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AKT抑制劑化合物和化療劑的組合以及使用方法與流程

文檔序號(hào):11203778閱讀:3825來(lái)源:國(guó)知局
AKT抑制劑化合物和化療劑的組合以及使用方法與流程

本申請(qǐng)是中國(guó)申請(qǐng)?zhí)枮?01280027028.3、發(fā)明名稱為“akt抑制劑化合物和化療劑的組合以及使用方法”且申請(qǐng)日為2012年3月30日的專利申請(qǐng)(pct申請(qǐng)?zhí)枮閜ct/us2012/031720)的分案申請(qǐng)。

發(fā)明的優(yōu)先權(quán)

本申請(qǐng)要求2011年4月1日申請(qǐng)的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)61/470,803和2011年4月1日申請(qǐng)的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)61/470,624的優(yōu)先權(quán)。將這些臨時(shí)申請(qǐng)的全部?jī)?nèi)容并入本文作為參考。

本發(fā)明大體涉及化合物的藥物組合,所述化合物具有針對(duì)過(guò)度增殖性病癥(例如癌癥)的活性并且包括抑制akt激酶活性的化合物。本發(fā)明還涉及將所述組合用于體外、原位和體內(nèi)診斷或者治療哺乳動(dòng)物細(xì)胞或者有關(guān)病理學(xué)病癥的方法。



背景技術(shù):

蛋白激酶(pk)是通過(guò)轉(zhuǎn)移atp上的末端(γ)磷酸酯,催化蛋白的酪氨酸、絲氨酸和蘇氨酸殘基上羥基的磷酸化的酶。通過(guò)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑,這些酶調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)、分化和增殖,即細(xì)胞周期的幾乎所有方面以某種或者其它方式取決于pk活性(hardie,g.和hanks,s.(1995)theproteinkinasefactsbook.iandii,academicpress,sandiego,ca)。此外,pk活性異常與許多病癥有關(guān),范圍從相對(duì)無(wú)生命危險(xiǎn)的疾病例如牛皮癬至極其致命的疾病例如惡性膠質(zhì)瘤(腦癌)。蛋白激酶是治療調(diào)節(jié)的重要靶向類別(cohen,p.(2002)naturerev.drugdiscovery1:309)。

國(guó)際專利申請(qǐng)公開(kāi)wo2008/006040詳述了一系列式i的akt抑制劑:

目前,仍然需要可用于治療過(guò)度增殖性疾病(例如癌癥)的改善的方法和組合物。



技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素:

已經(jīng)確定的是,體外和體內(nèi)抑制癌細(xì)胞生長(zhǎng)的累加或者協(xié)同效應(yīng)可通過(guò)給予式i的化合物或者其藥用鹽與其它某些具體的化療劑的組合來(lái)實(shí)現(xiàn)。所述組合和方法可用于過(guò)度增殖性病癥(例如癌癥)的治療。

本發(fā)明的一個(gè)方面提供了治療哺乳動(dòng)物中過(guò)度增殖性病癥的方法,其包括對(duì)哺乳動(dòng)物給予:a)式i的化合物或者其藥用鹽;以及b)選自:5-fu、鉑劑(卡鉑、順鉑、奧沙利鉑等等)、伊立替康、多西他賽(docetaxel)、多柔比星、吉西他濱、sn-38、卡培他濱、替莫唑胺、厄洛替尼(erlotinib)、pd-0325901、紫杉醇(paclitaxel)、貝伐珠單抗、帕妥珠單抗、他莫昔芬、雷帕霉素、拉帕替尼、plx-4032、mdv3100、阿比特龍和gdc-0973中的一種或者多種藥劑,所述式i為:

一個(gè)方面包括a)式i化合物或者其藥用鹽和b)選自5-fu、鉑劑、甲酰四氫葉酸、伊立替康、多西他賽、多柔比星、吉西他濱、sn-38、卡培他濱、替莫唑胺、紫杉醇、貝伐單抗、培妥珠單抗、他莫昔芬、雷帕霉素和拉帕替尼或其藥用鹽的藥劑的組合,其用于預(yù)防性或者治療性處置治療過(guò)度增殖性病癥,所述式i為:

在一個(gè)實(shí)例中,式i化合物為gdc-0068或者其鹽。

式i的化合物或者其藥用鹽和化療劑可共同配制用于作為藥物組合物的組合給藥或者它們可作為治療性組合交替(先后)分開(kāi)給藥。

本發(fā)明的一個(gè)方面提供了治療哺乳動(dòng)物中由akt激酶所調(diào)節(jié)的疾病或者病癥的方法,其包括對(duì)所述哺乳動(dòng)物給予:a)式i的化合物或者其藥用鹽;以及b)一種或者多種藥劑,所述藥劑選自:5-fu、鉑劑、伊立替康、多西他賽、多柔比星、吉西他濱、sn-38、卡培他濱、替莫唑胺、厄洛替尼、pd-0325901、紫杉醇、貝伐珠單抗、帕妥珠單抗、他莫昔芬、雷帕霉素、拉帕替尼、plx-4032、mdv3100、阿比特龍和gdc-0973。

本發(fā)明的一個(gè)方面提供了用于治療過(guò)度增殖性病癥的組合,所述組合包含:a)式i的化合物或者其藥用鹽;以及b)一種或者多種藥劑,所述藥劑選自:5-fu、鉑劑、伊立替康、多西他賽、多柔比星、吉西他濱、sn-38、卡培他濱、替莫唑胺、厄洛替尼、pd-0325901、紫杉醇、貝伐珠單抗、帕妥珠單抗、他莫昔芬、雷帕霉素、拉帕替尼、plx-4032、mdv3100、阿比特龍和gdc-0973。

本發(fā)明的一個(gè)方面提供了用于治療由akt激酶所調(diào)節(jié)的疾病或者病癥的組合,所述組合包含:a)式i的化合物或者其藥用鹽;以及b)一種或者多種藥劑,所述藥劑選自:5-fu、鉑劑、伊立替康、多西他賽、多柔比星、吉西他濱、sn-38、卡培他濱、替莫唑胺、厄洛替尼、pd-0325901、紫杉醇、貝伐珠單抗、帕妥珠單抗、他莫昔芬、雷帕霉素、拉帕替尼、plx-4032、mdv3100、阿比特龍和gdc-0973。

本發(fā)明的一個(gè)方面提供了式i的化合物或者其藥用鹽在制備用于治療哺乳動(dòng)物中過(guò)度增殖性病癥的藥物中的用途,其中對(duì)所述哺乳動(dòng)物給予一種或者多種藥劑,所述藥劑選自:5-fu、鉑劑、伊立替康、多西他賽、多柔比星、吉西他濱、sn-38、卡培他濱、替莫唑胺、厄洛替尼、pd-0325901、紫杉醇、貝伐珠單抗、帕妥珠單抗、他莫昔芬、雷帕霉素、拉帕替尼、plx-4032、mdv3100、阿比特龍和gdc-0973。

本發(fā)明的一個(gè)方面提供了式i的化合物或者其藥用鹽在制備用于治療哺乳動(dòng)物中由akt激酶所調(diào)節(jié)的疾病或者病癥的藥物中的用途,其中對(duì)所述哺乳動(dòng)物給予一種或者多種藥劑,所述藥劑選自:5-fu、鉑劑、伊立替康、多西他賽、多柔比星、吉西他濱、sn-38、卡培他濱、替莫唑胺、厄洛替尼、pd-0325901、紫杉醇、貝伐珠單抗、帕妥珠單抗、他莫昔芬、雷帕霉素、拉帕替尼、plx-4032、mdv3100、阿比特龍和gdc-0973。

本發(fā)明的一個(gè)方面提供了試劑盒,其包含式i的化合物或者其藥用鹽、容器以及包裝說(shuō)明書(shū)或者標(biāo)簽,所述包裝說(shuō)明書(shū)或者標(biāo)簽指明用于治療過(guò)度增殖性病癥的式i的化合物或者其藥用鹽與一種或者多種藥劑的給藥,所述藥劑選自:5-fu、鉑劑、伊立替康、多西他賽、多柔比星、吉西他濱、sn-38、卡培他濱、替莫唑胺、厄洛替尼、pd-0325901、紫杉醇、貝伐珠單抗、帕妥珠單抗、他莫昔芬、雷帕霉素、拉帕替尼、plx-4032、mdv3100、阿比特龍和gdc-0973。

本發(fā)明的一個(gè)方面提供了產(chǎn)品,其為在過(guò)度增殖性病癥的治療中分開(kāi)、同時(shí)或者先后使用的組合制劑,包含具有式i的化合物或者其藥用鹽和化療劑,所述化療劑選自5-fu、鉑劑、伊立替康、多西他賽、多柔比星、吉西他濱、sn-38、卡培他濱、替莫唑胺、厄洛替尼、pd-0325901、紫杉醇、貝伐珠單抗、帕妥珠單抗、他莫昔芬、雷帕霉素、拉帕替尼、plx-4032、mdv3100、阿比特龍和gdc-0973。

除了提供為給定的過(guò)度增殖性病癥提供改善的治療之外,與接受不同治療的相同患者所經(jīng)歷的生活質(zhì)量相比,本發(fā)明某些組合的給藥可改善患者的生活質(zhì)量。例如,如果相同患者僅接受化療劑作為治療,則與他們將會(huì)經(jīng)歷的生活質(zhì)量相比,對(duì)患者給予本申請(qǐng)所述式i的化合物或者其藥用鹽和化療劑的組合可提供改善的生活質(zhì)量。例如,用本申請(qǐng)所述組合的組合療法可降低所需化學(xué)藥物的劑量,由此減輕與高劑量化療劑有關(guān)的副作用(例如,惡心、嘔吐、脫發(fā)、皮疹、食欲減退、重量減輕等等)。所述組合還可引起降低的腫瘤負(fù)荷和有關(guān)的不良事件,例如,疼痛、器官功能障礙、重量減輕等等。因此,本發(fā)明的一個(gè)方面提供了式i的化合物或者其藥用鹽,其治療性用于改善用藥劑治療過(guò)度增殖性病癥的患者的生活質(zhì)量,所述藥劑選自5-fu、鉑劑、伊立替康、多西他賽、多柔比星、吉西他濱、sn-38、卡培他濱、替莫唑胺、厄洛替尼、pd-0325901、紫杉醇、貝伐珠單抗、帕妥珠單抗、他莫昔芬、雷帕霉素、拉帕替尼、plx-4032、mdv3100、阿比特龍和gdc-0973。因此,本發(fā)明的另一方面提供用于治療用途的式i化合物或者其藥用鹽,其用于改善用選自5-fu、鉑劑、甲酰四氫葉酸、伊立替康、多西他賽、多柔比星、吉西他濱、sn-38、卡培他濱、替莫唑胺、紫杉醇、貝伐單抗、培妥珠單抗、他莫昔芬、雷帕霉素和拉帕替尼的藥劑治療過(guò)度增殖性病癥的患者的生命質(zhì)量。

附圖說(shuō)明

圖1示出實(shí)施例15的結(jié)果,即實(shí)施例2化合物和多西他賽在lucap35v原發(fā)性前列腺腫瘤中具有200的hscore的結(jié)果。

圖2示出實(shí)施例15的結(jié)果,即po或者ip間歇給藥的實(shí)施例2化合物和多西他賽在pc3-nci前列腺腫瘤中的結(jié)果。

圖3示出實(shí)施例15的結(jié)果,即po給藥的實(shí)施例2化合物和多西他賽在pc3-nci前列腺腫瘤中的結(jié)果。

圖4示出實(shí)施例15的結(jié)果,即間歇ip給藥的實(shí)施例2化合物和多西他賽在mcf7-neo/her2腫瘤中的結(jié)果。

圖5示出實(shí)施例15的結(jié)果,即po給藥的實(shí)施例2化合物和多西他賽在mcf7-neo/her2乳腺癌腫瘤中的結(jié)果。

圖6示出實(shí)施例15的結(jié)果,即實(shí)施例2化合物和多西他賽在maxf401乳腺腫瘤中的結(jié)果。

圖7示出實(shí)施例15的結(jié)果,即實(shí)施例2化合物和多西他賽在skov3卵巢癌腫瘤中的結(jié)果。

圖8示出實(shí)施例2化合物和順鉑在skov3卵巢癌腫瘤中的結(jié)果。

圖9示出實(shí)施例15的結(jié)果,即po給藥的實(shí)施例2化合物和卡鉑在igrov-1卵巢癌腫瘤中的結(jié)果。

圖10示出實(shí)施例15的結(jié)果,即實(shí)施例2化合物和mdv3100在lucap35v細(xì)胞中的結(jié)果。

圖11示出gdc-0068和b20-4.1.1(鼠抗vegf抗體)的組合在乳腺癌模型中的結(jié)果。

圖12示出實(shí)施例14的數(shù)據(jù),其顯示,代表性組合針對(duì)許多癌癥類型提供加和或者協(xié)同活性。

圖13示出實(shí)施例14的數(shù)據(jù),其顯示實(shí)施例2加上5-fu/順鉑的活性與akt路徑活化相關(guān),特別是在胃和頭頸鱗狀細(xì)胞癌中。加和效果在gdc-0068加上5-fu/順鉑的組合中觀察到,并且與pten(低或者沒(méi)有)、pakt(過(guò)表達(dá))和pi3k突變和擴(kuò)增相關(guān)。

圖14示出來(lái)自實(shí)施例14的bliss得分?jǐn)?shù)據(jù),其顯示實(shí)施例2(gdc-0068)加上5-fu/順鉑(“化療”)組合在胃細(xì)胞系中的活性。協(xié)同性在所述組合中在nugc3細(xì)胞系(胃癌)中得到證實(shí),其中pten狀態(tài)低并且pakt過(guò)表達(dá)。另外,這種特定細(xì)胞系(nugc3)在5-fu/順鉑的中等劑量和gdc-0068的高劑量顯示加和效果。

圖15示出實(shí)施例14的數(shù)據(jù),其顯示,實(shí)施例2加上多西他賽組合在無(wú)pten系(其對(duì)實(shí)施例2具有最小單一藥劑應(yīng)答)中顯示最大效果。

圖16示出實(shí)施例14的數(shù)據(jù),其顯示實(shí)施例2加上多西他賽組合在pten正常細(xì)胞系中較弱。

圖17顯示akt抑制劑式1a(gdc-0068)與dtx的序列組合在lucap145.2無(wú)pten原發(fā)性前列腺癌異種移植模型中的數(shù)據(jù)。

圖18示出po給藥的式1a(gdc-0068)+多西他賽在mcf-7乳腺癌腫瘤中的數(shù)據(jù)。

圖19示出po給藥的式1a(gdc-0068)+卡鉑在ovcar3卵巢癌腫瘤中的數(shù)據(jù)。

圖20示出單一藥劑gdc-0068在hgc-27(her2(-)&無(wú)pten)胃腫瘤異種移植物中的數(shù)據(jù)。

圖21顯示用gdc-0068單一藥劑療法治療的乳腺癌患者的pet掃描應(yīng)答。

圖22顯示一位用gdc-0068單一藥劑療法治療的乳腺癌患者的pet和腫瘤標(biāo)記物應(yīng)答。

圖23顯示一位具有akt1e17k突變?nèi)橄侔┑幕颊咴诙喾N其它化療治療失敗后從一個(gè)周期的gdc-0068與多西他賽組合治療得到部分應(yīng)答的結(jié)果。

圖24顯示在在先治療失敗后gdc-0068與folfox的組合治療具有部分應(yīng)答的結(jié)果,其中患者患有宮頸的pik3ca突變型鱗狀癌。

圖25顯示在在先治療失敗后gdc-0068與folfox的組合治療具有部分應(yīng)答的結(jié)果,其中患者患有pten損失(hscore40),kras野生型結(jié)腸直腸癌。

圖26顯示蛋白質(zhì)印跡數(shù)據(jù),其示出在用gdc-0068與mdv3100的組合處理3小時(shí)和8小時(shí)的lucap35v腫瘤中的pd應(yīng)答。

示例性實(shí)施方案的具體描述和定義

當(dāng)在說(shuō)明書(shū)和下面的權(quán)利要求中使用時(shí),術(shù)語(yǔ)“包含(comprise)”、“包含(comprising)”、“包括(include)”、“包括(including)”和“包括(includes)”,意欲具體說(shuō)明所敘述的性能、整體、組分或步驟的存在,但不排除存在或添加一或多種其它性能、整體、組分、步驟或基團(tuán)。

本申請(qǐng)所用的術(shù)語(yǔ)“烷基”是指1至12個(gè)碳原子的飽和直鏈或支鏈一價(jià)烴基,其中烷基可以任選被一個(gè)或多個(gè)如下所述的取代基獨(dú)立地取代。烷基的實(shí)例包括但不限于,甲基(me、-ch3)、乙基(et、-ch2ch3)、1-丙基(n-pr、正丙基、-ch2ch2ch3)、2-丙基(i-pr、異丙基、-ch(ch3)2)、1-丁基(n-bu、正丁基、-ch2ch2ch2ch3)、2-甲基-1-丙基(i-bu、異丁基、-ch2ch(ch3)2)、2-丁基(s-bu、仲丁基、-ch(ch3)ch2ch3)、2-甲基-2-丙基(t-bu、叔丁基、-c(ch3)3)、1-戊基(正戊基、-ch2ch2ch2ch2ch3)、2-戊基(-ch(ch3)ch2ch2ch3)、3-戊基(-ch(ch2ch3)2)、2-甲基-2-丁基(-c(ch3)2ch2ch3)、3-甲基-2-丁基(-ch(ch3)ch(ch3)2)、3-甲基-1-丁基(-ch2ch2ch(ch3)2)、2-甲基-1-丁基(-ch2ch(ch3)ch2ch3)、1-己基(-ch2ch2ch2ch2ch2ch3)、2-己基(-ch(ch3)ch2ch2ch2ch3)、3-己基(-ch(ch2ch3)(ch2ch2ch3))、2-甲基-2-戊基(-c(ch3)2ch2ch2ch3)、3-甲基-2-戊基(-ch(ch3)ch(ch3)ch2ch3)、4-甲基-2-戊基(-ch(ch3)ch2ch(ch3)2)、3-甲基-3-戊基(-c(ch3)(ch2ch3)2)、2-甲基-3-戊基(-ch(ch2ch3)ch(ch3)2)、2,3-二甲基-2-丁基(-c(ch3)2ch(ch3)2)、3,3-二甲基-2-丁基(-ch(ch3)c(ch3)3)、1-庚基、1-辛基等。

術(shù)語(yǔ)“烯基”是指2至12個(gè)碳原子、且具有至少一個(gè)不飽和位點(diǎn)(即碳-碳sp2雙鍵)的直鏈或支鏈一價(jià)烴基,其中烯基可以任選被一個(gè)或多個(gè)本申請(qǐng)所述的取代基獨(dú)立地取代,并且包括具有“順式”和“反式”取向或“e”和“z”取向的基團(tuán)。實(shí)例包括但不限于,乙烯基(ethylenyl)或乙烯基(vinyl)(-ch=ch2)、烯丙基(-ch2ch=ch2)等。

術(shù)語(yǔ)“炔基”是指2至12個(gè)碳原子、且具有至少一個(gè)不飽和位點(diǎn)(即碳-碳sp叁鍵)的直鏈或支鏈一價(jià)烴基,其中炔基可以任選被一個(gè)或多個(gè)本申請(qǐng)所述的取代基獨(dú)立地取代。實(shí)例包括但不限于,乙炔基(-c≡ch)和丙炔基(炔丙基,-ch2c≡ch)等等。

術(shù)語(yǔ)“碳環(huán)(carbocycle)”、“碳環(huán)基(carbocycly)”、“碳環(huán)(carbocyclicring)”和“環(huán)烷基”指作為單環(huán)的環(huán)具有3至12個(gè)碳原子或者作為二環(huán)的環(huán)具有7至12個(gè)碳原子的單價(jià)非芳族的、飽和的或者部分不飽和的環(huán)。具有7至12個(gè)原子的二環(huán)碳環(huán)可排列(例如)成二環(huán)[4,5]、二環(huán)[5,5]、二環(huán)[5,6]或者二環(huán)[6,6]系統(tǒng),而具有9或10個(gè)環(huán)原子的二環(huán)碳環(huán)可排列成二環(huán)[5,6]或者二環(huán)[6,6]系統(tǒng),或者排列成橋連系統(tǒng)如二環(huán)[2.2.1]庚烷、二環(huán)[2.2.2]辛烷和二環(huán)[3.2.2]壬烷。單環(huán)碳環(huán)的實(shí)例包括但不限于,環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、1-環(huán)戊-1-烯基、1-環(huán)戊-2-烯基、1-環(huán)戊-3-烯基、環(huán)己基、1-環(huán)己-1-烯基、1-環(huán)己-2-烯基、1-環(huán)己-3-烯基、環(huán)己二烯基、環(huán)庚基、環(huán)辛基、環(huán)壬基、環(huán)癸基、環(huán)十一基、環(huán)十二基等。

“芳基”是指6-20個(gè)碳原子的一價(jià)芳族烴基,其通過(guò)從母體芳環(huán)體系的單一碳原子上除去一個(gè)氫原子而得到。一些芳基在示例性結(jié)構(gòu)中表示為“ar”。芳基包括包含與飽和、部分不飽和的環(huán),或芳族碳環(huán)或雜環(huán)稠合的芳環(huán)的二環(huán)基團(tuán)。典型的芳基包括但不限于,衍生自下列的基團(tuán):苯(苯基)、取代的苯、萘、蒽、聯(lián)苯、茚、茚滿、1,2-二氫萘、1,2,3,4-四氫萘等。芳基可以任選被一個(gè)或多個(gè)本申請(qǐng)描述的取代基獨(dú)立地取代。

術(shù)語(yǔ)“雜環(huán)(heterocycle)”、“雜環(huán)基”和“雜環(huán)(heterocyclicring)”在本申請(qǐng)中互換使用并指飽和的或者部分不飽和的(即,環(huán)內(nèi)具有一個(gè)或者多個(gè)雙鍵和/或三鍵)具有3至20個(gè)環(huán)原子的碳環(huán)基,其中至少一個(gè)環(huán)原子為選自氮、氧和硫的雜原子,剩余的環(huán)原子為c,其中一個(gè)或者多個(gè)環(huán)原子任選地獨(dú)立取代有一個(gè)或者多個(gè)以下所述的取代基。雜環(huán)可以為具有3至7個(gè)環(huán)成員的單環(huán)(2至6個(gè)碳原子和1至4個(gè)選自n、o、p和s的雜原子)或者具有7至10個(gè)環(huán)成員的二環(huán)(4至9個(gè)碳原子和1至6個(gè)選自n、o、p和s的雜原子),例如:二環(huán)[4,5]、二環(huán)[5,5]、二環(huán)[5,6]或者二環(huán)[6,6]系統(tǒng)。雜環(huán)綜述于paquette,leoa.;"principlesofmodernheterocyclicchemistry"(w.a.benjamin,newyork,1968),尤其是第1、3、4、6、7和9章;"thechemistryofheterocycliccompounds,aseriesofmonographs"(johnwiley&sons,newyork,1950topresent),尤其是第13、14、16、19和28卷;以及j.am.chem.soc.(1960)82:5566。術(shù)語(yǔ)“雜環(huán)”包括雜環(huán)烷氧基。“雜環(huán)基”還包括其中雜環(huán)基與飽和的、部分不飽和的環(huán)或者芳族碳環(huán)或者雜環(huán)稠合的基團(tuán)。雜環(huán)的實(shí)例包括但不限于,吡咯烷基、四氫呋喃基、二氫呋喃基、四氫噻吩基、四氫吡喃基、二氫吡喃基、四氫噻喃基、哌啶子基、嗎啉代、硫嗎啉代、噻噁烷基(thioxanyl)、哌嗪基、高哌嗪基、氮雜環(huán)丁烷基、氧雜環(huán)丁烷基、硫雜環(huán)丁烷基、高哌啶基、氧雜環(huán)庚烷基、硫雜環(huán)庚烷基、氧氮雜基、二氮雜基、硫氮雜基、2-吡咯啉基、3-吡咯啉基、二氫吲哚基、2h-吡喃基、4h-吡喃基、二噁烷基、1,3-二氧雜環(huán)戊烷基、吡唑啉基、二硫雜環(huán)己烷基(dithianyl)、二硫雜環(huán)戊烷基(dithiolanyl)、二氫吡喃基、二氫噻吩基、二氫呋喃基、吡唑烷基、咪唑啉基、咪唑烷基、3-氮雜二環(huán)[3.1.0]己基、3-氮雜二環(huán)[4.1.0]庚基、氮雜二環(huán)[2.2.2]己基、3h-吲哚基、喹嗪基和n-吡啶基脲。螺部分也包括在本定義的范圍之內(nèi)。其中2個(gè)環(huán)碳原子被氧代(=o)部分取代的雜環(huán)基團(tuán)的實(shí)例是嘧啶酮基和1,1-二氧代-硫嗎啉基。本申請(qǐng)中雜環(huán)基團(tuán)任選地獨(dú)立取代有一個(gè)或者多個(gè)本申請(qǐng)所述的取代基。

術(shù)語(yǔ)“雜芳基”指5-、6-或者7-元環(huán)的單價(jià)芳族基團(tuán),并包括5-20個(gè)原子的稠合的環(huán)系(其中至少一個(gè)是芳族的),所述環(huán)系含有一個(gè)或者多個(gè)獨(dú)立選自氮、氧和硫的雜原子。雜芳基的實(shí)例為吡啶基(包括,例如,2-羥基吡啶基)、咪唑基、咪唑并吡啶基、嘧啶基(包括,例如,4-羥基嘧啶基)、吡唑基、三唑基、吡嗪基、四唑基、呋喃基、噻吩基、異噁唑基、噻唑基、噁唑基、異噻唑基、吡咯基、喹啉基、異喹啉基、吲哚基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、噌啉基、吲唑基、吲嗪基、酞嗪基、噠嗪基、三嗪基、異吲哚基、蝶啶基、嘌呤基、噁二唑基、三唑基、噻二唑基、噻二唑基、呋咱基、苯并呋咱基、苯并噻吩基、苯并噻唑基、苯并噁唑基、喹唑啉基、喹喔啉基、萘啶基和呋喃并吡啶基。雜芳基任選地獨(dú)立取代有一個(gè)或者多個(gè)本申請(qǐng)所述的取代基。

所述雜環(huán)或者雜芳基在適當(dāng)連接時(shí)可以是碳(碳聯(lián)的)、氮(氮聯(lián)的)或者氧(氧聯(lián)的)連接的。作為實(shí)例且非限制,碳鍵合的雜環(huán)或者雜芳基在以下位置鍵合:吡啶的2、3、4、5或者6位,噠嗪的3、4、5或者6位,嘧啶的2、4、5或者6位,吡嗪的2、3、5或者6位,呋喃、四氫呋喃、噻吩(thiofuran)、噻吩(thiophene)、吡咯或者四氫吡咯的2、3、4或者5位,噁唑、咪唑或者噻唑的2、4或者5位,異噁唑、吡唑或者異噻唑的3、4或者5位,氮雜環(huán)丙烷的2或者3位,氮雜環(huán)丁烷的2、3或者4位,喹啉的2、3、4、5、6、7或者8位或者異喹啉的1、3、4、5、6、7或者8位。

作為實(shí)例而非限制,氮鍵合的雜環(huán)或者雜芳基在以下位置鍵合:氮雜環(huán)丙烷、氮雜環(huán)丁烷、吡咯、吡咯烷、2-吡咯啉、3-吡咯啉、咪唑、咪唑烷、2-咪唑啉、3-咪唑啉、吡唑、吡唑啉、2-吡唑啉、3-吡唑啉、哌啶、哌嗪、吲哚、二氫吲哚、1h-吲唑的1位,異吲哚或者二氫異吲哚的2位,嗎啉的4位,以及咔唑或者β-咔啉的9位。

術(shù)語(yǔ)“治療(treat)”和“治療(treatment)”指的是治療性處置以及預(yù)防或阻止性措施,其中目的是預(yù)防或延遲(衰減)不希望的生理變化或異常,諸如癌癥的生長(zhǎng)、發(fā)展或者擴(kuò)散。對(duì)本發(fā)明來(lái)說(shuō),有利的或目標(biāo)臨床效果包括但不限于,癥狀減輕,疾病程度降低,疾病狀態(tài)穩(wěn)定化(即未惡化),延遲或減緩疾病發(fā)展,改善或減緩疾病狀態(tài),和癥狀緩解(不論是部分的或全部的),不論是否是可檢測(cè)或不可檢測(cè)的?!爸委煛边€可以是指:與不得到醫(yī)治而期望的存活相比,可以延長(zhǎng)存活。需要治療的那些包括:患有病癥或障礙的那些,以及易于患所述病癥或障礙的那些或者其中所述病癥或障礙應(yīng)該被預(yù)防的那些。

