專利名稱：牛尿酚治療皮膚病的用途的制作方法
牛尿酚治療皮膚病的用途相關(guān)申請本發(fā)明是申請日為2005年2月17日的申請序列號No. 11/059,951的部分繼續(xù)申 請，所述11/059，951在35U. S. C. § 119(e)下要求申請日為2004年4月28日的美國臨時 專利申請序列號No. 60/521，457的申請日權(quán)益。此外，本發(fā)明是申請日為2005年10月20 日的申請序列號No. 10/533，045的部分繼續(xù)申請，所述No. 10/533，045是申請日為2003年 10月29日的PCT序列號NO.US2003/034441的繼續(xù)申請，所述US2003/034441指定了美國， 以英文公布，在35U. S. C. § 119(e)下要求申請日為2002年10月29日的美國臨時系列專 利申請60/422，469的申請日權(quán)益。此外，本發(fā)明是申請日為2003年7月24日的申請序列 號No. 10/625,989的部分繼續(xù)申請，所述No. 10/625，989在35U. S. C. § 119(e)下要求申請 日為2002年7月24日的美國臨時專利申請序列號60/398，270的申請日權(quán)益和申請日為 2008年7月3日的專利申請序列號No. 12/167,813的申請日權(quán)益，No. 12/167，813是申請 日為2003年7月24日的申請序列號No. 10/625，934 (現(xiàn)在的美國專利7，396，855)的繼續(xù) 申請，所述No. 10/625，934在美國法典35U. S. C. § 119(e)下要求申請日為2002年7月24 日的美國臨時專利申請序列號No. 60/398，270的申請日權(quán)益。所有上述申請通過引用整體 并入本文。聯(lián)邦資助的研究或開發(fā)本發(fā)明得到以下政府支持國立衛(wèi)生研究所(NIH)給予的資助#NS39951，以及美 國農(nóng)業(yè)部(USDA)給予的資助 #NRI 2002-00798 和 #NRI2004-01811。政府擁有本發(fā)明的某些權(quán)利。
背景技術(shù)：
本發(fā)明涉及牛尿酚及其作用機(jī)理和作為治療和預(yù)防受雄激素調(diào)節(jié)的生理性和病 理性病況的治療性化合物的用途。近年來，植物性雌激素由于其針對年齡相關(guān)的疾病(例如心血管疾病和骨質(zhì)疏 松)和激素依賴的癌癥(即乳腺癌和前列腺癌)的潛在的保護(hù)作用，而受到越來越多的研 究性關(guān)注。主要有三類植物性雌激素1)異黃酮(主要來源于大豆)、2)木脂素(大量發(fā)現(xiàn) 于亞麻仁中)和3)香豆苯醚(coumestans)(來源于發(fā)芽的植物例如紫花苜蓿(alfalfa)。 在這三種主要類別中，由于含大豆的食品來源容易并廣泛，人們對異黃酮的消費(fèi)具有最大 的影響。異黃酮中，染料木素(genistain)和大豆苷元(daidzein)被認(rèn)為具有最強(qiáng)的雌 激素作用，因此大部分的注意力都指向這些分子(Knight et al.，Obstet Gyneco, 187 897-904,(1996) ；Setchel1，KDR. Am J Clin Nutr, 129 1333S-1346S(1998) ；Kurzeret al, Annu Rev Nutr，17 :353_381 (1997))。然而，這些異黃酮分子在大豆食物中以生物活性形 式存在的水平不高，而是以前體的形式以高豐度存在。例如，染料木苷(genistin)，染料木 素的前體，是含有分子碳水化合物部分的糖苷形式。此外，還存在丙二酰糖苷和乙酰糖苷形 式。這些綴合物在胃腸(GI)道中由腸道細(xì)菌代謝，所述腸道細(xì)菌將碳水化合物部分水解， 生成生物活性的植物性雌激素，染料木素。糖苷配基大豆苷元發(fā)生的代謝步驟相同，其轉(zhuǎn)化 自糖苷形式大豆苷(daidzin)。大豆苷元在“生成牛尿酚”的哺乳動物中再進(jìn)一步代謝成牛尿酚，所述牛尿酚然后可以在生產(chǎn)牛尿酚的個體的血漿中找到。除非食用大豆，否則牛尿酚 在絕大多數(shù)健康成年人的尿中通常是不存在的。體內(nèi)牛尿酚的形成完全依賴于腸道菌群， 證據(jù)是下述發(fā)現(xiàn)當(dāng)用大豆飼養(yǎng)無菌以及無植物性雌激素喂養(yǎng)的動物時發(fā)現(xiàn)其并不排泄牛 尿酚，并且人類新生兒或從出生開始僅喂養(yǎng)大豆食物的4個月齡的嬰兒的血漿和尿中也不 存在牛尿酚，原因是新生兒中還沒有發(fā)展出腸道菌群。(參見Setchell et al,The Lancet, 1997 ；350 23-27)。異黃酮的酚環(huán)使得這些化合物能結(jié)合雌激素受體(ER)并模擬雌激素。雖然染料 木素和大豆苷元結(jié)合雌激素受體，但與雌二醇相比其親和力較低，并且對ERi3的親和力比 對ERa高。因此異黃酮(如染料木素和代謝物S-牛尿酚)在機(jī)體各處多個組織位點(diǎn)中起 天然的選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)物(SERMs)的作用。在一些組織中，有證據(jù)顯示植物性雌激 素起雌激素激動劑的作用，而在另外的組織中，它們又顯示出與他莫西芬和雷洛昔芬相當(dāng) 的拮抗劑特征，其中SERM活性似乎是性激素依賴性和性別依賴性的。盡管大量科學(xué)文獻(xiàn)關(guān)注大豆或三葉草中的天然異黃酮，但很少有關(guān)于它們的腸來 源代謝物的作用或效果的報道。牛尿酚(7-羥基-3-(4'羥基苯基)_色滿)是植物性雌激 素大豆苷的主要代謝產(chǎn)物，大豆苷是大豆和豆制品中含量豐富的主要異黃酮之一。然而牛 尿酚并不是植物性雌激素，因為它不是植物的天然成分。它不天然存在于任何一種基于植 物的產(chǎn)品中。事實(shí)上，它是完全由腸細(xì)菌代謝產(chǎn)生的非留體異黃酮，然而只有約30-40%的 人類具有將大豆異黃酮轉(zhuǎn)化成牛尿酚的必需菌群。之前牛尿酚的研究已經(jīng)證實(shí)牛尿酚具有某些弱的雌激素性質(zhì)，與性激素結(jié)合球蛋 白和α-胎蛋白結(jié)合，還具有抗氧化劑的活性。在食用大豆的“產(chǎn)生牛尿酚”的哺乳動物的 尿和血漿中，牛尿酚的S-對映體(S-牛尿酚)是唯一的牛尿酚形式，也是人類腸細(xì)菌產(chǎn)生 的唯一牛尿酚對映體。R-和S-對映體構(gòu)象不同，相應(yīng)地影響了它們的生物活性。例如，只 有牛尿酚的S-對映體以足夠的親和力結(jié)合ER亞型，從而與報道的人類正常循環(huán)牛尿酚水 平相關(guān)。前列腺的發(fā)育和成熟依賴于雄激素的作用，人類的良性前列腺增生(BPH)的形 成明確需要在衰老過程中與睪丸雄激素的聯(lián)合。然而，睪酮不是負(fù)責(zé)前列腺生長的主要 雄激素。如最近的前列腺癌癥的治療所證明的，主要的前列腺雄激素是5 α - 二氫睪酮 (5 α -DHT)，所述治療涉及用5 α -還原酶抑制劑減少5 α -DHT。雖然在人類BPH中5 α -DHT 水平?jīng)]有升高，但在衰老的過程中前列腺中的5 α-DHT水平保持穩(wěn)定，雖然血漿中睪酮的 濃度降低。在前列腺間質(zhì)和基底細(xì)胞中睪酮被5α-還原酶轉(zhuǎn)化成5α-DHT。5 α-DHT主 要負(fù)責(zé)前列腺的發(fā)育和BPH的發(fā)病。5 α -還原酶抑制劑能將前列腺體積減小20% -30%。 這種腺組織的減小是通過誘導(dǎo)凋亡產(chǎn)生的，組織學(xué)上表現(xiàn)為導(dǎo)管的萎縮。5α_還原酶有兩 種同工型，1型和2型，前列腺主要表達(dá)2型同工型，肝和皮膚主要表達(dá)1型同工型。病人 已被鑒定為缺乏2型5 α -還原酶而非1型。具有2型5 α -還原酶無效突變的基因靶向敲 除小鼠顯示類似于缺乏5 α -還原酶的人的表型。1型5 α -還原酶敲除雄性小鼠在生育功 能上表型正常。已報道了其他泌尿生殖組織例如附睪、睪丸、引帶和海綿體組織(corporal cavernosal tissue)中5 α -還原酶的酶活性或免疫組織化學(xué)檢測。數(shù)量上，由于性別上更高的腎上腺皮質(zhì)應(yīng)激性，女性分泌的雄激素量比雌激素多。 通常被歸類為雄激素的主要循環(huán)類固醇根據(jù)血漿濃度遞減的順序，包括脫氫表雄酮硫酸鹽(DHEAS)，脫氫表雄酮(DHEA)(源自腎上腺皮質(zhì))，雄烯二酮㈧，睪酮⑴和5 α -DHT,雖然 只有最后兩種能結(jié)合雄激素受體至顯著的程度。其他三種類固醇被更適當(dāng)?shù)卣J(rèn)為是前雄激 素。5 α-DHT主要是睪酮代謝的外周產(chǎn)物。睪酮以游離形式和結(jié)合蛋白質(zhì)的形式循環(huán)，所述 蛋白質(zhì)包括白蛋白和性類固醇激素結(jié)合球蛋白(SHBG)，其水平是決定游離睪酮濃度的重要 因素。絕經(jīng)后卵巢是分泌雄激素的器官，絕經(jīng)過渡期或絕經(jīng)期的發(fā)生不直接影響睪酮的水 平。一些研究工作已經(jīng)開始關(guān)注用于治療雄激素依賴性疾病的甾體化合物的開發(fā)，所 述疾病例如為多毛癥，雄激素樣禿發(fā)癥，良性前列腺肥大(BPH)和前列腺癌。主要通過對 遺傳缺乏留類5 α-還原酶的男性的臨床評價暗示DHT是這些疾病進(jìn)程的病因因素。通過這 些研究，抑制這種酶成為設(shè)計和合成新的抗雄激素(antiandrogenic)藥物的藥理學(xué)策略。 然而，還不清楚抑制5α還原酶是否對系統(tǒng)有毒害作用，其已被使用5 α還原酶抑制劑的傳 統(tǒng)治療方法報道的副作用引起的禁忌癥例如降低的性欲，勃起障礙和射精障礙證實(shí)。把抑 制DHT的作用作為靶點(diǎn)的多種策略的開發(fā)將成為雄激素調(diào)節(jié)的病況的治療的重大進(jìn)步。盡管最近對牛尿酚涉及雌激素作用的藥理學(xué)有了一定了解，我們的研究顯示牛尿 酚有效的抗雄激素作用是獨(dú)特和新穎的，并且開啟了預(yù)防或治療雄激素相關(guān)病況的新途 徑。結(jié)合或隔絕5 α-DHT將提供抑制其對5 α-DHT敏感組織的作用的方法。目前沒有對 5 α -DHT特異的已知配體，但這類試劑明顯優(yōu)于直接靶向雄激素受體的無選擇性化合物相 比或雄激素合成相關(guān)的酶。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明涉及共調(diào)節(jié)雄激素作用和雌激素作用的方法，所述方法通過以足以結(jié)合游 離5 α -DHT (從而抑制5 α -DHT與雄激素受體的結(jié)合)并結(jié)合雌激素受體亞型的用量施用 包含S-牛尿酚的異構(gòu)牛尿酚，來緩解人或非人物種的一種或多種生理性和病理性皮膚病
