)行感染，感染前和感染后每天都記錄每組小鼠死亡/存活只數(shù)以及體重變化情況，連續(xù)觀(guān)察14d，24h內(nèi)發(fā)生死亡的小鼠為非特異性死亡，在進(jìn)行死亡率統(tǒng)計(jì)時(shí)不予計(jì)算在內(nèi)，用GraphPadPrism5軟件統(tǒng)計(jì)小鼠死亡率及體重變化情況。實(shí)驗(yàn)結(jié)果：野生型C57BL/6小鼠和CXCL-10基因敲除小鼠感染病毒滴度為1.33×104的甲型H1N1流感病毒PR8株后的死亡率結(jié)果以及體重變化結(jié)果，如圖4、圖5所示。感染相同滴度的PR8株甲型H1N1流感病毒后，野生型C57BL/6小鼠死亡率明顯高于CXCL-10基因敲除小鼠（圖4）。*P<0.05。體重變化（降低）結(jié)果與死亡率結(jié)果一致（圖5）。***P<0.001此結(jié)果說(shuō)明，CXCL-10在甲型H1N1流感病毒PR8株感染導(dǎo)致小鼠死亡的過(guò)程中發(fā)揮重要作用，針對(duì)CXCL-10分子的干預(yù)在治療甲型H1N1流感病毒PR8株感染所導(dǎo)致的損傷中，有可能發(fā)揮重要作用。圖6中（×200倍，HE染色）病理照片顯示：感染滴度為1.33×104TCID50的甲型H1N1流感病毒PR8株后，野生型C57BL/6小鼠肺組織中出現(xiàn)嚴(yán)重的病理?yè)p傷（圖6的A圖）。肺組織正常結(jié)構(gòu)被破壞，肺組織紋理紊亂，伴隨出血、炎性滲出及大量紅細(xì)胞、炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)等病理?yè)p傷。但是，感染相同滴度病毒的CXCL-10基因敲除小鼠肺組織未見(jiàn)顯著病理?yè)p傷，無(wú)顯著的出血、滲出或者炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)等病理變化，肺組織紋理清晰，結(jié)構(gòu)完整（圖6的B圖）。上述結(jié)果說(shuō)明，CXCL-10對(duì)小鼠在感染甲型H1N1流感病毒PR8株導(dǎo)致的急性肺組織病理?yè)p傷中發(fā)揮了重要作用。檢測(cè)小鼠肺臟濕干比可以反映小鼠發(fā)生急性肺水腫的程度。從圖7中也可見(jiàn)，4周齡野生型小鼠在感染甲型H1N1流感病毒PR8后，其肺臟濕干比相比CXCL-10基因敲除小鼠顯著降低，說(shuō)明CXCL-10的敲除可以極顯著緩解甲型H1N1流感病毒PR8株感染后小鼠的肺臟水腫。***P<0.001。此結(jié)果進(jìn)一步說(shuō)明，CXCL-10分子在甲型H1N1流感病毒PR8株感染導(dǎo)致小鼠發(fā)生急性肺組織損傷的病理過(guò)程中發(fā)揮了重要作用。實(shí)施例4PI3K-缺陷小鼠中甲型H1N1流感病毒PR8株感染引起的急性肺損傷得以減輕本實(shí)施例實(shí)驗(yàn)材料和實(shí)驗(yàn)方法等同實(shí)施例3基本相同，實(shí)驗(yàn)材料區(qū)別在于含有PI3K-缺陷小鼠（獲自?shī)W地利科學(xué)院分子生物技術(shù)研究所（InstituteofMolecularBiotechnologyoftheAustrianAcademyofSciences）），不含有CXCL-10-缺陷小鼠，實(shí)驗(yàn)方法區(qū)別在于使用甲型H1N1流感病毒PR8株感染PI3K-缺陷小鼠。野生型C57BL/6小鼠和PI3K基因敲除小鼠感染病毒滴度為1.33×104的甲型H1N1流感病毒PR8株后的死亡率結(jié)果以及體重變化結(jié)果，如圖8、圖9所示。感染相同滴度的PR8株甲型H1N1流感病毒后，野生型C57BL/6小鼠死亡率明顯高于PI3K基因敲除小鼠（圖8）。**P<0.01。體重變化（降低）結(jié)果與死亡率結(jié)果一致（圖9）。***P<0.001。此結(jié)果說(shuō)明，PI3K在甲型H1N1流感病毒PR8株感染導(dǎo)致小鼠死亡的過(guò)程中發(fā)揮重要作用。