短語(yǔ)“治療有效量”表示本發(fā)明化合物的量,所述化合物(i)治療具體疾病、病癥或者障礙,(ii)減弱、改善或者消除所述具體疾病、病癥或者障礙的一種或者多種癥狀,或者(iii)預(yù)防或者延遲本申請(qǐng)所述具體疾病、病癥或者障礙的一種或者多種癥狀的發(fā)作。在癌癥的情況下,治療有效量的藥物可減少癌細(xì)胞的數(shù)量;減小腫瘤大小;抑制(即,在某種程度上減慢并優(yōu)選停止)癌細(xì)胞向外周器官的浸潤(rùn);抑制(即,在某種程度上減慢并優(yōu)選停止)腫瘤轉(zhuǎn)移;在某種程度上抑制腫瘤生長(zhǎng);和/或在某種程度上減輕一種或者多種與癌癥有關(guān)的癥狀。為此,藥物可以預(yù)防所存在癌細(xì)胞的生長(zhǎng)和/或?qū)⑵錃⑺赖某潭龋梢允羌?xì)胞生長(zhǎng)抑制性的和/或細(xì)胞毒性的。對(duì)于癌癥治療,可以例如通過(guò)評(píng)價(jià)疾病進(jìn)展的時(shí)間(ttp)和/或測(cè)定反應(yīng)率(rr)來(lái)測(cè)定其效果。

術(shù)語(yǔ)“癌癥(cancer)”和“癌的(cancerous)”是指哺乳動(dòng)物中特征通常為未調(diào)節(jié)的細(xì)胞生長(zhǎng)的生理?xiàng)l件或者描述所述生理?xiàng)l件?!澳[瘤”包含一種或者多種癌細(xì)胞。癌癥的實(shí)例包括但不限于癌(carcinoma)、淋巴瘤、母細(xì)胞瘤、肉瘤以及白血病(leukemia)或者淋巴樣惡性腫瘤(lymphoidmalignancy)。所述癌癥的更具體的實(shí)例包括鱗狀細(xì)胞癌(例如上皮鱗狀細(xì)胞癌);肺癌,包括小細(xì)胞肺癌、非小細(xì)胞肺癌(“nsclc")、肺腺癌(adenocarcinomaofthelung)和肺鱗狀細(xì)胞癌(squamouscarcinomaofthelung);腹膜癌;肝細(xì)胞癌;胃癌(gastricorstomachcancer),包括胃腸癌;胰腺癌;成膠質(zhì)細(xì)胞瘤;子宮頸癌;卵巢癌;肝癌(livercancer);膀胱癌;肝細(xì)胞瘤(hepatoma);乳腺癌(breastcancer);結(jié)腸癌;直腸癌;結(jié)腸直腸癌;子宮內(nèi)膜癌或者子宮癌;唾液腺癌;腎癌或者腎癌;前列腺癌;外陰癌(vulvalcancer);甲狀腺癌;肝臟癌(hepaticcarcinoma);肛門(mén)癌;陰莖癌;以及頭頸癌。本申請(qǐng)所用的胃癌(gastriccancer)包括胃癌(stomachcancer),其可在胃的任何部分發(fā)展并可在胃各處蔓延并蔓延至其它器官;具體而言為食道、肺、淋巴結(jié)和肝。

“化療劑”是可用于治療癌癥的生物學(xué)的(大分子)或者化學(xué)的(小分子)化合物,而與其作用機(jī)理無(wú)關(guān)?;焺┌?,但是不限于:烷化劑、抗代謝藥、紡絲體毒植物生物堿(spindlepoisonplantalkaloids)、細(xì)胞毒性/抗腫瘤抗生素(cytotoxic/antitumorantibiotics)、拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑(topoisomeraseinhibitors)、蛋白、抗體、光敏性藥物和激酶抑制劑?;焺┌ㄔ凇鞍邢虔煼ā焙头前邢虺R?guī)化學(xué)療法中使用的化合物。

術(shù)語(yǔ)“哺乳動(dòng)物”包括但不限于,人、小鼠、大鼠、豚鼠、猴、狗、貓、馬、牛、豬、羊以及家禽。

術(shù)語(yǔ)“包裝說(shuō)明書(shū)”是指通常包括在治療產(chǎn)品的市售包裝中的說(shuō)明書(shū),其含有關(guān)于適應(yīng)癥、用法、劑量、給藥、禁忌癥和/或者注意事項(xiàng)的信息,這些信息涉及上述治療產(chǎn)品的使用。

本申請(qǐng)使用的短語(yǔ)“藥用鹽”是指本發(fā)明化合物的藥用有機(jī)或者無(wú)機(jī)鹽。示例性鹽包括但不限于硫酸鹽、枸櫞酸鹽、乙酸鹽、草酸鹽、鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、硝酸鹽、硫酸氫鹽、磷酸鹽、酸式磷酸鹽、異煙酸鹽、乳酸鹽、水楊酸鹽、酸式枸櫞酸鹽、酒石酸鹽、油酸鹽、鞣酸鹽(tannate)、泛酸鹽(pantothenate)、酒石酸氫鹽、抗壞血酸鹽、琥珀酸鹽、馬來(lái)酸鹽、龍膽酸鹽(gentisinate)、富馬酸鹽、葡糖酸鹽、葡糖醛酸鹽、糖二酸鹽(saccharate)、甲酸鹽、苯甲酸鹽、谷氨酸鹽、甲磺酸鹽(mesylate)、乙磺酸鹽、苯磺酸鹽、對(duì)甲苯磺酸鹽和撲酸鹽(即1,1'-亞甲基-二-(2-羥基-3-萘甲酸鹽))。藥用鹽可涉及另一種分子如乙酸根離子、琥珀酸根離子或者其它抗衡離子的包合物(inclusion)??购怆x子可以是穩(wěn)定母體化合物電荷的任何有機(jī)或者無(wú)機(jī)部分。此外,藥用鹽可在其結(jié)構(gòu)中具有多于一個(gè)帶電原子。多個(gè)帶電原子為藥用鹽的部分的情況可具有多個(gè)抗衡離子。因此,藥用鹽可具有一個(gè)或者多個(gè)帶電原子和/或者一個(gè)或者多個(gè)抗衡離子。

若本發(fā)明化合物為堿,則期望的藥用鹽可通過(guò)本領(lǐng)域可得的任何合適方法來(lái)制備,例如用無(wú)機(jī)酸(如鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、甲磺酸、磷酸等)或者用有機(jī)酸(如乙酸、馬來(lái)酸、琥珀酸、扁桃酸、富馬酸、丙二酸、丙酮酸、草酸、羥乙酸、水楊酸、吡喃糖基酸(pyranosidylacid)如葡萄糖醛酸或者半乳糖醛酸、α-羥基酸如枸櫞酸或者酒石酸、氨基酸如天冬氨酸或者谷氨酸、芳族酸如苯甲酸或者肉桂酸、磺酸如對(duì)甲苯磺酸或者乙磺酸等)處理游離堿。例如,由p.stahl等,camilleg.(eds.)handbookofpharmaceuticalsalts.properties,selectionanduse.(2002)zurich:wiley-vch;s.berge等,journalofpharmaceuticalsciences(1977)66(1)119;p.gould,internationalj.ofpharmaceutics(1986)33201217;anderson等,thepracticeofmedicinalchemistry(1996),academicpress,newyork;remington’spharmaceuticalsciences,18thed.,(1995)mackpublishingco.,eastonpa;andintheorangebook(food&drugadministration,washington,d.c.ontheirwebsite)討論了通常認(rèn)為適于由堿性藥用化合物形成藥學(xué)上有用的或者可接受的鹽的酸。將這些公開(kāi)引入到本申請(qǐng)作為參考。

若本發(fā)明化合物為酸,則期望的藥用鹽可通過(guò)任何合適方法來(lái)制備,例如用無(wú)機(jī)或者有機(jī)堿(如胺(伯胺、仲胺或者叔胺)、堿金屬氫氧化物或者堿土金屬氫氧化物等)處理游離酸。合適鹽的示例性實(shí)例包括但不限于從以下物質(zhì)得到的有機(jī)鹽:氨基酸如甘氨酸和精氨酸、氨、伯胺、仲胺和叔胺以及環(huán)狀胺如哌啶、嗎啉和哌嗪;以及從以下物質(zhì)得到的無(wú)機(jī)鹽:鈉、鈣、鉀、鎂、錳、鐵、銅、鋅、鋁和鋰。

短語(yǔ)“藥用的”表示所述物質(zhì)或者組合物必須與制劑包含的其它成分和/或者用其治療的哺乳動(dòng)物在化學(xué)上和/或者毒理學(xué)上是相容的。

“溶劑化物”是指一種或者多種溶劑分子與本發(fā)明化合物的締合物(association)或者絡(luò)合物(complex)?;衔锟梢苑侨軇┗镆约叭軇┗镄问酱嬖?。形成溶劑化物的溶劑的實(shí)例包括但不限于水、異丙醇、乙醇、甲醇、dmso、乙酸乙酯、乙酸和乙醇胺。術(shù)語(yǔ)“水合物”是指當(dāng)溶劑分子是水時(shí)的絡(luò)合物。該物理締合物涉及多種程度的離子鍵合和共價(jià)鍵合,其包括氫鍵鍵合。在某些實(shí)例中所述溶劑化物將能夠分離,例如當(dāng)一個(gè)或多個(gè)溶劑分子被摻到結(jié)晶固體的晶格中時(shí)。溶劑化物的制備通常是已知的,例如,m.caira等,j.pharmaceuticalsci.,93(3),601611(2004)。e.c.vantonder等,aapspharmscitech.,5(1),article12(2004);以及a.l.bingham等,chem.commun.,603604(2001)描述了溶劑化物、半溶劑化物、水合物等的類似制備。典型的、非限制性的方法涉及在高于環(huán)境溫度時(shí)將發(fā)明的化合物溶于期望量的期望溶劑(有機(jī)溶劑或者水或者其混合物)中,并以足夠形成晶體的速率冷卻所述溶液,然后通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)方法分離所述晶體。分析技術(shù),例如i.r.光譜,顯示作為溶劑化物(或者水合物)的晶體中溶劑(或者水)的存在。

本申請(qǐng)所用的術(shù)語(yǔ)“協(xié)同的”指比兩種或更多種單個(gè)藥劑累加效應(yīng)更有效的治療組合。式i的化合物或者其藥用鹽與一種或者多種化療劑之間協(xié)同性相互作用的確定可基于從本申請(qǐng)所述的測(cè)定中獲得的結(jié)果。為了獲得組合指數(shù),可使用chou和talalay組合方法以及用calcusyn軟件的劑量-效果分析來(lái)分析這些測(cè)定的結(jié)果(chouandtalalay,1984,adv.enzymeregul.22:27-55)。已經(jīng)在若干測(cè)定系統(tǒng)中評(píng)估了該發(fā)明所提供的組合,并且可采用在抗癌劑中的定量協(xié)同作用、相加作用和拮抗作用的標(biāo)準(zhǔn)程序分析所述數(shù)據(jù)。所采用的程序,例如在圖12中所采用的,是chou和talalay在"newavenuesindevelopmentalcancerchemotherapy,"academicpress,1987第2章中描述的程序。小于0.8的組合指數(shù)值指示協(xié)同作用,大于1.2的值指示拮抗作用而0.8至1.2的值指示累加效應(yīng)。所述組合療法可提供“協(xié)同作用”并證明是“協(xié)同的”,即,當(dāng)所述活性成分一起使用時(shí)所實(shí)現(xiàn)的效應(yīng)大于由分開(kāi)使用所述化合物產(chǎn)生的效應(yīng)的總和。當(dāng)所述活性成分為以下成分時(shí),可達(dá)到協(xié)同效應(yīng):(1)在組合的單位劑量制劑中共同配制并同時(shí)給藥或者遞送;(2)作為分開(kāi)制劑交替或平行遞送;或者(3)通過(guò)一些其它用藥方案。當(dāng)在交替療法中遞送時(shí),例如通過(guò)分開(kāi)注射器中的不同注射液,當(dāng)先后給予或者遞送所述化合物時(shí)可達(dá)到協(xié)同效應(yīng)。一般而言,在交替療法期間,有效劑量的各活性成分是先后給藥的,即,連續(xù)地,而在組合療法中,有效劑量的兩種或者更多種活性成分是一起給藥的。

在一些實(shí)例中,使用bliss獨(dú)立模型和最高單個(gè)藥劑(hsa)模型(lehár等.2007,molecularsystemsbiology3:80)評(píng)估組合效應(yīng)。bliss評(píng)分定量來(lái)自單個(gè)藥劑的增強(qiáng)程度并且bliss評(píng)分>0表明大于單純的相加作用。has評(píng)分>0表明組合效應(yīng)大于相應(yīng)濃度時(shí)單個(gè)藥劑響應(yīng)的最大值。

使用responseevaluationcriteriainsolidtumors,version1.1(recistv1.1)評(píng)價(jià)在某些人臨床試驗(yàn)中的腫瘤應(yīng)答。這部分提供用于針對(duì)靶標(biāo)病灶測(cè)定客觀腫瘤應(yīng)答的標(biāo)準(zhǔn)的定義?!巴耆珣?yīng)答”(cr)用于表示所有可觀察的靶標(biāo)病灶消失,病理淋巴結(jié)(無(wú)論是靶標(biāo)還是非靶標(biāo))的短軸已經(jīng)減小至小于約10mm?!安糠謶?yīng)答”(pr)用于表示靶標(biāo)病灶的直徑的總和減少至少約30%,使用直徑的基線總和作為參照?!斑M(jìn)行性疾病”(pd)用于表示靶標(biāo)病灶的直徑的總和增加至少約20%,使用所研究的最小總和(最低值)(包括基線)作為參照。除了約20%的相對(duì)增加之外,總和也顯示至少約5mm的絕對(duì)增加。在一個(gè)實(shí)例中,一個(gè)或者多個(gè)新病灶的出現(xiàn)被認(rèn)為是pd?!胺€(wěn)定性疾病”(sd)用于表示達(dá)不到量化為pr所需的足夠的收縮,也達(dá)不到量化為pd所需的足夠的增加,使用所研究的最小總和作為參照。

使用不良事件分級(jí)(嚴(yán)重性)尺度評(píng)價(jià)安全性和耐受性,等級(jí)1為輕微(未指示干預(yù)),等級(jí)2為中度(指示最小、局部,或者非侵襲性干預(yù)),等級(jí)3為嚴(yán)重(嚴(yán)重或者醫(yī)學(xué)上明顯,但是不立即威脅生命;指示住院或者住院的延長(zhǎng)),等級(jí)4是非常嚴(yán)重,威脅生命或者殘廢,指示緊急干預(yù),和等級(jí)5是與不良事件有關(guān)的死亡。

在一個(gè)方面中,本發(fā)明提供了治療過(guò)度增殖性病癥的方法,其中式i的化合物或者其鹽和一種或者多種藥劑的給藥提供了治療過(guò)度增殖性病癥的協(xié)同效應(yīng),所述藥劑選自:5-fu、鉑劑、伊立替康、多西他賽、多柔比星、吉西他濱、sn-38、卡培他濱、替莫唑胺、厄洛替尼、pd-0325901、紫杉醇、貝伐珠單抗、帕妥珠單抗、他莫昔芬、雷帕霉素、拉帕替尼、plx-4032、mdv3100、阿比特龍和gdc-0973。在另一個(gè)方面中,所述協(xié)同效應(yīng)具有小于約0.8的組合指數(shù)。

在臨床前模型中,gdc-0068給藥導(dǎo)致血漿葡萄糖水平的劑量依賴性增加。等級(jí)1或者2的高血糖癥事件在gdc-0068的ia期人臨床試驗(yàn)中在禁食的患者中觀察到,并且用口服抗糖尿病治療和膳食的組合緩解。因此,一旦本發(fā)明的方面是治療患有過(guò)增生性疾病如癌癥的患者中的過(guò)增生性疾病如癌癥的方法,其包括與抗糖尿病化合物(例如二甲雙胍)組合地給藥式i化合物(例如,gdc-0068)。抗糖尿病療法的組合預(yù)防、治療或者逆轉(zhuǎn)式ia化合物治療的高血糖癥副作用。在一個(gè)實(shí)例中,將gdc-0068空腹(禁食)給藥,任選地與抗糖尿病療法組合,并與本申請(qǐng)所述的化療劑組合。在其它實(shí)施方案中,也將化療劑(在本申請(qǐng)中進(jìn)一步討論,例如多西他賽和folfox)作為組合的一部分給藥。

式i化合物

式i化合物包含式i的化合物及其藥用鹽,所述式i化合物為:

其中:

r1為h、me、et、乙烯基、cf3、chf2或者ch2f;

r2為h或者me;

r5為h、me、et或者cf3;

a為

g為任選地被一至四個(gè)r9基團(tuán)所取代的苯基或者任選地被鹵素取代的5-6元的雜芳基;

r6和r7獨(dú)立地為h、och3、(c3-c6環(huán)烷基)-(ch2)、(c3-c6環(huán)烷基)-(ch2ch2);v-(ch2)0-1,其中v為具有一至兩個(gè)獨(dú)立地選自n、o和s的環(huán)雜原子的5-6元的雜芳基;w-(ch2)1-2,其中w為任選地取代有f、cl、br、i、ome、cf3或者me的苯基;任選地取代有c1-c3烷基或者o(c1-c3烷基)的c3-c6-環(huán)烷基;羥基-(c3-c6-環(huán)烷基);氟-(c3-c6-環(huán)烷基);ch(ch3)ch(oh)苯基;任選地取代有f、oh、c1-c3-烷基、環(huán)丙基甲基或者c(=o)(c1-c3烷基)的4-6元的雜環(huán);或者任選地取代有一個(gè)或者多個(gè)基團(tuán)的c1-c6-烷基,所述基團(tuán)獨(dú)立地選自oh、氧代、o(c1-c6-烷基)、cn、f、nh2、nh(c1-c6-烷基)、n(c1-c6-烷基)2、環(huán)丙基、苯基、咪唑基、哌啶基、吡咯烷基、嗎啉基、四氫呋喃基、氧雜環(huán)庚烷基或者四氫吡喃基,

或者r6和r7與它們所連接的氮一起形成4-7元的雜環(huán),其中所述雜環(huán)任選地取代有一個(gè)或者多個(gè)基團(tuán),所述基團(tuán)獨(dú)立地選自oh、鹵素、氧代、cf3、ch2cf3、ch2ch2oh、o(c1-c3烷基)、c(=o)ch3、nh2、nhme、n(me)2、s(o)2ch3、環(huán)丙基甲基和c1-c3烷基;

ra和rb為h,

或者ra為h,且rb和r6與它們所連接的原子一起形成5-6元的具有一個(gè)或者兩個(gè)氮原子的雜環(huán);

rc和rd為h或者me,

或者rc和rd與它們所連接的原子一起形成環(huán)丙基環(huán);

r8為h、me、f或者oh,

或者r8和r6與它們所連接的原子一起形成5-6元的具有一個(gè)或者兩個(gè)環(huán)氮原子的雜環(huán);

各個(gè)r9獨(dú)立地為鹵素、c1-c6-烷基、c3-c6-環(huán)烷基、o-(c1-c6-烷基)、cf3、ocf3、s(c1-c6-烷基)、cn、och2-苯基、ch2o-苯基、nh2、nh-(c1-c6-烷基)、n-(c1-c6-烷基)2、哌啶、吡咯烷、ch2f、chf2、och2f、ochf2、oh、so2(c1-c6-烷基)、c(o)nh2、c(o)nh(c1-c6-烷基)和c(o)n(c1-c6-烷基)2;

r10為h或者me;并且

m、n和p獨(dú)立地為0或者1。

式i的具體化合物為化合物,其中a為

式i的具體化合物為式ia化合物或者其藥用鹽,所述式ia為:

在本發(fā)明的一個(gè)方面中,式i的化合物不包含式ia化合物(s)-2-(4-氯苯基)-1-(4-((5r,7r)-7-羥基-5-甲基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(異丙基氨基)丙-1-酮或者其藥用鹽(該化合物也可稱作gdc-0068),所述式ia為:

式i化合物的制備

本發(fā)明化合物可通過(guò)包括與化學(xué)領(lǐng)域中眾所周知的方法類似的方法的合成路線來(lái)合成,特別是根據(jù)本申請(qǐng)所含有的描述。起始原料通??蓮纳虡I(yè)來(lái)源例如aldrichchemicals(milwaukee,wi)得到或者使用本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的方法容易制備(例如,通過(guò)louisf.fieserandmaryfieser,reagentsfororganicsynthesis,v.1-19,wiley,n.y.(1967-1999ed.),或者beilsteinshandbuchderorganischenchemie,4,aufl.ed.springer-verlag,berlin,包括附錄中通常所描述的方法制備)。

式i的化合物可逐一制備,或者作為包含至少2個(gè),例如5至1,000個(gè)化合物或者10至100化合物的化合物庫(kù)制備。通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的操作,使用液相或者固相化學(xué),式i化合物的庫(kù)可通過(guò)組合的‘裂分和混合’途徑或者通過(guò)多個(gè)平行合成來(lái)制備。因此根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)方面,提供有包含至少2個(gè)式i的化合物或者其鹽的化合物庫(kù)。

為了用作說(shuō)明,方案1-4和方案a-j顯示制備本發(fā)明化合物以及關(guān)鍵中間體的通用方法。對(duì)于個(gè)別反應(yīng)步驟更加詳細(xì)的描述,見(jiàn)下面實(shí)施例部分。本領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解的是,其它合成路線可用于合成發(fā)明的化合物。雖然在方案中描述并在下面討論了具體的起始原料和試劑,但是其它起始原料和試劑可容易地被替換,從而提供多種衍生物和/或反應(yīng)條件。除此之外,多種通過(guò)下面所述方法制備的化合物可根據(jù)本公開(kāi)使用本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的常規(guī)化學(xué)來(lái)進(jìn)一步修飾。

方案1

方案1顯示制備式i的化合物10的方法,其中r1為h,r2為h且r5為h。嘧啶2的形成可通過(guò)在適當(dāng)溶劑(如乙醇)中在堿(如koh)存在下酮酸酯1與硫脲的反應(yīng)來(lái)完成。在標(biāo)準(zhǔn)還原條件(例如,蘭尼鎳和nh4oh)下化合物2的巰基還原得到化合物3之后,在標(biāo)準(zhǔn)條件(例如,在diea/dce中的pocl3)下可將羥基嘧啶3氯化得到化合物4。然后在標(biāo)準(zhǔn)條件(例如,mcpba在適當(dāng)溶劑如chcl3中的溶液)下將化合物4氧化得到嘧啶-氧化物。用乙酸酐處理嘧啶-氧化物得到重排產(chǎn)物6?;衔?是在標(biāo)準(zhǔn)snar反應(yīng)條件下通過(guò)化合物6與適當(dāng)取代的哌啶反應(yīng),得到化合物7來(lái)獲得的。將化合物7水解得到化合物8,然后脫保護(hù)得到中間體9。在偶聯(lián)試劑如hbtu存在下,哌嗪基環(huán)戊二烯并[d]嘧啶9與適當(dāng)氨基酸?;匾獣r(shí)接著脫保護(hù),得到式i的化合物10。

方案2

方案2顯示制備式i的化合物22、25和27的方法,其中r1、r2和r5為甲基。根據(jù)方案2,(+)-長(zhǎng)葉薄荷酮11與溴的溴化得到二溴化物12。用堿(如乙醇鈉)處理二溴化物12得到蒲勒烯酸酯(pulegenate)13。臭氧分解蒲勒烯酸酯13得到酮酸酯14。在乙醇中在堿(如koh)存在下,用硫脲處理酮酸酯14,接著在標(biāo)準(zhǔn)條件(例如,在氨中的蘭尼鎳催化劑)下還原巰基,得到羥基嘧啶16。在標(biāo)準(zhǔn)條件(例如,pocl3)下將羥基嘧啶16氯化得到4-氯嘧啶17。用氧化劑如mcpba或者過(guò)氧化氫氧化4-氯嘧啶17得到n-氧化物18。n-氧化物18與乙酸酐的重排得到中間體19。根據(jù)方案1中所述操作,化合物19與期望的哌嗪反應(yīng),得到其中r5為h的化合物20和其中r5為me的化合物23。使用具有手性固定相的hplc手性分離化合物20和23,然后緊接著用堿(如氫氧化鋰)處理進(jìn)行水解分別得到化合物21和24。在脫保護(hù)之后,化合物21和24接著與適當(dāng)氨基酸反應(yīng)分別得到化合物22和25。

可選擇地,化合物24的7-羥基可在堿(如nah或者koh)存在下用烷基化試劑(如烷基鹵化物)進(jìn)行烷基化得到其中r2為me的化合物26。在脫保護(hù)之后,化合物26接著與適當(dāng)氨基酸反應(yīng),得到化合物27。

方案3

方案3顯示制備化合物73和74的可選擇的方法。根據(jù)方案3,使用氨合成子的14的胺化得到63。在50℃-250℃和/或在高壓在甲酰胺存在下使用例如甲酸銨進(jìn)行嘧啶的形成得到二環(huán)單元64。使用例如pocl3或者socl2,進(jìn)行64的活化得到活化的嘧啶65。在0℃至150℃使用適當(dāng)保護(hù)的/取代的哌嗪,取代該離去基團(tuán),得到哌嗪66。在-20℃至50℃使用例如間氯過(guò)氧苯甲酸(“mcpba”或者“m-cpba”)或者氧化得到n-氧化物67。用?;瘎?例如,乙酸酐)處理接著加熱(40℃至200℃)引起重排得到68。在0℃至50℃使用例如lioh或者naoh,水解得到醇69。在適當(dāng)溫度使用例如swern條件、mno4或者吡啶-so3絡(luò)合物,氧化得到酮70。例如在氫氣存在下使用催化的手性催化劑、在手性配體存在下使用cbs催化劑或者硼氫化物還原劑進(jìn)行不對(duì)稱還原,在醇71或者72處產(chǎn)生(r)或者(s)立體化學(xué)??蛇x擇地,可使用非手性還原劑(例如,h2,pd/c),使在環(huán)戊烷單元上的甲基提供面選擇性及最終地非對(duì)映立體選擇性。如果還原得到較低的非對(duì)映立體選擇性,可通過(guò)(例如)色譜法、重結(jié)晶或者衍生化分離非對(duì)映異構(gòu)體。最終,boc-基團(tuán)的脫保護(hù)(例如在0℃至50℃使用酸)、使用適當(dāng)官能化氨基酸的?;霸摪被岬陌返淖罱K官能化(例如,任何保護(hù)基的移除、烷基化、還原胺化或者?;?,引入新取代基),生成最終的化合物73和74。

方案4

向化合物1引入手性助劑(例如,evans噁唑烷酮等等)可通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)?;僮鱽?lái)完成,得到結(jié)合物2。例如,在-20℃至100℃在胺類堿存在下,用活化劑(例如,cocl2)處理所述酸或者形成混合酸酐(例如,2,2-二甲基丙酰氯),接著用適當(dāng)手性助劑(x)處理,得到化合物2。立體化學(xué)和手性助劑的選擇可決定新產(chǎn)生的手性中心的立體化學(xué)和非對(duì)映立體選擇性。先后在低溫(例如,-20℃至-100℃)用路易斯酸(例如,ticl4)、胺類堿(例如,許尼希堿)以及在低溫使用適當(dāng)取代的亞胺離子前體3處理化合物2,然后生成化合物4。溫度、路易斯酸和手性助劑預(yù)期都可影響加成產(chǎn)物的非對(duì)映立體選擇性。最終,在溫和條件下(例如,lioh/h2o在-10℃至30℃)皂化生成期望的酸5。

因此,本發(fā)明的另一個(gè)方面提供了制備式i的化合物的方法,其包括:

使下述化合物與氨基酸反應(yīng),

所述化合物具有以下式:

其中r1、r2、r5和r10如本申請(qǐng)所定義,

所述氨基酸具有以下式:

其中r6、r7、ra、rb、rc、rd、g、m、n和p如本申請(qǐng)所定義。

在方案1-4和實(shí)施例所述的式i化合物的合成中所使用的氨基酸或者是可商購(gòu)的或者可根據(jù)本申請(qǐng)所公開(kāi)的方法制備。例如,在某些實(shí)施方案中,用于制備式i化合物的氨基酸包括具有式1a的β-苯基甘氨酸氨基酸、具有式2a的γ-苯基甘氨酸氨基酸、具有式3a的β-苯基丙氨酸氨基酸和具有式4a的γ-苯基丙氨酸氨基酸。

制備式1a-4a的氨基酸的方法顯示在方案a-j中。

方案a

方案a說(shuō)明制備任選取代的式1a的β-苯基甘氨酸氨基酸25和26的方法,其中r8為h,且r6和r9如本申請(qǐng)所定義,t為0至4,且r7為h或者胺保護(hù)基。根據(jù)方案a,使用標(biāo)準(zhǔn)條件如在催化量的酸(如濃h2so4)或者偶聯(lián)劑(如dcc/dmap)存在下用適當(dāng)醇(例如,meoh)處理;或者可選擇地在適當(dāng)溫度(例如,-20℃至100℃)在堿(如net3/dmap)存在下用適當(dāng)親電體(例如,mei、etbr、bnbr)處理,將酸20轉(zhuǎn)化成其中r'為烷基的酯21。適當(dāng)?shù)孽サ倪x擇通過(guò)在合成結(jié)束時(shí)重新形成酸所需要的條件來(lái)決定,許多適當(dāng)?shù)膶?shí)例和條件在greene和wuts編著的‘protectivegroupsinorganicsynthesis’(wiley-interscience)第三版第5章中列出。在適當(dāng)溫度(例如,-20℃至室溫)在堿(如naoet)存在下用適當(dāng)醛(例如,甲醛)處理引入羥基甲基,得到化合物22。通過(guò)在適當(dāng)溫度(例如,-20℃至室溫)在過(guò)量堿(如net3、dipea或者dbu)存在下可用(例如)甲磺酰氯處理來(lái)完成化合物22醇基團(tuán)的活化,形成離去基團(tuán)(例如,甲磺酸酯、甲苯磺酸酯、鹵化物)。在許多情況下可從該操作中直接分離烯烴24,在其它情況下可需要溫?zé)?30℃至100℃)或者另外的堿(例如,在鹵化物的情況下為dbu)完成消除從而得到化合物24。活化的烯烴24可在適當(dāng)溫度(例如,-20℃至回流溫度)在適合的溶劑(如thf)中用期望的伯胺(例如,乙胺)處理,生成氨基酯中間體。在其中化合物24具有富電子芳族環(huán)或者缺電子/體積大的伯胺的情況下,可需要加熱(例如,在密封管中30-240℃)或者微波化學(xué)。氨基的保護(hù)(例如boc-基團(tuán))可在標(biāo)準(zhǔn)條件下使用boc2o來(lái)完成,得到其中pg為保護(hù)基的化合物23。可使用可選擇的保護(hù)基,并且許多實(shí)例在greene和wuts編著的‘protectivegroupsinorganicsynthesis’(wiley-interscience)第三版第7章中列出。使用適合于酯的條件(例如,對(duì)于甲酯的含水lioh、對(duì)于芐酯的氫化、對(duì)于叔丁酯的酸)可完成酯23的皂化,形成保護(hù)的氨基酸25。

可選擇地,所述活化的烯烴24可在適當(dāng)溫度(例如,-20℃至回流溫度)在適合溶劑(如thf)中用仲胺(例如,二乙胺)處理,得到氨基酯中間體(未顯示)。在其中化合物24具有富電子芳族環(huán)或者缺電子/大體積仲胺的情況下,可需要加熱(例如,在密封管中30-240℃)或者微波化學(xué)。使用適于酯的條件(例如,對(duì)于甲基的含水lioh、對(duì)于芐基的氫化、對(duì)于叔丁酯的酸等等)可完成所述酯的皂化,形成氨基酸26。

在方案a的替代方案中,pg可用化合物23和25中的r7取代。

方案a1

方案a1顯示方案1的替代方案,其中活化的烯烴24反應(yīng)形成氨基酸26a。

方案b

方案b顯示制備任選取代的式1a的β-苯基甘氨酸氨基酸30和31的方法,其中r8為oh,且r6和r9如本申請(qǐng)所定義,t為0至4,且r7如本申請(qǐng)所定義或者為胺保護(hù)基。在適當(dāng)溫度(室溫至回流溫度)使用標(biāo)準(zhǔn)氧化劑(如mcpba)的不飽和酯24(根據(jù)方案a制備)的氧化,其中t為0-4且r'為烷基,得到環(huán)氧化物中間體28。通常在高溫(例如,50-300℃)和高壓(例如,在密封管或者鋼彈中)可用適當(dāng)胺處理中間體28,得到氨基醇29或者30。如果使用仲胺(如在化合物30的制備中),那么可使用greene和wuts編著的‘protectivegroupsinorganicsynthesis’(wiley-interscience)第三版第5章中所列條件的脫保護(hù)(例如,對(duì)于甲酯的lioh、對(duì)于芐酯的氫化等等)。當(dāng)使用伯胺(如在化合物29的制備中)時(shí),進(jìn)行胺的脫保護(hù)(例如,使用boc酐的boc-基團(tuán))接著是酯的脫保護(hù)(使用上述條件)得到羥基化的氨基酸31。

方案c

方案c顯示制備任選取代的式1a的β-苯基甘氨酸氨基酸36的方法,其中r8為甲基,r6為h,r7為胺保護(hù)基,t為0至4,且r9如本申請(qǐng)所定義。可在適當(dāng)溫度(例如,0℃至回流溫度)用堿(例如,naotbu)處理其中r”'為烷基的酯32,形成陰離子,接著在適當(dāng)溫度(例如,-78℃至室溫)加入親電體(例如,2-溴乙酸叔丁酯),得到同系的(homologated)酯33。在適當(dāng)溫度(例如,0℃至回流溫度)使用適當(dāng)酸(如tfa或者h(yuǎn)cl)除去化合物33的叔丁酯得到化合物34。例如在適當(dāng)溫度(例如,0℃至回流溫度)在溫和堿(如net3)存在下使用dppa進(jìn)行化合物34的curtius重排,接著任選地在較高溫度(例如,40-200℃)在路易斯酸(例如,sncl2)存在下用醇(例如,t-buoh)處理反應(yīng)性中間體,得到其中pg為胺保護(hù)基的化合物35。用于制備化合物35的醇的選擇決定胺保護(hù)基(例如,t-buoh得到boc-胺)。使用標(biāo)準(zhǔn)條件(例如,當(dāng)保護(hù)基為甲酯時(shí)用lioh,對(duì)于芐酯的氫化等等)的化合物35酯基的脫保護(hù),得到酸化合物36。

在方案c的一種替代方案中,r8可以為甲基、h或者f。

在方案c的另一種替代方案中,化合物35和36中的pg可用r7取代。

方案d

方案d顯示制備任選取代的式2a的γ-苯基甘氨酸氨基酸40的方法,其中rc、rd和r9如本申請(qǐng)所定義,t為0至4,r6為h,且r7為胺保護(hù)基(如boc)。根據(jù)方案a制備的起始不飽和酯24,可在適當(dāng)溫度(例如,0℃至室溫)在堿(如dbu)存在下,用取代的硝基甲烷衍生物(例如,硝基乙烷)處理,得到同系的加合物37??稍谶m當(dāng)溫度(例如,室溫至回流溫度)使用標(biāo)準(zhǔn)條件(例如,氫化、zn/酸等等)還原化合物37的硝基,并將所得中間體環(huán)化,得到內(nèi)酰胺中間體38。在標(biāo)準(zhǔn)條件下使用boc2o可完成(例如)具有boc-基團(tuán)胺的保護(hù),得到化合物39??墒褂每蛇x擇保護(hù)基,并且許多適當(dāng)?shù)膶?shí)例在greene和wuts編著的‘protectivegroupsinorganicsynthesis’(wiley-interscience)第三版第7章中列出。在適當(dāng)溫度(例如,0至100℃)用含水的堿(如lioh或者koh)處理化合物39來(lái)影響內(nèi)酰胺的開(kāi)環(huán),得到適當(dāng)取代的保護(hù)的氨基酸化合物40。

在方案d的一種替代方案中,化合物39和40中的boc可用r7代替。

方案d1

方案d1顯示形成γ氨基酸40d和40e的單個(gè)對(duì)映異構(gòu)體的方法,其中rc、rd和r9如本申請(qǐng)所定義,t為0至4,r6為h,且r7為胺保護(hù)基(如boc)。在一種可能的方法中,使用手性固定相將消旋的氨基酸進(jìn)行手性色譜分離。可選擇地,可制備非對(duì)映異構(gòu)的混合物,其可通過(guò)常規(guī)色譜技術(shù)分離。例如,在-20℃至50℃在堿性胺(例如,許尼希堿)存在下,活化化合物40(例如,cocl2、堿)并引入手性助劑(例如,evans的噁唑烷酮),得到化合物40b和40c的非對(duì)映異構(gòu)的混合物。該混合物可使用標(biāo)準(zhǔn)條件(例如,柱色譜、hplc、sfc等等)來(lái)分離,得到單獨(dú)的非對(duì)映異構(gòu)體。通過(guò)手性助劑的裂解(在evans的助劑情況下,通過(guò)在-15℃至室溫使用(例如)lioh/hooh)可將這些轉(zhuǎn)化成期望的酸,得到化合物40d和40e。需要保持低溫從而防止新分離的手性中心的消旋化。

方案e

方案e顯示制備任選取代的式2a的γ-苯基甘氨酸氨基酸44的方法,其中r8為甲基,r6為h,r7為胺保護(hù)基,t為0至4,且r9如本申請(qǐng)所定義??稍谶m當(dāng)溫度(例如,0℃至回流溫度)用適合的堿(如kotbu)處理其中r”'為烷基且t為0-4的酯32,形成陰離子,然后在-78℃至室溫的溫度范圍加入丙烯酸酯單元(例如,丙烯酸叔丁酯),得到同系的酯41。通過(guò)在適當(dāng)溫度(例如,0℃至回流溫度)用適合的酸(如tfa或者h(yuǎn)cl)處理,化合物41的叔丁酯進(jìn)行皂化得到化合物42。例如在適當(dāng)溫度(例如,0℃至回流溫度)在溫和堿(如net3)存在下使用dppa進(jìn)行化合物42的curtius重排,接著任選地在升高的溫度(例如,40-200℃)在路易斯酸(例如,sncl2)存在下用適當(dāng)?shù)拇?例如,t-buoh)處理反應(yīng)性中間體,得到化合物43。醇的選擇決定化合物43的胺保護(hù)基(例如,t-buoh得到boc-胺)。在標(biāo)準(zhǔn)條件下(例如,對(duì)于甲酯的lioh,對(duì)于芐酯的氫化等等)化合物43的酯的脫保護(hù),得到酸44。

在方案e的一種替代方案中,pg可用化合物43和44中的r7取代。

方案f

方案f顯示制備任選取代的式3a的β-苯基丙氨酸氨基酸48、49和50的方法,其中r6為h,r7為胺保護(hù)基,t為0至4,且r9如本申請(qǐng)所述。在適當(dāng)溫度(例如,室溫至回流溫度)在適合的堿(如哌啶)存在下,適當(dāng)取代的醛45可用其中r”'為烷基的式cn-ch2co2r”'的氰基乙酸酯(例如,2-氰基乙酸乙酯)處理,得到不飽和的酯46。可以多種方式完成化合物46的烯烴和腈基的還原,得到化合物47。例如,所述烯烴可用影響1,4-還原的已知的任何試劑(如nabh4)來(lái)還原。所述腈可在路易斯酸(如bf3.oet2或者tfa)存在下使用試劑(如lialh4或者nabh4)來(lái)還原??墒褂枚喾N可選擇的還原劑,如hudlicky編著的‘reductionsinorganicchemistry’(acs專著)第二版第18章中列出的還原劑。需要時(shí),在該階段使用標(biāo)準(zhǔn)條件(例如,使用適當(dāng)醛、路易斯酸和還原劑的還原胺化)可將伯胺47進(jìn)行單烷基化或者雙烷基化,得到制備化合物48和49途中的中間體(未顯示)。為了制備伯胺和仲胺,可使用多種保護(hù)基(例如,greene和wuts編著的‘protectivegroupsinorganicsynthesis’(wiley-interscience)第三版第7章)完成保護(hù),例如作為boc-基團(tuán)在0℃至室溫使用boc酐。使用含水堿如lioh或者koh,或者在上述‘protectinggroups’文本中列出的任何可選擇試劑(例如,對(duì)于芐酯的氫化)可完成酯基的裂解,形成氨基酸48、49或者50。

在方案f的一個(gè)替代方案中,pg可用化合物49或者50中的r7取代。

方案g

方案g顯示制備任選取代的式4a的α-苯基丙氨酸氨基酸54的方法,其中r6為h,r7為胺保護(hù)基,t為0至4,且r9如本申請(qǐng)所定義。在室溫至回流的溫度范圍使用例如lialh4,可將適當(dāng)取代的酸51還原成芐基醇52。使用例如pbr3、mscl/net3等等,可將化合物52的醇基團(tuán)活化為離去基團(tuán)(例如,鹵化物、甲磺酸酯等等)。在強(qiáng)堿(如lda、nbuli)存在下使用保護(hù)的甘氨酸衍生物(如2-(二苯基亞甲基氨基)乙酸乙酯)置換所述離去基團(tuán),得到氨基酯中間體53,其中r1為烷基且pg為保護(hù)基。適當(dāng)?shù)谋Wo(hù)基在‘protectivegroupsinorganicsynthesis’bygreeneandwuts,wiley-interscience中列出。在本階段可改變胺保護(hù)基,例如引入boc-基團(tuán)。在適當(dāng)溫度(例如,0℃至回流溫度)隨后進(jìn)行酯53的脫保護(hù)(例如,對(duì)于芐酯使用3nhcl、lioh、氫化等等),得到期望的n-保護(hù)的氨基酸54。

在方案g的一種替代方案中,在化合物53脫保護(hù)之后,pg可用化合物54中的r7取代。

方案h

方案h顯示制備任選取代的式2a的γ-苯基甘氨酸氨基酸56的方法,其中r6和r8與它們所連接的原子一起形成螺環(huán)雜環(huán),r7為胺保護(hù)基,t為0至4,且r9如本申請(qǐng)所定義。根據(jù)方案h,在適當(dāng)溫度(例如,室溫至回流溫度)在干燥條件(例如,加入分子篩)下,可將不飽和的酯24用適當(dāng)保護(hù)的甘氨酸衍生物(例如,芐基甘氨酸)和甲醛處理,生成化合物55。使用標(biāo)準(zhǔn)條件(例如,經(jīng)氫化、甲酸1-氯乙酯等等)裂解芐基,接著加入胺保護(hù)基(如boc-基團(tuán)),并在標(biāo)準(zhǔn)條件下(例如,在0℃至回流溫度,對(duì)于甲酯的lioh、對(duì)于叔丁酯的酸等等)裂解酯,得到n-保護(hù)的氨基酸56。

在方案h的一種替代方案中,pg可用化合物56中的r7取代。

方案i

方案i顯示制備任選取代的式3a的β-苯基丙氨酸氨基酸61和62的方法,其中r6和rb與它們所連接的原子一起形成雜環(huán),且r7和r9如本申請(qǐng)所定義且t為0至4。使用標(biāo)準(zhǔn)條件如在催化的酸(例如,濃h2so4或者tmscl)或者偶聯(lián)劑(例如,dcc/dmap)存在下用適當(dāng)醇(例如,meoh)處理;或者可選擇地通過(guò)在適當(dāng)溫度(例如,-20℃至100℃)在適合的堿(如net3/dmap)存在下用適當(dāng)親電體(例如,mei、etbr、bnbr)處理,將酸57轉(zhuǎn)化成酯58。適當(dāng)?shù)孽サ倪x擇通過(guò)在合成結(jié)束時(shí)重新形成酸所需要的條件來(lái)決定,如greene和wuts編著的‘protectivegroupsinorganicsynthesis’(wiley-interscience)第三版第5章中所述的條件。例如,在tfa存在下使用n-(甲氧基甲基)(苯基)-n-((三甲基甲硅烷基)甲基)甲胺,可實(shí)現(xiàn)化合物58的環(huán)化,得到化合物59。該特定試劑組生成芐胺,所述試劑組可在標(biāo)準(zhǔn)條件如在-20℃至50℃在氫化下或者任何其它標(biāo)準(zhǔn)條件如greene和wuts編著的‘protectivegroupsinorganicsynthesis’(wiley-interscience)第三版第7章中列出的條件下裂解,得到化合物60。使用上文所列出的試劑(如boc-酐)用可選擇的保護(hù)基(例如,boc)保護(hù)化合物60的游離胺,隨后使用適于酯的標(biāo)準(zhǔn)條件(例如,對(duì)于甲酯的含水lioh、對(duì)于芐酯的氫化、對(duì)于叔丁酯的酸)裂解酯,得到酸化合物61??蛇x擇地,可將游離胺進(jìn)一步官能化(例如,使用烷基化、還原胺化或者酰化條件),接著裂解酯,得到三級(jí)氨基酸化合物62。

方案j

使用方案j中所示的操作可制備任一種b-氨基酸的對(duì)映異構(gòu)體??蓪⑴c具有適當(dāng)立體化學(xué)以產(chǎn)生在氨基酸b-位期望的化學(xué)的適當(dāng)手性助劑(r*)(例如,evans的助劑或者磺內(nèi)酰胺)偶聯(lián)的乙酸2-苯酯用亞胺或者亞胺離子合成子(例如,在-100℃至50℃在路易斯酸(例如,ticl4)和適當(dāng)取代的烷氧基甲胺或者n-(烷氧基甲基)酰胺/氨基甲酸酯存在下原位制備)處理。不對(duì)稱加成可需要路易斯酸(例如,ticl4)、胺類堿(例如,許尼希堿)和較低溫度(例如,-100℃至0℃)的存在,產(chǎn)生最佳水平的立體化學(xué)誘導(dǎo)。如果de低于所需,可通過(guò)(例如)色譜法或者重結(jié)晶在本階段分離單獨(dú)的非對(duì)映異構(gòu)體。然后使用裂解所選助劑已知的方法(例如,對(duì)于evans助劑的在-50℃至50℃的lioh/h2o2)裂解手性助劑得到期望的在b-位具有期望立體化學(xué)的n-保護(hù)的b-氨基酸。另外,如果r6也是保護(hù)基(例如,2,4-二甲氧基芐基),可在boc-基團(tuán)存在下將其除去(例如,氫化或者ddq等等),得到boc-氨基酸,當(dāng)其除去boc-基團(tuán)時(shí)將會(huì)得到伯胺,所述伯胺可通過(guò)烷基化、?;蛘哌€原胺化進(jìn)一步官能化(在與嘧啶-哌嗪?jiǎn)卧悸?lián)之前或者之后)。

在制備式i的化合物中,中間體遠(yuǎn)距離官能團(tuán)(例如,伯胺或者仲胺等等)的保護(hù)可以是必需的。這種保護(hù)的需要將取決于遠(yuǎn)距離官能團(tuán)的性質(zhì)和制備方法的條件而變化。適合的氨基-保護(hù)基(nh-pg)包括乙?;?、三氟乙酰基、叔丁氧基羰基(boc)、芐基氧基羰基(cbz)和9-芴基亞甲基氧基羰基(fmoc)。這種保護(hù)的需要由本領(lǐng)域的技術(shù)人員容易地確定。對(duì)于保護(hù)基以及其使用的一般描述,見(jiàn)t.w.greene,protectivegroupsinorganicsynthesis,johnwiley&sons,newyork,1991.

分離方法

在制備式i的化合物的任意合成方法中,將反應(yīng)產(chǎn)物彼此分離和/或者與起始原料分離可能是有益的。通過(guò)本領(lǐng)域常見(jiàn)技術(shù)將每步或者多步中期望的產(chǎn)物分離和/或者純化(以下稱為分離)為期望的同質(zhì)性程度。通常所述分離涉及多相萃取、從溶劑或者溶劑混合物中結(jié)晶、蒸餾、升華或者色譜法。色譜法可涉及任何數(shù)目的方法,包括例如:反相和正相;尺寸排阻(sizeexclusion);離子交換;高、中和低壓液相色譜方法和裝置;小規(guī)模分析;模擬移動(dòng)床(smb)和制備性薄層或者厚層色譜,以及小規(guī)模薄層和快速色譜技術(shù)。

另一類分離方法涉及用所選擇的試劑處理混合物,從而與期望的產(chǎn)物、未反應(yīng)的起始原料、反應(yīng)副產(chǎn)物等結(jié)合或者使得期望的產(chǎn)物、未反應(yīng)的起始原料、反應(yīng)副產(chǎn)物等分離。所述試劑包括吸附劑(adsorbent)或者吸收劑(absorbent),如活性炭、分子篩、離子交換介質(zhì)等??晒┻x擇地,所述試劑可以是酸(在堿性物質(zhì)的情況下),堿(在酸性物質(zhì)的情況下),結(jié)合劑如抗體、結(jié)合蛋白,選擇性螯合劑如冠醚,液/液離子交換試劑(lix)等。

對(duì)適當(dāng)?shù)姆蛛x方法的選擇依賴于所涉及的物質(zhì)的性質(zhì)。例如,沸點(diǎn)和分子量(在蒸餾和升華中)、存在或者不存在極性官能團(tuán)(在色譜法中)、在酸性和堿性介質(zhì)中物質(zhì)的穩(wěn)定性(在多相萃取中)等等。本領(lǐng)域技術(shù)人員將采用最有可能實(shí)現(xiàn)期望的分離的技術(shù)。

可通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的方法(如色譜法和/或者分級(jí)結(jié)晶),基于非對(duì)映異構(gòu)體的物理化學(xué)差別,將非對(duì)映異構(gòu)混合物分離為其單獨(dú)的非對(duì)映異構(gòu)體。對(duì)映異構(gòu)體可通過(guò)以下方式分離:通過(guò)使對(duì)映異構(gòu)體混合物與適當(dāng)?shù)墓鈱W(xué)活性的化合物(例如,手性助劑如手性醇或者mosher's酰氯)反應(yīng)將其轉(zhuǎn)化為非對(duì)映異構(gòu)混合物,分離非對(duì)映異構(gòu)體,然后將單獨(dú)的非對(duì)映異構(gòu)體轉(zhuǎn)化(例如,水解)為相應(yīng)的純的對(duì)映異構(gòu)體。此外,一些本發(fā)明化合物可以是阻轉(zhuǎn)異構(gòu)體(例如,取代的聯(lián)芳(biaryl))并視為本發(fā)明的部分。對(duì)映異構(gòu)體也可通過(guò)使用手性hplc柱分離。

單一的立體異構(gòu)體,例如,基本上不含其立體異構(gòu)體的對(duì)映異構(gòu)體,可通過(guò)以下方式獲得:使用諸如形成非對(duì)映異構(gòu)體的方法,用光學(xué)活性的拆分劑來(lái)拆分外消旋混合物(eliel,e.andwilen,s."stereochemistryoforganiccompounds,"johnwiley&sons,inc.,newyork,1994;lochmuller,c.h.,j.chromatogr.,(1975)113(3):283-302)。本發(fā)明的手性化合物的外消旋混合物可通過(guò)任何合適的方法分開(kāi)和離析,所述方法包括:(1)與手性化合物形成離子性非對(duì)映異構(gòu)的鹽,然后通過(guò)分級(jí)結(jié)晶或者其它方法分離,(2)與手性衍生試劑形成非對(duì)映異構(gòu)的化合物,分離所述非對(duì)映異構(gòu)體,然后轉(zhuǎn)化為純的立體異構(gòu)體,(3)在手性條件下直接分離基本上純的或者富含的立體異構(gòu)體。參見(jiàn):"drugstereochemistry,analyticalmethodsandpharmacology,"irvingw.wainer,ed.,marceldekker,inc.,newyork(1993)。

在方法(1)的情況下,非對(duì)映異構(gòu)的鹽可通過(guò)以下方式形成:使對(duì)映異構(gòu)純的手性堿如馬錢(qián)子堿(brucine)、奎寧、麻黃堿、番木鱉堿(strychnine)、α-甲基-β-苯基乙胺(安非他明)等與帶有酸性官能團(tuán)的不對(duì)稱化合物如羧酸和磺酸反應(yīng)??赏ㄟ^(guò)分級(jí)結(jié)晶或者離子色譜法誘導(dǎo)非對(duì)映異構(gòu)體的鹽分離。對(duì)于氨基化合物的光學(xué)異構(gòu)體的分離而言,加入手性羧酸或者磺酸如樟腦磺酸、酒石酸、扁桃酸或者乳酸可引起非對(duì)映異構(gòu)體的鹽的形成。

可供選擇地,通過(guò)方法(2),使待拆分的底物與手性化合物的一種對(duì)映異構(gòu)體反應(yīng),形成非對(duì)映異構(gòu)對(duì)(e.andwilen,s."stereochemistryoforganiccompounds",johnwiley&sons,inc.,1994,p.322)。非對(duì)映異構(gòu)化合物可通過(guò)以下方式形成:使不對(duì)稱化合物與對(duì)映異構(gòu)純的手性衍生試劑如薄荷基衍生物反應(yīng),接著分離非對(duì)映異構(gòu)體,然后水解得到純的或者富集的對(duì)映異構(gòu)體。確定光學(xué)純度的方法涉及制備外消旋混合物的手性酯,如在堿的存在下制備薄荷基酯例如(-)氯甲酸薄荷基酯,或者mosher酯,乙酸α-甲氧基-α-(三氟甲基)苯基酯(jacobiii.j.org.chem.,(1982)47:4165),然后就兩種阻轉(zhuǎn)異構(gòu)的對(duì)映異構(gòu)體或者非對(duì)映異構(gòu)體的存在而分析1hnmr光譜。阻轉(zhuǎn)異構(gòu)化合物的穩(wěn)定的非對(duì)映異構(gòu)體可遵循分離阻轉(zhuǎn)異構(gòu)的萘基-異喹啉(wo1996/15111)的方法通過(guò)正相和反相色譜分開(kāi)和離析。通過(guò)方法(3),兩種對(duì)映異構(gòu)體的外消旋混合物可使用手性固定相通過(guò)色譜來(lái)分離("chiralliquidchromatography"(1989)w.j.lough,ed.,chapmanandhall,newyork;okamoto,j.ofchromatogr.,(1990)513:375-378)。富集的或者純化的對(duì)映異構(gòu)體可通過(guò)用于區(qū)分帶有不對(duì)稱碳原子的其它手性分子的方法(如旋光性或者圓二色性)來(lái)區(qū)分。

化療劑

某些化療劑與式i的化合物或者其藥用鹽組合已經(jīng)證明具有令人驚訝的及意想不到的體外和體內(nèi)抑制細(xì)胞增殖性質(zhì)。所述化療劑包括:5-fu、鉑劑、伊立替康、多西他賽、多柔比星、吉西他濱、sn-38、卡培他濱、替莫唑胺、厄洛替尼、pd-0325901、紫杉醇、貝伐珠單抗、帕妥珠單抗、他莫昔芬、雷帕霉素、拉帕替尼、plx-4032、mdv3100、阿比特龍和gdc-0973。

5-fu(氟尿嘧啶,5-氟尿嘧啶,cas登記號(hào)51-21-8)為胸苷酸合酶抑制劑并已經(jīng)用于癌癥治療數(shù)十年,所述癌癥包括結(jié)腸直腸癌和胰腺癌(us2802005;us2885396;duschinsky等(1957)j.am.chem.soc.79:4559;hansen,r.m.(1991)cancerinvest.9:637-642)。5-fu的命名為5-氟-1h-嘧啶-2,4-二酮。

亞葉酸(inn)或者甲酰四氫葉酸(usan)((2s)-2-{[4-[(2-氨基-5-甲?;?4-氧代-5,6,7,8-四氫-1h-蝶啶-6-基)甲基氨基]苯甲酰基]氨基}戊二酸,cas登記號(hào)1492-18-8)通常作為亞葉酸鈣或者亞葉酸鈉(或者甲酰四氫葉酸鈣/鈉)給藥,作為方案folfox的一部分用于癌癥化療中,所述化療包括the與化療藥物5-氟尿嘧啶,和在某些實(shí)施方案中,與奧沙利鉑,或者任選地與其它鉑如順鉑的協(xié)同組合。它具有結(jié)構(gòu):

