專利名稱：苯酚衍生物和它們調(diào)控pkb活性的用途的制作方法
苯酚f斤生物和它們調(diào)控PKB活性的用途本發(fā)明涉及可用作蛋白激酶B (PKB/Akt)的抑制劑和/或活化劑的新化 合物。從而，這些化合物可用于治療癌癥。磷酸肌醇3-激酶(PI 3-激酶)是具有脂激酶活性的一進(jìn)化保守族酶，其 響應(yīng)于細(xì)胞外刺激能產(chǎn)生一系列具有信號(hào)傳導(dǎo)潛能的3-磷酸化磷酸肌醇脂 質(zhì)。所導(dǎo)致的PI3-激酶活性的細(xì)胞作用是多樣的，包括DNA合成、趨化 性、葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)和嚢泡運(yùn)輸(vesicle trafficking)。 PI 3-激酶本身通過多種機(jī) 理活化，所述機(jī)理包括受體酪氨酸激酶、Ras和異源三聚體G-蛋白。負(fù)責(zé)一些上述作用的PI 3-激酶的效應(yīng)器是蛋白激酶B (PKB/Akt)—哺 乳動(dòng)物的病毒癌蛋白v-akt的同系物(Staal 1987)。響應(yīng)于生長因子刺激通 過3-磷酸肌醇與有助于其在兩個(gè)不同部位磷酸化和隨后活化的其PH結(jié)構(gòu) 域結(jié)合PKB被募集到質(zhì)膜。第一個(gè)磷酸化部位、即蘇氨酸-308(T308)位于 PKB的活化環(huán)(activation loop)中，被磷酸肌醇-依賴性激酶-1 (PDK-1)磷酸 化。第二個(gè)部位、即絲氨酸-473(S473)位于C-末端疏水性調(diào)節(jié)結(jié)構(gòu)域中， 被尚未鑒定的激酶磷酸化(Chang,Lee等人，2003)。迄今為止，已經(jīng)假定了 多種S473候選激酶，包括PDK-1、促分裂原活化蛋白激酶-活化蛋白激酶 2、整聯(lián)蛋白連接激酶(ILK)和PKB本身(Brazil, Park等人，2002; Hill, Feng 等人，2002)。仍然有待確定是這些激酶中的任何一種還是迄今為止尚未鑒 定的激酶負(fù)責(zé)該特定部位的磷酸化。AGC激酶族的其它蛋白激酶如蛋白激 酶C 8 (PKC8)和p70"K通過它們的同源殘基的磷酸化而共享類似的活化 機(jī)理(Newton 2003)。所有上述激酶的活化均易受LY294002和渥曼青霉素 對(duì)PI3-激酶抑制的影響。PKB的效應(yīng)器包括Bad、 GSK-3 (糖原合成酶激 酶-3)和mTOR (雷帕霉素的哺乳動(dòng)物靼標(biāo))(Vivanco和Sawyers 2002)。 mTOR是蛋白合成的調(diào)節(jié)劑并且在PKC5活化中起作用(Parekh， Ziegler 等人，2000)。與PI 3-激酶類似，已經(jīng)使用藥理學(xué)物質(zhì)來幫助對(duì)mTOR信號(hào)傳導(dǎo)進(jìn)行研究。雷帕霉素通過與FKBP12結(jié)合抑制mTOR的活性，從
而抑制mTOR末端的事件(Sabers， Martin等人，1995)。
因此，磷酸肌醇信號(hào)傳導(dǎo)是控制細(xì)胞死亡、存活和命運(yùn)的關(guān)鍵因素。
特別是細(xì)胞存活是一種重要的對(duì)抗癌癥的天然防御機(jī)理。細(xì)胞存活是由磷
酸肌醇3-激酶產(chǎn)物控制的，其又轉(zhuǎn)而活化^f皮稱為PKB或Akt的特定的蛋
白激酶。PKB/Akt被其它激酶磷酸化，隨后導(dǎo)致其自身催化能力的完全活
化并從而通過該蛋白激酶級(jí)聯(lián)推進(jìn)細(xì)胞存活信號(hào)。闡明PKB砩酸化控制中
的要素已經(jīng)成為許多研究小組和藥物開發(fā)團(tuán)隊(duì)的工作焦點(diǎn)。
我們現(xiàn)在已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了能抑制和/或活化PKB的化合物。
因此，在第一個(gè)方面，本發(fā)明提供了下式的化合物和其可藥用的鹽在
制備用于調(diào)控PKB活性的藥物中的用途
<formula>formula see original document page 10</formula>其中
R1是C15烷氧基、OCOC13烷基、0(CH2)20(CH2)20(CH2)2OMe、 0(CH2)20(CH2)20(CH2)2OH或OH;
R2是H、 (CH2)nOH、 OCH3、 Hal或
<formula>formula see original document page 10</formula>R1
或
R2
R3是H或(CH2)nOH;且
R4是任選地被一個(gè)或多個(gè)Hal、 OH、 COCH3、 NH2、 NHCH3、 NHMe、 NMe2、 OCOCH3、 C02H或其酯或酰胺取代的d.6烷基， 其中n是l-5。在本發(fā)明的上下文中，囟素指的是F、 Cl、 I或Br,優(yōu)選地是C1、 I 或Br。
對(duì)于本發(fā)明的目的而言，烷基指的是1至6個(gè)碳原子的直鏈和支鏈烷 基，包括但不限于甲基、乙基、正-丙基、異丙基、正-丁基、仲-丁基、異 丁基、叔-丁基、正-戊基、正-己基。具體而言，烷基指的是具有l(wèi)、 2、 3、 4、 5或6個(gè)碳原子的基團(tuán)。術(shù)語烷基還包括環(huán)烷基，包括但不限于環(huán)丙基、 環(huán)丁基、CBb-環(huán)丙基、CH;r環(huán)丁基、環(huán)戊基或環(huán)己基。具體而言，環(huán)烷基 指的是具有3、 4、 5或6個(gè)碳原子的基團(tuán)。環(huán)烷基可任選地,皮取代或與一 個(gè)或多個(gè)碳環(huán)基團(tuán)或雜環(huán)基團(tuán)稠合。
如本文所討論的這樣，發(fā)現(xiàn)本發(fā)明的化合物可用作PKB的抑制劑和/ 或活化劑，并且從而可用作用于治療癌癥的物質(zhì)。特別是發(fā)現(xiàn)本文所述的 化合物可用于其中涉及PKB上調(diào)的癌癥，更特別是其中涉及PKB上調(diào)以 及PTEN突變的癌癥。因此，所述化合物的特定靶標(biāo)是癌癥如卵巢癌、乳 癌、前列腺癌、甲狀腺癌和胰腺癌。
發(fā)現(xiàn)本文所公開的作為活化劑的那些化合物可用于預(yù)防細(xì)胞死亡。因 此，發(fā)現(xiàn)它們可用于治療變性性障礙、不能再生的那些組織、即分別為神 經(jīng)元(阿爾茨海默病、中風(fēng)等)或心臟(梗死、缺氧)和骨骼肌(運(yùn)動(dòng)損傷)組織 的變性性疾病(Glass 2003; Matsui, Nagoshi等人，2003; Tatton， Chen等人， 2003)。
因此，在第二個(gè)方面，本發(fā)明提供了包含一種或多種本文所定義的化 合物并任選地包含一種或多種可藥用的稀釋劑、載體和/或賦形劑的藥物制 劑。
本發(fā)明的組合物可以以每個(gè)劑量含有預(yù)定量的各活性成分的單位劑量 形式存在。該類單位可適于提供5-100mg/天的所述化合物，優(yōu)選5-15mg/ 天、10-30mg/天、25-50mg/天、40-80mg/天或60-100mg/天。對(duì)于式I化合 物而言，提供100-1000mg/天的劑量，優(yōu)選提供100-400mg/天、300-600mg/ 天或500-1000mg/天的劑量。該類劑量可以以單劑量的形式或者以多個(gè)離 散劑量的形式被提供。最終的劑量當(dāng)然將取決于所治療的病癥、施用途徑和患者的年齡、體重和情況，并且將由醫(yī)生決定。
本發(fā)明的主題最優(yōu)選地是以適宜的組合物形式進(jìn)行施用。作為適宜的 組合物，可以提及的是通常用于全身或局部施用藥物的所有組合物?？伤?用的載體應(yīng)當(dāng)基本上是惰性的，以便不與活性成分發(fā)生相互作用。合適的
惰性載體包括水、醇、聚乙二醇、礦物油或石油凝膠(petroleumgel)、丙二 醇等。所述藥物制劑可以被配制用于以對(duì)于人或獸藥應(yīng)用而言任何方便的 方式進(jìn)4亍施用。
如下文所詳細(xì)討論的那樣，本發(fā)明的藥物組合物特別是可被配制用于 以固體或液體形式進(jìn)行施用，包括適于下列施用的那些(l)口服施用，例 如，獸用頓服藥(水性或非水性溶液劑或混懸劑)、片劑、大丸劑、散劑、 顆粒劑、應(yīng)用于舌的糊劑；(2)胃腸外施用，例如，以例如無菌溶液劑或混 懸劑的形式通過皮下、肌內(nèi)或靜脈內(nèi)注射進(jìn)行胃腸外施用；(3)局部應(yīng)用， 例如，以應(yīng)用于皮膚的乳膏劑、軟骨劑或噴霧劑的形式進(jìn)行局部應(yīng)用；或 (4)陰道內(nèi)或直腸內(nèi)施用，例如，以陰道栓、乳青劑或泡沫劑的形式進(jìn)行陰 道內(nèi)或直腸內(nèi)施用。但是，在某些實(shí)施方案中，可以將主題物質(zhì)簡(jiǎn)單地溶 解或混懸在無菌水中。在某些實(shí)施方案中，藥物制劑是非致熱性的，即不 會(huì)升高患者的體溫。本文所用的短語"有效量，，指的是可在動(dòng)物中有效產(chǎn) 生一些所需作用的一種或多種物質(zhì)、材料或包含一種或多種本發(fā)明的物質(zhì) 的組合物的量。^H人的是當(dāng)用一種物質(zhì)來獲得治療作用時(shí)，包含"有效量，， 的實(shí)際劑量將根據(jù)許多情況進(jìn)行變化，所述情況包括所治療的具體病癥、 疾病的嚴(yán)重程度、患者的大小和健康狀況、施用途徑等。熟練的醫(yī)學(xué)從業(yè) 者可以用醫(yī)學(xué)領(lǐng)域眾所周知的方法容易地確定適宜的劑量。在本文中短語 "可藥用的，，用于指在合理的醫(yī)學(xué)判斷范圍內(nèi)適合用于與人類和動(dòng)物的組 織接觸而不會(huì)引起過度的毒性、刺激、變態(tài)反應(yīng)或其它問題或適應(yīng)征、同 時(shí)具有合理的益處/風(fēng)險(xiǎn)比的那些化合物、材料、組合物和/或劑型。
本文所用的短語"可藥用的載體"指的是在將所述主題物質(zhì)從一個(gè)器 官或機(jī)體的一個(gè)部分?jǐn)y帶或轉(zhuǎn)運(yùn)到另一個(gè)器官或機(jī)體的另一個(gè)部分時(shí)所涉 及的可藥用的材料、組合物或介質(zhì)，如液體或固體填充劑、稀釋劑、賦形劑、溶劑或包封材料。各載體在能與制劑的其它成分相容的意義上必須是
"可接受的"?？捎米骺伤幱幂d體的材料的一些實(shí)例包括(l)糖類，如乳 糖、葡萄糖和蔗糖；(2)淀粉類，如玉米淀粉和馬鈴薯淀粉；(3)纖維素及其 衍生物，如羧甲基纖維素鈉、乙基纖維素和乙酸纖維素；(4)粉狀西黃蓍膠； (5)麥芽糖；(6)明膠；(7)滑石粉；(S)賦形劑，如可可脂和栓劑蠟類；(9)油 類，如花生油、棉子油、紅花油、芝麻油、橄欖油、玉米油和豆油；(10) 二醇類，如丙二醇；(ll)多元醇類，如甘油、山梨醇、甘露醇和聚乙二醇； (12)酯類，如油酸乙酯和月桂酸乙酯；(13)瓊脂；(14)緩沖劑，如氫氧化鎂 和氫氧化鋁；(15)海藻酸；(16)無熱原的水；(17)等張鹽水；(18)林格氏液； (19)乙醇；(20)磷酸鹽緩沖溶液；和(21)藥物制劑中所用的其它無毒的相容 性物質(zhì)。在某些實(shí)施方案中， 一種或多種所述物質(zhì)可含有堿性官能團(tuán)，如 氨基或烷基氨基，并且因此能與可藥用的酸形成可藥用的鹽。