況/病癥。本發(fā)明還涉及調(diào)節(jié)雄激素作用的方法，所述方法通過以足以結(jié)合游離5 α-DHT并 抑制5 α -DHT與雄激素受體結(jié)合的用量施用包含R-牛尿酚的異構(gòu)牛尿酚，來緩解人或非人 物種的一種或多種生理性和病理性皮膚病況/病癥。本發(fā)明進(jìn)一步涉及治療和預(yù)防受雄激素作用調(diào)節(jié)的雄激素相關(guān)疾病的方法，所述 方法通過以足以結(jié)合游離5 α -DHT (從而抑制5 α -DHT與雄激素受體的結(jié)合)并結(jié)合雌激 素受體亞型的用量施用包含S-牛尿酚的對映異構(gòu)牛尿酚來實(shí)現(xiàn)。本發(fā)明也可涉及治療和預(yù)防受雄激素作用調(diào)節(jié)的雄激素相關(guān)疾病的方法，所述方 法通過以足以結(jié)合游離5 α -DHT并抑制5 α -DHT與雄激素受體結(jié)合的用量施用包含R-牛 尿酚的對映異構(gòu)牛尿酚來實(shí)現(xiàn)。本發(fā)明還涉及含有S-牛尿酚的對映異構(gòu)牛尿酚用于治療和預(yù)防受雄激素作用調(diào) 節(jié)的雄激素相關(guān)疾病的用途，所述用途通過以足以結(jié)合游離5 α -DHT并抑制5 α -DHT與雄 激素受體結(jié)合和足以結(jié)合雌激素受體亞型的用量施用包含S-牛尿酚的對映異構(gòu)牛尿酚來 實(shí)現(xiàn)。本發(fā)明還涉及對人或非人物種的一種或多種生理性和病理性皮膚病況/疾病提 供個人化治療的方法，所述病況/疾病受DHT和雌激素受體的調(diào)節(jié)，所述方法包含1)評價病人的一種或多種疾病狀態(tài)或病況；2)評價病人的牛尿酚生產(chǎn)者狀態(tài)；3)從包含下列的組 中選定治療的最佳方案a)施用模式，b)劑量，c)施用間隔和d)牛尿酚劑量中對映異構(gòu)體 的比例。本發(fā)明的方法和組合物對選自以下的多種皮膚病況/疾病的治療和緩解有效皮 膚完整性，膠原蛋白的產(chǎn)生，彈性蛋白的產(chǎn)生，彈性蛋白酶，皮膚厚度，皮膚的血流，皮膚的 充盈，皮膚含水量，陰道干澀，預(yù)防基質(zhì)金屬蛋白酶引起的膠原蛋白和彈性蛋白的裂解，修 復(fù)和預(yù)防皮膚的皺紋，增加葡糖胺聚糖和透明質(zhì)酸用于改善的皮膚外表，傷口愈合，皮膚傷 疤的改善，通過改善皮脂腺功能減輕油性皮膚，皮膚老人斑，和粉刺，男性和女性型禿發(fā)，多 毛癥，頭皮、臉部和身體毛發(fā)的健康和生長，頂泌(汗)腺功能，皮膚炎癥，皮膚的免疫功能， 皮膚毛孔大小，皮膚溫度，以及涉及雄激素和/或雌激素影響的類固醇激素合成/激素作 用、類固醇代謝和類固醇結(jié)合受體代謝中皮膚和毛發(fā)的異常。另一個實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及調(diào)節(jié)雄激素作用從而緩解受試者至少一種皮膚或 毛發(fā)病況的方法。所述方法包括施用牛尿酚，其中至少是R-牛尿酚，其中R-牛尿酚結(jié) 合游離5 α - 二氫睪酮并抑制5 α - 二氫睪酮與雄激素受體的結(jié)合。此方法中，牛尿酚可以 包括至少5% R-牛尿酚。此方法中，牛尿酚可以包括至少10% R-牛尿酚。此方法中，牛尿 酚可以包括至少20% R-牛尿酚。此方法中，牛尿酚可以包括至少25% R-牛尿酚。此方法 中，牛尿酚可以是S-牛尿酚和R-牛尿酚的外消旋混合物。此方法中，牛尿酚可以進(jìn)一步包 括足量結(jié)合雌激素受體亞型的S-牛尿酚。另一個實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及緩解受試者至少一種皮膚或毛發(fā)病況的方法。該 方法包括施用包含牛尿酚的組合物，所述牛尿酚中至少是R-牛尿酚，其中R-牛尿酚結(jié) 合游離5 α - 二氫睪酮和抑制5 α - 二氫睪酮與雄激素受體的結(jié)合。此方法中，牛尿酚可以 包括至少5% R-牛尿酚。此方法中，牛尿酚可以包括至少10% R-牛尿酚。此方法中，牛尿 酚可以包括至少20% R-牛尿酚。此方法中，牛尿酚可以包括至少25% R-牛尿酚。此方法 中，牛尿酚可以是S-牛尿酚和R-牛尿酚的外消旋混合物。此方法中，組合物可以是局部、透 皮或皮下施用。此方法中，組合物可以是局部組合物，包含至少約0. 001%至約10%的牛尿 酚。此方法中，組合物可以進(jìn)一步包含藥學(xué)活性物質(zhì)或賦形劑。此方法中，組合物可以口服， 劑量是至少約0.005mg/kg體重的牛尿酚。此方法中，組合物可以是遲釋或緩釋制劑。此方 法中，組合物可以通過乳液，噴霧液，護(hù)墊，繃帶或透皮貼劑的形式施用。此方法中，牛尿酚 可以進(jìn)一步包括足量結(jié)合雌激素受體亞型的S-牛尿酚。此方法中，皮膚或毛發(fā)的狀態(tài)可以 經(jīng)至少下列一種以美容形式改善a)通過細(xì)胞重生誘導(dǎo)提高的皮膚完整性；b)增強(qiáng)皮膚的 含水量或濕度；c)增加葡糖胺聚糖和透明質(zhì)酸用于改善皮膚光澤；d)降低經(jīng)表皮的水分流 失，皮膚剝落和脫皮；e)滋補(bǔ)得到有活力的健康皮膚；f)改善皮膚厚度和增強(qiáng)細(xì)胞的耐久 性；g)加強(qiáng)皮膚的膠原蛋白和改善皮膚健康；h)促進(jìn)皮膚的伸縮性以及改善皮膚的保護(hù)性 能；i)增加彈性蛋白以改善皮膚的彈性；j)保護(hù)免受彈性蛋白酶的損傷；k)保護(hù)免受膠原 蛋白酶的損傷；1)保護(hù)免受基質(zhì)金屬蛋白酶的損傷；m)修復(fù)和減輕真皮皺紋和改善皮膚質(zhì) 地；η)減小皮膚毛孔尺寸和增強(qiáng)皮膚的光滑度；ο)復(fù)原和恢復(fù)皮膚；P)改善傷疤的外觀和 皮膚磨損；q)通過最小化皮脂腺分泌減輕油性皮膚；r)減輕按年代的，內(nèi)在和外在的皮膚 的真皮衰老；s)改善皮膚老人斑；t)增強(qiáng)毛發(fā)的色素沉著和U)改善皮膚色調(diào)。此方法中， 通過至少一種以下的手段藥學(xué)上改善皮膚或毛發(fā)的病況a)增加皮膚中的血流；b)改善皮膚的溫度和皮膚的溫度調(diào)節(jié)；C)增加真皮厚度和抑制成纖維細(xì)胞的凋亡；d)誘導(dǎo)膠原蛋白 的產(chǎn)生和增強(qiáng)皮膚的充盈；e)誘導(dǎo)彈性蛋白的產(chǎn)生和增加皮膚彈性；f)抑制彈性蛋白酶以 改善皮膚的質(zhì)地和真皮紋理；g)修復(fù)和治療皺紋和改善皮膚質(zhì)地；h)正面影響血管形成， 皮膚厚度和皮膚充盈，和減慢衰老的進(jìn)程；i)減少基質(zhì)金屬蛋白酶以正面影響皮膚膠原蛋 白和彈性蛋白；j)增強(qiáng)皮膚的修復(fù)和傷口的愈合；k)改善傷疤的外觀和皮膚磨損；1)通過 最小化皮脂腺分泌減輕油性皮膚；m)穩(wěn)定皮膚顏色的變化和毛發(fā)的色素沉著以及增強(qiáng)皮 膚的亮度；η)治療，改善和對抗高色素沉著，老人斑和光老化帶來的損害；ο)減輕或消除粉 刺；P)減輕頭皮頭發(fā)的減少或增強(qiáng)頭皮頭發(fā)的保留(在男性和女性型禿發(fā)中)；q)延遲面 部和身體毛發(fā)的生長，減少面部和身體毛發(fā)的生長和減輕多毛癥；r)減輕頂泌腺分泌和減 輕過量汗腺功能(汗腺炎和腋臭)；s)減輕皮膚炎癥和陰道干燥和t)減輕涉及雌激素和/ 或雄激素影響的類固醇激素合成和功能，和類固醇代謝與類固醇結(jié)合受體代謝中皮膚和毛 發(fā)的異常。在另一個實(shí)施方式中，本發(fā)明涉及增強(qiáng)皮膚外觀的方法。方法包括施用包含牛尿 酚的組合物的步驟，所述牛尿酚中至少1 %是R-牛尿酚，其中R-牛尿酚結(jié)合游離5 α - 二氫 睪酮和抑制5 α - 二氫睪酮與雄激素受體的結(jié)合。此方法中，牛尿酚可以進(jìn)一步包括足量結(jié) 合雌激素受體亞型的S-牛尿酚。


圖1顯示S-牛尿酚和R-牛尿酚對映體的化學(xué)結(jié)構(gòu)。圖2顯示健康成年人口服施用R-牛尿酚后血漿中R-牛尿酚的出現(xiàn)/消失曲線。圖3顯示[3H] 5 α -DHT+牛尿酚出現(xiàn)明顯的峰，而單獨(dú)的[3H] 5 α -DHT沒有。圖4Α顯示與前列腺共同孵育后[3H] 5 α -DHT+牛尿酚出現(xiàn)兩個明顯的峰㈧。圖4Β顯示與前列腺共同孵育后[3H] 5 α -DHT僅出現(xiàn)單獨(dú)的峰⑶。圖5顯示牛尿酚與[3H] 5 α -DHT特異性結(jié)合。圖6顯示喂養(yǎng)Phyto-600或無Phyto飲食的雄性大鼠(不禁食)的血糖水平。圖7顯示喂養(yǎng)Phyto-600或無Phyto飲食的雄性大鼠(不禁食)的甲狀腺(T3) 血清水平。圖8顯示基于無-Phyto飲食的三組大鼠在接受牛尿酚注射或載劑注射后28天的
睪丸重量。圖9A顯示非禿的皮膚上雌激素受體β (ER- β),5α-還原酶(5 α -R)和雄激素受 體(AR)的分布。圖9B顯示人皮膚的毛囊球部的ER β，5 α -R和AR的分布。圖9C顯示人皮膚的皮脂腺的ER β，5 α -R和AR的分布。圖10顯示與加入組織培養(yǎng)基的對照物質(zhì)或牛尿酚(外消旋混合物)孵育后表皮 中前膠原的合成。圖11顯示與加入組織培養(yǎng)基的對照物質(zhì)或牛尿酚(外消旋混合物)孵育后表皮 加真皮中平均的前膠原合成。圖12顯示與加入組織培養(yǎng)基的對照物質(zhì)或牛尿酚(外消旋混合物)孵育后真皮 中前膠原的合成。
圖13顯示人真皮單層成纖維細(xì)胞與加入培養(yǎng)基的0. 01 %，0. 001 %和0. 0001 %牛 尿酚，0. 01 %，0. 001 %和0. 0001 % 17 β -雌二醇，載劑或抗壞血酸孵育后，通過MTT試驗測 量的代謝活性。圖14顯示人真皮單層成纖維細(xì)胞與加入培養(yǎng)基的0. 01 %，0. 001 %和0. 0001 %牛 尿酚，0.01%，0. 001%和0. 0001% 17 β-雌二醇，載劑或抗壞血酸孵育后，通過膠原I型C 末端前肽ELISA測量的膠原蛋白沉積。圖15顯示人真皮單層成纖維細(xì)胞與加入培養(yǎng)基的載劑或0. 001%牛尿酚孵育后， 通過MTT試驗測量的代謝活性。水平線表示用未處理對照培養(yǎng)物測定的基線。圖16顯示人真皮單層成纖維細(xì)胞與加入組織培養(yǎng)基的二乙二醇單乙基醚 (transcutol)載劑，0. 0001 %牛尿酚，或抗壞血酸孵育后，通過膠原I型C末端前肽ELISA 測定的膠原蛋白沉積。水平線表示用未處理對照培養(yǎng)物測定的基線。圖17顯示人真皮單層成纖維細(xì)胞與加入組織培養(yǎng)基的未處理的介質(zhì)，抗壞血酸， 0. 001%牛尿酚，0. 001% 5 α-DHT或0. 001%牛尿酚和0. 001% 5 α-DHT的組合孵育后，通 過MTT測定測量的代謝活性。水平線表示用未處理對照培養(yǎng)物測定的基線。圖18顯示與加入組織培養(yǎng)基的載劑，10，1，或0. Inm 5 α-DHT，100，10，或Inm牛 尿酚，或5 α-DHT和牛尿酚的組合孵育后，前列腺癌細(xì)胞分泌的前列腺特異性抗原(PSA)水 平。圖19顯示與加入組織培養(yǎng)基的載劑，IOnm牛尿酚，或IOnm 17 β -雌二醇孵育后， 人真皮單層成纖維細(xì)胞的3維(3-D)培養(yǎng)物中膠原I型蛋白表達(dá)的熒光活化的細(xì)胞分選 (FACS)分析。圖20顯示與加入組織培養(yǎng)基的載劑，IOnm牛尿酚，或IOnm 17 β -雌二醇孵育后， 人真皮單層成纖維細(xì)胞的3-D培養(yǎng)物中，膠原III型蛋白表達(dá)的熒光素活化的FACS分析。圖21顯示與加入組織培養(yǎng)基的載劑，IOnm牛尿酚，或IOnm 17 β -雌二醇孵育后， 人真皮單層成纖維細(xì)胞的3-D培養(yǎng)物中，基質(zhì)金屬蛋白酶-3(ΜΜΡ-3)蛋白表達(dá)的FACS分 析。圖22顯示與加入組織培養(yǎng)基的載劑，IOnm牛尿酚，或IOnm 17 β -雌二醇孵育后， 人真皮單層成纖維細(xì)胞的3-D培養(yǎng)物中，彈性蛋白表達(dá)的FACS分析。圖23顯示與加入組織培養(yǎng)基的載劑，IOnm牛尿酚，或IOnm 17 β -雌二醇孵育后， 人真皮單層成纖維細(xì)胞的3-D培養(yǎng)物中，彈性蛋白酶蛋白表達(dá)的FACS分析。