奧沙利鉑(cas登記號(hào)63121-00-6)為用于癌癥化療的配位絡(luò)合物(美國(guó)專利4,169,846)。已經(jīng)在晚期癌癥(胃癌、卵巢癌)中將奧沙利鉑與其它鉑化合物(順鉑、卡鉑)作比較。奧沙利鉑通常在稱為folfox的組合中與氟尿嘧啶和甲酰四氫葉酸給藥用于結(jié)腸直腸癌的治療。

mfolfox6(修飾的folfox6)是指奧沙利鉑(例如,)、5-fu(例如,),和甲酰四氫葉酸(例如,)。

卡鉑(cas登記號(hào)41575-94-4)是用于針對(duì)卵巢癌、肺癌、頭頸癌的化療藥物(us4140707;calvert等(1982)cancerchemother.pharmacol.9:140;harland等(1984)cancerres.44:1693)。卡鉑的命名為環(huán)丁烷-1,1-二羧酸二氨鉑(azanide;cyclobutane-1,1-dicarboxylicacid;platinum)。

順鉑(cisplatin)、順鉑(cisplatinum)或者順式-二氨二氯化亞鉑(ii)(cas登記號(hào)15663-27-1)為用于治療多種類型癌癥的化療藥物,所述癌癥包括肉瘤、一些癌瘤(例如,小細(xì)胞肺癌和卵巢癌)、淋巴瘤以及生殖細(xì)胞腫瘤(germcelltumors)。它是含有鉑的抗癌藥物種類中的第一個(gè)成員,該種類目前還包括卡鉑和奧沙利鉑。順鉑具有如下結(jié)構(gòu):順式-ptcl2(nh3)2。

伊立替康(cas登記號(hào)97682-44-5)為拓?fù)洚悩?gòu)酶1抑制劑,其阻止dna解旋。伊立替康經(jīng)水解活化成拓?fù)洚悩?gòu)酶i的抑制劑sn-38。所述活性代謝物sn-38對(duì)拓?fù)洚悩?gòu)酶i的抑制最終導(dǎo)致對(duì)dna復(fù)制和轉(zhuǎn)錄的抑制。它主要用于結(jié)腸癌,具體而言,與其它化療劑組合用于結(jié)腸癌。所述組合包括用藥方案folfiri,其由輸注的5-氟尿嘧啶、甲酰四氫葉酸和伊立替康組成。

多柔比星(cas登記號(hào)23214-92-8)為蒽環(huán)類抗生素。同所有蒽環(huán)類一樣,它通過(guò)嵌入dna起作用。多柔比星常用于多種癌癥(包括血液惡性腫瘤)、多種癌瘤以及軟組織肉瘤的治療。多柔比星的命名為(8s,10s)-10-(4-氨基-5-羥基-6-甲基-四氫-2h-吡喃-2-基氧基)-6,8,11-三羥基-8-(2-羥基乙?;?-1-甲氧基-7,8,9,10-四氫并四苯-5,12-二酮。

多西他賽(cas登記號(hào)114977-28-5)用于治療乳腺癌、卵巢癌以及nsclc癌癥的紫杉烷(us4814470;us5438072;us5698582;us5714512;us5750561;mangatal等(1989)tetrahedron45:4177;ringel等(1991)j.natl.cancerinst.83:288;bissery等(1991)cancerres.51:4845;herbst等(2003)cancertreat.rev.29:407-415;davies等(2003)expert.opin.pharmacother.4:553-565)。多西他賽的命名為(2r,3s)-n-羧基-3-苯基異絲氨酸,n-叔丁酯,13-酯與5,20-環(huán)氧-1,2,4,7,10,13-六羥基紫杉-11-烯-9-酮4-乙酸酯2-苯甲酸酯,三水合物((2r,3s)-n-carboxy-3-phenylisoserine,n-tert-butylester,13-esterwith5,20-epoxy-1,2,4,7,10,13-hexahydroxytax-11-en-9-one4-acetate2-benzoate,trihydrate)(us4814470;ep253738;cas登記號(hào)114977-28-5)。

吉西他濱(cas登記號(hào)95058-81-4)為阻斷dna復(fù)制的核苷類似物,用于治療多種癌瘤,所述癌瘤包括胰腺癌、乳腺癌、nsclc和淋巴瘤(us4808614;us5464826;hertel等(1988)j.org.chem.53:2406;hertel等(1990)cancerres.50:4417;lund等(1993)cancertreat.rev.19:45-55)。吉西他濱的命名為4-氨基-1-[3,3-二氟-4-羥基-5-(羥基甲基)四氫呋喃-2-基]-1h-嘧啶-2-酮。

sn-38(cas登記號(hào)86639-52-3)為伊立替康的活性代謝物(見(jiàn)上文)。它比伊立替康本身活性強(qiáng)200倍。它的命名為7-乙基-10-羥基-喜樹(shù)堿。

卡培他濱(cas登記號(hào)154361-50-9)為口服給藥的用于轉(zhuǎn)移性乳腺癌和結(jié)腸直腸癌治療的化療劑??ㄅ嗨麨I為在腫瘤中被酶解轉(zhuǎn)化成5-氟尿嘧啶的前藥,其中它抑制dna合成并減慢腫瘤組織的生長(zhǎng)??ㄅ嗨麨I的活化采取具有三種酶解步驟和兩種中間代謝物的途徑形成5-氟尿嘧啶,所述代謝物為5'-脫氧-5-氟胞嘧啶(5'-dfcr)和5'-脫氧-5-氟尿嘧啶(5'-dfur)??ㄅ嗨麨I的命名為[1-(3,4-二羥基-5-甲基-四氫呋喃-2-基)-5-氟-2-氧代-1h-嘧啶-4-基]氨基甲酸戊酯。

替莫唑胺(cas登記號(hào)85622-93-1)為用于治療iv級(jí)星形細(xì)胞瘤(也稱作多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤)以及黑色素瘤(皮膚癌的形式)的烷化劑。替莫唑胺的命名為4-甲基-5-氧代-2,3,4,6,8-五氮雜二環(huán)[4.3.0]壬-2,7,9-三烯-9-甲酰胺。

厄洛替尼(cas登記號(hào)183321-74-6,osi-774,genentech)用于治療非小細(xì)胞肺癌(nsclc)、肺癌、胰腺癌和特異性靶向表皮生長(zhǎng)因子受體(egfr)酪氨酸激酶的幾種其它類型的癌癥(us5747498;us6900221;moyer等(1997)cancerres.57:4838;pollack等(1999)j.pharmcol.exp.ther.291:739;perez-soler等(2004)j.clin.oncol.22:3238;kim等(2002)curr.opin.invest.drugs3:1385-1395;blackhall等(2005)expertopin.pharmacother.6:995-1002)。厄洛替尼的命名為n-(3-乙炔基苯基)-6,7-二(甲氧基甲氧基)喹唑啉-4-胺(cas登記號(hào)183321-74-6)并具有以下結(jié)構(gòu):

pd-0325901(cas登記號(hào)391210-10-9,pfizer)為治療癌癥的可能的口服片劑的第二代、非-atp競(jìng)爭(zhēng)性、變構(gòu)mek抑制劑(us6960614;us6972298;us2004/147478;us2005/085550)。已經(jīng)進(jìn)行ii期臨床試驗(yàn),可能治療乳腺癌、結(jié)腸癌和黑色素瘤。pd-0325901的命名為(r)-n-(2,3-二羥基丙氧基)-3,4-二氟-2-(2-氟-4-碘苯基氨基)苯甲酰胺,并具有以下結(jié)構(gòu):

紫杉醇(cas登記號(hào)33069-62-4,bristol-myerssquibboncology,princetonnj)是從太平洋紫杉樹(shù)短葉紅豆杉(taxusbrevifolia)的樹(shù)皮中分出的化合物,并用于治療肺癌、卵巢癌、乳腺癌以及晚期的卡波西肉瘤(kaposi’ssarcoma)(wani等(1971)j.am.chem.soc.93:2325;mekhail等(2002)expert.opin.pharmacother.3:755-766)。紫杉醇的命名為(2ar-(2a-α,4-β,4a-β,6-β,9-α(α-r*,β-s*),11-α,12-α,12a-α,2b-α))-β-(苯甲酰基氨基)-α-羥基-苯丙酸6,12b-二(乙?;趸?-12-(苯甲?;趸?-2a,3,4,4a,5,6,9,10,11,12,12a,12b-十二氫-4,11-二羥基-4a,8,13,13-四甲基-5-氧代-7,11-亞甲基-1h-環(huán)癸(3,4)苯并(1,2-b)氧雜環(huán)丁-9-基酯,并具有以下結(jié)構(gòu):

貝伐珠單抗(cas登記號(hào)216974-75-3,genentechinc.)為針對(duì)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子vegf的重組人源化單克隆抗體(us6054297;presta等(1997)cancerres.57:4593-4599)。它用于癌癥的治療,其中它通過(guò)阻斷新血管的形成來(lái)抑制腫瘤生長(zhǎng)。貝伐珠單抗是美國(guó)第一種臨床可用的血管發(fā)生抑制劑,其在2004年由fda批準(zhǔn)在轉(zhuǎn)移性結(jié)腸癌和大多數(shù)形式的轉(zhuǎn)移性非小細(xì)胞肺癌的治療中與標(biāo)準(zhǔn)化療組合使用。正在進(jìn)行幾項(xiàng)晚期臨床研究以確定它對(duì)于患有以下疾病的患者的安全性和有效性:輔助的(adjuvant)/非轉(zhuǎn)移性結(jié)腸癌、轉(zhuǎn)移性乳腺癌、轉(zhuǎn)移性腎細(xì)胞癌、轉(zhuǎn)移性多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤、轉(zhuǎn)移性卵巢癌、轉(zhuǎn)移性激素難治性前列腺癌,以及轉(zhuǎn)移性或者不能切除的局部晚期胰腺癌(ferrara等(2004)nat.rev.drugdisc.3:391-400)。貝伐珠單抗的分子量為約149,000道爾頓并且是糖基化的。

貝伐珠單抗和其它人源化的抗-vegf抗體在us6884879中有更多描述。另外的抗-vegf抗體包括g6或者b20系列抗體,例如,g6-31,b20-4.1,(wo2005/012359;wo2005/044853;us7060269;us6582959;us6703020;us6054297;wo98/45332;wo96/30046;wo94/10202;ep0666868b1;us2006/009360;us2005/0186208;us2003/0206899;us2003/0190317;us2003/0203409;20050112126;popkov等(2004)journalofimmunologicalmethods288:149-164。“b20系列抗體”為根據(jù)wo2005/012359的圖27-29的任一項(xiàng)從b20抗體或者b20-衍生的抗體的序列衍生的抗-vegf抗體,將其整個(gè)公開(kāi)特地引入本申請(qǐng)作為參考。在一個(gè)實(shí)施方案中,所述b20系列抗體結(jié)合至人vegf上包含殘基f17、m18、d19、y21、y25、q89、i91、k101、e103和c104的功能表位。其它抗-vegf抗體包括結(jié)合至人vegf上包含殘基f17、m18、d19、y21、y25、q89、i91、k101、e103和c104或者可選擇地包含殘基f17、y21、q22、y25、d63、i83和q89的功能表位的抗體。

曲妥珠單抗(humab4d5-8,rhumabher2,genentech)為重組的dna-衍生的人源化的、igg1κ、單克隆抗體版本的鼠her2抗體,其在基于細(xì)胞的測(cè)定中高親和力選擇性結(jié)合(kd=5nm)至人表皮生長(zhǎng)因子受體2蛋白her2(erbb2)的細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域(us5821337;us6054297;us6407213;us6639055;coussensl,等(1985)science230:1132-9;slamondj,等(1989)science244:707-12)。曲妥珠單抗含有具有結(jié)合至her2的鼠抗體(4d5)互補(bǔ)性決定區(qū)的人構(gòu)架區(qū)。曲妥珠單抗結(jié)合至所述her2抗原并由此抑制癌性細(xì)胞的生長(zhǎng)。在體外測(cè)定和動(dòng)物中已經(jīng)顯示,曲妥珠單抗抑制過(guò)表達(dá)her2的人腫瘤細(xì)胞的增殖(hudziakrm,等(1989)molcellbiol9:1165-72;lewisgd,等(1993)cancerimmunolimmunother;37:255-63;baselgaj,等(1998)cancerres.58:2825-2831)。曲妥珠單抗為具有抗體依賴性細(xì)胞毒性adcc的介質(zhì)(hotalingte,等(1996)[abstract].proc.annualmeetingamassoccancerres;37:471;pegrammd,等(1997)[abstract].procamassoccancerres;38:602;sliwkowski等(1999)seminarsinoncology26(4),suppl12:60-70;yardeny.andsliwkowski,m.(2001)naturereviews:molecularcellbiology,macmillanmagazines,ltd.,vol.2:127-137)。在1998年被批準(zhǔn)治療患有erbb2-過(guò)表達(dá)的轉(zhuǎn)移性乳腺癌的患者(baselga等,(1996)j.clin.oncol.14:737-744)。fda在2006年批準(zhǔn)作為含有多柔比星、環(huán)磷酰胺和紫杉醇的治療方案的部分以用于患有her2-陽(yáng)性、結(jié)節(jié)-陽(yáng)性乳腺癌的患者的輔助治療。有發(fā)展更多her2-定向的癌癥療法的重大的臨床需要,其用于患有對(duì)治療不響應(yīng)或者響應(yīng)微弱的her2-過(guò)表達(dá)的腫瘤或者與her2表達(dá)有關(guān)的其它疾病的患者。

帕妥珠單抗(omnitargtm,rhumab2c4,genentech)為臨床階段、人源化抗體并且是第一種稱作her二聚化抑制劑(hdi)的新型藥劑,其阻斷了her2受體與其它her受體家族成員(即her1/egfr、her3和her4)協(xié)作的能力(us6949245;agus等(2002)cancercell2:127–37;jackson等(2004)cancerres64:2601–9;takai等(2005)cancer104:2701–8)。在癌細(xì)胞中,干擾her2與其它her家族受體協(xié)作的能力阻斷了細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)并可最終導(dǎo)致癌細(xì)胞生長(zhǎng)抑制和癌細(xì)胞的死亡。由于它們獨(dú)特的作用模式,hdi具有在包括不過(guò)表達(dá)her2腫瘤的多種腫瘤中起作用的可能性(mullen等(2007)molecularcancertherapeutics6:93-100)。

替莫唑胺(cas登記號(hào)85622-93-1,scheringplough)是由fda批準(zhǔn)治療間變性星形細(xì)胞瘤的口服化療藥物,并已經(jīng)研究用于其它腦腫瘤類型如多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤(us5260291;stevens等(1984)j.med.chem.27:196;newlands等(1997)cancertreat.rev.23:35-61;danson等(2001)expertrev.anticancerther.1:13-19)。替莫唑胺的命名為(4-甲基-5-氧代-2,3,4,6,8-五氮雜二環(huán)[4.3.0]壬-2,7,9-三烯-9-甲酰胺或者3,4-二氫-3-甲基-4-氧代咪唑并[5,1-d]-as-四嗪-8-甲酰胺(us5260291,casno.85622-93-1),并具有以下結(jié)構(gòu):

他莫昔芬(cas登記號(hào)10540-29-1,)為口服有效的、選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑(serm),其用于乳腺癌的治療并且是目前世界上針對(duì)該適應(yīng)癥銷量最大的藥物。他莫昔芬在1977年首先由fda批準(zhǔn)(icipharmaceuticals,現(xiàn)在的astrazeneca)用于轉(zhuǎn)移性乳腺癌的治療(jordanvc(2006)brjpharmacol147(suppl1):s269-76)。他莫昔芬目前用于絕經(jīng)前和絕經(jīng)后婦女的早期和晚期雌激素受體(er)陽(yáng)性乳腺癌的治療(jordanvc(1993)brjpharmacol110(2):507-17)。fda還批準(zhǔn)它用于預(yù)防具有高的發(fā)展疾病風(fēng)險(xiǎn)的婦女中的乳腺癌以及用于降低對(duì)側(cè)的(在對(duì)生的乳房中)乳腺癌。他莫昔芬的命名為(z)-2-[4-(1,2-二苯基丁-1-烯基)苯氧基]-n,n-二甲基-乙胺(cas登記號(hào)10540-29-1)并具有以下結(jié)構(gòu):

雷帕霉素(cas登記號(hào)53123-88-9,西羅莫司,)為用于預(yù)防器官移植排異反應(yīng)的免疫抑制藥物,并且在腎移植中尤其有用。雷帕霉素為大環(huán)內(nèi)酯抗生素("-霉素"),其首先在來(lái)自稱作拉帕努伊(rapanui)的島(作為復(fù)活節(jié)島(easterisland)更為出名)的土壤樣本中作為細(xì)菌吸水鏈霉菌(streptomyceshygroscopicus)產(chǎn)物被發(fā)現(xiàn)(pritcharddi(2005).drugdiscoverytoday10(10):688–691)。雷帕霉素抑制對(duì)白介素-2(il-2)的應(yīng)答并由此阻斷t-和b-細(xì)胞的活化。雷帕霉素的作用模式為結(jié)合至胞質(zhì)蛋白fk-結(jié)合蛋白12(fkbp12)。通過(guò)直接結(jié)合所述mtor絡(luò)合物1(mtorc1),雷帕霉素-fkbp12絡(luò)合物抑制哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白(mtor)途徑。mtor也稱作frap(fkbp-雷帕霉素相關(guān)蛋白)或者raft(雷帕霉素和fkbp靶蛋白)。雷帕霉素的命名為(3s,6r,7e,9r,10r,12r,14s,15e,17e,19e,21s,23s,26r,27r,34as)-9,10,12,13,14,21,22,23,24,25,26,27,32,33,34,34a-十六氫-9,27-二羥基-3-[(1r)-2-[(1s,3r,4r)-4-羥基-3-甲氧基環(huán)己基]-1-甲基乙基]-10,21-二甲氧基-6,8,12,14,20,26-六甲基-23,27-環(huán)氧-3h-吡啶并[2,1-c][1,4]-氧雜氮雜環(huán)三十一碳烷-1,5,11,28,29(4h,6h,31h)-五酮(cas登記號(hào)53123-88-9),并具有以下結(jié)構(gòu):

拉帕替尼(cas登記號(hào)388082-78-8,gw572016,glaxosmithkline)已被批準(zhǔn)與卡培他濱(roche)組合用于治療患有晚期或者轉(zhuǎn)移性乳腺癌的患者,他們的腫瘤過(guò)表達(dá)her2(erbb2)并且他們已經(jīng)接受包括蒽環(huán)類抗生素、紫杉烷和曲妥珠單抗的先前治療。拉帕替尼為atp-競(jìng)爭(zhēng)性表皮生長(zhǎng)因子(egfr)和her2/neu(erbb-2)雙重酪氨酸激酶抑制劑(us6727256;us6713485;us7109333;us6933299;us7084147;us7157466;us7141576),其通過(guò)結(jié)合至egfr/her2蛋白激酶結(jié)構(gòu)域的atp-結(jié)合口袋來(lái)抑制受體自磷酸化作用和活化。拉帕替尼的命名為n-(3-氯-4-(3-氟芐基氧基)苯基)-6-(5-((2-(甲基磺?;?乙基氨基)甲基)呋喃-2-基)喹唑啉-4-胺,并具有以下結(jié)構(gòu):

威羅菲尼(rg7204,plx-4032,cas登記號(hào)1029872-55-5)已經(jīng)顯示在多種癌細(xì)胞系中引起程序性細(xì)胞死亡,例如黑色素瘤細(xì)胞系。威羅菲尼中斷b-raf/mek/erk途徑上的b-raf/mek步驟-如果所述b-raf具有常見(jiàn)的v600e突變。威羅菲尼在患者中起作用,例如在fda所批準(zhǔn)的黑色素瘤患者中,他們的腫瘤具有v600ebraf突變(即,在b-raf蛋白上的氨基酸位置號(hào)600,正常的纈氨酸被谷氨酸所替代)。大約60%的黑色素瘤具有所述v600ebraf突變。所述v600e突變存在于多種其它癌癥中,所述其它癌癥包括淋巴瘤、結(jié)腸癌、黑色素瘤、甲狀腺癌和肺癌。威羅菲尼具有下列結(jié)構(gòu):

(威羅菲尼)(genentech,inc.)在美國(guó)被批準(zhǔn)并被指定用于治療患者的藥品,所述患者患有通過(guò)fda批準(zhǔn)的試驗(yàn)檢測(cè)具有brafv600e突變的不能切除的或者轉(zhuǎn)移黑色素瘤。(威羅菲尼)不被推薦用于缺乏brafv600e突變的黑色素瘤患者(野生型braf黑色素瘤)。

mdv3100(cas登記號(hào)915087-33-1)為開(kāi)發(fā)用于激素難治性前列腺癌治療的雄激素受體拮抗劑藥物。已經(jīng)報(bào)道在服用所述藥物一個(gè)月后前列腺特異性抗原血清水平降低高達(dá)89%。與比卡魯胺相反的是,mdv3100不能促進(jìn)ar向細(xì)胞核的易位并且另外還阻止ar對(duì)dna以及ar對(duì)共活化物蛋白的結(jié)合。發(fā)現(xiàn)mdv3100對(duì)正在進(jìn)行的i和ii期試驗(yàn)中的轉(zhuǎn)移性去雄抗性(castration-resistant)前列腺癌患者是臨床有效的。mdv3100的命名為4-(3-(4-氰基-3-(三氟甲基)苯基)-5,5-二甲基-4-氧代-2-硫代咪唑烷-1-基)-2-氟-n-甲基苯甲酰胺。

阿比特龍(cas登記號(hào)154229-19-3;見(jiàn)美國(guó)專利5,604,213和5,618,807)是目前正在研究用于去雄抗性前列腺癌的藥物。它通過(guò)抑制cyp17a1(cyp450c17)(也稱作17α-羥化酶/17,20裂解酶的酶)阻斷睪酮的形成。該酶涉及dhea和雄烯二酮的形成,其最終可代謝成睪酮。阿比特龍的命名為(3s,8r,9s,10r,13s,14s)-10,13-二甲基-17-(吡啶-3-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15-十二氫-1h-環(huán)戊二烯并[a]菲-3-醇。它還作為以下乙酸酯前藥注冊(cè):乙酸(3s,8r,9s,10r,13s,14s)-10,13-二甲基-17-(吡啶-3-基)-2,3,4,7,8,9,10,11,12,13,14,15-十二氫-1h-環(huán)戊二烯并[a]菲-3-基酯。

(乙酸阿比特龍)(johnson&johnsoncorp)是在美國(guó)被批準(zhǔn)并被指定與潑尼松組合用于治療患有轉(zhuǎn)移去雄抗性的前列腺癌的患者的藥品,所述患者已經(jīng)接受了含有多西他賽的在先化療。

gdc-0973為mek的選擇性抑制劑,mek也稱作絲裂原活化蛋白激酶激酶(mapkk),所述酶是常在人腫瘤中活化的ras/raf/mek/erk途徑的關(guān)鍵組分。在缺少外源性生長(zhǎng)因子的情況下,mek/erk途徑的不適當(dāng)活化促進(jìn)細(xì)胞生長(zhǎng)。評(píng)估gdc-0973用于實(shí)體瘤的i期臨床試驗(yàn)正在進(jìn)行中。gdc-0973可如國(guó)際專利申請(qǐng)公開(kāi)wo2007044515(a1)中所述來(lái)制備。gdc-0973的命名為:(s)-(3,4-二氟-2-(2-氟-4-碘苯基氨基)苯基)(3-羥基-3-(哌啶-2-基)氮雜環(huán)丁烷-1-基)甲酮,并具有以下結(jié)構(gòu):

藥物組合物

本發(fā)明的藥物組合物或者制劑包含式i化合物、化療劑以及一種或者多種可藥用的載體、助流劑、稀釋劑或者賦形劑的組合。

一個(gè)實(shí)例包括用于口服遞送式i化合物,或者其鹽,和一種或者多種藥學(xué)上可接受的載體、助流劑、稀釋劑,或者賦形劑的第一制劑,和用于口服遞送威羅菲尼(vemerafenib)或者其鹽,和一種或者多種藥學(xué)上可接受的載體、助流劑、稀釋劑,或者賦形劑的第二制劑。在一個(gè)實(shí)例中,第一制劑包含gdc-0068或者其鹽。

本發(fā)明的式i化合物和化療劑可以非溶劑化形式以及與可藥用的溶劑(如水、乙醇等)的溶劑化形式存在,并且意圖是本發(fā)明包括所有溶劑化的和非溶劑化的形式。

本發(fā)明的式i化合物和化療劑還可以呈不同的互變異構(gòu)形式存在,并且所有這些形式都包括在本發(fā)明的范圍中。術(shù)語(yǔ)“互變異構(gòu)體”或者“互變異構(gòu)形式”是指可通過(guò)低能壘互相轉(zhuǎn)化的不同能量的結(jié)構(gòu)異構(gòu)體。例如,質(zhì)子互變異構(gòu)體(也稱為質(zhì)子移變互變異構(gòu)體)包括通過(guò)質(zhì)子遷移進(jìn)行的互相轉(zhuǎn)化,如酮-烯醇異構(gòu)化和亞胺-烯胺異構(gòu)化。價(jià)鍵互變異構(gòu)體包括通過(guò)一些成鍵電子的重組進(jìn)行的互相轉(zhuǎn)化。

藥物組合物包括由多于一種(例如,兩種)藥學(xué)活性劑與任何無(wú)藥學(xué)活性的賦形劑、稀釋劑、載體或者助流劑一起組成的大量的(bulk)組合物和單獨(dú)的劑量單位,所述藥學(xué)活性劑包括式i化合物和選自本申請(qǐng)所述另外藥劑名單的化療劑。所述大量的組合物和各單獨(dú)劑量單位可含有固定量的上述藥學(xué)活性劑。所述大量的組合物是尚未形成單獨(dú)劑量單位的物質(zhì)。示例性劑量單位為口服劑量單位如片劑、丸劑、膠囊劑等。類似地,本申請(qǐng)所述的通過(guò)給予本發(fā)明的藥物組合物治療患者的方法也意在包括大量的組合物和單獨(dú)的劑量單位的給藥。

藥物組合物還包括同位素標(biāo)記的本發(fā)明化合物,其與本申請(qǐng)所述的化合物相同,但是事實(shí)上一個(gè)或者多個(gè)原子被原子質(zhì)量或者質(zhì)量數(shù)不同于自然界中常見(jiàn)原子質(zhì)量或者質(zhì)量數(shù)的原子代替。預(yù)期任何具體原子或者元素的所有同位素都包括在本發(fā)明化合物和它們的用途的范圍中??梢氡景l(fā)明化合物中的示例性同位素包括氫、碳、氮、氧、磷、硫、氟、氯和碘的同位素,如2h、3h、11c、13c、14c、13n、15n、15o、17o、18o、32p、33p、35s、18f、36cl、123i和125i。某些同位素標(biāo)記的本發(fā)明化合物(例如,用3h和14c標(biāo)記的化合物)用于化合物和/或者底物的組織分布測(cè)定。氚標(biāo)記的(3h)和碳-14(14c)同位素由于其易于制備及可檢測(cè)性,從而是有用的。此外,用較重的同位素如氘(即,2h)取代可得到起因于較好的代謝穩(wěn)定性(例如,體內(nèi)半衰期增加或者劑量需求降低)的某些治療優(yōu)點(diǎn),因此在一些情況中可以是優(yōu)選的。發(fā)射正電子的同位素如15o、13n、11c和18f用于正電子發(fā)射成像(pet)研究以檢查底物受體的占據(jù)。同位素標(biāo)記的本發(fā)明化合物通??赏ㄟ^(guò)遵循與方案中和/或者下文本申請(qǐng)的實(shí)施例中披露的操作所類似的操作,通過(guò)用同位素標(biāo)記的試劑取代非同位素標(biāo)記的試劑來(lái)制備。

式i化合物和化療劑可按照標(biāo)準(zhǔn)制藥規(guī)范來(lái)配制以用于治療哺乳動(dòng)物(其包括人)中過(guò)度增殖性病癥的治療性處置(其包括預(yù)防性治療)的治療性組合。本發(fā)明提供了包含式i化合物與一種或者多種可藥用的載體、助流劑、稀釋劑或者賦形劑的藥物組合物。