在這一方面，術(shù)語"可藥用的鹽"指的是本發(fā)明的化合物的相對(duì)無毒 的無機(jī)和有機(jī)酸加成鹽。這些鹽可以在本發(fā)明的化合物的最后分離和純化 過程中原位制備，或者可以通過單獨(dú)地將游離堿形式的本發(fā)明的純化的化 合物與合適的有機(jī)酸或無機(jī)酸進(jìn)行反應(yīng)并分離出由此形成的鹽來制備。代 表性的鹽包括氫溴化物、鹽酸鹽、硫酸鹽、硫酸氫鹽、磷酸鹽、硝酸鹽、 乙酸鹽、戊酸鹽、油酸鹽、棕櫚酸鹽、硬脂酸鹽、月桂酸鹽、苯甲酸鹽、 乳酸鹽、磷酸鹽、甲苯磺酸鹽、檸檬酸鹽、馬來酸鹽、富馬酸鹽、琥珀酸 鹽、酒石酸鹽、萘酸鹽(napthylate)、甲磺酸鹽、葡庚糖酸鹽、乳糖酸鹽和 十二烷基磺酸鹽等(Berge， Bighley等人，1977)。所述物質(zhì)的可藥用的鹽包 括所述化合物的常規(guī)的無毒的鹽或季銨鹽，例如由無毒的有機(jī)酸或無機(jī)酸 形成的鹽。例如，該類常規(guī)的無毒的鹽包括衍生自無機(jī)酸如鹽酸、氬溴酸、 硫酸、氨基磺酸、磷酸、硝酸等的那些；和由有機(jī)酸如乙酸、丙酸、琥珀 酸、乙醇酸、硬脂酸、乳酸、蘋果酸、酒石酸、檸檬酸、抗壞血酸、棕櫚 酸、馬來酸、羥基馬來酸、苯乙酸、谷氨酸、苯甲酸、水楊酸(salicyclic acid)、 對(duì)氨基苯磺酸、2-乙酰氧基苯甲酸、富馬酸、甲苯磺酸、甲磺酸、乙烷二 磺酸、草酸、羥乙磺酸(isothionic acid)等制得的鹽。在其它情況下， 一種或多種物質(zhì)可含有一個(gè)或多個(gè)酸性官能團(tuán)，因此能與可藥用的堿形成可藥 用的鹽。這些鹽同樣可以在化合物的最后分離和純化過程中原位制備，或 者通過單獨(dú)地將游離酸形式的純化的化合物與合適的堿如可藥用的金屬陽 離子的氫氧化物、碳酸鹽或碳酸氫鹽、與氨或者與可藥用的有機(jī)伯、仲或 叔胺進(jìn)4于反應(yīng)來制備。
代表性的堿金屬或堿土金屬鹽包括鋰、鈉、鉀、鉀、鎂和鋁鹽等?？?用于形成堿加成鹽的代表性的有機(jī)胺包括乙胺、二乙胺、乙二胺、乙醇胺、
二乙醇胺、旅，秦等(參見例如Berge等人，同上)。在組合物中還可以存在濕 潤劑、乳化劑和潤滑劑如十二烷J^fL酸鈉和硬脂酸鎂以及著色劑、釋放劑、 包衣劑、甜味劑、矯味劑和芳香劑、防腐劑和抗氧化劑?？伤幱玫目寡趸?劑的實(shí)例包括(l)水溶性抗氧化劑，如抗壞血酸、鹽酸半胱氨酸、硫酸氫 鈉、偏亞石危酸氫鈉、亞石克酸鈉等；(2)油溶性抗氧化劑，如棕櫚酸抗壞血酸 酯、丁基化羥基苯甲醚(BHA)、 丁化羥基甲苯(BHT)、卵磷脂、掊酸丙酯、 a-生育酚等；和(3)金屬螯合劑，如檸檬酸、乙二胺四乙酸(EDTA)、山梨醇、 酒石酸、磷酸等。
本發(fā)明的制劑包括適于口服、鼻、局部(包括口含和舌下)、直腸、陰 道和/或胃腸外施用的那些。制劑可以方便地以單位劑量形式存在并且可以 用制藥領(lǐng)域眾所周知的任何方法來制備。可以與載體材料組合以制備單劑 量形式的活性成分的量將根據(jù)所治療的主體、具體的施用方式而變化?？?以與載體材料組合以制備單劑量形式的活性成分的量一般是產(chǎn)生治療作用 的化合物量。 一般而言，以百分之一為單位，該量為約1%至約99%的活 性成分，優(yōu)選地為約5°/0至約70%，最優(yōu)選地為約10%至約30%。制備這 些制劑或組合物的方法包括將活性劑與載體以及任選的 一種或多種輔助成 分結(jié)合到一起的步驟。 一般而言，制劑是通過將本發(fā)明的物質(zhì)與液體載體 或研細(xì)的固體載體或與這二者均勻地且緊密地結(jié)合到一起、然后如果必要 將產(chǎn)品成型來制備的。
本發(fā)明的適于口服施用的制劑可以a嚢劑、扁嚢劑、丸劑、片劑、 錠劑(使用進(jìn)行了矯味的基質(zhì)，通常為蔗糖和阿拉伯膠或西黃蓍膠)、散劑、顆粒劑的形式，或者可以是在水性或非水性液體中的溶液劑或混懸劑的形 式，或者可以是水包油型或油包水型液體乳劑的形式，或者可以是酏劑或糖漿劑的形式，或者可以是軟錠劑(pastaie)(使用惰性基質(zhì)，如明膠和甘油 或蔗糖和阿拉伯膠)的形式和/或可以是漱口劑的形式等，其各自含有預(yù)定 量的本發(fā)明的化合物作為活性成分。本發(fā)明的化合物也可以以大丸劑、藥 糖劑或糊劑的形式進(jìn)行施用。在本發(fā)明的用于口服施用的固體劑型(膠嚢 劑、片劑、丸劑、糖衣丸、散劑、顆粒劑等)中，活性成分與一種或多種可 藥用的載體如檸檬酸鈉或磷酸二鈣和/或下列物質(zhì)中的任何一種混合(1) 填充劑或增量劑，如淀粉類物質(zhì)、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和/或硅酸； (2)粘合劑，如，例如羧曱基纖維素、藻酸鹽、明膠、聚乙烯吡咯烷酮、蔗 糖和/或阿拉伯膠；(3)保濕劑，如甘油；(4)崩解劑，如瓊脂、碳酸釣、馬 鈴薯淀粉或木薯淀粉、海藻酸、某些硅酸鹽和碳酸鈉；(5)溶解阻滯劑，如 石蠟；(6)吸收促進(jìn)劑，如季銨化合物；(7)濕潤劑，如，例如鯨蠟醇和甘油 單硬脂酸酯；(8)吸收劑，如高嶺土和膨潤土； (9)潤滑劑，如滑石粉、硬脂 酸鈣、硬脂酸鎂、固體聚乙二醇、十二烷基硫酸鈉以及其混合物；和(IO) 著色劑。在膠嚢劑、片劑和丸劑的情況下，藥物組合物還可以包含緩沖劑。 使用諸如乳糖或奶糖(milk sugar)以及高分子量聚乙二醇等賦形劑，相似類 型的固體組合物也可用作軟和硬填充明膠膠囊的填充劑。片劑可以通過壓 制或模制來制備，任選地使用一種或多種輔助成分。壓制片可以用粘合劑 (例如明膠或羥丙基甲基纖維素)、潤滑劑、惰性稀釋劑、防腐劑、崩解劑(例 如淀粉羥乙酸鈉或交聯(lián)羧甲基纖維素鈉)、表面活性劑或分散劑來制備。模 制片可以通過在合適的機(jī)器中將用惰性載體稀釋劑潤濕的粉狀化合物混合 物模制來制備。本發(fā)明的藥物組合物的片劑和其它固體劑型如糖衣丸、膠嚢劑、丸劑 和顆粒劑可任選地#_刻痕或者用包衣和外殼如腸溶衣以及藥物配制領(lǐng)域中 眾所周知的其它包衣來制備。還可以將它們使用例如提供所需釋放性質(zhì)的 不同比例的羥丙基甲基纖維素、其它聚合物基質(zhì)、脂質(zhì)體和/或微球進(jìn)行配 制以緩^^或控制釋力文其中的活性成分。可以通過例如用截留細(xì)菌的濾器進(jìn)行過濾或通過摻入在使用前即刻被溶解在無菌水或一些其它無菌注射溶媒 中的無菌固體組合物形式的滅菌劑來對(duì)其進(jìn)行滅菌。這些組合物還可任選 地含有遮光劑，可以是僅在胃腸道的某些部分中或者優(yōu)選地在胃腸道的某 些部分中釋》文活性成分、任選地以延遲方式釋放活性成分的組合物?？梢?使用的包埋組分的實(shí)例包括聚合物和蠟類。活性成分還可以是微嚢化的形 式，如果適宜，該微嚢化的形式可以具有一種或多種上述賦形劑。本發(fā)明 的化合物的用于口服施用的液體劑型包括可藥用的乳劑、微乳、溶液劑、 混懸劑、糖漿劑和酏劑。除活性成分外，所述液體劑型還可含有本領(lǐng)域常 用的惰性稀釋劑如例如水或其它溶劑、穩(wěn)定劑和乳化劑如乙醇、異丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、節(jié)醇、苯曱酸節(jié)酯、丙二醇、1，3-丁二醇、油類(特 別是棉子油、花生油、玉米油、胚油、橄欖油、蓖麻油和芝麻油)、甘油、 四氫呋喃醇、聚乙二醇和脫水山梨醇的脂肪酸酯以及其混合物。除惰性稀 釋劑外，口服組合物還可包含助劑如濕潤劑、乳化劑和助混劑、甜味劑、 矯味劑、著色劑、芳香劑和防腐劑。除活性化合物外，混懸劑還可含有助 混劑如例如乙氣基化的異硬脂醇、聚氧乙烯山梨醇和脫水山梨醇酯、微晶 纖維素、偏氫氧化鋁(aluminum metahydroxide)、膨潤土、瓊脂和西黃蓍 膠以及其混合物。用于直腸或陰道施用的本發(fā)明的藥物組合物的制劑可以是栓劑的形 式，其可以通過將一種或多種本發(fā)明的化合物與一種或多種合適的非刺激 性賦形劑或載體混合來制備，所述賦形劑或載體包括例如可可脂、聚乙二 醇、栓劑蠟或水楊酸酯，并且其在室溫下是固體但是在體溫下是液體，因 此，其將在直腸或陰道腔內(nèi)熔化并釋放活性劑。適于陰道施用的本發(fā)明的 制劑還包括含有本領(lǐng)域已知適宜的該類載體的陰道栓、衛(wèi)生栓、乳膏劑、 凝膠劑、糊劑、泡沫劑或噴霧劑。用于本發(fā)明的化合物的局部或透皮施用 的劑型包4錄劑、噴霧劑、軟膏劑、糊劑、乳骨劑、洗劑、凝膠劑、溶液 劑、貼劑和吸入劑。可以將活性化合物在無菌條件下與可藥用的栽體和可 能需要的任何防腐劑、緩沖劑或拋射劑混合。除本發(fā)明的活性化合物外，軟骨劑、糊劑、乳骨劑和凝膠劑還可含有賦形劑如動(dòng)物和植物脂肪、油類、蠟類、石蠟、淀粉、西黃蓍膠、纖維素 衍生物、聚乙二醇、硅氧烷類、膨潤土、硅酸、滑石粉和氧化鋅或其混合 物。除本發(fā)明的化合物外，散劑和噴霧劑還可含有賦形劑如乳糖、滑石粉、 硅酸、氫氧化鋁、硅酸鉤和聚酰胺粉末或這些物質(zhì)的混合物。噴霧劑還可 含有常規(guī)拋射劑如氯氟烴類和揮發(fā)性的未被取代的烴類如丁烷和丙烷。透 皮貼劑具有向機(jī)體控制遞送本發(fā)明的化合物的另外的優(yōu)點(diǎn)。該類劑型可以 通過將活性劑溶解或分散在適當(dāng)?shù)娜苊街衼碇苽?。還可以使用吸收促進(jìn)劑 來增加活性劑通過皮膚的流量?？梢酝ㄟ^提供控速膜或?qū)⒒衔锓稚⒂诰?合物基質(zhì)或凝膠中來控制該類流動(dòng)的速率。在本發(fā)明的范圍內(nèi)還涵蓋眼用制劑、眼骨劑、散劑、溶液劑等。本發(fā) 明的適于胃腸外施用的藥物組合物包含一種或多種本發(fā)明的化合物和一種 或多種可藥用的無菌等張的水性或非水性溶液、分散物、混懸液或乳液或者可在使用前即刻被重構(gòu)到無菌的可注射的溶液或^:物中的無菌粉末， 其可含有抗氧化劑、緩沖劑、抑菌劑、使制劑與預(yù)期接受者的血液等張的 溶質(zhì)或助混劑或增稠劑。可用在本發(fā)明的藥物組合物中的合適的水性和非 水性載體的實(shí)例包括水、乙醇、多元醇(如甘油、丙二醇、聚乙二醇等)以 及其合適的混合物、植物油類如橄欖油和可注射的有機(jī)酯類如油酸乙酯。 可以例如通過使用包衣材料如卵磷脂、在分散物的情況下通過維持所需的 粒度和通過使用表面活性劑來維持適當(dāng)?shù)牧鲃?dòng)性。這些組合物還可以含有助劑如防腐劑、濕潤劑、乳化劑和分散劑?？?以通過包含各種抗細(xì)菌劑和抗真菌劑例如尼泊金酯、氯丁醇、山梨酸苯酯 (phenol sorbic acid)等來確保預(yù)防微生物的作用。還可能需要在組合物中包 含等張化劑如糖類、氯化鈉等。此外，還可以通過包含延遲吸收的物質(zhì)如 單硬脂酸鋁和明膠來實(shí)現(xiàn)可注射的藥物形式的延遲吸收。在一些情況下， 為了延長活性劑的作用，需要由皮下或肌內(nèi)注射來減緩活性劑的吸收。這 可以通過使用水溶性差的結(jié)晶或無定形材料的液體混懸劑來實(shí)現(xiàn)?；钚詣?的吸收速率則取決于其溶出速率，其溶出速率轉(zhuǎn)而又可取決于晶體大小和 晶形。或者，通過將活性劑溶解或混懸在油性介質(zhì)中來實(shí)現(xiàn)胃腸外施用的活性劑的延遲吸收。可注射的貯庫形式是通過形成主題化合物在可生物降 解聚合物如聚丙交酯-聚乙交酯中的微嚢基質(zhì)來制備。根據(jù)活性劑與聚合物 的比例以及所用的具體聚合物的性質(zhì)，可以控制活性劑釋放的速率。其它 可生物降解的聚合物的實(shí)例包括聚(原酸酯)和聚(酸酐)。可注射的貯庫制劑 也通過將活性劑捕獲在可與機(jī)體組織相容的脂質(zhì)體或微乳中來制備。當(dāng)本文所述的化合物以藥物的形式被施用于人和動(dòng)物時(shí)，它們可以以其本身的形式或者以含有例如0.1至99.5%(更優(yōu)選0.5至卯％)的活性成分 和可藥用載體的藥物組合物的形式被給予。除上述組合物外，還可以使用 含有適宜量的治療物的覆蓋物例如硬膏劑、繃帶、敷料、紗布?jí)|等。如上 文所詳細(xì)描述的那樣，治療性組合物可以在支架、裝置、假體和移植物上 被施用/遞送。在第三個(gè)方面，本發(fā)明提供了用在藥物中的、特別是用于治療癌癥的 本文所定義的化合物。般的常規(guī)知識(shí)容易地合成。此外，下列化合物是新的并且形成了本發(fā)明的第四個(gè)方面ci ci<formula>formula see original document page 19</formula><formula>formula see original document page 20</formula><formula>formula see original document page 21</formula>其中R5是d-s烷氧基或OH;R6是任選地被Hal、 NHCH3、 C02H或其酯或酰胺取代的d.s烷基；且R7和R8獨(dú)立地是(CH2)qOH,其中q是2-5 。 還提供了該類化合物在制備用于調(diào)控PKB活性的藥物中的用途?，F(xiàn)在將參考下面的實(shí)施例來對(duì)本發(fā)明進(jìn)行描述，但是絕不應(yīng)將這些實(shí) 施例曲解為對(duì)本發(fā)明范圍的限制。本發(fā)明的每個(gè)方面的優(yōu)選特征在已作必 要調(diào)整的情況下也適用于其它各方面。這些實(shí)施例涉及附圖