圖24顯示與加入組織培養(yǎng)基的載劑，IOnm牛尿酚，或IOnm 17 β -雌二醇孵育后， 人真皮單層成纖維細(xì)胞的3-D培養(yǎng)物中，通過FACS進(jìn)行的凋亡的細(xì)胞周期分析。圖25顯示與加入組織培養(yǎng)基的載劑，IOnm牛尿酚，或IOnm 17 β -雌二醇孵育后， 人真皮單層成纖維細(xì)胞的3-D培養(yǎng)物中，通過FACS進(jìn)行的處于S-G2M相周期的細(xì)胞周期分 析。圖26顯示連續(xù)注射載劑或牛尿酚25天后雄性大鼠的尾部皮膚溫度。圖27顯示與加入組織培養(yǎng)基的載劑，IOnm牛尿酚，IOnm 17 β-雌二醇，或抗壞血 酸孵育后，通過膠原I型C末端前肽ELISA測量的人真皮單層成纖維細(xì)胞的膠原蛋白沉積 的結(jié)果。圖28顯示用于測試載劑(乙醇)，牛尿酚外消旋體或S-牛尿酚的刺激性的眼刺激性檢測(ocular irritection)模型。圖29顯示用于測試載劑(乙醇)，牛尿酚外消旋體或S-牛尿酚的刺激性的真皮刺 激實(shí)驗?zāi)Ｐ汀D30是顯示直接結(jié)合5 α -DHT的牛尿酚異構(gòu)體比例的圖表(平均值士 s. e. m.)。圖31的圖表說明在人真皮器官型培養(yǎng)物中，雌激素受體亞型阻斷劑他莫西芬 (TAM)對于牛尿酚對膠原I型產(chǎn)生的正面影響的阻斷。圖32的圖表說明在人真皮等同物培養(yǎng)物中，雌激素受體亞型阻斷劑TAX對于牛尿 酚對膠原I型和III型和彈性蛋白的正面影響的阻斷。圖33的圖表顯示在器官型人全厚度等同物中，體外給予不同濃度的非外消旋牛 尿酚(0. 3至0. 0001% )測定的存活力和細(xì)胞毒性。圖34的圖表顯示使用非外消旋牛尿酚和已知組織穿透劑對人真皮成纖維細(xì)胞中 膠原蛋白的刺激。圖35的圖表顯示非外消旋牛尿酚刺激人類真皮成纖維細(xì)胞中膠原蛋白沉積的效^ ο圖36是在半臉(half-face)實(shí)驗中通過給予非外消旋牛尿酚進(jìn)行的攝像分析的 照片。對附圖和目前優(yōu)選的實(shí)施方式的詳述在這里，術(shù)語“皮膚”指的是包含人或非人個體體被的細(xì)胞層，以及其結(jié)構(gòu)元件例 如毛發(fā)、毛囊、皮脂腺、頂泌(汗)腺、手指甲和腳指甲。更進(jìn)一步地，本發(fā)明使用的術(shù)語“皮 膚”包括延伸自相鄰皮膚的粘膜組織，例如嘴和口腔、鼻子和鼻路、眼睛和眼皮、耳朵和外耳 道，以及會陰，和肛門和泌尿生殖器口的組織。在這里，術(shù)語“受影響的部位”指的是要用治療性分子或包含治療性分子的化合物 治療的皮膚區(qū)域。受影響的部位可以是尋求治療的皮膚病況或疾病的部位。在一些情形中， 受影響的部位可以包含個體所有的皮膚。可選擇的，受影響的部位可以是尋求改善美容性 質(zhì)的部位，其同樣可以包括個體所有的皮膚。在這里，術(shù)語“系統(tǒng)的”或“系統(tǒng)性地”指的是通過血流或淋巴系統(tǒng)達(dá)到皮膚的受 影響的部位進(jìn)行治療的施用方式。系統(tǒng)性治療的實(shí)例包括但不限于，口服灌胃或消化，靜脈 內(nèi)或皮下泵輸注，和肌肉內(nèi)、腹膜內(nèi)、真皮下注射(hypodermic)或皮下(subdermic)注射。在這里，術(shù)語“局部的”或“局部地”指的是直接應(yīng)用于皮膚的受影響的部位的施 用方式。局部治療的實(shí)例包括，但不限于應(yīng)用乳霜、乳液、香波、調(diào)理液、噴霧、護(hù)墊、繃帶、尿 布、預(yù)濕小毛巾(proistened towellte)或透皮貼劑；和經(jīng)靜脈內(nèi)注射或?qū)脲V劑或栓劑 的局部施用。在這里，術(shù)語“皮膚參數(shù)”指的是皮膚健康的各種指標(biāo)，包括但不限于膠原蛋白和 彈性蛋白的生產(chǎn)水平，彈性蛋白酶、皮膚厚度、皮膚中的血流、皮膚充盈和含水量、基質(zhì)金屬 蛋白酶引發(fā)的膠原蛋白和彈性蛋白裂解的防止、皮膚皺紋的消失、為了正常皮膚外觀的葡 糖胺聚糖和透明質(zhì)酸的存在、皮膚傷口愈合的能力、正常的皮脂腺功能、皮膚老人斑的不存 在或色素沉著障礙、皮膚毛孔大小、皮膚溫度和毛發(fā)和指甲的正常生長。在這里，術(shù)語“皮膚完整性”指的是細(xì)胞外基質(zhì)中膠原蛋白和彈性蛋白的存在，所 述蛋白使得皮膚能夠伸長和回縮，從而允許運(yùn)動。
牛尿酚(7-羥基-3-(4 ‘-羥基苯基)_色滿)代表大豆苷和大豆苷元的主要代謝 物——在大豆和大豆食物中大量存在的異黃酮，并且是一種重要的生物活性分子。喂養(yǎng)富 含植物性雌激素飲食的動物，例如嚙齒動物中，主要循環(huán)的異黃酮是牛尿酚，約占總循環(huán)異 黃酮水平的70-90%。然而，人體中不是這樣。牛尿酚是通過來自大豆的大豆苷的糖綴合物和甲基化異黃酮芒柄花黃素或在三 葉草中發(fā)現(xiàn)的其糖的綴合物的水解形成的。一旦形成，牛尿酚顯示為代謝惰性的，不經(jīng)過進(jìn) 一步的生物轉(zhuǎn)化，保留II相代謝或肝中輕微程度的附加的羥基化。與大豆苷元和染料木素 一樣，主要的II相反應(yīng)是葡萄糖醛酸化和程度較小的硫酸化。在尿中存在的牛尿酚是大豆 消化的函數(shù)的原始發(fā)現(xiàn)之后，我們觀察到約50-70%的成年人即使天天食用大豆食物，尿液 中也沒有牛尿酚排泄，原因不清楚。而且，即使給予純的異黃酮化合物，從而去除食物基質(zhì) 的任何影響，許多人也不能將大豆苷元轉(zhuǎn)化成牛尿酚。這種現(xiàn)象導(dǎo)致將人定義為“牛尿酚生 產(chǎn)者”或“非牛尿酚生產(chǎn)者”(或“低牛尿酚生產(chǎn)者”)來形容這兩種不同的人群。通過經(jīng)驗得到了劃分這兩種人群的邊界值。血漿牛尿酚濃度小于IOng/ mL(40nmol/L)的屬于“非牛尿酚生產(chǎn)者”，水平大于lOng/mL(40nmol/L)的定義為“牛尿酚 生產(chǎn)者”。這種區(qū)別也可以通過尿中的水平得到，牛尿酚生產(chǎn)者是排泄大于lOOOnmol/L的 人。雖然個體間對牛尿酚的排泄差別很大，但能生產(chǎn)牛尿酚和不能生產(chǎn)的個體之間區(qū)分很 明顯，其與催化該反應(yīng)的酶動力學(xué)中的前體-產(chǎn)物關(guān)系一致。因此尿中大豆苷和牛尿酚水 平之間存在反相關(guān)，并且迄今為止未定義顯著的性別差異。牛尿酚的作用機(jī)理已經(jīng)被認(rèn)為是皮膚健康和疾病的重要分支，表明牛尿酚在雄 激素和/或雌激素調(diào)節(jié)的皮膚和毛發(fā)病理過程的治療中有廣泛和重要的應(yīng)用。牛尿酚能 作為抗雄激素或雌激素受體的激動劑或拮抗劑。牛尿酚的抗雄激素性質(zhì)是獨(dú)一無二的， 這是因為牛尿酚不與雄激素受體(AR)結(jié)合，而是特異性地高親和力結(jié)合5α_ 二氫睪酮 (5 α -DHT)，從而防止5 α -DHT結(jié)合AR。而且，牛尿酚的R-和S-對映異構(gòu)體都特異性結(jié)合 5 α -DHT,隔絕5 α -DHT和AR，抑制5 α -DHT在體內(nèi)生理過程的作用。由R-牛尿酚和S-牛 尿酚組成的外消旋牛尿酚，以及單獨(dú)的R-牛尿酚或S-牛尿酚，選擇性地結(jié)合5 α -DHT。哺乳動物中，有兩種主要的雄激素，睪酮和其5 α -還原的代謝物，5 α -DHT。 5 α -DHT被認(rèn)為是哺乳動物體中作用最強(qiáng)的雄激素。由位于人類X染色體上的單拷貝基因 編碼的AR特異性地調(diào)節(jié)雄激素的作用。雖然睪酮和5 α -DHT都結(jié)合AR，但是僅受睪酮輕微 影響的某些組織(即前列腺，毛囊等)受5 α -DHT很大的影響。而且，5 α -DHT涉及許多疾 病和病癥。因為牛尿酚特異性結(jié)合5 α -DHT并抑制其作用，表明牛尿酚在雄激素調(diào)節(jié)的皮 膚和毛發(fā)病理過程的治療中有廣泛和重要的應(yīng)用。牛尿酚與類固醇雌激素雌二醇有相似的結(jié)構(gòu)。附圖1顯示了 R-牛尿酚和S-牛尿 酚的化學(xué)結(jié)構(gòu)。牛尿酚在異黃酮中是獨(dú)一無二的，其具有手性中心從而存在兩種不同的對 映異構(gòu)體形式，R-和S-對映異構(gòu)體。R-和S-牛尿酚構(gòu)像上不同，這預(yù)示著其將影響牛尿 酚對映體與二聚ER復(fù)合物空腔中結(jié)合位點(diǎn)的配位方式，以及與5 α -DHT的結(jié)合方式。約50%的牛尿酚以游離或未結(jié)合的形式在人體循環(huán)，并且比血漿中的游離大豆苷 元(18. 7% )或雌二醇(4. 6% )的比例顯著更高。由于未結(jié)合的部分可用于進(jìn)行受體占據(jù)， 并且假定地可用于結(jié)合5 α -DHT，所以這可有效增強(qiáng)牛尿酚的總效力。所有已知的之前對牛尿酚的研究似乎都是用牛尿酚的外消旋形式進(jìn)行的。通常缺少存在兩種形式的牛尿酚或其對映體作用可不同的評價，據(jù)我們所知目前沒有關(guān)于單個對 映體的特異性作用或活性的報道。R-和S-牛尿酚特異性結(jié)合5 α-DHT。牛尿酚外消旋體， R-牛尿酚或S-牛尿酚不結(jié)合雄激素受體(AR)。與17 β -雌二醇相比，R-和S-牛尿酚對映 體與ER α的親合力(分?jǐn)?shù)(1/210)和分?jǐn)?shù)(1/49))分別小于17 β-雌二醇。然而，S-牛 尿酚對映體看起來具有ER β高選擇性，具有相對高的ER β親和力。對映體S-牛尿酚結(jié)合 ER β的濃度與17 β -雌二醇相似[牛尿酚，Kd = 0. Ixm vs. 17 β -雌二醇，Kd = 0. 15nm]， 但其對ERi3亞型優(yōu)先的親和力將S-牛尿酚定義為SERM。R-牛尿酚對映體以約{分?jǐn)?shù) (1/100)}的親和力結(jié)合，但是，如果R-牛尿酚以非常高的濃度存在，它就不具有SERM性質(zhì)。 因此，S-和R-牛尿酚具有選擇性結(jié)合最強(qiáng)循環(huán)雄激素——5 α -DHT的能力，并且S-牛尿酚 對ER β具有充分的親和力，從而定義它具有SERM的性質(zhì)。 大豆苷元的天然代謝物S-牛尿酚和R-牛尿酚拮抗有效的雄激素二氫睪酮 5 α -DHT作用的能力為預(yù)防和治療其中強(qiáng)效雄激素5 α -DHT發(fā)揮有害作用的疾病的美容、 飲食、營養(yǎng)藥品和藥理學(xué)方法提供了機(jī)會，所述疾病包括但不限于，前列腺癌、肥胖癥、皮膚 疾病和毛發(fā)缺損。另外，S-牛尿酚的雌激素作用也可對治療或預(yù)防BPH和前列腺癌有利， 這歸功于牛尿酚在雌激素受體水平上和作為抗雄激素的聯(lián)合作用。
雖然不天然存在，但由于能調(diào)節(jié)體內(nèi)受雄激素介導(dǎo)的過程，R-牛尿酚是非常重要 的。在結(jié)合研究中，牛尿酚對映體特異性結(jié)合5 α -DHT，但不結(jié)合睪酮、DHEA或雌激素。這 樣，牛尿酚不直接結(jié)合雄激素受體自身就能隔絕5 α -DHT與雄激素受體。體內(nèi)研究表明對 未經(jīng)閹割的雄性大鼠進(jìn)行牛尿酚處理能顯著降低前列腺和附睪而不是睪丸的重量。給予用 5 α -DHT處理的閹割的雄性大鼠牛尿酚后，牛尿酚抑制了 5 α -DHT對前列腺的營養(yǎng)作用，以 及對血漿促黃體生成素(LH)水平的負(fù)反饋?zhàn)饔?。通過特異性結(jié)合5 α -DHT和阻止5 α -DHT與雄激素受體(AR)的結(jié)合，而不是自身 與AR結(jié)合，牛尿酚能起抗雄激素作用。而且，已經(jīng)與AR結(jié)合的5 α -DHT不能再被異構(gòu)的牛 尿酚競爭性結(jié)合。異構(gòu)的牛尿酚可以被用來在體外或體內(nèi)與5 α-DHT接觸。當(dāng)在體內(nèi)接觸 5 α -DHT時，可以通過任何路徑施用牛尿酚，所述路徑允許吸收牛尿酚進(jìn)入血液或局部應(yīng)用 進(jìn)入皮膚。生物學(xué)上可獲得的5 α -DHT在結(jié)合牛尿酚之前是游離的，并不被任何天然配體