合適的載體、稀釋劑和賦形劑是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的,并且包括以下物質(zhì),如碳水化合物、蠟、水溶性聚合物和/或者水可溶脹聚合物(swellablepolymer)、親水性物質(zhì)或者疏水性物質(zhì)、明膠、油、溶劑、水等。所用的具體載體、稀釋劑或者賦形劑將取決于應(yīng)用本發(fā)明化合物的方式和目的。通?;诒绢I(lǐng)域技術(shù)人員認(rèn)為給予哺乳動(dòng)物安全的溶劑(gras)來(lái)選擇溶劑。一般而言,安全溶劑為無(wú)毒性含水溶劑如水和可在水中溶解或者混溶的其它無(wú)毒性溶劑。合適的含水溶劑包括水、乙醇、丙二醇、聚乙二醇(例如,peg400、peg300)等及其混合物。制劑還可包括以下物質(zhì)中的一種或者多種:緩沖劑、穩(wěn)定劑、表面活性劑、潤(rùn)濕劑、潤(rùn)滑劑、乳化劑、助懸劑、防腐劑、抗氧化劑、遮光劑(opaquingagent)、助流劑、加工助劑(processingaid)、著色劑、增甜劑、芳香劑、矯味劑和提供藥物(即本發(fā)明化合物或者其藥物組合物)的優(yōu)質(zhì)外觀或者輔助制造藥物產(chǎn)品(即藥物)的其它已知添加劑。

制劑可使用常規(guī)溶出和混合操作制備。例如,將大塊的藥品(即,本發(fā)明化合物或者化合物的經(jīng)穩(wěn)定形式(例如,與環(huán)糊精衍生物或者其它已知復(fù)合劑(complexationagent)的復(fù)合物))在一種或者多種上述的賦形劑存在下溶于合適的溶劑中。通常將本發(fā)明化合物配制成提供容易可控制藥物的劑量且使患者能夠依從所給出的方案的藥物劑型。

取決于用于給藥藥物的方法,用于施用的藥物組合物(或者制劑)可按多種方式包裝。一般地,用于分配的物品包括容器,容器內(nèi)存放有適當(dāng)形式的藥物制劑。合適的容器是本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的,并且包括以下物質(zhì),如瓶(塑料的和玻璃的)、小袋(sachet)、安瓿、塑料袋、金屬圓筒等。容器還可包括防止不慎重取得包裝中的內(nèi)含物的的防干擾裝置(tamper-proofassemblage)。此外,在容器上具有描述容器中的內(nèi)含物的標(biāo)簽。所述標(biāo)簽還可包括適當(dāng)?shù)淖⒁馐马?xiàng)。

可制備本發(fā)明化合物的藥物制劑用于多種給藥途徑和類型。例如,具有期望的純度的式i的化合物可任選與藥用稀釋劑、載體、賦形劑或者穩(wěn)定劑(remington'spharmaceuticalsciences(1995)18thedition,mackpubl.co.,easton,pa)以凍干制劑、磨細(xì)的粉末劑或者水溶液劑形式混合。配制可如下進(jìn)行:在環(huán)境溫度在適當(dāng)?shù)膒h以及在適當(dāng)?shù)募兌扰c生理學(xué)可接受的載體(即在采用的劑量和濃度下對(duì)受體是無(wú)毒性的載體)混合。制劑的ph主要取決于具體用途和化合物的濃度,但范圍可為約3至約8。

所述藥物制劑優(yōu)選為無(wú)菌的。特別地,用于體內(nèi)給藥的制劑必須為無(wú)菌的。所述滅菌通過(guò)濾過(guò)經(jīng)無(wú)菌濾膜容易地完成。

藥物制劑通??蓛?chǔ)存為固體組合物、凍干制劑或者水溶液劑。

所述藥物制劑將按照與良好醫(yī)學(xué)實(shí)踐一致的方式(即量、濃度、時(shí)間表、過(guò)程、媒介物和給藥途徑)來(lái)確定劑量和給藥。在此背景下考慮的因素包括所治療的具體病癥、所治療的具體哺乳動(dòng)物、個(gè)體患者的臨床情況、病癥的起因、藥物的遞送位點(diǎn)、給藥方法、給藥的時(shí)間表和醫(yī)學(xué)實(shí)踐者已知的其它因素。所給藥的化合物的“治療有效量”將由這些考慮因素控制,并且是預(yù)防、改善或者治療凝結(jié)因子介導(dǎo)的病癥所需的最小量。所述量?jī)?yōu)選低于對(duì)宿主有毒的或者使宿主顯著地更易于出血的量。

作為通常的建議,每劑量口服或者腸胃外給藥的式i化合物的初始藥學(xué)有效量應(yīng)當(dāng)在約0.01-1000mg/kg的范圍,即約0.1至20mg/kg的患者體重/天的范圍,所用化合物的通常起始范圍為0.3至15mg/kg/天。所要給藥的式i化合物的劑量和化療劑的劑量各自可以為約1mg至約1000mg/單位劑量形式,或者,為約10mg至約100mg/單位劑量形式。式i化合物和化療劑的劑量可以約1:50至約50:1以重量計(jì)的比率或者以約1:10至約10:1以重量計(jì)的比率給藥。

可接受的稀釋劑、載體、賦形劑和穩(wěn)定性在所用的劑量和濃度下對(duì)受體是無(wú)毒性的,并且包括緩沖劑如磷酸鹽、枸櫞酸鹽和其它有機(jī)酸;抗氧化劑,包括抗壞血酸和蛋氨酸(methionine);防腐劑(如十八烷基二甲基芐基氯化銨;氯化六甲雙銨(hexamethoniumchloride);苯扎氯銨、芐索氯胺;苯酚、丁醇或者芐醇;對(duì)羥基苯甲酸烷基酯,如對(duì)羥基苯甲酸甲酯或者對(duì)羥基苯甲酸丙酯;兒茶酚;間苯二酚(resorcinol);環(huán)己醇;3-戊醇和間甲酚);低分子量(少于約10個(gè)殘基)多肽;蛋白質(zhì),如血清白蛋白、明膠或者免疫球蛋白;親水性聚合物,如聚乙烯吡咯烷酮;氨基酸,如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、組氨酸、精氨酸或者賴氨酸;單糖、二糖和其它碳水化合物,包括葡萄糖、甘露糖或者糊精;螯合劑,如edta;糖如蔗糖、甘露醇、海藻糖或者山梨醇;成鹽的抗衡離子,如鈉;金屬絡(luò)合物(例如,zn-蛋白質(zhì)絡(luò)合物);和/或者非離子型表面活性劑,如tweentm、pluronicstm或者聚乙二醇(peg)?;钚运幬锍煞诌€可包埋在通過(guò)例如凝聚技術(shù)或者通過(guò)界面聚合制備的微膠囊中,例如在膠體藥物遞送系統(tǒng)(例如脂質(zhì)體、白蛋白微球、微乳液、納米顆粒和納米膠囊(nanocapsules))中或者在巨乳液(macroemulsion)中,分別為羥基甲基纖維素或者明膠微膠囊和聚-(甲基丙烯酸甲酯)微膠囊。所述技術(shù)披露于remington'spharmaceuticalsciences18thedition,(1995)mackpubl.co.,easton,pa中。

可制備式i的化合物的緩釋制劑。緩釋制劑的合適實(shí)例包括含有式i的化合物的的固態(tài)疏水性聚合物的半滲透性基質(zhì),其中基質(zhì)以成形的物品形式(例如薄膜或者微膠囊)存在。緩釋基質(zhì)的實(shí)例包括聚酯、水凝膠(例如,聚(甲基丙烯酸2-羥基乙酯)或者聚(乙烯醇))、聚交酯(us專利3,773,919)、l-谷氨酸和γ-乙基-l-谷氨酸的共聚物、非降解性乙烯-乙酸乙烯酯、降解性乳酸-羥乙酸共聚物如luprondepottm(由乳酸-羥乙酸共聚物和醋酸亮丙瑞林組成的可注射微球)和聚-d-(-)-3-羥基丁酸。

所述藥物制劑包括適于本申請(qǐng)?jiān)斒龅慕o藥途徑的制劑。制劑可適宜地以單位劑量形式存在并可通過(guò)藥學(xué)領(lǐng)域公知的任何方法制備。技術(shù)和制劑通常參見(jiàn)remington'spharmaceuticalsciences18thed.(1995)mackpublishingco.,easton,pa。所述方法包括使活性成分與構(gòu)成一種或者多種助劑(accessoryingredient)的載體結(jié)合的步驟。通常制劑如下制備:使活性成分與液態(tài)載體或者微細(xì)分散的固態(tài)載體或者與這兩種載體同時(shí)均勻和緊密的結(jié)合,然后必要時(shí),對(duì)產(chǎn)品進(jìn)行成型。

可將適于口服給藥的式i的化合物和/或化療劑的制劑制備成離散的單位如丸劑、硬的或者軟的(例如)明膠膠囊、扁膠囊、糖錠(troches)、錠劑(lozenges)、含水或者油混懸劑、可分散粉劑或者顆粒劑、乳劑、糖漿劑或者酏劑,其各自含有預(yù)設(shè)量的式i化合物和/或化療劑。式i化合物的量和化療劑的量可作為組合制劑在丸劑、膠囊劑、溶液劑或者混懸劑中配制??蛇x擇地,式i化合物和化療劑可交替在丸劑、膠囊劑、溶液劑或者混懸劑中單獨(dú)配制。

制劑可根據(jù)制備藥物組合物的領(lǐng)域已知的任何方法制備,所述組合物可含有一種或者多種試劑,包括增甜劑、矯味劑、著色劑和防腐劑,以提供適口的制劑。壓制片可如下制備:在合適的機(jī)器中對(duì)自由流動(dòng)形式(如粉末或者顆粒)的活性成分以及任選混合的粘合劑、潤(rùn)滑劑、惰性稀釋劑、防腐劑、表面活性劑或者分散劑進(jìn)行壓制。模制片可如下制備:在合適的機(jī)器中對(duì)用惰性液態(tài)稀釋劑潤(rùn)濕的粉末狀活性成分的混合物進(jìn)行模制??扇芜x對(duì)片劑進(jìn)行包衣或者刻痕,并任選進(jìn)行配制以提供活性成分從其中緩慢或者控制釋放。

藥物制劑的片劑賦形劑可包括:填充劑(或者稀釋劑),增加組成片劑的粉末狀藥物的大體積;崩解劑,當(dāng)它被消化時(shí)促進(jìn)片劑分裂成小碎片,理想地是個(gè)體藥物顆粒,并且促進(jìn)藥物的快速溶出和吸收;粘合劑,確保顆粒劑和片劑可以需要的機(jī)械強(qiáng)度形成,并在已經(jīng)被壓縮后保持片劑在一起,防止在包裝、運(yùn)輸和日常搬運(yùn)期間分裂成它的組分粉末;助流劑,改善生產(chǎn)期間組成片劑的粉末的流動(dòng)性;潤(rùn)滑劑,確保生產(chǎn)期間壓片粉末不粘附于用于壓片的設(shè)備,它們通過(guò)壓縮改善粉末狀混合物的流動(dòng)并且當(dāng)從完成的片劑設(shè)備中推出時(shí)最小化摩擦力和破裂;抗粘附劑,其具有與助流劑類似的功能,減少生產(chǎn)期間組成片劑的粉末與用于沖出片劑形狀的設(shè)備之間的粘著力;調(diào)味劑,其摻入片劑給予其更加令人愉快的味道或者掩蔽不愉快的味道;以及著色劑,有助于識(shí)別和患者順應(yīng)性。

含有活性成分以及混合有適于制造片劑的無(wú)毒性生理學(xué)可接受的賦形劑的片劑是可接受的。這些賦形劑可以是,例如,惰性稀釋劑,如碳酸鈣或者碳酸鈉、乳糖、磷酸鈣或者磷酸鈉;成粒劑和崩解劑,如玉米淀粉或者海藻酸;粘合劑,如淀粉、明膠或者阿拉伯膠;以及潤(rùn)滑劑,如硬脂酸鎂、硬脂酸或者滑石。片劑可以是未包衣的或者可通過(guò)已知技術(shù)(包括微膠囊化)包衣,以延遲在胃腸道的崩解和吸收,由此在較長(zhǎng)的時(shí)間提供持續(xù)的作用。例如,可采用定時(shí)延遲物質(zhì),如單獨(dú)的或者與蠟結(jié)合的單硬脂酸甘油酯或者二硬脂酸甘油酯。

對(duì)于治療眼部或者其它外部組織如嘴和皮膚而言,所述制劑優(yōu)選應(yīng)用為局部軟膏劑或者乳膏劑,其含有的活性成分的量為例如,0.075至20%w/w。當(dāng)配制成軟膏劑時(shí),活性成分可與石蠟或者可與水混溶的軟膏基質(zhì)一起使用??晒┻x擇地,活性成分可與水包油性乳膏基質(zhì)一起配制成乳膏。

如果期望的話,乳膏基質(zhì)的水相可包括多元醇,即,具有兩個(gè)或者更多個(gè)羥基的醇,如丙二醇、丁-1,3-二醇、甘露醇、山梨醇、甘油和聚乙二醇(包括peg400)及這些醇的混合物。局部制劑可包括增強(qiáng)活性成分通過(guò)皮膚或者其它作用區(qū)域吸收或者滲透的化合物。所述皮膚滲透增強(qiáng)劑的實(shí)例包括二甲基亞砜和相關(guān)類似物。

本發(fā)明的乳劑的油相可由已知成分以已知方式構(gòu)成,包含至少一種乳化劑與脂肪或者油或者與脂肪和油兩者的混合物。優(yōu)選地,還包括親水性乳化劑以及作為穩(wěn)定劑的親脂性乳化劑。同時(shí),含有或者不含有穩(wěn)定劑的乳化劑構(gòu)成了所謂的乳化蠟,所述蠟和油和脂肪一起構(gòu)成了形成軟膏制劑的油性分散相的所謂乳化軟膏基質(zhì)。適用于本發(fā)明制劑的乳化劑和乳化穩(wěn)定劑包括60、80、十八醇/十六醇、芐醇、肉豆蔻醇、單硬脂酸甘油酯和月桂基硫酸鈉。

所述藥物制劑的含水混懸劑含有活性物質(zhì)以及混合有適于制備水性混懸劑的賦形劑。所述賦形劑包括助懸劑,如羧甲基纖維素鈉、交聯(lián)羧甲基纖維素、聚維酮、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、海藻酸鈉、聚乙烯吡咯烷酮、西黃蓍膠和阿拉伯膠,以及分散或者潤(rùn)濕劑,如天然存在的磷脂(例如,卵磷脂)、烯化氧與脂肪酸的縮合產(chǎn)物(例如,聚氧乙烯硬脂酸酯)、環(huán)氧乙烷與長(zhǎng)鏈脂肪醇的縮合產(chǎn)物(例如,十七亞乙氧基十六醇)、環(huán)氧乙烷與衍生自脂肪酸和己糖醇脫水物的偏酯的縮合產(chǎn)物(例如,聚氧乙烯脫水山梨糖醇單油酸酯)。水性混懸劑還可含有一種或者多種防腐劑如對(duì)羥基苯甲酸乙酯或者對(duì)羥基苯甲酸正丙酯、一種或者多種著色劑、一種或者多種矯味劑和一種或者多種增甜劑如蔗糖或者糖精。

藥物組合物可呈無(wú)菌注射制劑,如無(wú)菌注射水性混懸劑或者油性混懸液制劑形式存在。該混懸液可使用上文已提及的合適的分散劑或者潤(rùn)濕劑和助懸劑根據(jù)本領(lǐng)域已知方法配制。無(wú)菌注射制劑還可以是于無(wú)毒性的腸胃外可接受的稀釋劑或者溶劑中的無(wú)菌注射溶液或者混懸液,如于1,3-丁二醇中的溶液,或者制備為凍干粉末。可使用的可接受媒介物和溶劑包括水、林格氏溶液(ringer'ssolution)和等張氯化鈉溶液。此外,無(wú)菌不揮發(fā)性油(sterilefixedoil)通??捎米魅軇┗蛘咧鷳医橘|(zhì)。出于該目的,可采用任何溫和的不揮發(fā)性油,包括合成性甘油一酯或者甘油二酯。此外,脂肪酸如油酸同樣可用于制備注射劑。

可與載體物質(zhì)結(jié)合以產(chǎn)生單一劑量形式的活性成分的量將隨著所治療的宿主和具體的給藥模式而變化。例如,意在對(duì)人類口服給藥的定時(shí)釋放制劑可含有約1至1000毫克活性物質(zhì),以及混合有適當(dāng)和適宜量的載體物質(zhì),所述載體其可占總組合物(重量:重量)的約5至約95%??芍苽渌幬锝M合物以提供給藥時(shí)容易測(cè)量的量。例如,意在用于靜脈輸注的水溶液每毫升溶液可含有約3至500μg活性成分,從而合適體積的輸注以約30毫升/hr的速率出現(xiàn)。

適于腸胃外給藥的制劑包括水性和非水性無(wú)菌注射溶液劑,其可含有抗氧化劑、緩沖劑、抑菌劑和使得制劑與預(yù)期受體的血液等張的溶質(zhì);以及水性和非水性無(wú)菌混懸劑,其可包括助懸劑和增稠劑。

適于局部給藥至眼部的制劑還包括滴眼劑,其中將活性成分溶于或者懸浮于合適的載體(尤其是活性成分的含水溶劑)中。在所述制劑中存在的活性成分的濃度優(yōu)選為約0.5至20%w/w,例如約0.5至10%w/w,例如約1.5%w/w。

適于在口內(nèi)局部給藥的制劑包括糖錠(lozenge),其含有于矯味基質(zhì)(通常是蔗糖和阿拉伯膠或者西黃蓍膠)中的活性成分;錠劑(pastille),其含有于惰性基質(zhì)(如明膠和甘油,或者蔗糖和阿拉伯膠)中的活性成分;以及漱口劑,其包含于液態(tài)載體中的活性成分。

適于直腸給藥的制劑可呈現(xiàn)為栓劑形式,其具有合適基質(zhì)(其包含例如可可脂或者水楊酸酯)。

適于肺內(nèi)或者經(jīng)鼻給藥的制劑具有例如為0.1至500微米的粒度(包括在0.1和500微米之間,增量為例如0.5、1、30微米、35微米等的粒度),其通過(guò)鼻道經(jīng)快速吸入給藥或者通過(guò)口經(jīng)吸入給藥,以便到達(dá)肺泡囊(alveolarsacs)。合適的制劑包括活性成分的水性或者油性溶液劑。適于氣霧劑或者干粉給藥的制劑可根據(jù)常規(guī)方法制備,并可與其它治療藥物(如迄今用于治療或者預(yù)防下文所述的病癥的化合物)一起遞送。

適于陰道給藥的制劑可呈現(xiàn)為陰道栓劑、棉塞(tampon)、乳膏劑、凝膠劑、糊劑、泡沫或者噴霧制劑,這些制劑除了活性成分外還含有本領(lǐng)域已知為適當(dāng)?shù)妮d體。

制劑可包裝在單位劑量或者多劑量容器例如密封安瓿或者小瓶中,并且可在冷凍干燥(凍干)條件下儲(chǔ)存,在立即使用前僅需要加入無(wú)菌液態(tài)載體例如水,用于注射。即時(shí)注射溶液劑(extemporaneousinjectionsolutionsandsuspension)和混懸劑從前述種類的無(wú)菌粉末、顆粒和片劑制備。優(yōu)選的單位劑量制劑是含有本申請(qǐng)上文所述的日劑量或者單位日亞劑量(sub-dose)或者其適當(dāng)分?jǐn)?shù)的活性成分的制劑。

本發(fā)明還提供了獸用組合物,由此其含有上文定義的至少一種活性成分以及獸用載體。獸用載體是用于給藥所述組合物目的的物質(zhì),并可為固態(tài)、液態(tài)或者氣態(tài)物質(zhì),這些物質(zhì)在獸醫(yī)領(lǐng)域要么是惰性的要么是可接受的,并且與活性成分相容。這些獸用組合可經(jīng)腸胃外、口服或者經(jīng)任何其它期望的途徑給藥。

組合療法

式i的化合物或者其藥用鹽可與其它化療劑或其藥用鹽組合用于治療過(guò)度增殖性疾病或者病癥,所述過(guò)度增殖性疾病或者病癥包括腫瘤、癌癥和新生物組織,以及惡化前和非新生物的或者非惡性的過(guò)度增殖性病癥。在某些實(shí)施方案中,式i的化合物或者其藥用鹽在作為組合療法的劑量用藥方案中與具有抗過(guò)度增殖性質(zhì)或者用于治療過(guò)度增殖性病癥的第二化合物或其藥用鹽組合。所述劑量用藥方案的第二化合物優(yōu)選具有與式i的化合物或者其藥用鹽互補(bǔ)的活性,從而使得它們不能不利地影響彼此。這種化合物可以對(duì)預(yù)期目的有效的量給藥。在一個(gè)實(shí)施方案中,所述治療性組合通過(guò)劑量用藥方案給藥,其中所述治療有效量的式i化合物或者其藥用鹽在每日兩次至每三周一次(q3wk)的范圍內(nèi)給藥,并且治療有效量的化療劑在每日兩次至每三周一次的范圍內(nèi)給藥。

在一個(gè)實(shí)例中,應(yīng)答于化療劑如多西他賽的給藥,癌細(xì)胞正調(diào)節(jié)途徑,例如pi3k/akt途徑,試圖避開(kāi)化療并變得對(duì)化療耐藥。在另一實(shí)例中,某些癌癥與pten狀態(tài)、pi3k或者akt中的突變相關(guān),其使得癌癥固有地對(duì)化療耐藥。通過(guò)與化療劑組合地給藥式i化合物,式i化合物抑制應(yīng)答于化療劑正調(diào)節(jié)的,或者在pten狀態(tài)、pi3k或者akt途徑中具有突變的途徑。在一個(gè)實(shí)施方案中,本申請(qǐng)的組合防止癌細(xì)胞對(duì)某些化療耐藥。在另一個(gè)實(shí)施方案中,本申請(qǐng)的組合治療已經(jīng)接受了化療劑,但是已經(jīng)對(duì)治療耐藥或者已經(jīng)治療失敗的患者。

在另一實(shí)例中,應(yīng)答于使用folfox(或者5-fu、奧沙利鉑或者順鉑,和亞葉酸中的一個(gè)或者多個(gè))的治療,某些癌癥例如胃癌和結(jié)腸癌誘導(dǎo)pakt的增加,其可作為結(jié)腸癌應(yīng)答于所述治療耐藥的機(jī)制。在另一實(shí)例中,某些癌癥例如胃癌和結(jié)腸癌與pten、pi3k或者akt突變相關(guān),其可作為所述癌癥應(yīng)答于所述治療耐藥的機(jī)制。

在一個(gè)實(shí)施方案中,將gdc-0068或者其鹽與folfox(或者5-fu、奧沙利鉑或者順鉑,和亞葉酸中的一個(gè)或者多個(gè))組合給藥,以防止癌細(xì)胞對(duì)所述治療耐藥。在另一個(gè)實(shí)施方案中,將gdc-0068或者其鹽與folfox(或者5-fu、奧沙利鉑或者順鉑,和亞葉酸中的一個(gè)或者多個(gè))組合給藥,以治療癌癥患者,所述患者已經(jīng)接受了一種或者多種化療劑,但是已經(jīng)對(duì)所述治療變得耐藥或者已經(jīng)治療失敗。在一個(gè)具體實(shí)例中,癌癥為胃癌。在另一實(shí)例中,癌癥為結(jié)腸癌。

在另一實(shí)例中,某些癌癥例如乳腺癌、肺癌(例如,非-小肺癌)、前列腺癌(例如,crcp)、胃癌和頭/頸癌與pten狀態(tài)、pi3k或者akt中的突變相關(guān),其可作為所述癌癥應(yīng)答于使用紫杉烷如多西他賽或者紫杉醇的治療耐藥的機(jī)制。在一個(gè)實(shí)施方案中,將gdc-0068或者其鹽與紫杉烷(例如,多西他賽)組合給藥,以防止癌細(xì)胞對(duì)紫杉烷治療變得耐藥。在另一個(gè)實(shí)施方案中,將gdc-0068或者其鹽與紫杉烷(例如,多西他賽)組合給藥,以治療癌癥患者,所述患者已經(jīng)接受了紫杉烷,但是已經(jīng)對(duì)所述治療變得耐藥或者已經(jīng)治療失敗,在一個(gè)實(shí)例中由于pten狀態(tài)、pi3k或者akt突變。在一個(gè)具體實(shí)例中,所述癌癥為前列腺癌或者激素難治性前列腺癌。在另一實(shí)例中,所述癌癥為耐切除的前列腺癌并且所述組合還包含激素療法,例如潑尼松。在另一實(shí)例中,所述組合在紫杉烷劑量足夠低時(shí)是有效的,以防止發(fā)生有害的副作用,例如肝毒性、中性粒細(xì)胞減少癥、超敏反應(yīng)和液體潴留,其中單獨(dú)的紫杉烷的這種劑量不會(huì)有效。

在另一實(shí)例中,應(yīng)答于使用紫杉烷例如多西他賽或者紫杉醇的治療,某些癌癥例如前列腺癌(例如,crcp)誘導(dǎo)pakt的增加,其可作為前列腺癌應(yīng)答于所述治療耐藥的機(jī)制。在一個(gè)實(shí)施方案中,將gdc-0068或者其鹽與紫杉烷(例如,多西他賽)組合給藥,以防止癌細(xì)胞對(duì)紫杉烷治療變得耐藥。在另一個(gè)實(shí)施方案中,劑gdc-0068或者其鹽與紫杉烷(例如,多西他賽)組合給藥,以治療癌癥患者,所述患者已經(jīng)接受了紫杉烷,但是已經(jīng)對(duì)所述治療變得耐藥或者已經(jīng)治療失敗。在一個(gè)具體實(shí)例中,所述癌癥為前列腺癌。在另一實(shí)例中,所述癌癥為耐切除的前列腺癌并且所述組合還包含激素治療例如潑尼松。

所述組合療法可作為同時(shí)或者先后用藥方案給藥。當(dāng)先后給藥時(shí),所述組合可以在兩次或者更多次給藥中給予。所述組合給藥包括使用分開(kāi)制劑的共同給藥,以及以任一次序的連續(xù)給藥,其中優(yōu)選有兩種(或者所有)活性劑同時(shí)發(fā)揮它們生物學(xué)活性的時(shí)間段。

在本發(fā)明的一個(gè)具體方面中,可在一種或者多種藥劑給藥開(kāi)始之后給予式i的化合物或者其藥用鹽,歷時(shí)約1至約10天。在本發(fā)明的另一個(gè)具體方面,可在組合給藥開(kāi)始之前給予式i的化合物或者其藥用鹽,歷時(shí)約1至約10天。在本發(fā)明的另一個(gè)具體方面,式i的化合物或者其藥用鹽的給藥與所述化療劑的給藥在同一天開(kāi)始。

任何上述共同給藥藥劑的適合劑量為目前所使用的劑量并且可由于新近鑒定的藥劑和其它化療劑或者治療組合作用(協(xié)同作用)而降低,如增加治療指數(shù)或者減輕毒性或者其它副作用或者后果。

在抗癌療法的具體實(shí)施方案中,式i的化合物或者其藥用鹽,可與化療劑組合,以及與手術(shù)療法和放射療法組合。為了實(shí)現(xiàn)期望的組合治療效應(yīng),應(yīng)選擇式i的化合物或者其藥用鹽和其它一種或者多種藥學(xué)活性化療劑的量和給藥的相對(duì)時(shí)機(jī)。

藥物組合物的給藥

所述化合物可通過(guò)任何適于所要治療病癥的途徑給藥。適合的途徑包括口服途徑、腸胃外途徑(其包括皮下、肌內(nèi)、靜脈內(nèi)、動(dòng)脈內(nèi)、吸入、皮內(nèi)、鞘膜內(nèi)、硬膜外和輸注技術(shù))、經(jīng)皮途徑、直腸途徑、鼻途徑、局部途徑(其包括口腔含服和舌下途徑)、陰道途徑、腹膜內(nèi)途徑、肺內(nèi)途徑和鼻內(nèi)途徑。局部給藥還可涉及經(jīng)皮給藥如經(jīng)皮貼劑或者離子電滲療法裝置的使用。