檢測(cè)小鼠肺臟濕干比可以反映小鼠發(fā)生急性肺水腫的程度。從圖10中也可見(jiàn)，4周齡野生型小鼠在感染甲型H1N1流感病毒PR8后，其肺臟濕干比相比PI3K基因敲除小鼠顯著降低，說(shuō)明PI3K的敲除可以顯著緩解甲型H1N1流感病毒PR8株感染后小鼠的肺臟水腫。*P<0.05。PI3K-Akt-p38通路已被證實(shí)位于CXCL-10下游，在CXCL-10誘導(dǎo)的趨化性中發(fā)揮重要作用，此結(jié)果進(jìn)一步證明CXCL-10分子在甲型H1N1流感病毒PR8株感染導(dǎo)致小鼠發(fā)生急性肺組織損傷的病理過(guò)程中發(fā)揮了重要作用。實(shí)施例5抗CXCL-10單克隆抗體可以使甲型H1N1流感病毒PR8株感染引起的急性肺損傷得以減輕實(shí)驗(yàn)材料：1)主要實(shí)驗(yàn)儀器：三級(jí)生物安全實(shí)驗(yàn)室、三級(jí)生物安全柜、動(dòng)物飼養(yǎng)柜、小鼠飼養(yǎng)籠、小動(dòng)物手術(shù)器械、無(wú)菌注射器、移液器、移液管等。2)主要實(shí)驗(yàn)試劑：1%（W/V）戊巴比妥鈉溶液、病毒稀釋液、消毒劑（2.5%碘酒和75%酒精）等。3)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：SPF級(jí)野生型(WT)C57BL/6小鼠（4周齡）：購(gòu)于軍科院動(dòng)物所。實(shí)驗(yàn)方法：1)分組：病毒溶劑（雞胚尿囊液）對(duì)照組、抗體溶劑（PBS）對(duì)照組、同型抗體對(duì)照組和抗CXCL-10單克隆抗體治療組；2)感染前1天，給抗CXCL-10單克隆抗體治療組的小鼠靜脈注射0.5mg/ml的抗CXCL-10單克隆抗體100ul，給同型抗體對(duì)照組和抗體溶劑對(duì)照組分別注射相同劑量的同型對(duì)照抗體和PBS。3)安全固定小鼠，用1mL無(wú)菌注射器腹腔注射1%（W/V）戊巴比妥鈉溶液麻醉；4)保持麻醉小鼠頭部向上向后傾斜姿勢(shì)，使其鼻腔向上，便于病毒穩(wěn)定進(jìn)入呼吸道。用移液管每側(cè)鼻孔各滴入10μL甲型H1N1流感病毒PR8株病毒液（滴度為1.33×104TCID50）感染，感染病毒滴度為1.33×104TCID50/只，每組感染10只小鼠；5)保持小鼠此體位15秒，使病毒進(jìn)入呼吸道。將小鼠置于鼠籠內(nèi)，待其恢復(fù)清醒后，給予水及食物；6)感染后1天和3天，各重復(fù)步驟2一次。7)感染后觀(guān)察，24h內(nèi)發(fā)生死亡的小鼠為非特異性死亡，在進(jìn)行死亡率統(tǒng)計(jì)時(shí)不予計(jì)算在內(nèi)；8)存活率和體重變化實(shí)驗(yàn)連續(xù)觀(guān)察14d，每天記錄每組小鼠死亡/存活只數(shù)以及體重變化情況；9)用GraphPadPrism5軟件統(tǒng)計(jì)小鼠死亡率及體重變化情況；10)肺組織病理切片實(shí)驗(yàn)于感染病毒后第5d進(jìn)行，用腹腔注射過(guò)量麻醉劑的方法使小鼠死亡；11)將小鼠固定于小動(dòng)物手術(shù)臺(tái)，移除胸部皮膚及骨骼，暴露胸腔，將小鼠肺臟連同心臟同時(shí)取出，用無(wú)菌PBS洗去表面血液，置于多聚甲醛固定液中室溫固定48h；12)固定后的樣品由病理實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行包埋、切片、HE染色等處理；13)病理切片置于顯微鏡下觀(guān)察，并記錄；14)肺組織濕干比實(shí)驗(yàn)于感染病毒后第5d進(jìn)行，用腹腔注射過(guò)量麻醉劑的方法使小鼠死亡；15)將小鼠固定于小動(dòng)物手術(shù)臺(tái)，移除胸部皮膚及骨骼，暴露胸腔，將小鼠完整肺臟取出，去除表面血液及多余結(jié)締組織，稱(chēng)量并記錄肺臟濕重；16)肺臟置于55℃高溫組織干燥器中干烤，24h后取出，待溫度降至室溫進(jìn)行肺臟干重的稱(chēng)量并記錄；17)計(jì)算小鼠肺臟濕重/干重比值(Wet/dryratio)，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析；實(shí)驗(yàn)結(jié)果：野生型C57BL/6小鼠經(jīng)靜脈注射PBS、抗體對(duì)照或抗CXCL-10單克隆抗體后，感染病毒滴度為1.33×104TCID50的甲型H1N1流感病毒PR8株后的死亡率結(jié)果，如圖11所示。