專利名稱：抗腫瘤藥物納米脂質(zhì)體的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)療技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種長循環(huán)抗腫瘤藥物納米脂質(zhì)體組合物及其制 備方法。
背景技術(shù)：
脂質(zhì)體(liposome)是磷脂分散在水中時(shí)形成的磷脂雙分子層，其內(nèi)部為水 相的閉合囊泡。由于其結(jié)構(gòu)類似生物膜，故又稱人工生物膜(artificial biological membrane)據(jù)實(shí)驗(yàn)和臨床應(yīng)用的需要，可以改變脂質(zhì)體的脂質(zhì)成分提高脂質(zhì)體的靶向性。脂 質(zhì)體作為抗腫瘤藥物載體已試用于臨床并取得了較滿意的療效。脂質(zhì)體的特點(diǎn)脂質(zhì)體作為藥物的載體具有以下優(yōu)點(diǎn)①脂質(zhì)體載體能保護(hù)被包裹 物；②能有效地控制藥物釋放；③能通過改變脂質(zhì)體大小和電荷，可以控制藥物在組織內(nèi) 的分布與在血液中的清除率；④能改變某種物理因素，例如改變用藥局部的Ph、病變部位 溫度等能明顯改變脂質(zhì)體膜的通透性，使脂質(zhì)體選擇性的釋放藥物；⑤可用單克隆抗體等 配體修飾脂質(zhì)體，使藥物靶向病變部位；⑥脂質(zhì)體進(jìn)人體內(nèi)后主要被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)吞噬，能 激活機(jī)體的自身免疫功能，并使藥物主要在肝、脾、肺和骨髓等組織器官中積累，從而提高 藥物的治療指數(shù)，減少藥物的治療劑量和降低藥物毒性；⑦脂質(zhì)體本身對(duì)人體無毒性和免 疫抑制作用。脂質(zhì)體的藥代動(dòng)力學(xué)研究顯示，脂質(zhì)體作為抗癌藥物的載體，靜脈注射后除被網(wǎng) 狀內(nèi)皮系統(tǒng)認(rèn)作外源分子，被吞噬細(xì)胞所吞噬，主要聚集于肝、脾及骨髓外，還可進(jìn)人實(shí)質(zhì) 性腫瘤、炎癥組織和高血壓血管損傷等部位，因這些部位的毛細(xì)血管比正常血管通透性高。 因而應(yīng)用脂質(zhì)體攜載抗瘤藥物比游離藥物更易聚集在腫瘤部位，發(fā)揮更高的抗瘤作用。并 且脂質(zhì)體包裹具有化學(xué)毒性的抗腫瘤制劑時(shí)，能保護(hù)敏感組織免遭藥物毒性的損害。盡管普通脂質(zhì)體給藥后可顯著地改變脂質(zhì)體攜帶藥物在體內(nèi)的動(dòng)力學(xué)特征，如增 加血藥濃度-時(shí)間曲線下面積、增加淋巴系統(tǒng)的導(dǎo)向性、降低正常組織的血藥濃度、避免耐 藥性等。但普通脂質(zhì)體作為藥物載體，仍存在靶向分布特性不理想，貯存中穩(wěn)定性欠佳等缺 點(diǎn)，因而限制了脂質(zhì)體在腫瘤化療中的應(yīng)用。蒽環(huán)類藥物在以化療為基礎(chǔ)的腫瘤治療基本方案中具有不可替代的作用。多柔比 星是乳腺癌、淋巴癌等多種腫瘤標(biāo)準(zhǔn)治療方案中的基礎(chǔ)治療藥物之一，多柔比星仍是當(dāng)前 最有效的化療藥物之一。雖然傳統(tǒng)的多柔比星市場有一部分被心臟毒性較低的表柔比星替 代，但表柔比星也存在劑量限制性毒性，加之本身用量比較大，所以其劑量限制性毒性表現(xiàn) 也比較明顯。由于其劑量限制性毒性，普通多柔比星和表柔比星就表現(xiàn)出其局限性了，而蒽 環(huán)類藥物的納米脂質(zhì)體等新機(jī)型尚未發(fā)現(xiàn)明顯的劑量限制性毒性，對(duì)這類病人治療上有很 大優(yōu)勢(shì)。