藥物的制劑在remington'spharmaceuticalsciences,18thed.,(1995)mackpublishingco.,easton,pa中有討論。藥物制劑的其它實(shí)例可在liberman,h.a.andlachman,l.,eds.,pharmaceuticaldosageforms,marceldecker,vol3,2nded.,newyork,ny中找到。對(duì)于局部免疫抑制性治療,可通過(guò)損害內(nèi)給藥給予所述化合物,其包括在移植前用所述抑制劑灌注或者以其它方式接觸移植物。應(yīng)當(dāng)理解的是,優(yōu)選的途徑可隨著(例如)接受者的情況而變化。口服給予所述化合物時(shí),它可以與可藥用的載體、助流劑或者賦形劑一起配制為丸劑、膠囊劑、片劑等等。腸胃外給予所述化合物時(shí),如下文詳述,它可與可藥用的腸胃外媒介物或者稀釋劑一起并以單位劑量可注射的形式配制。

治療人類患者的劑量可以為約20mg至約1600mg/天的式i的化合物或者其藥用鹽。通常的劑量可以為約50mg至約800mg的所述化合物。取決于包括所述具體化合物的吸收、分布、代謝和排泄的藥代動(dòng)力學(xué)(pk)和藥效學(xué)(pd)性質(zhì),可每日一次(qd)、每日兩次(bid)或者更頻繁地給予劑量。除此之外,毒性因素可影響劑量和給藥用量方案。當(dāng)口服給藥時(shí),所述丸劑、膠囊劑或者片劑可每日兩次、每日一次或者更不頻繁地(如對(duì)于具體的時(shí)間周期,每周一次或者每?jī)芍芑蛘呷芤淮?攝入。所述用藥方案可重復(fù)多個(gè)治療周期。

治療方法

(1)式i的化合物或者其藥用鹽和(2)化療劑的治療性組合用于治療疾病、病癥和/或障礙,其包括但不限于,哺乳動(dòng)物中由akt激酶所調(diào)節(jié)的疾病、病癥和/或障礙。根據(jù)本發(fā)明的方法可治療的癌癥包括但不限于,間皮瘤、子宮內(nèi)膜癌、乳腺癌、肺癌、卵巢癌、前列腺癌(其包括去雄抗性前列腺癌“crpc”)、胰腺癌、黑色素瘤、胃癌、結(jié)腸癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、頭頸癌。

制品

在本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施方案中,提供了用于治療上述疾病和病癥的含有式i的化合物或者其藥用鹽的制品或者“試劑盒”。在一個(gè)實(shí)施方案中,所述試劑盒包含容器和式i的化合物或者其藥用鹽。

所述試劑盒還可包含附在容器上或者容器中的標(biāo)簽或者包裝說(shuō)明書(shū)。術(shù)語(yǔ)“包裝說(shuō)明書(shū)”用來(lái)指通常包括在治療產(chǎn)品的市售包裝中的說(shuō)明書(shū),其含有關(guān)于適應(yīng)癥、用法、劑量、給藥、禁忌癥和/或者注意事項(xiàng)的信息,這些信息涉及所述治療產(chǎn)品的使用。合適的容器包括,例如,瓶、小瓶、注射器、發(fā)泡包裝(blisterpack)等。容器可從多種材料(如玻璃或者塑料)形成。容器可裝有有效治療所述病癥的式i的化合物或其藥用鹽或者其制劑,并可具有無(wú)菌入口(例如,容器可為靜脈注射溶液袋或者具有可由皮下注射針頭刺穿的塞子的小瓶)。在組合物中至少一種活性藥物是式i的化合物或其藥用鹽。標(biāo)簽或者包裝說(shuō)明書(shū)指示所述組合物用于治療選擇的病癥如癌癥。在一個(gè)實(shí)施方案中,標(biāo)簽或者包裝說(shuō)明書(shū)指示包含式i的化合物或其藥用鹽的組合物可用于治療起因于異常細(xì)胞生長(zhǎng)的病癥。標(biāo)簽或者包裝說(shuō)明書(shū)還可指示所述組合物可用于治療其它病癥。可供選擇地或者另外地,所述制品還可包含第二種容器,所述容器包含藥用緩沖液,如抑菌性注射用水(bwfi)、磷酸鹽緩沖生理鹽水、林格氏溶液和葡萄糖溶液。試劑盒還可包括從商業(yè)和使用者角度看是期望的其它物質(zhì),包括其它緩沖液、稀釋劑、濾器、針頭和注射器。

試劑盒還可包含給藥式i的化合物或其藥用鹽以及第二種藥物制劑(如果存在)的說(shuō)明。例如,若試劑盒包含第一種組合物(含有式i的化合物或其藥用鹽)和第二種藥物制劑,則試劑盒還可包含將第一種和第二種藥物組合物同時(shí)、先后或者分開(kāi)給予需要所述制劑的患者的說(shuō)明。

在另一實(shí)施方案中,試劑盒適于遞送固態(tài)口服形式的式i的化合物或其藥用鹽,如片劑或者膠囊劑。這樣的試劑盒優(yōu)選包括多個(gè)單位劑量。所述試劑盒可以包括針對(duì)預(yù)期用途為目的的劑量卡片。這樣的試劑盒的一個(gè)實(shí)例是“泡罩包裝”。泡罩包裝在包裝工業(yè)中是公知的,并且廣泛用于包裝藥物單位劑量形式。如果期望的話,可提供記憶輔助裝置(memoryaid),其可呈例如數(shù)字、字母或者其它標(biāo)記形式,或者具有日歷插入物,所述記憶輔助裝置指定在可對(duì)所述劑量進(jìn)行給藥的治療時(shí)間表中的天數(shù)。

根據(jù)一實(shí)施方案,試劑盒可包含(a)在其中含有式i的化合物或其藥用鹽的第一個(gè)容器;以及任選地(b)在其中含有第二種藥物制劑的第二個(gè)容器,其中所述第二種藥物制劑包含具有抗過(guò)度增殖活性的第二化合物。可供選擇地或者另外地,所述試劑盒還可包含第三個(gè)容器,其包含藥用緩沖液,如抑菌性注射用水(bwfi)、磷酸鹽緩沖生理鹽水、林格氏溶液和葡萄糖溶液。其還可包括從商用和使用者角度來(lái)看是期望的其它物質(zhì),包括其它緩沖液、稀釋劑、濾器、針頭和注射器。

在試劑盒包含式i的化合物或其藥用鹽和第二種治療藥物(即化療劑)的組合物的某些其它實(shí)施方案中,所述試劑盒可包含用于容納分開(kāi)的組合物的容器,如分開(kāi)的瓶或者分開(kāi)的箔包裝(foilpacket),然而,分開(kāi)的組合物還可容納在單一的未分開(kāi)的容器中。典型地,試劑盒包含給藥分開(kāi)的組分的說(shuō)明。當(dāng)分開(kāi)的組分優(yōu)選以不同劑量形式(例如口服和腸胃外)給藥時(shí),當(dāng)以不同劑量間隔給藥時(shí),或者當(dāng)對(duì)聯(lián)用的單獨(dú)組分進(jìn)行滴定對(duì)主治醫(yī)師是期望之時(shí),試劑盒形式是特別有益的。

本發(fā)明的具體方面

在本發(fā)明的一個(gè)具體方面中,所述過(guò)度增殖性病癥為癌癥。

在本發(fā)明的一個(gè)具體方面中,所述癌癥與pten突變有關(guān)。

在本發(fā)明的一個(gè)具體方面中,所述癌癥與akt突變、過(guò)表達(dá)或者擴(kuò)增有關(guān)。

在本發(fā)明的一個(gè)具體方面中,所述癌癥與與pi3k突變有關(guān)。

在本發(fā)明的一個(gè)具體方面中,所述癌癥與與her2突變有關(guān)。

在本發(fā)明的一個(gè)具體方面中,所述癌癥選自乳腺癌、肺癌、卵巢癌、前列腺癌(例如,去雄抗性的前列腺癌)、黑色素瘤、胃癌、結(jié)腸癌、腎癌、頭頸癌和神經(jīng)膠質(zhì)瘤。

在本發(fā)明的一個(gè)具體方面中,對(duì)所述哺乳動(dòng)物給予式i的化合物或者其藥用鹽和5-fu。

在本發(fā)明的一個(gè)具體方面中,對(duì)所述哺乳動(dòng)物給予式i的化合物或者其藥用鹽、5-fu和奧沙利鉑并且所述癌癥為胃癌、卵巢癌或者結(jié)腸癌。

在本發(fā)明的一個(gè)具體方面中,對(duì)所述哺乳動(dòng)物給予式i的化合物或者其藥用鹽、5-fu和奧沙利鉑并且所述癌癥為胃癌、前列腺癌、頭部或者頸部癌。

在本發(fā)明的一個(gè)具體方面中,對(duì)所述哺乳動(dòng)物給予式i的化合物或者其藥用鹽、5-fu、奧沙利鉑和亞葉酸并且所述癌癥為胃癌、卵巢癌或者結(jié)腸癌。

在本發(fā)明的一個(gè)具體方面中,對(duì)所述哺乳動(dòng)物給予式i的化合物或者其藥用鹽、5-fu、奧沙利鉑和亞葉酸并且所述癌癥為胃癌、前列腺癌、頭部或者頸部癌。

在本發(fā)明的一個(gè)具體方面,將所述式i化合物,例如,gdc-0068,或者其藥用鹽,以及5-fu、奧沙利鉑,和亞葉酸中的一個(gè)或者多個(gè)給藥于所述哺乳動(dòng)物以治療癌癥并且所述癌癥為her2陰性胃癌(例如,第一線)、結(jié)腸直腸癌(例如,第一線,任選與vegf抑制劑如貝伐單抗組合)、scc頭/頸癌(例如,第一線)、結(jié)腸直腸癌(例如,第二線),或者胰腺癌(例如,第二線)。

在本發(fā)明的一個(gè)具體方面中,對(duì)所述哺乳動(dòng)物給予式i的化合物或者其藥用鹽和卡鉑。

在本發(fā)明的一個(gè)具體方面中,對(duì)所述哺乳動(dòng)物給予式i的化合物或者其藥用鹽和卡鉑并且所述癌癥為乳腺癌、肺癌或者前列腺癌。

在本發(fā)明的一個(gè)具體方面中,對(duì)所述哺乳動(dòng)物給予式i的化合物或者其藥用鹽和卡鉑并且所述癌癥為乳腺癌、肺癌、前列腺癌、頭部或者頸部癌。

在本發(fā)明的一個(gè)具體方面中,對(duì)所述哺乳動(dòng)物給予式i的化合物或者其藥用鹽和伊立替康。

在本發(fā)明的一個(gè)具體方面中,對(duì)所述哺乳動(dòng)物給予式i的化合物或者其藥用鹽和伊立替康并且所述癌癥為結(jié)腸癌。

在本發(fā)明的一個(gè)具體方面中,對(duì)所述哺乳動(dòng)物給予式i的化合物或者其藥用鹽和紫杉醇以治療子宮內(nèi)膜癌(例如,第二線)

在本發(fā)明的一個(gè)具體方面中,對(duì)所述哺乳動(dòng)物給予式i的化合物或者其藥用鹽和多西他賽。

在本發(fā)明的一個(gè)具體方面中,對(duì)所述哺乳動(dòng)物給予式i的化合物或者其藥用鹽和多西他賽并且所述癌癥為乳腺癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤、肺癌、黑色素瘤、卵巢癌或者前列腺癌。

在本發(fā)明的一個(gè)具體方面中,對(duì)所述哺乳動(dòng)物給予式i的化合物或者其藥用鹽和多西他賽并且所述癌癥為乳腺癌、卵巢癌或者前列腺癌。

在本發(fā)明的一個(gè)具體方面,將所述式i化合物,例如,gdc-0068,或者其藥用鹽和多西他賽給藥于所述哺乳動(dòng)物并且所述癌癥為去雄抗性的前列腺癌(例如,第一線)、her2陰性乳腺癌(例如,第一線)、胃癌(例如,第二線)、胃食管連接部癌癥(例如,第二線)、非-小細(xì)胞肺癌(例如,第二線)、卵巢癌(例如,第二線),和鱗狀細(xì)胞癌頭頸癌(例如,第二線)。

在本發(fā)明的一個(gè)具體方面中,對(duì)所述哺乳動(dòng)物給予式i的化合物或者其藥用鹽和多柔比星。

在本發(fā)明的一個(gè)具體方面中,對(duì)所述哺乳動(dòng)物給予式i的化合物或者其藥用鹽和多柔比星并且所述癌癥為乳腺癌、肺癌、卵巢癌、神經(jīng)膠質(zhì)瘤或者前列腺癌。

在本發(fā)明的一個(gè)具體方面中,對(duì)所述哺乳動(dòng)物給予式i的化合物或者其藥用鹽和sn-38。

在本發(fā)明的一個(gè)具體方面中,對(duì)所述哺乳動(dòng)物給予式i的化合物或者其藥用鹽和sn-38并且所述癌癥為結(jié)腸癌。

在本發(fā)明的一個(gè)具體方面中,對(duì)所述哺乳動(dòng)物給予式i的化合物或者其藥用鹽和替莫唑胺。

在本發(fā)明的一個(gè)具體方面中,對(duì)所述哺乳動(dòng)物給予式i的化合物或者其藥用鹽和替莫唑胺并且所述癌癥為神經(jīng)膠質(zhì)瘤。

在本發(fā)明的一個(gè)具體方面中,對(duì)所述哺乳動(dòng)物給予式i的化合物或者其藥用鹽和鉑劑。

在本發(fā)明的一個(gè)具體方面中,對(duì)所述哺乳動(dòng)物給予式i的化合物或者其藥用鹽和鉑劑并且所述癌癥為卵巢癌。

在本發(fā)明的一個(gè)具體方面中,對(duì)所述哺乳動(dòng)物給予式i的化合物或者其藥用鹽和gdc-0973或者其藥用鹽。

在本發(fā)明的一個(gè)具體方面中,對(duì)所述哺乳動(dòng)物給予式i的化合物或者其藥用鹽和gdc-0973或者其藥用鹽并且所述癌癥為胰腺癌、前列腺癌、黑色素瘤或者乳腺癌。

在本發(fā)明的一個(gè)具體方面中,對(duì)所述哺乳動(dòng)物給予式i的化合物或者其藥用鹽和plx-4032或者其藥用鹽。

在本發(fā)明的一個(gè)具體方面中,對(duì)所述哺乳動(dòng)物給予式i的化合物或者其藥用鹽和plx-4032或者其藥用鹽并且所述癌癥為黑色素瘤。

在本發(fā)明的一個(gè)具體方面中,可口服給予式i的化合物或者其藥用鹽。

在本發(fā)明的一個(gè)具體方面中,將式i的化合物或者其藥用鹽配制成片劑。

一般制備操作

實(shí)施例

為了示例說(shuō)明本發(fā)明,包括下列實(shí)施例。然而,應(yīng)當(dāng)理解的是,這些實(shí)施例不限制本發(fā)明并且僅僅意在提出實(shí)施本發(fā)明的方法。本領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)認(rèn)識(shí)到所述化學(xué)反應(yīng)可容易地適于制備多種本發(fā)明的其它akt抑制劑,并且認(rèn)為制備本發(fā)明化合物的可選方法在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。例如,根據(jù)本發(fā)明合成非示例性化合物可通過(guò)對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見(jiàn)的修改來(lái)順利進(jìn)行,所述修改例如,通過(guò)適當(dāng)保護(hù)干擾基團(tuán),通過(guò)采用不同于所述試劑的本領(lǐng)域已知的其它適合試劑和/或通過(guò)進(jìn)行反應(yīng)條件的路線修改??蛇x擇地,應(yīng)當(dāng)認(rèn)為本申請(qǐng)所公開(kāi)的或者本領(lǐng)域已知的其它反應(yīng)具有制備本發(fā)明其它化合物的適用性。

實(shí)施例1

(s)-3-氨基-2-(4-氯苯基)-1-(4-((5r,7r)-7-羥基-5-甲基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮二鹽酸鹽的制備

步驟1:向1l圓底燒瓶中加入(r)-(+)-長(zhǎng)葉薄荷酮(76.12g,0.5mmol)、無(wú)水nahco3(12.5g)和無(wú)水乙醚(500ml)。在氮?dú)庀聦⒎磻?yīng)混合物用冰浴冷卻。歷時(shí)30分鐘滴加溴(25.62ml,0.5mmol)。過(guò)濾混合物并在冰-冷卻浴中小心地將其加入到naoet(21%,412ml,1.11mmol)中。將混合物在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜,然后加入1l的5%hcl和300ml的乙醚。用乙醚(2x300ml)萃取水相。將合并的有機(jī)相用水洗滌,干燥并濃縮。將殘余物加入到溫?zé)岬陌被妍}酸鹽(37.5g)和naoac(37.5g)在水(300ml)中的溶液,然后加入沸騰的乙醇(300ml),得到澄清的溶液。將混合物回流2.5小時(shí),然后在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜。將混合物用1l的水和300ml的乙醚處理。用乙醚(2x300ml)萃取水相。將合并的有機(jī)相用水洗滌,干燥并濃縮。將殘余物通過(guò)真空蒸餾純化(在0.8mmhg73-76℃),得到(2r)-2-甲基-5-(丙-2-亞基)環(huán)戊羧酸乙酯(63g,64%)。1hnmr(cdcl3,400mhz)4.13(m,2h),3.38(d,j=16hz,0.5h),2.93(m,0.5h),2.50-2.17(m,2h),1.98(m,1h),1.76(m,1h),1.23(m,6h),1.05(m,6h).

步驟2:用干冰/異丙醇將(2r)-2-甲基-5-(丙-2-亞基)環(huán)戊羧酸乙酯(24g,0.122mol)在乙酸乙酯(100ml)中的溶液冷卻至-68℃。將臭氧化的氧氣(5-7立方英尺/小時(shí)的o2)通過(guò)該溶液鼓泡3.5小時(shí)。在室溫將反應(yīng)混合物用氮?dú)獯迪粗敝令伾АU婵粘ヒ宜嵋阴ゲ堄辔锶苡?50ml的乙酸并經(jīng)冰水冷卻,加入鋅粉(45g)。將溶液攪拌30分鐘然后過(guò)濾。用2nnaoh(1.3l)和nahco3中和濾液。將水相用乙醚(3x200ml)萃取。合并有機(jī)相,用水洗滌,干燥并濃縮,得到(2r)-2-甲基-5-氧代環(huán)戊羧酸乙酯(20g,96%)。1hnmr(cdcl3,400mhz)4.21(m,2h),2.77(d,j=11.2hz,1h),2.60(m,1h),2.50-2.10(m,3h),1.42(m,1h),1.33(m,3h),1.23(m,3h).

步驟3:向(2r)-2-甲基-5-氧代環(huán)戊羧酸乙酯(20g,117.5mmol)和硫脲(9.2g,120.9mmol)的混合物在乙醇(100ml)中的溶液加入koh(8.3g,147.9mmol)在水(60ml)中的溶液。將混合物回流10小時(shí)。冷卻后,除去溶劑并在0℃將殘余物用濃hcl(12ml)中和,然后用dcm(3x150ml)萃取。除去溶劑并通過(guò)硅膠色譜(用己烷/乙酸乙酯(2:1)洗脫)將殘余物純化,得到(r)-2-巰基-5-甲基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[d]嘧啶-4-醇(12g,56%).ms(apci+)[m+h]+183.

步驟4:(r)-2-巰基-5-甲基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[d]嘧啶-4-醇(12g,65.8mmol)在蒸餾水(100ml)中的混懸液加入蘭尼鎳(15g)和nh4oh(20ml)。將混合物回流3小時(shí)然后過(guò)濾,并將濾液濃縮,得到(r)-5-甲基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[d]嘧啶-4-醇(9.89g,99%)。ms(apci+)[m+h]+151.

步驟5:將(r)-5-甲基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[d]嘧啶-4-醇(5.8g,38.62mmol)在pocl3(20ml)中的混合物回流5分鐘。真空除去過(guò)量的pocl3并將殘余物溶于dcm(50ml)中。然后將混合物加入飽和的nahco3(200ml)中。將水相用dcm(3x100ml)萃取,并將合并的有機(jī)相干燥并濃縮。通過(guò)硅膠色譜(用乙酸乙酯洗脫)將殘余物純化,得到(r)-4-氯-5-甲基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[d]嘧啶(3.18g,49%)。1hnmr(cdcl3,400mhz)8.81(s,1h),3.47(m,1h),3.20(m,1h),3.05(m,1h),2.41(m,1h),1.86(m,3h),1.47(m,3h).

步驟6:以三份向(r)-4-氯-5-甲基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[d]嘧啶(2.5g,14.8mmol)在chcl3(60ml)中的溶液加入mcpba(8.30g,37.0mmol)。將混合物在室溫?cái)嚢?天。將混合物冷卻至0℃并向其中先后滴加na2s2o3(10g)在水(60ml)中的溶液、na2co3(6g)在水(20ml)中的溶液。將反應(yīng)混合物攪拌20分鐘。將水相用chcl3(2x200ml)萃取,并將合并的有機(jī)相在低溫(<25℃)濃縮。通過(guò)硅膠色譜(用乙酸乙酯-dcm/meoh(20:1)洗脫)將殘余物純化,得到(r)-4-氯-5-甲基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[d]嘧啶-氧化物(1.45g,53%)。1hnmr(cdcl3,400mhz)8.66(s,1h),3.50(m,1h),3.20(m,2h),2.44(m,1h),1.90(m,1h),1.37(d,j=7.2hz,3h).

步驟7:將(r)-4-氯-5-甲基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[d]嘧啶-氧化物(1.45g,7.85mmol)在乙酸酐(20ml)中的溶液加熱至110℃持續(xù)2小時(shí)。冷卻后,真空除去過(guò)量的溶劑。通過(guò)硅膠色譜(用己烷/乙酸乙酯(3:1)洗脫)將殘余物純化,得到乙酸(5r)-4-氯-5-甲基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[d]嘧啶-7-基酯(1.25g,70%)。1hnmr(cdcl3,400mhz)8.92(m,1h),6.30-6.03(m,1h),3.60-3.30(m,1h),2.84(m,1h),2.40-2.20(m,1h),2.15(d,j=6hz,2h),1.75(m,2h),1.47(d,j=6.8,2h),1.38(d,j=7.2,1h).ms(apci+)[m+h]+227.

步驟8:向乙酸(5r)-4-氯-5-甲基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[d]嘧啶-7-基酯(0.5g,2.2mmol)在nmp(10ml)中的溶液加入1-boc-哌嗪(0.9g,4.8mmol)。將反應(yīng)混合物加熱至110℃持續(xù)12小時(shí)。冷卻后,將反應(yīng)混合物用乙酸乙酯(200ml)稀釋并用水(6x100ml)洗滌。將有機(jī)相干燥并濃縮。通過(guò)硅膠色譜(用乙酸乙酯洗脫)將殘余物純化,得到4-((5r)-7-乙酰氧基-5-甲基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.6g,72%)。1hnmr(cdcl3,400mhz)8.60(d,1h),6.05-5.90(m,1h),3.80-3.30(m,9h),2.84(m,1h),2.20-(m,1h),1.49(s,9h),1.29-1.20(m,3h).ms(apci+)[m+h]+377.通過(guò)手性分離hplc(chiralcelodh柱,250x20mm,己烷/etoh60:40,21ml/分鐘)將所得非對(duì)映異構(gòu)體的混合物純化。第一個(gè)峰(rt=3.73分鐘)為4-((5r,7r)-7-乙酰氧基-5-甲基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.144g,24%)。第二個(gè)峰(rt=5.66分鐘)為4-((5r,7s)-7-乙酰氧基-5-甲基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.172g,29%)。ms(apci+)[m+h]+377.

步驟9:向4-((5r,7r)-7-乙酰氧基-5-甲基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.144g,0.383mmol)在thf(4ml)中的溶液加入lioh(3m,2ml)。將混合物在室溫?cái)嚢?小時(shí),然后用2nhcl(3ml)淬滅。除去溶劑并通過(guò)硅膠色譜(用乙酸乙酯洗脫)將殘余物純化,得到4-((5r,7r)-7-羥基-5-甲基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(89mg,70%)。1hnmr(cdcl3,400mhz)8.52(s,1h),5.48(br,1h),5.14(m,1h),3.82-3.40(m,9h),2.20(m,2h),1.49(s,9h),1.19(d,j=6.8hz,3h).ms(apci+)[m+h]+335.

步驟10:在dcm(5ml)中將4-((5r,7r)-7-羥基-5-甲基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯用hcl(4m的二噁烷溶液,2ml)處理6小時(shí),得到(5r,7r)-5-甲基-4-(哌嗪-1-基)-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[d]嘧啶-7-醇二鹽酸鹽。ms(apci+)[m+h]+235.

步驟11:將2,4-二甲氧基芐基氨基甲酸叔丁酯(3.96g,14.8mmol)溶于thf(74ml)并冷卻至-78℃。歷時(shí)五分鐘滴加丁基鋰(7.44ml,16.3mmol)處理該溶液,得到淡黃色溶液。將溶液攪拌15分鐘后滴加氯(甲氧基)甲烷(1.35ml,17.8mmol)(純態(tài)的)。將反應(yīng)混合物在-78℃攪拌10分鐘,然后慢慢溫?zé)嶂镰h(huán)境溫度過(guò)夜。將反應(yīng)混合物真空濃縮,得到黃色凝膠狀物,將其在半飽和nh4cl溶液和乙醚之間分配。萃取水相一次,并合并有機(jī)相。將有機(jī)層用先后用水、鹽水洗滌,分離,以na2so4干燥,過(guò)濾并真空濃縮。1hnmr證實(shí)了期望的接近純的(>90%)2,4-二甲氧基芐基(甲氧基甲基)氨基甲酸叔丁酯(4.81g,104%產(chǎn)率),為淡黃色油狀物,其無(wú)需純化即可使用。

步驟12:將(r)-4-芐基-3-(2-(4-氯苯基)乙酰基)噁唑烷-2-酮(3.00g,9.10mmol)溶于dcm(91ml)并冷卻至-78℃。先后向溶液中加入ticl4的1m甲苯溶液(11.4ml,11.4mmol)、diea(1.66ml,9.55mmol),得到暗紫色反應(yīng)混合物。將該反應(yīng)混合物攪拌15分鐘之后滴加2,4-二甲氧基芐基(甲氧基甲基)氨基甲酸叔丁酯(3.40g,10.9mmol)在dcm(10ml)中的溶液。將反應(yīng)混合物在-78℃攪拌15分鐘,然后在鹽水-冰浴中將其溫?zé)嶂?18℃持續(xù)一小時(shí)。歷時(shí)2.5小時(shí)將該反應(yīng)混合物慢慢溫?zé)嶂?℃。然后加入飽和的nh4cl溶液(100ml)將反應(yīng)混合物淬滅。分離各相,并將有機(jī)層用dcm萃取一次。將合并的有機(jī)層以mgso4干燥,過(guò)濾并真空濃縮,得到黃色油狀物。通過(guò)色譜(用4:1己烷:乙酸乙酯洗脫的硅膠)將殘余物純化,得到純物質(zhì),為無(wú)色油狀物2,4-二甲氧基芐基((s)-3-((r)-4-芐基-2-氧代噁唑烷-3-基)-2-(4-氯苯基)-3-氧代丙基)氨基甲酸叔丁酯(4.07g,73.5%產(chǎn)率)。在環(huán)境溫度將所述2,4-二甲氧基芐基((s)-3-((r)-4-芐基-2-氧代噁唑烷-3-基)-2-(4-氯苯基)-3-氧代丙基)氨基甲酸叔丁酯(680mg,1.12mmol)溶于dcm(10.6ml)和水(560ul;19:1dcm:水)。用ddq(380mg,1.67mmol)處理該溶液,并將反應(yīng)混合物攪拌一天,通過(guò)tlc和lcms分析得到反應(yīng)完成。將反應(yīng)混合物用dcm稀釋并用半飽和的nahco3溶液洗滌。將有機(jī)層以mgso4干燥,過(guò)濾并真空濃縮,得到黃橙色油狀物。通過(guò)色譜(用9:1己烷:乙酸乙酯洗脫的硅膠)將殘余物純化,得到醛副產(chǎn)物和(s)-3-((r)-4-芐基-2-氧代噁唑烷-3-基)-2-(4-氯苯基)-3-氧代丙基氨基甲酸叔丁酯的混合物(不可分離的),為淡黃色油狀物(729mg合并重量)。lc/ms(apci+)m/z359.1[m-boc+h]+.