纟口口。生殖器官例如前列腺和附睪已知是受雄激素控制的。之前的數(shù)據(jù)顯示青春期前， 當(dāng)循環(huán)的雄激素水平很低時，用含有大量大豆衍生的異黃酮的飲食喂養(yǎng)的大鼠具有不被這 種飲食改變的前列腺重量。然而，青春期后，當(dāng)雄激素水平升高時，與喂養(yǎng)無植物性雌激素 飲食的動物相比，喂養(yǎng)富含植物性雌激素飲食的大鼠的前列腺重量顯著下降。這些數(shù)據(jù)與 本發(fā)現(xiàn)相似，本發(fā)現(xiàn)即經(jīng)牛尿酚處理的未經(jīng)閹割大鼠顯示前列腺和附睪重量顯著下降，但 不改變睪丸或垂體的重量。值得注意的是，如果前列腺和附睪的值相對于體重被標(biāo)準(zhǔn)化 (每100克)，則所述比例在牛尿酚處理過的值和對照值之間仍然顯著不同。牛尿酚也抑制 5 α -DHT對前列腺和附睪的雄激素營養(yǎng)作用，而不顯著改變睪酮水平。5 α-DHT對循環(huán)的血漿促黃體生成素(LH)水平有負(fù)反饋?zhàn)饔谩ＥＤ蚍油ㄟ^結(jié) 合5 α -DHT顯著升高LH水平并防止這種反饋?zhàn)饔?。牛尿酚完全逆轉(zhuǎn)5 α -DHT對性腺切除 (GDX)的雄性中LH水平的抑制作用，但5ci-DHT加牛尿酚處理的雄性大鼠顯示與對照值相 似的LH水平。這些數(shù)據(jù)進(jìn)一步提示牛尿酚具有結(jié)合5 α-DHT的特定能力(推測在血循環(huán)系統(tǒng)中)，并阻礙5 α -DHT在LH生產(chǎn)或分泌中的激素作用。因此本發(fā)明的一個實(shí)施方案是 通過用對映異構(gòu)的牛尿酚接觸個體的5 α -DHT來調(diào)節(jié)個體LH水平的方法。牛尿酚可以通 過允許將牛尿酚吸收入皮膚或血液的任何路徑施用，其施用的量與要被治療的疾病的性質(zhì) 和個體的大小一致。在某些方案中，可能需要提供系統(tǒng)和局部的聯(lián)合治療。對映異構(gòu)的牛尿酚可以通過化學(xué)合成制備，可以通過已知方法，典型地利用手性 相柱從外消旋混合物中分離得到?？梢允褂蒙飳W(xué)方法得到具有高對映選擇性的S-牛尿 酚，所述生物學(xué)方法利用與源自異黃酮例如大豆苷元的牛尿酚的代謝相關(guān)的產(chǎn)生牛尿酚的 微生物。PCT專利公開W004-009035描述了這些方法，其整體被引入作為參考。誦過I合予S-牛尿酚、R-牛尿酚和、混合物來治療疾病本發(fā)明為個體受試者提供一種手段，來克服不能體內(nèi)產(chǎn)生牛尿酚或尤其是供應(yīng) R-牛尿酚的問題，所述手段通過直接提供牛尿酚對映體、S-牛尿酚或R-牛尿酚、非外消旋 S-牛尿酚和R-牛尿酚的外消旋或非外消旋混合物來實(shí)現(xiàn)，避免對生產(chǎn)這些化合物的腸道 細(xì)菌的需要或攝取含牛尿酚前體的異黃酮的大豆食品的需要。輸送S-牛尿酚不僅能補(bǔ)充 “牛尿酚生產(chǎn)者”也能補(bǔ)充“非牛尿酚生產(chǎn)者”體內(nèi)S-牛尿酚的生成。當(dāng)牛尿酚生產(chǎn)者產(chǎn)生的日常S-牛尿酚水平由于下列原因不足時，給他的飲食中 補(bǔ)充牛尿酚對映體或混合物是有利的，1)消耗的異黃酮不足以產(chǎn)生牛尿酚，2)抗生素的使 用消除了從前體異黃酮制造牛尿酚的腸道細(xì)菌的活性，或3)其他影響牛尿酚生產(chǎn)或吸收 水平的健康因素，例如短腸綜合征或腸造口的手術(shù)構(gòu)建，例如回腸造口術(shù)。另外，補(bǔ)充的牛 尿酚水平被認(rèn)為對人的健康和生活質(zhì)量有增強(qiáng)作用。本發(fā)明提供以足夠?qū)π奂に叵嚓P(guān)疾病以及其他相關(guān)病況產(chǎn)生健康益處的用量輸 送S-牛尿酚、R-牛尿酚、外消旋牛尿酚或非外消旋的牛尿酚混合物的方法。牛尿酚的抗雄 激素活性能影響體內(nèi)許多組織。特別地，5 α -DHT的抑制雄激素的活性對預(yù)防和治療以下有 利女性和男性型禿發(fā)、面部和身體毛發(fā)生長(多毛癥)、皮膚健康(粉刺、抗衰老例如預(yù)防 皺紋和修復(fù)以及抗光老化)，和皮膚完整性(膠原蛋白和彈性蛋白的堅穩(wěn)性)。該方法可以 是局部施用、系統(tǒng)性施用或局部和系統(tǒng)性聯(lián)合施用。對于局部施用，應(yīng)用于皮膚受影響的部位的牛尿酚濃度的范圍在0. 001%到10% 之間。其他實(shí)施方案中，應(yīng)用于皮膚受影響的部位的牛尿酚濃度的范圍在0.01%到10% 之間。典型地，0.01%到能有效誘導(dǎo)提高的皮膚完整性，膠原蛋白的產(chǎn)生，彈性蛋白的 產(chǎn)生，彈性蛋白酶，皮膚厚度，皮膚的血流，皮膚的充盈，皮膚含水量，預(yù)防基質(zhì)金屬蛋白酶 導(dǎo)致的膠原蛋白和彈性蛋白的裂解，皮膚皺紋的修復(fù)和預(yù)防，增加用于改善皮膚外觀的葡 糖胺聚糖和透明質(zhì)酸，傷口愈合，皮膚傷疤的改善，通過改善皮脂腺功能減輕油性皮膚，皮 膚老人斑和皮膚亮度，粉刺，男性和女性型禿發(fā)，多毛癥，頭皮、臉部和身體毛發(fā)的健康和生 長，頂泌(汗)腺功能，皮膚炎癥，皮膚的免疫功能，皮膚毛孔大小，皮膚溫度，以及涉及雄激 素和/或雌激素影響的類固醇激素合成/激素作用、類固醇和類固醇結(jié)合受體代謝中皮膚 和毛發(fā)的異常。在某些方案中，由于皮膚病況或疾病的存在或病人是非牛尿酚生產(chǎn)者，需要 較高的劑量。這種情況下，局部應(yīng)用的牛尿酚濃度可以高達(dá)10 %，可以更加頻繁地進(jìn)行局部 施用，或可以聯(lián)合或替代局部施用地使用系統(tǒng)施用。對于系統(tǒng)施用，給予足量含牛尿酚的組合物，以在哺乳動物血漿中產(chǎn)生至少5納 克每毫升(ng/mL)、更典型地至少lOng/mL或更高的瞬時對映異構(gòu)牛尿酚水平，或尿液中高于lOOOnmol/L的瞬時對映異構(gòu)牛尿酚水平。典型地，口服的組合物的劑量為至少約 0. 005mg,至少約lmg，更典型地至少5mg，和高達(dá)200mg，更典型地達(dá)50mg的異構(gòu)牛尿酚。圖 2的R-牛尿酚血漿出現(xiàn)/消失的藥代動力學(xué)曲線顯示了健康成年人口服20mg R-牛尿酚對 映體后血漿中典型的R-牛尿酚血漿濃度。健康成年人口服20mg S-牛尿酚后血漿中典型 的S-牛尿酚生物利用度水平與R-牛尿酚顯示的相似。輸送足量的R-和/或S-牛尿酚的能力被認(rèn)為比輸送牛尿酚的外消旋混合物更有 優(yōu)勢。首先，單獨(dú)的R-牛尿酚或S-牛尿酚的效力典型地是外消旋混合物的至少2倍。第 二，人體只產(chǎn)生S-牛尿酚，因而只含S-牛尿酚的組合物代表含身體熟悉的成分S-牛尿酚 的“天然”產(chǎn)品。第三，由于R-牛尿酚對映體具有獨(dú)一無二的性質(zhì)，只含或基本只含R-對 映體的治療組合物可以產(chǎn)生有利和/或治療作用。第四，給予R-牛尿酚可以補(bǔ)充存在的任 何內(nèi)源性S-牛尿酚，從而在體內(nèi)產(chǎn)生雌激素性和抗雄激素性兩種作用。本發(fā)明包括對映異構(gòu)的牛尿酚用于治療和預(yù)防與男性和女性型禿發(fā)相關(guān)的疾病 和病況的用途。5 α -DHT已知是頭皮毛發(fā)缺損的原因。雄激素，特別是主要的循環(huán)雄激素睪 酮被轉(zhuǎn)化成更強(qiáng)效的雄激素二氫睪酮(5 α -DHT)(在毛囊中)，5 α -DHT對頭皮毛囊的激素 作用造成了毛發(fā)缺損。因此，如果能阻斷5 α -DHT的激素作用，例如通過在本發(fā)明中使用牛 尿酚結(jié)合循環(huán)中(血管中)和毛囊中的5 α-DHT，就能減輕或預(yù)防頭皮毛發(fā)缺損。本發(fā)明包括對映異構(gòu)的牛尿酚用于治療和預(yù)防與面部和身體毛發(fā)相關(guān)的疾病和 病況的用途。面部和身體的毛發(fā)受雄激素調(diào)控，但與頭皮毛發(fā)的調(diào)控相反。具體地，更強(qiáng)效 的雄激素，5 α-DHT，增加面部和身體的毛發(fā)。5 α-DHT還增加皮脂腺的皮脂(油)生成，其 有利于粉刺的增加。因此，牛尿酚結(jié)合5 α-DHT能減輕面部和身體的毛發(fā)以及皮脂(油) 的分泌，和減少或預(yù)防粉刺。本發(fā)明包括對映異構(gòu)的牛尿酚用于治療和預(yù)防與皮膚效果、皮膚品質(zhì)和完整性、 皮膚老化、皮膚光老化和皮膚色素沉著和亮度相關(guān)的疾病和病況的用途。雌激素，絕經(jīng)期之 前尤其是之后，通過增加彈性蛋白和膠原蛋白的含量改善皮膚健康以改進(jìn)皮膚的性質(zhì)或堅 穩(wěn)性。同樣地，當(dāng)皮膚受粉刺或其他皮膚破壞(搔傷、突起的水皰或小切口等)損傷時，如 果存在雌激素或類雌激素化合物例如牛尿酚，則修復(fù)的過程更快并且皮膚治愈地更好。人 們認(rèn)為對映異構(gòu)的牛尿酚特別是S-牛尿酚或?qū)τ丑w混合物或外消旋的牛尿酚能刺激彈性 蛋白和膠原蛋白，還能保護(hù)免受光老化。牛尿酚阻斷5 α-DHT的激素作用的能力能降低皮 脂腺產(chǎn)生的皮脂油，從而減輕或消除粉刺。由于S-牛尿酚結(jié)合雌激素受體(主要是ERi3)， 這種類雌激素分子的保護(hù)作用刺激皮膚中的彈性蛋白和膠原蛋白。另外，由于牛尿酚是強(qiáng) 抗氧化劑，它能保護(hù)皮膚避免衰老，包括光老化。性類固醇激素參與了皮膚發(fā)育和功能例如分泌的調(diào)控，還包括一些皮膚病理性疾 病。公認(rèn)雌激素和雄激素的作用受皮膚、毛發(fā)和皮膚相關(guān)腺體中它們的受體的存在的調(diào)節(jié)。 參見 Pelletier 和 Ren，Histol Histopathology, 19 :629_636，2004。例如雄激素受體(AR) 定位于表皮/真皮的大多數(shù)角化細(xì)胞中，并且在約10%的成纖維細(xì)胞中觀察到AR。然而， AR在皮脂腺的基底細(xì)胞和皮脂腺細(xì)胞中大量存在。AR在毛囊的表達(dá)受限于真皮乳頭細(xì)胞。 ER^在表皮、皮脂腺(基底細(xì)胞和皮脂腺細(xì)胞)和外泌汗腺中高量表達(dá)。在毛囊中，ER^ 廣泛表達(dá)于真皮乳頭細(xì)胞、內(nèi)鞘細(xì)胞、基質(zhì)細(xì)胞和包括凸出部分的外鞘細(xì)胞。由于牛尿酚是大豆苷元的代謝物并具有選擇性雌激素受體調(diào)節(jié)劑(SERMS)的性質(zhì)，在某些細(xì)胞和組織位置，它起雌激素激動劑的作用而在其他地方它起雌激素拮抗劑的 作用，有理由推測牛尿酚在含ER3的多種細(xì)胞/組織中起雙重類雌激素作用。由于R-牛 尿酚對ER α或ER β的親和力很低，公認(rèn)牛尿酚(外消旋體)能夠通過其對映體S-牛尿酚 結(jié)合ERi3。然而，由于能夠特異性結(jié)合并生物學(xué)上滅活5 α-DHT，S-牛尿酚和R-牛尿酚兩 者具有可觀的重要性，所述5CI-DHT在以下中起重要作用a)頭皮和面部/身體毛囊生長， 例如雄激素樣禿頭癥或男性型禿發(fā)，女性多毛癥或女性型禿發(fā)，b)粉刺和皮脂腺功能，c) 傷口愈合和d)皮膚病癥，例如頂泌腺障礙，化膿性汗腺炎或腋臭。