目前國外臨床應(yīng)用的脂質(zhì)體蒽環(huán)類藥物有脂質(zhì)體柔紅霉素、脂質(zhì)體阿霉素Myocet 和聚乙二醇包被的脂質(zhì)體阿霉素Doxil (Caelyx)，這些藥物的應(yīng)用既保證了療效，又減少 了毒副反應(yīng)。根據(jù)研究結(jié)果統(tǒng)計(jì)推斷出脂質(zhì)體阿霉素的最大累積劑量為達(dá)2200mg/m2(普 通劑型為550mg/m2)。由于該產(chǎn)品開發(fā)時(shí)間較早，在大量臨床實(shí)踐中出現(xiàn)了大量由PEG引起的手腳皮膚顏色暫時(shí)變深、起水泡甚至脫皮等毒性較為嚴(yán)重(手足綜合征，Hand-Foot Syndrome)，并且由于PEG修飾磷脂價(jià)格昂貴，是其價(jià)高一直高居不下，限制了在臨床推廣 使用。PEG修飾脂質(zhì)體Doxil由于藥物包裹過嚴(yán)，難以從脂質(zhì)體中釋放，雖然其在體內(nèi)的循 環(huán)時(shí)間很長，在腫瘤組織的分布也較多，但腫瘤組織中能夠發(fā)揮藥效的藥物濃度有限，所以 其療效提高受到限制。另一脂質(zhì)體阿霉素Myocet則由于產(chǎn)品采用三瓶裝試劑盒形式，包括 脂質(zhì)體、藥物及緩沖液三部分，需要在使用前混合，水浴加熱將藥物包裹進(jìn)入脂質(zhì)體后方能 使用，給臨床使用帶來了很大不便，并且該脂質(zhì)體容易被體內(nèi)網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)吞噬，在血液循 環(huán)中駐留時(shí)間較短，藥物的靶向釋放較少。本發(fā)明設(shè)計(jì)的新型納米脂質(zhì)體克服了現(xiàn)有脂質(zhì) 體產(chǎn)品的上述不足，同時(shí)保留了 PEG修飾脂質(zhì)體長循環(huán)、靶向性等特點(diǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了一種穩(wěn)定的，長期循環(huán)的抗腫瘤藥物納米脂質(zhì)體，及其生產(chǎn)方法。 PEG化得脂質(zhì)體使用能夠PEG包被脂質(zhì)體，在脂質(zhì)體的表面帶有數(shù)千個(gè)PEG鏈，該過程被稱 為聚乙二醇化。PEG修飾脂質(zhì)體由于含有親水基團(tuán)而能阻止血液中許多不同組分特別是調(diào) 理素與其結(jié)合，從而降低與單核吞噬細(xì)胞系統(tǒng)MPS的親和力，可在循環(huán)系統(tǒng)中穩(wěn)定存在并 使半衰期延長，增加腫瘤組織對(duì)它的攝取。還由于癌增長部位及感染、炎癥部位病變弓I起毛 細(xì)血管的通透性增加，含有藥物的長循環(huán)脂質(zhì)體能增加藥物在這些部位的聚集量；又由于 脂質(zhì)體藥物的緩釋直接作用于病變部位，增強(qiáng)了治療效果。此種增加藥物的治療指數(shù)的機(jī) 制稱為“被動(dòng)靶向”。長循環(huán)脂質(zhì)體的被動(dòng)靶向作用已在許多動(dòng)物模型上進(jìn)行了研究。如 小鼠結(jié)腸癌、乳腺癌、淋巴癌以及人類癌癥模型等，并驗(yàn)證了其體內(nèi)靶向作用。如有人用實(shí) 驗(yàn)表明，阿霉素的長循環(huán)脂質(zhì)體比游離阿霉素靜注后在腫瘤組織中的藥物濃度增加了 4-16 倍。又如，由人體免疫缺乏病毒(HIV)引起的卡巴氏瘤(KS)，其癌變部位的血管通透性顯 著增加，長循環(huán)脂質(zhì)體可將高于正常皮膚5-11倍的阿霉素輸送到KS部位，其總體有效率高 于80%，而且可降低阿霉素的心毒性等毒副作用。