，其中圖l提供了本發(fā)明的化合物；圖2提供了蛋白印跡的結(jié)果，說明了當(dāng)用多種本發(fā)明的化合物進(jìn)行處 理時(shí)PKB的磷酸化；圖3說明了本發(fā)明的化合物Q誘導(dǎo)PKB的磷酸化。在PKB在S473 上的磷酸化用FITC標(biāo)記的磷酸-特異性抗體的綠色染色的增加來表示且核 經(jīng)dapi染色的情況下，綠色和藍(lán)色熒光通道的重疊顯示為紅色的假色。上 面一組如所示的那樣，將々幾餓的Cos6細(xì)胞用血清和/或15ng/ml cQ處理 IO分鐘。下面一組e)將々幾餓的Cos6細(xì)胞用非刺激濃度(0.2ng/ml)的胰島 素進(jìn)行處理。f)用500nMPTEN抑制劑RV001進(jìn)行預(yù)處理、之后進(jìn)行胰島 素攻擊足以誘導(dǎo)PKB的磷酸化，而g) 15照/ml cQ抑制PI(3，4，5)P3介導(dǎo)的 PKB活化。h)用lOOnM PI3-激酶抑制劑LY29400預(yù)孵育30分鐘增加cQ 誘導(dǎo)的PKB磷酸化(與c相比)；圖4說明了化合物Q抑制胰島素-刺激的肌動(dòng)蛋白重塑。紅色(F-肌動(dòng)蛋白)和藍(lán)色(核)熒光通道重疊。如所顯示的那樣，將饑餓的Cos6細(xì)胞用 15jig/ml cQ和/或5pg/ml胰島素刺激10分鐘。c)將細(xì)胞用100|nM LY294002 預(yù)孵育30分鐘，之后進(jìn)行刺激。羅丹明-標(biāo)記的鬼筆環(huán)肽染色證明a)饑餓 的Cos6成纖維細(xì)胞形成應(yīng)力纖維，其在d)胰島素刺激后被重塑成與質(zhì)膜 毗連的聚合的F-肌動(dòng)蛋白。b)cA也在饑餓的成纖維細(xì)胞中誘導(dǎo)應(yīng)力纖維損 失。但是與胰島素不同，cQ能c)不依賴PI3-激酶地改組細(xì)胞骨架和e)干 擾胰島素-刺激的應(yīng)力纖維破壞；和圖5提供了另外的蛋白印跡的結(jié)果，說明了用本發(fā)明的多種化合物進(jìn) 4亍的PKB活化。實(shí)驗(yàn)一本發(fā)明的各種化合物的合成除非另有說明，否則起始材料得自商業(yè)供應(yīng)商并且不經(jīng)進(jìn)一步純化即 進(jìn)行使用。無水溶劑是HPLC級(jí)的。所有非水性反應(yīng)均在氮?dú)鈿夥障掠煤?箱或火焰干燥的玻璃器亞進(jìn)行。水指的是去離子水，鹽水指的是飽和氯化 鈉溶液。溶劑是在減壓下用Bttchi旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器除去的?？焖僦挿ㄓ霉?膠(35-70^im的微粒)進(jìn)行。薄層色語法用商購獲得的預(yù)涂的鋁板進(jìn)行。通 過熒光熄滅或用KMn04或磷鉬酸染色使板顯影。和13C NMR光i普是在Bruker Avance AMX-300 Fourier Transform 光鐠儀上記錄的?；瘜W(xué)位移值以百萬分率(ppm)給出，位于四甲基硅烷的 低磁場(chǎng)，偶合常數(shù)(J)值以Hz值的形式給出。除非另有說明，否則NMR 光i普是在300 K下記錄的。紅外光i普是用Shamadazu FTIR-8700紅外分光光度計(jì)記錄的。熔點(diǎn) 是在Gallenkamp熔點(diǎn)儀上記錄的并且未進(jìn)行校正。質(zhì)語是用Micromass LCT-KAlll電噴霧質(zhì)譜儀記錄的。精確的分子量是由Department of Chemistry, University College London的工作人員測(cè)得的。33，-亞曱基雙[l-(2-氯乙基)-4-羥基苯一化合物C所有化學(xué)物質(zhì)和試劑均購自商業(yè)供應(yīng)商一Sigma Aldrich Company Ltd, Avocado Research Chemicals Ltd和Lancaster Synthesis,未經(jīng)進(jìn)一步純化。除非另有"i兌明，否則溶劑均不經(jīng)進(jìn)一步純化直接使用。用于進(jìn)行洗滌的水是去離子水。鹽水指的是飽和氯化鈉水溶液。^NMR和"CNMR 光鐠學(xué)用Bruker儀器AMX分別在300 MHz和75 MHz下進(jìn)行。IR光語 是在NicoletFT-IR機(jī)器上獲得的。熔點(diǎn)是用Gallenkamp熔點(diǎn)儀測(cè)定的。ci ciOH OH將硫酸(25% w/w水溶液；50ml， 142.7mmol)和曱醛(37。/0 w/v水溶液； 1.2ml， 14.8mmol)加入到4-羥基苯乙基氯(1.96ml， 12.5mmol)中。將該反應(yīng) 用機(jī)械攪拌器進(jìn)行攪拌并在70'C下在回流下加熱2小時(shí)。冷卻后，潷出水 層，將殘余的白色固體溶解于乙酸乙酯(60ml)中。將有機(jī)層用水(2 x 30ml) 和鹽水(2 x 30ml)洗滌。將有機(jī)層干燥(石克酸鎂)并真空蒸發(fā)，得到固體。通 過用氯仿重結(jié)晶對(duì)產(chǎn)物進(jìn)行純化，得到白色粉末形式的標(biāo)題化合物(49%， 0.987g)。附/ 161畫165。C (氯仿)；IR (石蠟糊法)/cm1 1591m， 1608m, 2932w, 3020w， 3225s (O-H); 5H(300 MHz; CDC13) 3.01 (4H, t， /7.4 Hz， 2-H)， 3.72 (4H, t， /7.4 Hz l-H)， 3.93 (2H， s， CH2), 6.36 (2H， br， OH)， 6.81 (2H， d， / 8,2 Hz， 5誦H), 7.00 (2H， dd， /8.2和2.2 Hz， 6國H)， 7.15 (2H， d， /2.2 Hz， 2-H);6c(75MHz; CDC13) 32.5(2H， ArCH2Ar)， 38.5(CH2CH2C1，)， 45.4(CH2CH2C1)， 116.3， 126.8， 128.5， 131.2， 131.3， 151.7;(FAB) 324 (M+， 52%), 307 ([M畫OH+， 24)， 289 ([M-OH-OH2]+， 24)。 m/z HRMS C17H18C1202 [M+的計(jì)算值324.06838，實(shí)測(cè)值324.06843。4-(4-甲氧基苯基)-2-氨基丁烷鹽酸鹽一化合物M (MGN-M253) (S. K. Chattopadhyay, IC V. Sashidhara, V. Ko腿i， V. Tripathi, A. K. Tripathi， V. Prajapati， S. Kumar, U.S. (2001)6252114)將4-(4-甲氧基苯基)-2- 丁酮(2.09g， 11.74mmo1)、乙酸銨(9.06g， 11.75mmol)和氰基硼氫化鈉(0.52g， 0.82mmol)在甲醇(30ml)中的混合物在 室溫下攪拌72小時(shí)。將該反應(yīng)混合物用濃HC1 (10ml)酸化并在真空下除去 溶劑。然后加入水并用乙醚(3x50ml)萃取未反應(yīng)的起始材料。用氫氧化鉀 小丸使水性溶液呈堿性，用氯化鈉(2g)使其飽和并用乙醚(3 x 100ml)萃取。 將合并的有機(jī)萃取物用硫酸鎂干燥并真空蒸發(fā)，得到無色粘性液體形式的 3-(4-曱氧基苯基)-l-甲基丙胺。然后通過向該胺中加入20% HCl-甲醇(3ml) 制備其鹽酸鹽。將該混合物蒸發(fā)至干并用二氯甲烷重結(jié)晶，得到白色固體 形式的3-(4-曱氧基苯基)-l-甲基丙胺鹽酸鹽(0.31g， 68%)。 Vmax(膜法)/cm-1 1514， 1612， 2937， 2997， 3423 (N-H拉伸)。NMR (300 MHz; CDC13) 1.52 (3H， d， /6.6 Hz)， 2.09 (2H， m)， 2.88 (2H， m)， 3.66 (1H， m)， 4.01 (3H, s)， 7.17 (2H， d， /8，7 Hz)， 7.45 (2H， d， /8.7 Hz); 13C匿R (75 MHz; CDC13) 17.7， 30.1， 36.0， 47.6， 55.7, 114.5， 129.8, 133.9， 157.5;齡(ES+) 180 ([M-Cl+， 100%);w/zHRMS CuHwNOM + H]+的計(jì)算值180.13883,實(shí)測(cè)值180.13863。2，6-雙(羥基甲基)-4-茴香醚一化合物F，其用于合成化合物V (關(guān)于其合成，參見B. Masei， S. Saccheo， r"rfl/^金o"， 1993, 49， 10739.)mp 98-100。C (氯仿)(文獻(xiàn)，103-104。C)vmax (膜法)/cm-1 1475w, 2835w， 2850w， 2910w， 2935w， 3180br， 3290br (O-H拉伸)；NMR (300 MHz; CDC13) 2.32 (3H, s， 1誦H)， 3.84 (3H，s， 7-H), 4.70 (4H, s，6-H)， 7.13 (2H， s， 3陽H);13C醒R (75 MHz; CDC13) 20.9 (CH3)， 61.2， 62.4， 129.7， 133.8， 134.5， 154.2;m/z (ES+) 182 (M+, 100%), 165 ([M-CH3+， 98)。[3-(3-羥基甲基-2-甲氧基-5-曱基節(jié)氧基曱基)-2-甲氧基-5-甲基苯基卜甲醇一 化合物V (MGN-V481(di))。步驟l:向wang (聚合物-結(jié)合的對(duì)-節(jié)氧基節(jié)醇)樹脂(107g， 4.5mmo1) 在干燥二氯曱烷(30ml)中的混懸液中加入三氯乙腈(4.5ml， 44.88mmo1)。將 該混合物冷卻至(TC ，滴加1，8-二氮雜二環(huán)[5.4.0十一碳-7-烯(DBU)(0.3ml， 2.00mmol)并將該反應(yīng)混合物在O'C下振搖1小時(shí)。將樹脂收集到一個(gè)垂熔 玻璃漏斗中并相繼用二氯曱烷、四氫呋喃、四氫呋喃/甲醇(l:l)、曱醇、四 氫呋喃/甲醇(l:l)、四氫呋喃和二氯甲烷洗滌。