最后，已知雌激素對皮膚 參數(shù)、傷口愈合、毛囊健康、皮脂腺和頂泌腺功能、表皮和毛囊色素沉著和惡性黑色素瘤起 正面影響。雌激素已知是人類皮膚維持的主要激素因素。已知它刺激真皮中膠原蛋白的生 成，增加皮膚厚度，增加皮膚的血管形成和增加表皮的有絲分裂活性。參見Brincat MP, Maturitas,29 107-117,2000 ；Punnonen R, Acta ObstetGynecol Scand Suppl,21 :3_44, 1972 ；Hasselquist，M B et al.，J Clin Endocrinol Metab，50 :76_82，1980 ；禾口 Shah M G 與Maibach H I,Am JClin Dermatol, 2 :143_150，2001。特別地，像Pirila E et al. ,Curr Med Chem, 8 :281_294，2001描述的，已知雌激素是基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)的天然調(diào)節(jié)劑。已 知MMPs可以裂解膠原蛋白和彈性蛋白。這種裂解可能是由于環(huán)境(接觸化學(xué)制品、污染、 極端溫度環(huán)境_冷或熱)、機(jī)械(面部肌肉的收縮，例如微笑、皺眉、吸煙或用吸管喝東西) 或生物學(xué)的老化。這些因素受遺傳學(xué)和老化的自然過程的影響，在老化過程中，皮膚變薄， 由于膠原蛋白尤其是彈性蛋白的減少而出現(xiàn)皺紋，皮膚的強(qiáng)健面貌衰落。雌激素治療還顯 示增加葡糖胺聚糖的濃度(粘多糖酸和透明質(zhì)酸)，所述葡糖胺聚糖促進(jìn)皮膚的含水量或 濕度以及影響皮膚的充盈。同樣參見Raine-Fenning N J et al.，Am J Clin Dermatol,
4:371-378，2003。本發(fā)明包括S-牛尿酚或S-和R-牛尿酚的外消旋或非外消旋混合物用于緩解或 阻斷涉及雌激素受體(例如他莫西芬)的癌癥治療的負(fù)性影響。已經(jīng)證實(shí)他莫西芬治療能 引起陰道干澀，這能通過牛尿酚的SERM作用得到改善?？梢砸韵嗨频姆绞绞褂帽景l(fā)明以改 善伴隨絕經(jīng)期或絕經(jīng)后陰道干澀的陰道干澀。本發(fā)明包括S-牛尿酚或S-和R-牛尿酚的外消旋或非外消旋混合物用于阻斷
5α -DHT的負(fù)性作用以及降低MMPs從而正面影響皮膚膠原蛋白、彈性蛋白、血管形成和皮 膚厚度以及皮膚充盈，并減緩環(huán)境、機(jī)械和生物學(xué)老化的進(jìn)程。雌激素對傷口愈合的速率和質(zhì)量很重要。參見Pirila Eet al.，Curr Med Chem, 8 :281-294，2001 和 Ashcroft G E et al. ,Nat Med，3 1209-1215，1997。已經(jīng)證明 ER3 是 成年人頭皮皮膚和皮膚的毛囊皮脂腺單元(毛囊)的主要雌激素受體。參見Thornton M J et al. , Exp Dermatol, 12 181-190, 2003禾口 Thornton M J et al. , J InvestDermatol Symp Proc, 8 :100-103，2003。而且，有報道稱生理水平的5 α-DHT通過破壞免疫功能和引發(fā)炎 癥抑制傷口的愈合。參見 Nitsch S M et al. ,Arch Surg，139 157-163，2004 和 Gilliver S C et al. ,Thromb Haemost，90 :978_985，2003。MMPs 還參與了傷口 愈合并受雌激素的調(diào) 節(jié)。本發(fā)明包括S-牛尿酚、R-和S-牛尿酚的外消旋或非外消旋混合物通過其R-和 S-對映體與細(xì)胞外和細(xì)胞內(nèi)的5 α -DHT結(jié)合來生物學(xué)失活這種強(qiáng)效雄激素并正面影響傷口愈合的用途。同時，R-和S-牛尿酚的外消旋或非外消旋混合物能通過ERi3激素調(diào)節(jié)機(jī) 理改善傷口愈合的速率和質(zhì)量。頭皮毛囊的內(nèi)置活性節(jié)奏使得生長新毛發(fā)并脫掉舊的。這種活性被認(rèn)為是受類 固醇激素的影響。頭皮毛囊生長特異性地被5 α -DHT抑制，同時，面部和身體毛囊也受 5 α-DHT的刺激。根據(jù)Brincat (參見上文的文獻(xiàn))的描述，已知絕經(jīng)期后的婦女經(jīng)歷女性 型禿發(fā)模式是由于卵巢類固醇激素的缺失和這期間雄激素/雌激素比例的增加。在這期 間，絕經(jīng)期后女性還經(jīng)歷多毛癥或提高的面部和身體毛發(fā)生長，并在前絕經(jīng)期期間具有提 高的雄激素生成。前絕經(jīng)期婦女伴隨增加的雄激素生成同樣經(jīng)歷多毛癥。參見Reed M J與 Franks S, Baillieres Clin Obstet Gynaecol，2 :581_595，1988。具有低雄激素水平的經(jīng) 閹割的雄性，或具有遺傳性5 α-DHT還原酶缺失的人不會患有男性型禿發(fā)(Trueb R Μ,Εχρ Gerontol, 37 :981_990，2002)。體外和體內(nèi)研究表明雌激素加快毛囊的生長或生命周期并刺激真皮乳頭細(xì)胞的 血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)的分泌，這種因子影響毛囊的血流。同樣參見Lachgar S et al., J Invest Dermatol Symp Proc，4 :290_295，1999。本發(fā)明包括S-牛尿酚或R-和S-牛尿酚的外消旋或非外消旋混合物使強(qiáng)效雄激 素5 α -DHT生物學(xué)失活并抑制其對男性和女性頭皮毛囊生長的負(fù)性作用的用途。牛尿酚能 刺激毛囊生命周期并增加真皮乳頭細(xì)胞的血管內(nèi)皮生長因子從而正面影響頭皮毛發(fā)的生 長。相反，R-牛尿酚和/或S-牛尿酚能阻斷5 α -DHT的激素作用，并且減少面部和身體的 毛發(fā)生長。雌激素減小男性和女性的皮脂腺大小并抑制其分泌。參見Pochi P E與Strauss J S, J Invest Dermatol，62 :191_210，1974 禾口 Larie F et al. , Horm Res，54 :218_229， 2000。ERi3在皮脂腺中廣泛而高量表達(dá)，雌激素作用通過這種受體明顯地降低與毛囊相關(guān) 的脂腺分泌。另一方面，皮脂腺中的雄激素受體被5 α-DHT激活。皮脂腺的5 α-DHT刺激 與招引細(xì)菌相關(guān)的油脂的產(chǎn)生，從而促進(jìn)并產(chǎn)生粉刺。本發(fā)明包括S-牛尿酚或R-和S-牛尿酚的外消旋或非外消旋混合物使強(qiáng)效雄激 素5 α -DHT生物學(xué)失活并抑制皮脂腺對油脂分泌的產(chǎn)生從而減少粉刺的發(fā)生的用途。對映 體(R-牛尿酚和S-牛尿酚)的聯(lián)合能減小皮脂腺大小并抑制其油脂產(chǎn)生以參與緩解或預(yù) 防粉刺。頂泌腺從毛囊外根鞘長出并保持與其相連。頂泌腺與身體的多毛區(qū)域相關(guān)，這 些區(qū)域絕大多數(shù)從腋窩和腹股溝發(fā)汗，如Jakubovic H R et al.，Dermatology，第三版， Philadelphia，W. B. Saunders, 1992，69_77頁所述?；撔院瓜傺缀鸵赋羰怯捎谂c腋窩和腹 股溝相關(guān)的大汗腺的炎癥引起的疾病。參見Sato T et al. ,Br J Dermatol, 139 =806-810, 1998?；歼@些病癥的病人有頂泌腺排出的過量或不正常的氣味(腋臭)。這種疾病在女性 中更常見，并似乎能用雌激素和/或抗雄激素治療改善，暗示著這種特殊化的腺體受雌激 素和雄激素的調(diào)控。同樣參見 Offidanl A et al. ,J Clin Pathol，52 :829_832，1999。特 別地，當(dāng)研究雄激素作用時，檢測到頂泌(汗)腺有過量或不正常氣味的受試者的頂泌腺中 有高水平的5 α還原酶活性，5 α -DHT的作用也參與了這些病況。本發(fā)明包括S-牛尿酚、R-和S-牛尿酚的外消旋或非外消旋混合物使強(qiáng)效雄激素 5 α -DHT失活并抑制頂泌腺對汗液分泌的產(chǎn)生并減少汗腺炎和腋臭的發(fā)生的用途。與之相隨地，在一定比例對映異構(gòu)體(R-牛尿酚和S-牛尿酚)的組合中，牛尿酚能減小頂泌腺對 汗液的產(chǎn)生以參與預(yù)防汗腺炎和腋臭。一些研究顯示表皮黑色素細(xì)胞是雌激素響應(yīng)的。存在一些口服含雌激素的避孕藥 導(dǎo)致女性臉部高色素沉著的報道，如Wade T R et al.，Obstet Gynecol, 5 =233-242,1978 所述。本發(fā)明包括S-牛尿酚或R-和S-牛尿酚的外消旋或非外消旋混合物使強(qiáng)效雄激 素5 α -DHT生物學(xué)失活并促進(jìn)牛尿酚對雌激素受體的激素作用的用途。通過牛尿酚的SERM 作用可以抑制表皮黑色素細(xì)胞，得到發(fā)亮皮膚的效果。因此，牛尿酚對于老人或皮膚斑，尤 其是臉部和手上的，將是有效的治療手段。本發(fā)明包括S-牛尿酚或R-和S-牛尿酚的外消旋或非外消旋混合物使強(qiáng)效雄激 素5 α -DHT失活并促進(jìn)牛尿酚對雌激素受體的激素作用的用途。通過牛尿酚的SERM作用可 以刺激毛囊黑色素細(xì)胞，得到促進(jìn)毛發(fā)色素沉著的結(jié)果。參見Tobin D J與Bystryn J C， Pigment Cell Res,9 :304_310，1996 ；Thorton M J,ExpDermatology, 11 487-502,2002 ；禾口 Ohuchi A et al.,在Third Intercontinental Meetingof Hair Research Societies,日 本，2001中。因此，牛尿酚可以是調(diào)控毛囊的色調(diào)和顏色并從而改變毛發(fā)的色素沉著的有效 治療手段。由于毛囊與惡性黑色素瘤的形成相關(guān)，牛尿酚的SERM性質(zhì)可以正面方式影響 惡性黑色素瘤。參見 Kanda N 與 Watanabe S, J Invest Dermatol，117 :274_283，2001 ； Richardson B et al. , Br J Cancer,80 2025-2033,1999 ；禾口 Durvasula R et al.， Climacteric，5 1970200，2002。例如，對用雌二醇孵育的人轉(zhuǎn)移性黑色素瘤細(xì)胞系進(jìn)行處 理能抑制3H-胸腺嘧啶的吸收，這能被抗雌激素的施用抵消。而且，雌二醇能通過激活粘連 蛋白來抑制人黑色素瘤細(xì)胞的侵入。最后，女性出現(xiàn)惡性黑色素瘤的平均年齡是50歲初 期，與絕經(jīng)期出現(xiàn)的時間相同。傳統(tǒng)認(rèn)為黑色素瘤是雌激素受體陽性腫瘤，然而最近的證據(jù) 反駁了這點(diǎn)。本發(fā)明包括S-牛尿酚或R-和S-牛尿酚的外消旋或非外消旋混合物使強(qiáng)效雄激 素5 α -DHT失活并促進(jìn)牛尿酚對雌激素受體的激素作用的用途。通過牛尿酚的SERM作用 可以抑制惡性黑色素瘤的形成并使毛囊黑色素細(xì)胞穩(wěn)定化，導(dǎo)致惡性黑色素瘤的預(yù)防和治療。本發(fā)明的其他實(shí)施方式包括牛尿酚在雄激素相關(guān)的皮膚或毛發(fā)病癥以及由于雌 激素/雄激素平衡被打亂產(chǎn)生的病癥中作為診斷劑的用途。