不過研究發(fā)現(xiàn)，臨床使用PEG修飾的脂質(zhì) 體時(shí)會(huì)產(chǎn)生“手足綜合征“等嚴(yán)重不良反應(yīng)，在手掌和足底都觀察到了紅腫和潰瘍等癥狀。 PEG化脂質(zhì)體的另一個(gè)缺點(diǎn)是，PEG在脂質(zhì)體表面的出現(xiàn)，可能減弱脂質(zhì)體與細(xì)胞的相互作 用，并且妨礙脂質(zhì)體進(jìn)入腫瘤組織，從而可能減少脂質(zhì)體藥物在腫瘤組織的釋放和累積。本發(fā)明提供了穩(wěn)定的、長循環(huán)的、低毒性非聚乙二醇修飾的納米脂質(zhì)體，它展示了 聚乙二醇化脂質(zhì)體大豐穩(wěn)定性，具有上文所述的長循環(huán)和低毒性等特點(diǎn)。但由于本發(fā)明的 納米脂質(zhì)體不需要使用PEG來獲得上述結(jié)果，所以他們不會(huì)導(dǎo)致“手足綜合征”，并且藥物 在腫瘤組織的釋放特性更佳，有利于提高藥物治療效果。適合制備脂質(zhì)體的任何磷脂都可以用于本發(fā)明中，適合的磷脂包括傾向于降低脂 質(zhì)體膜的通透性的磷脂。含有具有長的脂肪酸鏈的磷脂的脂質(zhì)體更為合適，以確保藥物釋 放比從由較短脂肪酸鏈的磷脂組成的脂質(zhì)體更慢。隨著脂肪酸的碳鏈長度的增加，相變溫 度也會(huì)提高。由具有較高相變溫度的磷脂組成的脂質(zhì)體比由較低相變溫度組成的組織更緩 慢釋放其所包載藥物。因?yàn)榱字な前胪感缘?，較高的相變溫度使得藥物能以比較慢的速 度釋放到血液中。磷脂的飽和度和電荷均會(huì)影響膜的通透性和穩(wěn)定性。本發(fā)明的納米脂質(zhì)體優(yōu)選中性磷脂，優(yōu)選相變溫度為40°C -65°c，更優(yōu)選 50°C _55°C的中性磷脂。優(yōu)選的磷脂具有至少十六個(gè)碳的脂肪酸鏈。
本發(fā)明的適合磷脂包括，但不限于二硬脂酰磷酯酰膽堿、二棕櫚酰磷脂酰膽堿、氫 化大豆磷脂和這些磷脂的衍生物。將膽固醇與磷脂一起摻入脂質(zhì)體中，以便改變脂質(zhì)體膜的剛性和通透性，膽固醇 是兩親性分子，并且將其自身插入磷脂膜中，使羥基朝親水表面。磷脂與膽固醇的比例決定 了藥物從脂質(zhì)體中釋放的速度。磷脂和膽固醇的優(yōu)選摩爾比大約為1 0.1-1 2。用于包載到本發(fā)明的脂質(zhì)體中的合適試劑是具有可離子化基團(tuán)的水溶性兩親性 化合物。兩親性化合物同時(shí)具有親水和親脂特性，并且可以是治療或者藥物。本發(fā)明優(yōu)選 的藥物為蒽環(huán)類抗腫瘤藥物，包括多柔比星、表柔比星和柔紅霉素等。本發(fā)明提供了以與組合物中相同比例所述組分生產(chǎn)組合物的方法，該方法包括1)將磷脂和膽固醇溶于適量無水乙醇中，形成透亮溶液；2)減壓回收乙醇，在容器壁形成膜，注入硫酸銨溶液，使得膜材溶解，水化Ih 2h ；3)以注射用水為透析介質(zhì)，透析15 20h，制造硫酸銨梯度，得空白脂質(zhì)體；4)在水浴加熱條件下，通過孔徑為400納米-50nm的高壓擠出儀連續(xù)擠壓上述方 法獲得的空白脂質(zhì)體，獲得粒徑< 100納米的納米脂質(zhì)體；5)在空白脂質(zhì)體中加入藥物溶液，在30°C 60°C孵化10 60分鐘；6)取孵化后的溶液，以緩沖液為透析外液，在4。C 37°C溫度下透析12h，透析到 外液無色透明，把透析液轉(zhuǎn)移至容量瓶中定容，即可獲得包封率高，穩(wěn)定，粒徑均勻的長循 環(huán)脂質(zhì)體。