步驟2:將所得的樹脂(0.83g， 1.22mmol)在氮?dú)庀掠盟臍溥秽?2 x 3ml) 洗滌，然后混懸于干燥四氫呋喃(20ml)中。加入醇2，6-雙(羥基甲基)-4-茴香 醚(3,30g， 18.13mmol)并將該反應(yīng)混合物振搖20分鐘。然后滴加三氟化硼 二乙醚合物(0.093ml， 0.76mmol)并將該樹脂混懸液在室溫下振搖18小時(shí)。 將樹脂收集到一個(gè)垂熔玻璃漏斗中并相繼用四氫呋喃、四氫呋喃/曱醇 (1:1)、甲醇、四氫吹喃/甲醇(l:l)、四氫呋喃和二氯甲烷洗滌。步驟3:向樹脂在千燥二氯曱烷中的混懸液中 將樹脂如前所述進(jìn)行 洗滌。將樹脂(0.17g， 0.25mmol)重新混懸于1%三氟乙酸/二氯甲烷溶液 (5.0ml)中。將該樹脂混懸液振搖4小時(shí)，然后相繼用二氯甲烷、四氬呋喃、 四氫呋喃/甲醇(l:l)、甲醇、四氫呋喃/甲醇(l:l)、四氫呋喃和二氯甲烷洗滌。 將有機(jī)層用水(2 x 50ml)和鹽水(2 x 40ml)洗滌，用石克酸鎂干燥并在真空下濃 縮。將產(chǎn)物用HPLC純化，得到[3-(3-羥基甲基-2-甲氧基-5-甲基-千氧基甲基)-2-甲氧基-5-甲基-苯基]-甲醇(MGN-V481(di))(86。/0)。Vmax(膜法)/cnT1 1385iii， 1614m, 1682s, 1714m， 2928w， 2964w， 3418b (O-H拉伸)；NMR (300 MHz; CDC13) 2.32 (6H， s), 3.80 (6H, s)， 4.62 (4H， s)， 4.71 (4H， s)， 7.13 (2H， s)， 7.21 (2H， s);13C匪R (75 MHz; CDC13) 20.8， 61.4， 62.4， 67.4,129.5, 130.4， 131.0,132.5, 134.0， 154.3;/w/z (ES+) 369 (M+ Na， 100%);m/z HRMS C20H26O5 [M + Na]的計(jì)算值369.16725,實(shí)測(cè)值369.16726。5-(2-氯乙基)-3-羥基甲基-2-曱氧基苯基卜甲醇~>[匕合物Z (MGN-Z594)<formula>formula see original document page 26</formula>向4-甲氧基苯乙基氯(5ml)在二氯甲烷(40ml)中的溶液中加入氯化鋁 (9.67g，72.52mmo1)。將該混合物在冰中進(jìn)行冷卻，然后滴加乙酰氯(5.16ml， 72.46mmol)。將該反應(yīng)混合物在55。C下在回流下加熱18小時(shí)。在冷卻后， 將該反應(yīng)混合物小心地傾倒到水中并用二氯甲烷(3 x 80ml)萃取產(chǎn)物。將有 機(jī)層用鹽水(2 x 100ml)洗滌，用硫酸鎂干燥，真空濃縮并用快速色語法(洗 脫劑乙醚/己烷(l:3))進(jìn)行純化，得到雙-乙?；闹虚g體(4.05g，64。/。)。向該中間體(2.58g， 10.73mmol)和碳酸鉀(3.00g， 21.72mmol)在丙酮 (30ml)中的溶液中加入碘甲烷(l,34g， 21.44mmo1)。將該反應(yīng)在回流下加熱 18小時(shí)。在冷卻后，將碳酸鉀濾出，用大量丙酮(3xl00ml)充分洗滌，然 后在真空下除去丙酮。將產(chǎn)物重新溶解于乙醚(60ml)中并用水(2 x 40ml)和 鹽水(2 x 40ml)洗滌。將產(chǎn)物真空濃縮，得到O-甲氧基雙-乙?；闹虚g體 (2.13g， 78%)。在氮?dú)庀?，將無水曱醇(7ml)加入到該O-曱氧基中間體(0.65g， 2.55mmol)中，然后在冰中冷卻至0'C 。滴加13。/。次氯酸鈉(24ml， 20.55mmo1)并將該混合物在室溫下攪拌18小時(shí)。然后緩慢加入18.5。/。鹽酸水溶液(5ml) 并將該混合物在室溫下攪拌3小時(shí)。然后將該反應(yīng)混合物真空濃縮并在氮 氣下重新溶解于無水甲醇(10ml)中。將該混合物在冰中冷卻并滴加亞硫酰 氯(056ml， 7.64mmo1)。然后將該混合物攪拌18小時(shí)，然后在真空下除去溶 劑和過量的亞硫酰氯并加入水(10ml)。用二氯曱烷(3 x 15ml)萃取該中間體， 用鹽水(2x20ml))洗滌，用硫酸鎂干燥并真空濃縮。在氮?dú)庀?，向氫化鋁 鋰(0.17g， 4.52mmol)在四氫呋喃(8ml)中的混合物(預(yù)先攪拌30分鐘)中滴加 位于四氫呋喃(4ml)中的中間體(0.41g， 1.42mmo1)。將該反應(yīng)在室溫下攪拌 4小時(shí)。小心地加入水(2ml),然后加入2M氫氧化鈉(1.5ml)，然后再次加 入水(2ml)。用二氯甲烷(3x30ml)萃取產(chǎn)物，得到淡黃色粘性液體形式的 [5-(2-氯-乙基)-3-羥基曱基-2-曱氧基-苯基-甲醇(0.25& 57%),將其用快速 色譜法(洗脫劑:二氯甲烷/甲醇，10:1)進(jìn)行純化。1H NMR (300 MHz; CDC13) 3.04 (2H， t， / 7.3 Hz), 3.66 (2H， t， / 7.3 Hz)， 3.85 (3H，s)， 4.73 (4H, s)， 7.20 (2H, s);13C醒R (75 MHz; CDC13) 38.7， 45.0， 61.1， 62.3， 129.3， 134.2， 134.7， 155.1;/w/z (ES+) 253 (M+ Na， 100%)， 219 ([(M-OH2) +Na]+, 50);m/z HRMS CnH15C103 [M + Na的計(jì)算值253.06019，實(shí)測(cè)值253.06017。[3-羥基曱基-2-曱氧基-5-(2-甲基氨基-乙基)-苯基]-甲醇鹽酸鹽~>[匕合物Al (MGN-A1598)向化合物Z (72mg， 0.27mmol)的溶液中加入33。/。乙醇的甲胺溶液(2ml， 13.37mmol)并將該反應(yīng)在室溫下攪拌10天。在真空下除去溶劑，向該反應(yīng) 混合物中加入水，然后加入1M鹽酸(lml)。將有才幾層用乙醚萃取。用2M 氫氧化鉀(0.5ml)使水層呈堿性并將產(chǎn)物真空濃縮，得到橙色液體。向該胺產(chǎn)物中加入18.5。/。鹽^/甲醇(0.1ml)并攪拌30分鐘。將該溶液在真空下濃 縮并將產(chǎn)物在水(30ml)和二氯甲烷(2 x 20ml)之間進(jìn)行分離。將水層在真空 下濃縮，得到化合物Al ， 3-羥基甲基-2-甲氧基-5-(2-甲基氨基乙基)-苯基]-甲醇鹽酸鹽(63mg, 89%)。v咖x(膜法)/cm1 1477s， 1633w， 1649w， 1710w， 2885w， 2962w， 3362br (N-H 拉伸)；工H NMR (300 MHz; CDC13) 2.61 (3H， s)， 2.92 (2H， t， / 7.5 Hz)， 3.13 (2H， t, /7.5 Hz)， 3.71 (3H， s)， 4.60 (4H， s)， 7.22 (2H， s);13C醒R (75 MHz; CDC13) 31.5 (C-l)， 33.2 (C-4)， 50.4 (C-3)， 58.9 (C-9)， 62.9 (C-IO)， 130.0 (C畫6)， 133,4 (C-7)， 134.3 (C-5)， 154.7(C畫8); m/z (ES+) 226 [M國Cl+， 100%);wt HRMS C12H20ClNOM-ClI+的計(jì)算值226.14377，實(shí)測(cè)值226.14381。1-[5-(2-氯乙基)-2-羥基苯基-乙酮~>[匕合物Bl (MGN-B1558F1)和1-[5-(2-氯乙基)-2-甲氧基苯基I乙酮一化合物Cl (MGN-C1557F2)在氮?dú)庀?，將氯化鋁(764mg，5.73mmol)加入到在二氯甲烷中的4-曱氧 基苯乙基氯(0.4ml，2.64mmol)中。將該混合物在水中冷卻至0'C ，然后滴加 乙酰氯(0.41ml， 5.76mmo1)。將該反應(yīng)混合物在室溫下攪拌24小時(shí)。將該 混合物小心地傾倒到冰中并將有機(jī)層用二氯甲烷(3 x 30ml)萃取。將合并的 有機(jī)萃取物用鹽水洗滌，用硫酸鎂干燥并真空濃縮。將產(chǎn)物通過快速色鐠 法(洗脫劑乙醚/己烷，l:4)進(jìn)行純化，作為產(chǎn)生雙-?；a(chǎn)物的反應(yīng)的副產(chǎn) 物得到l-[5-(2-氯-乙基)-2-羥基-苯基-乙酮(MGN-B1558Fl)(24mg， 5%)和 1國[5-(2-氯-乙基)-2-甲氧基-苯基卜乙酮(MGN-C1557F2)(llmg， 2%)。BlVmax(膜法)/cnT1 1487s， 1620m， 1643s， 1650s， 2959m， 3011w;力匪R (300 MHz; CDC13) 2.63 (3H， s)， 3.03 (2H， t， /7.1 Hz)， 3.70 (2H， t，/7.1 Hz)， 6.95 (1H， d， /8.5 Hz)， 7.34 (1H， /8.5 Hz)， 7.58 (1H， s);13C匪R (75 MHz; CDC13) 26.8， 39.2， 45.2， 118.8， 119.9， 128,6， 130.9,137.1161.5， 204.5;/ /^ (ES+) 199 ([M+H+， 100%);w/zHRMS d。HuC102 [M+H+的計(jì)算值199.05258，實(shí)測(cè)值199.05115。 Cl丄H NMR (300 MHz; CDC13) 2.61 (3H， s， ll-H)， 3.02 (2H， t， /7.2， 2-H)， 3.69 (2H， t, /7.2 Hz， l-H)， 3.90 (3H， s， 9-H)， 6.93 (1H， d， /8.4 Hz， 6-H)， 7.33 (1H d， /8.4 Hz， 4-H)， 7.56 (1H， s， 5畫H);13C NMR (75 MHz; CDC13) 32.0, 38.1, 45.1, 55.7， 111.9， 128.3， 130.4， 130.7， 134.3， 158.1， 199.6;m/z (ES+) 235 ([M曙Na+， 100%);{6-[5-(2-氯-乙基)-2-羥基-苯基-6-氧代-己基}-氨基曱酸911-芴-9-基曱基酯 獲得化合物Fl的路徑向Fmoc-s-Ahx-OH (2.00g, 5.66mmol)在干燥二氯曱烷(10ml)中的溶液 中滴加亞硫酰氯(2.5ml，34.2mmo1)。將該溶液在40。C下加熱15分鐘。在真 空下蒸發(fā)掉溶劑和過量的亞硫酰氯并將剩余的白色固體在不經(jīng)進(jìn)一步純化 的情況下使用。向該酰氯中加入硝基苯A(20ml),然后加入在硝基苯(10ml) 中的4-羥基苯乙基氯(0.920g， 5.7mmo1)。將該溶液冷卻至0。C并逐份加入氯 化鋁(2.6g， 19.5mmo1)。然后將該溶液在57。C下加熱16小時(shí)。然后加入水(20ml)并將該混合物用乙醚(2x50ml)萃取。將合并的有;IM目用MgS04干燥 并在真空下蒸發(fā)掉溶劑。將該粗混合物用快速硅膠色鐠法(氯仿，然后氯仿 /MeOH 5%)**進(jìn)行純化，得到標(biāo)題化合物(0.