這些實(shí)施方案中，給予個體牛 尿酚用于結(jié)合5 α -DHT，從而防止5 α -DHT和雄激素受體結(jié)合。然后測量雌激素平衡的變化 或評估雄激素_結(jié)合的變化，以診斷或進(jìn)一步闡明皮膚或毛發(fā)的雄激素相關(guān)的異常。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)牛尿酚能通過增加彈性蛋白和膠原蛋白的量來改善皮膚性質(zhì)或堅穩(wěn)性 從而提高皮膚的健康狀態(tài)。人們認(rèn)為這種作用的機(jī)理是阻斷5 α -DHT的激素作用，這繼而 可以降低皮脂腺的油脂產(chǎn)生從而減輕粉刺和其他皮膚病癥。由于牛尿酚，特別是S-牛尿酚 結(jié)合雌激素受體，類雌激素分子在皮膚中刺激產(chǎn)生彈性蛋白和膠原蛋白的保護(hù)作用被認(rèn)為 受ERi3調(diào)節(jié)。另外，牛尿酚的抗氧化劑性質(zhì)保護(hù)免受光老化，通常是皮膚的老化。為了評估關(guān)于所述治療部分的5 α -DHT的結(jié)合能力，可以提前或與其他治療部分 同時施用牛尿酚用來結(jié)合5 α -DHT0同樣，為了評估用于在缺乏5 α -DHT結(jié)合的情況下雄激素結(jié)合部分用于儲存雄激素活性和平衡雌激素活性的效力，施用牛尿酚后可以施用雄激素 結(jié)合部分。進(jìn)一步地，為了替代這些天然存在或源于5 α -DHT的無生命的5 α -DHT結(jié)合部 分，在存在5 α -DHT結(jié)合部分的情況下可以施用牛尿酚?？梢酝ㄟ^提供牛尿酚的口服劑量形式來施用對映異構(gòu)的牛尿酚，這使得有效量的 牛尿酚吸收入血流。若需要可以口服之外的途徑施用牛尿酚。例如，可以考慮以直腸或尿 道施用來施用牛尿酚，用于治療變大的前列腺或預(yù)防前列腺的變大。另外，考慮可以分離和 合成牛尿酚分子的活性配體結(jié)合位點(diǎn)用于施用，這樣可以提供5 α -DHT結(jié)合而不需要完整 的牛尿酚分子。牛尿酚分子或其具有5 α -DHT結(jié)合能力的片段的劑量依賴于施用方式和要 治療的病況?；谖覀兊捏w內(nèi)研究，顯然相對低劑量的牛尿酚拮抗高得多的5 α -DHT劑量， 這可以解釋為牛尿酚結(jié)合血清蛋白質(zhì)的能力和5 α -DHT有很大差別。后者多數(shù)結(jié)合蛋白進(jìn) 行循環(huán)，而牛尿酚有50%是游離的。通常，使接受者血流中產(chǎn)生足夠的牛尿酚或其活性部分 的濃度的劑量至少是約0. 2mg牛尿酚每kg接受者體重，優(yōu)選至少約0. 5mg/kg。若不導(dǎo)致明 顯的劑量限制性副作用，可以顯著提高劑量到高于約10mg/kg?？梢杂梦⒛倚问竭M(jìn)行口服施 用，該形式可以提供藥物的遲釋或緩釋?？梢远喾N形式局部、透皮和皮下施用牛尿酚，所述形式包括乳液、軟膏、泡沫 (包括剃須膏)和噴霧，或作為適于局部應(yīng)用的底物的活性成分，所述底物例如為護(hù) 墊、手術(shù)繃帶、黏性繃帶、預(yù)濕的小毛巾、嬰兒或成年人失禁尿布(例如描述于美國專利 No. 5，525，346，其被引入作為參考)、女性衛(wèi)生用品、或透皮皮膚貼劑(例如描述于美國專 利No. 5，613，958和No. 6，071，531，其被引入作為參考)，機(jī)電設(shè)備，包括微泵系統(tǒng)(例如描 述于美國專利No. 5，693，018和No. 5，848，991，其被引入作為參考)和皮下埋植(例如描述 于美國專利No. 5，468，501，其被引入作為參考)。適用于實(shí)踐本發(fā)明的組合物包含至少生理學(xué)可接受量的牛尿酚，其可以至少部分 結(jié)合和隔絕游離5 α -DHT (但不是睪酮或DHEA)從而防止個體施用后其與雄激素受體的結(jié) 合，因此具有健康和疾病的重要分支，和在受雄激素調(diào)節(jié)的病理過程的治療中具有廣泛和 重要的應(yīng)用。含S-牛尿酚，R-牛尿酚，牛尿酚外消旋混合物或牛尿酚非外消旋混合物的組合物 可以用于口服。所述組合物或含該組合物的產(chǎn)品可以是投放市場的或公共機(jī)構(gòu)的食品、藥 物和OTC藥物。食品組合物每份可以包含至少lmg，典型地至200mg的對映異構(gòu)的牛尿酚或 牛尿酚混合物?？诜┯玫乃巹┟縿┛梢园辽賚mg，典型地至200mg的對映異構(gòu)的牛尿 酚或牛尿酚混合物。局部應(yīng)用的產(chǎn)品可以包含至少0.001%或0.01%，以及至10%重量的 S-牛尿酚或R-牛尿酚或?qū)τ钞悩?gòu)體混合物。所選擇的濃度范圍包括約0. 001 %至約3%， 約0. 001%至約1%，約0. 01%至約3%，約0. 至約1%，約0. 1%至約3%，約0. 至約 5%，約0.3%至約1%，約0.3%至約3%，約0.3%至約5%，約0.5%至約1%，約0. 5%至 約3 %，和約0. 5 %至約5 %。典型地，0. 01 %至1 %是可以應(yīng)用于不同時間間隔的有效濃度 范圍。某些方案中，優(yōu)選以至多5%的濃度應(yīng)用牛尿酚來治療某些病理學(xué)情形或疾病。由于 病況或疾病的嚴(yán)重程度，或因為個體是非牛尿酚生產(chǎn)者，因此需要給予更大量的外源性牛 尿酚可能還有需要高達(dá)10%濃度的情況。本發(fā)明的局部組合物可以包括其他化妝品和藥學(xué)活性物質(zhì)以及賦形劑。合適的化 妝品和藥學(xué)試劑包括，但不限于，抗真菌劑、維生素、抗炎癥劑、抗菌劑、鎮(zhèn)痛劑、一氧化氮合酶抑制劑、驅(qū)蟲劑、美黑霜、表面活性劑、保濕劑、穩(wěn)定劑、防腐劑、消毒劑、增稠劑、潤滑齊U、 濕潤劑、螯合劑、皮膚穿透促進(jìn)劑、潤膚劑、香料和著色劑。對于某些個體，優(yōu)選聯(lián)合使用系統(tǒng)和局部施用。這可以是由于病況或疾病的嚴(yán)重 程度，或因為個體是非牛尿酚生產(chǎn)者，因此需要給予更大量的外源性牛尿酚。對映異構(gòu)的牛尿酚還可以是對映異構(gòu)牛尿酚的綴合物，在C-4’或C-7’位置與選 自葡萄糖醛酸苷、硫酸、乙酸、丙酸、葡萄糖苷、乙酰葡萄糖苷、丙二酰葡萄糖苷和其混合物 的綴合物綴合。用于施用給受試者來治療和/或預(yù)防雄激素相關(guān)疾病和病況或降低其患病傾 向性的受試者、含對映異構(gòu)牛尿酚或其混合物的組合物或制劑可以還包含一種或多種藥 學(xué)上可接受的佐劑，運(yùn)載體和/或賦形劑。這些藥學(xué)上可接受的佐劑，運(yùn)載體和/或賦 形劑是本領(lǐng)域公知的，例如 Handbook of PharmaceuticalExcipients，第二版，American Pharmaceutical Association，1994 (引入作為參考)描述的?？梢云瑒⒛z囊、用于重新溶 解的粉末、糖漿、食物(例如食物棒、餅干、點(diǎn)心和其它本領(lǐng)域公知的標(biāo)準(zhǔn)食品形式)或飲料 配制物施用該組合物。飲料可含有調(diào)味劑、緩沖液等。組合物可包含S-牛尿酚和R-牛尿酚的非外消旋混合物，所述混合物中S-牛尿 酚的對映體過量(EE)為大于0%到小于90%。具有0%的EE的組合物是兩種對映體為 50 50的外消旋混合物。所述組合物可直接通過從外消旋混合物中不完全分離和去除 R-牛尿酚或S-牛尿酚對映體任一來制備。所述組合物也可通過聯(lián)合含牛尿酚的混合物 (非外消旋或外消旋混合物)的第一牛尿酚組分，和含主要由S-牛尿酚或R-牛尿酚組成 的組合物的第二組分來制備。這樣產(chǎn)生的非外消旋組合物具有過量的S-牛尿酚或R-牛 尿酚?；诮M合物中含有的R-牛尿酚或S-牛尿酚組分的明確的益處或指示，可制備一種 組合物，其中包含的S-牛尿酚和R-牛尿酚的比例為大于約50 50到約99. 5 1，更典 型地約51 49到約99 1，以及從小于約50 50到約1 99. 5，更典型地約49 51 到約1 99。該組合物典型地不包括顯著量的任何其他雄激素受體結(jié)合化合物?？蛇x的 S-牛尿酚比R-牛尿酚的比例包括約3 1到約19 1，約3 1到約9 1，約4 1到 約19 1，以及約4 1到約9 1。適宜口服施用的組合物可存在于分離的單位中，例如膠囊、扁膠囊、錠劑或片劑， 每種都含有預(yù)定量的提取物；作為粉末或顆粒；作為溶液或水性或非水性液體中的懸浮 液；或者作為水包油或油包水的乳液。對本發(fā)明更完整的理解和使用可以從以下實(shí)驗獲得。實(shí)驗1.測定牛尿酚的S-和R-對映體的受體結(jié)合能力進(jìn)行體外結(jié)合研究來檢測S-和R-對映體牛尿酚對雌激素受體ER α和ER β的相 對親和力。完整長度的大鼠ERa表達(dá)載體(pcDNA-ERa ；RH Price UCSF)和ER0表達(dá)載 體(pcDNA-ERβ ；T A Brown, Pfizer, Groton, Conn.)被用于在體外利用 TnT-偶聯(lián)的網(wǎng)狀 細(xì)胞溶解物系統(tǒng)(Promega，Madison, Wis.)和T7-RNA聚合酶，在30°C反應(yīng)90分鐘合成激 素受體。翻譯反應(yīng)混合物保存在-80°C備用。為了計算并確定S-牛尿酚和R-牛尿酚對映 體對ERa和ERii的親合力，將IOOyL的網(wǎng)狀細(xì)胞溶解物上清液的等分試樣與濃度漸增 (0. Ol-IOOnM)的[3H] 17 β-雌二醇(Ε2)在適宜的時間和溫度孵育，即室溫90分鐘(ERβ) 或4°C 18小時(ERa)。這些時間通過經(jīng)驗確定，并代表受體與雌激素的最佳結(jié)合。使用300倍過量的ER激動劑二乙基己烯雌酚在平行試管內(nèi)評估非特異性結(jié)合。孵育后，將孵育的反 應(yīng)物通過 ImL 親脂性 S 印 hadex LH-20 (Sigma-Aldrich Co.，SaintLouis，Mo.)柱，分離結(jié)合 和未結(jié)合的[3H]E2。根據(jù)以前公開的方案(Handa etal.，1986 ；0，Keefe和Handa，1990)， 用 TEGMD(10mM Tris-Cl, 1. 5mmEDTA, 10%甘油，25mm鉬酸鹽，和 Imm二硫蘇糖醇，pH7. 4)-飽 和的 S印hadex 組裝一次性吸液管頭(lmL，Labcraff ； Curt in Matheson Scientific, Inc, Houston, Tex.)，來構(gòu)建柱子。為進(jìn)行層析，用TEGMD (100 μ L)重新平衡柱子，將孵育反應(yīng) 物分別加入各柱中，并在柱上再孵育30分鐘。這次孵育后，將600 μ L的TEGMD加入到各柱 中，收集流出物，加入4mL閃爍液，并在2900TR Packard閃爍計數(shù)儀(Packard Bioscience, Meri den，Conn.)中計數(shù)樣品(每個5分鐘)。使用競爭結(jié)合實(shí)驗評估牛尿酚的S-牛尿酚和R-牛尿酚對映體的雌激素性質(zhì)。根 據(jù)S-和R-牛尿酚與[3H] E2競爭結(jié)合ER的能力，顯示兩種對映體對體外翻譯的ER的親和 力有很大區(qū)別。S-牛尿酚對映體顯示對ERβ的親和力最大[Kd(riM) = 0.73士0.2]，而其 對ERa的親合力經(jīng)比較相對較低[Kd(riM) = 6. 41 士 1. 0]。R-牛尿酚對映體對ERβ的親合 力[Kd(nM) = 15. 4士 1.3]和對 ERa 的親合力[Kd(nM) = 27. 38士3. 8]更低。作為對照， 在該系統(tǒng)中17 β-雌二醇與ERo以Kd (nM) =0.13結(jié)合，與ER β以Kd(nM) = 0. 15結(jié)合。研究表明僅S-牛尿酚對映體與ER以足夠的親合力結(jié)合，從而與人體中報道的循 環(huán)牛尿酚水平具有潛在的相關(guān)性。與17 β -雌二醇相比，S-牛尿酚和R-牛尿酚對映體與 ERa的相對親合力分別是17 β-雌二醇的{分?jǐn)?shù)(1/49)}和{分?jǐn)?shù)(1/211)}。但S-牛尿 酚對映體似乎大多為ERβ選擇性的，其對ERβ的親合力相對較高；而R-牛尿酚對映體與 ER β結(jié)合的親合力是S-牛尿酚的約{分?jǐn)?shù)(1/100)}。從兩種對映體的結(jié)合特異性方面來 看，僅S-牛尿酚存在于人血漿和尿中的分離和結(jié)合的測定是明顯的。實(shí)驗2. R-牛尿酚的生物利用度過夜禁食后將20mg純的R-牛尿酚以口服形式施用給健康成年人。接下來的24 小時內(nèi)在固定的時間間隔收集血樣，用選定的離子監(jiān)測的同位素稀釋氣相色譜-質(zhì)譜法確 定牛尿酚血漿濃度。8小時后觀察到迅速出現(xiàn)的牛尿酚的血漿峰濃度。R-牛尿酚的終消除半衰期 為約8小時。電噴射質(zhì)譜證實(shí)血漿中存在的牛尿酚是R-牛尿酚對映體(PCT專利公開 W004-009035)，從而確認(rèn)它是穩(wěn)定的，不經(jīng)歷任何外消旋化或腸道中進(jìn)一步的生物轉(zhuǎn)化。圖 2顯示R-牛尿酚的血漿出現(xiàn)/消失曲線。這些結(jié)果證實(shí)若以藥物或營養(yǎng)補(bǔ)劑制劑形式給予 的R-牛尿酚是生物可利用的。當(dāng)口服給予健康成年人S-牛尿酚也得到相似的結(jié)果。