具體實(shí)施例方式實(shí)施例制備含有鹽酸多柔比星納米脂質(zhì)體組合物的方法分別稱取氫化大豆磷脂和膽固醇156mg和521mg，置于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀燒瓶內(nèi)，加入 4ml甲醇，在60°C水浴加熱將其溶解成透亮溶液。將燒瓶與旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀連接，并且將水浴溫 度調(diào)至60 V，在真空條件下將溶劑去除，以便在燒瓶內(nèi)壁形成類脂膜。然后用6ml硫酸銨溶 液，使得膜材溶解，水化Ih 池獲得空白脂質(zhì)體。以注射用水為透析介質(zhì)，透析15 20h， 制造硫酸銨梯度，得空白脂質(zhì)體。在60°C水浴加熱條件下，通過孔徑為400納米-50nm的高 壓擠出儀連續(xù)擠壓上述方法獲得的空白脂質(zhì)體，獲得粒徑< 100納米的納米脂質(zhì)體。按照 藥物脂質(zhì)1 10的比例將10mg/ml鹽酸多柔比星溶液和空白納米脂質(zhì)體混合，在65°C水 浴中保溫15分鐘，即得鹽酸多柔比星納米脂質(zhì)體。
權(quán)利要求
1.一種新型長循環(huán)納米脂質(zhì)體組合物，其特征在于以高相變溫度脂質(zhì)和膽固醇為膜 材，制備成長循環(huán)納米脂質(zhì)體，脂質(zhì)與藥物的摩爾比為1 1-100 1，分散相的平均粒徑 (lOOnm。
2.如權(quán)利要求1的方法，其中，所述磷脂和膽固醇的摩爾比大約為1 0.1-1 2。
3.如權(quán)利要求1的方法，其中，所述磷脂相變溫度為40-60°C。
4.如權(quán)利要求3的方法，其中，所述磷脂至少具有十六個(gè)碳的脂肪酸鏈。
5.如權(quán)利要求3-4的方法，其中，所述磷脂選自二硬脂酰磷酯酰膽堿、二棕櫚酰磷脂 酰膽堿、氫化大豆磷脂和這些磷脂的衍生物。
6.如權(quán)利要求1的方法，其中，所述藥物選自阿霉素、柔紅霉素和表阿霉素等蒽環(huán)類 藥物。
7.如權(quán)利要求1的方法，其中，制備方法如下1).將磷脂、膽固醇溶于適量無水乙醇 中，形成透亮溶液；2).減壓回收乙醇，在容器壁形成膜；注入硫酸銨溶液，使得膜材溶解； 水化Ih 池；3).以注射用水為透析介質(zhì)，透析15 20h，制造硫酸銨梯度，得空白脂質(zhì)體， 在水浴加熱條件下，通過孔徑為400納米-50nm的高壓擠出儀連續(xù)擠壓上述方法獲得的空 白脂質(zhì)體，獲得粒徑< 100納米的納米脂質(zhì)體；4).在空白脂質(zhì)體中加入藥物溶液；5).在 30°C 60°C孵化10 60分鐘；6).取孵化后的溶液，以緩沖液為透析外液，在4°C 37°C溫 度下透析12h，透析到外液無色透明；把透析液轉(zhuǎn)移至容量瓶中定容，即可獲得包封率高， 穩(wěn)定，粒徑均勻的長循環(huán)脂質(zhì)體。
全文摘要
本發(fā)明涉及抗腫瘤藥物納米脂質(zhì)體，具體涉及一種新型長循環(huán)納米脂質(zhì)體及其制備方法。本發(fā)明屬于藥物制劑領(lǐng)域。其特征在于以高相變溫度脂質(zhì)和膽固醇為膜材，制備成長循環(huán)納米脂質(zhì)體，所述磷脂相變溫度為40-60℃。本發(fā)明采用硫酸銨梯度法制備。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，可以減少抗腫瘤藥物對(duì)人體的毒副作用，降低生產(chǎn)成本，對(duì)某些特定器官具有靶向性等優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號(hào)A61K9/127GK102138898SQ20101010448
公開日2011年8月3日 申請(qǐng)日期2010年2月3日 優(yōu)先權(quán)日2010年2月3日
發(fā)明者張茂斌, 魏維 申請(qǐng)人:張茂斌, 魏維