卯g， 34%) &匪R (400 MHz; CDC13) 8 12.27 (1H， s， OH)， 7.76 (2H， d， /7.5 Hz， H-Fmoc), 7.58 (3H， m， H畫Fmoc， H-Ar)， 7.39 (2H， t, / 7.4 Hz， H-Fmoc)， 7.32 (3H， m， H陽Fmoc, H-Ar)， 6.94 (1H, d， / 8.5 Hz， H-Ar o醒OH)， 4.83 (1H， t寬 峰，NH)， 4.40 (2H， d， / 6.8 Hz， COOCfl^CH), 4.21 (1H， t， / 6.6 Hz， COOCH^CH)， 3.69 (2H， t， J 7.0 Hz， CH2C1), 3.2 (2H， q， / 6.4 Hz， CH2NH)， 3.0 (4H， m， CH2CH2C1， CH2OAr)， 1.76 (2H， m， CH2CH2)， 1.55 (2H， m， CH2CH2)， 1.44 (2H， m， CH2CH2)13C匪R (100 MHz; CDC13) 5 207.1 (CO)， 161.4 (Ar C國l)， 156,4 (NHCOO) 143.9 (C-q)， 141.3 (C-q), 136.7 (C-q)， 130.0 (Ar-CH)， 128.4 (Ar畫CH)， 127.6 (Ar-CH), 126.9 (Ar C-H)， 124.9 (Ar C-H)， 119.9 (Ar C腸H)， 119.0 (Ar C-H), 118.8 (Ar C-H), 66.5 (COOCH2)， 53.4 (CH2CO)， 47.2 (COOCH2CH)， 45.0 (CH2C1)， 40.7 (CH2CH2C1)， 38.0 (CH2NHCOO)， 29.8 (CH2)， 26.2 (CH2)， 23.8 (CH2)./w/zFAB 514 [(M+Na)， 100%] 注*按照一些以前的文獻(xiàn)操作步驟，以前用四氯化碳作為溶劑，但是不幸地是， 分離出的唯一產(chǎn)物是**首先用氯仿除去硝基苯，然后，通過增加極性(曱醇/氯仿)可以洗脫下產(chǎn) 物。但是，與產(chǎn)物一起洗脫下來少量雜質(zhì)，因此所用的甲醇量是在氯仿中 2-5% 。{6-[5-(2-氯乙基)-2-羥基苯基1-6-羥基己基}-氨基甲酸9樂芴-9-基甲基酯向Fmoc酮(0,200g， 0.40mmol)在干燥甲醇(8ml)中的溶液*中加入 NaBH4(20mg，0.52mmol)。將該溶液在回流下加熱16小時(shí)，然后在真空下 除去溶劑。將殘余物重新溶解于氯仿中并用水(10ml)和鹽水(10ml)洗涂。將 有機(jī)相用MgS04干燥并在真空下蒸發(fā)掉溶劑。然后將殘余物用快速柱色鐠 法(氯仿/MeOH, 7/1)**進(jìn)行純化，得到標(biāo)題化合物(0.100g， 50%)NMR (400 MHz; CDC13) 8 7.95 (1H, s寬峰，OH)， 7.75 (2H， d， /7.5 Hz， H-ArFmoc), 7.57 (2H， d， / 7.5 Hz, H-ArFmoc)， 7.39 (2H， t， / 7.4 Hz， H國ArFmoc)， 7.30 (2H， t， / 7.4 Hz， H-ArFmoc)， 6.98 (1H， / 8.2 Hz， H國Ar)， 6.80 (1H, d， 《/ 8.2 Hz, H-Ar)， 6.78 (1H, s， H國Ar)， 4.80-4.77 (2H， m， NH, CTOH)， 4.40 (2H， d， / 6.7 Hz， COOC^CH)， 4.20 (1H， t, COOCH2C/0， 3.64 (2H， t， / 8.0 Hz， CH2C1)， 3.10 (2H， m, CH2NH)， 2.94 (2H， t， / 7.4 Hz， CJ72CH2C1), 1.76 (1H， m， CH2CH2)， 1.70 (1H， m， CH2CH2)， 1.48-1.35 (6H， m， CH2CH2)13C醒R (100 MHz; CDC13) S 156.6 (NHCOO)， 154.4 (Ar C畫l)， 143.9 (C q) 141.3 (C q)， 129.1 (C q)， 129.0 (Ar C-3)， 127.6 (Ar C-5)， 127.5 (Ar Fmoc C-3), 127.0 (Ar Fmoc C-4)， 124.9 (Ar Fmoc C-5)， 119.9 (Ar Fmoc C曙2)， 117.3 (Ar C-2)， 75.6 (CHOH)， 66.5 (COOCH2)， 47.2 (COOCH2CH)， 45.3 (CH2C1)， 40.6 (CH2CH2C1)， 38.3 (CH2NHCOO)， 37.0 (CH2CHOH)， 29.8 (CH2), 25.9 (CH2)， 24.9 (CH2)2-(6-氨基-l-羥基己基)-4-(2-氯乙基)-苯酚~^匕合物Fl向化合物Fmoc醇((U6mg， 0.073mmol)在DMF (5ml)中的溶液中加入 哌啶(lml)。將該溶液在室溫下攪拌20分鐘，然后在高真空下蒸發(fā)掉溶劑。 然后，將固體溶解于氯仿中并用己烷充分洗滌。最后以75。/。的收率獲得化 合物Fl*。NMR (500 MHz; CD3OD) 6 7,13 (1H, s， H-5)， 6.94 (1H， d， /8.1 Hz)， 6.67 (1H， d， 《/8.1 Hz)， 4.94 (1H， m， CHOH)， 3.66 (2H， t， /7.1 Hz， CH2C1)， 2.93 (2H， t， /7.3 Hz， C^2CH2C1)， 2.84 (2H， t， /7.5 Hz， CH2NH2)， 1.72 (2H， m， CH2CHOH)， 1.60 (2H， m， CH2)， 1.5-1.4 (4H， m， CH2CH2) 13C NMR (125 MHz; CD3OD) S 154.3， 132.1， 130.4， 129.2， 128.0， 116.2， 70,4 (CHOH)， 46.3 (CH2C1)， 40.9 (CH2NH2)， 39.7 (CH2CH2C1), 38.5 (CH2)， 29.1 (CH2)， 27.4 (CH2)， 26.5 (CH2) m/z ES(+) 272.2 [M+H， 100%(3隱溴丙基)苯酚"匕合物Kl (JW4) (C. J. Cooksey， P. J. Garratt， E. J. Land, S. Pavel, C. A. Ramsden， P. A. Riley, N. P. M. Smit， / C/^附.， 1997， 272， 26226)將3-(4-羥基苯基)-l-丙醇(2.50g， 16.5mmol)、硫酸(lml)和氬溴酸水溶 液(48%, 15ml)的溶液在回流下加熱6小時(shí)，在冷卻至室溫后，將該反應(yīng)混 合物用飽和碳酸氫鈉溶液中和，然后用乙酸乙酯(3x60ml)洗滌。將合并的 有機(jī)層用鹽水(100ml)洗滌，用硫酸鎂干燥，然后真空濃縮。用二氧化硅快 速色譜法(二氯曱烷)進(jìn)行純化，得到淡黃色固體形式的標(biāo)題化合物(2.70g，78%)。丄H NMR (300 MHz; CDC13)》2.15 (2H， tt， / 6.6， 6.6 Hz)， 2.78 (2H, t， / 6.6 Hz)， 3.38 (2H， t， / 6.6 Hz)， 6.79 (2H， d， / 9.0 Hz， Ph-H)， 7.06 (2H， d， / 9.0 Hz， Ph-H);13C匪R (75.5 MHz; CDC13) 33.0， 33.2和34.4， 115.3， 129.7， 132.8， 153.8。 柳/z (-ES) 215 (100， [M-H)。2-(4-甲氧基苯基)-7V，2V-二甲基乙胺一化合物01 (JW8) (Y. Sato, H. Sakakibara， / 6>"《《朋麼似//| 1979， 166， 303.)將3-(4-曱氧基苯基)-l-乙醇(0,30g， 1.39mmol)和二曱胺溶液(2.0M的 THF溶液，2ml， 4.00mmol)的溶液在一個(gè)密封管中在室溫下攪拌18小時(shí)。 將該反應(yīng)真空濃縮。用二氧化硅快速色譜法(10%甲醇的二氯甲烷溶液)進(jìn) 行純化，得到白色固體形式的標(biāo)題化合物(155mg， 55%)。NMR (300 MHz; CDC13) 2.67 (6H, s)， 2.99 (4H， m)， 3.83 (3H， s)， 6.75 (2H, d， /8.6 Hz， Ph-H)， 7.08 (2H， d， /8.6 Hz, Ph-H);13C NMR (75.5 MHz; CDC13) 30.7， 43.6， 55.3, 59.7， 114.2， 128.6， 129.7， 158.6;柳/z (+ES) 180 (100， MH、 4-(3-(甲基氨基)丙基)苯酚一化合物Ql/K2(JW11) OH向4-(3-溴丙基)苯酚(2.00g, 10.1mmol)和叔-丁基二甲基氯硅烷(1.68g， ll.lmmol)在THF(40ml)中的溶液中緩慢加入咪唑(1.88g， 27.6mmo1)。將該反應(yīng)混合物攪拌4小時(shí)，過濾，然后真空濃縮。將濃縮的濾液重新溶解于 乙酸乙酯(60ml)中并用水(60ml)、飽和碳酸氯鈉溶液(60ml)和鹽水(60ml)洗 滌。將有機(jī)層用-克酸鎂干燥，然后真空濃縮。用二氧化硅快速色鐠法(5% 二氯甲烷的己烷溶液)進(jìn)行純化，得到無色油狀物形式的硅烷化的苯酚 (2.95g， 89%)。醒R (300 MHz; CDC13) S -0.01 (6H， s)， 0.98 (9H， s)， 2.12 (2H， tt， /6.6， 6.6 Hz)， 2.70 (2H， t， / 6.6 Hz)， 3.38 (2H， t， / 6.6 Hz)， 6.76 (2H， d, / 8.5 Hz， Ph國H)， 7.04 (2H， d, /8.5 Hz， Ph-H);13C NMR (75.5 MHz; CDC13) §國4.4， 18.2， 25.7， 33.1和34.4， 120.0， 129.4， 133.1， 154.0;Wz (+ES) 353 (40， [M+Na+), 360 (100)。將該珪烷4匕的中間體(0.50g， 1.52mmol)和甲胺溶液(33。/。的乙醇溶液， lml)的溶液在密封的試管中在室溫下攪拌18小時(shí)。將該反應(yīng)混合物真空濃 縮，然后將其重新溶解于濃HCl/水/甲醇(l:l:5，21ml)溶液中。將所得的混 合物再攪拌72小時(shí)，然后用飽和碳酸氫鈉溶液中和并用乙酸乙酯(3 x 30ml) 萃取。將合并的有機(jī)層用鹽水(50ml)洗滌，用石克酸鈉干燥，然后真空濃縮。 用二氧化硅快速色鐠法(氨水溶液/甲醇/二氯甲烷，5:20:75)進(jìn)行純化，得到 淡黃色固體形式的化合物Ql (56mg, 22%)。&匪R (300 MHz; CDC13) §1.83 (2H， tt， / 7.4， 7.5 Hz)， 2.43 (3H， s)， 2.54 (2H， t， J 7.4 Hz， C刷，2.63 (2H， t， J 7.5 Hz， C刷，6.76 (2H， d， / 8.5 Hz， Ph-H)， 6.93 (2H， d， /8.5 Hz， Ph國H);13C NM盡(75.5 MHz; CDC13) §30.7, 32.5, 35.6， 50.9， 115.7， 129.3， 132.1， 155.3;附/z (+ES) 165 (100， MH+)。4-(2-(二曱基氨基)乙基)苯酚"^f匕合物Tl/L2 (JW32) (H. Voswinckel，Ber。1912， 45 1004)將4-曱氧基苯乙基溴(0.20& 0.93mmol)和二甲胺(2.0M的THF溶液， 2ml)的溶液在密封的試管中在室溫下攪拌18小時(shí)。將該反應(yīng)混合物真空濃 縮并重新溶解于二氯甲烷(2ml)中。在冷卻至O^C后，滴加三溴化硼(1.0M 的己烷溶液，l.OOml)并將該溶液在該溫度下攪拌10分鐘。滴加水(20ml)并 將該混合物再攪拌30分鐘。