步驟13:向lioh-h2o(0.0978g,2.33mmol)在2:1thf:h2o(33ml)中的溶液加入35%h2o2(0.240ml,2.91mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?5分鐘,然后冷卻至0℃。通過(guò)滴液漏斗滴加含有(s)-3-((r)-4-芐基-2-氧代噁唑烷-3-基)-2-(4-氯苯基)-3-氧代丙基氨基甲酸叔丁酯(0.535g,1.17mmol)和2,4-二甲氧基苯甲醛(0.194g,1.17mmol)的混合物在thf(7ml)中的溶液。將冰浴慢慢溫?zé)?,并將反?yīng)混合物攪拌過(guò)夜。然后將反應(yīng)混合物冷卻至0℃,加入1mna2so3(7ml)。將混合物攪拌5分鐘,然后溫?zé)嶂潦覝夭嚢枇硗?0分鐘。然后將反應(yīng)混合物轉(zhuǎn)移至分液漏斗并用乙醚(3x)洗滌。用khso4(固體)酸化水層,并用dcm(2x)萃取該混合物。將合并的萃取物干燥(na2so4),過(guò)濾并濃縮,得到(s)-3-(叔丁氧基羰基氨基)-2-(4-氯苯基)丙酸(0.329g,94.2%產(chǎn)率),為白色殘余物。lc/ms(apci+)m/z200[m-boc+h]+.

步驟14:向(s)-3-(叔丁氧基羰基氨基)-2-(4-氯苯基)丙酸(0.329g,1.10mmol)在2:1二噁烷:dcm(10ml)中的溶液加入4mhcl/二噁烷(5.49ml,22.0mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜(16小時(shí)),此后將其濃縮至1/3體積。將所得混濁的混合物用乙醚稀釋,并將混合物再濃縮至1/3體積。將混合物再用乙醚(20ml)稀釋,并通過(guò)具有氮?dú)鈮旱闹刑?hào)玻璃料漏斗(mediumfritfunnel)過(guò)濾將固體分離,用乙醚(5x10ml)沖洗,在氮?dú)鈮焊稍?,并真空干燥,得?s)-3-氨基-2-(4-氯苯基)丙酸鹽酸鹽(0.199g,76.8%產(chǎn)率),為白色固體。hplc>99面積%純。lc/ms(apci+)m/z200.

步驟15:向(s)-3-氨基-2-(4-氯苯基)丙酸鹽酸鹽(0.199g,0.843mmol)和四甲基氫氧化銨五水合物(0.382g,2.11mmol)在10:1mecn:h2o(7.7ml)中的溶液加入boc2o(0.368g,1.69mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜(12小時(shí)),此后在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上除去mecn。將混合物用水稀釋并用乙醚(2x)洗滌。用khso4(固體)酸化水層,并用dcm萃取該混合物,并將合并的萃取物干燥(na2so4),過(guò)濾并濃縮,得到(s)-3-(叔丁氧基羰基氨基)-2-(4-氯苯基)丙酸(0.229g,90.6%產(chǎn)率),為泡沫狀物。hplc>99面積%純。lc/ms(apci+)m/z200[m-boc+h]+.

步驟16:向(5r,7r)-5-甲基-4-(哌嗪-1-基)-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[d]嘧啶-7-醇二鹽酸鹽(88mg,0.29mmol)和(s)-3-(叔丁氧基羰基氨基)-2-(4-氯苯基)丙酸(86mg,0.29mmol)在dcm(10ml)和二異丙基乙基胺(0.22ml,1.3mmol)的溶液中加入hbtu(110mg,0.29mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢?小時(shí)。除去溶劑并將殘余物溶于乙酸乙酯(100ml),用水(6x50ml)洗滌。將有機(jī)相干燥并濃縮,得到(s)-2-(4-氯苯基)-3-(4-((5r,7r)-7-羥基-5-甲基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙基氨基甲酸叔丁酯(116mg,78%).1hnmr(cdcl3,400mhz)8.51(s,1h),7.34-7.20(m,4h),5.15-5.09(m,2h),4.15-4.05(m,1h),3.87-3.85(m,2h),3.78-3.38(m,7h),3.22-3.19(m,1h),2.20-2.10(m,2h),1.48(s,9h),1.41(s,9h),1.14-1.12(d,j=7.2hz,3h).ms(apci+)[m+h]+516.

步驟17:在dcm(5ml)中將(s)-2-(4-氯苯基)-3-(4-((5r,7r)-7-羥基-5-甲基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙基氨基甲酸叔丁酯用hcl(4m的二噁烷溶液,2ml)處理6小時(shí),得到(s)-3-氨基-2-(4-氯苯基)-1-(4-((5r,7r)-7-羥基-5-甲基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)丙-1-酮二鹽酸鹽。1hnmr(d2o,400mhz)8.38(s,1h),7.37-7.35(d,j=8.4hz,2h),7.23-7.21(d,j=8.4hz,2h),5.29-5.25(m,1h),4.64(s,9h),4.31-4.28(m,1h),4.11(m,1h),3.88-3.79(m,2h),3.70-3.20(m,10h),2.23-2.17(m,1h),2.07-1.99(m,1h),1.22-1.20(m,2h),0.98-0.96(d,j=6.8hz,2h).ms(apci+)[m+h]+416.

實(shí)施例2

(s)-2-(4-氯苯基)-1-(4-((5r,7r)-7-羥基-5-甲基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(異丙基氨基)丙-1-酮

步驟1:使用干冰-異丙醇浴將蒲勒烯酸乙酯(ethylpulegenate)(130g,662mmol)在etoac(900ml)中的溶液冷卻至-78℃。使該混合物經(jīng)受臭氧解直至反應(yīng)變成紫色。此時(shí),停止產(chǎn)生臭氧,并將反應(yīng)混合物從干冰浴中移開(kāi)。使得氧氣鼓泡通過(guò)該反應(yīng)混合物直至它變成黃色。將反應(yīng)混合物真空濃縮,并將所得殘余物溶于冰醋酸(400ml)。將溶液冷卻至0℃,歷時(shí)30分鐘逐份加入zn粉(65g,993mmol)。然后將反應(yīng)混合物攪拌2小時(shí),此時(shí)通過(guò)硅藻土填料將反應(yīng)混合物過(guò)濾除去鋅粉。用naoh和nahco3的水溶液將乙酸中和至ph7并用乙醚(3x800ml)萃取。將合并的有機(jī)物用鹽水洗滌,以mgso4干燥并濃縮,得到(2r)-2-甲基-5-氧代環(huán)戊-羧酸乙酯,為棕色液體(107g,95%)。

步驟2:向(r)-2-甲基-5-氧代環(huán)戊羧酸乙酯(106.0g,622.78mmol)在meoh(1.2l)中的溶液加入乙酸銨(240.03g,3113.9mmol)。氮?dú)庀聦⒎磻?yīng)混合物在室溫?cái)嚢?0小時(shí),此后通過(guò)tlc和hplc判斷反應(yīng)完成。濃縮反應(yīng)混合物除去meoh。將所得殘余物溶于dcm,用h2o洗滌兩次,用鹽水洗滌一次,干燥(na2so4),過(guò)濾并濃縮,得到(r)-2-氨基-5-甲基環(huán)戊-1-烯羧酸乙酯(102g,97%產(chǎn)率),為橙色油狀物。lc/ms(apci+)m/z170[m+h]+.

步驟3:將含有(r)-2-氨基-5-甲基環(huán)戊-1-烯羧酸乙酯(161.61g,955.024mmol)和甲酸銨(90.3298g,1432.54mmol)在甲酰胺(303.456ml,7640.19mmol)中的溶液加熱至內(nèi)溫150℃并攪拌17小時(shí)。將反應(yīng)混合物冷卻,并轉(zhuǎn)移至2l單頸燒瓶中。然后通過(guò)高真空蒸餾除去過(guò)量的甲脒。一旦甲脒停止餾出,將蒸餾器(stillpot)中剩余的油狀物溶于dcm并用鹽水(3x200ml)洗滌。用dcm萃取合并的含水洗滌物。將合并的有機(jī)萃取物干燥(na2so4),過(guò)濾并濃縮。將所得棕色油狀物溶于最小量dcm,并使用分液漏斗向攪拌的乙醚溶液加入該溶液(大約5體積的乙醚相對(duì)于dcm溶液),使得形成一些棕色沉淀物。通過(guò)中號(hào)玻璃料漏斗過(guò)濾除去該棕色沉淀物,用乙醚淋洗并棄去(disposed)。濃縮濾液,再重復(fù)從乙醚中研磨兩次,然后在真空管道上干燥,得到(r)-5-甲基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[d]嘧啶-4-醇(93.225g,65.00%產(chǎn)率),為棕黃色糊狀固體。lc/ms(apci-)m/z149.2.

步驟4:通過(guò)滴液漏斗向(r)-5-甲基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[d]嘧啶-4-醇(152.2g,1013mmol)在dce(1.2l)中的0℃溶液中慢慢加入純態(tài)的pocl3(463.9ml,5067mmol)。加入完成后,將反應(yīng)混合物溫?zé)嶂潦覝兀缓蠹訜嶂粱亓鞑嚢?0分鐘。通過(guò)hplc確定反應(yīng)完成。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫,并分4份淬滅過(guò)量的pocl3,操作如下:將反應(yīng)混合物轉(zhuǎn)移至分液漏斗并滴入到含有在冰浴中冷卻的冰及飽和nahco3溶液的燒杯中。一旦每份反應(yīng)混合物加入完成,將所淬滅的混合物攪拌30分鐘以確保在轉(zhuǎn)移至分液漏斗之前完全破壞pocl3。將混合物轉(zhuǎn)移至分液漏斗中并用dcm萃取兩次。將合并的萃取物干燥(na2so4),過(guò)濾并濃縮。將粗品在硅膠上純化如下:將硅膠(1kg)在9:1己烷:乙酸乙酯中打漿到3l玻璃料漏斗上,真空沉降硅膠,用沙封頂。用dcm/己烷混合物裝載粗品,并使用1l側(cè)臂燒瓶真空洗脫。高rf副產(chǎn)物首先被洗脫,然后是(r)-4-氯-5-甲基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[d]嘧啶(104.4g,61.09%產(chǎn)率),為棕色油狀物。向(r)-4-氯-5-甲基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[d]嘧啶(30.0g,178mmol)在n-buoh(250ml)中的溶液加入三乙胺(93.0ml,534mmol)和哌嗪-1-羧酸叔丁酯(34.8g,187mmol)。氮?dú)庀聦⒎磻?yīng)混合物加熱至回流并攪拌過(guò)夜(17小時(shí)),此后將其在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮。將所得油狀物溶于dcm,用h2o洗滌,干燥(na2so4),過(guò)濾并濃縮。將所得棕色油狀物在硅膠上純化(首先用2:1己烷:乙酸乙酯直至干凈地洗脫產(chǎn)物,然后用1:1至1:5dcm:乙酸乙酯梯度)得到(r)-4-(5-甲基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(42.0g,74.1%產(chǎn)率),為米色粉末。lc/ms(apci+)m/z319.1[m+h]+.

步驟5:向(r)-4-(5-甲基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(20.0g,62.8mmol)在chcl3(310ml)中的0℃溶液逐份加入固體77%最大量mcpba(23.9g,107mmol)。將反應(yīng)混合物攪拌5分鐘,然后溫?zé)嶂潦覝夭嚢?0分鐘。7.5小時(shí)后hplc顯得類似。將反應(yīng)混合物冷卻至0℃,然后加入nahco3(13.2g,157mmol)和另外0.5當(dāng)量的m-cpba。將反應(yīng)混合物攪拌過(guò)夜(14小時(shí))。將反應(yīng)混合物冷卻至0℃,并通過(guò)滴液漏斗滴加na2s2o3(29.8g,188mmol)在h2o(50ml)中的溶液。接著通過(guò)滴液漏斗加入na2co3(24.6g,232mmol)在h2o(70ml)中的溶液(混合物變成均質(zhì)的)。將反應(yīng)混合物攪拌30分鐘,然后用chcl3(3x150ml)萃取混合物。將合并的萃取物干燥(na2so4),過(guò)濾并濃縮,得到n-氧化物。lc/ms(apci+)m/z335.1[m+h]+.

步驟6:向來(lái)自步驟5的n-氧化物(21.0g,62.8mmol)中加入ac2o(77.0ml,816mmol)。氮?dú)庀聦⒎磻?yīng)混合物在90℃沙浴加熱并攪拌100分鐘。將反應(yīng)混合物冷卻至室溫,并通過(guò)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去過(guò)量的乙酸酐。將所得油狀物溶于dcm,然后將其小心地傾入冰的飽和na2co3中。用dcm萃取混合物,并將合并的萃取物干燥(na2so4),過(guò)濾并濃縮,得到(5r)-4-(7-乙酰氧基-5-甲基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(23.6g,100%),為棕色泡沫狀物。lc/ms(apci+)m/z377.1[m+h]+.

步驟7:向(5r)-4-(7-乙酰氧基-5-甲基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(23.6g,62.69mmol)在2:1thf:h2o(320ml)中的0℃溶液中加入lioh-h2o(6.577g,156.7mmol)。將反應(yīng)混合物攪拌10分鐘,然后溫?zé)嶂潦覝?。?小時(shí)和4.5小時(shí)lc/ms看起來(lái)相同。將反應(yīng)混合物冷卻至0℃,然后向混合物中加入飽和的nh4cl。將混合物攪拌5分鐘,并通過(guò)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去大部分的thf。用etoac(3x250ml)萃取混合物,并將合并的萃取物干燥(na2so4),過(guò)濾并濃縮。將粗品在biotage65m上快速分離:4:1dcm:乙酸乙酯,然后梯度為1:1至1:4dcm:乙酸乙酯。一旦洗脫產(chǎn)物,然后用乙酸乙酯淋洗柱。然后30:1dcm:meoh洗脫剩余部分的產(chǎn)物(8.83g)。使用相同的條件將混合的餾分用biotage40m再次快速分離,得到另外2.99g,其給出合并產(chǎn)量的(5r)-4-(7-羥基-5-甲基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(11.82g,56.38%產(chǎn)率),為棕色泡沫狀物。lc/ms(apci+)m/z335.1[m+h]+.

步驟8:通過(guò)滴液漏斗向草酰氯(3.35ml,38.4mmol)在dcm(150ml)中的-78℃溶液滴加dmso(5.45ml,76.8mmol)在dcm(50ml)中的溶液。將反應(yīng)混合物攪拌35分鐘,然后通過(guò)滴液漏斗慢慢加入(5r)-4-(7-羥基-5-甲基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(9.17g,27.4mmol)在dcm(80ml)中的溶液。將反應(yīng)混合物在-78℃攪拌另外1小時(shí),此后向混合物中加入純態(tài)的三乙胺(18.0ml,129mmol)。然后將反應(yīng)混合物溫?zé)嶂潦覝?,然后攪?0分鐘。加入h2o。用dcm(3x200ml)萃取混合物,并將合并的萃取物干燥(na2so4),過(guò)濾并真空濃縮。將粗品在硅膠(biotage65m)上純化:用大約800ml4:1dcm:etoac,然后梯度為1:1dcm:乙酸乙酯淋洗柱直至產(chǎn)物洗脫,然后1:4dcm:etoac洗脫產(chǎn)物,得到(r)-4-(5-甲基-7-氧代-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(7.5g,82.3%產(chǎn)率),為棕色泡沫狀物。從dcm/己烷中濃縮(3x)該泡沫狀物,其給出極淺棕色的泡沫狀物。hplc>95%面積。lc/ms(apci+)m/z333[m+h]+.

步驟9:向(r)-4-(5-甲基-7-氧代-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(9.75g,29.3mmol)在dcm(210ml;使用之前用氮?dú)饷摎?0分鐘)中加入三乙胺(4.33ml,31.1mmol;使用之前用氮?dú)饷摎?0分鐘)和甲酸(1.36ml,36.1mmol;使用之前用氮?dú)饷摎?0分鐘)。將混合物攪拌5分鐘,然后加入ru催化劑(0.0933g,0.147mmol)。將反應(yīng)混合物在正氮?dú)鈮簲嚢柽^(guò)夜(18小時(shí))。將反應(yīng)混合物高真空濃縮至干并干燥。將不純的物質(zhì)在biotage65m上快速分離,裝入1:1dcm:乙酸乙酯500ml淋洗,然后是1:4dcm:乙酸乙酯直至產(chǎn)物洗脫(第2個(gè)點(diǎn)),然后梯度為純態(tài)的乙酸乙酯,然后25:1dcm:meoh洗脫剩余部分的產(chǎn)物。合并餾分并在旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上濃縮。從dcm/己烷中再濃縮殘余物,得到4-((5r,7r)-7-羥基-5-甲基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(主要的)和4-((5r,7s)-7-羥基-5-甲基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(次要的)的混合物(9.35g,95.3%產(chǎn)率),為米色泡沫狀物。lc/ms(apci+)m/z335[m+h]+.通過(guò)甲醇次甲基(carbinolmethine)的積分,1hnmr(cdcl3)顯示88%de。

步驟10:向4-((5r,7r)-7-羥基-5-甲基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(7.0g,20.9mmol)和三乙胺(4.38ml,31.4mmol)在dcm(110ml)中的0℃溶液加入4-硝基苯甲酰氯(4.27g,23.0mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜,此后加入飽和的nahco3。將混合物攪拌10分鐘,然后用dcm萃取。將合并的萃取物干燥(na2so4),過(guò)濾并濃縮。將粗品在biotage65m上快速分離(3:1己烷:乙酸乙酯裝載粗品,然后2:1己烷:乙酸乙酯洗脫)得到4-((5r,7r)-5-甲基-7-(4-硝基苯甲?;趸?-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯和少量混合的餾分。然后使用1:2己烷:乙酸乙酯洗脫4-((5r,7s)-5-甲基-7-(4-硝基苯甲?;趸?-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯。通過(guò)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮具有產(chǎn)物的餾分,得到4-((5r,7r)-5-甲基-7-(4-硝基苯甲?;趸?-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(8.55g,84.5%產(chǎn)率),為黃色泡沫狀物。lc/ms(apci+)m/z484[m+h]+.1hnmr(cdcl3)顯示單一的非對(duì)映異構(gòu)體)。通過(guò)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)濃縮具有其它對(duì)映異構(gòu)體的餾分,得到4-((5r,7s)-5-甲基-7-(4-硝基苯甲?;趸?-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.356g,3.52%產(chǎn)率),為棕色泡沫狀物。lc/ms(apci+)m/z484[m+h]+.

步驟11:向4-((5r,7r)-5-甲基-7-(4-硝基苯甲?;趸?-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(2.30g,4.76mmol)在2:1thf:h2o(40ml)的0℃溶液中加入lioh-h2o(0.499g,11.9mmol)。將反應(yīng)混合物溫?zé)嶂潦覝夭嚢?小時(shí)。通過(guò)旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去thf,加入飽和的nahco3,并用乙酸乙酯萃取混合物。將合并的萃取物用飽和的nahco3洗滌(1x),干燥(na2so4),過(guò)濾并濃縮,得到4-((5r,7r)-7-羥基-5-甲基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(1.59g,100.0%產(chǎn)率),為黃色泡沫狀物。后處理后hplc僅產(chǎn)物>98面積%純。lc/ms(apci+)m/z335[m+h]+.使用類似的方法制備4-((5r,7s)-7-羥基-5-甲基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯。

步驟12:向4-((5r,7r)-7-羥基-5-甲基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-羧酸叔丁酯(0.600g,1.79mmol)在二噁烷(15ml)中的溶液加入4mhcl/二噁烷(11.2ml,44.9mmol)。氮?dú)庀聦⒎磻?yīng)混合物在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜(20小時(shí))。將混合物濃縮至干并在高真空管道上干燥。將粗品混懸在乙醚中,超聲并攪拌5分鐘。通過(guò)具有氮?dú)鈮旱闹刑?hào)玻璃料漏斗過(guò)濾將固體分離出,用乙醚淋洗,氮?dú)鈮合赂稍锊⒃诟哒婵展艿郎显俑稍?,得?5r,7r)-5-甲基-4-(哌嗪-1-基)-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[d]嘧啶-7-醇二鹽酸鹽(0.440g,79.8%產(chǎn)率),為黃色粉末。lc/ms(apci+)m/z235.使用類似的方法制備(5r,7s)-5-甲基-4-(哌嗪-1-基)-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[d]嘧啶-7-醇二鹽酸鹽。

步驟13:將2-(4-氯苯基)乙酸甲酯(36.7g,199mmol)和多聚甲醛(6.27g,209mmol)溶解/混懸在dmso(400ml)中并用naome(537mg,9.94mmol)處理。將混合物在室溫?cái)嚢?小時(shí)至完全(通過(guò)粗品的tlc分析)。將反應(yīng)混合物傾入冰-冰水中(700ml;白色乳液)并加入1mhcl溶液中和。用乙酸乙酯(3x)萃取水層,并合并有機(jī)物。將有機(jī)層用水(2x)、鹽水(1x)洗滌,分離,以mgso4干燥,過(guò)濾并真空濃縮,得到粗產(chǎn)物,為黃色油狀物。將殘余物裝載到具有硅膠的大號(hào)玻璃料漏斗上并用9:1己烷:乙酸乙酯洗脫直至收集起始原料/烯烴。然后用1:1己烷:乙酸乙酯洗脫填料直至純的期望產(chǎn)物完全被洗脫。濃縮純的餾分得到2-(4-氯苯基)-3-羥基丙酸甲酯,為無(wú)色油狀物(39.4g,92%)。

步驟14:將2-(4-氯苯基)-3-羥基丙酸甲酯(39.4g,184mmol)溶于dcm(500ml)并用tea(64.0ml,459mmol)處理。將溶液冷卻至0℃并用mscl(15.6ml,202mmol)慢慢處理,然后攪拌30分鐘至完全(通過(guò)tlc分析)。將溶液與1nhcl溶液一起分配,并用dcm萃取水相一次。將合并的有機(jī)層用1nhcl溶液再洗滌一次,分離,用稀的nahco3溶液洗滌并分離。將有機(jī)層以mgso4干燥,過(guò)濾并真空濃縮,得到橙色的油狀物。將殘余物裝載到具有硅膠填料的大號(hào)玻璃料漏斗中并用9:1己烷:乙酸乙酯洗脫,得到純的期望產(chǎn)物(通過(guò)tlc分析)。濃縮純的餾分得到2-(4-氯苯基)丙烯酸甲酯,為無(wú)色油狀物(30.8g,85%)。在0℃向攪拌的i-prnh2(217ul,2.54mmol)在thf(5.0ml)中的溶液加入2-(4-氯苯基)丙烯酸甲酯(500mg,2.54mmol)在thf(1.35ml)中的溶液。將反應(yīng)混合物在室溫?cái)嚢柽^(guò)夜至完全(通過(guò)lcms分析)。經(jīng)吸量管向攪拌的胺中加入boc2o(584ul,2.54mmol)。將反應(yīng)混合物攪拌過(guò)夜至完全(通過(guò)混合物的lcms和tlc分析)。真空濃縮溶液,得到3-(叔丁氧基羰基(異丙基)氨基)-2-(4-氯苯基)丙酸甲酯,為無(wú)色油狀物(854mg,94%)。lc/ms(apci+)m/z256.1[m-boc]+.

步驟15:在室溫將3-(叔丁氧基羰基(異丙基)氨基)-2-(4-氯苯基)丙酸甲酯(133g,374mmol)溶于thf(1.0l)并用kotms(56.0g,392mmol)處理。將混合物攪拌過(guò)夜至完全(通過(guò)粗品的lcms分析)。真空濃縮混合物,得到濕的泡沫狀物,將其真空干燥過(guò)夜,得到3-(叔丁氧基羰基(異丙基)氨基)-2-(4-氯苯基)丙酸鉀,為白色固體(148.7g,105%)。lc/ms(apci+)m/z242.1[m-boc-k]+.

步驟16:在室溫將3-(叔丁氧基羰基(異丙基)氨基)-2-(4-氯苯基)丙酸鉀(77.2g,203mmol)溶于thf(515ml)并用特戊酰氯(26.3ml,213mmol)處理。將混合物攪拌3小時(shí),形成混合物酸酐。在分開(kāi)的燒瓶中將(s)-4-芐基噁唑烷-2-酮(46.1g,260mmol)溶于thf(600ml)并冷卻至-78℃。將溶液用n-buli(102ml的2.50m己烷溶液,254mmol)處理并攪拌一小時(shí)。經(jīng)套管向攪拌的li-噁唑烷酮中加入制備的酸酐溶液,并將混合物溫?zé)嶂潦覝剡^(guò)夜。加入飽和的氯化銨溶液將混合物淬滅,然后在更多的水和乙酸乙酯之間分配。萃取水相若干次,并將有機(jī)物合并。將有機(jī)層先后用水、鹽水洗滌,分離,以mgso4干燥,過(guò)濾并真空濃縮。經(jīng)色譜法(用4:1己烷:乙酸乙酯洗脫的硅膠)將殘余物純化/分離(非對(duì)映異構(gòu)體),得到完全分離的非對(duì)映異構(gòu)體,為粘性油狀物:(r)-3-((s)-4-芐基-2-氧代噁唑烷-3-基)-2-(4-氯苯基)-3-氧代丙基(異丙基)氨基甲酸叔丁酯(12.16g,基于1/2的酸消旋體為24%)和(s)-3-((s)-4-芐基-2-氧代噁唑烷-3-基)-2-(4-氯苯基)-3-氧代丙基(異丙基)氨基甲酸叔丁酯(39.14g,基于1/2的酸消旋體為77%)。lc/ms(apci+)m/z401.2[m-boc]+.

步驟17:在室溫向攪拌的thf(30ml)和水(15ml)的溶液中加入lioh-h2o(168mg,4.00mmol)直至其溶解。將混合物用過(guò)氧化氫(658ul的在水中的35%wt.溶液,8.00mmol)處理并在室溫?cái)嚢?0分鐘。在冰浴中將反應(yīng)混合物冷卻至0℃,并歷時(shí)10分鐘經(jīng)滴液漏斗滴加(s)-3-((s)-4-芐基-2-氧代噁唑烷-3-基)-2-(4-氯苯基)-3-氧代丙基(異丙基)氨基甲酸叔丁酯(1.00g,2.00mmol)在thf(15ml)中的溶液。將混合物在室溫?cái)嚢柚镣耆?通過(guò)粗品的lcms分析)。將反應(yīng)混合物冷卻至0℃,然后歷時(shí)十分鐘時(shí)間經(jīng)滴液漏斗用1mna2so3(9.00ml)溶液處理。加入完成后,將混合物溫?zé)嶂潦覝?0分鐘。將混合物濃縮除去thf,然后用水稀釋。用乙酸乙酯洗滌水層兩次(棄去)。將水層與乙酸乙酯一起分配,然后在攪拌的同時(shí)用1mhcl滴加處理直至達(dá)到ph2-3。用乙酸乙酯萃取水層兩次,并將有機(jī)物合并。將有機(jī)物用鹽水洗滌,分離,以mgso4干燥,過(guò)濾并真空濃縮。將無(wú)色油狀物高真空干燥一小時(shí),得到(s)-3-(叔丁氧基羰基(異丙基)氨基)-2-(4-氯苯基)丙酸,為粘性油狀物/泡沫狀物(685mg,100%)。lc/ms(apci+)m/z242.1[m-boc]+.

步驟18:將(5r,7r)-5-甲基-4-(哌嗪-1-基)-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[d]嘧啶-7-醇二鹽酸鹽(2.92g,9.51mmol)和(s)-3-(叔丁氧基羰基(異丙基)氨基)-2-(4-氯苯基)丙酸(3.25g,9.51mmol)在dcm(40ml)和diea(5.0ml,28.7mmol)中的溶液在室溫?cái)嚢?0分鐘。向混合物中加入hbtu(3.61g,9.51mmol)。將混合物在室溫?cái)嚢?小時(shí)。除去溶劑,并將殘余物溶于乙酸乙酯(500ml)并用水(6x100ml)洗滌。將有機(jī)相干燥并濃縮。將殘余物由etoac-dcm/meoh(20:1)洗脫的柱色譜處理,得到(s)-2-(4-氯苯基)-3-(4-((5r,7r)-7-羥基-5-甲基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙基(異丙基)氨基甲酸叔丁酯(3.68g,69%)。lc/ms(apci+)m/z558.2[m+h]+.