實(shí)施例下列實(shí)施例展示出了本發(fā)明的使用以及派生的益處。為了證明本發(fā)明的有效性， 使用下列方案，并將參照下列實(shí)施例進(jìn)行本發(fā)明實(shí)施例使用的方案1.測試材料儲液的制備將約20至40mg的測試材料稱量入預(yù)稱皮重的無菌玻璃小瓶中，并記錄精確的重 量。計算得到50% w/v的溶液的載劑體積，然后加入載劑。根據(jù)實(shí)施例的說明，使用2種不 同的載劑。DMSO載劑用 100% DMSO(EMDBioscience Cat. #MX1458_6，批次#42364321)制備。二乙二醇單乙基醚載劑用100%二乙二醇單乙基醚(Gattefosse a. s. a.，Cedex, France) 制備。然后充分渦旋樣品直到干粉已經(jīng)都可見地溶入溶液中。某些情況下，樣品需要短暫 加溫至37°C。儲液等分試樣可以小份的等分試樣冷凍，并儲存在約-20°C下，或制備后立即 使用。制備用于測試的牛尿酚外消旋混合物的濃度為0(對照)，0.3，1.0和5.0%。用濃度 為50 μ g/ml的抗壞血酸DMEM/F-12作為陽性對照。儲液稀釋使用后立即丟棄。2. MTT 試驗進(jìn)行MTT試驗來測定組織培養(yǎng)物中的牛尿酚毒性。細(xì)胞存活力和增殖的測量是細(xì) 胞種群對外界因素響應(yīng)的一系列體外試驗的基礎(chǔ)。四唑鹽的還原是廣泛被接受的可靠的 研究細(xì)胞增殖的方法。MTT試驗是對細(xì)胞代謝活性的量熱分析(ATCC5Gaithersberg Md.； Catalogue#30-1010K)。黃色的四唑鹽MTT (3- (4，5- 二甲基噻唑基-2) -2，5- 二苯基四氮唑 溴化物)被代謝活性細(xì)胞還原生成還原性等同物例如NADH和NADPH。形成的細(xì)胞內(nèi)的紫色 甲臜可以溶解并用分光光度計方法計量。MTT細(xì)胞增殖試驗測量細(xì)胞增殖速率和相反地，當(dāng) 代謝活動導(dǎo)致凋亡或壞死時，測量細(xì)胞存活力的降低。細(xì)胞數(shù)和產(chǎn)生的信號之間建立線性 關(guān)系，由此可以精確量化細(xì)胞繁殖速率的變化。某些方案或?qū)嶒炛?，MTT試驗的結(jié)果將用來 標(biāo)準(zhǔn)化前膠原I型C肽試驗。用測試系統(tǒng)中使用的測試材料進(jìn)行相容性測試。每種測試材料的等分試樣和等體 積的2mg/ml MTT溶液在玻璃測試管中混合。蓋上蓋子，室溫、無光下孵育約2小時除非轉(zhuǎn) 化迅速發(fā)生。顏色變成紫色說明測試材料可能自發(fā)地還原MTT，造成假反應(yīng)。如果觀察到有 顏色變化，則運(yùn)行“空白組織孔”。在這些空白中添加和試驗相同用量的測試材料，并只進(jìn)行 到最長時間點(diǎn)。若觀察到背景讀數(shù)，需要在分別的測試材料中將其減去。3.組織培養(yǎng)中TestSkin的使用使用TestSkin II組織評估測試材料的促進(jìn)或抑制膠原蛋白合成的能力。這頂測 試同樣用來評估接觸測試材料后組織的存活力。TestSkin II由力學(xué)穩(wěn)定并具有生理學(xué)功能 的皮膚結(jié)構(gòu)組成，其精密模仿活的人皮膚的實(shí)際結(jié)構(gòu)和生物響應(yīng)機(jī)理。該組織具有表皮和 真皮。上部表皮層由活的人角質(zhì)細(xì)胞組成并具有分化好的角質(zhì)層。表皮長在支持性真皮層 上，所述真皮層由分散于活的人真皮成纖維細(xì)胞中的牛膠原蛋白網(wǎng)組成，所述人真皮成纖 維細(xì)胞使膠原蛋白排列成致密基質(zhì)。根據(jù)下面的組織培養(yǎng)方案使用TestSkin。TestSkin組織培養(yǎng)方案，第1天需要使用足量的6孔板來完成實(shí)驗并放置于孵箱(hood)中。打開含有每個培養(yǎng) 板的包裝，拿走培養(yǎng)板蓋，將其倒置放在工作面上。6孔板的每個孔中放置一個Millicell 以及Iml DMEM/F-12。蓋上蓋子，將6孔板靜置直至對TestSkin II單元切片并準(zhǔn)備好儲存。 為了對TestSkin II單元切片，用70%乙醇擦拭密封的沖頭的外表面。使用無菌剪打開沖 頭，拿走含TestSkin II單元的托盤。拿走TestSkin II單元托盤的蓋子，倒置放于工作面， 使蓋子的內(nèi)面保持無菌。用無菌鑷子移動TestSkin II的transwell并放置于蓋子的內(nèi)面。 為了對TestSkin II單元切片，使用無菌活體檢查沖頭(8mm)。將沖頭放置于TestSkin II單 元的表面，慢慢往下壓并同時扭轉(zhuǎn)。來回轉(zhuǎn)動沖頭約1/4圈，同時使用足夠的壓力以切穿皮 膚和聚碳酸酯膜。不完全扭轉(zhuǎn)沖頭，因為這樣可能割到皮膚。將個體切片與剩下的皮膚分離 時用無菌尖嘴鑷移動所述切片；只抓住切片的邊緣，并小心不擠壓或折疊切片。小心地將切 片的真皮面朝下置于Millicell上，確保其水平放置，并且Millicell底部和皮膚之間沒有氣泡。先放置一角再慢慢放低剩余的部分對于不產(chǎn)生氣泡是有幫助的。表皮面仍然朝上， 帶有真皮的聚碳酸酯膜靠著Millicell平放。重復(fù)此步驟直到分離正確數(shù)目的切片并放置 在6孔板的Millicells中。切割完成后，蓋上蓋子將培養(yǎng)板放置于孵箱中，在約37士2°C和 5士 CO2下過夜(16-24小時)。TestSkin組織培養(yǎng)方案，第2天吸出每個孔中的培養(yǎng)液，用Iml新鮮的DMEM/F-12培養(yǎng)液替換。對每個處理組(陰 性對照，陽性對照和測試材料)而言，在組織上加入10μ1材料，并蓋上給藥墊。然后將組 織放回入孵箱，在約37士2°C和5士 CO2下孵育約48小時。TestSkin組織培養(yǎng)方案，第3天再一次局部加入每份組織10 μ 1的不同處理至所有測試樣品。把該組織放回孵箱 中，在約37士2°C和5士 CO2下孵育約24小時。TestSkin組織培養(yǎng)方案，第4天去掉每個孔中的培養(yǎng)液，并冷凍以便進(jìn)行下面的前膠原試驗。每個處理組的4份 組織樣品中的3份立即進(jìn)行MTT試驗。每個處理組的第四份組織用福爾馬林固定，埋入石 蠟，切片，然后進(jìn)行組織染色。用顯微鏡對組織切片進(jìn)行彈性蛋白和膠原蛋白分析。用DMEM/F-12 (預(yù)熱至37 士 2°C )制備2mg/ml MTT溶液(對于2mg/組織是足夠 的)。室溫下用攪拌盤混合MTT溶液10-15分鐘。然后4000rpm離心溶液5分鐘。去掉顆 粒狀物，只使用上清液。給6孔板的孔加入MTT溶液(2ml/孔)。從Millicell插入物中拿 走組織，用洗瓶里的至少5ml PBS在燒杯上方漂洗。所有測試材料取出后停止漂洗。然后把 組織放入6孔板的對應(yīng)孔中。培養(yǎng)板在搖床平臺上以125rpm，約37士2°C和5士 CO2下 孵育約2小時。2小時孵育結(jié)束時，移走M(jìn)TT溶液并丟棄。每孔加入Iml PBS靜置2分鐘， 重復(fù)2遍。吸走每次的PBS洗液。接觸MTT后，組織在600 μ g/ml嗜熱菌蛋白酶溶液(加入DMEM/F-12得到2ml的 總體積)中，37士2°C下孵育30分鐘。該孵育時間對于分離組織的真皮和表皮層被認(rèn)為是 足夠的。表皮期望浮于真皮的頂端。組織的真皮部分放置在一套單獨(dú)的6孔板中。用每孔 Iml異丙醇將兩套培養(yǎng)板中的MTT萃取出來。培養(yǎng)板放置在搖床平臺上1小時。異丙醇萃 取后，將200 μ 1萃取物轉(zhuǎn)移至相應(yīng)的96孔板的孔中。540nm下對平板進(jìn)行讀數(shù)。4.人真皮成纖維細(xì)胞組織培養(yǎng)方案將來自新生包皮的原代人真皮成纖維細(xì)胞的10-11代接種至48孔板，密度 為2.4\104細(xì)胞數(shù)/孔/0. 5ml培養(yǎng)液，所述培養(yǎng)液由帶Ix非必需氨基酸(HyClone Cat. #SH30238. 01，批次 #AMC15759)、Ix 抗生素 / 抗霉菌素(SigmaCat. #A5955,批 次 #13K2363)和 2 % 小牛血清(HyClone Cat. #SH30072. 03，批次 #ANF_18955)的 DMEM(MediaTech，Cat. #10_017_CV，批次#10017103)組成。使用的還有來自上一批次的 小牛血清(批次#AMM17780)的樣品。細(xì)胞在37°C，潮濕的5% CO2的孵箱內(nèi)培養(yǎng)約16-24 小時，然后更換培養(yǎng)液并往孔中的培養(yǎng)液加入牛尿酚、抗壞血酸(Sigma Cat.#A4544，批次 #073K0139)或載劑。在測試或?qū)φ詹牧系拇嬖谙聦⒓?xì)胞培養(yǎng)約48小時。5.器官型、三維真皮培養(yǎng)物為了制備器官型、三維(3D)培養(yǎng)物，將真皮成纖維細(xì)胞接種至尼龍網(wǎng)并基本按照 描述生長約8個星期(參見Fleishmajer，J Invest Dermatol,97 :638_643，1991 ；Contard,Cell Tissue Res, 273 :571_575,1993 禾口 Pinney, Liu, Sheeman 與 Mansbridge, J Cell Physiology, 183 =74-82, 2000)。這種體外模型精密模仿真皮的發(fā)育，為器官型性質(zhì)的研究 提供了系統(tǒng)，所述性質(zhì)例如為支持表皮分化的能力(參見Slivka，J Invest Dermatol, 100 40-46,1993)和膠原蛋白微纖維形成(Contard, Cell Tissue Res，273 :571_575，1993)。2 星期以后對所有3D培養(yǎng)物補(bǔ)充20 μ g/mL抗壞血酸，但單層培養(yǎng)物不補(bǔ)充。其他方面，單層 和3D實(shí)驗的所有材料和步驟基本相等。