在溫?zé)嶂潦覝睾?，將該反?yīng)混合物用二氯甲烷 (3x20ml)萃取。將合并的有機(jī)層用鹽水(30ml)洗滌，用硫酸鈉干燥，然后 真空濃縮。用二氧化硅快速色i普法(氨水溶^/曱醇/二氯甲烷，5:20:75)進(jìn)行 純化，得到白色固體形式的標(biāo)題化合物(61mg，40。/。)。AH NMR (400 MHz; CD4OD) -2.31 (6H， s)， 2.54 (2H， m， C^2)， 2.65 (2H， m， C/f2), 6.67 (2H， d， /8.4 Hz， Ph-H)， 6.99 (2H， d, /8.4 Hz， Ph-H); 13C NMR (100 MHz; CD4OD)》34.5， 46.1， 63.5， 117.2,131.4和132.3， 157.8; 附/z (+ES) 166 (100， MH、。2-(4-{2-[2-(2-曱氧基乙氧基)-乙氧基l-乙氧基卜苯基)-乙醇一化合物XI (JMB1)在氮?dú)庀拢蛉蚀紗渭酌?O.SOml， 3.1mmol)在二氯甲烷(5ml)中的溶 液中加入對(duì)-甲苯碌酰氯(715mg， 3.75加11101)和三乙胺(0.521111， 3.8mmol)并將該反應(yīng)混合物在室溫下攪拌24小時(shí)。將該溶液用水(3 x 5ml)洗滌，分離 出有機(jī)層并用硫酸鎂干燥。在真空下除去二氯甲烷并將粗產(chǎn)物用二氧化硅 柱色i瞽法(用乙酸乙酯/己烷，2:1洗脫)進(jìn)行純化，得到澄清油狀物形式的甲苯-4-磺酸2-[2-(2-曱氧基-乙|1&)-乙氧基]-乙基酯(870mg, 88%),將其用于 接下來的偶聯(lián)步驟。SH (300 MHz; CDC13) 2.44 (3H， s， C仏Ar)， 3.37 (3H， s， C/T3OCH2)， 3.53 (2H， m, PEG)， 3.61 (8H， m, PEG), 3.68 (3H， t， /4.8 Hz， Cfl^CI^OTs), 4.16 (3H， t, /4.9 Hz， C/r2OTs)， 7.34 (2H， d， /8.1 Hz)， 7.80 (2H， d， /8.3 Hz); 8C (75 MHz; CDC13) 21.4, 58.9, 68.5， 69.0, 70.4， 70.6， 71.7， 127.8, 129.6， 132.9， 144.6;柳/z (ES+) 341 + Na+， C14H2206S， 100 %), 319H+， 25%)。在攪拌的情況下，在氮?dú)庀?，在室溫下?-(4-羥基苯基)乙醇(100mg， 7.24 x 10"mmol)在THF(5ml)中的溶液中加入氫化鈉(60%的礦物油溶液， 48mg， 0.72mmo1)。加入上面甲笨璜?；腜EG (230mg， 7.24 x 10"mmo1) 并將該溶液在回流下加熱16小時(shí)。將該溶液冷卻至室溫并在攪拌的情況下 滴加水(5ml， lml min"),用氯仿(10ml)萃取該溶液，將有機(jī)層分離出來并 用水(3x5ml)洗滌。將有機(jī)層用硫酸鎂干燥并在真空下除去溶劑，得到橙 色油狀物形式的標(biāo)題化合物(146mg， 67%)。SH (300 MHz; CDC13) 2.80 (2H， t， / 6.5 Hz， C//2CH2OH), 3.37 (3H， s， C 30CH2)， (3,55， 2H, m， PEG), 3.64-3.74 (IOH， m， PEG), 3.85 (2H, t， /5.2 Hz， C&2OH), 4.11 (2H, t， / 4.7 Hz, Cff2OAr)， 6.83 (2H， d, / 8.6 Hz)， 7.13 (2H， d，/8.6 Hz);Sc (75 MHz; CDC13) 38.3 (CH2CH2OH), 59.0, 63.8 (CH^OH)， 67.5， 69.8，70.6， 70.7， 70.8， 72.0， 114.8， 129.9， 130.6,157.5;附/z (ES+) 307 + Na+， C1SH2405， 100%)， 285 ([M+ H+， 55%)?；衔颵l 0JMB2) <formula>formula see original document page 36</formula>向化合物X1 (50mg， 0.18mmol)在二氯甲烷(5ml)中的溶液中加入二曱 基甲酰胺( 0.001ml， 031)和亞硫酰氯(0.031111， 0.2mmol)并將該反應(yīng)混合物 在室溫下在氮?dú)庀聰嚢?6小時(shí)。用水(3 x 5ml)洗滌該溶液并將有機(jī)層用硫 酸鎂干燥。在真空下除去二氯曱烷，用二氧化硅柱色鐠法(用氯仿/甲醇,95:5 洗脫)分離粗產(chǎn)物，得到黃色油狀物形式的Yl (39mg，72%)。 5H (300 MHz; CDC13) 3.00 (2H， t， / 7.4 Hz， CH2CH2C1)， 3.38 (3H， s， C^3OCH2)， 3.56 (2H， m， PEG). 3.65-3.74 (8H， m， CZT2C1和PEG), 3.85 (2H， t， /4.8 Hz， Cff2CH2OAr)， 4.11 (2H， t, J4.7 Hz， Ci/2OAr)， 7.87 (2H， d， /8.6 Hz)， 7.13 (2H， d，/8.6 Hz);Sc (75 MHz; CDC13) 38.4 (CH2CH2C1)， 45.2 (CH2C1)， 59.0， 67.4， 69.8， 70.6， 70.7， 70.8， 71.9， 114.7， 129.8， 130.4， 157.8; 挑/z (ES+) 325Na+， C15H2304C1， 100%)。4-(2-氯乙基)-2-(5-(2-氯乙基)-2-{2-[2-(2-甲氧基乙氧基)-乙氧基]-乙氧基}-節(jié) 基)畫苯酚—化合物A2/P2 (JMB4)向氯化二聚物(105mg， 3.23 x 10"mmol)在二曱基甲酰胺(5ml)中的溶液 中加入甲^^?；腜EG (見XI) (103mg， 3.23 x 10"mmol)、碳酸鉀(45mg， 0.32mmol)和18-冠醚-6 (86mg, 0.32mmol)并將該溶液在室溫下在氮?dú)庀聰?拌16小時(shí)。加入氷(5ml)并將該溶液用乙酸乙酯(3 x 5ml)萃取。將合并的有 機(jī)層用硫酸鎂干燥并在真空下除去溶劑。用二氧化硅柱色鐠法(用氯仿/曱 醇，95:5洗脫)分離粗產(chǎn)物，得到澄清油狀物形式的標(biāo)題化合物(4mg, 0,009mmol，4%)。m/z (ES+) 493([M + Na十，C24H3205C12， 50%), 187 (100%)。2-溴-4-(2-氯乙基)-苯酚一化合物C2 (RB2B)在0°C下，將溴(0,20ml， 3.90mmol)加入到進(jìn)行著攪拌的4-(2-氯乙基)-苯酚(600mg， 3.83mmol)在氯仿(20ml)中的溶液中并將該反應(yīng)混合物攪拌 3.5小時(shí)。用飽和碳酸氫鈉溶液(20ml)淬滅反應(yīng)混合物。分離出有機(jī)層并用 水(3x20ml)和鹽水(20ml)洗滌，干燥(MgS04)，過濾并減壓蒸發(fā)，得到橙色 油狀物形式的所述苯酚(804mg，89。/0)。 i F0.21(4:l己烷乙酸乙酯)； vmax/cm_1 (膜法)3501， 1607， 1497， 1123， 914和822;&H (300 MHz; CDC13) 7.40 (1H, s， Ar)， 7.08 (2H， d， /8.3 Hz, Ar)， 6.97 (1H， d， /8.3 Hz， Ar), 5.56 (1H， s， O用，3.67 (2H， t， /7.2 Hz， C樂C1)， 2.98 (2H， t， /7.2 Hz，C/T2Ar);5C (75 MHz; CDC13) 151.2， 132.1， 131.8， 116.1， 110.2， 44.9和37.9; 柳/z (CI+)實(shí)測(cè)值M+ 234.9530; C8H8BrC10的計(jì)算值M+ 234.9525。溴化2-(4-甲氧基苯基)-AyV，W-三甲基乙銨一化合物G2 (JW29) (J. R. I. Eubanks, L. B. Sims， A. Fry, / 爿肌CAe附.Soc. 1991， /U， 8821)將4-甲氧基苯乙基溴(0.20& 0.93mmol)和三曱胺水溶液(45。/0， 0.22ml) 在THF(0.5ml)中的溶液在密封的試管中在50°C下攪拌18小時(shí)。在冷卻至 室溫，將所得的混合物用飽和碳酸氬鈉溶液中和，然后用乙酸乙酯(3 x 10ml) 萃取。將合并的有機(jī)層用鹽水(20ml)洗滌，用硫酸鎂干燥，然后真空濃縮。 用二氧化硅快速色譜法(10%曱醇的二氯甲烷溶液)進(jìn)行純化，得到淡黃色 固體形式的標(biāo)題化合物(0.15g， 63%)。SH (300 MHz; CD4OD) 3.08 (2H， m)， 3.24 (9H， s)， 3.56 (2H， m)， 3.76 (3H， s)，6.89 (2H， d， /8.6 Hz， Ph國H)， 7.26 (2H， d， /8.6 Hz， Ph-H);8C (100 MHz; CD4OD) 29.4， 53.8， 55.8， 68.6， 115.4， 129.5和131.2， 160.4;加/z (+ES) 194 (50， MH+), 135 (100， [M-NMe3"。4-(2-(甲基氨基)乙基)苯酚一化合物H2 (JW32) (V. N. Bulavka， A. N. Shchavlinskii， O. N. Tolkachev， 五CyOC-3做f/五CSOC謂4 5"印t 7-3C, 1999和2000， 142-146)將4-曱氧基苯乙溴(0.2(^， 0.93mmol)和甲胺(33。/o的乙醇溶液，2ml)的 溶液在密封的試管中在室溫下攪拌18小時(shí)。將該反應(yīng)混合物真空蒸發(fā)，然 后重新溶解于二氯甲烷(2ml)中。在冷卻至0。C后，滴加三溴化硼(1.0M的 己烷溶液，1.00ml)并將該溶液在該溫度下攪拌10分鐘。滴加水(20ml)并將 該混合物再攪拌30分鐘。在溫?zé)嶂潦覝睾?，用二氯甲?3x20ml)萃取反 應(yīng)混合物。將合并的有機(jī)層用鹽水(30ml)洗滌，用硫酸鈉千燥，然后真空 濃縮。用二氧化硅快速色鐠法(氨水溶液/甲醇/二氯曱烷，5:20:75)進(jìn)行純化， 4尋到白色固體形式的標(biāo)題化合物(54mg， 36%)。NMR (400 MHz; CD4OD) 2.42 (3H， s)， 2.71 2.84 (4H， m)， 2.65 (2H， m, C刷，6.74 (2H, d, /8.5 Hz， Ph誦H)， 7.05 (2H， d, /8.5 Hz， Ph-H); 13C NMR (100 MHz; CD4OD) 36.2和36.6， 55.0， 117.3， 131.5和132.0， 157.9; 附/z (+ES) 152 (40， MH+)， 120 (100， [M-NMe3+)。l-(3-溴丙基)-4-甲氧基苯一化合物12 (JW31) (A. P. Tamiz， E. R. Whittemore, R, 1VL Woodward, R, B, Upasani， J, F, W, Ke犯a, JB/wg. M^/. CA諷k汰1999， 9， 1619.)將3-(4-甲氧基苯基)-l-丙醇(2.72g， 16.5mmol)、硫酸(lml)和氬溴酸水 溶液(48。/。，15ml)的溶液在回流下攪拌6小時(shí)，在冷卻至室溫后，將該反應(yīng) 混合物用飽和碳酸氫鈉溶液中和，然后用乙酸乙酯(3x60ml)洗滌。