步驟19:在室溫將(s)-2-(4-氯苯基)-3-(4-((5r,7r)-7-羥基-5-甲基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-氧代丙基(異丙基)氨基甲酸叔丁酯(2.50g,4.48mmol)溶于二噁烷(22.4ml)并用4mhcl的二噁烷溶液(22.4ml,89.6mmol)處理。將所得溶液攪拌過(guò)夜至完全(通過(guò)粗品的lcms分析)。真空濃縮溶液得到凝膠狀物,將其溶于最小量的甲醇(10ml)。經(jīng)吸量管將該溶液轉(zhuǎn)移至攪拌的乙醚(300ml)中,得到期望產(chǎn)物的白色沉淀物。當(dāng)白色沉淀物融化成黃色膠狀物時(shí)加入大約一半。真空濃縮該物質(zhì),得到黃色凝膠狀物,將其減壓放置過(guò)夜,得到(s)-2-(4-氯苯基)-1-(4-((5r,7r)-7-羥基-5-甲基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-3-(異丙基氨基)丙-1-酮二鹽酸鹽,為淺黃色粉末(2.14g,90%)。

1hnmr(d2o,400mhz8.39(s,1h),7.37-7.35(d,j=8.4hz,2h),7.23-7.20(d,j=8.4hz,2h),5.29-5.25(m,1h),4.33-4.29(m,1h),4.14-4.10(m,1h),3.89-3.19(m,11h),2.23-2.17(m,1h),2.08-1.99(m,1h),1.20-1.18(m,6h),0.98-0.96(d,j=6.8hz,3h).ms(apci+)[m+h]+458.

表1中所示實(shí)施例3-9也可根據(jù)上述方法制得。

表1

實(shí)施例10

(s)-2-(4-環(huán)丙基苯基)-1-(4-((5r,7r)-7-羥基-5-甲基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-((s)-吡咯烷-2-基)乙酮

步驟1:將環(huán)丙基溴化鎂(64.0ml,32.00mmol)的thf溶液用氯化鋅(ii)(64.00ml,32.00mmol)在thf中的溶液處理。將混合物在室溫?cái)嚢?0分鐘。加入2-(4-溴苯基)乙腈(5.228g,26.67mmol)和二[三叔丁基膦]鈀(0.6814g,1.333mmol)在thf(2ml)中的溶液。氮?dú)庀聦⒎磻?yīng)混合物在環(huán)境溫度攪拌12小時(shí)。用飽和的nh4cl淬滅反應(yīng)混合物,用二氯甲烷稀釋并分離。用二氯甲烷(2x)洗滌水層,然后用水(3x)洗滌合并的有機(jī)層,以na2so4干燥并真空濃縮。將粗產(chǎn)物經(jīng)sio2色譜處理(用25:1己烷/乙酸乙酯洗脫),得到2-(4-環(huán)丙基苯基)乙腈(2.76g,66%)。1hnmr(cdcl3,400mhz)7.20(d,j=8.2,2h),7.07(d,j=8.2,2h),3.70(s,2h),1.94-1.85(m,1h),1.01-0.95(m,2h),0.71-0.66(m,2h).

步驟2:將甲醇(65ml)冷卻至0℃并用hcl(氣體)飽和。用2-(4-環(huán)丙基苯基)乙腈(2.76g,17.56mmol)在甲醇(6ml)中的溶液處理該溶液。在含有caso4的干燥管下將反應(yīng)混合物加熱至回流過(guò)夜。將反應(yīng)混合物冷卻并真空濃縮。將粗混合物再混懸于乙酸乙酯和水,然后分離。將有機(jī)層用飽和的nahco3、飽和的nacl洗滌,以na2so4干燥并真空濃縮,得到2-(4-環(huán)丙基苯基)乙酸甲酯,為油狀物(3.10g,93%)。1hnmr(cdcl3,400mhz)7.16(d,j=8.3,2h),7.02(d,2h),3.68(s,3h),3.58(s,2h),1.92-1.83(m,1h),0.97-0.91(m,2h),0.70-0.64(m,2h).

步驟3:將2-(4-環(huán)丙基苯基)乙酸甲酯(3.10g,16.30mmol)溶于thf/meoh/水的混合物(2:2:1,80ml)中,并用氫氧化鋰水合物(0.8548g,20.37mmol)處理該溶液。然后將混合物在環(huán)境溫度攪拌4小時(shí)。用3nhcl將反應(yīng)混合物中和至ph為4并真空濃縮。將該固體再溶于乙酸乙酯和水。用3nhcl將ph再調(diào)節(jié)到約3至約4的ph。然后分離各層。用乙酸乙酯(2x)洗滌水層。然后將合并的有機(jī)層用飽和的nacl洗滌,以na2so4干燥并濃縮,得到2-(4-環(huán)丙基苯基)乙酸(2.82g,98%)。1hnmr(cdcl3,400mhz)7.16(d,j=8.2,2h),7.03(d,2h),3.60(s,2h),1.92-1.83(m,1h),098-0.91(m,2h),0.70-0.64(m,2h).

步驟4:在甲苯(14ml)中將2-(4-環(huán)丙基苯基)乙酸(2.82g,16.003mmol)與(r)-4-芐基噁唑烷-2-酮(3.4030g,19.204mmol)合并。將該混懸液用三乙胺(6.6917ml,48.010mmol)處理,然后加熱至80℃。滴加特戊酰氯(1.9893ml,16.003mmol)在甲苯(3.5ml)中的溶液處理該溶液。將反應(yīng)混合物在80℃加熱過(guò)夜。將反應(yīng)混合物冷卻并用2nhcl洗滌,然后分離。用甲苯洗滌水層,然后用2nhcl、水、飽和的nahco3(2x)、飽和的nacl洗滌合并的有機(jī)物,以na2so4干燥并真空濃縮。將粗產(chǎn)物經(jīng)sio2色譜處理(用9:1己烷/乙酸乙酯洗脫),得到(r)-4-芐基-3-(2-(4-環(huán)丙基苯基)乙?;?噁唑烷-2-酮(3.43g,64%)。1hnmr(cdcl3,400mhz)7.33-7.20(m,5h),7.16-7.11(m,2h),7.05(d,j=8.2,2h),4.70-4.63(m,1h),4.32-4.14(m,4h),3.26(dd,j1=3.2,j2=13.3,1h),2.75(dd,j1=9.5,j2=13.3,1h),1.93-1.85(m,1h),0.98-0.92(m,2h),0.72-0.66(m,2h).

步驟5:根據(jù)實(shí)施例1中所述操作,使用(r)-4-芐基-3-(2-(4-環(huán)丙基苯基)乙?;?噁唑烷-2-酮,制備(s)-2-((s)-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)-2-(4-環(huán)丙基苯基)乙酸(0.287g,26%)。ms(esi+)[m+h]345.7.

步驟6:根據(jù)實(shí)施例3中所述操作,使用(s)-2-((s)-1-(叔丁氧基羰基)吡咯烷-2-基)-2-(4-環(huán)丙基苯基)乙酸,制備(s)-2-((s)-1-(4-環(huán)丙基苯基)-2-(4-((5r,7r)-7-羥基-5-甲基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯(0.199g,94%)。ms(esi+)[m+h]562.1.

步驟7:根據(jù)實(shí)施例3中所述操作,使用(s)-2-((s)-1-(4-環(huán)丙基苯基)-2-(4-((5r,7r)-7-羥基-5-甲基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-氧代乙基)吡咯烷-1-羧酸叔丁酯,制備(s)-2-(4-環(huán)丙基苯基)-1-(4-((5r,7r)-7-羥基-5-甲基-6,7-二氫-5h-環(huán)戊二烯并[d]嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-((s)-吡咯烷-2-基)乙酮(0.145g,77%)。ms(esi+)[m+h]462.2.1hnmr(cd3od,400mhz)8.56(s,1h),7.26(d,2h),7.13(d,2h),5.29(dd,1h),5.32-5.26(dd,1h),4.32(d,1h),4.29-4.18(m,1h),4.12-3.95(m,2h),3.88-3.61(m,6h),3.51-3.38(m,1h),3.35-3.30(m,1h),2.32-2.24(m,1h),2.22-2.03(m,2h),1.95-1.85(m,2h),1.82-1.73(m,2h),1.40-1.34(m,1h),1.16(d,3h),1.01-0.95(m,2h),0.69-0.64(m,2h).

表2中所示實(shí)施例也可根據(jù)上述方法制得。

表2

實(shí)施例14體外細(xì)胞增殖測(cè)定

實(shí)施例2的化合物與某些具體化療劑的組合的體外效能可使用celltiter-熒光細(xì)胞存活測(cè)定(可由promegacorp.,madison,wi商購(gòu)得到)進(jìn)行測(cè)量。該均質(zhì)測(cè)定(homogeneousassay)方法基于同翅目螢光素酶的重組表達(dá)(us5583024;us5674713;us5700670)并基于存在的atp(代謝活性細(xì)胞的指示物)的定量確定培養(yǎng)物中活細(xì)胞的數(shù)目(crouch等(1993)j.immunol.meth.160:81-88;us6602677)。所述celltiter-測(cè)定以96或384孔模式進(jìn)行,使其可進(jìn)行自動(dòng)高通量篩選(hts)(cree等(1995)anticancerdrugs6:398-404)。所述均質(zhì)測(cè)定操作包括將單一試劑(celltiter-reagent)直接加到在血清補(bǔ)充的培養(yǎng)基中孵育的細(xì)胞中。不需要洗滌細(xì)胞、除去培養(yǎng)基和多次移液步驟。在加入試劑并混合后的10分鐘內(nèi),在384-孔模式中系統(tǒng)檢出低至15個(gè)細(xì)胞/孔。

所述均質(zhì)"加入-混合-測(cè)量(add-mix-measure)"模式導(dǎo)致細(xì)胞溶解并產(chǎn)生與存在的atp的量成比例的熒光信號(hào)。atp的量與在培養(yǎng)物中存在的細(xì)胞數(shù)目直接成比例。所述celltiter-測(cè)定產(chǎn)生"輝光型"熒光信號(hào)(由熒光素酶反應(yīng)產(chǎn)生),其具有通常大于五小時(shí)的半衰期,依賴于細(xì)胞類型和所使用的培養(yǎng)基。以相對(duì)發(fā)光單位(rlu)反映活細(xì)胞。通過(guò)重組螢火蟲(chóng)熒光素酶使底物(甲蟲(chóng)熒光素(beetleluciferin))氧化性脫羧,伴隨著將atp轉(zhuǎn)化成amp并產(chǎn)生光子。延長(zhǎng)的半衰期使之不再需要使用試劑注射器并且使多板連續(xù)或多板分批模式加工具有靈活性。該細(xì)胞增殖測(cè)定可用于各種多孔模式,例如96或384孔模式??赏ㄟ^(guò)光度計(jì)或ccd相機(jī)成像裝置記錄數(shù)據(jù)。呈現(xiàn)發(fā)光輸出,其為隨時(shí)間測(cè)量的相對(duì)光單位(rlu)。

使用celltiter-測(cè)定測(cè)量實(shí)施例2的化合物和某些化療劑的組合的抗增殖效應(yīng)。確定所述測(cè)試化合物和組合的ec50值。體外細(xì)胞效能活性的范圍為約100nm至約10μm。圖12中的數(shù)據(jù)證實(shí)了,代表性組合針對(duì)許多癌癥類型提供加和或者協(xié)同的活性。

實(shí)施例15體內(nèi)腫瘤異種移植物效力

本發(fā)明的代表性組合的效能通過(guò)將癌細(xì)胞的同種異體移植物或者異種移植物植入嚙齒動(dòng)物中并將荷瘤動(dòng)物用所述組合處理來(lái)進(jìn)行體內(nèi)測(cè)量。可變結(jié)果可取決于細(xì)胞系、在腫瘤細(xì)胞中存在或者不存在某些突變、給予實(shí)施例2化合物和化療劑的順序、給藥方案以及其它因素而為預(yù)期的。將受試小鼠用藥物或者對(duì)照(媒介物)處理并歷時(shí)若干周或者更長(zhǎng)時(shí)間監(jiān)測(cè)以測(cè)量腫瘤體積倍增的時(shí)間、細(xì)胞死亡對(duì)數(shù)值和腫瘤抑制。

在該模型中測(cè)試了本發(fā)明的代表性組合,結(jié)果示于圖中。

圖中的數(shù)據(jù)證明了,與各藥劑單獨(dú)給藥相比,代表性組合提供了改善的效果。例如,在lucap35v原發(fā)性人前列腺腫瘤模型中,實(shí)施例2和多西他賽的組合導(dǎo)致腫瘤退行,而任一化合物的單一藥物僅導(dǎo)致腫瘤停滯(圖1)。另外,在skov3卵巢人腫瘤模型(圖8)中,實(shí)施例2和順鉑的組合比單獨(dú)的任一單一藥物導(dǎo)致較大的腫瘤生長(zhǎng)抑制。

已經(jīng)確定的是,本發(fā)明的某些組合提供針對(duì)某些癌癥表型的改善的效應(yīng)。例如,本發(fā)明的某些組合提供針對(duì)與pten突變、akt突變(例如過(guò)表達(dá)或者擴(kuò)增水平)、pi3k突變或者h(yuǎn)er2/erbb2擴(kuò)增或突變有關(guān)的癌癥的改善的效應(yīng)。因此,本申請(qǐng)所述的某些組合針對(duì)這些類型的癌癥特別有用。例如,在胃癌中,pten-喪失預(yù)示著本發(fā)明的某些組合(例如,式i的化合物與5-fu/順鉑)具有更好的效力,并且在前列腺癌pten-無(wú)效細(xì)胞系中可看到式i的化合物和多西他賽的組合具有更強(qiáng)的效應(yīng)。

可通過(guò)本領(lǐng)域已知的任何適合的方法測(cè)量pten狀態(tài)。在一個(gè)實(shí)例中,使用ihc??蛇x擇地,可使用蛋白質(zhì)印跡分析。針對(duì)pten的抗體是可商購(gòu)的(cellsignalingtechnology,beverly,ma,cascadebiosciences,winchester,ma)。pten狀態(tài)的ihc和蛋白質(zhì)印記分析的實(shí)例操作在neshat,m.s.等.enhancedsensitivityofpten-deficienttumorstoinhibitionoffrap/mtor,proc.natlacad.sci.usa98,10314–10319(2001)和perren,a.等人immunohistochemicalevidenceoflossofptenexpressioninprimaryductaladenocarcinomasofthebreast,americanjournalofpathology,vol.155,no.4,october1999中有描述。另外,可使用本領(lǐng)域已知的技術(shù)鑒定與akt突變、pi3k突變以及與her2/erbb2擴(kuò)增或突變有關(guān)的癌癥。在一個(gè)實(shí)例中,患者或者組織樣品的pten狀態(tài)使用ihc測(cè)定,并將histo得分或者h(yuǎn)score指定至樣品或者患者。計(jì)算hscore的實(shí)例方式使用下式:hscore=(%1+細(xì)胞x1)+(%2+細(xì)胞x2)+(%3+細(xì)胞x3)(seeshoman,n,et.al,modpath(2005)18,250-259)。來(lái)自相同患者或者患者的集合的非-癌性組織的平均ptenhscore可用于測(cè)定是否患者或者樣品hscore為低的或者無(wú)效。在一個(gè)實(shí)例中,小于約200的hscore被認(rèn)為是低的并對(duì)應(yīng)于pten低,以及約0的hscore被認(rèn)為無(wú)效。

一個(gè)方面包括患者中的腫瘤生長(zhǎng)抑制(tgi)的方法,所述患者患有包含pten突變、akt擴(kuò)增(例如,過(guò)表達(dá)或者擴(kuò)增)、pi3k突變,或者h(yuǎn)er2/erbb2擴(kuò)增或者突變的癌癥,所述方法包括向所述患者給藥gdc-0068或者其藥用鹽和以下中的一種:folfox、鉑劑、伊立替康、多西他賽、多柔比星、吉西他濱、sn-38、卡培他濱、替莫唑胺、紫杉醇、貝伐單抗、培妥珠單抗、他莫昔芬、雷帕霉素和拉帕替尼或者它們的藥用鹽。在某些實(shí)施方案中,所述組合為協(xié)同性的。在某些實(shí)施方案中,所述組合的tgi大于單獨(dú)的任一gdc-0068或者化療劑的tgi。在某些實(shí)施方案中,所述組合的tgi比單獨(dú)的任一gdc-0068或者化療劑的tgi大約10%、15%、20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%或者75%。

測(cè)量tgi的方法是本領(lǐng)域已知的。在一個(gè)實(shí)例方法中,從治療之前和之后的患者測(cè)量平均腫瘤體積并比較。腫瘤體積可使用本領(lǐng)域中的任何方法在兩個(gè)維度(長(zhǎng)度和寬度)中測(cè)量,例如ultracaliv卡尺(fredv.fowlercompany)或者通過(guò)pet(正電子發(fā)射斷層掃描),或者通過(guò)一些其它方法。可使用式腫瘤體積(mm3)=(長(zhǎng)度x寬度2)x0.5。歷經(jīng)多個(gè)時(shí)間段測(cè)量腫瘤體積可使用混合建模的linearmixedeffects(lme)方法進(jìn)行(pinheiroetal。2009)。這種方法可解決重復(fù)測(cè)量(和多個(gè)患者)。在每個(gè)劑量水平,可使用三次回歸樣條將非線性曲線擬合至腫瘤體積的時(shí)間過(guò)程。然后可將這些非線性曲線與混合模型中的劑量關(guān)聯(lián)起來(lái)??墒褂孟率綄⒆鳛槊浇槲锏陌俜?jǐn)?shù)的腫瘤生長(zhǎng)抑制計(jì)算為與媒介物相關(guān)的每天的擬合曲線下面積百分比(auc):

使用該式,100%的tgi值表示腫瘤停滯,大于約1%但是小于約100%表示腫瘤生長(zhǎng)抑制,和大于約100%表示腫瘤退行。

在某些實(shí)施方案中,癌癥包括akt、pi3k、pten和her2突變或者akt、pi3k、pten或者h(yuǎn)er2異常信號(hào)中的一個(gè)或者多個(gè)。在一個(gè)實(shí)例中,癌癥為包含高pakt活性和低或者無(wú)pten狀態(tài)的胃癌。

在一個(gè)具體方面,本發(fā)明提供治療具有癌癥的患者的方法,所述癌癥與pten突變或者表達(dá)缺失、akt突變或者擴(kuò)增、pi3k突變或者擴(kuò)增,或者h(yuǎn)er2/erbb2擴(kuò)增相關(guān),所述方法包括將本發(fā)明的組合給藥于患者。在另一方面,本發(fā)明提供鑒別可用本發(fā)明組合治療的具有癌癥的患者的方法,所述方法包括測(cè)定是否患者的癌癥與pten突變或者表達(dá)缺失、akt突變或者擴(kuò)增、pi3k突變或者擴(kuò)增,或者h(yuǎn)er2/erbb2擴(kuò)增相關(guān),其中患者的癌癥與pten突變或者表達(dá)缺失、akt突變或者擴(kuò)增、pi3k突變或者擴(kuò)增,或者h(yuǎn)er2/erbb2擴(kuò)增相關(guān)表明所述癌癥可用本發(fā)明組合治療。在另一方面,本發(fā)明提供方法,其進(jìn)一步包括用本發(fā)明組合治療如此識(shí)別的患者。

在另一實(shí)例中,待治療的癌癥與組合有her2陽(yáng)性或者陰性狀態(tài)的陽(yáng)性、低或者無(wú)pten狀態(tài)相關(guān)。實(shí)例包括胃癌,所述胃癌為(i)pten陰性(hscore小于約10,或者0)和her2陰性,(ii)低pten(hscore小于約200)和her2陰性,(iii)pten陰性和her2陽(yáng)性,或者(iv)pten陽(yáng)性和her2陰性。在此實(shí)例中,癌癥可用式i化合物例如gdc-0068或者其鹽和folfox的組合治療。

實(shí)施例16gdc-0068的人類給藥

對(duì)具有晚期或者轉(zhuǎn)移實(shí)體腫瘤的患者口服給藥gdc-0068的鹽酸鹽,并使用例如pet掃描和劑量限制性毒性(dlt)的發(fā)病率和性質(zhì)評(píng)價(jià)安全性、耐受性和應(yīng)答?;颊呓邮?5(n=3)、50(n=3)、100(n=3)、200(n=3)、400(n=3)、600(n=8)和800(n=7)mggdc-0068的劑量。在25、50、100、200、400或者600mg劑量未觀察到dlt。在800mg劑量時(shí)在一位患者中觀察到等級(jí)3疲勞。所有3位患者在400mg劑量時(shí)在pras40水平(akt信號(hào)的下游讀數(shù))方面具有大于約60%的抑制率,如通過(guò)ihc或者rppa測(cè)定測(cè)量。

將患有去雄抗性的前列腺癌(n=10)或者診斷陽(yáng)性的轉(zhuǎn)移乳腺癌(具有低或者無(wú)pten狀態(tài)、pi3k突變或者akt突變或者提高的表達(dá)或者活性中的一個(gè)或者多個(gè),n=10)的患者以600mg的劑量口服給藥gdc-0068,在21天周期的最初7天每天一次。圖21示出乳腺癌患者的pet掃描應(yīng)答。圖22示出圖21的患者1中的pet和腫瘤標(biāo)記物應(yīng)答,其患有her2-,pi3k突變型(h1047r)乳腺癌。圖24的患者6(其患有akt突變型e17k(pi3k野生型和240的hscore)乳腺癌)在pet掃描上在周期#1后具有完全應(yīng)答,所有靶標(biāo)和非-靶標(biāo)病灶pet陰性,并且未發(fā)現(xiàn)新的病灶。這些應(yīng)答證實(shí),式i化合物例如gdc-0068治療患者的過(guò)增生性疾病。

替代pd生物標(biāo)記測(cè)定

在用gdc-0068治療后,在不同的時(shí)間點(diǎn)使用在富血小板血漿(prp)中的磷酸-gsk-3b作為替代pd生物標(biāo)記測(cè)量患者中的akt途徑抑制。將外周血收集在含有作為抗凝劑的.38%檸檬酸鹽的vacutainer中。將血液在室溫以200g旋轉(zhuǎn)15分鐘。將prp層從所述管小心地取出,然后在含有洗滌劑、蛋白酶和磷酸酶抑制劑的緩沖液中裂解。在prp裂解液中的磷酸化的和總的gsk-3β水平使用磷酸-gsk3β/總-gsk3β多重msd測(cè)定來(lái)測(cè)量。將pgsk-3β水平歸一化至總的gsk-3β水平,并將pgsk-3β的劑量后抑制表示為每位患者的劑量前水平的比率。證實(shí)了劑量-和時(shí)間-依賴性藥理學(xué)應(yīng)答,在劑量≥200mg時(shí),pgsk3β水平的降低≥75%。

反相蛋白質(zhì)測(cè)定(rppa測(cè)定)

將來(lái)自用gdcc0068治療的患者的中心穿刺腫瘤活組織檢查新鮮冷凍在oct中并切成8um切片。將組織在含有tper、300mmnacl和磷酸酶抑制劑的rppa裂解緩沖液中裂解。將裂解物的磷蛋白標(biāo)記使用反相蛋白質(zhì)測(cè)定分析:將樣品印刷在硝化纖維素載玻片上并用sypro染色,測(cè)定總的蛋白質(zhì)濃度。將每個(gè)載玻片用不同的抗體在4℃染色過(guò)夜。然后將數(shù)據(jù)標(biāo)準(zhǔn)化成總的蛋白質(zhì)水平并將空間效應(yīng)使用quadrant中值歸一化除去。ppras40的60%–70%的降低和cyclind1的~50%降低(與基線相比)發(fā)生在每天以400mg治療的所有3位患者中。對(duì)于rppa的方法和綜述,參見(jiàn):reversephaseproteinmicroarraysadvancetouseinclinicaltrials,molecularoncology.2010dec;4(6):461-81,muellercetal。

實(shí)施例17與多西他賽組合地向人類給藥gdc-0068

進(jìn)行21天治療期,歷經(jīng)多個(gè)周期。將具有晚期或者轉(zhuǎn)移實(shí)體腫瘤的患者給藥gdc-0068的鹽酸鹽(口服,每天一次,在所有周期的第2天至第15天)和多西他賽(在第1天歷時(shí)1小時(shí)給予75mg/m2iv靜脈輸注)。將患者分成隊(duì)列。隊(duì)列1接受100mggdc-0068劑量。分別地,隊(duì)列2接受200mg,隊(duì)列3接受400mg和隊(duì)列4接受600mggdc-0068。疾病狀態(tài)使用responseevaluationcriteriainsolidtumors,version1.1(recistv1.1)評(píng)價(jià)。安全性和耐受性使用劑量限制性毒性(dlt)的發(fā)病率和性質(zhì)以及不良事件和實(shí)驗(yàn)室異常的發(fā)病率、性質(zhì),和嚴(yán)重性評(píng)價(jià)(根據(jù)ncictcaev4.03分級(jí))。在隊(duì)列1、2或者3中未觀察到dlt。

圖23示出在akt1e17k突變?nèi)橄侔┗颊咧械囊晃痪哂胁糠謶?yīng)答的患者的結(jié)果?;颊呓邮芰巳齻€(gè)療程的在先化療,但是在三個(gè)療程中均失敗。在第1天的多西他賽治療后,在約15天的第一周期的第2天口服給予患者gdc-0068,每天一次。在接下來(lái)的28天內(nèi)不給予治療。在組合治療之前(在篩查時(shí)),患者的腫瘤為30.2×17.9mm,以及在第一周期的組合治療后,患者的腫瘤收縮至18.2×16.0mm(39%降低或者pr)。這些應(yīng)答證實(shí),與化療劑例如多西他賽組合的式i化合物例如gdc-0068治療患者的過(guò)增生性疾病,并且可在在先治療失敗后治療疾病。

實(shí)施例18與5-fu、甲酰四氫葉酸和奧沙利鉑(folfox)組合的gdc-0068的人類給藥

進(jìn)行14天治療期,歷經(jīng)多個(gè)周期。在所有周期的第1天至第7天,對(duì)具有晚期或者轉(zhuǎn)移實(shí)體腫瘤的患者口服給藥逐步提高劑量的gdc-0068的鹽酸鹽,每天一次,并將mfolfox6(奧沙利鉑85mg/m2,甲酰四氫葉酸400mg/m2iv,歷經(jīng)2小時(shí),和5-氟尿嘧啶400mg/m2iv注射(初始推注)和5-氟尿嘧啶2400mg/m2iv,歷經(jīng)46小時(shí))作為iv靜脈輸注在每個(gè)14天周期的第1天給藥。隊(duì)列1接受100mg的gdc-0068劑量。分別地,隊(duì)列2接受200mg和隊(duì)列3接受400mggdc-0068。疾病狀態(tài)將使用responseevaluationcriteriainsolidtumors,version1.1(recistv1.1)評(píng)價(jià)。安全性和耐受性使用劑量限制性毒性(dlt)的發(fā)病率和性質(zhì)以及不良事件和實(shí)驗(yàn)室異常的發(fā)病率、性質(zhì),和嚴(yán)重性評(píng)價(jià)(根據(jù)ncictcaev4.03分級(jí))。在隊(duì)列1或者2中未觀察到dlt。

圖24示出在宮頸的pik3ca突變型鱗狀癌中具有部分應(yīng)答的一位患者的結(jié)果。所述患者接受上面的組合療法。在組合治療之前(在篩查時(shí)),患者的腫瘤為22mm,以及在上面的組合治療的第8周后,患者的腫瘤收縮至13.1mm(40%減低或者pr)。

圖25示出在在先治療失敗后與folfox組合的gdc-0068具有部分應(yīng)答的治療結(jié)果,其中患者患有pten缺失(hscore40)、kras野生型結(jié)腸直腸癌。

這些應(yīng)答證實(shí),與化療劑例如多西他賽組合的式i化合物例如gdc-0068治療患者的過(guò)增生性疾病,并且可在在先治療失敗后治療疾病。

另外,由于許多修飾和變化對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言將變得顯而易見(jiàn),不希望將本發(fā)明限制至如上所述的精確結(jié)構(gòu)和方法。因此,所有適合的修飾物和等價(jià)物可被認(rèn)為落在所附權(quán)利要求限定的本發(fā)明范圍內(nèi)。

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