為了在檢測不到雌激素活性水平的環(huán)境中檢驗雌激素性測試材料的效果，在添加測試材料之前將3D實(shí)驗生長于不含酚紅的培養(yǎng)液中3個星期，因此其從未接觸酚紅染料。6.人前列腺癌細(xì)胞培養(yǎng)物人前列腺癌細(xì)胞系來源于ATCC(ATCC#CRL-1740，LNCAP-FGC)，并在 37°C，5% CO2 的潮濕孵箱中，加入5%胎牛血清(Hyclone Cat. #SH30088. 03，批次編號APC20780)和5mM Hepes (Sigma Cat. H-0887)、lx 抗生素 / 抗霉菌素(Sigma Cat. #A5955)的 RPMI 培養(yǎng)基 (Sigma Cat. #R-8758)中進(jìn)行培養(yǎng)。細(xì)胞擴(kuò)展至T-150培養(yǎng)瓶，傳3代，然后在液氮中，在含 10% FBS和10% DMSO作為冷凍保存劑的RPMI培養(yǎng)基中冷凍保存并儲藏。然后將冷凍小瓶 在37°C水浴下解凍，再次擴(kuò)展1至2代，然后用RPMI 5% FBS培養(yǎng)基接種入96孔板，每96 孔的0. 2ml培養(yǎng)基中含10，000細(xì)胞數(shù)。約48小時后，將培養(yǎng)基更換為不含酚紅的含2% FBS和Ix抗生素/抗霉菌素的DMEM/F12 (GibcoCat. #21041-025)，加入源自IOx儲液的測 試材料以及DMSO/載劑對照至合適濃度。將細(xì)胞在測試材料和對照的存在下培養(yǎng)約48小 時，之后取出培養(yǎng)基上清液以進(jìn)行前列腺特異性抗原(PSA)ELISA。7.膠原蛋白I型C-前肽ELISA合成膠原蛋白(I、II、III、IV和V型)作為前體分子，稱之為前膠原蛋白。它們含 有額外的稱之為前肽的肽序列，這種序列可以促使前膠原蛋白分子在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中纏繞成三倍 螺旋構(gòu)像。分泌過程中，前肽從膠原蛋白三倍螺旋分子上裂解下來后，三倍螺旋膠原蛋白聚 合成細(xì)胞外膠原纖維。因此，游離前肽的數(shù)量化學(xué)計量地反映了合成的膠原蛋白分子的數(shù) 量(Takara Biomedicals，膠原I型C-前肽試劑盒)。真皮成纖維細(xì)胞主要合成I型膠原蛋白，C末端前肽的裂解對于在細(xì)胞外基質(zhì) 中沉積成纖維是必需的。所述前肽可以用不識別細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的未加工形式的抗 血清測量，還在臨床上用來衡量病人血清中的纖維化。裂解的前肽量沉積的I型膠原蛋 白的量成正比，并可以使用經(jīng)純化的標(biāo)準(zhǔn)和商業(yè)的ELISA試劑盒(Takara Mirus, Inc., Cat. #TAK-MK-101)精確量化。48小時后，在測試材料或?qū)φ盏拇嬖谙?，取出培養(yǎng)基上清液，立刻根據(jù)廠商的說明 書使用ELISA試劑盒、使用Molecular Device Vmax 96孔板酶標(biāo)儀讀數(shù)和SoftMax軟件進(jìn) 行分析。由于抗壞血酸(抗壞血酸鹽，SigmaCat. #A4544，批次#073K0139)已知可以刺激膠 原蛋白的沉積，其被用作陽性對照，加入培養(yǎng)基的最終濃度是20 μ g/ml。經(jīng)載劑處理的培養(yǎng) 基或單獨(dú)的培養(yǎng)基作為陰性對照或空白對照。從培養(yǎng)板或孔中收集來源于組織培養(yǎng)的上清液或培養(yǎng)基。足量上清液在 2000-3000rpm下離心5_10分鐘，量化膠原I型C-前肽。沉淀顆粒在研究中不使用。實(shí)驗 溶液的制備方法如下標(biāo)準(zhǔn)溶液(640noPIP/mi)
標(biāo)準(zhǔn)溶液用Iml雙蒸水再水化并在工作臺面上用間斷地緩慢滾動約10分鐘的方 式進(jìn)行混合。標(biāo)準(zhǔn)按表1顯示的來制備。標(biāo)準(zhǔn)溶液在4°C下可以穩(wěn)定1周。對標(biāo)準(zhǔn)的測試
重復(fù)兩次。表1用于前膠原I型C-肽的標(biāo)準(zhǔn)溶液
權(quán)利要求
一種調(diào)節(jié)雄激素作用以改善受試者至少一種皮膚或毛發(fā)病況的方法，所述方法包括施用牛尿酚，其中至少1％是R 牛尿酚，其中，所述R 牛尿酚結(jié)合游離的5α 二氫睪酮并抑制所述5α 二氫睪酮與雄激素受體的結(jié)合。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述牛尿酚包含至少5%的R-牛尿酚。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述牛尿酚包含至少10%的R-牛尿酚。
4.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述牛尿酚包含至少20%的R-牛尿酚。
5.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述牛尿酚包含至少25%的R-牛尿酚。
6.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述牛尿酚是S-牛尿酚和R-牛尿酚的外消旋混合物。
7.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所述牛尿酚還包含用量足以結(jié)合雌激素受體亞型的 S-牛尿酚。
8.一種改善受試者至少一種皮膚或毛發(fā)病況的方法，包括施用包含牛尿酚的組合 物，其中至少是R-牛尿酚，其中，所述R-牛尿酚結(jié)合游離的5 α - 二氫睪酮并抑制所述 5 α-二氫睪酮與雄激素受體的結(jié)合。
9.根據(jù)權(quán)利要求8的方法，其中所述牛尿酚包含至少5%的R-牛尿酚。
10.根據(jù)權(quán)利要求8的方法，其中所述牛尿酚包含至少10%的R-牛尿酚。
11.根據(jù)權(quán)利要求8的方法，其中所述牛尿酚包含至少20%的R-牛尿酚。
12.根據(jù)權(quán)利要求8的方法，其中所述牛尿酚包含至少25%的R-牛尿酚。
13.根據(jù)權(quán)利要求8的方法，其中所述牛尿酚是S-牛尿酚和R-牛尿酚的外消旋混合物。
14.根據(jù)權(quán)利要求8的方法，其中所述組合物是局部、透皮或皮下施用。
15.根據(jù)權(quán)利要求8的方法，其中所述組合物是包含至少約0.001%至約10%牛尿酚的 局部組合物。
16.根據(jù)權(quán)利要求8的方法，其中所述組合物還包含一種藥學(xué)活性物質(zhì)或賦形劑。
17.根據(jù)權(quán)利要求8的方法，其中所述組合物以每千克體重至少約0.005mg牛尿酚的劑量口服施用。
18.根據(jù)權(quán)利要求8的方法，其中所述組合物處于延釋或緩釋制劑中。
19.根據(jù)權(quán)利要求8的方法，其中所述組合物經(jīng)由乳液、噴霧液、護(hù)墊、繃帶或透皮貼劑 的形式施用。
20.根據(jù)權(quán)利要求8的方法，其中所述牛尿酚還包含用量足以結(jié)合雌激素受體亞型的 S-牛尿酚。
21.根據(jù)權(quán)利要求8的方法，其中所述皮膚或毛發(fā)的狀態(tài)可以經(jīng)至少下列一種以美容 形式改善a)通過細(xì)胞更新誘導(dǎo)提高的皮膚完整性；b)增加皮膚的含水量或濕度；c)增加葡糖胺聚糖和透明質(zhì)酸用于改善皮膚光澤；d)降低經(jīng)表皮的水分流失，皮膚剝落和脫皮；e)滋補(bǔ)得到有活力的健康皮膚；f)改善皮膚厚度和增強(qiáng)細(xì)胞的耐久性；g)加強(qiáng)皮膚的膠原蛋白和增強(qiáng)皮膚健康；h)增強(qiáng)皮膚的伸縮性以及改善皮膚的保護(hù)性能；i)增加彈性蛋白以改善皮膚的彈性； j)用以抵擋彈性蛋白酶的保護(hù)；k)用以抵擋膠原蛋白酶的保護(hù)；1)用以抵擋基質(zhì)金屬蛋白酶的保護(hù)；m)修復(fù)和減輕真皮皺紋的外觀和改善皮膚質(zhì)地；η)減小皮膚毛孔尺寸和增強(qiáng)皮膚的光滑度；ο)復(fù)原和恢復(fù)皮膚；P)改善皮膚磨損和傷疤的外觀；q)通過最小化皮脂腺分泌減輕油性皮膚；r)減輕皮膚按年代的、內(nèi)在和外在的真皮衰老；s)改善皮膚老人斑；t)增強(qiáng)毛發(fā)的色素沉著；和u)改善皮膚色調(diào)。
22.根據(jù)權(quán)利要求7的方法，其中所述皮膚或毛發(fā)的病況通過至少一種以下的手段藥 學(xué)上改善a)增加皮膚中的血流；b)改善皮膚的溫度和皮膚的溫度調(diào)節(jié)；c)增加皮膚厚度和抑制成纖維細(xì)胞的凋亡；d)誘導(dǎo)膠原蛋白的產(chǎn)生和增加皮膚的充盈性；e)誘導(dǎo)彈性蛋白的產(chǎn)生和增加皮膚彈性；f)抑制彈性蛋白酶以改善皮膚的質(zhì)地和真皮紋理；g)修復(fù)和治療皺紋和改善皮膚質(zhì)地；h)正面地影響血管形成，皮膚厚度和皮膚充盈性，和減慢衰老的進(jìn)程；i)減少基質(zhì)金屬蛋白酶，以正面地影響皮膚膠原蛋白和彈性蛋白； j)增強(qiáng)皮膚的修復(fù)和傷口的愈合；k)改善皮膚磨損和傷疤的外觀； 1)通過改善皮脂腺功能減輕油性皮膚；m)穩(wěn)定皮膚顏色的變化和毛發(fā)的色素沉著以及促進(jìn)皮膚的亮度； η)治療、改善和對抗色素沉著過度，老人斑和光老化； ο)減輕或消除粉刺；P)減輕頭皮頭發(fā)的減少或促進(jìn)頭皮頭發(fā)的保留(在男性和女性型禿發(fā)中)； q)延遲面部和身體毛發(fā)的生長，減少面部和身體毛發(fā)的生長和減輕多毛癥； r)減輕頂泌腺分泌和減輕過量汗腺功能(汗腺炎和腋臭)； s)減輕皮膚炎癥和陰道干燥；和t)減輕皮膚和毛發(fā)在涉及雄激素和/或雌激素效果的類固醇激素合成與功能以及類 固醇與類固醇結(jié)合受體代謝中的反常。
23.一種改善皮膚外觀的方法，包括施用包含牛尿酚的組合物，其中至少是R-牛尿 酚，其中R-牛尿酚結(jié)合游離的5 α - 二氫睪酮并抑制所述5 α - 二氫睪酮與雄激素受體的結(jié)合。
24.根據(jù)權(quán)利要求23的方法，其中所述牛尿酚還包含用量足以結(jié)合雌激素受體亞型的 S-牛尿酚。
全文摘要
本發(fā)明提供了牛尿酚治療皮膚病的用途。植物性雌激素大豆苷元的主要代謝產(chǎn)物牛尿酚(7-羥基-3-(4′-羥基苯基)-色滿)在體外和體內(nèi)特異性結(jié)合并阻斷5α-二氫睪酮(DHT)。牛尿酚可以結(jié)合循環(huán)的游離DHT并將其與雄激素受體隔絕，從而改變受雄激素調(diào)控的生長和生理性激素響應(yīng)。這些數(shù)據(jù)提出解釋牛尿酚生物學(xué)性質(zhì)的一種新模型。牛尿酚特異性結(jié)合并隔絕DHT與雄激素的能力的顯著性在健康和疾病之間具有重要分支，并可提示牛尿酚在治療和預(yù)防雄激素調(diào)節(jié)的皮膚和毛發(fā)病理學(xué)上有廣泛和重要的用途。因此，牛尿酚可以特異性結(jié)合DHT和預(yù)防DHT在影響皮膚和毛發(fā)的生理和病理性進(jìn)程中的生物學(xué)作用。
文檔編號A61P17/08GK101987097SQ20101050291
公開日2011年3月23日 申請日期2010年8月2日 優(yōu)先權(quán)日2009年7月31日
發(fā)明者埃德溫·道格拉斯·李帕特, 特倫特·D·倫德, 羅伯特·J·翰達(dá), 肯尼思·大衛(wèi)·瑞吉納德·賽徹爾 申請人:布萊阿姆青年大學(xué);科羅拉多州立大學(xué)研究基金會;兒童醫(yī)院醫(yī)藥中心