將合并 的有機(jī)層用鹽水(100ml)洗滌，用硫酸鎂千燥，然后真空濃縮。用二氧化硅 快速色H法(二氯甲烷)進(jìn)行純化，得到無色油狀物形式的標(biāo)題化合物(1.58g， 42%)。NMR (300 MHz; CDC13) 2.15 (3H, m)， 2.71 (4H， t， /7.5 Hz)， 3.20 (2H， t， / 6.8 Hz)， 3.80 (3H， s)， 6.85 (2H, d， / 8.6 Hz， Ph-H)， 7.02 (2H， d， / 8.6 Hz， Ph曙H);13C腿R (75.5 MHz; CDC13) 33.1， 34.4和35.2, 55.3， 114.0, 129.5, 132.6， 158.1;柳/z (+ES) 230 (30, MH+)， 135 (100， [M-CH2Br,。 乙酸4-(2-氯乙基)-苯基酯一化合物M2 (RG26)在0。C下，將乙酰氯(0,24ml， 3.38mmol)加入到進(jìn)行著攪拌的4-(2-氯-乙基)-苯酚(261mg， 1.67mmo1)、吡啶(0.68ml， 8.41mmol)和4-二甲基氨基吡 咬(20mg， 0.16mmol)在二氯甲烷(6ml)中的溶液中，使該反應(yīng)混合物緩慢溫 熱至室溫并將其攪拌17小時(shí)。用水(8ml)淬滅反應(yīng)混合物。將有機(jī)層分離 出來并用飽和碳酸氫鈉溶液(10ml)、水(3xl0ml)、鹽水(10ml)洗滌，干燥 (MgS04),過濾并減壓蒸發(fā)，得到黃色油狀物形式的所述苯基酯(270mg，82%)。v咖x/cm1 (膜法)2959， 1767， 1605， 1508， 1167， 1018和847;8H (300 MHz; CDC13) 7.23 (2H， d， / 8.5 Hz， Ar)， 7.04 (2H， d， / 8.5 Hz， Ar)，3.70 (2H， t， / 7.4 Hz， CZT2C1)， 3.06 (2H, t， / 7.4 Hz， C/T2Ar)， 2.30 (1H， s.C樂COO);Sc (75 MHz; CDC13) 169.5， 149.6， 135.7， 129.8， 121.7， 44.8,38.6和21.1; 加/z (ES+) 221 (M+Na)+ (88%), (CI+)實(shí)測(cè)值M+ 199.0524; d。H"C102的 計(jì)算值M+ 199.0520。乙酸4-(2-乙酰氧基-乙基)-苯基酯一化合物N2o o人o乙酸2-(4-羥基笨基)-乙基酯一化合物02在0°C下，將吡啶(1.64ml， 20.27mmol)加入到進(jìn)行著攪拌的乙酰氯 (0.58ml， 8.16mmo1)、 2隱(4曙羥基國苯基)-乙醇(510mg， 3.69mmol)和催化量4-二甲基氨基吡啶在二氯甲烷(13ml)中的溶液中，使該反應(yīng)混合物緩慢溫?zé)?至室溫并將其攪拌20小時(shí)。用水(20ml)淬滅反應(yīng)混合物。將有機(jī)層分離出 來并用飽和碳酸氬鈉溶液(20ml)、 lMHCl(20ml)、水(3x20ml)、鹽水(20ml) 洗滌，干燥(MgS04)，過濾并減壓蒸發(fā)，得到粗產(chǎn)物，將其用快速色鐠法 進(jìn)行純化，用4:1的己烷乙酸乙酯洗脫，得到黃色油狀物形式的已知的二 乙酸酯(N2) (Procopiou, P.A., Baugh， S.P.D.， Flack, S.S., Inglis， G.G.A. / Crg.Chen.1998, 63， 2342-2347) (391mg, 48%)。 RF 0.43 (4:1己烷乙酸乙酯)；
vmax/cm(-1) (膜法)2959， 1740， 1506,1367， 1167,1018和851;&H (300 MHz; CDC13) 7.22 (2H， d, / 8.5 Hz， Ar)， 7.02 (2H, d， / 8.5 Hz， Ar)，4.26 (2H， t， / 7.0 Hz， C樂OAc)， 2.93 (2H， t， / 7.0 Hz， C&2Ar), 2.29 (3H， s，C樂COOCH2);8C (75 MHz; CDC13) 171.0， 169.6， 149.3， 135.4， 129.8， 121.6， 64.7， 34.5, 23.6， 21.1和21.0;w/z (ES+) 245 (M+Na)+ (100%)。從上面的操作步驟中還以黃色針狀物形式分離出了已知的乙酸烷基酯 (02) (Shashidhar， M.S., Bhatt， M.V. / CA纖。畫肌,渭7，654.; Pedrochi畫Fantoni， G.， Servi， S. / C%e/m. iS0c尸cA:/" TVyww.丄，7992， 1029) (44mg, 7%),M.p. 54-57。Cj及f 0.27 (4:1己烷乙酸乙酯)；vmax/cm_1 (石蠟舉月法)2979， 1644， 1620,1485， 1148和1022; SH (300 MHz; CDC13) 7.08 (2H， d， / 8.5 Hz， Ar)， 6.75 (2H， d， / 8.4 Hz， Ar)， 4.72 (1H， s， 0^0， 4.23 (2H， t， / 7.1 Hz， C樂OAc)， 2.86 (2H， t， / 7.1 Hz， C仏Ar), 2.04 (3H， s， C恥OO);8C (75 MHz; CDC13) 171.5， 154.4， 130.0， 129.7,115.4, 65.4,34.2和21.0;附/z (ES+) 203 (M+Na)+ (100%)。丁酸4-(2-氯-乙基)-苯基酯一匕合物R2 (JMB8)<formula>formula see original document page 42</formula>在攪拌的情況下，在0°C下，在氮?dú)庀拢?-羥基苯乙基氯(500mg:3.19mmol)在二氯甲烷(5ml)中的溶液中加入丁酰氯(0.40ml， 3.8mmol)和吡 啶((K31ml， 3.8mmo1)。使溫度升至室溫并將該反應(yīng)混合物攪拌16小時(shí)。將 該溶液用水(3 x 5ml)洗滌并用硫酸鎂干燥。在真空下除去二氯甲烷并用二 氧化硅柱色鐠法(用己烷/乙酸乙酯，95:5洗脫)分離粗產(chǎn)物，得到澄清油狀物 形式的標(biāo)題化合物(680mg， 94%)。dH (300 MHz; CDC13) 1.04 (3H， t， / 7.4 Hz， C&3CH2)， 1.76 (2H，六重峰，/ 7.4 Hz， CH3CJy2CH2)， 2.53 (2H， t, / 7.4 Hz, C^CC^Ar), 3.06 (2H， t， / 7.4 Hz， Ci72CH2Cl)， 3.70 (2H， t， / 7.4 Hz， C樂C1)， 7.03 (2H， d， 《/ 8.5 Hz)， 7.23 (2H， d,/8.5 Hz);8C (75 MHz; CDC13) 13.6， 18.5， 36.2， 38.5 (CH2CH2C1)， 44.8 (CH2C1), 121.7,129.8， 135.5,149.6， 172.2 (CH2C02Ar);附/z (ES+) 249 ([M+ Na+， C12H1502C1， 100%)。2，2，-亞甲基雙(4-(3-溴丙基)苯酚)一化合物S2 (JW35)
<formula>formula see original document page 43</formula>
將4-(3-溴丙基)苯酚(0,30g， 1.51mmo1)、曱醛(0.12ml， 1.51mmol)和濃硫 酸(lml)在水(5ml)中的溶液在密封的試管中在80°C下攪拌2小時(shí)。在冷卻 至室溫后，將該反應(yīng)混合物用飽和碳酸氳鈉溶液中和。用乙酸乙酯(3 x 20ml) 萃取所得的混合物。將合并的有機(jī)溶劑用鹽水(40ml)洗滌，用硫酸鎂干燥， 然后真空濃縮。用二氧化硅快速色鐠法(30%乙醚的己烷溶液)進(jìn)行純化， 得到白色固體形式的標(biāo)題化合物(72mg， 23%)。力NMR (300 MHz; CD4OD) 8 1.99 (4H, tt, /6.6， 7.2 Hz)， 2.57 (4H, t， /7.2Hz), 3.30 (4H， t， J6.6 Hz)， 3.83 (2H， s)， 6.69-7.05 (6H， m， Ph-H);13C匪R (75.5 MHz; CD4OD) S 31.0， 33.8, 34.1和35.9,116.2， 128.2， 128.7，131.7， 131.1， 154.0;附/z (+ES) 465 (20, [M+Na、304 (100， [M-2Br+Na廣； 柳/z (+ES) 441 (100， [M-HD。雙(5-(3-溴丙基)-2-甲氧基苯基)甲烷一化合物T2 (JW37)Br、 Br、OMe OMe將氫化鈉(60%, 22mg， 0.54mmol)在無水THF(2ml)中的溶液在密封的 試管中在室溫下攪拌15分鐘。在加熱至50°C后，加入S2 (0.12g， 0.27mmo1) 并將該反應(yīng)混合物在該溫度下攪拌30分鐘。加入硤甲烷(34jd， 0.54mmo1) 并繼續(xù)攪拌1小時(shí)。在冷卻至室溫后，加入水(10ml)并將該混合物用乙酸 乙酯(3x 15ml)萃取。將合并的有機(jī)萃取物用鹽水(30ml)洗滌，用硫酸鎂千 燥，然后真空濃縮。用二氧化硅快速色謙法(10%二氯甲烷的己烷溶液)進(jìn) 4亍純化，得到無色油狀物形式的標(biāo)題化合物(54mg， 43%)。NMR (300 MHz; CDC13) 2.07 (4H， m)， 2.63 (4H， t， /7.1 Hz)， 3.35 (4H， t， /6.6 Hz)， 3.81 (6H, s)， 3.94 (2H， s)， 6.81-7.06 (6H, m， Ph-H); 13C NMR (75 MHz; CDC13) 30.0， 33.2， 34.5和35.2， 55.5,110.3， 127.0， 129.1， 130.6， 132.1,156.1。m/z (+ES) 453 (50， [M+Na+)， 180 (100); 實(shí)施例l監(jiān)測(cè)PKB調(diào)控的實(shí)驗(yàn)PKB是PI3K的蛋白質(zhì)下游效應(yīng)器，響應(yīng)于PI3K的活化其(在其活性 所需的殘基上)被磷酸化。小牛血清(Natal Calf Serum)(NCS)是PI3K的刺 激物，從而隨后導(dǎo)致PKB活化。因此，實(shí)驗(yàn)中所用的陽性對(duì)照是10%血 清，所用的陰性對(duì)照根本沒有血清。在一種典型的方法中，使NIH3T3細(xì)胞在六孔板中在含有10% NCS的培養(yǎng)基(GibcoBRL)中生長至接近匯合。用0.5%的血清使細(xì)胞々幾餓2-3 天。然后除去培養(yǎng)基并代之以不含血清的培養(yǎng)基培養(yǎng)15分鐘。隨后，向反 應(yīng)孔中加入1。/。NCS,向?qū)φ湛字屑尤?%、 1。/。和10。/oNCS。在孵育20 分鐘后，加入化合物，將各孔再孵育15分鐘。除去培養(yǎng)基，加入樣品緩沖 液，將細(xì)胞溶解、沸騰、離心。用10% SDS-PAGE對(duì)樣品進(jìn)行凝膠電泳，然后根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方案蛋白印 跡在PVDF膜(Biorad)上。用購自New England Biolabs的抗PKB的一級(jí) 抗體和與辣才艮過氧化物酶偶聯(lián)的山羊抗-兔igG的二級(jí)抗體(Amersham)來 探測(cè)蛋白印跡。