感染相同滴度的PR8株甲型H1N1流感病毒后，靜脈注射PBS和靜脈注射抗體對(duì)照的小鼠死亡率都明顯高于靜脈注射抗CXCL-10單克隆抗體的小鼠（圖11）。*P<0.05。此結(jié)果說(shuō)明，CXCL-10在甲型H1N1流感病毒PR8株感染導(dǎo)致小鼠死亡的過(guò)程中發(fā)揮重要作用，針對(duì)CXCL-10分子的干預(yù)在治療甲型H1N1流感病毒PR8株感染所導(dǎo)致的損傷中，有可能發(fā)揮重要作用。檢測(cè)小鼠肺臟濕干比，可以反映小鼠發(fā)生急性肺水腫的程度。從圖12中可見(jiàn)，4周齡野生型C57BL/6小鼠在靜脈注射了抗CXCL-10單克隆抗體后，感染甲型H1N1流感病毒PR8株，其肺臟濕干比相比抗體對(duì)照治療組小鼠顯著降低，說(shuō)明抗CXCL-10抗體可以顯著緩解甲型H1N1流感病毒PR8株感染后小鼠的肺臟水腫。*P<0.05。此結(jié)果進(jìn)一步說(shuō)明，CXCL-10分子在甲型H1N1流感病毒PR8株感染導(dǎo)致小鼠發(fā)生急性肺組織損傷的病理過(guò)程中發(fā)揮了重要作用。圖13A-D中（×200倍，HE染色）病理照片顯示：感染滴度為1.33×104TCID50的甲型H1N1流感病毒PR8株后，靜脈注射病毒溶劑對(duì)照（雞胚尿囊液）和靜脈注射抗體溶劑（PBS）以及對(duì)照抗體的4周齡的野生型C57BL/6小鼠肺組織中出現(xiàn)嚴(yán)重的病理?yè)p傷（分別如圖13A、圖13B和圖13C所示）。肺組織正常結(jié)構(gòu)被破壞，肺組織紋理紊亂，伴隨出血、炎性滲出及大量紅細(xì)胞、炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)等病理?yè)p傷。感染相同滴度病毒靜脈注射抗CXCL-10單克隆抗體的小鼠肺組織未見(jiàn)顯著病理?yè)p傷，無(wú)顯著的出血、滲出或者炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)等病理變化，肺組織紋理清晰，結(jié)構(gòu)完整（圖13D）。雞胚尿囊液組小鼠肺組織也未見(jiàn)顯著病理?yè)p傷。結(jié)果說(shuō)明，抗CXCL-10抗體對(duì)小鼠在感染甲型H1N1流感病毒PR8株導(dǎo)致的急性肺組織病理?yè)p傷中發(fā)揮了重要保護(hù)作用。實(shí)施例6抗CXCL-10單克隆抗體可以緩解由來(lái)自大腸桿菌O111：B4的脂多糖和來(lái)自釀酒酵母的酵母多糖A聯(lián)合感染后小鼠的肺組織病理?yè)p傷實(shí)驗(yàn)材料：1)主要實(shí)驗(yàn)儀器：SPF級(jí)動(dòng)物房、SPF級(jí)生物安全柜、SPF級(jí)動(dòng)物飼養(yǎng)柜、SPF級(jí)小鼠飼養(yǎng)籠、小動(dòng)物手術(shù)器械、高溫組織干燥器、無(wú)菌注射器、移液器、移液管等。2)主要實(shí)驗(yàn)試劑：抗CXCL-10單克隆抗體（AbM50009-1-PU，購(gòu)自北京華大蛋白質(zhì)研發(fā)中心有限公司）、抗體對(duì)照（AbM59538-10-PU，購(gòu)自北京華大蛋白質(zhì)研發(fā)中心有限公司）、1%（W/V）戊巴比妥鈉溶液、病毒稀釋液、無(wú)菌PBS、消毒劑（2.5%碘酒和75%酒精）等。