然后，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)方案用新制備的ECL溶液使膜顯影。多種濃度的化合物Q、 B、 D、 E和F的結(jié)果如圖2a中所示，并且在 圖2b中提供了化合物D和E的確證結(jié)果。這些結(jié)果顯示化合物E是PKB 的抑制劑，而化合物D和F是活化劑。還對(duì)磷酸-Akt含量的蛋白印跡進(jìn)行了監(jiān)測(cè)。所用方法同上。圖5中的 結(jié)果顯示9種化合物[A B C D E FIJ Q可活化PKB。實(shí)施例2: c48/80和cQ對(duì)PKB的活化基于c48/80 (N-曱基-對(duì)-甲氧基苯乙基胺和甲醛的縮合產(chǎn)物，是不同聚 合度的陽離子兩親物的混合物)是PKB的活化劑的數(shù)據(jù)，我們的目標(biāo)是用 不同的方法對(duì)蛋白印跡所獲得的有希望的結(jié)果進(jìn)行確證。因此，我們通過 使用磷酸-特異性PKB抗體的免疫熒光顯微技術(shù)測(cè)試了化合物對(duì)PKB S473磷酸化的作用。因?yàn)閏48/80是不同聚合度的陽離子兩親物的混合物，我們的目標(biāo)是從 純化的合成的單化合物中找到活化劑。證明這些類似物之一是研究涉及 PKB的路徑的甚至更有力的工具。因此，我們集中著眼于對(duì)化合物Q(cQ) 進(jìn)行研究<formula>formula see original document page 45</formula>材料和方法在涂布有PLL的蓋玻片上將在含有10% FCS的DMEM中生長的 Cos6成纖維細(xì)胞的NIH 3T3饑餓24小時(shí)。用c48/80 [10ug/ml進(jìn)行的刺激 始終是在存在1% FCS的情況下進(jìn)行10分鐘。而將在完全沒有血清的 DMEM中生長的細(xì)胞用于用cQ [15ug/ml進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)。如所示的那樣，用 100pM LY294002將細(xì)胞預(yù)處理30分鐘或者用500nM RV001將其預(yù)處理 15分鐘。在處理后，將細(xì)胞用PBS洗滌，用4% PFA固定，用0.25% Triton-X/PBS進(jìn)行透化處理并充分洗滌。在1% BSA中進(jìn)行阻斷后，將細(xì) 胞進(jìn)行鬼筆環(huán)肽染色和/或與砩酸-特異性Ser473 PKB抗體(Cell Signalling) 一起在4'C下孵育過夜并且與熒光素(FITC)-軛合的山羊抗-小鼠IgG (Jackson Immuno Research)—起在室溫下孵育1小時(shí)。用Dapi對(duì)核進(jìn)行 染色。將蓋玻片安放在含Mowiol的載玻片上，密封，然后在Nikon顯微 鏡上進(jìn)行分析。c48/80誘導(dǎo)在S473殘基上的PKB磷酸化概括說來，成像數(shù)據(jù)與蛋白印跡的結(jié)果一致，證明在NIH3T3和Cos 6成纖維細(xì)胞中用3照/ml至10|ng/ml的劑量發(fā)生了 PKB磷酸化。c48/80 誘導(dǎo)的PKB活化依賴于少量血清，因?yàn)榕c之前用蛋白印跡所發(fā)現(xiàn)的一樣， 僅用c48/80進(jìn)行處理不能誘導(dǎo)PKB活化。因此，c48/80誘導(dǎo)的PKB活化 對(duì)1^294002(—種一般性的PI3-激酶抑制劑)敏感，在僅存在血清一1%血 清或10%血清的情況下，LY294002阻斷c48/80所誘導(dǎo)的磷酸化(未給出數(shù) 據(jù))。cQ誘導(dǎo)PKB的磷酸化，但是在存在血清的情況下其作為PKB抑制劑發(fā)揮作用與c48/80不同，單獨(dú)的cQ在不存在任何血清的情況下足以誘導(dǎo)PKB 在S473殘基上的磷酸化(圖3c)。令人驚奇的是，濃度增加的血清抑制cQ 誘導(dǎo)的PKB活化。如圖3b中所示，在用10% FCS對(duì)饑餓細(xì)胞進(jìn)行刺激 后，可檢測(cè)到磷酸化PKB的水平增加。相反，用cQ進(jìn)行預(yù)處理則完全消 除了 10% FCS對(duì)PKB的活化(圖3d)。為了研究PI3-激酶依賴性，用PI3-激酶抑制劑LY294002和PTEN抑 制劑RV001(其與生長因子一起協(xié)同作用于PKB活化)進(jìn)行了研究。結(jié)果清 楚地證明PI3-激酶活性抵銷cQ誘導(dǎo)的PKB活化，LY294002處理強(qiáng)烈增 加cQ誘導(dǎo)的PKB磷酸化(圖3h)。另一方面，導(dǎo)致由PI3-激酶產(chǎn)生的 PI(3，4，5)P3水平增加的RV001處理間接抑制cQ攻擊后的PKB活化(圖3g)。cg^賴應(yīng)4 :^-冉邀^^^f ^ #麥鬼筆環(huán)肽染色的初步數(shù)據(jù)突出了以下結(jié)果cQ參與PKB以外的不同 路徑(在酪氨酸-激酶和G-蛋白偶聯(lián)受體活化后，PKB作為PI3-激酶的下游 靶標(biāo)發(fā)揮作用)。與胰島素相同，cQ在饑餓的成纖維細(xì)胞中誘導(dǎo)應(yīng)力纖維 的損失(圖4)。但是與胰島素不同，cQ能不依賴于PB-激酶地改組細(xì)胞骨 架(圖4c)。 cQ處理產(chǎn)生無規(guī)的胞質(zhì)F-肌動(dòng)蛋白和與質(zhì)膜毗連的肌動(dòng)蛋白環(huán) (圖4b)。由于在存在cQ的情況下F-肌動(dòng)蛋白應(yīng)力纖維量的減少不那么明 顯(其中保留了短的胞質(zhì)無規(guī)肌動(dòng)蛋白纖維)，因此其表現(xiàn)出抵銷了胰島素-刺激的肌動(dòng)蛋白重塑。實(shí)施例3:化合物C對(duì)PKB的活化 發(fā)現(xiàn)50jiM的化合物C (cC):Cl Cl在饑餓的細(xì)胞中活化S473上的Akt/PKB磷酸化并且在胰島素刺激的細(xì)胞 中抑制Akt/PKB磷酸化。與這些結(jié)果一致，在存在cC的情況下，PI3-激 酶的抑制(渥曼青霉素或LY294002)導(dǎo)致在該部位的磷酸化增加，而PTEN 的抑制和因此產(chǎn)生的PI(3,4，5)P3水平的增加抑制該響應(yīng)。由于濃度為 50nM的化合物C對(duì)NIH3T3成纖維細(xì)胞具有細(xì)胞毒性作用(MTT試驗(yàn))， 因此用lpM的濃度測(cè)試了其對(duì)Akt/PKB磷酸化的作用。單獨(dú)的該化合物 在饑餓細(xì)胞中仍具有活化作用。但是，其對(duì)凈皮刺激的細(xì)胞的抑制作用并不 那么強(qiáng)。所用的方法與實(shí)施例2相同。參考文獻(xiàn)Berge， S. 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1.下式的化合物和其可藥用的鹽在制備用于調(diào)控PKB活性的藥物中的用途其中R1是C1-5烷氧基、OCOC1-3烷基、O(CH2)2O(CH2)2O(CH2)2OMe、O(CH2)2O(CH2)2O(CH2)2OH或OH；R2是H、(CH2)nOH、OCH3、Hal或R3是H或(CH2)nOH；且R4是任選地被一個(gè)或多個(gè)Hal、OH、COCH3、NH2、NHCH3、NHMe、NMe2、OCOCH3、CO2H或其酯或酰胺取代的C1-6烷基，其中n是1-5。
2. 權(quán)利要求1所述的用途，其中PKB被抑制。
3. 權(quán)利要求2所述的用途，其中所述的藥物用于治療癌癥。
4. 權(quán)利要求3所述的用途，其中所述的癌癥是其中涉及PKB上調(diào)的 癌癥。
5. 權(quán)利要求4所述的用途，其中所述的癌癥是其中還涉及PTEN突變 的癌癥。
6. 權(quán)利要求4或權(quán)利要求5所述的用途，其中所述的癌癥是卵巢癌、乳癌、前列腺癌、曱狀腺癌或胰腺癌。
7. 權(quán)利要求2至6中任意一項(xiàng)所述的用途，其中Ri是甲氧基，W和 R3均是H且R4 A(CH2)2COCH3。
8. 權(quán)利要求l所述的用途，其中PKB被活化。
9. 權(quán)利要求8所述的用途，其中所述的藥物用于治療變性性障礙。
10. 權(quán)利要求9所述的用途，其中所述的變性性障礙是阿爾茨海默病、 中風(fēng)、梗死、缺氧、骨骼肌損傷或II型糖尿病。
11. 權(quán)利要求8至10中任意一項(xiàng)所述的用途，其中化合物是<formula>formula see original document page 3</formula>3<formula>formula see original document page 4</formula>
12. 用在藥物中的權(quán)利要求1或11中所定義的化合物。
13. 化合物，其是<formula>formula see original document page 4</formula><formula>formula see original document page 5</formula><formula>formula see original document page 6</formula><formula>formula see original document page 6</formula><formula>formula see original document page 6</formula><formula>formula see original document page 6</formula>OMe OMe
14.下式的化合物和其可藥用的鹽R6 R6 R6R5 R5 R5其中R5是d—5烷氧基或OH;W是任選地被Hal、 NHCH3、 C02H或其酯或酰胺取代的d.s烷基；且R7和R8獨(dú)立地是(CH2)qOH ，其中q是2-5 。
15. 權(quán)利要求13或14中所定義的化合物和其可藥用的鹽在制備用于 調(diào)控PKB活性的藥物中的用途。
16. 權(quán)利要求13或14中所定義的化合物和其可藥用的鹽在制備用于 抑制PKB活性的藥物中的用途。
17. 權(quán)利要求13或14中所定義的化合物和其可藥用的鹽在制備用于 活化PKB活性的藥物中的用途。
18. 包含至少一種權(quán)利要求l、 7、 11、 13或14中任意一項(xiàng)中所定義 的化合物并任選地包含一種或多種可藥用的稀釋劑、載體和/或賦形劑的藥19.治療癌癥的方法，其包括對(duì)個(gè)體施用權(quán)利要求l、 7、 11、 13或14 中任意一項(xiàng)中所定義的化合物或權(quán)利要求18中所定義的藥物制劑。
全文摘要
本發(fā)明提供了式(I)化合物和其可藥用的鹽在制備用于調(diào)控PKB活性的藥物中的用途其中R¹是C_1-5烷氧基、OCOC_1-3烷基、O(CH₂)₂O(CH₂)₂O(CH₂)₂OMe、O(CH₂)₂O(CH₂)₂O(CH₂)₂OH或OH；R²是H、(CH₂)_nOH、OCH₃、Hal或(II)或(II)；R³是H或(CH₂)_nOH；且R⁴是任選地被一個(gè)或多個(gè)Hal、OH、COCH₃、NH₂、NHCH₃、NHMe、NMe₂、OCOCH₃、CO₂H或其酯或酰胺取代的C_1-6烷基，其中n是1-5。
文檔編號(hào)A61K31/045GK101222916SQ200680017087
公開日2008年7月16日 申請(qǐng)日期2006年3月17日 優(yōu)先權(quán)日2005年3月17日
發(fā)明者E·羅斯瓦茲, H·哈爾利斯, M·納姆伯雷, R·沃朔爾斯基 申請(qǐng)人:帝國創(chuàng)新有限公司