3)脂多糖(LPS)：L2630，購(gòu)于Sigma；酵母多糖(ZymosanA)：Z4250，購(gòu)于Sigma。4)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物：SPF級(jí)野生型BALB/c小鼠（4周齡）：購(gòu)于維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司。實(shí)驗(yàn)方法：1)分組：脂多糖和酵母多糖溶劑空白對(duì)照組、脂多糖和酵母多糖溶劑+同型抗體對(duì)照組、脂多糖和酵母多糖溶劑+抗CXCL-10單克隆抗體組、脂多糖和酵母多糖組+同型抗體對(duì)照組、脂多糖和酵母多糖+抗CXCL-10單克隆抗體組；2)小鼠靜脈注射抗體對(duì)照或抗CXCL-10單克隆抗體，每只小鼠每次靜脈注射50微克，共注射3次，分別為感染前12小時(shí)，1小時(shí)和感染后8小時(shí)；3)安全固定小鼠，用1mL無(wú)菌注射器腹腔注射1%（W/V）戊巴比妥鈉溶液麻醉；4)保持麻醉小鼠頭部向上向后傾斜姿勢(shì)，使其鼻腔向上。用酒精消毒頸部，用剪刀剪開(kāi)頸部皮膚，分離氣管，用注射器注入50微升含100微克脂多糖的PBS緩沖液，每組感染4只小鼠；5)保持小鼠此體位5分鐘，使脂多糖進(jìn)入呼吸道。將小鼠置于鼠籠內(nèi)，待其恢復(fù)清醒后，給予水及食物；6)給予脂多糖1小時(shí)后，按照操作3中方法麻醉小鼠，保持麻醉小鼠頭部向上向后傾斜姿勢(shì)，使其鼻腔向上。用酒精消毒頸部，分離氣管，用注射器注入50微升含60微克酵母多糖的PBS緩沖液，每組感染4只小鼠；7)保持小鼠此體位5分鐘，使脂多糖進(jìn)入呼吸道。將小鼠置于鼠籠內(nèi)，待其恢復(fù)清醒后，給予水及食物；8)感染病毒后24小時(shí)，用腹腔注射過(guò)量麻醉劑的方法使小鼠死亡；9)將小鼠固定于小動(dòng)物手術(shù)臺(tái)，移除胸部皮膚及骨骼，暴露胸腔，將小鼠肺臟連同心臟同時(shí)取出，用無(wú)菌PBS洗去表面血液，置于甲醛固定液中室溫固定48h；10)固定后的樣品由病理實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行包埋、切片、HE染色等處理；11)病理切片置于顯微鏡下觀(guān)察，并記錄。實(shí)驗(yàn)結(jié)果：圖14A-E中（×200倍，HE染色）病理照片顯示：脂多糖和酵母多糖溶劑空白對(duì)照組、脂多糖和酵母多糖溶劑+同型抗體對(duì)照組、脂多糖和酵母多糖溶劑+抗CXCL-10單克隆抗體組的小鼠肺組織未見(jiàn)顯著病理?yè)p傷，無(wú)顯著的出血、滲出或者炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)等病理變化，肺組織紋理清晰，結(jié)構(gòu)完整（分別如圖14A、圖14B和圖14C所示），感染來(lái)自大腸桿菌O111：B4的脂多糖和來(lái)自釀酒酵母的酵母多糖A后，靜脈注射抗體對(duì)照的4周齡的野生型C57BL/6小鼠肺組織中出現(xiàn)嚴(yán)重的病理?yè)p傷（圖14D）。肺組織正常結(jié)構(gòu)被破壞，肺組織紋理紊亂，伴隨出血、炎性滲出及大量紅細(xì)胞、炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)等病理?yè)p傷。感染相同滴度病毒靜脈注射抗CXCL-10單克隆抗體的小鼠肺組織未見(jiàn)顯著病理?yè)p傷，無(wú)顯著的出血、滲出或者炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)等病理變化，肺組織紋理清晰，結(jié)構(gòu)完整（圖14E）。結(jié)果說(shuō)明，抗CXCL-10抗體對(duì)小鼠在感染來(lái)自大腸桿菌O111：B4的脂多糖和來(lái)自釀酒酵母的酵母多糖A聯(lián)合導(dǎo)致的急性肺組織病理?yè)p傷中發(fā)揮了重要保護(hù)作用。